專利名稱：：一種惡性淋巴瘤放射性靶向分子顯像劑或/和靶向治療劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種放射性靶向分子顯像劑和/或放射性靶向治療新藥，特別是一種放射性核素標(biāo)記的小分子肽腫瘤靶向分子顯像劑和/或治療新藥及其制備方法和在腫瘤靶向分子診斷和/或靶向治療方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：目前，基于抗體的靶向治療獲得空前成功。美國(guó)FDA已批準(zhǔn)22個(gè)單克隆抗體(monoclonalantibody,mAb)應(yīng)用于臨床，數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體正用于治療包括癌癥、免疫系統(tǒng)疾病和感染性疾病的臨床前研究。排前五位的治療抗體(Rituxan、Remicade、Here印tin、Humira和Avastin)的收入已從2004年的64億美元上升到2006年的117億美元，翻了近一番。這些治療和商業(yè)成功反映過去三十年抗體工程在制備安全、特異性、高親和力及無免疫原性抗體方面所取得的重大進(jìn)展，因此，研究基于抗體的靶向治療藥物的前景已被人們充分認(rèn)識(shí)到[1]。HodgkinIymphoma(HL)禾口non—Hodgkinlymphoma(NHL)白勺臨床分類隨著人們?cè)趯?duì)淋巴瘤發(fā)病機(jī)制與其區(qū)分免疫表型、基因型、臨床和病理特點(diǎn)之間的關(guān)系的理解方面所取得的進(jìn)展而有所變化。這些進(jìn)展使得通過更有效地選擇并組合化療、放射治療和生物治療等多種手段，降低傳統(tǒng)療法的長(zhǎng)期毒性而不犧牲效能，從而顯著改善患者的生存狀況。然而，淋巴瘤的成功治療取決于早期對(duì)患者進(jìn)行準(zhǔn)確的分期和預(yù)后評(píng)估，以及選取并實(shí)施某種治療方案后，應(yīng)該盡早評(píng)價(jià)患者對(duì)該治療方案的反應(yīng)，便于識(shí)別患者對(duì)治療是否有效，并對(duì)治療無效者及時(shí)調(diào)整治療方案，即個(gè)體化診療。因此，研發(fā)高敏感性和高特異性的顯像方法對(duì)HL/NHL患者的治療尤為重要。Epstein-Barr病毒(EB病毒)是第一種被確認(rèn)可引起人體惡性腫瘤的病毒，其所致非洲兒童惡性淋巴瘤、Hodgkin’s淋巴瘤和鼻咽癌以及近年來發(fā)現(xiàn)部分AIDS病人所患肉瘤的腫瘤細(xì)胞表面均帶有特異性EB病毒表面抗原gp350/220。因此，可以認(rèn)為EB病毒表面抗原gp350/220就是該類腫瘤細(xì)胞的一種特異性標(biāo)志物[2-4]，針對(duì)此特異性標(biāo)志物，可設(shè)計(jì)基于“抗原_抗體”結(jié)合反應(yīng)模式的抗體或抗體片段替代物，研制一系列放射免疫顯像或放射免疫治療的放射性新藥用于EB病毒表面抗原gp350/220陽(yáng)性腫瘤(包括淋巴瘤)的核醫(yī)學(xué)分子顯像及放射性靶向治療。理想狀態(tài)下，靶向分子顯像劑或放射性內(nèi)照射靶向治療藥物首先應(yīng)在腫瘤靶組織有高度濃聚，并且未與腫瘤結(jié)合部分能從正常組織及血液循環(huán)中快速清除。雖然全抗體在血液循環(huán)中可長(zhǎng)時(shí)間滯留(13周)，有充裕的時(shí)間與腫瘤接觸，但其分子量大，腫瘤穿透力差，且未結(jié)合部分從正常組織及血液循環(huán)中清除需要數(shù)天才能降至正常本底水平，從而造成正常組織不必要的輻射損傷，這些缺點(diǎn)都決定了全抗體不是用放射性核素標(biāo)記的理想靶向分子顯像劑或放射性內(nèi)照射靶向治療藥物。因此，抗體的研究經(jīng)歷了多克隆抗體、單克隆抗體、單克隆抗體片段包括單鏈抗體片段(Singlechainvariablefragments,ScFv)、抗原結(jié)合片段(antigen-bindingfragment,Fab)等“減少分子量”的多個(gè)階段，目前已經(jīng)跨入基因水平操作抗體變構(gòu)體的階段，其主要目的是為了克服分子量大、腫瘤穿透力差等缺陷，提高對(duì)腫瘤的穿透力。目前，臨床上用于淋巴瘤患者的功能分子顯像方法主要有67Ga-枸櫞酸SPECT顯像和18FDGPET/CT顯像，但67Ga-枸櫞酸和18FDG都不是淋巴瘤特異性顯像劑，它們同時(shí)也可用于炎癥顯像，因而特異性降低。放射免疫顯像或治療有關(guān)抗體變構(gòu)體的研究集中在設(shè)計(jì)分子量為2030kDa的抗體變構(gòu)物，但肝臟攝取較多，血本底高為其主要缺點(diǎn)。如國(guó)外有專利文獻(xiàn)報(bào)道了抗CD137抗體、IRTA2抗體、抗CD22抗體、抗CD20抗體等抗體與放射性核素嵌合用于惡性淋巴瘤診治的研究[4-9]，但其所用抗體或抗體片段的分子量都大于20kDa甚或達(dá)數(shù)萬kDa。從理論上說，完美的放射性顯像或治療藥物在靜脈給藥后，將經(jīng)血液循環(huán)到達(dá)靶細(xì)胞，并通過理想的分子通路只與靶分子發(fā)生特異性結(jié)合。而任何沒有達(dá)到靶細(xì)胞或沒有與靶分子結(jié)合的放射性藥物都將盡快被排出體外，從而使生物體內(nèi)只在靶點(diǎn)有放射性藥物聚集。因此，放射性顯像劑或治療藥物設(shè)計(jì)的目標(biāo)要盡可能接近這種理想狀況。然而，要達(dá)到這個(gè)目標(biāo)卻面臨諸多困難。首先，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，腎臟對(duì)抗體片段多肽的清除閾值分子量介于60kDaSOkDa之間。分子量<腎臟清除閾值(60_kDa)的抗體片斷雖然比全抗體有更好的腫瘤穿透性，但由于肽類藥物與腫瘤靶分子“受體”(抗原)的結(jié)合需要一定時(shí)間，若清除過快，這些片斷因很快被腎臟清除導(dǎo)致放射標(biāo)記的抗體片斷在腫瘤部位不能有效聚集而難于成功顯像或有效殺滅腫瘤細(xì)胞[6]；而分子量>SOkDa時(shí)，雖可減少腎臟對(duì)抗體片段的快速清除，增加其血液循環(huán)的有效半衰期，但同時(shí)又因肝臟攝取增高、血液循環(huán)清除減慢、腹部本底增高而使靶/非靶放射性比值低，不利于獲得高質(zhì)量影像[7](C.VanDeffiele,H.Revets,N.Mertens,RadioimmunoimagingadvancesAndProspects.TheQuarterlyJournalOfNuclearMedicineAndMolecularImaging.200448(4):321-322)。另有報(bào)道，單鏈的Fv抗體片斷(25kD)很快被腎臟清除，到達(dá)腫瘤組織的量低，雙亞基的ScFv可以顯著提高血清半衰期和腫瘤聚集量。通過分子生物學(xué)手段也可以制備融合蛋白ScFv-CH3(80kD)和scFv-Fc片斷(105kDa)，不過在肝臟和腎臟中可以觀察到顯著的非特異性攝入從而干擾腹部顯像(AnnaM.ffu,ToveOlafse.AntibodiesforMolecularImagingofCancer.TheCancerJournal.200814(3):193_194)。因此，目前免疫顯像劑或治療劑面臨的困難是，當(dāng)抗體片斷分子量小時(shí)，對(duì)腫瘤的穿透力強(qiáng)，但是如果分子量小于腎臟清除閾值(60kD80kD)，則很容易被清除，腫瘤組織的放射免疫顯像劑積累量低，診斷治療效果不理想；而當(dāng)抗體分子量大于腎臟清除閾值(60kD80kD)時(shí)，雖不易被清除，卻使得肝臟和脾臟的非特異性攝入高，造成顯像本底高，干擾診斷結(jié)果，同時(shí)，分子量大的抗體難以穿透腫瘤，腫瘤部位攝取顯像劑或治療劑少，從而不能形成有效濃聚，因而腫瘤顯像或治療效果都不佳。對(duì)EB病毒所致的腫瘤如惡性淋巴瘤來說，目前臨床上雖有多種技術(shù)方法可用于診斷惡性淋巴瘤，但尚未見有惡性淋巴瘤的特異性靶向分子顯像技術(shù)的相關(guān)報(bào)道。本發(fā)明旨在提供一種源于EB病毒表面抗原gp350/220抗原決定簇的單克隆抗體的靶向放射性小分子抗體擬似肽，用于EB病毒表面抗原gp350/220陽(yáng)性腫瘤(包括淋巴瘤)的核醫(yī)學(xué)分子顯像及放射性靶向治療。該靶向放射性小分子抗體擬似肽的發(fā)明，將有助于惡性淋巴瘤的早期診斷、分期、治療方案選擇、療效評(píng)價(jià)及預(yù)后判斷。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明通過進(jìn)一步改造全抗體的結(jié)構(gòu)，尋求更小的腫瘤抗體或抗體片段替代物(分子量<lOkDa)。一方面，既能大力提高其對(duì)腫瘤的穿透力；另一方面，又能保留其與腫瘤分子靶點(diǎn)的高親和力及其在體內(nèi)的高度穩(wěn)定性，以保證其在腫瘤部位的有效聚集。同時(shí)制備方便容易，成本低廉，容易產(chǎn)業(yè)化。本發(fā)明提供一種融合多肽在制備放射性靶向腫瘤分子顯像劑或放射性內(nèi)照射治療藥物中的用途，所述的融合多肽是由單抗的重鏈可變域(或輕鏈可變域)的骨架區(qū)2(VhFR2或\FR2)連接一個(gè)重鏈可變域的互補(bǔ)決定區(qū)1或3(VfDRi或VHCDR3)和一個(gè)輕鏈可變域的互補(bǔ)決定區(qū)1或3(\〔0禮或VfDR3)組成，其分子量為34kD，所述的單抗是識(shí)別EB病毒表面抗原gp350/220抗原決定簇的單克隆抗體，所述的腫瘤為EB病毒所致的EB病毒表面抗原gp350/220陽(yáng)性的惡性腫瘤。所述融合多肽的氨基酸序列分別是SEQIDNO.14所示的序列SEQIDNO.1DYYLHWVKQRTEQGLEWIGQHIRELTRSSEQIDNO.2SFGMHWVRQAPEKGLEWVAGQGYSYPYTSEQIDNO.3DYNMHWVKQSHGKSLEWIGQQNNEDPYTSEQIDNO.4GYWMSWVRQAPGKGLEWVAQQLVEYPFT所述融合多肽的對(duì)照28C的氨基酸序列是SEQIDNO.5所示的序列SEQIDNO.5DYYLHQHIRELTRSWVKQRTEQGLEWIG所述優(yōu)選的融合多肽的氨基酸序列是SEQIDNO.1的序列。本發(fā)明還提供一種放射性靶向腫瘤分子顯像劑或放射性靶向腫瘤內(nèi)照射治療藥物，其包含上述的融合多肽以及可直接或間接與多肽偶聯(lián)標(biāo)記的放射性核素。所述放射性核素包括198AU、32P、125I、131I、123I、124I、9°Y、186Re、188Re、68Ca、64CU、67CU、211At、213Bi、224AC、223Ra、225AC、177LU、99mTC、18F、76Br、mIn、89Sr、9。Y、166H0、165Dy、77Br、mIn、195mPt。優(yōu)選的放射性核素是用于放射顯像和/或放射治療的123I、131I、124I、99mTc、188Re、mIn、18F、76Br、68Ca或64Cu。優(yōu)選的放射性核素是用于放射性內(nèi)照射治療的211At、213Bi、223Ra、225Ac、33P、mLu、67CU、131I、186Re、165Dy、89Sr、32P、166H0、188Re、9°Y、125I、124I、77Br、mIn、195mPt更優(yōu)選的放射性核素是1311、1231、1241。進(jìn)一步的，本發(fā)明提供的放射性腫瘤靶向分子顯像劑或/和放射性腫瘤靶向內(nèi)照射治療藥物，其包含用放射性核素直接標(biāo)記上述融合多肽的酪氨酸，或者通過核醫(yī)學(xué)上常用的偶聯(lián)劑與上述融合多肽的N末端或/和C末端偶聯(lián)后再間接用放射性核素標(biāo)記所形成的放射性復(fù)合物。本發(fā)明設(shè)計(jì)的小分子抗體擬似物包含一個(gè)由來自重鏈可變域的同源骨架區(qū)氨基酸序列(VhFR)將一個(gè)重鏈可變域的互補(bǔ)決定區(qū)(VhCDR)和一個(gè)輕鏈可變域的互補(bǔ)決定區(qū)(VlCDR)兩個(gè)相互作用的互補(bǔ)決定區(qū)(⑶R)連接起來的核心結(jié)構(gòu)“VHraR-VHFR-VfDR”，考慮到重、輕鏈的相互作用，較單鏈抗體片段可能更有利于提高其與抗原的親和力，而目前其它抗體變構(gòu)體的研究?jī)H考慮的是單鏈抗體片段。本發(fā)明制備的放射性免疫顯像劑或治療劑具有分子量小、腫瘤穿透力強(qiáng)及靶向性好、腫瘤濃聚高、血液中清除快、腫瘤外非靶器官如肝臟及脾臟等無明顯放射性分布、機(jī)體不會(huì)對(duì)該類小分子化合物分子(34kDa)產(chǎn)生免疫反應(yīng)(無免疫原性)、安全等優(yōu)點(diǎn)，初步研究證實(shí)1311標(biāo)記VHraRi-V/RfVLCD^具有高度惡性淋巴瘤靶向性(特異性)、高親和力及高度體內(nèi)穩(wěn)定性。這些正好克服了當(dāng)今放射性核素標(biāo)記多肽、放射性核素標(biāo)記單克隆抗體或單鏈抗體片段等所具有腫瘤穿透力差、肝臟等非特異性結(jié)合高、血液清除慢、易產(chǎn)生免疫反應(yīng)、難于在腫瘤形成有效聚集等關(guān)鍵技術(shù)難題，必將進(jìn)一步豐富放射免疫顯像及放射免疫治療的理論及臨床實(shí)踐。本發(fā)明的分子量為34kDa的融合多肽，較分子量為數(shù)萬的原始單抗或分子量為2030kDa的抗體變構(gòu)物可具有更強(qiáng)的腫瘤穿透力。前期用1311標(biāo)記VHCDRfV/RfVLCDRs已成功完成荷惡性淋巴瘤裸鼠體內(nèi)顯像，初步證實(shí)其惡性淋巴瘤靶向性。以下的具體實(shí)施方式是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步詳細(xì)說明，但并非對(duì)本發(fā)明的限制，任何基于本發(fā)明實(shí)質(zhì)內(nèi)容作出的變形都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。圖1合成28P(SEQIDNO.1)質(zhì)譜圖純度為95%。其中各特征峰的保留時(shí)間、峰面積如下序號(hào)保留時(shí)間名稱峰面積％峰面積115.2171.029266207_3]215.38195.4525467949316.1103.5215134896圖2NBS用量與標(biāo)記率的關(guān)系當(dāng)1251用量為1.5mCi時(shí)，NBS用量達(dá)到10yg時(shí)標(biāo)記率達(dá)到最高，再增加無明顯變化。圖328P用量與標(biāo)記率的關(guān)系1251用量為1.5mCi、NBS用量為lOiig時(shí)，28P的量為20yg時(shí)標(biāo)記率達(dá)到最高，再增加無明顯變化。圖4反應(yīng)時(shí)間對(duì)標(biāo)記率的影響28P在數(shù)秒內(nèi)與1251發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。圖5pH值對(duì)標(biāo)記率的影響最佳pH值為7.5(58)。圖6溫度對(duì)標(biāo)記率的影響本實(shí)驗(yàn)的最佳溫度為22°C(1825°C)。圖7標(biāo)記物的放射化學(xué)純度測(cè)定97%圖8標(biāo)記物的體外穩(wěn)定性將制備的放射性藥物在常溫下放置1、2、4、8、12、24、48、168、720h其放化純度基本穩(wěn)定，在168h時(shí)仍然保持在84%左右。甚至放置30天后其放化純?nèi)员３衷?0%左右。圖9本發(fā)明顯像劑對(duì)荷淋巴瘤裸鼠顯像實(shí)驗(yàn)結(jié)果(28P即SEQIDNO.1及其對(duì)照28C即:SEQIDNO.5)。初步證實(shí)1311標(biāo)記28P具有惡性淋巴瘤靶向特性。abc、def分別為1311標(biāo)記28P、131I標(biāo)記28C(陰性對(duì)照)在荷惡性淋巴瘤裸鼠模型經(jīng)尾靜脈注射后24h的6體內(nèi)顯像。其中，a、d分別為荷惡性淋巴瘤裸鼠模型的光學(xué)照片，b、e分別為1311標(biāo)記28P、mI標(biāo)記28C在荷惡性淋巴瘤裸鼠模型體內(nèi)的SPECT影像，c、f分別為a、d光學(xué)照片與相應(yīng)b、eSPECT影像的融合影像。圖10本發(fā)明顯像劑(1311標(biāo)記28P)對(duì)荷惡性淋巴瘤及荷非小細(xì)胞肺癌裸鼠顯像結(jié)果初步證實(shí)1311標(biāo)記28P具有惡性淋巴瘤高度靶向性(特異性)、高親和力及高度體內(nèi)穩(wěn)定性。惡性淋巴瘤高度濃聚mI標(biāo)記28P，注射后24h腫瘤/對(duì)側(cè)肌肉放射性比值達(dá)3.73，顯像劑經(jīng)腎臟清除，肝臟、血循環(huán)及正常組織無攝?。粣盒粤馨土鑫磾z取mI標(biāo)記28C(對(duì)照)；非小細(xì)胞肺癌未攝取1311標(biāo)記28P。abc.def.ghi分別為1311標(biāo)記28P、131I標(biāo)記28C(陰性對(duì)照)、1311標(biāo)記28P注射后24h在荷惡性淋巴瘤、荷惡性淋巴瘤及荷非小細(xì)胞肺癌裸鼠的體內(nèi)顯像。其中，a、d、g分別為荷惡性淋巴瘤、荷惡性淋巴瘤及荷非小細(xì)胞肺癌裸鼠模型的光學(xué)照片，b、e、h分別為1311標(biāo)記28P、131I標(biāo)記28C及1311標(biāo)記28P在荷惡性淋巴瘤、荷惡性淋巴瘤及荷非小細(xì)胞肺癌裸鼠模型體內(nèi)的SPECT影像，c、f、i分別為a、d、g光學(xué)照片與相應(yīng)b、e、hSPECT影像的融合影像。圖11荷惡性淋巴瘤裸鼠模型圖12荷非小細(xì)胞肺癌裸鼠模型圖13.惡性淋巴瘤組織的病理學(xué)切片(倒置顯微鏡HEX400倍)圖14.非小細(xì)胞肺癌組織的病理學(xué)切片(倒置顯微鏡HEX400倍)上述附圖均為黑白圖片，為了更清除的說明本發(fā)明的靶向分子顯像劑或治療劑的特征，發(fā)明人同時(shí)提交圖914的彩色圖片作為參考。實(shí)施例1小分子融合肽的制備按照丘小慶等在文獻(xiàn)中(Xiao-QingQiu，HeWang，BeiCai，Lan-LanWang&Shi-TaoYue.Smallantibodymimeticscomprisingtwocomplementarity-determiningregionsandaframeworkregionfortumortargeting.NATUREBIOTECHNOLOGY,200725(8):921_928)公開的方法制備的小分子融合肽，或者按照SEQIDNO.1SEQIDNO.5公開的氨基酸序列由西安聯(lián)美生物制品有限公司合成。實(shí)施例2制備本發(fā)明的顯像劑1.1材料28P(SEQIDNO.1)由西安聯(lián)美生物制品有限公司合成，純度>95%(見圖1)。用BALB/c小鼠24只，體重約20g，雌雄不限，分為7組，每組5只(四川大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)；Na125I/NamI由成都中核高通同位素股份有限公司生產(chǎn)(無載體、無還原劑、放射化學(xué)純度彡96%，pH值7.08.0，y雜質(zhì)<0.1%)；N-溴代琥珀酰亞胺為sigma產(chǎn)品(USA)，HAS(上海)，分析純；丙酮(成都新川化學(xué)試劑有限責(zé)任公司)，Y計(jì)數(shù)儀(國(guó)營(yíng)二六二廠)，ESJ120-4電子分析天平(沈陽(yáng))，漩渦混合器XW-80A(上海醫(yī)科大學(xué))。2.128P的1251標(biāo)記及最佳標(biāo)記條件的確定采用N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)作為氧化劑，NBS以三蒸水溶解，濃度為0.5mg/ml；28P的濃度為lmg/ml；固定1251的用量，改變28P及NBS的用量，以取得最佳標(biāo)記條件。各反應(yīng)管內(nèi)先1251溶液0.5iU(約1.5mCi)，然后加入NBS溶液0.1、1、3、5、7、10、20yl室溫下，最后各加入28P20iU，分別加入lOOyl的0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液，蓋緊管口。漩渦混合器混勻。反應(yīng)約3分鐘后，加入10μ12%的HSA溶液終止反應(yīng)。采用相同方法，固定125I及NBS的用量，改變28Ρ的量分別為0.2、2、5、10、20、40、100μ1，反應(yīng)3分鐘后，取樣測(cè)標(biāo)記率。保持其它條件不變，再分別考察反應(yīng)時(shí)間、PH值、溫度對(duì)125Ι-28Ρ標(biāo)記率的影響。2.1.128Ρ用量及NBS用量與標(biāo)記率的關(guān)系125I用量為1.5mCi時(shí)標(biāo)記率較高；NBS用量達(dá)到10μg時(shí)標(biāo)記率達(dá)到最高，再增加無明顯變化(見圖2)，28P的量為20μg時(shí)標(biāo)記率達(dá)到最高(見圖3)，再增加無明顯變化因此，反應(yīng)最佳條件為20μg28P(lmg/ml/mL)U.5mCi7.4MBq125IUOygNBS0標(biāo)記率可達(dá)到97.8%。2.1.2反應(yīng)時(shí)間對(duì)標(biāo)記率的影響(見圖4)標(biāo)記率在0.5min內(nèi)迅速升高，以后隨時(shí)間延長(zhǎng)標(biāo)記率無明顯變化，因此28P能夠很快速與125I發(fā)生結(jié)合反應(yīng)。2.1.3pH值對(duì)標(biāo)記率的影響(見圖5)保持其它條件不變時(shí)，pH在0.114時(shí)標(biāo)記率隨pH值增高呈拋物線型變化，到pH值7.5時(shí)標(biāo)記率最高，確定本實(shí)驗(yàn)的最佳pH值為7.5。2.1.4溫度對(duì)標(biāo)記率的影響(見圖6)保持其它條件不變時(shí)，溫度在050°C時(shí)標(biāo)記率隨溫度增高呈拋物線型變化，到溫度為室溫時(shí)(22°C)標(biāo)記率最高，確定本實(shí)驗(yàn)的最佳溫度為22°C。2.1.5反應(yīng)體積對(duì)標(biāo)記率的影響本次實(shí)驗(yàn)通過往反應(yīng)體系中加入一定量的磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)反應(yīng)體積及pH值，發(fā)現(xiàn)當(dāng)反應(yīng)體積過小時(shí)標(biāo)記率不高，可能由于溶液的緩沖能力不夠，PH值未調(diào)節(jié)到有利于標(biāo)記的范圍；隨反應(yīng)體積的增大標(biāo)記率也隨之增大，之后隨反應(yīng)體積增大，標(biāo)記率反而下降?？赡苡捎隗w積過度增大時(shí)，反應(yīng)物的有效濃度降低，分子間相互作用減弱，標(biāo)記率降低。本實(shí)驗(yàn)的最佳選擇體積為120μ1。2.2放射性藥物的質(zhì)量控制125Ι-28Ρ的質(zhì)量控制(mI-28P的質(zhì)量控制同125I_28P的質(zhì)量控制)1.一般理化性質(zhì)觀察標(biāo)記產(chǎn)物的澄明度、色澤、外觀及pH值。觀察標(biāo)記產(chǎn)物為無色透明液體，反應(yīng)終pH值為-J.5。2.放射化學(xué)純度紙層析法測(cè)標(biāo)記率，固定相為新華I號(hào)紙，展開劑為丙酮生理鹽水=11(體積比)，測(cè)定標(biāo)記物及游離125I的Rf值，并計(jì)算125I-28P的標(biāo)記率，通過TLC掃描儀對(duì)標(biāo)記物放射化學(xué)純度進(jìn)行鑒定，125I-28P的Rf=0.50.6，游離125I的Rf=0.81.0，放射化學(xué)純度為97%，見圖7。3.體外穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將標(biāo)記物放置在常溫下，用紙層析法測(cè)定標(biāo)記物于標(biāo)記后1、2、4、8、12、24、48、168、720h內(nèi)不同時(shí)間的放射化學(xué)純度(RCP)，觀察其體外穩(wěn)定性。制備的放射性藥物放置室溫下24h內(nèi)放射化學(xué)純度大于95%，一周后RCP仍大于90%，室溫放置168h后，其RCP仍然保持在84%左右，甚至放置30天后其RCP仍保持在80%左右，具有良好的體外穩(wěn)定性(見圖8)。4.標(biāo)記物免疫活性測(cè)定按以下方法進(jìn)行125I-28P的免疫活性測(cè)定(1)在0.5ml的印pendorf管內(nèi)加入Raji細(xì)胞懸液25μ1(4XIO7個(gè)/ml)(2)加入已標(biāo)記的125I-28P25μ1(稀釋至25μ1約5XIO4個(gè)計(jì)數(shù)/10秒范圍內(nèi)不影響結(jié)果)(3)旋渦混合器振蕩30s后，置4°C，每15min震蕩一次，共2h。(4)r計(jì)數(shù)儀測(cè)量總放射性活度(T)。(5)離心2000g，3min。(6)吸棄上清(避免吸出細(xì)胞)。(7)加入2%FCS—PBS200μ1洗細(xì)胞，振蕩30s，同上離心，吸棄上清200μ1，重復(fù)3次。(8)第三次吸出200pl后，r計(jì)數(shù)儀測(cè)量放射性活度(B)。(9)計(jì)算B/T(%)。按上述方法測(cè)得125Ι-28ΡΒ/Τ(%)為38.2%。5.無菌、無熱源實(shí)驗(yàn)5.1無菌、無熱源mI-28P的制備參照《中華人民共和國(guó)藥典》之規(guī)定進(jìn)行，經(jīng)無菌條件下制備的131I-28P各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)均符合藥典體內(nèi)診斷試劑之規(guī)定。制備mI-28P時(shí)嚴(yán)格無菌操作。使用無菌、無熱源真空瓶及一次性無菌注射器，所使用的微量移液器在每次使用前后均需用75%的乙醇(優(yōu)級(jí)純G.R無水乙醇配置)溶液浸泡過夜。所配置的mI-28P需經(jīng)0.2μπι的無菌無熱源濾器濾過，收集到的即為無菌無熱源的131Ι-28Ρ，備用。5.2細(xì)菌檢查及熱源鑒定細(xì)菌檢查取3瓶新鮮配置的完全RPMI1640培養(yǎng)液放入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)過夜，第二天觀察培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)無污染、無細(xì)菌生長(zhǎng)，然后將嚴(yán)格無菌操作條件下制備的131Ι-28Ρ0.37MBq放入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)繼續(xù)培養(yǎng)，連續(xù)觀察7天，培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)無細(xì)菌生長(zhǎng)。熱源鑒定取三只新西蘭大白兔(雌2只，雄1只，體重-.2-2.5kg)，于20°C室溫環(huán)境常規(guī)培養(yǎng)三天，監(jiān)測(cè)肛溫，第四天，每只大白兔于耳緣靜脈注射mI-28P，劑量為106MBq/kg。于注射后0、30、60、90、120、150和180分鐘分別測(cè)定其肛溫，并作記錄。熱源鑒定陰性。6.急性毒性實(shí)驗(yàn)按體重60kg的患者每人/次注射6mCi131I_28P(含28P:80μg)計(jì)算選擇健康昆明小鼠15只(雌性，1822g)，隨機(jī)分為A、B、C3組，每組5只。A組每只小鼠經(jīng)尾靜脈注射0.3mCi/0.Iml放射化學(xué)純度為97%的mI_28P(含28P:6μg)，其放射性活度為同比體重患者的150倍，28P的用量為同比體重患者的230倍；B組每只小鼠經(jīng)尾靜脈注射無放射性標(biāo)記溶于PBS的28P20μg/0.lml,28P的用量為同比體重患者的769倍；C組每只小鼠經(jīng)尾靜脈注射0.Iml生理鹽水作對(duì)照。觀察并記錄注射后14天內(nèi)小鼠的飲食量、活動(dòng)度、反應(yīng)、體重，上述指標(biāo)無異常，小鼠體重增加。14天后取小鼠肝臟及腎臟，光鏡下觀察未見細(xì)胞變性及壞死。急性毒性實(shí)驗(yàn)陰性。用SEQIDNO.2SEQIDNO.5制備顯像劑或治療劑方法與上述方法相同，用其中放射性核素標(biāo)記的SEQIDNO.5序列作為對(duì)照。實(shí)施例3檢測(cè)碘-125標(biāo)記28P在正常小鼠的體內(nèi)分布碘-125標(biāo)記28P的制備取10μ1Na125I(約1.5mCi)，再加入10μ1(1μg/μ1)NBS溶液，然后加入預(yù)先分裝好的1μg/μ128Ρ，最后加入100μ10.05mol/LPBS緩沖液(ρΗ7·27·4)混勻，緩慢振蕩混勻，反應(yīng)3min，加入50μ12%HSA溶液終止反應(yīng)30sec，標(biāo)記完成。紙層析法測(cè)標(biāo)記率，固定相為新華I號(hào)紙，展開劑為丙酮生理鹽水=11(體積比)，125I-28P的Rf=0.40.6，游離125I的Rf=0.81.0，通過TLC掃描儀對(duì)標(biāo)記率進(jìn)行鑒定。獲得的131I-28P的放化純度96.8%。125I-28P標(biāo)記物在正常小鼠體內(nèi)的生物學(xué)分布選擇健康昆明小鼠35只，隨機(jī)分為7組，每組5只。每只小鼠經(jīng)尾靜脈注射0.Iml放射化學(xué)純度為97%的125I-28P。另取兩個(gè)0.ImL作為標(biāo)準(zhǔn)源。分別于注射后30min、lh、2h、4h、8h、12h、24h取出一組小鼠斷頭取血，解剖取出各主要臟器血、甲狀腺、腦、心、肺、肝、脾、胃、腸、腎、骨、肌肉、皮膚等，稱重并測(cè)定其放射性計(jì)數(shù)。結(jié)果以每克組織放射性攝取百分比(％ID/g)表示。每克組織百<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>藥物靜脈注射后4h、24h每克血、肝組織放射性計(jì)數(shù)占注入量的百分?jǐn)?shù)分別為0.2%、0.06%和0.17%、0.04%，說明藥物從血中清除快，肝臟攝取非常低(見表1)。表1125I-28P標(biāo)記物在正常小鼠體內(nèi)的生物學(xué)分布125I-28P的正常小鼠體內(nèi)分布(〒土m=5)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>放射性核素標(biāo)記的SEQIDNO.2SEQIDNO.4序列的融合肽在體內(nèi)分布與上述實(shí)驗(yàn)類似。實(shí)例4利用本發(fā)明顯像劑診斷淋巴癌項(xiàng)目組前期研究已初步獲得131I標(biāo)記28P(VhCDR1-VhFR2-VADR3)荷惡性淋巴瘤裸鼠靶向顯像的直接證據(jù)，研究結(jié)果顯示1311標(biāo)記28P具有惡性淋巴瘤高度靶向性(特異性)、高親和力及高度體內(nèi)穩(wěn)定性。(見圖9、圖10)放射性同位素活度計(jì)(CRC-15R，美國(guó)Capintec公司生產(chǎn))，Y放射免疫計(jì)數(shù)儀(FJ20201，西安二六二儀器廠)，Na131I溶液(成都中核高通同位素股份有限公司，放射化學(xué)純度彡96%，放射性濃度彡2.5GBq/mL,pH=8.0,Y雜質(zhì)<0.1)，28P由西安聯(lián)美生物制品有限公司合成，純度>95%；，N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)(Sigma公司，純度彡99%，分析純)，RPMI1640培養(yǎng)基(上海博生生物科技有限公司)，BALB/C-nU/nU裸鼠(SPF級(jí)，雌雄不限，鼠齡6周8周，體重20g25g)，四川大學(xué)華西實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。碘-131標(biāo)記28P的制備根據(jù)由Na131I標(biāo)記28P所獲得的最佳標(biāo)記條件。取10μ1NamI(約1.5mCi)，再加入ομl(lyg/y1)NBS溶液，然后加入預(yù)先分裝好的lyg/μ128Ρ，最后加入100μ10.05mol/LPBS緩沖液(ρΗ7·27.4)混勻，緩慢振蕩混勻，反應(yīng)3min，加入50μ12%HSA溶液終止反應(yīng)30s，標(biāo)記完成。紙層析法測(cè)標(biāo)記率，固定相為新華I號(hào)紙，展開劑為丙酮生理鹽水=11(體積比)，131I-28P的Rf=0.40.6，游離131I的Rf=0.81.0，通過TLC掃描儀對(duì)標(biāo)記率進(jìn)行鑒定。獲得的131I-28P的放化純度96.8%。荷淋巴瘤裸鼠模型的建立選擇指數(shù)期生長(zhǎng)Raji細(xì)胞計(jì)數(shù)達(dá)IO6IO7ceIls/mlU000r/min離心5min,棄去上清，用PBS將細(xì)胞重懸為濃度5XIO61X107cells/ml的單細(xì)胞懸液，按0.2ml/只快速將單細(xì)胞懸液接種10只裸鼠右前肢內(nèi)側(cè)腋窩皮下。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格遵循無菌原則，在華西醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)，SPF級(jí)。6周左右，腫瘤長(zhǎng)至約0.8cmX1.0cm，用于顯像實(shí)驗(yàn)(見圖11)。同時(shí)按上述相同方法，利用A549細(xì)胞建立5只非小細(xì)胞肺癌荷瘤鼠模型(見圖12)，為加以區(qū)別，將非小細(xì)胞肺癌荷瘤鼠模型建于左前肢內(nèi)側(cè)腋窩皮下。荷瘤小鼠顯像為避免顯像過程中甲狀腺對(duì)131I-28P脫落的131I的大量攝取而影響腫瘤的顯像，實(shí)驗(yàn)前7天在小鼠飲水中加入0.的碘化鉀以封閉甲狀腺對(duì)放射性碘的攝取。隨機(jī)抽取5只荷瘤鼠分別從尾靜脈注射7.4MBq的131I_28P，另外5只則從尾靜脈注射亂碼氨基酸序列的對(duì)照組(131I_28C)7.4MBq,同樣將標(biāo)記物mI_28P7.4MBq經(jīng)尾靜脈注入非小細(xì)胞肺癌荷瘤鼠體內(nèi)，經(jīng)腹腔注射0.75%戊巴比妥鈉注射液，按劑量45mg/kg給予麻醉。于注射后0.5、1、2、4、8、12、2處對(duì)每只荷瘤鼠行全身平面顯像。利用感興趣區(qū)技術(shù)(ROI)計(jì)算最佳顯像時(shí)間時(shí)腫瘤/非腫瘤組織相應(yīng)部位的放射性攝取比值(T/NT)。顯像條件采用高能針孔真空準(zhǔn)直器；靜態(tài)掃描；矩陣128X128；能峰140KeV；窗寬20%；放大倍數(shù)1.44倍；采集30K的計(jì)數(shù)。采用相同的方法，對(duì)非小細(xì)胞肺癌荷瘤鼠進(jìn)行顯像，作為對(duì)照組。靜脈注射131I標(biāo)記28P(VhCDR1-VhFR2-VADR3)24h荷惡性淋巴瘤裸鼠腫瘤/對(duì)側(cè)肌肉放射性比值高達(dá)3.73，藥物從血液循環(huán)中清除快，肝臟及脾臟無明顯放射性分布。而同等條件下131I標(biāo)記ZSC(VhCDR1-V^)R3-VhFR2對(duì)照，氨基酸序列為SEQIDNO5)靜脈注射24h內(nèi)始終未見腫瘤聚集顯像劑。此外，項(xiàng)目組已完成mI標(biāo)記28P荷非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)裸鼠的體內(nèi)顯像研究靜脈注射131I標(biāo)記28P后，于24h內(nèi)完成的系列靜態(tài)顯像也始終未見腫瘤組織攝取131I標(biāo)記28P。證實(shí)131I標(biāo)記28P具有惡性淋巴瘤高度靶向性(特異性)、高親和力及高度體內(nèi)穩(wěn)定性。根據(jù)本領(lǐng)域的常識(shí)，1311、1241等核素是公知的放射性治療劑，因此，當(dāng)28P標(biāo)記適當(dāng)?shù)姆派湫院怂貢r(shí)，即可以作為惡性淋巴瘤的靶向治療劑。放射性核素標(biāo)記的SEQIDNO.2SEQIDNO.4序列的融合肽也具有類似的靶向顯像和靶向治療效果。實(shí)施例5病理組織學(xué)檢查取荷瘤裸鼠的新鮮腫瘤組織置于10%福爾馬林溶液固定48h，石蠟包埋切片、HE染色，光鏡下觀察各實(shí)驗(yàn)組惡性淋巴瘤組織的病理學(xué)表現(xiàn)并采集圖片。淋巴瘤組織的病理學(xué)表現(xiàn)(見圖13)瘤細(xì)胞大小和形態(tài)一致，相互粘連，主要由小無裂細(xì)胞組成，瘤細(xì)胞胞界不清，胞質(zhì)少，核圓或卵圓形，核膜厚，染色質(zhì)較粗，核仁明顯，可貼近核膜，核有絲分裂象多見。特殊的是瘤細(xì)胞迅速死亡，被成熟的巨細(xì)胞吞噬，這些含有吞噬碎片和包涵體樣顆粒的巨細(xì)胞淡染，均勻地散布于瘤細(xì)胞之間呈現(xiàn)所謂的“滿天星”圖像，是本病的組織學(xué)特點(diǎn)。非小細(xì)胞肺癌組織的病理學(xué)切片(見圖14)其表現(xiàn)為癌細(xì)胞內(nèi)有空腔形成，表面有微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)可見分泌顆粒，細(xì)胞間可見連接復(fù)合體。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果均采用平均值士標(biāo)準(zhǔn)差(〒±s)來表示，利用SPSS軟件利用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。統(tǒng)計(jì)T和NT的放射性計(jì)數(shù)的差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)SPECT采集荷瘤裸鼠的圖像，通過勾畫感興趣區(qū)(ROI)技術(shù)測(cè)得131I-28P組腫瘤(T)與NT的計(jì)數(shù)分別為724士145和235士48，η=5，t檢驗(yàn)可得P=0.000，藥物分布有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。mI-28C組T與NT的計(jì)數(shù)分別為159士32和150士26，t檢驗(yàn)可得P=0.658，藥物分布無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而非小細(xì)胞肺癌組其T與NT的計(jì)數(shù)分別為101士10和91士17，t檢驗(yàn)可得P=0.286，藥物分布無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。上述結(jié)果說明本發(fā)明的惡性淋巴瘤靶向放射性藥物能在腫瘤部位高度濃聚而未見腫瘤攝取其對(duì)照藥物，非小細(xì)胞肺癌組織也不攝取該惡性淋巴瘤靶向放射性藥物。證實(shí)mI標(biāo)記28P具有惡性淋巴瘤高度靶向性(特異性)、高親和力及高度體內(nèi)穩(wěn)定性。本發(fā)明研制的碘化(131I)抗EB病毒表面抗原gp350/220抗原決定簇的單克隆抗體擬似物具有如下特色及創(chuàng)新之處1)分子量小(34kDa)，腫瘤穿透力強(qiáng)。注射后Ih即可見腫瘤顯影，繼后見腫瘤攝取逐漸增濃，首次成功完成荷惡性淋巴瘤裸鼠靶向分子顯像。而前期研究的基于單克隆抗體及抗體片段的放射性靶向分子顯像劑及放射性靶向治療藥物的總體臨床效果并不理想[7]；2)親和力高、靶向性強(qiáng)，穩(wěn)定性好，靶/非靶組織放射性比值高。注射后24h腫瘤/對(duì)側(cè)肌肉放射性比值高達(dá)3.73，可完成腫瘤部位的有效聚集特異性高，而肝臟、脾臟及其余正常組織器官未見攝取；3)經(jīng)腎臟從血循環(huán)中清除快。該研究打破抗體變構(gòu)體藥物的分子量要大于腎臟清除閾值(60kDaSOkDa)的傳統(tǒng)觀念，首次證實(shí)了1311標(biāo)記的3kDa抗EB病毒表面抗原gp350/220單克隆抗體的擬似物28P具有惡性淋巴瘤高度靶向性(特異性)、高親和力及高度體內(nèi)穩(wěn)定性；4)本研究抗體擬似物包含分別來自來自單克隆抗體重鏈可變域和輕鏈可變域的互補(bǔ)決定區(qū)以及來自重鏈可變域的同源骨架區(qū)的氨基酸序列，考慮到重、輕鏈的相互作用較單鏈抗體片段可能更有利于提高其與抗原的親和力。而目前其它抗體變構(gòu)體的研究?jī)H考慮的是單鏈抗體片段，它仍需要依靠?jī)?nèi)部的二硫鍵來維持其穩(wěn)定性，現(xiàn)已被證明有許多缺陷。綜上所述，本發(fā)明已成功用1251、1311標(biāo)記28P(VhCDR1-VhFR2-VlCDR3實(shí)驗(yàn))及其亂碼肽擬似物28C(VhCDR1-VlCDR3-VhFR2對(duì)照)，其放射化學(xué)純度(RCP)大于96%，室溫放置48小時(shí)后其放射化學(xué)純度仍然大于90%，體外穩(wěn)定。我們及項(xiàng)目合作者前期用125I標(biāo)記28P完成了健康小鼠的體內(nèi)分布研究及用mI標(biāo)記28P分別完成了荷惡性淋巴瘤裸鼠和荷非小細(xì)胞肺癌裸鼠體內(nèi)顯像研究，初步結(jié)果顯示=131I標(biāo)記28P分子量小、親和力高、特異性強(qiáng)、體內(nèi)穩(wěn)定和腫瘤穿透力強(qiáng)，從血循環(huán)中清除快，主要經(jīng)腎臟清除。mI標(biāo)記28P具有高度惡性淋巴瘤靶向性、高親和力及高度體內(nèi)穩(wěn)定性，是一種潛在的惡性淋巴瘤特異性靶向分子顯像劑。Untitled.ST25.txtSEQUENCELISTING<110>四川大學(xué)華西醫(yī)院<120>一種惡性淋巴瘤放射性靶向分子顯像劑或/和靶向治療劑<130>CD520-09P106337<160>5<170>PatentInversion3.2<210>1<211>28<212>PRT<213>融合肽<400>1AspTyrTyrLeuHisTrpValLysGlnArgThrGluGlnGlyLeuGlu151015TrplieGlyGlnHislieArgGluLeuThrArgSer2025<210>2<211>28<212>PRT<213>融合肽<400>2SerPheGlyMetHisTrpValArgGlnAlaProGluLysGlyLeuGlu151015TrpValAlaGlyGinGlyTyrSerTyrProTyrThr2025<210>3<211>28<212>PRT<213>融合肽<400>3AspTyrAsnMetHisTrpValLysGlnSerHisGlyLysSerLeuGlu151015TrplieGlyGlnGlnAsnAsnGluAspProTyrThr2025<210>4<211>28<212>PRT<213〉融合肽<400>4GlyTyrTrpMetSerTrpValArgGlnAlaProGlyLysGlyLeuGlu151015TrpValAlaGlnGlnLeuValGluTyrProPheThr2025<210>5<211>28<212>PRT<213>亂碼結(jié)構(gòu)<400>5AspTyrTyrLeuHisGlnHislieArgGluLeuThrArgSerTrpVal151015LysGlnArgThrGluGlnGlyLeuGluTrplieGly202權(quán)利要求一種融合多肽在制備腫瘤放射性靶向分子顯像劑或放射性靶向治療劑中的用途，所述的融合多肽是由單抗的重鏈可變域(或輕鏈可變域)的骨架區(qū)2(VHFR2或VLFR2)連接一個(gè)重鏈可變域的互補(bǔ)決定區(qū)1或3(VHCDR1或VHCDR3)和一個(gè)輕鏈可變域的互補(bǔ)決定區(qū)1或3(VLCDR1或VLCDR3)組成，其分子量為3～4kDa，所述的單抗是識(shí)別EB病毒表面抗原gp350/220抗原決定簇的單克隆抗體，所述的腫瘤為EB病毒所致的惡性腫瘤。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述用途，其特征是所述融合多肽的氨基酸序列分別是SEQIDNO.14所示的序列。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征是所述融合多肽的氨基酸序列是SEQIDNO.1的序列。4.一種放射性靶向分子顯像劑或放射性靶向治療劑，其特征是包含權(quán)利要求13所述的融合多肽以及可直接或間接與多肽偶聯(lián)標(biāo)記的放射性核素。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的放射性靶向分子顯像劑或放射性靶向治療劑，其特征是所述放射性核素包括198Aiu32P、125I、131I、123I、124I、9°Y、186Re、188Re、68Ca、64CU、67CU、211At、213Bi、224AC、223Ra、225AC、177LU、99mTC、18F、76Br、mIn、89Sr、9°Y、166H0、165Dy、77Br、mIn、195mPt。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的放射性靶向分子顯像劑或放射性靶向治療劑，其特征是所述放射性核素是用于放射顯像的123I、131I、124I、99mTC、188Re、mIn、18F、76Br、68Ca或64Cu。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的放射性靶向分子顯像劑或放射性靶向治療劑，其特征是所述放射性核素是用于放射顯像的123I、1311、124I。8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的放射性靶向分子顯像劑或放射性靶向治療劑，其特征是所述放射性核素是用于放射治療的211At、213Bi、223Ra、225AC、33P、mLU、67CU、mI、186Re、165Dy、89Sr、32P、166H0、188Re、9°Y、125I、124I、77Br、mIn、195mPt。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的放射性靶向分子顯像劑或放射性靶向治療劑，其特征是所述放射性核素是用于放射治療的1251、1311、1241。10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的放射性靶向分子顯像劑或放射性靶向治療劑，其特征是所述放射性核素是直接與融合多肽的酪氨酸偶聯(lián)，或者通過核醫(yī)學(xué)上常用的偶聯(lián)劑與融合多肽的N末端或/和C末端相連后再標(biāo)記。全文摘要本發(fā)明公開了一種融合多肽在制備腫瘤放射性靶向分子顯像劑或放射性靶向治療劑中的用途，和一種放射性靶向分子顯像劑或放射性靶向治療劑，所述的融合多肽是由單抗的重鏈可變域(或輕鏈可變域)的骨架區(qū)2(VHFR2或VLFR2)連接一個(gè)重鏈可變域的互補(bǔ)決定區(qū)1或3(VHCDR1或VHCDR3)和一個(gè)輕鏈可變域的互補(bǔ)決定區(qū)1或3(VLCDR1或VLCDR3)組成，其分子量為3～4kDa，所述的單抗是識(shí)別EB病毒表面抗原gp350/220抗原決定簇的單克隆抗體，所述的腫瘤為EB病毒所致的惡性腫瘤。本發(fā)明制備的放射性免疫顯像劑或治療劑具有分子量小、腫瘤穿透力強(qiáng)及靶向性好、腫瘤濃聚高、血液中清除快、腫瘤外非靶器官如肝臟及脾臟等無明顯放射性分布、無免疫原性、安全等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)A61K103/00GK101797393SQ20091005884公開日2010年8月11日申請(qǐng)日期2009年4月3日優(yōu)先權(quán)日2009年4月3日發(fā)明者匡安仁,李林,梁正路,范成中,解朋,譚天秩,鄧候富申請(qǐng)人:四川大學(xué)華西醫(yī)院