一種用于抑郁癥的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種藥物組合物，由貫葉連翹提取物和銀杏葉提取物組成；以所述藥物組合物的重量為基準，所述貫葉連翹提取物占20％～80％，余量為所述銀杏葉提取物。本發(fā)明還提供一種含有上述藥物組合物的藥物制劑。此外，本發(fā)明還提供所述藥物組合物和所述藥物制劑在制備治療抑郁癥的藥物中的應用。藥效試驗表明，本發(fā)明的藥物組合物對抑郁有顯著療效，從而可以為臨床提供一種治療抑郁癥的新選擇。
【專利說明】
一種用于抑郁癥的藥物組合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)學和藥學領(lǐng)域，具體涉及一種新的用于抑郁癥治療的藥物組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 抑郁癥，又稱抑郁障礙，以顯著而持久（至少2周以上，甚至長達數(shù)年）的心境低落 為主要臨床特征，是心境障礙的主要類型。臨床可見心境低落與其處境不相稱，情緒的消沉 可以從悶悶不樂到悲痛欲絕，自卑抑郁，甚至悲觀厭世，可有自殺企圖或行為;甚至發(fā)生木 僵;部分病例有明顯的焦慮和運動性激越;嚴重者可出現(xiàn)幻覺、妄想等精神病性癥狀。
[0003] 抑郁癥是一種高患病率、高疾病負擔、高復發(fā)率、高致殘率、高自殺率的慢性精神 疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，全球抑郁癥發(fā)病率約為11 %，全球約有3.4億抑郁癥患者。嚴重 的患者中有15 %會選擇自殺來結(jié)束生命，2/3的患者曾有過自殺的念頭，每年因抑郁癥自殺 死亡的人數(shù)估計高達100萬。當前抑郁癥已經(jīng)成為世界第四大疾病，預計到2020年可能將成 為僅次于心臟病的人類第二大疾患。我國大范圍抑郁癥患病情況的調(diào)查還沒有開展，只是 在不同的地區(qū)開展了抑郁癥的患病率調(diào)查。已有的數(shù)據(jù)顯示我國抑郁癥患病率各地區(qū)的差 異比較大，在1.6%-4.1%之間。鑒于我國抑郁癥患者的低就診率，實際發(fā)生率應該更高。
[0004] 越來越多的研究表明，軀體疾病如腫瘤、糖尿病、關(guān)節(jié)炎、慢性疼痛、心血管疾病等 慢性疾病跟抑郁癥互為危險因素，有共同發(fā)病的風險。如關(guān)節(jié)炎、背疼、頭疼的患者患抑郁 癥風險是普通人群的1.9到3.2倍，抑郁癥患者發(fā)生腫瘤、心血管疾病、中風的風險也較高。 因此，抑郁癥的防治成為醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點。
[0005] 隨著基因組學、腦影像學、神經(jīng)科學研究的深入，2010年《自然》雜志主編Philip Campbel提出抑郁癥是腦部發(fā)育性疾病，至此，抑郁癥屬于功能性疾病的觀念被徹底更正， 因此，藥物治療仍然是當前抑郁癥治療的主要手段。自20世紀80年代以來，抑郁癥治療的研 究取得了長足的進步，特別是第3代抗抑郁藥5-羥色胺再攝取抑制劑的誕生，開啟了抑郁癥 治療的新篇章，隨后10年相繼研發(fā)出第4代5-羥色胺與去甲腎腺素雙通道再攝取抑制劑 (SNRI類，如萬拉法新）、5_羥色胺與去甲腎腺素雙通道調(diào)節(jié)劑(NaSSa類，如米氮平），為醫(yī)師 給患者制訂個性化治療方案提供了更安全、更有效、更多的藥物選擇。盡管第3、4代抗抑郁 藥有更高的治療緩解率、更好的耐受性而成為一線抗抑郁藥物，而且對中、重度抑郁癥也具 有良好的療效，但目前一線抗抑郁藥物的治愈率僅為30%，起效時間2-4年(王祖新.抑郁癥 的藥物治療[J].中華內(nèi)科雜志，1998，37(11): 783)。近年，藥物研究最新熱點的氯胺酮具有 快速起效的特點。研究表明氯胺酮治療抑郁癥4~72h治療有效率及治愈率平均為77 %和 43%，但維持療效時間較短（Murrough J W，et al.R apid and longer-term antidepressant effects of repeated ketamine infusions in treatment-resistant major depression[J].Biol Psychiatry?2013?74(4):250-256)〇
[0006] 除了經(jīng)典的化學藥物研發(fā)思路，藥物研究人員和機構(gòu)還致力于從包括中草藥在內(nèi) 的天然藥物等多種途徑尋找更加有效和安全的抗抑郁癥藥物。
[0007] 現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)出現(xiàn)了這樣的藥物組合物。如公開號CN102961452A(【公開日】2013 年3月13日）、發(fā)明名稱為"一種用于緩解抑郁的藥物組合物及其制備方法"的中國發(fā)明專利 申請，公開了一種由5-HTP(5-羥色氨酸）20份、鹽酸維生素B615份、貫葉連翹提取物30份和 卡瓦提取物30份組成的藥物組合物。又如公開號CN102847050A(【公開日】2013年1月2日）、發(fā) 明名稱為"一種用于治療抑郁癥的中藥有效部位組合物"的中國發(fā)明專利申請，公開了一種 包括以貫葉連翹總黃酮為有效部位的貫葉連翹提取物、以姜黃素為有效部位的姜黃提取 物、以人參皂苷為有效部位的人參提取物的中藥有效部位組合物。再如公開號 CN104147090A(【公開日】2014年11月19日）、發(fā)明名稱"一種治療抑郁癥的藥物組合物"公開一 種由甜葉菊100~300份、合歡皮100~200份、云木香100~150份和銀杏葉60~100份為原料 的藥物組合物。
[0008] 雖然有新藥的面市，但是顯然抑郁癥的治療手段還遠不能滿足患者對療效和治療 結(jié)局的期待。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 針對上述問題，本發(fā)明的一個目的在于提供一種藥物組合物。藥效試驗表明，該組 合物對抑郁有顯著的療效，從而可以為臨床醫(yī)生和患者提供一種治療抑郁癥的新選擇。
[0010] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案：
[0011] -種藥物組合物，由貫葉連翹提取物和銀杏葉提取物組成。
[0012] 優(yōu)選的，以所述藥物組合物的重量為基準，所述貫葉連翹提取物占20%~80%，余 量為所述銀杏葉提取物。
[0013] 更優(yōu)選的，以所述藥物組合物的重量為基準，所述貫葉連翹提取物占20%~60%， 余量為銀杏葉提取物。
[0014] 進一步更優(yōu)選的，以所述藥物組合物的重量為基準，所述貫葉連翹提取物占40% ~60 %，余量為銀杏葉提取物。
[0015] 最優(yōu)選的，以所述藥物組合物的重量為基準，所述貫葉連翹提取物占60%，所述銀 杏葉提取物占40 %。
[0016] 優(yōu)選的，上述藥物組合物中，所述貫葉連翹提取物總金絲桃素不少于0.30%，貫葉 金絲桃素不少于3.0%。
[0017] 優(yōu)選的，上述藥物組合物中，所述銀杏葉提取物總黃酮醇苷不少于24.0%，含萜類 內(nèi)酯以白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的總量計不少于6.0%。
[0018] 本發(fā)明的另一個目的在于提供一種含有上述藥物組合物的藥物制劑。
[0019] 所述藥物制劑可以含有也可以不含有藥學上可以接受的輔料。
[0020] 所述藥物制劑為口服制劑，包括但不限于片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、泡騰片、口腔速 溶膜劑、口腔崩解片、口服液。
[0021] 本發(fā)明還有一個目的在于提供上述藥物制劑的制備方法，包括將上述藥物組合物 和藥學上可以接受的輔料混合，按照常規(guī)方法制備成臨床上可以接受的制劑。
[0022] 此外，本發(fā)明還有一個目的在于提供上述藥物組合物和所述藥物制劑在制備治療 抑郁癥的藥物中的應用。
[0023] 本發(fā)明所述的藥學上可以接受的輔料，包括（1)稀釋劑(又稱填充劑），如淀粉、蔗 糖、糊精、碳酸鈣、硫酸鈣、輕質(zhì)氧化鎂、微晶纖維、甘露醇、乳糖、預膠化淀粉；（2)崩解劑，如 干淀粉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、泡騰崩解 劑等；（3)潤濕劑，如蒸餾水、乙醇等；（4)粘合劑，如糖粉與糖漿、淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、 纖維素衍生物、膠漿、糊精等；（5)潤滑劑，如硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、微粉硅膠、氫化植 物油、聚乙二醇；以及必要的著色劑、芳香劑和甜味劑等等。
[0024]對體重60公斤的成年人，本發(fā)明提供的藥物組合物的臨床用量范圍為口服600~ 1200mg/日，優(yōu)選為900mg/日。
【附圖說明】
[0025]以下，結(jié)合附圖來詳細說明本發(fā)明的實施方案，其中：
[0026]圖1示出試驗例1中大鼠體重變化曲線，其中" 表示空白組，"奮"表示模型 組表示陽性組，" "表示藥物I組，"-I、"表示藥物II組，表示藥物III組， " 表示藥物IV組，".、、、、、、、:"表示藥物V組，""表示藥物VI組。
[0027]圖2示出的是試驗例1中CUMS抑郁模型對大鼠糖水偏好的影響，其中1為空白組，2 為模型組。
[0028]圖3示出的是試驗例1中各試驗組大鼠血漿中N0的含量測定結(jié)果；其中，圖3A是各 試驗組大鼠血漿中N0-1的含量測定結(jié)果，圖3B是各試驗組大鼠血漿中N0-2的含量測定結(jié) 果。圖中，1是空白組，2是模型組，3是陽性組，4是藥物I組，5是藥物II組，6是藥物III組，7是 藥物IV組，8是藥物V組，9是藥物VI組。
[0029]圖4示出的是試驗例1中各試驗組大鼠血漿中C0RT的含量測定結(jié)果；其中，圖4A是 各試驗組大鼠血漿中C0RT-1的含量測定結(jié)果，圖4B是各試驗組大鼠血漿中C0RT-2的含量測 定結(jié)果。圖中，1是空白組，2是模型組，3是陽性組，4是藥物I組，5是藥物II組，6是藥物III 組，7是藥物IV組，8是藥物V組，9是藥物VI組。
[0030] 圖5示出的是試驗例1中各試驗組大鼠礦場實驗的結(jié)果，其中圖5A為水平運動測定 結(jié)果，圖5B為垂直運動測定結(jié)果。圖中，1是空白組，2是模型組，3是陽性組，4是藥物I組，5是 藥物II組，6是藥物III組，7是藥物IV組，8是藥物V組，9是藥物VI組。
[0031] 圖6示出的是試驗例1中各試驗組大鼠海馬組織中5-HT含量的測定結(jié)果。圖中，1是 空白組，2是模型組，3是陽性組，4是藥物I組，5是藥物II組，6是藥物III組，7是藥物IV組，8 是藥物V組，9是藥物VI組。
[0032]圖7示出的是試驗例1中各試驗組大鼠海馬組織中NE含量的測定結(jié)果。圖中，1是空 白組，2是模型組，3是陽性組，4是藥物I組，5是藥物II組，6是藥物III組，7是藥物IV組，8是 藥物V組，9是藥物VI組。
[0033]圖8示出的是試驗例1中各試驗組大鼠海馬組織中BDNF含量的測定結(jié)果。圖中，1是 空白組，2是模型組，3是陽性組，4是藥物I組，5是藥物II組，6是藥物III組，7是藥物IV組，8 是藥物V組，9是藥物VI組。
【具體實施方式】
[0034] 以下參照具體的實施例來說明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實施例僅 用于說明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0035] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的藥 材原料、試劑材料等，如無特殊說明，均為市售購買產(chǎn)品，其中，
[0036]貫葉連翹提取物片，商品名稱路伏^泰?，每片含貫葉連翹干燥提取物300mg;德國 威瑪舒培博士藥廠生產(chǎn)，進口藥品注冊證號:Z20090005;
[0037]貫葉連翹提取物:含貫葉金絲桃素3.0%，總金絲桃素0.30 % ;購自重慶高仁生物 科技有限公司；
[0038]銀杏葉提取物含總黃酮醇苷24.0%，砲類內(nèi)酯（以以白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi) 酯B和銀杏內(nèi)酯C的總量計)6.0% ;購自重慶高仁生物科技有限公司。
[0039]實施例1 一種藥物組合物 [0040]所述藥物組合物的組成為：
[00411 貫葉連翹提取物40g，銀杏葉提取物10g。
[0042]將上述提取物混合均勻，即得。
[0043]實施例2-種藥物組合物
[0044]所述藥物組合物的組成為：
[0045] 貫葉連翹提取物30g，銀杏葉提取物20g。
[0046] 將上述提取物混合均勻，即得。
[0047]實施例3-種藥物組合物 [0048]所述藥物組合物的組成為：
[0049] 貫葉連翹提取物20g，銀杏葉提取物30g。
[0050] 將上述提取物混合均勻，即得。
[0051 ] 實施例4 一種藥物組合物
[0052]所述藥物組合物的組成為：
[0053] 貫葉連翹提取物10g，銀杏葉提取物40g。
[0054] 將上述提取物混合均勻，即得。
[0055]試驗例1本發(fā)明所述藥物組合物的抗抑郁作用研究 [0056] 實驗動物及實驗藥品
[0057] 1.實驗動物:SD大鼠，雄性，130_170g，購于湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許 可證號：SCXK(湘）2013 - 0004。
[0058] 2 ?實驗藥品：
[0059] 貫葉連翹提取物片，商品名稱路従*泰?，每片含貫葉連翹干燥提取物300mg;德國 威瑪舒培博士藥廠生產(chǎn)，進口藥品注冊證號:Z20090005;
[0060] 貫葉連翹提取物:含貫葉金絲桃素3.0%，總金絲桃素0.30 % ;購自重慶高仁生物 科技有限公司；
[0061] 銀杏葉提取物含總黃酮醇苷24.0%，砲類內(nèi)酯（以以白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi) 酯B和銀杏內(nèi)酯C的總量計)6.0% ;購自重慶高仁生物科技有限公司。
[0062] 動物飼養(yǎng):
[0063] 室內(nèi)溫度（18°C~24°C)，進食量(10g/100g體重? d)，飲水(每周換水2~3次）。
[0064] 實驗動物分組及給藥方案
[0065] 1.動物分組:實驗大鼠隨機分為9組，每組12只大鼠，6只/籠，每組2籠：
[0066] ①空白對照組:生理鹽水，灌胃，lml/100g體重?天
[0067] ②模型組：同"空白對照組"
[0068] ③陽性藥組:貫葉連翹提取物片（路優(yōu)泰? )
[0069] ④藥物I組:貫葉連翹提取物:銀杏葉提取物=1:0，
[0070] ⑤藥物II組:貫葉連翹提取物:銀杏葉提取物=4:1 (實施例1的組合物），
[0071 ]⑥藥物III組:貫葉連翹提取物:銀杏葉提取物=3:2(實施例2的組合物），
[0072] ⑦藥物IV組:貫葉連翹提取物:銀杏葉提取物=2:3(實施例3的組合物），
[0073] ⑧藥物V組:貫葉連翹提取物:銀杏葉提取物=1:4(實施例4的組合物），
[0074] ⑨藥物VI組:貫葉連翹提取物:銀杏葉提取物=0:1。
[0075] 2 ?給藥劑量：
[0076] 路優(yōu)泰@_每片含貫葉連翹提取物300mg，成人3片/d;若成人體重按60kg計，根據(jù)成 人/大鼠換算比例，大鼠每日給藥量為：
[0077] 900mg/60X6.3kg ? d = 94.5mg/kg ? d [0078]各藥物組的每日給藥劑量也為94.5mg/kg ? d。
[0079] 3 ?藥液配制：
[0080]①生理鹽水的配制:稱取9g氯化鈉，用雙蒸水定容至1000ml容量瓶中。
[0081 ]②陽性藥藥液的配制:取路伏^泰?片4片，去包衣，碾碎至粉末，稱取0.945g粉末， 用少量生理鹽水溶解，定容至l〇〇ml容量瓶中，配制成9.45mg/ml的溶液。按照所述方法，隨 用隨配。
[0082]③藥物組藥液的配制:分別取貫葉連翹提取物、實施例1~實施例4的組合物、以及 銀杏葉提取物各〇.945g，用少量生理鹽水溶解，定容至100ml容量瓶中，配制成9.45mg/ml的 溶液。按照所述方法，隨用隨配。
[0083] 4 ?給藥方案：
[0084]造模第15天開始給藥，藥物組灌胃給予相應藥液，模型組和空白組灌胃給予等體 積生理鹽水，每天1次，連續(xù)4周
[0085]實驗動物造模:慢性溫和不可預見性應激(CUMS)
[0086]通過利用一系列輕、中等強度的不可預知刺激(潮濕墊料、置于空籠、傾斜鼠籠、明 暗顛倒、強光刺激、高頻振蕩、冷水游泳、禁食、禁水等）的方式對大鼠連續(xù)實施6周，每天隨 機1 一 2種刺激，造成CUMS的大鼠抑郁模型。
[0087] 實驗過程及結(jié)果:
[0088] 1 ?體重增長率
[0089] 1)實驗方法:造模第1天，第7天，第14天，第21天，第28天，第35天，第42天測量所有 各實驗組大鼠體重。
[0090] 2)結(jié)果:見表1及圖1。
[0091] 表1各試驗組大鼠體重（
[0093] 與空白組比較，口〈0.05;#:與模型組比較，p〈0.05。
[0094] 3)結(jié)論：
[0095] 實施應激后，各造模組大鼠體重增長緩慢，實驗第14天、21天、28天、35天、42天，與 空白組比較，模型組、陽性藥組、各藥物組大鼠體重均顯著減輕(P〈〇.05);經(jīng)藥物治療后，造 模大鼠體重有所增加，實驗第28天、第35天、第42天，與模型組比較，陽性藥組、藥物I組、藥 物II組、藥物III組大鼠體重均顯著增加(P〈〇. 05);與陽性藥組比較，藥物I~VI組大鼠體重 無顯著性差異。
[0096] 2.糖水消耗實驗
[0097] 1)實驗方法:造模第14天給予大鼠刺激后，將空白組大鼠和模型組大鼠進行獨籠 飼養(yǎng)，在環(huán)境安靜的條件下使大鼠適應性含糖飲水1天，禁食禁水24小時后，每籠放置1瓶純 水，1瓶1.5%蔗糖水各50ml，2瓶位置隨機擺放，12小時后測定純水和糖水的消耗量，由下列 計算出糖水偏好率。
[0098] 糖水偏好率=糖水消耗量/(純水消耗量+糖水消耗量）X 100%
[0099] 2)實驗結(jié)果:見表2及圖2。
[01 00]表2抑郁模型對大鼠糖水偏好的影響
[0102] 與空白組比較，p〈0.05。
[0103] 3)數(shù)據(jù)分析：造模2周后，與空白組比較，模型組大鼠的糖水偏好率顯著下降（P〈 〇. 05);表明模型組大鼠經(jīng)造模后含糖飲水減少，快感缺失。說明造模成功。
[0104] 3.血漿中皮質(zhì)酮(C0RT)和N0含量測定
[0105] 1)實驗方法:造模第14天、第42天給予大鼠刺激后，對各組大鼠進行眼眶取血(血 漿），取血后大鼠正常飼養(yǎng)和給藥;將所取血液靜置1小時，離心(3000r/min，20min)，取上清 液置于EP管中，低溫保存待測。測定時將血漿樣本在室溫下解凍，采用ELISA法檢測血漿中 CORT和NO的含量。
[0106] 2)實驗結(jié)果:分別見表3和表4,以及圖3和圖4。其中，各試驗組大鼠血漿中N0-1的 含量測定結(jié)果見圖3A，各試驗組大鼠血漿中N0-2的含量測定結(jié)果見圖3B，各試驗組大鼠血 漿中C0RT-1的含量測定結(jié)果見圖4A，各試驗組大鼠血漿中C0RT-2的含量測定結(jié)果見圖4B。
[0107] 表3各試驗組大鼠血漿中N0含量的影響（$ ± §)
[0109] 與空白組比較，口〈0.05;#:與模型組比較4〈0.05 ;&:與陽性藥組比較，？〈0.05。
[0110] 表4各試驗組大鼠血漿中C0RT含量的影響（i 士 s)
[0112] 與空白組比較，p〈0.05。
[0113] 3)數(shù)據(jù)分析：
[0114] ①造模2周后，與空白組比較，各造模大鼠血漿中N0含量明顯升高(P〈0.05);造模6 周結(jié)束后，各造模大鼠血漿中N0含量持續(xù)升高，與空白組比較有顯著性差異(p〈0.05)。與模 型組比較，藥物II~VI組大鼠血漿中N0含量顯著降低(p〈0.05)。與陽性藥組比較，藥物III、 V和VI組大鼠血漿中N0含量顯著降低(p〈0.05)。
[0115] ②造模2周后，各組大鼠血漿中C0RT含量無明顯差異;造模6周結(jié)束后，與模型組比 較，陽性藥組、藥物I~IV組大鼠血漿中C0RT含量顯著減少(P〈0.05);與陽性藥組比較，各給 藥組間大鼠血漿中C0RT含量無明顯差異。
[0116] 4.曠場實驗(水平運動次數(shù)，垂直運動次數(shù)）
[0117] 1)實驗方法：
[0118]在造模第42天給予大鼠刺激后，進行曠場實驗，將大鼠放置于25格無蓋方箱的中 心，即刻觀察大鼠在3分鐘內(nèi)的活動情況，測定大鼠水平運動和垂直運動得分:大鼠穿越方 格數(shù)為水平活動得分，穿越1格(三爪以上跨入)為1次;直立次數(shù)(兩前肢離地lcm以上)為垂 直活動得分，每只大鼠僅進行1次，每次3min。每只大鼠測試結(jié)束后，要及時將大鼠排泄物清 除干凈，以免影響下次實驗。
[0119] 2)實驗結(jié)果:見表5及圖5。
[0120] 表5各試驗組大鼠曠場實驗測定結(jié)果x ± S)
[0122] 與空白組比較，口〈0.05;#:與模型組比較，p〈0.05。
[0123] 3)數(shù)據(jù)分析：
[0124] CUMS造模結(jié)束后，模型組大鼠水平運動和垂直運動次數(shù)均明顯減少(P〈0.05);經(jīng) 藥物治療后，與模型組比較，陽性藥組、藥物I~VI組大鼠水平運動和垂直運動次數(shù)均顯著 增加(P〈0.05);與陽性藥組比較，各給藥組大鼠水平運動和垂直運動次數(shù)無明顯差異。
[0125] 5.大鼠海馬組織中各神經(jīng)遞質(zhì)含量的測定
[0126] 1)實驗方法：
[0127] 造模第42天給予大鼠刺激后，將各組大鼠頸椎脫白處死，取腦，在冰臺上，分離稱 取海馬組織，放入組織勻漿器中，加入9倍PBS(pH7.4)勻漿，制成10%海馬組織勻漿液，將勻 漿液置入離心管中，于4°C條件下以3000r/min速度離心20min，靜置后仔細收集上清液，置 于1.5mlEP管中，-70°C保存，采用ELISA法檢測下丘腦中5-HT(5-羥色胺）、NE(去甲腎上腺 素）、BDNF(腦源性營養(yǎng)因子)的含量。
[0128] 2)實驗結(jié)果:見表6、及圖6~8。
[0129] 表6各試驗組大鼠海馬組織中神經(jīng)遞質(zhì)含量測定結(jié)果（i ± S)
[0131] 與空白組比較，口〈0.05;#:與模型組比較4〈0.05 ;&:與陽性藥組比較，？〈0.05。
[0132] 3)數(shù)據(jù)分析：
[0133] ①5-HT是腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，有研究表明抑郁癥的發(fā)生是腦內(nèi)5-HT釋放減少， 突觸間隙5-HT含量下降導致的結(jié)果。造模42天后，模型組大鼠海馬組織5-HT含量明顯減少， 與空白組比較有顯著性差異(P〈〇.05);與模型組比較，陽性藥組、藥物I~VI組大鼠海馬5-HT含量顯著增加(P〈0.05);與陽性藥組比較，各藥物組大鼠海馬5-HT含量無明顯差異，但是 藥物III組的5-HT水平高于藥性藥組。各藥物組別間相互比較，藥物III組（貫葉連翹提取 物/銀杏葉提取物=3:2)與其他各組均有顯著性差異。
[0134] ②NE是由多巴胺經(jīng)酪氨酸羥化酶作用生成的神經(jīng)遞質(zhì)，有學說認為抑郁癥是中樞 神經(jīng)系統(tǒng)中去甲腎上腺素合成和釋放減少引起的。造模42天后，模型組大鼠海馬組織NE含 量明顯減少，與空白組比較有顯著性差異(P〈〇. 05);與模型組比較，陽性藥組、藥物I~IV組 大鼠海馬5-HT含量顯著增加(P〈0.05);與陽性藥組比較，各藥物組大鼠海馬NE含量無明顯 差異，但是藥物III組的NE水平高于藥性藥組。各藥物組別間相互比較，藥物III組（貫葉連 翹提取物/銀杏葉提取物=3:2)與其他各組均有顯著性差異。
[0135] ③BDNF能刺激新生神經(jīng)元突起的生長，促進新生神經(jīng)元的發(fā)育和成熟;應激損傷 的初期，可通過調(diào)節(jié)神經(jīng)細胞內(nèi)的鈣濃度，減少神經(jīng)細胞壞死或凋亡，對神經(jīng)元起保護作 用。BDNF不僅可以通過促進軸突和樹突的生長、重構(gòu)及突觸形成，調(diào)節(jié)神經(jīng)的結(jié)構(gòu)可塑性， 還可以通過突觸前和突觸后機制改變突觸傳遞，影響神經(jīng)的功能可塑性。造模42天后，模型 組大鼠海馬組織BDNF含量明顯減少，與空白組比較有顯著性差異(P〈0.05);與模型組比較， 藥物III~VI組大鼠海馬BDNF含量顯著增加(P〈0.05)，陽性藥雖然能夠提高BDNF的水平，但 是與模型組比較沒有顯著性差異(P > 0.05);與陽性藥組比較，藥物VI組大鼠海馬BDNF含量 顯著增加(P〈〇.05)。各藥物組間相互比較，藥物V和VI組與其他各組有顯著性差異。
[0136] 結(jié)果分析:
[0137] 1.對大鼠連續(xù)給予輕、中等強度的不可預知刺激7天時就能觀察到大鼠體重顯著 降低，14天時大鼠的糖水消耗量明顯降低、42天時大鼠的水平運動次數(shù)和垂直運動次數(shù)都 顯著減少，說明造模成功。
[0138] 2.藥物II組(實施例1的組合物)和III組(實施例2的組合物)能夠顯著提高抑郁大 鼠的體重、改善其行為學，作用與陽性藥物路猶^泰?相當。
[0139] 3.血漿中N0水平過高，可對組織和細胞造成損傷。模型大鼠的N0-2水平顯著高于 空白組，本發(fā)明的組合物都能夠顯著降低N0-2水平，陽性藥組的N0-2水平雖然有所下降，但 是與模型組比較沒有顯著差異。提示本發(fā)明的組合物可以對組織和細胞起到保護作用，且 作用強于陽性對照。
[0140] 4.研究認為抑郁是因為大腦中相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)，如5-HT、NE、BDNF等合成和釋放的減 少。本試驗的模型大鼠即表現(xiàn)出腦內(nèi)上述神經(jīng)遞質(zhì)水平顯著降低（與空白組比較）。本發(fā)明 實施例1-4的組合物(藥物II~V組)能夠顯著提高抑郁大鼠腦組織中5-HT、NE、BDNF的水平， 尤其是實施例2的組合物(藥物III組），其在提高5-HT和NE水平方面的作用好于陽性藥組。 [0141]綜合試驗測定結(jié)果看，本發(fā)明的組合物能夠顯著糾正抑郁引起的大鼠各項指征的 異常，其中貫葉連翹提取物:銀杏葉提取物=3:2、2:3和1:4的組合物作用較優(yōu)。尤其是貫葉 連翹提取物:銀杏葉提取物=3 :2，與陽性藥路優(yōu)泰6比較，該優(yōu)選的組合物既有5-HT和NE 單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的再攝取的功效，又能保護神經(jīng)細胞，提高神經(jīng)功能可塑性。
[0142] 試驗例2本發(fā)明所述藥物組合物抗利血平致小鼠抑郁的藥效學研究
[0143] 實驗動物及實驗藥品
[0144] 1.實驗動物：SPF級ICR小鼠，雄性，150只，體重18-2lg，湖南斯萊克景達實驗動物 有限公司提供，許可證號：SCXK (湘)2011 -0003。
[0145] 2 ?實驗藥品
[0146] 貫葉連翹提取物:含貫葉金絲桃素3.0%，總金絲桃素0.30 % ;購自重慶高仁生物 科技有限公司；
[0147] 銀杏葉提取物含總黃酮醇苷24.0%，萜類內(nèi)酯（以以白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi) 酯B和銀杏內(nèi)酯C的總量計)6.0% ;購自重慶高仁生物科技有限公司。
[0148] 鹽酸氯米帕明：購自購自江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，批號:22150401。
[0149] 利血平:購自成都普菲德生物技術(shù)有限公司，批號：150314。
[0150] 動物飼養(yǎng):
[0151] 室內(nèi)溫度（18°C~24°C)，進食量(10g/100g體重? d)，飲水(每周換水2~3次）。
[0152] 實驗動物分組及給藥方案
[0153] 1.動物分組及給藥劑量:實驗小鼠隨機分為6組，每組10只小鼠，5只/籠，每組2籠：
[0154] ①空白對照組:生理鹽水(NaCl 9g/L)，灌胃，lml/100g體重?天
[0155] ②模型組：同"空白對照組"
[0156] ③陽性對照組:鹽酸氯米帕明，40mg ? kg-1 ? d-1
[0157] @高劑量組:貫葉連翹提取物+銀杏葉提取物(質(zhì)量比3:2)，272.1611^*1^4?(^
[0158] ?中劑量組:貫葉連翹提取物+銀杏葉提取物(質(zhì)量比3:2)，136.0811^1^_ 1*(1_1
[0159] ⑥低劑量組:貫葉連翹提取物+銀杏葉提取物(質(zhì)量比3:2)，68.04mg ? kg"1 ? cf1
[0160] 2 ?藥液配制：
[0161] ①利血平溶液的制備:給藥量為4mg ? kg<，取0.04g利血平粉末，用少量生理鹽水 溶解，定容至l〇〇ml容量瓶中，配置濃度為0.4mg ? mr1。
[0162] ②生理鹽水的配制:稱取9g氯化鈉，用雙蒸水定容至1000ml容量瓶中。
[0163] ③陽性藥藥液的配制：取鹽酸氯米帕明，去包衣，碾碎至粉末，稱取0.2667g粉末， 用少量生理鹽水溶解，定容至l〇〇ml容量瓶中，配置濃度為2.667mg ? mr1。
[0164] ④高劑量組藥液的配制：取貫葉連翹提取物1.0887g、銀杏提取物0.7257g，混合， 用少量生理鹽水溶解，定容至l〇〇 ml容量瓶中。
[0165] ⑤中劑量組藥液的配制：取貫葉連翹提取物0.5443g、銀杏提取物0.3692g，混合， 用少量生理鹽水溶解，定容至l〇〇 ml容量瓶中。
[0166] ⑥低劑量組藥液的配制：取貫葉連翹提取物0.2721g、銀杏提取物0.1815g，混合， 用少量生理鹽水溶解，定容至l〇〇 ml容量瓶中。
[0167] 4.給藥方案
[0168] 各組灌胃給予藥物或生理鹽水，每日1次，連續(xù)給藥7d(給藥體積均按0.015mL ? g 4 ? cf1);末次給藥后，除空白對照組外，其它各組腹腔注射4mg ? kg-1利血平，腹腔注射給藥 體積按0.01ml ? g-1 ? d-1。
[0169] 實驗過程及結(jié)果:
[0170] 1.體溫下降的觀測：
[0171] 末次給藥4h后將溫度計探頭插入小鼠肛門內(nèi)，深度以溫度計探頭完全進入肛門為 準，維持至少2min。記錄各組數(shù)據(jù)，比較給藥組及對照組中體溫的差異。具體結(jié)果見表7。
[0172] 表7各組體溫測定結(jié)果（X. 士 S)
[0174] 注：與空白組比較，*表示P〈0.05，#表示P〈0.01;與模型組比較，▲表示P〈0.05，^ 表示P〈0.01
[0175] 數(shù)據(jù)分析：模型組小鼠腹腔注射利血平后體溫與空白組比較降低非常顯著（P〈 0.01)，表明利血平致抑郁模型造模成功；陽性對照組和中劑量組與模型組比較都具有顯著 差異(P〈0.05)，但兩者升高因利血平導致的體溫下降的作用相當，無顯著性差異。
[0176] 2.小鼠血清中NE，DA和腦組織中5-HT含量的測定
[0177] 在末次給藥后8h，摘眼球取血，將所取血液靜置1小時，離心（3000r/min，20min)， 取上清液置于EP管中，低溫保存待測。取血后，斷頭處死動物，在冰盤上剝離大腦，去掉小腦 和嗅球，保留剩余的全腦組織，用錫箱紙包裹，_70°C保存。加入9倍PBS(PH7.4)勻漿，制成 10%腦組織勻漿液，將勻漿液置入離心管中，于4°C條件下以3000r/min速度離心20min，靜 置后仔細收集上清液，置于2mlEP管中，-70°C保存待測。
[0178] 采用ELI SA法檢測小鼠血清中NE、DA，和腦組織5-HT的含量。結(jié)果見表8。
[0179] 表8小鼠血清和腦組織中神經(jīng)遞質(zhì)的含量測定結(jié)果（i ± s)
[0181] 注：與空白組比較，*表示P〈0.05，#表示P〈0.01;與模型組比較，▲表示P〈0.05，^ 表示P〈0.01
[0182] 數(shù)據(jù)分析：
[0183] 1)模型組小鼠血清中DA含量明顯減少，與空白組比較具有極顯著性差異（P〈 0.01)，表明利血平致抑郁模型造模成功；與模型組比較，陽性藥組和各劑量組小鼠血清中 DA含量均顯著增加(P〈0.01)，說明本發(fā)明的藥物組合物高中低劑量均能夠顯著升高抑郁小 鼠血清中DA含量;與陽性藥組比較，各劑量組小鼠血清中DA含量無顯著差異。
[0184] 2)模型組小鼠血清中NE含量明顯減少，與空白組比較具有極顯著性差異（P〈 0.01)，表明利血平致抑郁模型造模成功；與模型組比較，陽性藥組和各劑量組小鼠血清中 NE含量均顯著增加(P〈0.01)，說明本發(fā)明的藥物組合物高、中、低劑量均具能顯著提高血清 中NE的含量;與陽性藥組比較，各給藥組均有顯著性差異(P<0.05)。
[0185] 3)模型組小鼠腦組織中5-HT含量明顯減少，與空白組比較具有極顯著性差異(P〈 0.01)，表明利血平致抑郁模型造模成功；與模型組比較，陽性藥組和中低劑量組小鼠腦組 織中5-HT含量均顯著增加，說明本發(fā)明的藥物組合物中低劑量均能夠顯著升高抑郁小鼠腦 組織中5-HT含量;與陽性藥組比較，低劑量組小鼠腦組織中5-HT含量與之相當。
[0186] 實驗結(jié)論
[0187] 利血平所致抑郁小鼠在各項生理指標都表現(xiàn)為異常，如體溫顯著降低、血清和腦 組織中的相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)水平顯著降低。貫葉連翹提取物和銀杏提取物以質(zhì)量比3:2組成的 藥物組合物，能夠逆轉(zhuǎn)上述異常的生理指標，顯示出對于抑郁有良好的藥效，且作用大多與 陽性藥相當；特別的，本發(fā)明的藥物組合物三個劑量組升高抑郁小鼠血清中NE水平的作用 強于陽性對照藥。因此，綜合上述藥效實驗結(jié)果，本發(fā)明的藥物組合物治療抑郁的作用好于 鹽酸氯米帕明。
[0188] 總之，本發(fā)明提供了一種新的可以用于治療抑郁的藥物組合物，由貫葉連翹提取 物和銀杏葉提取物組成。藥效學試驗表明，本發(fā)明的藥物組合物對抑郁模型動物有顯著的 療效，尤其是貫葉連翹提取物:銀杏葉提取物=3:2(重量比）的藥物組合物，在調(diào)節(jié)相關(guān)生 化指標和神經(jīng)遞質(zhì)方面，作用優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)的路優(yōu)泰 51和鹽酸氯米帕明。
[0189] 以上對本發(fā)明【具體實施方式】的描述并不限制本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)本 發(fā)明做出各種改變或變形，只要不脫離本發(fā)明的精神，均應屬于本發(fā)明所附權(quán)利要求的范 圍。
【主權(quán)項】
1. 一種藥物組合物，由貫葉連翹提取物和銀杏葉提取物組成。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，以所述藥物組合物的重量為基準， 所述貫葉連翹提取物占20%~80%，余量為所述銀杏葉提取物。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，其特征在于，以所述藥物組合物的重量為基 準，所述貫葉連翹提取物占20%~60%，余量為銀杏葉提取物； 優(yōu)選的，以所述藥物組合物的重量為基準，所述貫葉連翹提取物占40%~60%，余量為 銀杏葉提取物。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，以所述藥物組合物的重量為基準， 所述貫葉連翹提取物占60%，所述銀杏葉提取物占40%。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項所述的藥物組合物，其特征在于，所述貫葉連翹提取物 總金絲桃素不少于〇. 30%，貫葉金絲桃素不少于3.0%。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項所述的藥物組合物，其特征在于，所述銀杏葉提取物總 黃酮醇苷不少于24.0%，含萜類內(nèi)酯以白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯A、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的總 量計不少于6.0%。7. -種含有權(quán)利要求1至6中任一項所述藥物組合物的藥物制劑； 優(yōu)選的，所述藥物制劑含有或不含有藥學上可以接受的輔料。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物制劑，其特征在于，所述藥物制劑為口服制劑，選自片劑、 膠囊劑、軟膠囊劑、泡騰片、口腔速溶膜劑、口腔崩解片和口服液中的一種或多種。9. 權(quán)利要求7或8所述的藥物制劑的制備方法，包括將上述藥物組合物和藥學上可以接 受的輔料混合，按照常規(guī)方法制備成臨床上可以接受的制劑。10. 權(quán)利要求1至6中任一項所述的藥物組合物和權(quán)利要求7或8所述的藥物制劑在制備 治療抑郁癥的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P25/24GK105853479SQ201610268990
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月27日
【發(fā)明人】張海燕, 楊明, 宋民憲, 方洋, 賴瓊, 李游
【申請人】江西中醫(yī)藥大學