一種重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)靜脈給藥系統(tǒng)【技術(shù)領(lǐng)域】。具體為提供一種較高純度、簡便且可攜帶的重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)。同時提供一種該給藥系統(tǒng)的持續(xù)給藥方法。使用該給藥系統(tǒng)，一次配液注入以后可持續(xù)輸注藥物數(shù)天，且不產(chǎn)生新的雜質(zhì)、藥物純度達到生物制品的標準，從而大大降低患者生理上的痛苦，提高患者生命質(zhì)量。
【專利說明】一種重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)靜脈給藥系統(tǒng)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]20世紀60年代，美國哈佛醫(yī)學(xué)院的Folkman博士提出“腫瘤生長依賴血管生長”這一假設(shè)，即血管生成在實體瘤生長和轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用，并于1971年提出“餓死腫瘤療法”理論。為了刺激血管的生成，腫瘤細胞會上調(diào)一系列血管生成因子，同時也會產(chǎn)生一些血管生成抑制因子。組織中血管生成表型的開放與關(guān)閉將取決于組織局部區(qū)域血管生成刺激因子和抑制因子之間的動態(tài)平衡(Folkman，].Nat.MER 1:27-31, 1995;Hanahan, D., et al.Cell.86:353-364，1996)。研究發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性的血管生成抑制因子，如血管緊張素(Angiostatin),血管內(nèi)皮抑制素(Endostatin)等,均能夠抑制小鼠體內(nèi)腫瘤的生長(O，Relly, M.S.,et al.Cell.88:277-285，1997) 。
[0003]血管內(nèi)皮抑制素(Endostatin)是O’ Relly于1997年從小鼠內(nèi)皮細胞系EOMAD的培養(yǎng)液中分離得到的一種具有抑制血管內(nèi)皮細胞作用的物質(zhì)(O’ Relly, M.S.,etal.Cell.88:299-285, 1997)。氨基酸序列分析該物質(zhì)為膠原蛋白XYD的羧基末端的降解片段，分子量為20kD左右。
[0004]重組人血管內(nèi)皮抑制素(rhEndosratin)與重組鼠血管內(nèi)皮抑制素在氨基酸序列上有85%的同源性。1996年美國Entremed公司采用酵母作為表達體系生產(chǎn)了重組人血管內(nèi)皮抑制素。以重組DNA技術(shù)生產(chǎn)，以大腸桿菌為表達系統(tǒng)，表達出的重組人血管內(nèi)皮抑制素與先前的Endostatin相比較，表達水平更高，療效更強，并且沒有因為附加N端序列而導(dǎo)致體內(nèi)免疫原性。
[0005]但是利用傳統(tǒng)的大腸桿菌表達方法得到的重組人血管內(nèi)皮抑制素難以復(fù)性并且易于形成沉淀，而用巴斯德畢赤酵母表達系統(tǒng)所耗費的生產(chǎn)成本巨大，兩種方法均未能解決將重組人血管內(nèi)皮抑制素進行工業(yè)生產(chǎn)的問題。為此羅永章等人通過修飾人血管內(nèi)皮抑制素的核苷酸編碼序列，生產(chǎn)出N末端帶有附件氨基酸序列的重組人血管內(nèi)皮抑制素(rhEndostatin,商品名恩度? (Endostar藝))，大大簡化了純化步驟，提高了產(chǎn)物的純度
(ZL00107569.1)。所生產(chǎn)的重組人血管內(nèi)皮抑制素由192個氨基酸構(gòu)成，其氨基酸序列為:MGGSHHHHHHSHRDFQPVLHLVALNSPLSGGMRGIRGADFQCFQQARAVGLAGTFRAFLSSRLQDLYSIVRRADRAAVPIVNLKDELLFPSWEALFSGSEGPLKPGARIFSFDGKDVLRHPTWPQKSVffHGSDPNGRRLTESYCETWRTEAPSATGQASSLLGGRLLGQSAASCHHAYIVLCIENSFMTASK
一般來說，目前進入臨床研究的重組人血管內(nèi)皮抑制素均使用靜脈給藥，或者皮下注射給藥。以目前市場銷售的恩度注射液為例，其規(guī)格為15mg/3ml/支，臨床使用時將本品加入250~500ml生理鹽水中，勻速靜脈點滴，滴注時間3~4小時。本品在與NP化療方案聯(lián)合給藥時，在治療周期的第I~14日，每天給藥一次，連續(xù)給藥14天，休息一周，再繼續(xù)下一治療周期。通常可進行2~4個治療周期。顯而易見，一方面如此連續(xù)滴注14天，休息7天的給藥周期，可能會造成體內(nèi)血藥濃度波動過大，無法維持穩(wěn)態(tài)的濃度；另一方面，如此頻繁的注射給藥，每次滴注時間3~4小時，在生理上給患者帶來了巨大痛苦的同時在心理上也給患者帶來了巨大的壓力，使有些患者在中途就放棄了治療。
[0006]因此，在臨床應(yīng)用中，如果可以通過維持穩(wěn)態(tài)的血藥濃度，避免每日單次給藥造成的血藥濃度波動過大，達到持續(xù)抑制腫瘤血管生成，且不增加藥物毒性的目的，將給患者帶來更大的獲益。
[0007]鑒于重組人血管內(nèi)皮抑制素在抗腫瘤藥物領(lǐng)域中的重要作用及現(xiàn)有給藥系統(tǒng)的缺陷，對于研究合格的重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)是非常必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的就是為了克服上述缺陷與困難，提供一種較高純度、簡便且可攜帶的重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)。本發(fā)明的另一目的是提供一種該給藥系統(tǒng)的持續(xù)給藥方法。使用該給藥系統(tǒng)，一次配液注入以后可持續(xù)輸注藥物數(shù)天，且不產(chǎn)生新的雜質(zhì)、藥物純度達到生物制品的標準，從而大大降低患者生理上的痛苦，提高患者生命質(zhì)量。
[0009]本發(fā)明在研究重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)時發(fā)現(xiàn)，給藥系統(tǒng)的配液方式對于后續(xù)藥液純度有直接影響，將重組人血管內(nèi)皮抑制素與生理鹽水混合配液后再用普通注射器抽取混合液注入泵中，所得重組人血管內(nèi)皮抑制素稀釋液在反相高效液相層析(RP-HPLC)分析時在4.7min左右出現(xiàn)雜質(zhì)峰，原因在于目前臨床所用普通注射器，包括一次性注射器或玻璃注射器，均為有硅油注射器，但是重組人血管內(nèi)皮抑制素與硅油會發(fā)生相互作用，產(chǎn)生雜質(zhì)，故 而使得重組人血管內(nèi)皮抑制素在配液中的純度降低。但是本研究發(fā)現(xiàn)采取重組人血管內(nèi)皮抑制素、生理鹽水分別注入輸液裝置的配液步驟有效解決了這一問題。
[0010]本發(fā)明提供了一種重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)，包括輸液裝置和驅(qū)動裝置，其中輸液裝置包括儲藥裝置，輸液裝置的配液步驟為:分別將重組人血管內(nèi)皮抑制素和生理鹽水充入儲藥裝置中。然后，通過驅(qū)動裝置使重組人血管內(nèi)皮抑制素以負荷劑量持續(xù)進入人體。
[0011]上述一種重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)的配液步驟中使用注射器將重組人血管內(nèi)皮抑制素和生理鹽水充入儲藥裝置，注射器優(yōu)選硅油固化注射器或無硅油注射器。
[0012]本發(fā)明還提供了一種重組人血管內(nèi)皮抑制素的持續(xù)給藥方法，該持續(xù)給藥方法為將上述重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)通過靜脈使重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)進入人體。
[0013]上述一種重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥方法中重組人血管內(nèi)皮抑制素的負荷劑量為0.3125~3.125mg/hr，優(yōu)選0.3125~0.625mg/hr。持續(xù)給藥時間為24~144hr，優(yōu)選120~144hr ,更優(yōu)選120hr。本發(fā)明所用重組人血管內(nèi)皮抑制素優(yōu)選為Endostar。
[0014]本發(fā)明的優(yōu)點在于:
(I)本發(fā)明配液方法解決了藥物混合液中的雜質(zhì)問題，大大提高了重組人血管內(nèi)皮抑制素的純度，更加利于保證藥物的有效量。
[0015](2)本發(fā)明提供了更寬范圍的重組人血管內(nèi)皮抑制素負荷劑量，使用方法簡便，為臨床患者提供了更多的選擇空間。[0016](3)本發(fā)明解決了重組人血管內(nèi)皮抑制素臨床用藥的長期障礙，便攜式給藥系統(tǒng)使得持續(xù)輸液過程不影響患者正常生活，患者順應(yīng)性大大提高，具有較高的實用價值 。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0017]圖1實施例1-6的臨床患者血清藥物濃度-時間曲線圖(除15mg/day組n=5,其余n=3)。此圖為臨床用藥10天(連續(xù)兩次使用本發(fā)明持續(xù)給藥系統(tǒng))的患者血清藥物濃度-時間曲線圖，圖示中η為劑量組患者數(shù)量。此臨床使用方法即在第I天分別按實施例1-6所述操作及藥物劑量安裝本發(fā)明持續(xù)給藥系統(tǒng)，持續(xù)給藥5天(120hr),在第6天卸下第1-5天所用給藥系統(tǒng)，重復(fù)實施例1-6安裝操作更換本發(fā)明持續(xù)給藥系統(tǒng)。
[0018]圖2實施例7恩度稀釋液與恩度原液RP-HPLC純度。如圖所示，采用本發(fā)明配液步驟，恩度稀釋液RP-HPLC純度檢測無溶出雜質(zhì)。
[0019]圖3實施例7 Nipro泵中恩度稀釋液RP-HPLC純度。如圖所示，采用本發(fā)明配液步驟，孵育6天內(nèi)恩度稀釋液RP-HPLC純度檢測無溶出雜質(zhì)。
[0020]圖4實施例7 Baxtar泵中恩度稀釋液RP-HPLC純度。如圖所示，采用本發(fā)明配液步驟，孵育6天內(nèi)恩度稀釋液RP-HPLC純度檢測無溶出雜質(zhì)。
[0021]圖5實施例7大輸液中恩度稀釋液RP-HPLC純度。如圖所示，采用本發(fā)明配液步驟，孵育6天內(nèi)恩度稀釋液RP-HPLC純度檢測無溶出雜質(zhì)。
[0022]圖6實施例8采用有硅油注射器采樣的RP-HPLC純度檢測圖。如圖6所示，采用有硅油注射器采樣恩度稀釋液在4.7min左右出現(xiàn)雜質(zhì)峰。由此推定，使用混合后再將恩度稀釋液用有硅油注射器充入儲藥裝置的配液方式因為恩度與硅油接觸時間更長，雜質(zhì)峰將更強。
[0023]圖7實施例9恩度在有硅油注射器內(nèi)靜置24hr的RP-HPLC純度檢測圖，4.7min出現(xiàn)較強雜質(zhì)峰。根據(jù)注射器內(nèi)放樣結(jié)果，推定實施例8中雜質(zhì)峰為采樣用50ml —次性注射器引入硅油所致。
【具體實施方式】
[0024]下面實施例用于進一步說明本發(fā)明，但不是對本發(fā)明保護范圍的限制。
[0025]材料:靜脈注藥泵(便攜式，患者可隨身攜帶。臨床使用中有注射泵、輸液泵等多種注藥泵均可實現(xiàn)本發(fā)明):Baxter泵(容量300ml,輸液速度2ml/hr) ;Nipro泵(容量250ml，輸液速度2ml/hr);愛朋ZZB-300全自動注藥泵(容量300ml，輸液速度2ml/hr)。50ml注射器；注射用生理鹽水；重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液一恩度(山東先聲麥得津生物制藥有限公司生產(chǎn)，15mg/支，藥物包材為硅油固化注射器)。所有材料均為市售可得。
[0026]實施例1:
將2.5支恩度注射器針頭堵頭拔下，將恩度注射液充入NipiO泵的儲藥裝置中，然后再使用注射器抽取生理鹽水充入儲藥裝置，將藥液補充至240ml。排盡連接管內(nèi)的空氣，連接靜脈留置導(dǎo)管，固定妥善，設(shè)定Nipro泵驅(qū)動裝置參數(shù)2ml/hr,將恩度以0.3125mg/hr(7.5mg/day)負荷劑量泵入患者體內(nèi)，持續(xù)時間120hr。
[0027]實施例2:
將5支恩度注射器針頭堵頭拔下，將恩度注射液充入NipiO泵的儲藥裝置中，然后再使用注射器抽取生理鹽水充入儲藥裝置，將藥液補充至240ml。排盡連接管內(nèi)的空氣，連接靜脈留置導(dǎo)管，固定妥善，設(shè)定Nipro泵驅(qū)動裝置參數(shù)2ml/hr,將恩度以0.625mg/hr (15mg/day)負荷劑量泵入患者體內(nèi)，持續(xù)時間120hr。[0028]實施例3:
將10支恩度注射器針頭堵頭拔下，將恩度注射液充入Baxter泵的儲藥裝置中，然后再使用注射器抽取生理鹽水充入儲藥裝置，將藥液補充至240ml。排盡連接管內(nèi)的空氣，連接靜脈留置導(dǎo)管，固定妥善，設(shè)定Baxter泵驅(qū)動裝置參數(shù)2ml/hr,將恩度以1.25mg/hr(30mg/day)負荷劑量泵入患者體內(nèi)，持續(xù)時間120hr。
[0029]實施例4:
將15支恩度注射器針頭堵頭拔下，將恩度注射液充入Baxter泵的儲藥裝置中，然后再使用注射器抽取生理鹽水充入儲藥裝置，將藥液補充至240ml。排盡連接管內(nèi)的空氣，連接靜脈留置導(dǎo)管，固定妥善，設(shè)定Baxter泵驅(qū)動裝置參數(shù)2ml/hr,將恩度以1.875mg/hr(45mg/day)負荷劑量泵入患者體內(nèi)，持續(xù)時間120hr。
[0030]實施例5:
將20支恩度注射器針頭堵頭拔下，將恩度注射液充入愛朋ZZB-300全自動注藥泵的儲藥裝置中，然后再使用注射器抽取生理鹽水充入儲藥裝置，將藥液補充至240ml。排盡連接管內(nèi)的空氣，連接靜脈留置導(dǎo)管，固定妥善，設(shè)定愛朋ZZB-300全自動注藥泵驅(qū)動裝置參數(shù)2ml/hr,將恩度以2.5mg/hr (60mg/day)負荷劑量泵入患者體內(nèi)，持續(xù)時間120hr。
[0031]實施例6
將25支恩度注射器針頭堵頭拔下，將恩度注射液充入愛朋ZZB-300全自動注藥泵的儲藥裝置中，然后再使用注射器抽取生理鹽水充入儲藥裝置，將藥液補充至240ml。排盡連接管內(nèi)的空氣，連接靜脈留置導(dǎo)管，固定妥善，設(shè)定愛朋ZZB-300全自動注藥泵驅(qū)動裝置參數(shù)2ml/hr，將恩度以3.125mg/hr (75mg/day)負荷劑量泵入患者體內(nèi)，持續(xù)時間120hr。
[0032]表1為實施例1-6的臨床患者血清藥物濃度數(shù)據(jù)。此表為臨床用藥10天(連續(xù)兩次使用本發(fā)明持續(xù)給藥系統(tǒng))的患者血清藥物濃度數(shù)據(jù)，圖示中η為劑量組患者數(shù)量。此臨床使用方法即在第I天分別按實施例1-6所述操作及藥物劑量安裝本發(fā)明持續(xù)給藥系統(tǒng)，持續(xù)給藥5天(120hr)，在第6天卸下第1-5天所用給藥系統(tǒng)，重復(fù)實施例1_6安裝操作更換本發(fā)明持續(xù)給藥系統(tǒng)。
[0033]表1患者血清藥物濃度數(shù)據(jù)
【權(quán)利要求】
1.一種重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)，包括輸液裝置和驅(qū)動裝置，所述輸液裝置包括儲藥裝置；其特征在于， (I)輸液裝置的配液步驟為:分別將重組人血管內(nèi)皮抑制素和生理鹽水充入儲藥裝置中； (2)通過驅(qū)動裝置使(I)中的重組人血管內(nèi)皮抑制素以負荷劑量持續(xù)進入人體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的持續(xù)給藥系統(tǒng)，其特征在于，使用注射器分別將重組人血管內(nèi)皮抑制素和生理鹽水充入儲藥裝置。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的持續(xù)給藥系統(tǒng)，其特征在，所述注射器選自硅油固化注射器、無硅油注射器中的一種。
4.一種重組人血管內(nèi)皮抑制素的持續(xù)給藥方法，其特征在于，將權(quán)利要求1中的重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)給藥系統(tǒng)通過靜脈使重組人血管內(nèi)皮抑制素持續(xù)進入人體。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的持續(xù)給藥方法，其特征在于，所述重組人血管內(nèi)皮抑制素的負荷劑量為 0.3125^3.125mg/hr。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的持續(xù)給藥方法，其特征在于，所述重組人血管內(nèi)皮抑制素的負荷劑量為0.3125~0.625mg/hr。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的持續(xù)給藥方法，其特征在于，所述持續(xù)給藥時間為2ri44hr。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的持續(xù)給藥方法，其特征在于，所述持續(xù)給藥時間為.120~144hr。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的持續(xù)給藥方法，其特征在于，所述持續(xù)給藥時間為120hr。
10.根據(jù)權(quán)利要求4、中任一項所述的持續(xù)給藥方法，其特征在于所述重組人血管內(nèi)皮抑制素為Endostar。
【文檔編號】A61M5/142GK103536982SQ201210241984
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2012年7月13日 優(yōu)先權(quán)日:2012年7月13日
【發(fā)明者】岳德勝, 王鵬, 張弢, 王峰 申請人:江蘇先聲藥業(yè)有限公司, 江蘇先聲藥物研究有限公司