專利名稱：包括酚酸的油棕櫚樹樹葉提取物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有治療作用以減少或避免人類及低等動物的氧化應(yīng)激的油棕櫚樹 樹葉提取物。具體而言，本發(fā)明涉及提出物中富含(-)-兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸和酚酸 的組成部分，其中例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸具有所述治療作用。
背景技術(shù)：
油棕櫚樹(Elaeis)包括棕櫚科植物(Arecaceae)，或棕櫚家族，的兩個品種。非洲 油棕櫚樹(Elaeis guineensis)原生于西非，美洲油棕櫚樹(Elaeis oleifera)原生于中 美及南美的熱帶地方。非洲油棕櫚樹亦廣泛種植于馬來西亞及印度尼西亞以獲取其產(chǎn)油的 果實。成熟的油棕櫚樹是高達20米的單干植物，其樹葉呈羽狀，可長達3至5米。一棵幼 樹一年生出約30塊樹葉。油棕櫚樹的花朵簇聚在一起，每一朵都有三塊萼片和三塊花瓣。油棕櫚樹的果實帶紅色，以一大束生長，每一束可重達10至40公斤不等。果實包 括被稱為果皮的一層多油和多肉的外層、以及被稱為棕櫚仁的單種子。油從果皮及棕櫚仁 中提取出來。種植油棕櫚樹主要是為了取其果實；其果實主要用來生產(chǎn)食用油。從油棕櫚樹果 實提取的棕櫚油也含有胡蘿卜素、生育酚和生育三烯酚。現(xiàn)時已有進行一些關(guān)于棕櫚葉提 取物的有益作用的研究。Abeywardena M 等人(Asia Pac. J. Clin. Nutr. , 11 :S467_S472)披露了一種從油 棕櫚樹(Elaeis guineensis)樹葉提取出來富含多酚的提取物。該提取物可用于通過內(nèi) 皮依賴機制促進血管舒張，但并未披露或研究其中是否含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏 酸、沒食子酸和原兒茶酸，也沒有披露或研究該提取物作為抗氧化應(yīng)激制劑的用途。Suhaila Mohamed 等人(WHAT Medicine III Proceedings, 2007，頁 145-148)披 露了富含多酚的油棕櫚樹樹葉(非洲油棕櫚樹)提取物的抗高膽固醇血癥和抗高血壓的效 用，但并未披露或研究其中是否含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸、沒食子酸和原兒茶 酸，也沒有披露或研究該提取物作為抗氧化應(yīng)激制劑的用途。Nagendran Balasundram ^A (Asia Pac. J. Clin. Nutr. 2005 ；4 (4) ；319-324) M 露了一種從油棕櫚樹果實分隔出來的富含酚的組成部分。該提取物展示生物活性的特性， 特別是抗氧化作用，但沒有再披露或研究油棕櫚樹樹葉提取物的化學(xué)成分，也沒有披露或 研究油棕櫚樹樹葉提取物作為抗氧化應(yīng)激制劑的用途。Tan Y. A.等人(The Royal Society of Chemistry 2001 ；548-551)披露了從油 棕櫚樹果實的中果皮及棕櫚仁提取出來的棕櫚油中所含有的酚類化合物，該酚類化合物包 括沒食子酸、氯原酸、原兒茶酸、龍膽酸、香豆酸、阿魏酸和咖啡酸，以及兒茶素、橙皮甙、柚 皮蕓香甙和四羥基苯，但沒有再披露或研究油棕櫚樹樹葉提取物的化學(xué)成分，也沒有披露 或研究油棕櫚樹樹葉提取物作為抗氧化應(yīng)激制劑的用途。Run-Cang Sun 等人(J. Agric. Food Chem.，49 (11)，5122-5129，2001)披露了一種新方法對油棕櫚樹樹葉纖維的羥基肉桂酸作出定量測定，但并未披露或研究其中是否含有 (-)_兒茶素沒食子酸酯，也沒有披露或研究該提取物作為抗氧化應(yīng)激制劑的用途。Yew-Ai Tan 等人(European Journal of Lipid Sciences and Technology，第 109卷，第4號，頁380-393，2007)披露了榨取和提煉棕櫚油所得的，亦即是從油棕櫚樹果實 所得的副產(chǎn)品中含有的如留醇，維生素E，類胡蘿卜素，磷脂，角鯊烯和酚類物質(zhì)的植物化學(xué) 物質(zhì)，但沒有再披露或研究油棕櫚樹樹葉提取物的化學(xué)成分，也沒有披露或研究油棕櫚樹 樹葉提取物作為抗氧化應(yīng)激制劑的用途。Kinnoudo Celestin(W02007129136)披露了具有抗瘧特性的油棕櫚樹 (Elaeisguineensis)樹葉提取物，但沒有指出提取物的化學(xué)成分，沒有披露或研究油棕櫚 樹樹葉提取物當(dāng)中是否含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸、沒食子酸和原兒茶酸，也沒 有披露或研究提取物作為抗氧化應(yīng)激制劑的用途。氧化應(yīng)激自由活性基、約束活性基以及高活性而因此具破壞性的分子對人類健康和疾病的 重要性在過去幾十年越來越受重視。很多普遍但致命的人類疾病，包括動脈粥樣硬化、癌癥 及衰老都具有以基為根本的病理反應(yīng)作為創(chuàng)傷的基礎(chǔ)機制。一基或一自由基通常被理解為一分子，其外軌道層上具有一個或多于一個沒有配 對的電子。很多具有約束基的分子種類為一氧化碳或其他含有氧的化合物，一般被稱之為 活性氧簇(R0Q。這些高度不穩(wěn)定的分子傾向與鄰接的分子產(chǎn)生急速反應(yīng)，并提供、提取或 甚至分出其外軌道的電子。此反應(yīng)有時候以徹底而且有益的方式改變鄰接的目標(biāo)分子，但 亦可以把它摧毀，或可使沒有配對的電子轉(zhuǎn)移至目標(biāo)，即一自由基，從而產(chǎn)生第二簇不需要 的R0S，而該ROS又會繼續(xù)建設(shè)性地或破壞性地與一新目標(biāo)產(chǎn)生反應(yīng)。事實上，ROS的高活 性多數(shù)是因為ROS產(chǎn)生了上述的分子連鎖反應(yīng)，以至把其自身的影響強而有力地放大很多 倍。所有有生命的需氧生物都使用氧來產(chǎn)生能量。但很多跡象顯示使用氧的好處也 關(guān)系到氧化過程可能對需氧生物造成創(chuàng)傷的風(fēng)險。多種活性氧代謝物會參與氧化過程，但 也同時攻擊不同種類的生物材料。幾乎所有種類的化學(xué)化合物都會被這些氧化合物氧化 損耗。舉例說，核酸、蛋白質(zhì)、自由氨基酸、脂質(zhì)和烴的化合物會受氧中毒影響。人類有一 最精細(xì)和分布最廣并因此明顯地非常重要的系統(tǒng)來平衡氧化和抗氧化作用(見H. Sies, Oxidative Stress，頁2-4，1985)。但自然存在的抗氧化物庫并不能抗衡增多的活性氧簇 (ROS)，因此便出現(xiàn)所謂的“氧化應(yīng)激”。向氧化作用偏移的失衡可能由以下兩種原因造成1、由于產(chǎn)生一活性氧代謝物而令抗氧化系統(tǒng)的負(fù)荷過重；及/或2、抗氧化系統(tǒng)的不足。上述原因的結(jié)果被概括為“氧化應(yīng)激”。現(xiàn)時，此失衡可由很多不同的疾病造成，尤 其是如肝炎的炎癥、如癲癇癥或帕金森氏癥的中央神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如哮喘的肺器官疾病、銀 屑病、抗癌制劑的副作用、如百草枯的化學(xué)品、輻射的副作用以及如心肌梗死的冠脈循環(huán)疾病。為免受制于任何理論，氧化應(yīng)激是指在不同疾病或創(chuàng)傷狀態(tài)中的一個因素，但不 代表氧化應(yīng)激是那些疾病的成因。不過，正如很多研究證實，氧化應(yīng)激可以對上述疾病的進展產(chǎn)生負(fù)面影響，進一步破壞病者的細(xì)胞?，F(xiàn)時，有力的科學(xué)證據(jù)指出，人類和動物身上很多功能障礙和疾病都和氧化應(yīng)激 有關(guān)，當(dāng)中包括衰老在一正常衰老過程中以比正常更快的速度衰老。心臟和心血管疾病動脈粥樣硬化和阿霉素心肌毒性。腎臟自身免疫性腎病綜合癥和重金屬腎毒。太陽輻射皮膚起皺和色素沉著。眼部白內(nèi)障、退行性視網(wǎng)膜損傷和黃斑變性。肺部肺癌(香煙煙霧)、肺氣腫、氧化劑污染物(03，NO2)，支氣管肺發(fā)育異常和石 棉致癌。神經(jīng)系統(tǒng)紊亂帕金森氏癥、神經(jīng)元蠟樣脂褐質(zhì)沉積癥、老年性癡呆癥、肌肉萎縮 癥和多發(fā)性硬化癥。鐵質(zhì)超負(fù)荷特發(fā)性血色病、飲食上的鐵質(zhì)超負(fù)荷和地中海貧血癥。炎癥免疫創(chuàng)傷腎小球腎炎、自身免疫性疾病和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。肝臟由酒精引致的肝臟創(chuàng)傷、鹵代烴和撲熱息痛。抗氧化物能提供保護，因為它們可以打斷脂質(zhì)過氧化作用的基連鎖反應(yīng)，從而在 ROS和自由基對不同的生物分子造成破壞前便把它們掃除，或避免氧化創(chuàng)傷擴散?；隗w內(nèi) 的反應(yīng)和對身體產(chǎn)生的負(fù)荷而最終導(dǎo)致的病理狀態(tài)就是氧化應(yīng)激?？寡趸?基掃除者)被視為可以消除上述疾病的氧化應(yīng)激，而這種作用的研究 很早以前已經(jīng)開始，并早已研發(fā)出一種具有基掃除功能的抗炎制劑。所以，明顯地，具有抗 氧化功能的物質(zhì)能有效減少氧化應(yīng)激。不同的食品和補充品都含有如維生素C和維生素E的維生素，用來幫助身體減輕 氧化應(yīng)激的影響。不過，更有力地對抗自由基和ROS的其實是身體本身的防御系統(tǒng)所自然 制造的稱為抗氧化物的化學(xué)物。抗氧化物通過向自由基或ROS提供一個電子或阻止它們形 成，從而終止ROS的自由及約束基的傳播。身體的抗氧化物防御系統(tǒng)包括三種重要的、天然的抗氧化物超氧化物歧化酶 (SOD)、過氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過氧化酶(G PX)。研究顯示這些抗氧化物所催化的反 應(yīng)是代謝順序的，因此，它們可以協(xié)同運作，首先是S0D，然后是CAT和GPX。但即使身體含有上述SOD、CAT和GPX，身體的抗氧化物防御系統(tǒng)仍然持續(xù)受氧化 應(yīng)激影響，其制造SOD、CAT和GPX的能力會被衰老過程抵銷，此外，炎癥、微生物或病毒感 染、癌癥及神經(jīng)障礙惡化以及由氧化應(yīng)激造成或因氧化應(yīng)激造成或加劇的其他病理狀態(tài)也 可以損害身體的抗氧化物防御系統(tǒng)。近年有關(guān)自然抗氧化物的尋覓越來越受關(guān)注，主要是因為以下三個原因 (Dastmalchi, Dorman, Kosar, & Hiltunen, 2007)1、很多臨床和流行病學(xué)研究均顯示食用水果和蔬菜可減低患上如癌癥、心血管疾 病和糖尿病等慢性疾病的風(fēng)險；2、出于安全考慮，因為長期攝取食品及飲料中的合成抗氧化物對身體潛在不良影 響；以及3、公眾認(rèn)為天然和膳食中的抗氧化物較合成的類似物更安全，結(jié)果越加引發(fā)公眾對從藥用植物攝取天然抗氧化物的興趣。但至今仍未指明油棕櫚樹樹葉提取物當(dāng)中帶有抗氧化及抗氧化應(yīng)激作用的化學(xué) 化合物。本發(fā)明旨在提供一種新穎的油棕櫚樹樹葉提取物，可減少哺乳類動物和家禽的氧 化應(yīng)激。所述的提取物富含(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶 酸的酚酸，并具有抗氧化應(yīng)激作用，而且，油棕櫚樹樹葉提取物中(-)_兒茶素沒食子酸酯、 阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸的綜合作用之前也未曾公開過?？偫ǘ裕妥貦皹錁淙~提取物中富含多酚的組成部分已在之前披露過，其中所 述的組成部分可被用作抗高膽固醇血癥和抗高血壓制劑，但其中并沒有研究或披露過油棕 櫚樹樹葉中所提取的含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶 酸的酚酸的組成部分，也沒有研究或披露過這種提取物作為抗氧化應(yīng)激制劑的用途。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明的主要目的是提供一種從油棕櫚樹樹葉提取并對哺乳類動物和家禽 具有治療作用的組合物。本發(fā)明的第二個目的是提供一種含有(_)-兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以及例如 是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸的組合物。本發(fā)明的第三個目的是提供一種制備一種油棕櫚樹樹葉提取物的方法。本發(fā)明的第四個目的是提供一種藥物組合物，其包括所述新穎的提取物和最少一 藥物學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明的第五個目的是提供一種藥物組合物，其包括所述新穎的提取物、穩(wěn)定劑、 載體、賦形劑、增充劑和其他合適的物質(zhì)。本發(fā)明的第六個目的是提供一種組合物，其包括所述新穎的提取物；所述新穎的 提取物混合及聯(lián)同藥物載體以用作減少或避免在哺乳類動物和家禽身上出現(xiàn)的氧化應(yīng)激。為實現(xiàn)本發(fā)明以上以至其他目的，本發(fā)明提供一種包括油棕櫚樹樹葉提取物的組 合物，其特征在于其中所述的提取物含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食 子酸和原兒茶酸的酚酸，并提供一種方法來制備一種含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸 以及例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸的油棕櫚樹樹葉提取物，所述方法的步驟包括a、通過將干油棕櫚樹樹葉或新鮮油棕櫚樹樹葉與水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、 氯仿、異丙醇或這些溶劑的混合物或任何其他極性溶劑混合，并以25°C至95°C的溫度加熱 0. 5至96小時，以從干油棕櫚樹樹葉或新鮮油棕櫚樹樹葉提取草藥液；b、過濾從步驟a所得的草藥液提取物；C、使步驟b所得的已過濾草藥液提取物與一吸附色譜介質(zhì)接觸，所述吸附色譜介 質(zhì)選擇性地吸附于含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶酸 的酚酸的組成部分，所述吸附介質(zhì)可以是吸附柱或任何其他吸附介質(zhì)；d、把步驟c所得的所述組成部分以水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、異丙醇 或這些溶劑的混合物或任何其他極性溶劑從所述吸附色譜介質(zhì)洗提出來；e、以一噴霧干燥機、真空烤箱、傳統(tǒng)烤箱、微波爐或冷凍干燥機使步驟d所得的富 化草藥液提取物變得干燥。
另外，本發(fā)明的第七個目的是使用所述組合物減少或避免哺乳類動物及家禽身上 的氧化應(yīng)激，其中包括使需要接受治療的主體服用一有效劑量的所述組合物。


圖1顯示通過H PLC識別出油棕櫚樹樹葉提取物中含有(-)_兒茶素沒食子酸酯。圖2顯示通過TLC識別出油棕櫚樹樹葉提取物中含有阿魏酸。圖3顯示通過HPLC識別出油棕櫚樹樹葉提取物中含有沒食子酸。圖4顯示通過HPLC確定油棕櫚樹樹葉提取物中㈠-兒茶素沒食子酸酯的含量。圖5顯示通過HPLC確定油棕櫚樹樹葉提取物中阿魏酸的含量。圖6顯示通過UV確定油棕櫚樹樹葉提取物中總酚酸含量。
具體實施例方式本發(fā)明涉及包括油棕櫚樹樹葉提取物的組合物，其特征在于所述提取物包括 (-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸。本發(fā)明的所述油棕櫚樹樹葉包括選自包括非洲油棕櫚樹或美洲油棕櫚樹的植物 屬油棕櫚樹的植物樹葉。本發(fā)明新穎的組合物包括重量比為大約0. 至大約95%的(-)_兒茶素沒食子 酸酯、重量比為大約0. 至大約95%的阿魏酸以及重量比為大約0. 至大約95%的總 酚酸，如沒食子酸和原兒茶酸。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述組合物包括重量比為大約0. 5%至大約10% 的(-)_兒茶素沒食子酸酯、重量比為大約至大約5%的阿魏酸以及重量比為大約5%至 大約30%的總酚酸，如沒食子酸和原兒茶酸。在本發(fā)明最優(yōu)選的實施例中，所述組合物包括重量比為大約0.5%的(-)_兒茶素 沒食子酸酯、重量比為大約的阿魏酸以及重量比為大約20%的總酚酸，如沒食子酸和 原兒茶酸。本發(fā)明亦涉及一種制備所述油棕櫚樹樹葉提取物的方法，其中的步驟包括a、通過將干油棕櫚樹樹葉或新鮮油棕櫚樹樹葉與水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、 氯仿、異丙醇或這些溶劑的混合物或任何其他極性溶劑混合，并以25°C至95°C的溫度加熱 0. 5至96小時，以從干油棕櫚樹樹葉或新鮮油棕櫚樹樹葉提取草藥液；b、過濾從步驟a所得的草藥液提取物；C、使步驟b所得的已過濾草藥液提取物與一吸附色譜介質(zhì)接觸，所述吸附色譜介 質(zhì)選擇性地吸附于含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶酸 的酚酸的組成部分，所述吸附介質(zhì)可以是吸附柱或任何其他吸附介質(zhì)；d、把步驟c所得的所述組成部分在大約10°C至大約80°C之間的溫度和大約0. 1 巴至大約10巴之間的壓力以水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、異丙醇或這些溶劑的混 合物或任何其他極性溶劑從所述吸附色譜介質(zhì)洗提出來，以獲得一富含(-)-兒茶素沒食 子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸的提取物；以及e、以一噴霧干燥機、真空烤箱、傳統(tǒng)烤箱、冷凍干燥機或任何其他干燥設(shè)備使步驟 4所得的富化草藥液提取物變得干燥。
在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施例中，通過將大約5份至大約50份而優(yōu)選為10份至大 約30份的溶劑和1份油棕櫚樹樹葉(按干物質(zhì)計算)在一提取儀器中混合一段優(yōu)選為大 約1小時至96小時而更優(yōu)選為8小時至M小時的時間，以進行提取。溶劑的溫度保持在 優(yōu)選為大約25°C至95°C，更優(yōu)選為大約50°C至60°C。在本發(fā)明進一步的實施例中，用作提取的溶劑優(yōu)選包括水、乙醇、異丙醇或這些溶 劑的混合物，更優(yōu)選為水、乙醇或水和乙醇的混合物，最優(yōu)選則是一種水分重量比為30%而 乙醇重量比為70%的混合物。在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施例中，吸附色譜介質(zhì)包括苯乙烯二乙烯苯共聚物樹脂、 酚醛樹脂、丙烯酸樹脂、甲基丙烯酸樹脂和聚酰胺樹脂。這樣的樹脂例子有美國費城的羅 門哈斯公司(Rohm & Haas Co.，)的產(chǎn)品 Amberlite XAD-I、Amberlite XAD-2、Amberlite XAD-4> Amberlite XAD-7> Amberlite XAD-8> Amberlite XAD-II> AmberliteXAD-12> Amberlite XAD-1180,Amberlite 7HP,Amberlite 761 和Duolite S861 ；日本東京的三菱化 工(Mitsubishi Chemical Industries Ltd.)的產(chǎn)品 Diaion HP-10、DiaionHP_20、Diaion HP-21、Diaion HP-30、Diaion HP-40和Diaion HP-50以及中國天津南開和成科技有限公 司的產(chǎn)品AB-8交聯(lián)聚苯乙烯樹脂和H103交聯(lián)聚苯乙烯樹脂。在本發(fā)明一更優(yōu)選的實施例中使用的樹脂是苯乙烯二乙烯苯共聚物樹脂，例如是 中國天津南開和成科技有限公司的產(chǎn)品AB-8交聯(lián)聚苯乙烯樹脂、美國費城的羅門哈斯公 司(Rohm&Haas Co·，)的產(chǎn)品 Amberlite XAD 1180、Amberlite 7HP 和 Amberlite 761。在本發(fā)明最優(yōu)選的實施例中使用的樹脂是由中國天津南開和成科技有限公司出 產(chǎn)，產(chǎn)品名為AB-8交聯(lián)聚苯乙烯樹脂的苯乙烯二乙烯苯共聚物樹脂。用作把富化的組成部分從吸附色譜介質(zhì)洗提出來的洗提制劑可以是水、乙醇、甲 醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、異丙醇或這些溶劑的混合物或熟悉有關(guān)技術(shù)的人員所知道的任 何其他極性溶劑。優(yōu)選的溶劑是水和乙醇的混合物，最優(yōu)選的則是30%乙醇的水溶劑。在本發(fā)明一個優(yōu)選的實施例中，干燥方法包括使用一噴霧干燥機、真空烤箱或傳 統(tǒng)烤箱，最優(yōu)選為使用一噴霧干燥機。本發(fā)明用來制備一油棕櫚樹樹葉提取物的設(shè)備本發(fā)明用來制備非洲油棕櫚樹和美洲油棕櫚樹提取物的系統(tǒng)包括草藥提取箱、 色譜吸附柱和干燥機。根據(jù)本發(fā)明的一方面，草藥提取箱設(shè)有蒸汽夾套和一高速攪拌機來攪拌草藥提取 箱的內(nèi)物。蒸汽經(jīng)過蒸汽夾套，把草藥提取箱的內(nèi)物加熱。油棕櫚樹樹葉與水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、異丙醇或這些溶劑的混 合物或熟悉有關(guān)技術(shù)的人員所知道的任何其他極性溶劑混合，然后以優(yōu)選范圍為25°C至 95°C的溫度在草藥提取箱加熱1至96小時。加熱的過程會產(chǎn)生一草藥液提取物，然后再把 其過濾以收集濾液。根據(jù)本發(fā)明的一方面，色譜吸附柱填入了色譜吸附樹脂，優(yōu)選為包括聚苯乙烯樹 脂。已過濾的草藥液提取物經(jīng)過色譜吸附柱，其中富含(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以 及例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸的組成部分會吸附于所述樹脂的表面，之后，所述含 有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸的富化組成部 分便會通過以水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、異丙醇或這些溶劑的混合物或任何其他極性溶劑對色譜吸附柱進行洗提而被洗提。最后，得出的富化草藥液組成部分通過使用 噴霧干燥機、真空烤箱、傳統(tǒng)烤箱、微波爐、冷凍干燥機或其他熟悉相關(guān)技術(shù)的人員所熟知 的干燥設(shè)備被干燥。識別本發(fā)明的油棕櫚樹樹葉提取物中是否含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸 和沒食子酸的定性試驗。一種通過使用高性能液體色譜法(HPLC)識別一油棕櫚樹樹葉提取物中是否含有 (-)_兒茶素沒食子酸酯的方法1、在Iml的0. 磷酸溶解Img的(_)_兒茶素沒食子酸酯參照標(biāo)準(zhǔn)，以制備一參 照標(biāo)準(zhǔn)溶液；2、把200mg的本發(fā)明提取物溶解于IOml的乙醇中，以制備一測試溶液；3、把上述兩種溶液根據(jù)以下條件分別注入一 HPLC系統(tǒng)中設(shè)備PerkinElmer 系列的 200LC ；色譜柱Sinochrom ODS-BP 色譜柱 (250mmX4.6mm內(nèi)徑，5μπι粒徑)；流動相(i)2% (ν/ν)醋酸和(ii)乙腈的混合物；溶劑 混合物起始為含有92%溶劑(i)和8%的溶劑(ii)，然后在50分鐘內(nèi)以線性梯度增加至含 有 31%溶劑(ii)；流速1. Oml/min ；檢測=UV 280nm從參照標(biāo)準(zhǔn)溶液和測試溶液得出的色譜在大約觀分鐘的保留時間顯示一與 (-)_兒茶素沒食子酸酯相應(yīng)的主高峰。該高峰證實本發(fā)明的組合物含有(-)_兒茶素沒食 子酸酯。一種通過使用薄層色譜分析法(TLC)識別一油棕櫚樹樹葉提取物中是否含有阿 魏酸的方法1、于HPLC級甲醇溶解本發(fā)明的提取物，以4000rpm離心15分鐘，收集上清液，以 制備樣本；2、樣本首先通過使用包括甲醇/水(比例7 1)混合物的一溶劑相與一已知份 量的阿魏酸參照標(biāo)準(zhǔn)一同散布于一預(yù)涂的硅膠60TLC板(Ε-Merck)上；3、TLC板被空氣干燥，然后于波長為2Mnm的紫外(UV)燈下顯影。在參照標(biāo)準(zhǔn)和樣本溶液均可見到相應(yīng)于阿魏酸的淺紫色主體區(qū)域。該淺紫色主體 區(qū)域證實本發(fā)明的組合物含有阿魏酸。一種使用HPLC識別一油棕櫚樹樹葉提取物中是否含有沒食子酸的方法1、在IOml的甲醇中溶解IOmg的沒食子酸參照標(biāo)準(zhǔn)，以制備一沒食子酸的參照標(biāo) 準(zhǔn)溶液；2、在IOml的甲醇中溶解200mg的本發(fā)明提取物，以制備一測試溶液；3、把上述兩種溶液根據(jù)以下條件分別注入一 H PLC系統(tǒng)中設(shè)備PerkinElmer 系列的 200LC ；色譜柱Hypersil BDS C18 色譜柱 Q50mm X 4. 6mm內(nèi)徑，5 μ m粒徑)；流動相甲醇/水/正磷酸QO 79. 9 0. 1)混合物；流速 1. Oml/min ；檢測UV 270nm從參照標(biāo)準(zhǔn)溶液和測試溶液得出的色譜在大約6. 6分鐘的保留時間顯示一與沒 食子酸相應(yīng)的主高峰。該高峰證實本發(fā)明的組合物含有沒食子酸。通過使用HPLC檢測法對本發(fā)明的油棕櫚樹樹葉提取物中(-)_兒茶素沒食子酸酯 和阿魏酸的定量確定。
一種通過使用HPLC的方法來對一油棕櫚樹樹葉提取物中(_)-兒茶素沒食子酸酯 的總含量作出定量確定1、在Iml的0. 磷酸中溶解Img的(_)_兒茶素沒食子酸酯參照標(biāo)準(zhǔn)，以制備一 (-)_兒茶素沒食子酸酯的參照標(biāo)準(zhǔn)溶液；2、在IOml的甲醇中溶解200mg的本發(fā)明提取物，以制備一測試溶液；3、把上述兩種溶液根據(jù)以下條件分別注入一 HPLC系統(tǒng)中設(shè)備PerkinElmer 系列的 200LC ；色譜柱Sinochrom ODS-BP 色譜柱 O50mmX4.6mm內(nèi)徑，5μπι粒徑)；流動相⑴2% (ν/ν)醋酸和(ii)乙腈的混合物；溶 劑混合物起始為含有92%溶劑(i)和8%溶劑(ii)，在50分鐘內(nèi)以線性梯度改變；流速 1. Oml/min ；檢測:UV 280nm ；進量20 μ L在大約28分鐘的保留時間從HPLC數(shù)據(jù)得到一(_)_兒茶素沒食子酸酯的高峰區(qū) 域。通過與(-)_兒茶素沒食子酸酯的參照標(biāo)準(zhǔn)溶液比較便得出在測試溶液中(-)_兒 茶素沒食子酸酯的含量。使用下述方程式計算在測試溶液中(-)_兒茶素沒食子酸酯含量百分比(％ )1000Crt/ffrs其中C =從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(mg/ml)計算出測試溶液的(_)_兒茶素沒食子酸酯濃度。W =制備測試溶液(mg)的樣本重量(mg)。rt =從測試溶液所得的(-)_兒茶素沒食子酸酯的高峰區(qū)域。rs =從參照標(biāo)準(zhǔn)溶液所得的(-)_兒茶素沒食子酸酯的高峰區(qū)域。一種通過使用HPLC的方法來對一油棕櫚樹樹葉提取物中阿魏酸的總含量作出定 量確定a、在70%的乙醇中溶解阿魏酸參照標(biāo)準(zhǔn)，以制備含有分別為0. 15mg/ml、0. 20mg/ ml、0. 25mg/ml和0. 5mg/ml四種已知的阿魏酸參照標(biāo)準(zhǔn)濃度的阿魏酸參照標(biāo)準(zhǔn)溶液；b、在IOml的70%乙醇中溶解IOmg的本發(fā)明油棕櫚樹樹葉提取物，以制備一測試 溶液；C、把上述兩種溶液根據(jù)以下條件分別注入一 HPLC系統(tǒng)中，以實施HPLC檢測法設(shè)備PerkinElmer 系列的 200LC ；色譜柱Hypersil BDS C18 色譜柱 (250mmX 4. 6mm內(nèi)徑，5 μ m粒徑)；流動相甲醇和0. 磷酸水溶液(30 70)混合物；流 速1. Oml/min ；檢測:UV 325nm ；進量:20μ L在大約28. 8分鐘的保留時間從HPLC數(shù)據(jù)得到一阿魏酸的高峰區(qū)域。通過與阿魏酸的參照標(biāo)準(zhǔn)溶液比較便得出在測試溶液中阿魏酸的含量。通過使用下述方程式計算在測試溶液中阿魏酸的含量百分比(％ )1000Crt/ffrs其中C =從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(mg/ml)計算出測試溶液的阿魏酸濃度。W =制備測試溶液(mg)的樣本重量(mg)。rt =從測試溶液所得的阿魏酸的高峰區(qū)域。
rs =從參照標(biāo)準(zhǔn)溶液所得的阿魏酸的高峰區(qū)域。使用紫外分光光度測量法對本發(fā)明的油棕櫚樹樹葉提取物中總酚酸的定量確定。一種對本發(fā)明一油棕櫚樹樹葉提取物中酚酸總含量作出定量確定的方法，其中包 括以下步驟a、在IOOml的HPLC級甲醇中溶解10. Omg的原兒茶酸參照標(biāo)準(zhǔn)，以制備一參照標(biāo) 準(zhǔn)溶液，而IOml的溶液根據(jù)1 9的比例與HPLC級甲醇稀釋；b、在IOml的70%乙醇中溶解IOmg的油棕櫚樹樹葉提取物，以制備一測試溶液；c、在IOml的純凈水中溶解90mg的鐵氰化鉀，以制備0. 9%鐵氰化鉀水溶液；d、在IOml的純凈水中溶解90mg的氯化鐵，以制備0. 9%氯化鐵水溶液；e、把9ml的0. 9%鐵氰化鉀水溶液和IOml的0. 9%氯化鐵水溶液混合，以制備顯 色劑。把所有溶液(標(biāo)準(zhǔn)溶液、測試溶液和空白溶液)放在黑房里等待5分鐘，然后使所 有溶液的容量中分別帶有0. IM HCl水溶液，再把它們充分混合，然后把它們放在黑房里等 待另外20分鐘，然后對照空白溶液量度標(biāo)準(zhǔn)和測試溶液在679nm之下的吸光率。以標(biāo)準(zhǔn)溶 液的濃度作為X軸以及吸光率作為Y軸來繪制標(biāo)準(zhǔn)定標(biāo)曲線，并從標(biāo)準(zhǔn)定標(biāo)曲線計算總酚 酸的濃度。通過使用下述方程式計算在測試溶液中總酚酸的含量百分比(％ )50,000C/W其中C =從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(mg/ml)計算出測試溶液的總酚酸濃度。W =制備測試溶液(mg)的樣本重量(mg)本發(fā)明亦包括一具治療作用的組合物，其包括根據(jù)本發(fā)明所制備的提取物，而組 合物的形式是茶、片劑、包衣片劑、錠劑、可咀嚼片劑、膠囊、軟膠囊、顆粒劑、包衣顆粒劑、粉 末、包衣粉末、溶液、糖漿、乳液、以及懸浮液，能幫助人類或低等動物減少或避免氧化應(yīng)激。另外，本發(fā)明亦包括一藥物組合物，其包括一所述提取物的有效劑量，例如Img至 800mg，更優(yōu)選為300mg至500mg，以及一藥物學(xué)上可接受的載體。本發(fā)明提供一藥物組合物，其包括所述新穎的提取物，并且配制成可以吞服給藥、 含服給藥、直腸給藥、透皮給藥或適合吸入或吹入(通過口或鼻)的給藥形式。所述藥物組合物若為口服，便可以通過傳統(tǒng)方法加上藥物學(xué)上可接受的賦形劑如 結(jié)合劑(例如預(yù)膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)、填料(例如乳糖、微 晶纖維素、淀粉或磷酸三鈣)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石或二氧化硅)、崩解劑(例如交 聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、交叉羧甲纖維素鈉或羥基乙酸淀粉鈉)或潤濕劑(例如十二烷基硫酸 鈉)把其配制成茶、片劑、包衣片劑、錠劑、可咀嚼片劑、膠囊、軟膠囊、顆粒劑、包衣顆粒劑、 粉末、溶液、糖漿、乳液或懸浮液等形式。片劑的包衣可由相關(guān)技術(shù)中公知的方法制造。若為口服液狀劑，其形式可以是例如溶液、糖漿、乳液或懸浮液，或配制成在使用 前加入水或其他合適媒介體的干料，該液狀劑可以通過傳統(tǒng)方法加上藥物學(xué)上可接受的添 加劑如懸浮劑(例如山梨糖醇糖漿、纖維素衍生物或氫化食用油脂)、乳化劑(例如卵磷脂 或刺槐)、非水媒介體(例如杏仁油、油酯化物、乙醇或分餾植物油)以及防腐劑(例如甲基 或丙基-對羥基苯甲酸酯或山梨酸)。液狀劑也可以按情況含有緩沖鹽、調(diào)味料、色素和甜味劑。口服藥劑可按情況配制成能夠控制或延長釋出本發(fā)明的提出物。若為含服，組合物便可按傳統(tǒng)方法配制成片劑或錠劑。本發(fā)明的藥物組合物可以配制成由鼻孔吹入以及口部吸入的方式給藥。所述給藥 方式的制劑種類的例子包括適用于吸入器或吹入器的噴霧和氣溶膠。外用透皮制劑可用任 何熟知相關(guān)技術(shù)的人員所公知的合適乳劑、軟膏或乳液基礎(chǔ)配方輔助制成。本發(fā)明的藥物組合物也可以是直腸配方如栓劑或停留灌腸劑，例如包括傳統(tǒng)的栓 劑基礎(chǔ)配方如可可油或其他油脂。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施例中，所述藥物組合物包括膠囊、軟膠囊或片劑，當(dāng)中含 有大約1 %至大約95%所述提取物以及大約至大約95%所述藥物學(xué)上可接受的載體。“藥物學(xué)上可接受的載體”在此處是指一種或超過一種相容的固體或液體填充稀 釋劑，或任何熟悉相關(guān)技術(shù)的人員所公知的藥物賦形劑。一些可以作為藥物學(xué)上可接受的載體的物質(zhì)的例子包括如乳糖、葡萄糖和蔗糖的 糖類、如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉的淀粉質(zhì)、如羧甲基纖維素鈉、醋酸纖維素和微晶纖維素的 纖維素衍生物。本發(fā)明的所述組合物供人類(體重約60kg)服用的建議劑量為0. Img至lg，例如 以干提取物的重量計算，每劑含Img至500mg的活性成分，而每一劑每天可服用1至4次， 其中的含量取決于服用方法，但視乎病者的年紀(jì)和體重以及其病況的嚴(yán)重性，劑量亦可能 需要作出經(jīng)常性調(diào)整，而且，劑量亦會取決于服用方法。病者的醫(yī)生或獸醫(yī)決定最終的精確 劑量以及服用方法。本發(fā)明所制備的提取物在活體外的測試模型中顯示其抗氧化功效和掃除自由基 的作用，并在活體內(nèi)的測試模型中顯示其抗氧化應(yīng)激作用。根據(jù)本發(fā)明的另一個實施例，所述提取物用作減少或避免在哺乳類動物及家禽身 上出現(xiàn)氧化應(yīng)激，方法是把一有效劑量的組合物給有需要作出這種治療的人或動物服用。以下列舉本發(fā)明制備的組合物的示例。對本發(fā)明的組合物所作的毒性測試，證實在斯普拉-道來氏(SD)大鼠身上，即使 每一公斤體重口服30g油棕櫚樹樹葉提取物，所述提取物仍沒有任何毒性。因此，對人類而言，即使是每公斤體重口服0. 03g油棕櫚樹樹葉提取物，仍然是合 適而且安全的。例子1制備油棕櫚樹樹葉提取物通過使用500ml的水/乙醇混合物(比例是3 7，以容量計)在大約60至65°C 并以大約60分鐘時間把大約50g的干油棕櫚樹樹葉提取出來。所得的漿狀物以兩層薄紗 布過濾，以得到大約502g的提取物原液。之后，對得出的提取物原液實施柱狀吸附色譜法。把一 Amberlite XAD I6HP (由羅門哈斯公司(Rohm&Haas)生產(chǎn))放入一色譜柱 (5. Ocm內(nèi)徑X40cm高)中，得出柱容量約780ml，然后使用4至5個柱容量單位的去離子 水沖洗所述色譜柱，再把前述提取步驟所得的提取物原液注入所述色譜柱。所述色譜柱首 先以1500ml的去離子水被洗提，以移除鹽分、糖分和其他無用的親水物質(zhì)。
接著，所述色譜柱以1500ml的水/異丙醇(比例3 7，以容量計)混合物和一不 變的流速25ml/min在60°C和0. 5巴至1巴的壓力下被洗提，得出一富含(_)_兒茶素沒食 子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸的純凈洗提液。得出的洗提液再于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器被濃縮至50ml而濃縮液則于真空烤箱以60°C干燥 8小時。得出的2. 52gm米黃色粉末成分如下(-)_兒茶素沒食子酸酯含量-1. 1% (根據(jù)HPLC檢測法)阿魏酸含量-1. 5% (根據(jù)HPLC檢測法)總酚酸含量-10. 52 % (根據(jù)紫外分光光度測量法)例子2制備油棕櫚樹樹葉提取物把IOOkg的新鮮油棕櫚樹樹葉切成每塊長2cm的細(xì)塊，然后把它們放進一提取箱， 加入1000公升的水/異丙基溶液混合物(比例3 7，以容量計)，再以60°C加熱8小時。通過使用一孔徑為10 μ m的濾芯過濾器過濾，將提取物原液與油棕櫚樹樹葉分 離。已過濾的液體以70°C和降低至0. 08-0. 09MPa的壓力被濃縮，以得出約200L的濃縮提 取液(密度=1. 10-1. 20g/cm3)。得出的濃縮提取液通過使用一 15cm直徑和150cm長的不銹鋼色譜柱實施柱狀吸 附色譜法。所述色譜柱放滿粒徑范圍由30至60網(wǎng)孔的聚酰胺樹脂。之后，先以200L的去離子水沖洗所述色譜柱，再以200L的水/異丙基溶液(比例 3 7，以容量計)混合物和一不變的流速1. 5L/min在大約20至30°C和大約0. 5巴至1巴 的壓力下洗提，得出一富含(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶 酸的酚酸的純凈洗提液。得出的洗提液再以一噴霧干燥機以噴霧干燥。噴霧干燥機的入口 溫度設(shè)定為大約170°C至大約180°C，其出口溫度設(shè)定為大約100°C至大約105°C。得出的12. 5kg米黃色粉末成分如下(-)_兒茶素沒食子酸酯含量-1. 15% (根據(jù)HPLC檢測法)阿魏酸含量-1. 6% (根據(jù)HPLC檢測法)總酚酸含量-10. 5% (根據(jù)紫外分光光度測量法)通過定性和定量分析對本發(fā)明的組合物所作的特征描述確定本發(fā)明的組合物中是否含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸和沒食子酸的 定性分析方法是下述的薄層色譜分析法(TLC)和高性能液體色譜法(HPLC)例子3以HPLC識別油棕櫚樹樹葉提取物中的(-)_兒茶素沒食子酸酯在Iml的0. 磷酸溶解Img的(_)_兒茶素沒食子酸酯參照標(biāo)準(zhǔn)，以得出一參照 標(biāo)準(zhǔn)溶液。與此同時，把200mg準(zhǔn)備進行分析的提取物溶解于Oml的乙醇中，為例子1所得的 本發(fā)明提取物制備一測試溶液。把上述兩種溶液根據(jù)以下條件分別注入一 HPLC系統(tǒng)中設(shè)備PerkinElmer 系列的 200LC ；色譜柱Sinochrom ODS-BP 色譜柱 (250mmX4.6mm內(nèi)徑，5μπι粒徑)；流動相(i)2% (ν/ν)醋酸和(ii)乙腈的混合物；溶劑混合物起始為含有92%溶劑(i)和8%的溶劑(ii)，然后在50分鐘內(nèi)以線性梯度增加至含 有 31%溶劑(ii)；流速1. Oml/min ；檢測=UV 280nm從參照標(biāo)準(zhǔn)溶液和測試溶液得出的色譜在大約觀分鐘的保留時間顯示一與 (-)_兒茶素沒食子酸酯相應(yīng)的主高峰。該高峰證實本發(fā)明的組合物含有(-)_兒茶素沒食 子酸酯(見圖1)。例子 4以TLC識別油棕櫚樹樹葉提取物中的阿魏酸把例子1所得的油棕櫚樹樹葉提取粉溶解于HPLC級甲醇，以4000rpm離心15分 鐘，收集上清液。樣本首先通過使用包括甲醇/水(比例7 1)混合物的一溶劑相與一已 知份量的阿魏酸參照標(biāo)準(zhǔn)一同散布于一預(yù)涂的硅膠60TLC板(Ε-Merck)上。TLC板被空氣干燥，然后于波長為2Mnm的紫外(UV)燈下顯影。在參照標(biāo)準(zhǔn)溶液 和測試溶液均可見到相對于阿魏酸的淺紫色主體區(qū)域(見圖2)。例子 5以HPLC識別油棕櫚樹樹葉提取物中的沒食子酸在IOml的甲醇中溶解IOmg的沒食子酸參照標(biāo)準(zhǔn)，以得出參照標(biāo)準(zhǔn)溶液。與此同時，把200mg準(zhǔn)備進行分析的提取物溶解于IOml的甲醇中，為例子1所得 的本發(fā)明提取物制備一測試溶液。把上述兩種溶液根據(jù)以下條件分別注入一 HPLC系統(tǒng)中設(shè)備PerkinElmer 系列的 200LC ；色譜柱Hypersil BDS C18 色譜柱 O50mmX4. 6mm內(nèi)徑，5μπι粒徑)；流動相甲醇/水/正磷酸混合物QO 79. 9 0.1)； 流速1. Oml/min ；檢測UV 270nm從參照標(biāo)準(zhǔn)溶液和測試溶液得出的色譜在大約6. 6分鐘的保留時間顯示一與沒 食子酸相應(yīng)的主高峰。該高峰證實本發(fā)明的組合物含有沒食子酸(見圖3)。本發(fā)明通過以下的HPLC方法對本發(fā)明的組合物中所含的(_)-兒茶素沒食子酸酯 和阿魏酸進行定量分析例子6以HPLC對油棕櫚樹樹葉提取物中的(_)-兒茶素沒食子酸酯進行定量檢測通過使用HPLC方法來確定例子1所得的油棕櫚樹樹葉提取物中(_)-兒茶素沒食
子酸酯的含量。在Iml的0. 磷酸中溶解Img的(_)_兒茶素沒食子酸酯參照標(biāo)準(zhǔn)，以得出參照 標(biāo)準(zhǔn)溶液。與此同時，把200mg準(zhǔn)備進行分析的提取物溶解于IOml的甲醇中，為例子1所得 的本發(fā)明提取物制備一測試溶液。把上述兩種溶液根據(jù)以下條件分別注入一 HPLC系統(tǒng)中，以實施HPLC檢測法設(shè)備PerkinElmer 系列的 200LC ；色譜柱Sinochrom ODS-BP 色譜柱 O50mmX4.6mm內(nèi)徑，5μπι粒徑)；流動相⑴2% (ν/ν)醋酸和(ii)乙腈的混合物；溶 劑混合物起始為含有92%溶劑(i)和8%溶劑(ii)，在50分鐘內(nèi)以線性梯度改變；流速 1. Oml/min ；檢測:UV 280nm ；進量20 μ L在大約觀分鐘的保留時間從HPLC數(shù)據(jù)得到一(_)-兒茶素沒食子酸酯的高峰區(qū)域(見圖4)。通過與(-)_兒茶素沒食子酸酯的參照標(biāo)準(zhǔn)溶液比較便得出在測試溶液中(-)_兒 茶素沒食子酸酯的含量。通過使用下述方程式便可計算在測試溶液中(-)_兒茶素沒食子酸酯的含量百分 比(％ )1000Crt/ffrs其中C =從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(mg/ml)計算出測試溶液的(_)_兒茶素沒食子酸酯濃度。W =制備測試溶液(mg)的樣本重量(mg)。rt =從測試溶液所得的(-)_兒茶素沒食子酸酯的高峰區(qū)域。rs =從參照標(biāo)準(zhǔn)溶液所得的(-)_兒茶素沒食子酸酯的高峰區(qū)域。(-)-兒茶素沒食子酸酯含量-1.1 % (根據(jù)HPLC檢測法)HPLC檢測法顯示從例子1所得的組合物其(_)_兒茶素沒食子酸酯含量為1.1%。例子7以HPLC對油棕櫚樹樹葉提取物中的阿魏酸進行定量檢測通過使用HPLC方法來確定例子1所得的油棕櫚樹樹葉提取物中阿魏酸的含量。在70%的乙醇中溶解阿魏酸參照標(biāo)準(zhǔn)，以制備含有分別為0. 15mg/ml、0. 20mg/ ml、0. 25mg/ml和0. 5mg/ml四種已知的阿魏酸參照標(biāo)準(zhǔn)濃度的阿魏酸參照標(biāo)準(zhǔn)溶液。與此同時，把IOmg準(zhǔn)備進行分析的提取物溶解于IOml的70%乙醇中，為例子1所 得的本發(fā)明提取物制備一測試溶液。把上述兩種溶液根據(jù)以下條件分別注入一 HPLC系統(tǒng)中，以對兩種溶液實施HPLC 檢測法設(shè)備PerkinElmer 系列的 200LC ；色譜柱Hypersil BDS C18 色譜柱 Q50mm X4.6mm內(nèi)徑，5μπι粒徑)；流動相甲醇和0. 1 %磷酸水溶液混合物(30 70)；流速 1. Oml/min ；檢測:UV 325nm ；進量20 μ L在大約28. 8分鐘的保留時間從HPLC數(shù)據(jù)得到一阿魏酸的高峰區(qū)域(見圖5)。通過與阿魏酸的參照標(biāo)準(zhǔn)溶液比較便得出在測試溶液中阿魏酸的含量。通過下述方程式便可以計算在測試溶液中阿魏酸的含量百分比(％ )1000Crt/ffrs其中C =從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(mg/ml)計算出測試溶液需要的阿魏酸濃度。W =制備測試溶液(mg)的樣本重量(mg)。rt =從測試溶液所得的阿魏酸的高峰區(qū)域。rs =從參照標(biāo)準(zhǔn)溶液所得的阿魏酸的高峰區(qū)域。阿魏酸含量-1. 5% (根據(jù)HPLC檢測法)HPLC檢測法顯示從例子1所得的組合物的阿魏酸含量為1.5%。例子8以紫外光對油棕櫚樹樹葉提取物中的總酚酸進行定量檢測通過使用紫外分光光度測量法來確定例子1所得的油棕櫚樹樹葉提取物中總酚酸的含量。在IOOml的HPLC級甲醇中溶解IOmg的原兒茶酸參照標(biāo)準(zhǔn)，得出參照標(biāo)準(zhǔn)溶液，而 IOml的溶液根據(jù)1 9的比例與HPLC級甲醇稀釋。不同含量的標(biāo)準(zhǔn)溶液和Iml的甲醇(作為空白溶液)用移液管分別移至不同 的25ml量瓶中，并于每量瓶中加入5. Oml的無水乙醇、2ml的3%十二烷基硫酸鈉溶液和 1. Oml的顯色劑(0. 9%鐵氰化鉀溶液0. 9%氯化鐵溶液(0. 9 1))。把標(biāo)準(zhǔn)溶液和空白溶液放在黑房里等待5分鐘，然后使每一量瓶的容量都分別帶 有0. IM HC1，再把它們充分混合，然后把它們放在黑房里等待另外20分鐘。之后，對照空白溶液量度標(biāo)準(zhǔn)溶液的在679nm之下吸光率，并以標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度 作為X軸以及吸光率作為Y軸來繪制標(biāo)準(zhǔn)定標(biāo)曲線。根據(jù)紫外分光光度測量法而進行的檢測法把組合物溶解于IOml的70%乙醇水 溶液中，再把0. 05ml的溶液用移液管移至一量瓶，而測試溶液的制備方法和上述的方法相 同。在波長679nm之下得出油棕櫚樹樹葉提取物中總酚酸的吸光率(見圖6)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)定標(biāo)曲線計算出標(biāo)準(zhǔn)定標(biāo)曲線中總酚酸的濃度。通過使用下述方程式計算在測試溶液中總酚酸的含量百分比(％ )50，000C/W其中C =從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線(mg/ml)計算出測試溶液的總酚酸濃度。W =制備測試溶液(mg)的樣本重量(mg)紫外分光光度測量法顯示從例子1所得的組合物的總酚酸含量為10. 2%。例子9以活體外和活體內(nèi)測試模型確定本發(fā)明組合物的抗氧化作用本發(fā)明組合物通過以下活體外和活體內(nèi)測試模型而確定其抗氧化作用本發(fā)明組合物的DPPH自由基掃除作用例子1所得的本發(fā)明組合物在檢測波長517nm下以1，1_ 二苯基_2_苦基苯胼 (DPPH)比色法確定其DPPH自由基掃除作用。當(dāng)DPPH的顏色從紫色變黃色，吸光率便下降， 并藉此評估DPPH自由基掃除作用。把IOmg從上述例子1所得的樣本粉末溶解于5ml的無水乙醇以作為樣本溶液，并 于乙醇內(nèi)制備0. 2mmol/L的DPPH溶液。把Iml的DPPH溶液添加至細(xì)1的樣本溶液，然后 把樣本溶液放于黑房中等待30分鐘。樣本溶液在波長517nm之下量度其吸光率。反應(yīng)混 合物的吸光率較低則表示較高的自由基掃除作用。二丁基羥基甲苯(BHA)是對照物。樣本 所使用的濃度越高，自由基掃除作用便越強。結(jié)果顯示本發(fā)明的組合物相比所使用的BHA 有更強的抗氧化作用。
權(quán)利要求
1. 一種包括一油棕櫚樹樹葉提取物的組合物，其特征在于所述提取物包括(-)-兒茶 素沒食子酸酯、阿魏酸和例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于所述油棕櫚樹樹葉選自包括非洲油棕 櫚樹和美洲油棕櫚樹的植物屬油棕櫚樹。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于其中所含的所述(-)_兒茶素沒食 子酸酯重量比為0. 至95%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于其中所含的所述阿魏酸重量比為 0. 至 95%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于所述酚酸是沒食子酸。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2或5任何一項所述的組合物，其特征在于其中所含的酚酸重量 比為0. 至95%。
7.一種制備一油棕櫚樹樹葉提取物的方法，其中所述的提取物含有(-)_兒茶素沒食 子酸酯、阿魏酸和例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸；所述方法包括以下步驟a、通過將干油棕櫚樹樹葉或新鮮油棕櫚樹樹葉與水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯 仿、異丙醇或這些溶劑的混合物或任何其他極性溶劑混合，并以25°C至95°C的溫度加熱 0. 5至96小時，以從干油棕櫚樹樹葉或新鮮油棕櫚樹樹葉提取草藥液；b、過濾從步驟a所得的草藥液提取物；c、使步驟b所得的已過濾草藥液提取物與一吸附色譜介質(zhì)接觸，所述吸附色譜介質(zhì)選 擇性地吸附于含有(-)_兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚 酸的組成部分，所述吸附介質(zhì)可以是吸附柱或任何其他吸附介質(zhì)；d、把步驟c所得的所述組成部分以水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、異丙醇或這 些溶劑的混合物或任何其他極性溶劑從所述吸附色譜介質(zhì)洗提出來；e、以一噴霧干燥機、真空烤箱、傳統(tǒng)烤箱、微波爐或冷凍干燥機使步驟d所得的富化草 藥液提取物變得干燥。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法所制備的一種油棕櫚樹樹葉提取物，其含有(-)_兒茶素 沒食子酸酯、阿魏酸以及例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述提取物提取自非洲油棕櫚樹的樹葉。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述溶劑包括水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸 乙酯、甲類酒精、氯仿以及其混合物中至少一種。
11.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述分離介質(zhì)包括一聚合物色譜柱。
12.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述分離介質(zhì)包括一合成聚合物樹脂。
13.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述聚合物樹脂為聚苯乙烯。
14.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于其中所述的干燥步驟包括噴霧干燥。
15.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于其中所述的洗提劑包括水、甲醇、乙醇、 丙酮、乙酸乙酯、甲類酒精、氯仿以及其混合物中至少一種。
16.根據(jù)權(quán)利要求1至6任何一項所述具治療作用的組合物，其特征在于所述組合 物的形態(tài)為茶、片劑、包衣片劑、錠劑、可咀嚼片劑、膠囊、軟膠膠囊、顆粒劑、包衣顆粒劑、粉 末、溶液、糖漿、乳液或懸浮液。
17.一種藥物學(xué)組合物，其包括根據(jù)權(quán)利要求1至6任何一項所述的組合物的有效劑量和一藥物學(xué)可接受的載體。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的藥物學(xué)組合物，其特征在于所述藥物學(xué)可接受的載體可 以是穩(wěn)定劑、載體、增充劑以及其他合適的物質(zhì)。
19.根據(jù)權(quán)利要求1至6以及16至18中任何一項所述的藥物學(xué)組合物，其特征在于 所述提取物的含量為Img至SOOmg。
20.根據(jù)權(quán)利要求1至6以及16至18中任何一項所述的藥物學(xué)組合物，其特征在于 所述提取物優(yōu)選的含量為300mg至500mg。
21.權(quán)利要求1至6以及16至20所述的組合物用作減少或避免哺乳類動物和家禽身上 的氧化應(yīng)激的用途，其中包括使需要接受這種治療的主體服用一有效劑量的所述組合物。
22.權(quán)利要求1至6以及16至20所述的組合物的用途，其特征在于所述哺乳類動物 為人類。
23.權(quán)利要求1至6以及16至20所述的組合物的用途，其特征在于所述哺乳類動物 為母牛、水牛、山羊、綿羊或任何其他哺乳類動物。
24.權(quán)利要求1至6以及16至20所述的組合物的用途，其特征在于所述家禽是鵝、 雞、鴨、火雞、鴿子或任何其他家禽。
全文摘要
一種包含油棕櫚樹樹葉提取物的組合物，其特征在于所述提取物包括(-)-兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸和例如是沒食子酸和原兒茶酸的酚酸；一種制備所述提取物的方法，其中的步驟包括(a)通過一溶劑對干或新鮮的油棕櫚樹樹葉進行提取；(b)過濾步驟(a)所得的提取物；(c)使步驟(b)所得的已過濾提取物與一色譜介質(zhì)接觸，而所述色譜介質(zhì)選擇性地吸附于含有(-)-兒茶素沒食子酸酯、阿魏酸和酚酸的組成部分；(d)使用一溶劑把所述組成部分從所述色譜介質(zhì)中洗提出來；(e)對步驟(d)所得的已洗提組成部分進行干燥處理。此外，本發(fā)明的權(quán)利要求也包括使用所述組合物來減少或避免哺乳類動物及家禽身上的氧化應(yīng)激。
文檔編號A61P9/10GK102123720SQ200980116017
公開日2011年7月13日 申請日期2009年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月6日
發(fā)明者彭宜零, 林彩君, 桑基莎·瑟拉斯南, 沙爾哈爾弗薩·謝里夫, 穆罕默德·法魯斯·優(yōu)思明·阿卜杜勒哈立德, 西蒂阿斯瑪·漢巴里 申請人:諾華制藥有限公司