本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，特別是一種細辛提取物在制備治療抑郁癥藥物中的應用。
背景技術：
細辛為馬兜鈴科北細辛(asarumheterotropoidesfr.schmidtvar.mandshuricum(maxim.kitag.)、漢城細辛(asarumsieboldiimiq.var.seoulensenakai.)或華細辛(asarumsieboldiimiq.)的根及根莖。細辛是馬兜鈴科多年生草本植物.被子植物門；雙子葉植物綱；馬兜鈴目；馬兜鈴科；細辛屬；細辛。
作為藥用植物，始載秦漢。細辛根細、色灰黃、葉色綠，味辛辣麻舌?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》將細辛列為上品:“主欬逆,頭痛腦動,百節(jié)拘攣,風濕痹痛,死肌。久服明目利九竅,輕身長年?！北痉N全草入藥。細辛味辛，性溫，歸心、肺、腎經(jīng)。主溫中下氣,破痰,利水道,開胸中,除喉痹、齆鼻、風癇、癲疾,下乳結,汗不出,血不行,安五臟,益肝膽,通精氣?！薄侗静菥V目》云:“治口舌生瘡,大便燥結,起目中倒睫,散浮熱?！笨山獗砩⒑铒L止痛，通竅，溫肺化飲，行水，開竅的作用。用于風寒感冒，頭痛，牙痛，鼻塞流涕，鼻鼽，鼻淵，風濕痹痛，痰飲喘咳，治風寒頭痛，鼻淵，齒痛，痰飲咳逆，風濕痹痛?，F(xiàn)代醫(yī)學研究細辛具有抗炎免疫、局部麻醉、提高新陳代謝、抗菌作用，亦可用于腫瘤患者化療和放療所致的白細胞減少。臨床應用細辛涉及臨床各科多類病種,如慢性支氣管炎、類風濕性關節(jié)炎、脈管炎、椎間盤突出癥、肩周炎、鼓膜炎、過敏性鼻炎、耳聾、牙痛、口腔潰瘍、淚囊炎、弱視、痛經(jīng)、陽痿等。此外,對于局部麻醉、治療肌注局部反應,細辛也有獨特作用。
然而細辛氣盛味烈,性善走竄,達表入里,疏散風寒之力大,溫經(jīng)止痛之力強,既能發(fā)散在表之風寒,又能入里,祛除入里之陰寒,具有“竄透開滯”的特點,由此可知細辛有很好的開竅解郁作用，而且現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)細辛醚可抗抑郁，迄今為止，還不曾見細辛在抗抑郁方面的相關報道。
技術實現(xiàn)要素：
針對上述情況，為解決現(xiàn)有技術之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種細辛提取物在制備治療抑郁癥藥物中的應用，可有效解決抑郁癥的用藥問題。
本發(fā)明解決的技術方案是，細辛提取物的提取方法是，取細辛粗粉，水提，藥液比為1：5～20，浸泡0.5～1.5h，加沸石5～30粒，回流提取0.5～8h，揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，得到淺綠色揮發(fā)油；或稱取細辛飲片，水提，藥液比為1：5～20，浸泡0.5～1.5h，回流提取0.5～8h，殘渣以藥液比1：2～12回流提取0.5～8h，合并兩次濾液，濃縮成2g·ml-1的溶液，即得。
本發(fā)明細辛提取物用于制備治療抑郁癥的藥物，從而解決抑郁癥的防治問題，開辟了細辛提取物用于防治抑郁癥的新用途，這是中藥上的一大創(chuàng)新，具有突出的臨床意義。
具體實施方式
以下結合實施例對本發(fā)明的具體實施方式作進一步詳細說明。
實施例1
本發(fā)明在具體實施時，可取細辛粗粉400g，水提，藥液比為1：6，浸泡0.5h，加沸石6粒，回流提取0.5h，揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，得到淺綠色揮發(fā)油；或稱取細辛飲片400g，水提，藥液比為1：6，浸泡0.5h，回流提取0.5h，殘渣以藥液比1：2回流提取0.5h，合并兩次濾液，濃縮成2g·ml-1的溶液，即得。
實施例2
本發(fā)明在具體實施時，還可取細辛粗粉500g，水提，藥液比為1：10，浸泡1h，加沸石15粒，回流提取4h，揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，得到淺綠色揮發(fā)油；或稱取細辛飲片500g，水提，藥液比為1：10，浸泡1h，回流提取4h，殘渣以藥液比1：6回流提取4h，合并兩次濾液，濃縮成2g·ml-1的溶液，即得。
實施例3
本發(fā)明在具體實施時，還可取細辛粗粉600g，水提，藥液比為1：20，浸泡1.5h，加沸石29粒，回流提取8h，揮發(fā)油測定器收集揮發(fā)油，得到淺綠色揮發(fā)油；或稱取細辛飲片600g，水提，藥液比為1：20，浸泡1.5h，回流提取8h，殘渣以藥液比1：12回流提取8h，合并兩次濾液，濃縮成2g·ml-1的溶液，即得。
本發(fā)明運用懸尾實驗和強迫游泳實驗進行抗焦慮研究，采用高效elisa法測定小鼠腦內(nèi)gaba、glu、5-ht的含量，通過比較各組小鼠懸尾、強迫游泳的不動時間來證明細辛水煎液及揮發(fā)油的抗抑郁活性；通過比較各組小鼠腦內(nèi)的gaba、glu、5-ht含量來探討細辛抗焦慮的機制。
給藥時，鹽酸氟西汀及各提取物均以0.5％cmc-na溶解或混懸至所需濃度。
2分組與給藥
將80雄性小鼠通過開場實驗初篩選出自主活動能力較強小鼠60只，隨機分為6組，每組10只。各組藥均以0.5％cmc-na溶解或混懸至所需給藥濃度，陽性對照組鹽酸氟西汀劑量0.1mg·ml-1，細辛水煎液高、中、低劑量分別為2、1、0.5g·ml-1，細辛揮發(fā)油劑量為1g·ml-1，模型組給予同等體積的0.5％cmc-na溶液，連續(xù)給藥7d，每天1次。末次給藥后進行行為學實驗。
3抗抑郁測試
3.1懸尾實驗(tst)，將檢測懸尾箱、攝像機及計算機連接，開啟計算機，打開懸尾測試軟件，進行實驗各項參數(shù)設置，將實驗時間設為6min。將小鼠尾端后三分之一處(在距尾尖部約2cm處)用醫(yī)用膠布粘于懸尾箱(30cmx30cmx70cm)上部支架上，使小鼠成倒掛狀態(tài)，頭部離箱底約20cm。箱內(nèi)小鼠為了克服不正常體位而掙扎活動，但掙扎一段時間后會出現(xiàn)間歇性不動，顯示絕望狀態(tài)。懸掛時間為6min，僅統(tǒng)計后4min內(nèi)懸尾累計不動時間。不動狀態(tài)即小鼠停止掙扎不動或輕微晃動或無任何活動。
3.2強迫游泳(fst)，將強迫游泳裝置、攝像機及計算機連接，開啟計算機，打開強迫游泳測試軟件，進行實驗各項參數(shù)設置，將實驗時間設為6min。將小鼠單獨放入高40cm、直徑18cm的圓柱形透明塑料缸中，缸內(nèi)水深15cm，水溫25±2℃，從小鼠入水后計時6min，僅記錄后4min內(nèi)游泳累計不動時間。不動狀態(tài)指小鼠在水中顯示漂浮狀態(tài)或停止掙扎或僅有輕微的肢體運動以保持頭部浮在水面。
3.3開場實驗，將敞箱裝置、攝像機及計算機連接，開啟計算機，打開oft100軟件，進行實驗各項參數(shù)設置，將實驗時間設為3min。敞箱裝置為長50cm、寬50cm、高25cm金屬箱，開場實驗oft系統(tǒng)將箱底部從左到右從上向下按順序依此編號為相同大小的1-25個小格，其中7,8,9,12,13,14,17,18和19為中央?yún)^(qū)域，其余為外周格，13號格為正中格。內(nèi)面用黑漆涂滿。將小鼠放在測試房間適應1h后，開始開場實驗，將其放入中心方格內(nèi)，觀察小鼠在3min內(nèi)，運動距離以及停留時間以及站立次數(shù)，徹底清潔敞箱后再進行下1只小鼠的觀察。
4小鼠腦組織的處理及酶聯(lián)免疫法實驗，小鼠行為學測試結束后，立即脫頸椎處死，斷頭迅速剝離全腦，并用十萬天平精密稱重全腦重量；以腦組織(g)：生理鹽水(ml)1：9的比例加入生理鹽水，用細胞粉碎機進行勻漿粉碎；勻漿液在4℃低溫離心機，6000r·min-1離心10min，取上清液，置5ml離心管中，即得10％的小鼠腦勻漿液，然后立即進行elisa法檢測，測定腦組織中5-ht、gaba和glu的含量。
5統(tǒng)計學方法，采用spss19.0軟件對結果進行單因素方差分析，組間采用lsd檢驗，實驗數(shù)據(jù)以
6結果
6.1細辛水煎液與細辛揮發(fā)油對小鼠懸尾不動時間的影響，與模型組比較，細辛水煎液高劑量可顯著縮短小鼠懸尾不動時間(p<0.01)，陽性藥鹽酸氟西汀與細辛揮發(fā)油組同樣可顯著縮短小鼠懸尾不動時間(p<0.05)，細辛水煎液和陽性藥鹽酸氟西汀在計劃給藥方案內(nèi)在懸尾實驗tst中均表現(xiàn)出明顯的抗抑郁作用，且細辛中、低劑量對此有縮短趨勢，但均無統(tǒng)計學差異(p>0.05)；所以細辛水煎液高、中、低劑量呈現(xiàn)出一定的量效關系，見表1。
6.2細辛水煎液與細辛揮發(fā)油對小鼠強迫游泳不動時間的影響，與模型組比較，細辛水煎液中劑量、細辛揮發(fā)油和陽性藥鹽酸氟西汀均可顯著縮短強迫游泳不動時間(p<0.05)，提示細辛水煎液和鹽酸氟西汀在既定給藥方案內(nèi)在小鼠強迫游泳實驗中均表現(xiàn)出明顯的抗抑郁作用，見表1。
6.3細辛水煎液與細辛揮發(fā)油對小鼠開場實驗運動距離的影響，小鼠開場實驗運動距離，各組間比較均無顯著性差異(p>0.05)，結果見表1
表1：細辛提取物對懸尾和強迫游泳小鼠的不動時間以及開場實驗運動距離的影響(
注：與模型組比較*p<0.05，**p<0.01。
6.4細辛水煎液與細辛揮發(fā)油對小鼠腦內(nèi)5-羥色胺、gaba和glu含量的影響，小鼠腦內(nèi)5-羥色胺、gaba和glu含量，與模型組比較，細辛水煎液中、低劑量組能顯著升高小鼠腦內(nèi)5-ht的含量(p＜0.05)；陽性對照組，細辛揮發(fā)油組和水煎液高、中、低劑量組能顯著增加小鼠腦內(nèi)gaba的含量(陽性組p＜0.05，其他組p＜0.01)；細辛水煎液高、中劑量組能顯著升高小鼠腦內(nèi)glu的含量(p＜0.05)。小鼠腦內(nèi)gaba和glu含量之間的比值，各組之間比較均無顯著性p>0.05。結果見表2
表2：細辛提取物對腦內(nèi)5ht、gaba及glu含量影響
注：與模型組比較*p<0.05，**p<0.01。
6.5細辛水煎液與細辛揮發(fā)油對小鼠體重、腦重及臟器系數(shù)比值影響，小鼠的體重、腦重與臟器系數(shù)，各組的數(shù)值間并沒有受到細辛水煎液和揮發(fā)油的影響，均無顯著性差異(每組間互相比較p>0.05)。結果見表3
表3：小鼠體重、腦重及臟器系數(shù)比值
7小結：①細辛水煎液高劑量及細辛揮發(fā)油可使小鼠在懸尾實驗tst中不動時間顯著性縮短(高劑量p<0.01，揮發(fā)油p<0.01)；細辛水煎液中劑量及細辛揮發(fā)油可使小鼠在強迫游泳實驗fst的不動時間均顯著性縮短(p<0.05)。②細辛揮發(fā)油劑量組和水煎液高、中、低劑量組結果與模型組相比均能顯著增加小鼠腦內(nèi)gaba的含量(p＜0.01)；細辛水煎液高、中劑量組與模型組相比能顯著增高小鼠腦內(nèi)glu的含量(p＜0.05)；細辛水煎液中、低劑量組與模型組相能顯著增加小鼠腦內(nèi)5-ht的含量(中劑量p＜0.01，低劑量p＜0.05)。結論首次證實細辛水煎液及揮發(fā)油具有抗抑郁作用。細辛揮發(fā)油和水煎液在小鼠懸尾模型和強迫游泳模型上均表現(xiàn)出抗抑郁作用，其作用效果與鹽酸氟西汀不盡一致。作用機制可能與提高腦內(nèi)類神經(jīng)遞質5-ht、glu、gaba含量有關。
本發(fā)明通過藥理實驗證明細辛能夠起到抗抑郁的作用，同時測定跟抑郁癥相關的腦內(nèi)遞質濃度，來進一步驗證細辛抗抑郁機制，因此對細辛進行深入研究，擴大其藥效作用，將有很大的社會效益和廣泛的開發(fā)前景，具有實際的臨床意義。