一種具有醫(yī)藥用途的黃酮類化合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，具體設(shè)及從馬鞭草的干燥地上部分中分離得到的一種新的 黃酬類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 馬鞭草，又名鐵馬鞭、野荊芥、紫頂龍芽草，始載于《名醫(yī)別錄》，為馬鞭草科植物馬 鞭草(Verbena officinaliS L.)的干燥地上部分。馬鞭草味苦性涼，歸肝、脾經(jīng)，具有活血 散疲、利水退黃、解毒、截追的功效，主治瘤瘤積聚、痛經(jīng)經(jīng)閉、喉搏、癡腫、水腫、黃痘、追疾。 馬鞭草原產(chǎn)于熱帶美洲，為多年收草本，常生于路邊、山坡、溪邊或林旁，國(guó)內(nèi)廣泛分布于中 南、西南及山西、陜西、甘肅、新疆、江蘇、安徽、浙江、江西等地，主產(chǎn)湖北、江蘇、廣西、貴州。 花期6~8月，果期7~11月，通常采收季節(jié)為6~8月開花時(shí)，炮制過(guò)程僅去殘根及雜質(zhì)，洗 凈，稍潤(rùn)，切斷，曬干即可。
[0003] 目前已從馬鞭草中分離鑒定出百余種化學(xué)成分，包括環(huán)締酸祗糖巧類、苯丙素糖 巧類、=祗類、黃酬類、醬醇類、揮發(fā)油類、有機(jī)酸類等。
[0004] 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明馬鞭草具有抗腫瘤、抗菌、抗早孕、消炎止痛、止血、小劑量興 奮、大劑量抑制交感神經(jīng)末梢、促進(jìn)乳汁分泌、擬副交感等作用。臨床用于治療外感發(fā)熱，濕 熱黃痘，急性扁桃體炎、小兒急性腎炎、急性乳腺炎、流行性感冒、功能性子宮出血、牙周炎、 霉菌性陰道炎、細(xì)菌性頻疾等病癥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種從馬鞭草的干燥地上部分中分離得到的一種新的黃 酬類化合物；
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供該新化合物的制備方法；
[0007] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[000引一種黃酬類化合物，具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物(I)，
[0009]
[0010] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：（a)將馬鞭草的干燥地上部分 粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油酸、乙酸乙醋和 水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用75%乙醇洗脫 12個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟(b)中75%乙 醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、40:1、20:1、10:1和1:1的二氯甲燒-甲 醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟(C)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25: 1、20:1和10:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基娃 燒鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集9~13個(gè)柱體 積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。
[0011] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0012] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為75%。
[0013] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0014] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對(duì) 人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0015] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過(guò)口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無(wú)菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0016] 本發(fā)明提供的上述黃酬類化合物，在實(shí)驗(yàn)中證實(shí)A&-40的毒性損害神經(jīng)細(xì)胞，引起 PC12大量調(diào)亡，細(xì)胞活性下降，上述黃酬類化合物（I)干預(yù)后調(diào)亡情況得到改善，因此，上述 黃酬類化合物(I)具有醫(yī)藥用途，尤其是在制備保護(hù)神經(jīng)的藥物中。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1為化合物(I)結(jié)構(gòu)式；
[001引圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0020] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0021] 藥材和試劑來(lái)源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購(gòu)自上海 凌峰化學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。馬鞭草的干燥地 上部分購(gòu)于安徽毫州中藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地廣東。
[0022] 制備方法：（a)將馬鞭草的干燥地上部分(8kg)粉碎，用75%乙醇熱回流提取(2化 X3次），合并提取液，濃縮至無(wú)醇味(6L)，依次用石油酸(化X3次）、乙酸乙醋(化X3次）和 水飽和的正下醇(化X3次）萃取，濃縮，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（315g)和 正下醇萃取物；（b)步驟(a)中乙酸乙醋萃取物用純凈水溶解至化，醫(yī)用脫脂棉過(guò)濾，濾液用 AB-8型大孔樹脂（1.5kg)分離，依次用10%乙醇（1化)和75% (1化)乙醇洗脫，收集75%乙醇 洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏（155g); (C)步驟(b)中75%乙醇洗脫浸膏用200- 300目正相硅膠分離，依次用體積比為80:1 (10個(gè)柱體積）、40:1 (8個(gè)柱體積）、20:1 (8個(gè)柱體 積）、10:1 (8個(gè)柱體積)和1:1 (5個(gè)柱體積)的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟 (C)中組分3(36g)用200-300目正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為25:1(8個(gè)柱體積）、 20:1(8個(gè)柱體積)和10:1(5個(gè)柱體積)的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d) 中組分2 (12g)用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠ODS-C18分離，用體積百分濃度為70 %的甲 醇水溶液等度洗脫，收集9~13個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I) (25mg)。
[0023] 結(jié)構(gòu)確證:HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z 401.1006,結(jié)合核磁特征可得分子式為 C22Hi8〇6，不飽和度為 14。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)Sh(郵m，DMSO-ds，400MHz): H-5 (7.99，d，J = 8.7)，H-6(6.65，d，J = 8.5)，H-2'，6'（7.31，m)，H-3'，5'（7.27，m)，H-4'（7.31，m)，H-5" (8.01，3)，2"-16(1.31，3)，2"-16(1.31，3)，7-016(3.89,3);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)扣（口口111， DMS0-d6，100MHz):131.8(C，2-C)，193.7(C，3-C)，190.3(C，4-C)，113.1(C，4a-C),126.9 (CH，5-C)，104.7(CH，6-C)，163.7(C，7-C)，105.6(C，8-C)，158.1(C，8a-C)，136.3(C，r-C)， 127.8(CH，2'，6'-C)，127.3(CH，3'，5'-C)，127.5(CH，4'-C)，101.8(C，2"-C)，91.7(CH，3"-C)，110.9(C，r-C)，142.7(CH，5"-C)，21.8(CH3,2"-Me)，21.8(CH3,2"-Me)，55.2(C 出，7-OMe);碳原子標(biāo)記參見圖1。紅外光譜表明該化合物含有芳香碳(2964nm，1695nm和1591nm) 。1化NMR光譜顯示22個(gè)碳信號(hào)，包含S個(gè)甲基（SC21.8，2" -Me; 21.8，2"-Me和55.2，7-OMe)， 九個(gè)次甲基（此126.9,5-。104.7,6-。127.8,2'，6'-。127.3,3'，5'-。127.5,4'-。91.7， 滬-。142.7,5"-〇，十個(gè)季碳（5(：131.8,2-。193.7,3-。190.3,4-。113.1，4曰-。163.7,7-C; 105.6，8-C; 158.1，8a-C; 136.3，r-C; 101.8，2"-C; 110.9，r-C)。核磁數(shù)據(jù)表明該化合物 為黃酬類化合物。NOESY譜中，H-6(姐6.65，(1^ = 8.5化）與甲氧基質(zhì)子（姐3.89,3)的相關(guān) 性，W及H-5(如7.99，d，J = 8.7Hz)和H-6的相關(guān)性，表明C-7(SC163.7)位連有一個(gè)甲氧基。 綜合氨譜、碳譜、HMB幻普和NOESY譜，W及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物 如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過(guò)EC的式驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致(圖2)。
[0024] 實(shí)施例2:化合物(I)藥理作用試驗(yàn) [00巧]一、材料和儀器
[0026] PC12細(xì)胞株，安徽中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中屯、贈(zèng)與。A&