專利名稱：一種同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法
技術領域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥技術領域，具體來說是涉及同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物 堿的方法。
背景技術：
枳實始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有破氣消積，化痰散痞的功效。主要有效成分為揮 發(fā)油、黃酮類和生物堿類[1]，它們均對枳實的功效發(fā)揮一定作用?，F(xiàn)代藥理研究表明，揮 發(fā)油對大鼠離體腸平滑肌的收縮呈先興奮后抑制作用，并有一定程度的鎮(zhèn)痛作用和中樞抑 制作用[2]黃酮類對大鼠離體腸平滑肌具有收縮作用[3]；生物堿具有升壓、抗休克的作用 [4]0《中華人民共和國藥典》2010版規(guī)定枳實來源于蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培變種或甜橙Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果[5]。另有香橙Citurs junos Sieb部分地區(qū)也作為枳實使用目前有關枳實黃酮、生物堿成分制備方法的專利有 申請?zhí)?% :200410042658.5, CN200410077903. 6,200410070123. 9, CN200910183265. 9， CN200710163452. 1，CN200710111229. 2，CN200710099903. X，CN200710098445. 8 的專利等。 但本發(fā)明專利公開的是一種同時提取分離來源于酸橙及其栽培變種、香橙或甜橙的枳實中 揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的制備方法，采用該技術方法能使枳實中三類有效成分同時被 提取，有效避免了單一提取所帶來的資源浪費，提高了枳實的綜合利用率，降低了成本，并 且制備方法適宜工業(yè)化大生產(chǎn)。參考文獻
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3Benavente-Garca 0. , Castillo J. Update on Uses and Properties of Citrus Flavonoids: New Findings in Anticancer, Cardiovascular, and Anti~inflammatory Activity. J Agric Food Chem, 2008，56(15):6185-6205
4陳廉，王殿俊，常復蓉，等.青皮、陳皮、枳實藥理作用的比較.江蘇中醫(yī)雜 志，1981，(3) :60-61
5國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部).北京化學工業(yè)出版 社，2005:pl72
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法。
本發(fā)明的技術方案如下
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取枳實加5-12倍量水，浸泡0-4 h， 水蒸汽蒸餾法提取2-12 h，得揮發(fā)油；提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計6-12 倍量(L/kg)的55-95%乙醇回流提取2-3次，每次0. 5-1. 5 h，濾過，合并各提取液，減壓回 收溶劑，得提取物，加水分散溶解，使以生藥量計上樣液濃度為0. 4-0. 8 g/ml ；通過-陽離 子交換樹脂，吸附流速1-3 BV/h，樹脂柱徑高比為1 5-8，以生藥量計上樣量為0.8-1. 6 g/ml，先用30-80%乙醇洗脫2-4 BV，洗脫流速為1-4 BV/h，洗脫液待用；然后用0.8-2 mol/ L 30-80%乙醇氨水洗脫3-5 BV，洗脫流速為2-4 BV/h，此洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生 物堿提取物；上述乙醇溶液洗脫液，減壓回收溶劑，得提取物，加水分散溶解，使以生藥量 計上樣液濃度為0.4-1. Og/ml，通過大孔吸附樹脂，吸附流速1-3 BV/h，樹脂柱徑高比為 1 5-8，以生藥量計上樣量為0. 3-0. 6g/ml，先用0-20%乙醇洗脫2-3BV進行除雜，除雜流 速為1-3 BV/h，然后用50-90%乙醇洗脫3-4 BV，洗脫流速為0. 8-2 BV/h。此洗脫液濃縮， 干燥，得枳實總黃酮提取物。本發(fā)明所述原料枳實，來源于是蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽 培變種黃皮酸橙 Citrus aurantium ‘Huangpi，、代代花 Citrus aurantium ‘Daidai，、 7^； Citrus aurantium iChuluan' > ijf Citrus aurantium iTangcheng' | S C. aurantium iXiucheng'> 香澄 C. aurantium iXiangcheng'> 積澄 C. aurantium ΧΡ· trifoliata，甜橙 Citrus sinensis Osbeck 的干燥幼果。作為提取枳實揮發(fā)油、總生物堿和總黃酮的原材料，包括枳實市售飲片，也可以是 這些植物的成熟果實、莖、葉、花穗、根莖及根等任一部位或全部植株，其中優(yōu)選的藥材部位 為干燥根及根莖。上述所述的枳實包括未經(jīng)任何炮制處理的原藥材及飲片，還包括各種炮 制品，如“炒枳實”、“麩炒枳實”等。本發(fā)明利用離子交換樹脂法進行制備時，所用的離子交換樹脂可以是強酸性或弱 酸性任意一種類型，如 UBK530、WK40、SK1B、WK10、731 等。本發(fā)明利用大孔吸附樹脂法進行制備時，所用的大孔樹脂可以是非極性、弱極性、 中等極性等任意一種類型，如SP825，HP20, HPDl00A, D-101, NKA II等。本發(fā)明其中BV和BV/h的含義是通常將樹脂裝于圓筒形的樹脂柱中，溶液連續(xù)地 通過。樹脂柱內(nèi)裝載樹脂的體積稱為床容積(bed volume)，簡寫為BV。工業(yè)用的樹脂柱的 床容積通常由l-0m3，也有較小或較大的。這是樹脂柱的基本單位，它工作時的各種物料量 都以BV為單位。例如溶液通過樹脂柱的流量速度為2-4BV/h，即每小時通過溶液的體積為 樹脂床容積的2-4倍。樹脂的處理能力亦常以BV為單位計算。本發(fā)明質(zhì)量控制方法可以包括以下一種或幾種含量測定方法 1、揮發(fā)油
揮發(fā)油得率=揮發(fā)油量(ml)/生藥量(g) X 100% 檸檬烯和芳樟醇百分含量測定
色譜條件Restek Rxi-5ms石英毛細管柱(0.25 mm X 30 m,0. 25 μ m)；進樣口溫 度250 V ；程序升溫起始溫度50 °C，保持1 min，以5 V /min程序升溫至140 °C，保持 1 min，再以10 °C min-l升溫至200 °C，保持3 min。進樣量1 μ L ；分流比1 60 ；載氣氦 氣。質(zhì)譜分析條件電離方式為ΕΙ，離子源溫度200 °C，接口溫度為250 °C，電子能量70eV，電離電壓1760 V，質(zhì)量掃描范圍45-450 amu。百分含量測定取3批枳實揮發(fā)油樣品各3份，精密吸取0. 2 ml,加丙酮溶解并定 容于5 ml量瓶中，搖勻，作為檸檬烯和β-芳樟醇百分含量測定的供試品溶液。精密吸取 上述供試品溶液2 μ L，注入氣相色譜儀，測定，記錄三種成分百分含量。2、總生物堿
精密稱取辛弗林對照品適量，加甲醇溶解制成每1 ml含辛弗林0.831 mg的溶液。 精密吸取辛弗林對照品溶液0.5 ml, 1.0 ml, 1.5 ml, 2.0 ml, 2. 5 ml，置帶刻度具塞試管中， 分別加水至3 ml，加入pH5.0溴百里香草酚蘭緩沖溶液4 ml，搖勻，放入37°C水浴中保溫 0. 5小時，取出放冷，于420 nm處測定吸光度，以辛弗林濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪 制曲線。精密稱取3批枳實總生物堿提取物樣品各3份，每份約8 mg,加甲醇溶解并定容 于5 ml量瓶中，搖勻。精密吸取1.5 ml置帶刻度具塞試管中，加水至3 ml，加入pH5.0溴 百里香草酚蘭緩沖溶液4 ml，搖勻，放入37°C水浴中保溫0.5小時，取出放冷，于420 nm處 測定吸光度，計算含量。3、辛弗林
色譜條件Zobax Eclipse XDB-C18 (4. 6 mmX150 mm, 5 μ m)色譜柱；流動相乙 腈-水-磷酸-十二烷基硫酸鈉(24 76 0. 1 0.2);流速1. 2 ml/min ；檢測波長275 nm;柱溫30 °C。標準曲線精密吸取辛弗林對照品溶液(濃度為0.36 mg/ml)l，3，5，7,9 ml, 加甲醇分別定容至10 ml。分別精密吸取各濃度對照品溶液5 μ L，注入液相色譜儀，測定 峰面積，以辛弗林量(Pg)為橫坐標，色譜峰峰面積積分值為縱坐標，繪制標準曲線
含量測定精密稱取3批枳實總生物堿提取物樣品各3份，每份約5 mg,加甲醇溶解并 定容于10 ml量瓶中，搖勻，作為辛弗林含量測定的供試品溶液。精密吸取上述供試品溶液 10 UL,注入液相色譜儀，測定峰面積，計算含量。4、總黃酮
精密稱取橙皮苷對照品適量，加甲醇溶解制成每1 ml含橙皮苷0.22 mg的溶液。分別 精密吸取橙皮苷對照品溶液1，2，3，4，5 ml，于5 ml量瓶中，加甲醇定容，搖勻。分別精密吸 取上述對照品溶液0.5 ml，置25 ml量瓶中，準確加入10% A1C13溶液1.0 ml，再用蒸餾水 定容至刻度，搖勻，室溫放置15 min，于310 nm處測定吸光度，以橙皮苷濃度為橫坐標，吸光 度為縱坐標，繪制曲線。精密稱取3批枳實總黃酮提取物樣品各3份，每份約5 mg,加甲醇溶解并定容于 25 ml量瓶中，搖勻。分別精密吸取上述對照品溶液0.5 ml，置25 ml量瓶中，準確加入10% A1C13溶液1.0 ml，再用蒸餾水定容至刻度，搖勻，室溫放置15 min，于310 nm處測定吸光
度，計算含量。5、柚皮蕓香苷，柚皮苷，橙皮苷和新橙皮苷
色譜條件Agilent Zobax Extend_C18 (4. 6 mmX50 mm，1· 8 μ m)色譜柱，流動相 為甲醇- 醋酸(30:70)；檢測波長285 nm;流速1 ml/min ；柱溫30 °C。標準曲線精密稱取橙皮苷對照品、柚皮苷對照品適量，加甲醇溶解分別制成每1 ml含橙皮苷103. 2 μ g、柚皮苷87. 2 μ g的溶液。精密吸取等體積的兩種對照品溶液混勻，得到每1 ml含橙皮苷和柚皮苷各51. 6 μ g、43. 6 μ g的混合對照品溶液。精密吸取混合對 照品溶液1，3，5，7,9 μ L注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積，以測得的峰面 積積分值為縱坐標，進樣量(Pg)為橫坐標，繪制標準曲線。含量測定精密稱取3批枳實總黃酮提取物樣品各3份，每份約3 mg,加甲醇溶解 并定容于25 ml量瓶中，搖勻，作為柚皮蕓香苷，柚皮苷，橙皮苷和新橙皮苷含量測定的供試 品溶液。精密吸取上述供試品溶液2 UL,注入液相色譜儀，測定峰面積。計算橙皮苷和柚 皮苷含量。柚皮蕓香苷與柚皮苷、新橙皮苷與橙皮苷分別為兩對同分異構體，它們在紫外吸 收光譜中的吸收系數(shù)相同。因此在缺少柚皮蕓香苷和新橙皮苷對照品的情況下，根據(jù)DAD 檢測器測定的色譜峰紫外吸收光譜圖，確認柚皮蕓香苷和新橙皮苷色譜峰。并分別根據(jù)橙 皮苷和柚皮苷對照品的峰面積和進樣量計算樣品中新橙皮苷和柚皮蕓香苷的含量。
具體實施例方式實施例1
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取枳實飲片2 kg，加8倍量水，浸泡2 h，水蒸汽蒸餾法提取7 h，得揮發(fā)油。提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計9倍量 75%乙醇回流提取3次，每次1. 0 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得 提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0.6 g/ml ；通過1.8 L UBK530陽離子交 換樹脂，吸附流速2 BV/h，樹脂柱徑高比為1 6，以生藥量計上樣量為1. 2 g/ml，先用50% 乙醇洗脫3 BV，洗脫流速為3 BV/h，50%乙醇洗脫液待用；然后用1.4 mol/L 50%乙醇氨水 洗脫4 BV，洗脫流速為3 BV/h, 1. 4 mol/L 50%乙醇氨水洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物 堿提取物；上述50%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，得提取物，加水分散溶解，使上樣液濃度為 0.7 g/ml，通過SP-825大孔吸附樹脂，吸附流速2 BV/h，樹脂柱徑高比為1 6，以生藥量 計上樣量為0. 4 g/ml，先用10%乙醇洗脫2 BV進行除雜，除雜流速為2 BV/h，然后用70% 乙醇洗脫3 BV，洗脫流速為1.4 BV/h。70%乙醇洗脫液濃縮，干燥，得枳實總黃酮提取物。實施例2
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取枳實飲片5 kg,加5倍量水，浸泡4 h，水蒸汽蒸餾法提取12h，得揮發(fā)油。提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計12倍量 95%乙醇回流提取3次，每次1. 5 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得 提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 8 g/ml ；通過WK40陽離子交換樹脂， 吸附流速1 BV/h，樹脂柱徑高比為1 8，以生藥量計上樣量為1.6 g/ml，先用80%乙醇洗 脫4BV，洗脫流速為4 BV/h，80%乙醇洗脫液待用；然后用2 mol/L 80%乙醇氨水洗脫5 BV, 洗脫流速為4 BV/h, 2 mol/L 80%乙醇氨水洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物堿提取物；上 述80%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，得提取物，加水分散溶解，使上樣液濃度為1.0 g/ml，通 過HP20大孔吸附樹脂，吸附流速3 BV/h，樹脂柱徑高比為1 8，以生藥量計上樣量為0.6 g/ml，先用20%乙醇洗脫3 BV進行除雜，除雜流速為3 BV/h,然后用90%乙醇洗脫4 BV,洗 脫流速為2 BV/h。90%乙醇洗脫液濃縮，干燥，得枳實總黃酮提取物。實施例3
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取酸橙枳實飲片1 kg，加5倍量水， 水蒸汽蒸餾法提取2 h，得揮發(fā)油。提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計6倍量55%乙醇回流提取2次，每次0. 5 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得提 取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 4 g/ml ；通過UBK530陽離子交換樹脂， 吸附流速1 BV/h，樹脂柱徑高比為1 5，以生藥量計上樣量為0. 8 g/ml，先用30%乙醇洗 脫2 BV，洗脫流速為1 BV/h，30%乙醇洗脫液待用；然后用0. 8 mol/L 30%乙醇氨水洗脫3 BV，洗脫流速為2 BV/h, 0.8 mol/L 30%乙醇氨水洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物堿提取 物；上述30%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，得提取物，加水分散溶解，使上樣液濃度為0.4 g/ ml，通過SP-825大孔吸附樹脂，吸附流速1 BV/h，樹脂柱徑高比為1 5，以生藥量計上樣 量為0. 3 g/ml，先用水洗脫2 BV除雜，除雜流速為1 BV/h，然后用50%乙醇洗脫3 BV,洗脫 流速為0.8 BV/h。50%乙醇洗脫液濃縮，干燥，得枳實總黃酮提取物。實施例4
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取酸橙枳實飲片2 kg，加12倍量水， 浸泡0 h，水蒸汽蒸餾法提取4 h，得揮發(fā)油。提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入ML75%乙 醇回流提取3次，每次1. 0 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得提取 物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 6 g/ml ；通過731陽離子交換樹脂，吸附 流速2 BV/h，樹脂柱徑高比為1 6，上樣量以生藥量計為1.2 g/ml，先用50%乙醇洗脫3 BV，洗脫流速為3 BV/h，50%乙醇洗脫液待用；然后用1 mol/L 50%乙醇氨水洗脫4 BV，洗脫 流速為3 BV/h, 1 mol/L 50%乙醇氨水洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物堿提取物；上述50% 乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，得提取物，加水分散溶解，使上樣液濃度為0. 8 g/ml，通過DlOl 大孔吸附樹脂，吸附流速2 BV/h，樹脂柱徑高比為1 6，以生藥量計上樣量為0.4 g/ml, 先用水洗脫2 BV進行除雜，除雜流速為2 BV/h，然后用70%乙醇洗脫3 BV，洗脫流速為1 BV/h。70%乙醇洗脫液濃縮，干燥，得枳實總黃酮提取物。實施例5
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取酸橙枳實飲片3 kg，加5倍量水， 浸泡3 h，水蒸汽蒸餾法提取6 h，得揮發(fā)油。提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入ML95%乙 醇回流提取3次，每次1. 5 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得提取 物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 8 g/ml ；通過UBK530陽離子交換樹脂，吸 附流速3 BV/h，樹脂柱徑高比為1 8，上以生藥量計樣量為1.6 g/ml，先用80%乙醇洗脫 4BV，洗脫流速為4 BV/h，80%乙醇洗脫液待用；然后用2 mol/L 80%乙醇氨水洗脫5 BV，洗 脫流速為4 BV/h, 2 mol/L 80%乙醇氨水洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物堿提取物；上述 80%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，得提取物，加水分散溶解，使上樣液濃度為1.0 g/ml，通過 HPD100A大孔吸附樹脂，吸附流速3 BV/h，樹脂柱徑高比為1 8，以生藥量計上樣量為0. 6 g/ml，先用20%乙醇洗脫3 BV進行除雜，除雜流速為3 BV/h,然后用90%乙醇洗脫4 BV,洗 脫流速為2 BV/h。90%乙醇洗脫液濃縮，干燥，得枳實總黃酮提取物。實施例6
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取酸橙枳實飲片2 kg，加4倍量水， 浸泡2 h，水蒸汽蒸餾法提取5 h，得揮發(fā)油。提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入16L55%乙 醇回流提取2次，每次0. 5 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得提取 物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0.4 g/ml ；通過SKlB陽離子交換樹脂，吸附 流速1 BV/h，樹脂柱徑高比為1 5，以生藥量計上樣量為0.8 g/ml，先用30%乙醇洗脫2BV，洗脫流速為1 BV/h，30%乙醇洗脫液待用；然后用0.8 mol/L 30%乙醇氨水洗脫3 BV, 洗脫流速為2 BV/h, 0.8 mol/L 30%乙醇氨水洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物堿提取物；上 述30%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，得提取物，加水分散溶解，使上樣液濃度為0. 4 g/ml，通 過D-101大孔吸附樹脂，吸附流速1 BV/h，樹脂柱徑高比為1 5，以生藥量計上樣量為 0. 3 g/ml，先用水洗脫2 BV除雜，除雜流速為1 BV/h，然后用50%乙醇洗脫3 BV，洗脫流速 為0.8 BV/h。50%乙醇洗脫液濃縮，干燥，得枳實總黃酮提取物。實施例7
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取酸橙枳實飲片2 kg，加4倍量水， 浸泡2 h，水蒸汽蒸餾法提取6 h，得揮發(fā)油。提提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入20L70% 乙醇回流提取3次，每次1. 0 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得提 取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 5 g/ml ；通過731陽離子交換樹脂，吸 附流速2 BV/h，樹脂柱徑高比為1 6，以生藥量計上樣量為1. 2 g/ml，先用60%乙醇洗脫 3 BV，洗脫流速為3 BV/h，60%乙醇洗脫液待用；然后用1 mol/L 60%乙醇氨水洗脫4 BV, 洗脫流速為3 BV/h, 1 mol/L 60%乙醇氨水洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物堿提取物；上述 60%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，得提取物，加水分散溶解，使上樣液濃度為0. 8 g/ml，通過 NKA II大孔吸附樹脂，吸附流速2 BV/h，樹脂柱徑高比為1 6，上以生藥量計樣量為0.4 g/ml，先用水洗脫2 BV進行除雜，除雜流速為2 BV/h，然后用80%乙醇洗脫3 BV，洗脫流速 為1 BV/h。80%乙醇洗脫液濃縮，干燥，得枳實總黃酮提取物。實施例8
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取酸橙枳實飲片3 kg，加6倍量水， 水蒸汽蒸餾法提取0.5 h，得揮發(fā)油。提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入30L70%乙醇回流 提取2次，每次1. 0 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水 分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0. 6 g/ml ；通過SP-825大孔吸附樹脂，吸附流速2 BV/h，樹脂柱徑高比為1 6，上以生藥量計樣量為0.6 g/ml，先用水洗脫2 BV除雜，除雜 流速為2 BV/h，然后用30%乙醇洗脫3 BV，洗脫流速為2 BV/h, 30%乙醇洗脫液濃縮，干燥， 得枳實總生物堿提取物；樹脂柱繼續(xù)用70%乙醇洗脫3 BV，洗脫流速為1 BV/h，洗脫液濃 縮，干燥，得枳實總黃酮提取物。實施例9
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取酸橙枳實飲片1 kg，加8倍量水， 浸泡3 h，水蒸汽蒸餾法提取1 h，得揮發(fā)油。提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入8L70%乙醇 回流提取3次，每次1 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加 水分散溶解，以生藥量計使上樣液濃度為0.6 g/ml ；通過WK40陽離子交換樹脂，吸附流速2 BV/h，樹脂柱徑高比為1 6，以生藥量計上樣量為1. 2 g/ml，先用水洗脫2 BV除雜，除雜 流速為3 BV/h，再用50%乙醇洗脫，洗脫流速為3 BV/h，接收洗脫液3 BV，50%乙醇洗脫液 濃縮，干燥，得枳實總黃酮提取物；樹脂柱然后用1 mol/L 50%乙醇氨水洗脫4 BV，洗脫流 速為3 BV/h, 1 mol/L 50%乙醇氨水洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物堿提取物。實施例10
同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取酸橙枳實飲片2 kg，加6倍量水， 浸泡2 h，水蒸汽蒸餾法提取1 h，得揮發(fā)油。提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入20L水提取3次，每次1. 0 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，以生藥量計使上樣液 濃度為0.6 g/ml ；通過UBK530陽離子交換樹脂，吸附流速2 BV/h，樹脂柱徑高比為1 6， 以生藥量計上樣量為1.2 g/ml，先用50%乙醇洗脫3 BV，洗脫流速為3 BV/h，50%乙醇洗脫 液待用；然后用1 mol/L 50%乙醇氨水洗脫4 BV，洗脫流速為3 BV/h, 1 mol/L 50%乙醇氨 水洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物堿提取物；上述50%乙醇洗脫液，減壓回收溶劑，得提取 物，加水分散溶解，使上樣液濃度為0.8 g/ml，通過SP-825大孔吸附樹脂，吸附流速2 BV/ h，樹脂柱徑高比為1 6，以生藥量計上樣量為0.4 g/ml，先用水洗脫2 BV進行除雜，除雜 流速為2 BV/h，然后用70%乙醇洗脫3 BV，洗脫流速為1 BV/h。70%乙醇洗脫液濃縮，干燥， 得枳實總黃酮提取物。 以上實施例利用上述質(zhì)量檢測方法測得總黃酮和生物堿含量如下
權利要求
1.一種同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取枳實飲片加5-12倍量(L/ kg)水，浸泡0-4 h，水蒸汽蒸餾法提取2-12 h，得揮發(fā)油；提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加 入以生藥量計6-12倍量(L/kg) 55-95%乙醇回流提取2-3次，每次0.5-1. 5 h，濾過，合并 各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生藥量計使上樣液 濃度為0.4-0.8 g/ml ；通過陽離子交換樹脂，吸附流速1-3 BV/h，樹脂柱徑高比為1 5_8， 上以生藥量計樣量為0. 8-1. 6 g/ml，先用30-80%乙醇洗脫2-4 BV，洗脫流速為1-4 BV/ h，洗脫液待用；然后用0. 8-2 mol/L 30-80%乙醇氨水洗脫3-5 BV，洗脫流速為2-4 BV/h, 此洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物堿提取物；上述乙醇溶液洗脫液，減壓回收溶劑，得提取 物，加水分散溶解，使以生藥量計上樣液濃度為0. 4-1. Og/ml，通過大孔吸附樹脂，吸附流 速1-3 BV/h，樹脂柱徑高比為1 5-8，以生藥量計上樣量為0.3-0. 6g/ml，先用0-20%乙醇 洗脫2-3 BV進行除雜，除雜流速為1-3 BV/h，然后用50-90%乙醇洗脫3-4 BV，洗脫流速為0.8-2BV/h ；此洗脫液濃縮，干燥，得枳實總黃酮提取物。
2.如權利要求1所述的一種同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，其特 征在于原料枳實，來源是蕓香科植物酸橙Citrus aurantium L.及其栽培變種黃皮酸 Citrus aurantium iHuangpi‘> ^ ^ ^ Citrus aurantium iDaidai‘>Citrus aurantium iChuluan' > ijf Citrus aurantium iTangcheng' 臭 C. aurantium iXiucheng'、香澄C. aurantium iXiangcheng'、積澄C. aurantium XP. trifoliata、舌甘澄 Citrus sinensis Osbeck的干燥幼果中的任意一種。
3.如權利要求1所述的一種同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，其特征 在于所用的離子交換樹脂型號是UBK530、WK40、SK1B、WK10或731中的任意一種。
4.如權利要求1所述的一種同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，其特征 在于所用的大孔樹脂型號是SP825，HP20，HPDl00A, D-101, NKA II中的任意一種。
5.如權利要求1所述的一種同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，其特征 在于同時制備枳實揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿的方法，取枳實飲片2 kg，加8倍量水，浸泡 2 h，水蒸汽蒸餾法提取7 h，得揮發(fā)油。
6.提取揮發(fā)油后藥液留用，藥渣加入以生藥量計9倍量75%乙醇回流提取3次，每次.1.0 h，濾過，合并各提取液和提取揮發(fā)油后藥液，減壓濃縮，得提取物，加水分散溶解，以生 藥量計使上樣液濃度為0. 6 g/ml ；通過1. 8 L UBK530陽離子交換樹脂，吸附流速2 BV/h, 樹脂柱徑高比為1 6，以生藥量計上樣量為1. 2 g/ml，先用50%乙醇洗脫3 BV，洗脫流速 為3 BV/h, 50%乙醇洗脫液待用；然后用.1. 4 mol/L 50%乙醇氨水洗脫4 BV，洗脫流速為3 BV/h, 1. 4 mol/L 50%乙醇氨水洗脫液濃縮，干燥，得枳實總生物堿提取物；上述50%乙醇洗 脫液，減壓回收溶劑，得提取物，加水分散溶解，使上樣液濃度為0. 7 g/ml，通過SP-825大 孔吸附樹脂，吸附流速2 BV/h，樹脂柱徑高比為1 6，以生藥量計上樣量為0.4 g/ml，先 用10%乙醇洗脫2 BV進行除雜，除雜流速為2 BV/h，然后用70%乙醇洗脫3 BV，洗脫流速 為1. 4 BV/h ；70%乙醇洗脫液濃縮，干燥，得枳實總黃酮提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥枳實中提取得到的揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿提取物的制備方法。該方法主要利用水蒸氣蒸餾、特定型號的離子交換樹脂和大孔吸附樹脂聯(lián)用的方法，同時提取分離枳實中揮發(fā)油、總黃酮和總生物堿。所制得的枳實揮發(fā)油提取物中檸檬烯和β-芳樟醇的百分含量為5-100%(w/w)；所制得的枳實總黃酮提取物中各種黃酮類成分百分含量的總和為5-100%(w/w),其中柚皮蕓香苷，柚皮苷，橙皮苷、新橙皮苷四種成分含量占總黃酮含量的5-100%(w/w)；所制得的枳實生物堿提取物中各種生物堿成分百分含量的總和為5-100%(w/w),其中辛弗林含量占總生物堿含量的5-100%(w/w)。
文檔編號A61K36/752GK102106918SQ20111004215
公開日2011年6月29日 申請日期2011年2月22日 優(yōu)先權日2011年2月22日
發(fā)明者劉振麗, 劉銘福, 呂署一, 宋志前, 王淳 申請人:中國中醫(yī)科學院中醫(yī)基礎理論研究所