專利名稱：一種腫瘤疫苗及其合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明關(guān)于ー種腫瘤疫苗及其合成方法，其利用生物信息學(xué)的運(yùn)算方式，設(shè)計出腫瘤相關(guān)抗原的序列，再據(jù)之合成腫瘤抗原，以形成一腫瘤疫苗。
背景技術(shù)：
癌癥，或稱惡性腫瘤，在世界各國均是ー項(xiàng)令人憂心的健康問題，盡管多年來各界已不斷發(fā)展出新的診斷技術(shù)和各類治療方法，例如外科手術(shù)切除、放射性治療、以及化學(xué)治療，但是和一般常見的糖尿病、心臟病、感染性疾病、和精神性疾病比較起來，癌癥依舊是首要的死亡原因。因此，現(xiàn)今醫(yī)界的首要課題便是研發(fā)出更新、更有效、以及能避免腫瘤復(fù)發(fā)的治療方法?；谏鲜隼碛?，科學(xué)家將一部份心カ轉(zhuǎn)移到研究免疫系統(tǒng)與癌癥之間的關(guān)系上，因此腫瘤免疫治療方法在過去十年中漸漸地發(fā)展成為ー項(xiàng)深具潛力的癌癥治療方式， 為人們提供另ー種治療的選擇。所謂癌癥免疫療法，指的是利用人體的免疫系統(tǒng)來對抗腫瘤，通過激發(fā)或調(diào)控人體專ー性免疫力來殺死癌細(xì)胞，以達(dá)到治療癌癥的目的。樹狀細(xì)胞(Dendriticcell, DCs)是專門的抗原提呈細(xì)胞(Antigen-presentingcell)，近來常常被應(yīng)用于免疫療法。樹狀細(xì)胞可以將抗原呈現(xiàn)給未活化的T細(xì)胞，進(jìn)而啟動細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)。樹狀細(xì)胞會表達(dá)大量的細(xì)胞表面主要組織相容性復(fù)合體(Majorhistocompatibility complex,以下簡稱MHC)分子并且辨認(rèn)多種來自細(xì)菌、病毒、其它病原體和內(nèi)生性腫瘤的抗原。載有腫瘤抗原的樹狀細(xì)胞可以被稱作樹狀細(xì)胞疫苗(DCvaccine)，樹狀細(xì)胞疫苗可以引發(fā)具有抗原專ー性的免疫反應(yīng)來對抗腫瘤。然而，樹狀細(xì)胞用于癌癥的免疫療法卻有其限制。公知技術(shù)中，通常需要將樹狀細(xì)胞與分離自病人體內(nèi)腫瘤細(xì)胞的腫瘤抗原共同培養(yǎng)一段時間后，才能讓樹狀細(xì)胞將該腫瘤抗原呈現(xiàn)給T淋巴細(xì)胞表面，以引發(fā)人體內(nèi)針對該腫瘤抗原的免疫反應(yīng)。由于不同個體的樹狀細(xì)胞表達(dá)不同的MHC分子，ー種MHC分子只能識別某ー種或某ー類抗原決定子(Epitope)，其稱為MHC的限制性反應(yīng)(MHC restricted response)。因此,僅用一種腫瘤抗原實(shí)施免疫治療,其效果與毒殺對象局限。再者，公知的樹狀細(xì)胞免疫療法目前僅能針對個別患者當(dāng)時所患的癌癥量身訂制，并且制備的過程與技術(shù)繁復(fù)冗長、花費(fèi)不貲，就成本考慮而言施行不易。由于免疫系統(tǒng)具有辨識非自體的抗原并加以消滅的能力，腫瘤所表達(dá)的抗原(或稱腫瘤抗原)已成為可以發(fā)展癌癥免疫療法的工具之一。用于免疫療法的腫瘤抗原可以被區(qū)分為兩種類型，一類是只有腫瘤細(xì)胞會表現(xiàn)的腫瘤特異性抗原(tumor-specificantigen,以下簡稱TSA);另ー類抗原是在腫瘤細(xì)胞的表現(xiàn)量明顯高于一般正常細(xì)胞表現(xiàn)量的腫瘤相關(guān)抗原(tumor-associated antigen,以下簡稱TAA)。然而,要能找到ー個TSA來制備腫瘤疫苗是相當(dāng)不容易的。另ー方面，由于正常細(xì)胞也會表現(xiàn)TAA，所以免疫系統(tǒng)會將TAA視為自體分子，因此使用TAA來制備腫瘤疫苗所能引發(fā)的免疫反應(yīng)和腫瘤毒殺效果非常低。腫瘤相關(guān)抗原之所以不能引發(fā)強(qiáng)效的免疫反應(yīng)，是因?yàn)槊庖呦到y(tǒng)對于TAA這類自體抗原具有耐受性。免疫系統(tǒng)的ー個特色是它具有耐受性，這在協(xié)助免疫系統(tǒng)區(qū)分自體與外來分子時扮演很重要的角色。免疫系統(tǒng)的耐受性可以分為兩種，ー是中樞耐受性，另ー個是周邊耐受性。中樞耐受性表現(xiàn)在胸腺(產(chǎn)生T淋巴球)和骨髄(產(chǎn)生B淋巴球)。以T淋巴球來說，自體抗原與MHC組合而成的復(fù)合體和T細(xì)胞受器(T cellreceptors,以下簡稱TCR)之間的親和カ對于T細(xì)胞的免疫耐受性而言相當(dāng)重要，凡是被MHC識別的自體抗原與T細(xì)胞受器有高親和カ的先驅(qū)T細(xì)胞都會經(jīng)由負(fù)篩選的作用而被剔除，只留下親和力低的T細(xì)胞，以防止免疫系統(tǒng)對自體細(xì)胞組織展開攻擊。雖然這個機(jī)制在正常情況下可以保護(hù)自體的細(xì)胞組織，但在癌癥發(fā)生的時候，無異是給了癌細(xì)胞ー個保護(hù)傘，讓癌細(xì)胞躲過人體的保衛(wèi)系統(tǒng)，在人體內(nèi)日益壯大形成腫瘤，終致危害健康。在公知的以腫瘤抗原作為免疫療法的技術(shù)中，僅能針對單ー種類的腫瘤進(jìn)行治療，或者僅能引發(fā)細(xì)胞性免疫反應(yīng)而無法刺激體液性免疫反應(yīng)，效果局限且不能防止癌細(xì)胞復(fù)發(fā)，并且由于無法突破人體免疫系統(tǒng)的耐受性機(jī)制，因此所能引發(fā)的免疫效カ不夠強(qiáng)，導(dǎo)致治療徒勞無功。 綜上所述，免疫療法固然對于癌癥的治療而言，提供了一種新的可能，但是公知的癌癥免疫療法卻存在著如只能針對單ー個體內(nèi)的特定腫瘤抗原進(jìn)行毒殺、只能攻擊某ー種腫瘤、費(fèi)用昂貴又費(fèi)時、無法突破自體免疫耐受性、甚至引發(fā)副作用、與無法防止復(fù)發(fā)等問題尚待克服。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供ー種可以不受限于免疫系統(tǒng)耐受性和MHC的限制性，能夠針對多種不同癌細(xì)胞進(jìn)行毒殺攻擊、且可以防止癌癥復(fù)發(fā)的腫瘤疫苗。本發(fā)明的另一目的在于提供ー種合成方法，以制備可不受限于免疫系統(tǒng)耐受性、能夠針對多種不同癌細(xì)胞進(jìn)行毒殺攻擊、且可以防止癌癥復(fù)發(fā)的腫瘤疫苗。雖然T細(xì)胞受器對于MHC的辨認(rèn)具有很強(qiáng)的專ー性，但有初歩的研究結(jié)果顯示，當(dāng)有不同的抗原和ー個或多個MHC分子結(jié)合時，會驅(qū)使TCR的抗原辨識能力下降，導(dǎo)致T細(xì)胞對自體抗原產(chǎn)生交叉反應(yīng)，顯示TCR的辨識能力具有可變性?，F(xiàn)有的ー種假說是，源于寄生蟲、細(xì)菌和病毒這類具傳染性的病原體抗原，可能會因?yàn)椴≡w和宿主自體抗原間的某些微差異而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)降低對于自體抗原的免疫耐受性的限制。因此推估，只要改變依照TAA所產(chǎn)生的抗原的氨基酸序列，便可以透過樹狀細(xì)胞協(xié)助活化可毒殺腫瘤的T細(xì)胞，而引發(fā)針對表達(dá)TAA的腫瘤細(xì)胞發(fā)生自體免疫反應(yīng)。根據(jù)這個理論，發(fā)明人等決定以氨基酸序列為基礎(chǔ)來設(shè)計腫瘤疫苗以弓I發(fā)免疫系統(tǒng)對癌細(xì)胞的攻擊。大多數(shù)的腫瘤疫苗是依據(jù)其和人類主要組織相容性復(fù)合體(HLA)的結(jié)合力設(shè)計的。含有8至10個氨基酸的單ー勝肽抗原決定子(single-peptide epitope)可以和樹狀細(xì)胞上的第一型細(xì)胞表面主要組織相容性復(fù)合體(MHCI)結(jié)合而引發(fā)細(xì)胞毒殺T細(xì)胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)的反應(yīng),而可以和第二型細(xì)胞表面主要組織相容性復(fù)合體(MHCII)結(jié)合的勝肽類抗原決定子可以活化輔助T細(xì)胞(Helper T cell)，以協(xié)助CTL的反應(yīng)和抗體的產(chǎn)生。MHCII不同于MHCI的地方在于，MHCII的抗原結(jié)合區(qū)可以容納不同長度的勝肽鏈，通常介于13至25個氨基酸序列的長度。由于活化后的輔助T細(xì)胞也可以協(xié)助活化記憶T細(xì)胞(Memory cytotoxic T cells),因此和MHCII相關(guān)的腫瘤疫苗可以有效的防止癌癥在治療后再度復(fù)發(fā)。是故，發(fā)明人決定著手研發(fā)對于MHCII具有專ー性的腫瘤疫苗，以用來制備可不受限于免疫系統(tǒng)耐受性、又能夠針對多種不同癌細(xì)胞進(jìn)行毒殺攻擊的腫瘤疫苗。
本發(fā)明采用表皮生長因子受體(Epidermal growth factorreceptor,以下簡稱EGFR或ERBB)與上皮黏蛋白I (Mucinproteintypel，MUCI)作為腫瘤疫苗的候選基因。表皮生長因子受體是受體型酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases)家族的ー員，是ー種穿膜醣蛋白，具有ー細(xì)胞外的配位子結(jié)合區(qū)、一穿膜親脂性片段、以及ー細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)激酶(protein kinases)功能區(qū)。目前在人體共發(fā)現(xiàn)有四種EGFR亞型，包括ERBB1，ERBB2，ERBB3和ERBB4。EGFR在多種不同的實(shí)體腫瘤中高度表現(xiàn)，其中包括結(jié)腸直腸癌、乳癌、膀胱癌、腎臟癌、肺癌、胰臟癌、前列腺癌以及頭頸癌等。上皮黏蛋白1(以下簡稱MUC1)是一種穿膜醣蛋白(glycosylatedtransmembraneprotein), MUCl在一些常見的上皮惡性腫瘤中會大量表達(dá)，例如胰臟癌、乳癌、前列腺癌和大腸癌等。由于MUCl和惡性細(xì)胞的快速增生有夫，因此MUCl已被視為ー個在功能上具有顯著意義的致癌基因，且被歸類為ー種腫瘤相關(guān)抗原而將之應(yīng)用于癌癥免疫療法。本發(fā)明人通過生物信息學(xué)方法，找出和人類白血球組織(Humanleukocyteantigen,HLA) ニ類抗原(即人類的細(xì)胞表面主要組織相容性復(fù)合體MHCII)具有較高親和 力的序列，經(jīng)過設(shè)計改良，而研發(fā)出能與HLA ニ類抗原分子專ー性結(jié)合的ERBB1、ERBB2和MUCl抗原序列，共得到14種，井分為野生型和突變型兩組，每組各含7種抗原。這些序列可為大多數(shù)的HLA ニ類抗原所辨認(rèn)。這些HLA分子的分布可覆蓋99%以上的華人群體(HanChinese population)。該 14 種抗原序列如 SEQ NO. I 至 SEQ NO. 14 所不。本發(fā)明實(shí)施例提供ー種腫瘤疫苗，其包括至少ー腫瘤抗原，其中，該腫瘤抗原的序列選自SEQ NO. I至SEQ NO. 14的群組，其中各抗原序列以道爾頓為單位的分子量分別為SEQ NO. I :3693 ；SEQ NO. 2 :4121 ；SEQ NO. 3 :3729 ；SEQ NO. 4 :3842 ；SEQ NO. 5 :4003 ；SEQ NO. 6 :3818 ；SEQ NO. 7 :3901 ；SEQ NO. 8 :3954 ；SEQ NO. 9 :3885 ；SEQ NO. 10 :4010 ；SEQNO. 11:3927 ；SEQ NO. 12 :3866 ；SEQ NO. 13 :3641 ；SEQ NO. 14 :3629。作為本發(fā)明實(shí)施例的一種優(yōu)選方案，其中，該腫瘤抗原序列由至少30個氨基酸組合而成。作為本發(fā)明實(shí)施例的一種優(yōu)選方案，其中，該腫瘤抗原以化學(xué)法或基因工程法合成。作為本發(fā)明實(shí)施例的一種優(yōu)選方案，其中，該腫瘤抗原具有專ー性的一表皮生長因數(shù)受體與一上皮黏蛋白的抗原決定子，且是人類白血球組織ニ類抗原分子的限制性抗原。本發(fā)明實(shí)施例提供一種腫瘤疫苗的合成方法，其包含以下步驟(a)根據(jù)一人類白血球組織抗原DR、DQ和DP各亞型分子在華人群體中的分布，選擇ー表皮生長因子受體I、一表皮生長因子受體2以及ー上皮黏蛋白I的氨基酸序列上可被這些人類白血球組織ニ類抗原分子所識別的抗原決定子；(b)以生物信息學(xué)方法分析抗原決定子與各人類白血球組織ニ類抗原分子之間的親和力，并挑選出合適的腫瘤抗原氨基酸序列；(c)根據(jù)步驟(b)的結(jié)果設(shè)計出14種包含至少30個氨基酸的ー腫瘤抗原序列；(d)以化學(xué)法或基因工程法合成這些腫瘤抗原；(e)將這些合成的14種腫瘤抗原分別與ニ甲基亞砜混合，使每ー種腫瘤抗原混合液的最終濃度為20mg/mL至40mg/mL，并將這些腫瘤抗原混合液分為野生型和突變型兩組，每組包括7種腫瘤抗原混合液；(f)將同一組中的腫瘤抗原混合液分別取出相同體積，并充分混合在一起，而得到一包含7種野生型或突變型腫瘤抗原的腫瘤疫苗，并使其中每種腫瘤抗原的最終濃度為2mg/mL 4mg/mL。作為本發(fā)明實(shí)施例的一種優(yōu)選方案，其中，這些腫瘤抗原的抗原決定子能被人類白血球組織ニ類抗原中分子所識別。


為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的一些實(shí)施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其它的附圖。
圖I為本發(fā)明中，腫瘤疫苗合成方法的流程圖。
具體實(shí)施例方式下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對本發(fā)明實(shí)施例的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動的前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。I.腫瘤疫苗設(shè)計與實(shí)施首先，以人類表皮生長因子受體I (ERBBl)、表皮生長因子受體2 (ERBB2)以及上皮黏蛋白l(Human mucin type I protein, MUC1)作為癌癥腫瘤疫苗候選基因,將這些候選基因所轉(zhuǎn)譯的氨基酸序列與華人(Han Chinese)的HLA ニ類抗原序列進(jìn)行比對。接著，利用生物信息學(xué)方法找出與這些華人的HLA ニ類抗原之間親和力高的腫瘤抗原氨基酸序列。其中，所謂生物信息學(xué)方法包含利用計算機(jī)與軟件等輔助工具進(jìn)行數(shù)據(jù)庫檢索、運(yùn)用計算機(jī)運(yùn)算法對檢索到的序列數(shù)據(jù)進(jìn)行比對與分析、使用計算機(jī)運(yùn)算法預(yù)測HLA ニ類抗原和ERBBU ERBB2與MUCl腫瘤抗原氨基酸序列之間的親和力等。根據(jù)前述生物信息學(xué)方法預(yù)測的結(jié)果，挑選出適合的腫瘤抗原序列，組合成含有至少30個氨基酸的腫瘤疫苗，其中較佳的實(shí)施態(tài)樣為含有33個氨基酸(33-mer)。依照上述方法，可以得到較佳的14種腫瘤抗原序列，最后再以化學(xué)法或基因工程法合成這些腫瘤抗原(實(shí)際合成時并不需要使用實(shí)體的ERBB1、ERBB2、MUCl等，而用生物信息學(xué)方法得到即可)。前述的14種ERBB1、ERBB2與MUCl腫瘤抗原可通過化學(xué)方法或基因工程方法合成而得，每種合成的腫瘤抗原以適量的ニ甲基亞砜(DMSO)溶解，并將最終濃度分別調(diào)整為20mg/mL至40mg/mL。之后將14種腫瘤抗原的混合液分為野生型和突變型兩組，每組7種。將每組(野生型組或突變型組)7種ERBB1、ERBB2與MUCl腫瘤抗原混合液以等體積的比例混合在一起后成為ー腫瘤疫苗，其中姆種腫瘤抗原的最終濃度調(diào)整為2mg/mL至4mg/mL。取出50μ I至200μ I的腫瘤疫苗與樹狀細(xì)胞進(jìn)行混合。其中較佳的實(shí)施態(tài)樣為ImL的樹狀細(xì)胞(每毫升約含I至2百萬個樹狀細(xì)胞)加5 μ 1-10 μ I的腫瘤疫苗，并使腫瘤抗原的最終濃度成為20 μ g/mL至40 μ g/mL,而得到一包含ERBBl、ERBB2與MUCl的樹狀細(xì)胞腫瘤疫苗，請參照圖I。該腫瘤疫苗可以利用體外培養(yǎng)的樹狀細(xì)胞攜帯方式或用皮下多點(diǎn)注射方式施打于人體，而攜帶ERBBl、ERBB2與MUCl腫瘤抗原的樹狀細(xì)胞可以活化輔助T細(xì)胞，引發(fā)其針對ERBBl、ERBB2與MUCl的免疫反應(yīng)，包括分泌特異性的抗ERBBl、ERBB2與MUCl腫瘤抗原的抗體。因此該腫瘤疫苗可以用于治療大多數(shù)的實(shí)體腫瘤，并且可以引發(fā)免疫作用的記憶性，以防止癌癥的復(fù)發(fā)，例如預(yù)防經(jīng)過初步治療(如外科手術(shù)切除與放射性治療)后的腫瘤復(fù)發(fā)。2.樹狀細(xì)胞體外培養(yǎng)2. I.樹狀細(xì)胞的制備所有操作均嚴(yán)格遵守標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)的程序。采集患者外周血100毫升(含2-3X108 個單個核細(xì)胞)，肝素抗凝血。經(jīng) Ficoll-Paque (GE Health care Life Sciences)分離單個核細(xì)胞，制備自體血漿，離心洗滌兩次，用無血清RPMI164 0重懸 ，調(diào)整細(xì)胞濃度為2-4X 106/ml,鋪入6孔板,置于37°C>5% CO2培養(yǎng)箱中，孵育兩小時后，輕晃6孔板,收集懸浮細(xì)胞至另ー個50ml離心管，用無血清RPMI1640培養(yǎng)液洗板1_2次，加入含1%自體血漿的AIM-V培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)；第三天補(bǔ)加樹狀細(xì)胞培養(yǎng)液2-3ml/孔(Claison，Shanghai,China);第五天加入腫瘤特異性抗原(終濃度為O. 02-0. 04mg/ml)，誘導(dǎo)后12-16小時，カロ入樹狀細(xì)胞成熟因子(Claison, Shanghai, China);第8天收集細(xì)胞,離心,生理鹽水洗漆3次，用含有10%患者自體血漿的生理鹽水重懸，總體積為100ml。2. 2.細(xì)胞學(xué)分析分別在細(xì)胞采集當(dāng)天及注射后第一周和第四周采集患者外周血10ml，分別用⑶3，HLA ニ類抗原和⑶4單克隆抗體進(jìn)行熒光雙標(biāo)記(FITC和PE或APC)，分析檢測T細(xì)胞亞群的百分比值(％ )。如果DR+⑶3+和⑶4+⑶3+T細(xì)胞百分比值隨時間上升，表明T細(xì)胞已被腫瘤抗原啟動。此時可輸入自然殺手細(xì)胞(Natural killer cell, NK cells) 02. 3.抗體分析分別在細(xì)胞采集當(dāng)天及注射結(jié)束第1、3、6、12和24個月采集患者外周血5ml，離心分離血衆(zhòng)或血清。采用酶聯(lián)免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血中抗ERBB1、ERBB2與MUCl腫瘤抗原的抗體水平。根據(jù)抗體水平?jīng)Q定是否需要再次注射疫苗。3.皮下多點(diǎn)注射3. I.疫苗注射劑量與使用方式該腫瘤疫苗可以利用皮下多點(diǎn)注射的方式使用。每次治療需要注射700-1400微克(μg/次)腫瘤抗原混合液(每種抗原量為100-200微克)，注射前應(yīng)與loo微克佐劑如顆粒-巨卩遼細(xì)胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)混合。每個月注射一次，共連續(xù)注射4-6個月。以后根據(jù)血中抗ERBB1、ERBB2與MUCl腫瘤抗原的抗體水平?jīng)Q定是否需要再次注射疫苗。3. 2.抗體水平分析分別在首次注射和毎次再注射時及治療結(jié)束后每隔6個月采集患者外周血5ml，離心分離血衆(zhòng)或血清。采用酶聯(lián)免疫吸附分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)檢測血中抗ERBB1、ERBB2與MUCl腫瘤抗原的抗體水平。根據(jù)抗體水平?jīng)Q定是否需
要再次注射疫苗。
以上所述，僅為本發(fā)明的具體實(shí)施方式
，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何 熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)以所述權(quán)利要求的保護(hù)范圍為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.ー種腫瘤疫苗，其包括至少ー腫瘤抗原，其中，該腫瘤抗原的序列選自SEQ NO. I至SEQ NO. 14的群組，其中各抗原序列以道爾頓為單位的分子量分別為SEQ NO. I :3693 ；SEQNO. 2 :4121 ；SEQ NO. 3 :3729 ；SEQ NO. 4 :3842 ；SEQ NO. 5 :4003 ；SEQ NO. 6 :3818 ；SEQ NO. 7 3901 ；SEQ NO. 8 :3954 ；SEQ NO. 9 :3885 ；SEQ NO. 10 :4010 ；SEQ NO. 11 :3927 ；SEQ NO. 12 3866 ；SEQ NO. 13 :3641 ；SEQ NO. 14 :3629。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤疫苗,其中，該腫瘤抗原序列由至少30個氨基酸組合而成。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤疫苗，其中，該腫瘤抗原以化學(xué)法或基因工程法合成。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的腫瘤疫苗，其中，該腫瘤抗原具有專ー性的一表皮生長因數(shù) 受體與一上皮黏蛋白的抗原決定子，且是人類白血球組織ニ類抗原分子的限制性抗原。
5.一種腫瘤疫苗的合成方法，其包含以下步驟 (a)根據(jù)一人類白血球組織抗原DR、DQ和DP各亞型分子在華人群體中的分布，選擇ー表皮生長因子受體I、一表皮生長因子受體2以及ー上皮黏蛋白I的氨基酸序列上可被這些人類白血球組織ニ類抗原分子所識別的抗原決定子； (b)以生物信息學(xué)方法分析抗原決定子與各人類白血球組織ニ類抗原分子之間的親和力，并挑選出合適的腫瘤抗原氨基酸序列； (c)根據(jù)步驟(b)的結(jié)果設(shè)計出14種包含至少30個氨基酸的ー腫瘤抗原序列； (d)以化學(xué)法或基因工程法合成這些腫瘤抗原； (e)將這些合成的14種腫瘤抗原分別與ニ甲基亞砜混合，使每ー種腫瘤抗原混合液的最終濃度為20mg/mL至40mg/mL，并將這些腫瘤抗原混合液分為野生型和突變型兩組，每組包括7種腫瘤抗原混合液； (f)將同一組中的腫瘤抗原混合液分別取出相同體積，并充分混合在一起，而得到一包含7種野生型或突變型腫瘤抗原的腫瘤疫苗，并使其中每種腫瘤抗原的最終濃度為2mg/mL全 4mg/mL。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的腫瘤疫苗的合成方法，其中，這些腫瘤抗原的抗原決定子能被人類白血球組織ニ類抗原中分子所識別。
全文摘要
本發(fā)明關(guān)于一種腫瘤疫苗及其合成方法，其以表皮生長因子受體1(ERBB1)、表皮生長因子受體2(ERBB2)、以及上皮黏蛋白1(MUC1)作為候選基因，再利用生物信息學(xué)的運(yùn)算方式，設(shè)計出可以不受限于免疫系統(tǒng)耐受性、能夠針對多種不同類型的腫瘤進(jìn)行毒殺攻擊、并且可以防止癌癥復(fù)發(fā)的一種腫瘤疫苗。
文檔編號A61K39/00GK102716472SQ20111007987
公開日2012年10月10日 申請日期2011年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月31日
發(fā)明者李光輝 申請人:李光輝