治療性腫瘤疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療癌癥的方法，其包括用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞，和將所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。特別地，本發(fā)明涉及一種治療性癌癥疫苗。更特別地，本發(fā)明涉及經(jīng)至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理的樹突狀細胞(DC)。
【專利說明】治療性腫瘤疫苗
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種治療癌癥的方法，其包括用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞，和將治療有效量的所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。特別地，本發(fā)明涉及一種治療性癌癥疫苗。更特別地，本發(fā)明涉及經(jīng)至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理的樹突狀細胞(DC)。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤疫苗是近年研究的熱點之一，其原理是通過激活患者自身免疫系統(tǒng)，利用腫瘤細胞或腫瘤抗原物質(zhì)誘導機體的特異性細胞免疫和體液免疫反應(yīng)，增強機體的抗癌能力，阻止腫瘤的生長、擴散和復發(fā)，以達到清除或控制腫瘤的目的。
[0003]DC在激活固有免疫與適應(yīng)性免疫反應(yīng)中起關(guān)鍵作用(Banchereau etal.，1998，Nature 392:245-252) JC能夠提呈腫瘤抗原給初始腫瘤特異性細胞毒T細胞。DC也是重要的細胞因子來源，如白介素_12 (Interleukin-12IL_12)、腫瘤壞死因子a (Tumor NecrosisFactor alpha TNF a )與a干擾素(Interferon alphal FN a ),這些細胞因子在抗腫瘤免疫反應(yīng)中起作用(Banchereau et al.，1998，Nature 392:245-252)。因此，近幾年來，科學家正在努力開發(fā)激活DC活性以用于治療腫瘤的藥物。為了誘導適當?shù)拿庖叻磻?yīng)，DC必須攝取抗原、被TLR信號激活、遷移到次級淋巴器官并激活T細胞。
[0004]DC是免疫系統(tǒng)的中樞組分，橋聯(lián)固有免疫與適應(yīng)性免疫反應(yīng)。在接收到成熟信號刺激后如炎性細胞因子、T細胞刺激或識別病原相關(guān)分子模式(pathogen-associatedmolecular patterns, PAMP), DC上調(diào)細胞表面主要組織相容性抗原I and II (majorhistocompatibility complex II, MHCII)與共刺激分子的表達(Kawai T & Akira`S.Nature Immunology, 11, 373-384, 2010)。在成熟過程中，DC的作用從抗原攝取轉(zhuǎn)變成抗原提呈，并遷移到次級淋巴器官，刺激T淋巴細胞。利用DC特性用于臨床的工作已經(jīng)被大量開展如DC的間接體內(nèi)療法已經(jīng)成為標準操作(Gilboa E.JClin Invest.117(5):1195-1203，2007)。尤其是由于DC能夠激活初始T細胞，因此DC在惡性腫瘤治療方面的應(yīng)用是大有希望的(Figdor CG.et al.Nature Medicine 10,475-480,2004)。
[0005]DC輔助免疫療法已經(jīng)顯示出對增強腫瘤患者的免疫反應(yīng)是一種安全的方式。可是，到目前為止已經(jīng)取得的免疫反應(yīng)還沒有達到治療潛力，而且DC輔助療法目前還沒有成為臨床的標準治療(Gilboa E.J Clin Invest.117(5):1195-1203,2007 ；Steinman RM,Annual Review of Immunology, 30:1-22, 2012)。一項新近的 meta 研究發(fā)現(xiàn),使用成熟的DC治療338個黑色素瘤患者中，大約30%的病人有完全反應(yīng)(CR)，部分反應(yīng)(CR)或病情穩(wěn)定(SD) (Melanoma Research，21，165-174，2011)。在免疫學參數(shù)中，尤其是抗原特異性T淋巴細胞的誘導被發(fā)現(xiàn)對于陽性結(jié)果(CR，PR和SD)的產(chǎn)生是有意義的。
[0006]DC用于臨床治療的最關(guān)鍵的方面是DC對T淋巴細胞的刺激能力。Toll樣受體(TLR)已經(jīng)被認為是一種激活DC的重要受體。TLR識別微生物病原體的特異的分子模式。在人類中，已經(jīng)鑒定到至少十種不同的TLR分子。通過微生物分子觸發(fā)的TLR信號強烈地激活 DC 上調(diào)共刺激分子(CD80 和 CD86) (Hertz et al.,2001, J.1mmunol.166:2444-2450)，并產(chǎn)生促炎細胞因子(TNF- a、IL_6 和 IL-12) (Thoma-Uszynski et al.,2001,J.1mmunol.154:3804-3810)?，F(xiàn)在，眾多研究已經(jīng)鑒定了多種的結(jié)構(gòu)不同的細菌產(chǎn)物可作為TLR的配體和激動劑，包括細菌脂多糖(TLR-4)、鞭毛蛋白(TLR-5)、脂磷壁酸(TLR-2)與Poly 1:C(TLR-3)。更特別的是，TLR-9已經(jīng)顯示是具有免疫刺激作用的細菌CpG DNA的配體(Hemmi et al., 2000, Nature 408:740745 ;Wagner, 2001, Immunity 14:499-502)。
[0007]Toll 樣受體(TLR)是一種模式識別受體家族(pattern recognitionreceptors,PRR)，是主要的識別微生物病原體誘導固有免疫反應(yīng)的傳感器。TLR識別微生物的不同結(jié)構(gòu)，被稱為“PAMP”(pathogen associatedmo lecular patterns)。配體結(jié)合到 TLR 引起細胞內(nèi)信號通路級聯(lián)，誘導產(chǎn)生炎癥與免疫因子。PRR也包括細胞內(nèi)蛋白，如NOD樣受體、RIG-1樣解旋酶(RLH)以及細胞外受體如清道夫受體和C型凝集素受體。TLR典型地被微生物信號或者內(nèi)源性配體(如熱休克蛋白、纖連蛋白與纖維蛋白原)或化學合成的藥物激活。在人類，已經(jīng)鑒定到十種TLR。這些受體包括一種保守的跨膜分子家族，在胞外區(qū)富含亮氨酸重復序列，含有一個跨膜結(jié)構(gòu)域與一個細胞內(nèi)TIR(Toll/IL-lR)結(jié)構(gòu)域。表達于細胞表面的TLR(TLR1，-2，-4，-5,-6)偵測局部微環(huán)境中的病原體。TLR4通過胞外段識別細菌細胞壁成分脂多糖(LPS),除了單磷酰脂A(monophosphoryllipid A,MPLA)外。脂蛋白與脂磷壁酸被 TLR2分別聯(lián)合TLRl與TLR6識別。TLR5識別細菌鞭毛蛋白。相反，某些TLR (TLR-3，-7/8，-9)位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)并被快速募集到內(nèi)體-溶酶體區(qū)室，在區(qū)室內(nèi)的TLR能夠偵測微生物核酸(分別是 dsRNA, ssRNA 與含有未甲基化的 CpG模序的 ss DNA) (Napolitani G.et al.NatureImmunology 6，769，2005.)。配體結(jié)合到TLR誘導細胞銜接蛋白募集，在細胞質(zhì)形成信號轉(zhuǎn)導復合物。這導致信號通路包括NF-KB與MAPK p38和JNK的激活，調(diào)節(jié)參與炎癥(細胞因子)與免疫(MHC分子、黏附分子)的基因的表達。由于不同的TLR信號通過不同的銜接蛋白的聯(lián)合，因此募集不同的轉(zhuǎn)錄因子與誘導不同的基因表達。內(nèi)體受體TLR7，-8，-9在配體結(jié)合后被激活，并與銜接蛋白 MyD88 (myeloid diff erentiation primary response gene)相互作用，接著與幾種信號復合物聯(lián)合，最后導致IRF7，NF-KB和MAPK的激活。IRF7的表達促進I型干擾素(IFN)的高表達。LPS與TLR4結(jié)合后，募集幾種銜接蛋白(TIRAP，MyD88，TRAM和TRIF)到TIR胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。這些銜接蛋白隨后參與MyD88和TRIF依賴的信號通路。
[0008]由于目前的腫瘤疫苗無法激活足夠的免疫反應(yīng)來抗擊腫瘤，因此有必要開發(fā)新的腫瘤疫苗來治療腫瘤。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明人首次出人意料地發(fā)現(xiàn)，通過用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原的組合處理DC細胞，能夠特別有效地激活DC細胞從而增強抗腫瘤免疫應(yīng)答，由此可用于治療癌癥。
[0010]因此，在一個方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原。
[0011]在另一個方面，本發(fā)明提供了一種用于刺激免疫系統(tǒng)的方法，其包括:用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞；和將治療有效量的所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。[0012]在又一個方面，本發(fā)明提供了一種用于改善對象中針對癌癥的免疫應(yīng)答的方法，其包括:用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞；和將治療有效量的所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。
[0013]在又一個方面，本發(fā)明提供了一種用于治療癌癥的方法，其包括:用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞；和將治療有效量的所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。
[0014]在又一個方面，本發(fā)明提供了用于處理樹突狀細胞的方法，其包括:用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。
[0015]在又一個方面，本發(fā)明提供了至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。
[0016]在又一個方面，本發(fā)明提供了至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原在制備用于刺激免疫系統(tǒng)的藥物中的用途。
[0017]在又一個方面，本發(fā)明提供了至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原在制備用于改善對象中針對癌癥的免疫應(yīng)答的藥物中的用途。
[0018]另外，本發(fā)明還提供了一種藥物、藥物組合或藥盒(kit)，其包含至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原。本發(fā)明還提供了一種經(jīng)處理的樹突狀細胞，其經(jīng)過至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原的處理。本發(fā)明還提供了一種治療性癌癥疫苗，其包含至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原或者經(jīng)過至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理的樹突狀細胞。
[0019]本發(fā)明至少部分地基于發(fā)現(xiàn)聯(lián)合施用兩種或更多種獨特的TLR激動劑有很強的免疫刺激活性。另外，本發(fā)明還發(fā)現(xiàn)在聯(lián)合施用兩種TLR激動劑的情況下，用針對來源于腫瘤干細胞、腫瘤細胞與增殖性腫瘤相關(guān)內(nèi)`皮細胞的抗原處理樹突狀細胞，然后將樹突狀細胞施用給患者能夠從三方面抑制了腫瘤干細胞與腫瘤細胞的生長及血管生成。
[0020]因此，在一個特定的實施方案中，本發(fā)明提供了通過激活DC治療腫瘤的藥物，該藥物含有至少兩種TLR激動劑與至少三種分別來源于腫瘤干細胞、腫瘤細胞與增殖性腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞的抗原。
[0021]在另一個特定的實施方案中，本發(fā)明提供了通過給予有效劑量的藥物來激活DC治療腫瘤的方法，該藥物含有至少兩種TLR激動劑與至少三種分別來源于腫瘤干細胞、腫瘤細胞與增殖性腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞的抗原。
[0022]在又一個特定的實施方案中，本發(fā)明提供了通過給予足夠量的用藥物預處理的DC并通過激活DC來治療腫瘤的方法，該藥物含有至少兩種TLR激動劑與至少三種分別來源于腫瘤干細胞、腫瘤細胞與增殖性腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞的抗原。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1是激活DC抗原提呈的藥物與方法的示意圖，其中激活DC以誘導廣泛的抗腫瘤細胞、腫瘤干細胞與腫瘤相關(guān)血管內(nèi)皮細胞的免疫反應(yīng)，其中AACSc表示抗血管發(fā)生腫瘤干細胞及腫瘤細胞(Anti AngiogenesisCancer Stem Cell and Cancer Cell)。
[0024]圖2顯示了通過ELISA方法定量人DC產(chǎn)生的促炎細胞因子IL_12p70，其中DC經(jīng)以下藥物預處理:0K-432、1C、CpG、AACSc, 0K-432+IC以及對照PBS緩沖液，其中IC表示Poly 1:C，CpG表示非甲基化CpG寡核苷酸，AACSc表示包含兩種TLR激動劑(Poly 1:C和0K-432)和三種癌癥相關(guān)抗原(hTERT、MUCl和VEGFR2)的抗血管發(fā)生，腫瘤干細胞及腫瘤細胞疫苗。
[0025]圖3是一系列ELISP0T試驗的檢測圖，其顯示經(jīng)AACSc疫苗預處理的DC相比于僅用腫瘤相關(guān)抗原(TAA)(其包含三種癌癥相關(guān)抗原(hTERT、MUCl和VEGFR2))或腫瘤裂解物預處理的DC更強地活化抗TAA(tumor-associated antigen)特異性人T淋巴細胞。圖3A顯示在針對抗hTERT細胞應(yīng)答的活化中，相比于腫瘤裂解物(MDA-MB-231裂解物)+TLR激動劑(Poly 1:C和0K-432)，AACSc預處理的DC表現(xiàn)出更強的活性。AACSc表示包含兩種TLR激動劑Poly 1:C和0K-432以及三種癌癥相關(guān)抗原h(huán)TERT、MUCl和VEGFR2的疫苗；圖3B顯示AACSc在活化抗MUClT細胞應(yīng)答中活性更強，縮寫如圖3A中所述；圖3(:顯示AACSc在活化抗VEGFR T細胞應(yīng)答中活性更強，縮寫如圖3A中所述。
[0026]圖4是標準的51Cr釋放試驗的結(jié)果圖，顯示用AACSc疫苗或其他藥物預處理的自體DC在體外激活HLA-A2+T淋巴細胞的溶瘤活性.所述激活HLA-A2+T淋巴細胞對HLA-A2+、hTERT+及MUCl+人類腫瘤細胞(MDA-MD-231細胞)的溶瘤活性，其中TAA表示hTERT、MUCl和VEGFR2的混合物，腫瘤裂解物表示MDA-MB-231裂解物，TLR激動劑表示Poly 1:C和OK-432，AACSc表示包含兩種TLR激動劑Poly 1:(:和01(-432以及三種癌癥相關(guān)抗原h(huán)TERT、MUCl和VEGFR2的疫苗。
[0027]圖5是標準的51Cr釋放試驗的結(jié)果圖，顯示用AACSc疫苗或其他藥物預處理的自體DC在體外激活HLA-A2+T淋巴細胞殺傷增殖內(nèi)皮細胞(HUVEC)活性.所述激活HLA-A2+T淋巴細胞對增殖性HLA-A2+及VEGFR2+人類血管內(nèi)皮細胞(原代HLA-A2+人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC))的殺傷活性，其中TAA表示hTERT、MUCl和VEGFR2的混合物，腫瘤裂解物表示MDA-MB-231裂解物，TLR激動劑表示Poly1:C和OK-432，AACSc表示包含兩種TLR激動劑Poly 1:C和0K-432以及三種癌癥相關(guān)抗原h(huán)TERT、MUCl和VEGFR2的疫苗。
【具體實施方式】`
[0028]在一個方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其包含至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原。在一些實施方案中，所述藥物組合物包含至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑。在另一些實施方案中，所述藥物組合物包含至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原。優(yōu)選地，所述藥物組合物包含至少兩種TLR激動劑和至少三種癌癥相關(guān)抗原。
[0029]在另一個方面，本發(fā)明提供了一種用于刺激免疫系統(tǒng)的方法，其包括:用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞；和將治療有效量的所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。本發(fā)明還提供了一種用于刺激免疫系統(tǒng)的方法，其包括:將治療有效量的至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原施用給有此需要的對象，從而在原位處理樹突狀細胞。在一些實施方案中，所述方法用至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑處理樹突狀細胞。在另一些實施方案中，所述方法用至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。優(yōu)選地，所述方法用至少兩種TLR激動劑和至少三種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。
[0030]在又一個方面，本發(fā)明提供了一種用于改善對象中針對癌癥的免疫應(yīng)答的方法，其包括:用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞；和將治療有效量的所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。本發(fā)明還提供了一種用于改善對象中針對癌癥的免疫應(yīng)答的方法，其包括:將治療有效量的至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原施用給有此需要的對象，從而在原位處理樹突狀細胞。在一些實施方案中，所述方法用至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑處理樹突狀細胞。在另一些實施方案中，所述方法用至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。優(yōu)選地，所述方法用至少兩種TLR激動劑和至少三種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。
[0031]在又一個方面，本發(fā)明提供了一種用于治療癌癥的方法，其包括:用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞；和將治療有效量的所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。本發(fā)明還提供了一種用于治療癌癥的方法，其包括:將治療有效量的至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原施用給有此需要的對象，從而在原位處理樹突狀細胞。在一些實施方案中，所述方法用至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑處理樹突狀細胞。在另一些實施方案中，所述方法用至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。優(yōu)選地，所述方法用至少兩種TLR激動劑和至少三種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。
[0032]在又一個方面，本發(fā)明提供了用于處理樹突狀細胞的方法，其包括:用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。在一些實施方案中，所述方法用至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑處理樹突狀細胞。在另一些實施方案中，所述方法用至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。優(yōu)選地，所述方法用至少兩種TLR激動劑和至少三種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。在某些實施方案中，所述處理在原位進行。
[0033]在又一個方面，本發(fā)明提供了至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原在制備用于治療癌癥的藥物中的用途。在一些實施方案中，所述TLR激動劑為至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑。在`另一些實施方案中，所述癌癥相關(guān)抗原為至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原。
[0034]在又一個方面，本發(fā)明提供了至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原在制備用于刺激免疫系統(tǒng)的藥物中的用途。在一些實施方案中，所述TLR激動劑為至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑。在另一些實施方案中，所述癌癥相關(guān)抗原為至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原。
[0035]在又一個方面，本發(fā)明提供了至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原在制備用于改善對象中針對癌癥的免疫應(yīng)答的藥物中的用途。在一些實施方案中，所述TLR激動劑為至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑。在另一些實施方案中，所述癌癥相關(guān)抗原為至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原。
[0036]在又一個方面，本發(fā)明提供了一種藥物組合物，其用于治療癌癥、刺激免疫系統(tǒng)或者改善對象中針對癌癥的免疫應(yīng)答，所述藥物組合物包含至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原。在一些實施方案中，所述TLR激動劑為至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑。在另一些實施方案中，所述癌癥相關(guān)抗原為至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原。[0037]另外，本發(fā)明還提供了一種藥物、藥物組合或藥盒(kit)，其包含至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原或者經(jīng)至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理的樹突狀細胞。本發(fā)明還提供了一種經(jīng)處理的樹突狀細胞，其經(jīng)過至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原的處理。本發(fā)明還提供了一種治療性癌癥疫苗，其包含至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原或者經(jīng)過至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理的樹突狀細胞。
[0038]在又一個方面中，本發(fā)明提供了用于處理樹突狀細胞的方法，其包括:用至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞。
[0039]在另一個方面中，本發(fā)明提供了至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原在制備用于治療癌癥的藥物中的用途，其中所述治療通過以下方式實現(xiàn):用所述至少一種TLR激動劑和所述至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞；和將所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。
[0040]在又一個方面中，本發(fā)明提供了至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原在制備用于刺激免疫系統(tǒng)的藥物中的用途，其中所述刺激通過以下方式實現(xiàn):用所述至少一種TLR激動劑和所述至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞；和將所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。
[0041]在又一個方面中，本發(fā)明提供了至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原在制備用于改善對象中針對癌癥的免疫應(yīng)答的藥物中的用途，其中所述改善通過以下方式實現(xiàn):用所述至少一種TLR激動劑和所述至少一種癌癥相關(guān)抗原處理樹突狀細胞；和將所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。
[0042]在又一個方面中，本 發(fā)明提供了至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原在制備用于處理樹突狀細胞的藥物中的用途。
[0043]在一個方面中，本發(fā)明還特別地提供了一種癌癥疫苗(特別地為治療性癌癥疫苗)，其包含至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原，或者包含經(jīng)至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原處理的樹突狀細胞。
[0044]在另一個方面中，本發(fā)明還提供了藥物組合、藥物、樹突狀細胞、藥盒或者癌癥疫苗，其用于治療癌癥、刺激免疫系統(tǒng)和/或改善針對癌癥的免疫應(yīng)答。
[0045]在又一個方面中，本發(fā)明還提供了如上所述的藥物組合、藥物、樹突狀細胞、藥盒或者癌癥疫苗在制備用于治療癌癥、刺激免疫系統(tǒng)和/或改善針對癌癥的免疫應(yīng)答之藥物中的用途。
[0046]在本發(fā)明的一些實施方案中，所述至少一種TLR激動劑為至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑，優(yōu)選至少兩種TLR激動劑，更優(yōu)選兩種TLR激動劑。特別地，所述TLR激動劑包括:TLR1激動劑、TLR2激動劑、TLR3激動劑(例如Poly 1: C)、TLR4激動劑(例如單磷酰脂A)、TLR5激動劑(例如鞭毛蛋白)、TLR6激動劑、TLR7激動劑、TLR8激動劑、TLR9激動劑(例如非甲基化CpG寡核苷酸)、非特定TLR激動劑(例如0K-432)或其任意組合。優(yōu)選地，本發(fā)明中的所述至少一種TLR激動劑為TLR3激動劑和非特定TLR激動劑，更優(yōu)選為Poly 1:C和0K-432。
[0047]在本發(fā)明的另一些實施方案中，所述至少一種癌癥相關(guān)抗原為至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原，優(yōu)選至少三種癌癥相關(guān)抗原，更優(yōu)選三種癌癥相關(guān)抗原。特別地，所述至少一種癌癥相關(guān)抗原包括至少一種來源于腫瘤細胞的癌癥相關(guān)抗原、至少一種來源于增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞的癌癥相關(guān)抗原或其任意組合。更特別地，所述至少一種來源于腫瘤細胞的癌癥相關(guān)抗原包括至少一種來源于腫瘤干細胞的癌癥相關(guān)抗原。優(yōu)選地，所述至少一種癌癥相關(guān)抗原包括至少兩種來源于腫瘤干細胞的癌癥相關(guān)抗原和至少一種來源于增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞的癌癥相關(guān)抗原。
[0048]在本發(fā)明的又一些實施方案中，所述來源于腫瘤細胞的抗原包括:端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶、黑素細胞分化抗原 A(melanocyte differentiation antigenMelan-A)、酪氨酸酶、黑色素瘤抗原_1 (melanoma-associated anti gen-1MAGE-1)、黑色素瘤抗原_2、黑色素瘤抗原-3、黑色素瘤抗原-4、黑色素瘤抗原-12、黑色素瘤相關(guān)抗原I (Melanoma-associatedantigen recognizedby T cells)、粘蛋白I (MUCl)、粘蛋白2、粘蛋白3、粘蛋白4、粘蛋白 18、癌胚抗原(Cancer Embryo Antigen CEA)、前列腺特異性抗原(prostate specificantigen PSA)、前列腺特異性膜抗原(prostate-specif icmembrane antigen P SM) > α-胎球蛋白、gp 100抗原、NY-ES0-1抗原或其任意抗原性片段。
[0049]在本發(fā)明的又一些實施方案中，所述來源于腫瘤干細胞的抗原包括:端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(telomerase reverse transcriptase, TERT)例如 hTERT、粘蛋白 I (mucin I, MUCI)或其任意抗原性片段。
[0050]在本發(fā)明的又一些實施方案中，所述來源于增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞的抗原包括:血管內(nèi)皮生長因子受體 I (Vascular Endothelial Growthfactor receptor-lVEGFRl)、血管內(nèi)皮生長因子受體2、腫瘤內(nèi)皮標記物8 (Tumor Endothelial Marker 8TEM8)、成纖維細胞生長因子受體I (fibroblast Growth factor receptor-1)、內(nèi)皮素、Tie2受體、血管動蛋白、生存素及血小板源生長因子受體β (platelet-derived growth factorreceptorbeta PDGFRbeta)或其任意抗原性片段。
[0051]在本發(fā)明一些特別優(yōu)選的實施方案中，所述癌癥相關(guān)抗原包括hTERT、MUCl和VEGFR2或其任意抗原性片段。
[0052]在本發(fā)明的一些實施方案中，所述癌癥選自:黑色素瘤、乳腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細胞癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、小腸癌、腎癌、前列腺癌、甲狀腺腫瘤、卵巢癌、睪丸癌、頭頸癌、結(jié)直腸癌、食管癌、胃癌、眼癌、膀胱癌、膠質(zhì)母細胞瘤以及轉(zhuǎn)移癌。
[0053]在本發(fā)明的一些實施方案中，所述樹突狀細胞為異體或自體樹突狀細胞，優(yōu)選自體樹突狀細胞。
[0054] 在本發(fā)明的一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的疫苗、藥物、藥物組合或組合物還包含根據(jù)施用方式所選的適合的藥物賦形劑、稀釋劑或載體，其可以通過任何適合的方式施用于需要處理的細胞和/或需要治療的患者/受試者。精確的劑量將取決于多個因素。
[0055]本領(lǐng)域中相關(guān)技術(shù)人員可使用適當?shù)娜軇┗蛑苿┡渲聘鶕?jù)本發(fā)明的疫苗、藥物、藥物組合或組合物，例如:等張賦形劑如氯化鈉注射液、林格氏注射液，乳酸林格氏注射液。根據(jù)要求，可以加入防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑、抗氧化劑和/或其它一些添加劑?？诜┯玫乃幬锝M合物可以是片劑、膠囊、粉劑或口服液等形式。片劑可以包括固體載體，如明膠或輔劑。液體藥物組合物通常包括液體載體，如水、石油、動物或植物油、礦物油或合成油。也可以包括生理鹽水溶液、葡萄糖或其它糖溶液或二醇類，如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。
[0056]以上所提到的技術(shù)和方案的例子以及其它一些根據(jù)本發(fā)明所使用的技術(shù)和方案可以在 Remington' s Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Oslo, A.(ed), 1980.中找到。
[0057]定義
[0058]除非另有定義，本文使用的所有科技術(shù)語具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的相同含義。關(guān)于本領(lǐng)域的定義及術(shù)語，專業(yè)人員具體可參考CurrentProtocols in MolecularBiology (Ausubel)。氨基酸殘基的縮寫是本領(lǐng)域中所用的指代20個常用L-氨基酸之一的標準3字母和/或I字母代碼。
[0059]盡管本發(fā)明的廣義范圍所示的數(shù)字范圍和參數(shù)近似值，但是具體實施例中所示的數(shù)值盡可能準確的進行記載。然而，任何數(shù)值本來就必然含有一定的誤差，其是由它們各自的測量中存在的標準偏差所致。另外，本文公開的所有范圍應(yīng)理解為涵蓋其中包含的任何和所有子范圍。例如記載的“I至10”的范圍應(yīng)認為包含最小值I和最大值10之間(包含端點)的任何和所有子范圍；也就是說，所有以最小值I或更大起始的子范圍，例如I至
6.1，以及以最大值10或更小終止的子范圍，例如5.5至10。另外，任何稱為“并入本文”的參考文獻應(yīng)理解為以其整體并入。
[0060]另外應(yīng)注意，如本說明書中所使用的，單數(shù)形式包括其所指對象的復數(shù)形式，除非清楚且明確的限于一個所指對象。術(shù)語“或”可與術(shù)語“和/或”互換使用，除非上下文另有清楚指明。
[0061]本文使用的術(shù)語“TLR激動劑”是指能夠激活toll樣受體(“TLR”)的任何分子，其包括但不限于多種TLR配體。特別地，TLR激動劑包括但不限于TLRl激動劑、TLR2激動劑、TLR3激動劑(例如Poly 1:C)、TLR4激動劑(例如單磷酰脂A)、TLR5激動劑(例如鞭毛蛋白)、TLR6激動劑、TLR7激動劑、TLR8激動劑、TLR9激動劑(例如非甲基化CpG寡核苷酸)、非特定TLR激動劑(例`如0K-432)或其任意組合。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，TLR激動劑是指TLR 3激動劑Poly 1: C和/或TLR4激動劑0K-432。另外，本文使用的術(shù)語“非特定TLR激動劑”是指激活多于一種特定toll樣受體的TLR激動劑，即激活選自TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8 和 TLR9 中一種或更多種的激動劑，例如激活TLRl和TLR2的TLR激動劑、激活TLRl和TLR3的TLR激動劑、激活TLR2和TLR3的TLR激動劑、激活TLR3和TLR4的TLR激動劑等、或者激活TLR1、TLR2和TLR3的TLR激動劑。
[0062]本文使用的術(shù)語“0K-432”是指一種用于治療癌癥的鏈球菌制劑，其具有免疫活性作用，又稱為0K432或PicibaniI。
[0063]本文使用的術(shù)語“Poly 1:C”是指聚肌胞苷酸，又稱為聚肌苷酸-聚胞苷酸。其為一種雙鏈RNA類似物，已知Poly 1: C與TLR3相互作用。
[0064]本文使用的術(shù)語“癌癥相關(guān)抗原”和“腫瘤相關(guān)抗原”可互換地使用，其是指與癌癥或腫瘤有關(guān)的抗原，特別地指腫瘤抗原，即由腫瘤產(chǎn)生的抗原性物質(zhì)，例如腫瘤細胞、腫瘤干細胞、增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞所產(chǎn)生的抗原性物質(zhì)。所述癌癥相關(guān)抗原在宿主中引發(fā)了免疫應(yīng)答。在本發(fā)明的一些實施方案中，所述癌癥相關(guān)抗原為天然或重組的多肽或其抗原性片段。
[0065]本文使用的術(shù)語“抗原性片段”是指天然或合成多肽的片段，其保留了所述天然或合成多肽的抗原特性，即能夠引發(fā)針對所述天然或合成多肽的免疫應(yīng)答。
[0066]本文使用的術(shù)語“藥物組合物”、“組合藥物”和“藥物組合”可互換地使用，其表示組合在一起以實現(xiàn)某種特定目的的至少一種藥物以及任選地可藥用賦形劑或輔料的組合。在某些實施方案中，所述藥物組合物包括在時間和/或空間上分開的組合，只要其能夠共同作用以實現(xiàn)本發(fā)明的目的。例如，所述藥物組合物中所含的成分(例如TLR激動劑和/或癌癥相關(guān)抗原)可以以整體施用于對象，或者分開施用于對象。當所述藥物組合物中所含的成分分開地施用于對象時，所述成分可以同時或依次施用于對象。
[0067]本文使用的術(shù)語“腫瘤細胞”是指以不受控的方式生長和分裂的細胞，也經(jīng)常被稱為“癌細胞”。
[0068]本文使用的術(shù)語“腫瘤干細胞”是指具有正常干細胞特征的腫瘤細胞，其具有產(chǎn)生在腫瘤組織中存在的所有細胞類型的能力。該術(shù)語的定義還可參見http://en.wikipedia.0rg/wiki/Cancer stem cell。
[0069]本文使用的術(shù)語“增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞”是指在腫瘤發(fā)生過程中出現(xiàn)異常增生的內(nèi)皮細胞。所述增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞包括血管內(nèi)皮細胞。
[0070]本文使用的術(shù)語“來源于腫瘤干細胞的癌癥相關(guān)抗原”是指與腫瘤干細胞有關(guān)的癌癥相關(guān)抗原，特別地為由腫瘤干細胞產(chǎn)生或者由腫瘤干細胞所表達的抗原性物質(zhì)。
[0071]本文使用的術(shù)語“來源于腫瘤細胞的癌癥相關(guān)抗原”是指與腫瘤細胞有關(guān)的癌癥相關(guān)抗原，特別地為由腫瘤細胞產(chǎn)生或者由腫瘤細胞所表達的抗原性物質(zhì)。
[0072]本文使用的術(shù)語“來源于增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞的癌癥相關(guān)抗原”是指與增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞有關(guān)的癌癥相關(guān)抗原，特別地為由增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞產(chǎn)生或者由其所表達的抗原性物質(zhì)。
[0073]本文使用的術(shù)語“hTERT”指人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶或其抗原性片段。特別地，所述hTERT包含014746的121位至1132位氨基酸所示的序列(例如SEQ ID NO:1的121位至1132位氨基酸所示的序列)，如下所示:
【權(quán)利要求】
1.一種藥物組合物，其包含至少一種TLR激動劑和至少一種癌癥相關(guān)抗原。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其包含至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種TLR激動劑，例如包含兩種TLR激動劑。
3.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的藥物組合物，其中所述至少一種TLR激動劑選自:TLR1激動劑、TLR2激動劑、TLR3激動劑(例如Poly 1:C)、TLR4激動劑(例如單磷酰脂A)、TLR5激動劑(例如鞭毛蛋白)、TLR6激動劑、TLR7激動劑、TLR8激動劑、TLR9激動劑(例如非甲基化CpG寡核苷酸)、非特定TLR激動劑(例如0K-432)和其任意組合。
4.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的藥物組合物，其中所述至少一種TLR激動劑至少包括TLR3激動劑和非特定TLR激動劑，優(yōu)選至少包括PolyI = C和0K-432。
5.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含至少兩種、至少三種、至少四種或至少五種癌癥相關(guān)抗原，優(yōu)選至少三種癌癥相關(guān)抗原。
6.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的藥物組合物，其中所述至少一種癌癥相關(guān)抗原包括至少一種來源于腫瘤細胞的癌癥相關(guān)抗原和至少一種來源于增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞的癌癥相關(guān)抗原，更優(yōu)選地所述至少一種來源于腫瘤細胞的癌癥相關(guān)抗原包括至少一種來源于腫瘤干細胞的癌癥相關(guān)抗原。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的藥物組合物，其中所述來源于腫瘤細胞的抗原選自:端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶、黑素細胞分化抗原A、酪氨酸酶、黑色素瘤抗原-1、黑色素瘤抗原_2、黑色素瘤抗原-3、黑色素瘤抗原_4、黑色素瘤抗原-12、黑色素瘤相關(guān)抗原1、粘蛋白I (MUCl)、粘蛋白2、粘蛋白3、粘蛋白4、粘蛋白18、癌胚抗原、前列腺特異性抗原、前列腺特異性膜抗原、α -胎球蛋白、gplOO抗原、NY-ESO-1抗原及其任意抗原性片段。
8.根據(jù)權(quán)利要求6的藥`物組合物，其中所述來源于腫瘤干細胞的抗原選自:端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶、粘蛋白I及其任意抗原性片段。
9.根據(jù)權(quán)利要求6的藥物組合物，其中所述來源于增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞的抗原選自:血管內(nèi)皮生長因子受體1、血管內(nèi)皮生長因子受體2、腫瘤內(nèi)皮標記物8、成纖維細胞生長因子受體1、內(nèi)皮素、Tie2受體、血管動蛋白、生存素、血小板源生長因子受體β及其任意抗原性片段。
10.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的藥物組合物，其中所述癌癥選自:黑色素瘤、乳腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細胞癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、小腸癌、腎癌、前列腺癌、甲狀腺腫瘤、卵巢癌、睪丸癌、頭頸癌、結(jié)直腸癌、食管癌、胃癌、眼癌、膀胱癌、膠質(zhì)母細胞瘤以及轉(zhuǎn)移癌。
11.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的藥物組合物，其中所述至少一種癌癥相關(guān)抗原包括至少兩種來源于腫瘤干細胞的癌癥相關(guān)抗原和至少一種來源于增生的腫瘤相關(guān)內(nèi)皮細胞的抗原，例如包括端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶或其任意抗原性片段、粘蛋白I或其任意抗原性片段和血管內(nèi)皮生長因子受體2或其任意抗原性片段。
12.經(jīng)權(quán)利要求1-10中任一項所述藥物組合物處理的樹突狀細胞。
13.藥盒，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項的藥物組合物和/或經(jīng)根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項的藥物組合物處理的樹突狀細胞。
14.治療性癌癥疫苗，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項的藥物組合物和/或經(jīng)過根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項的藥物組合物處理的樹突狀細胞。
15.一種獲得樹突狀細胞的方法，其包括:用權(quán)利要求1-11中任一項所述藥物組合物處理樹突狀細胞。
16.—種用于治療癌癥的方法,其包括: 將治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項的藥物組合物和/或根據(jù)權(quán)利要求12所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。
17.一種用于刺激免疫系統(tǒng)的方法，其包括: 將治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項的藥物組合物和/或根據(jù)權(quán)利要求12所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。
18.一種用于改善對象中針對癌癥的免疫應(yīng)答的方法，其包括: 將治療有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項的藥物組合物和/或根據(jù)權(quán)利要求12所述經(jīng)處理的樹突狀細胞施用給有此需要的對象。
19.根據(jù)權(quán)利要求16或18的方法，其中所述癌癥選自:黑色素瘤、乳腺癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、肺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝細胞癌、子宮內(nèi)膜癌、胃癌、小腸癌、腎癌、前列腺癌、甲狀腺腫瘤、卵巢癌、睪丸癌、頭頸癌、結(jié)直腸癌、食管癌、胃癌、眼癌、膀胱癌、膠質(zhì)母細胞瘤以及轉(zhuǎn)移癌。
20.根據(jù)權(quán)利要求12-19任一項的方法，其中所述樹突狀細胞為異體或自體樹突狀細胞，優(yōu)選自體樹突狀細胞。`
【文檔編號】A61P35/04GK103768604SQ201210409853
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年10月24日 優(yōu)先權(quán)日:2012年10月24日
【發(fā)明者】黃雪芬 申請人:北京圣沃德生物科技有限公司