一種大黃丹參提取物的指紋圖譜的鑒別方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了大黃丹參提取物的指紋圖譜鑒別方法，包括供試品溶液的制備、指紋圖譜的測定、對照指紋圖譜的確定和大黃丹參提取物指紋圖譜的鑒別。通過對大黃丹參提取物進行高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜測定和分析，確定了9個大黃丹參提取物的特征峰，這些共有特征峰構(gòu)成了大黃丹參提取物的指紋特征，可作為大黃丹參提取物的對照指紋圖譜；對需要鑒別的大黃丹參提取物可以與對照指紋圖譜進行比對，檢查共有特征峰的情況，以鑒別質(zhì)量。本發(fā)明具有方法簡便、重現(xiàn)性好、特征峰明顯、準確可靠等特點，有利于鑒別大黃丹參提取物的質(zhì)量。
【專利說明】一種大黃丹參提取物的指紋圖譜的鑒別方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種大黃丹參提取物指紋圖譜的鑒別方法，具體地說是用高效液相色譜指紋圖譜法來對大黃丹參提取物的有效成分進行質(zhì)量控制的一種鑒別方法。
【背景技術(shù)】
[0002]大黃具有攻積滯、清濕熱、瀉火、涼血、祛瘀、解毒等功效，為《中華人民共和國藥典2010版》一部收載品種。大黃為寥科植物掌葉大黃Rheum palmatum, L.、唐古特大黃Rheumtanguticum / Maxim, ex Balf.或藥用大黃 Rheumoj-fIcinaleBaill.的干燥根和根莖。大黃藥材中的主要成分是蒽醌苷及雙蒽酮苷，其醌苷有:大黃酚-1-葡萄糖苷或大黃酚苷、大黃素-6-葡萄糖苷、蘆薈大黃素-8-葡萄糖苷、大黃素甲醚葡萄糖苷、大黃酸-8-葡萄糖苷；掌葉大黃中還含有大黃素雙葡萄糖苷、蘆薈大黃素雙葡萄糖苷、大黃酚雙葡萄糖苷。雙蒽酮苷有番瀉苷A、B、C、D、E、F。游離型蒽醌類主要有:大黃酚、大黃素、大黃素甲醚、蘆薈大黃素、大黃酸。大黃又含有大黃鞣酸及其相關(guān)物質(zhì)，如沒食子酸、兒茶素、大黃四聚素。此外，大黃尚含有脂肪酸、草酸鈣、葡萄糖、果糖和淀粉。目前大黃藥材的質(zhì)量控制方法主要有:以蘆薈大黃素(C15HltlO5)、大黃酸(C15H8O6)、大黃素(C15HltlO5)、大黃酚(C10H10O4)和大黃素甲醚(C16H12O5)的總量測定作為含量測定方法《中華人民共和國藥典2010版一部》；丹參主要含結(jié)晶性菲醌類化合物:丹參酮1、IIA、IIB，異丹參酮1、異丹參酮II，隱丹參酮，異隱丹參酮、羥基丹參酮IIA、丹參新酮、左旋二氫丹參酮1、丹參酚等。此外，尚含原兒茶醛、原兒茶酸、琥珀酸、熊果酸、乳酸、維生素E等。目前丹參藥材的質(zhì)量控制方法主要有:以丹參酮II A(C19H18O3)、丹酚酸B(C36H3tlO16)的含量測定作為含量測定方法《中華人民共和國藥典2010版一部》；楊樹聲采用HPLC法同時測定丹參類藥材中水溶性活性成分的含量(甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008年06期);王偉采用反相高效液相色譜法同時測定丹參藥材中丹參素(I )、迷迭香酸(II )、紫草酸(III)、丹酚酸B (IV)的含量(安徽醫(yī)藥，Anhui Medicaland Pharmaceutical Journal, 2010年11期);宋潔瑾通過建立丹參藥材的指紋圖譜，對不同產(chǎn)地丹參藥材質(zhì)量進行評價(遼寧中醫(yī)雜志，2008年03期)。
[0003]中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當處理后，采用一定的分析手段，得到的能夠標示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建立在中藥化學(xué)成分系統(tǒng)研究的基礎(chǔ)上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質(zhì)量的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性?！罢w性”和“模糊性”為其顯著特點。中國食品藥品監(jiān)督管理局于2000年頒布了《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)》，要求中藥注射劑必須進行指紋圖譜的研究，并建立其相關(guān)的標準。規(guī)范了中藥指紋圖譜的研究，從而掀起了國內(nèi)近幾年來對指紋圖譜的研究熱潮。目前，采用指紋圖譜技術(shù)除了能反映幾乎全部成分的含量、種類外，尚能反映成分的比例、未知成分(含量測定方法中可能已被作為無效或干擾成分扣除)的產(chǎn)生，更多的是從藥物穩(wěn)定性、安全性上進行監(jiān)測。目前中藥提取物產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，但其質(zhì)量控制技術(shù)水平不高，對質(zhì)量控制較成熟的方法有單個成分含量測定或一類成分如總皂苷、總黃酮等的紫外分光光度測定法，不能對提取物進行全面直觀的質(zhì)量控制。本發(fā)明通過指紋圖譜技術(shù)對大黃丹參提取物種的化學(xué)成分進行整體控制和綜合評價，能夠有效的鑒別大黃丹參提取物的質(zhì)量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種大黃丹參提取物的指紋圖譜鑒別方法，通過指紋圖譜測定對大黃丹參提取物進行全面而有效的鑒別。
[0005]大黃丹參提取物的制備方法:
以大黃、丹參為原料，兩味藥材以重量份計為:大黃70-150g，丹參60-120g。取大黃、丹參,混合,加水煎煮,煎液濃縮后加乙醇沉淀,吸取上清液，回收乙醇,再加入明膠溶液靜置除鞣質(zhì)，將除鞣質(zhì)后的上清液制成。
[0006]本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的。
本發(fā)明大黃丹參提取物的指紋圖譜鑒別方法，該方法包括如下步驟:
(a)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈或甲醇、乙腈甲醇混合溶劑為流動相A，以甲酸水溶液或冰醋酸水溶液、磷酸水溶液、三氟乙酸水溶液為流動相B。檢測器為紫外檢測器、示差檢測器或蒸發(fā)光檢測器；
(b)精密吸取供試品溶液至量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，收取濾液，備用。
[0007](C)測定法吸取供試品溶液適量，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，即得。
[0008]進一步優(yōu)選的測定條件為:
(a)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(柱長l(T25cm，內(nèi)徑3~5cm，粒徑為f 10 μ m);以乙腈為流動相A，以0.0f 2%冰醋酸水溶液為流動相B ;紫外檢測器，檢測波長20(T400nm ;柱溫2(T50°C，流速為每分鐘0.2~2ml。
[0009](b)供試品溶液的制備精密吸取大黃丹參提取物供試品溶液0.5~Iml至10~20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。用微孔濾膜0.22~0.45 μ m濾過，收取濾液，備用。
[0010](c)測定法吸取供試品溶液5~40 μ 1，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，SP得。
[0011]最佳測定條件:
(a)色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，色譜柱柱長為25cm,內(nèi)徑為4.6mm,粒徑為5 μ m ;以乙腈為流動相A，以0.3%冰醋酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；檢測波長為280nm ;柱溫25°C ;流速為每分鐘0.9ml。
【權(quán)利要求】
1.大黃丹參提取物的指紋圖譜鑒別方法，其特征在于包括以下步驟: (O大黃丹參提取物的制備方法: 以大黃、丹參為原料，兩味藥材以重量份計為:大黃70-150g，丹參60-120g ;取大黃、丹參,混合,加水煎煮,煎液濃縮后加乙醇沉淀,吸取上清液，回收乙醇,再加入明膠溶液靜置除鞣質(zhì)，將除鞣質(zhì)后的上清液制成； (2)供試品溶液的制備:精密吸取大黃丹參提取物供試品溶液0.5?Iml至10?20ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜0.22?0.45 μ m濾過，收取濾液，備用； (3)指紋圖譜測定:取供試品溶液適量，注入高效液相色譜儀，記錄75分鐘以內(nèi)的色譜圖，得到由其共有特征峰構(gòu)成的大黃丹參提取物對照高效液相指紋圖譜；其中高效液相色譜分析的條件如下:用十八烷基鍵合硅膠為填充劑；A g i I e n tZorbax Eclipse XDB C18色譜柱4.6X250mm ；乙臆-0.01-2%冰醋酸為流動相梯度洗脫，梯度程序為:0min — 5min — 30min — 45min — 60min — 62min — 75min對應(yīng)流動相:乙腈:2% — 7% — 15% — 20% — 35% — 50% — 50% ；0.01-2% 冰醋酸:98% — 93% — 85% — 80% — 65% — 50% — 50%,檢測波長為 200nm_400nm ;流速為 0.2ml/min-2ml/min ;柱溫為20°C -50°C ;所得到的大黃丹參提取物的對照指紋圖譜有9個共有特征峰，其相對保留時間分別為:1號峰:0.13，2號峰:0.18，3號峰:0.29，4號峰:0.66，5號峰:0.86，6 號峰:0.93，7 號峰:0.97，8 號峰(S):1.00,9 號峰:1.01。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大黃丹參提取物的指紋圖譜鑒別方法，其特征在于:其中所述的檢測波長為280nm ;流速為0.9ml/min ;柱溫為25°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的大黃丹參提取物的指紋圖譜鑒別方法，其特征在于:其中的流動相乙腈-0.01-2%冰醋酸用乙腈-0.03%磷酸溶液或乙腈-0.03%甲酸溶液代替。
【文檔編號】G01N30/06GK103969353SQ201310040433
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2013年2月2日 優(yōu)先權(quán)日:2013年2月2日
【發(fā)明者】果德安, 吳婉瑩, 趙丙賢, 呂延英, 劉蓉霞, 姚帥, 王俊平, 趙興, 蔡錄影, 王丹丹, 侯晉軍, 笪娟 申請人:西安世紀盛康藥業(yè)有限公司