專利名稱：蘆薈多糖藥理新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，確切地說是蘆薈多糖藥理新用途，涉及蘆薈多糖體內(nèi) 外抗肝癌作用的應(yīng)用，并且和其他抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用，提高抗腫瘤效果，減少化療藥物的 副作用。
背景技術(shù)：
蘆薈多糖(Aloe Polysaccharide, AP)為百合科植物，庫拉索蘆薈(Aloe barbadensis Miller)、木立聲菩(Aloe Arboresecens Miller)、兀江聲菩(Aloe yuan-jiangensis)、華蘆薈(Aloe chinenesis)及其他近緣植物中提取分離得到的多糖。 蘆薈主要產(chǎn)于我國福建、廣東、廣西、云南、四川、臺(tái)灣等省，還有在云南元江地區(qū)、海南和雷 省州島.。蘆薈中含有氨基酸、有機(jī)酸、微元素、肽類、酶類、蒽醌類、多糖等多種生物活性成 分，能分別通過不同的途徑對(duì)機(jī)體產(chǎn)生有益的作用，如促進(jìn)傷口愈合、抗菌、健胃瀉下、降血 糖、強(qiáng)心、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗癌和抗病毒等，并且不產(chǎn)生副作用，因此被聯(lián)合國糧農(nóng)組織 (FAO)譽(yù)為“21世紀(jì)最佳保健食品”。惡性腫瘤是人類最主要的死亡原因之一，治療難度大，且發(fā)病率一直呈上升趨勢(shì)。 據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)，2020年將有2000萬新發(fā)癌癥病例，其中死亡人數(shù)將達(dá)1200萬，其中 大部分將發(fā)生在發(fā)展中國家。我國腫瘤引起的死亡率在所有病因中占17.9%，居第2位， 且發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。目前的治療手段以手術(shù)、放療、化療為主，手術(shù)多適用于早期癌癥患 者，放療和化療只對(duì)敏感瘤種有效，但同時(shí)又會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的毒副反應(yīng)和后遺癥，甚至造成嚴(yán) 重的醫(yī)源性疾病而危及生命，因此中草藥的抗癌作用越來越受到重視。多項(xiàng)研究證實(shí)，蘆薈多糖可以促進(jìn)細(xì)胞毒性T細(xì)胞(Tc)的分化和增殖，增強(qiáng)Tc的 細(xì)胞毒性。進(jìn)一步研究后獲知，蘆薈多糖能激活巨噬細(xì)胞，通過增強(qiáng)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶 (iNO)mRNA的表達(dá)而增加一氧化氮(NO)的合成，刺激巨噬細(xì)胞分泌細(xì)胞因子(IL_1，IL-6， TNF-α等)，釋放Ν0，刺激巨噬細(xì)胞表面分子的表達(dá)，引起細(xì)胞形態(tài)的改變，從而發(fā)揮其抗 腫瘤的活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供蘆薈多糖藥理新用途，即蘆薈多糖在動(dòng)物移植瘤的體內(nèi)抗腫 瘤和體外抑制肝癌細(xì)胞增殖的應(yīng)用，通過與順鉬類抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用，提高抗腫瘤效果。 本發(fā)明是通過反復(fù)篩選和試驗(yàn)得出的。至今所有的文獻(xiàn)中尚未見有關(guān)蘆薈多糖的體內(nèi)外抗肝癌細(xì)胞增殖的藥理作用，并 且與順鉬類化療藥物聯(lián)合應(yīng)用提高其抗腫瘤效果，減少放化療的毒副作用，明顯改善化療 藥物對(duì)骨髓的傷害作用，可以與化療藥物聯(lián)合用藥，提高療效，減少骨髓抑制的作用，提高 患者的免疫力。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的詳細(xì)組分由下列實(shí)施例給出，但本發(fā)明的保護(hù)范圍，不僅局限于此。實(shí)施例1蘆薈多糖提取物體內(nèi)抗腫瘤細(xì)胞增殖的藥理用途1提取工藝1)預(yù)處理將蘆薈烘干，再進(jìn)行粉碎，然后過40目篩網(wǎng)，收集過篩網(wǎng)的粉末，置于提 取罐中提取蘆薈多糖。2)提取向提取罐中加入蘆薈粉質(zhì)量15倍體積的蒸餾水，在攪拌下向其夾層通入蒸 汽，使物料升溫至85°C，攪拌浸提5h。提取完成后進(jìn)行離心分離，收集上層清液，進(jìn)行濃縮處理。3)濃縮將收集的離心上層清液置于濃縮機(jī)中，控制真空度為-0. 1 -O.OSMPa，濃 縮溫度為80-90°C，獲得濃縮液。4)取5份氯仿和1份正丁醇，混合均勻，備用。5)脫游離蛋白將獲得的濃縮液置于萃取器中，加入其體積1/3的5份氯仿和1份 正丁醇，攪拌均勻后，靜置分層30-60min。收集下層水相，置于離心機(jī)中，以3000r/min轉(zhuǎn)速 離心lOmin，收集上層離心清液，進(jìn)行沉淀多糖處理。6)沉淀、分離將收集的上層離心清液，置于沉淀罐中，在攪拌下加入乙醇沉淀蘆薈 多糖蛋白，直至沉淀液中乙醇濃度達(dá)到70 %時(shí)止。靜置過夜，次日虹吸上層乙醇溶液，泵入 真空濃縮機(jī)回收乙醇，下層沉淀進(jìn)行離心分離，離心速度為3000r/min，離心lOmin，收集下 層沉淀，用濃度為70%的乙醇反復(fù)洗滌兩次，同法離心分離，收集沉淀備用。7)干燥將獲得的沉淀置于真空干燥器中，控制干燥溫度為60°C，干燥24h，獲得蘆 薈多糖。將其進(jìn)行粉碎，獲得粉末產(chǎn)品。2、藥理實(shí)驗(yàn)小鼠右側(cè)腋下接種腫瘤細(xì)胞S180懸液，制備局灶性實(shí)體瘤模型，挑選體重 18 士 2g，隨機(jī)分5組，分別為模型組、5-Fu組(15mgkg)、蘆薈多糖(AP)大劑量組(4. Ogkg—1)、 中劑量組(2. Og. kg—1)及小劑量組(1. Ogkg-1)，每組12只。5-Fu組腹腔注射5-Fu，模型組 分別灌胃生理鹽水，其它灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥10d，記錄體重變化。最后一次給藥 24h后，處死并剝離瘤塊，去除脂肪組織，稱瘤重，按照以下公式計(jì)算抑瘤率抑瘤率(％)= (模型組平均瘤重_給藥組平均瘤重)/模型組平均瘤重X 100 %。結(jié)果見表1。表1、蘆薈多糖(AP)注射治療組和對(duì)照組的抗腫瘤活性比較 注*P < 0. 05，**P < 0. Olvs control group實(shí)施例2蘆薈多糖提取物的組合物體內(nèi)抗腫瘤細(xì)胞增殖的藥理用途1、藥理實(shí)驗(yàn)樣品_蘆薈多糖混懸劑的制備
采用如上述實(shí)施例中蘆薈多糖提取物為原料，以CMC-Na為混懸劑，按照常規(guī)方法 配制混懸劑，濃度為4. Og · kg-1。2、藥理實(shí)驗(yàn)小鼠右側(cè)腋下接種腫瘤細(xì)胞H22懸液，制備局灶性實(shí)體瘤模型，挑選體重18士2g， 隨機(jī)分5組，分別為模型組、5-Fu組(15mg -kg"1)、蘆薈多糖大劑量組(4. Og Agl、中劑量組 (2. Og · kg-1)及小劑量組(1. Og · kg-1)，每組12只。5-Fu組腹腔注射5-Fu，模型組分別灌 胃生理鹽水，其它灌胃給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥10d，記錄體重變化。最后一次給藥24h后， 處死并剝離瘤塊，去除脂肪組織，稱瘤重，按照以下公式計(jì)算抑瘤率抑瘤率(％ )=(模型 組平均瘤重_給藥組平均瘤重)/模型組平均瘤重X 100%。結(jié)果見表2。表2、蘆薈多糖注射治療組和對(duì)照組的抗腫瘤活性比較
Group
Dose
Weight/g
Tumor weight/g Inhibition rate/%
Begin
End
Control
5-Fu
AP
5.Omg kg" 4-Ogkg1 2-Og'kg1 I-Og kg-1
21‘3±1. 1 20.8±1.2 21.3±0‘8
20.5±1. O
20.6±0. 9
26.8 ±3. 6 20.3±2. 5 26.1 ±2. 4 25’8±2‘ 1 25.7±2. 6
1.63 ±0.46 UO±0’ 36" 0.91 ±0. 39" 1.24±(). 38* 1.16±0. 34*
30.1 28.8注:*P < 0. 05，**P < 0. Olvs control group實(shí)施例3蘆薈多糖提取物體外抑制肝癌細(xì)胞增殖的藥理用途對(duì)數(shù)生長期肝癌細(xì)胞SMMC-7721，細(xì)胞數(shù)為3 X IO4接種于96孔板中。CO2培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)24h后加藥，分別設(shè)空白對(duì)照組、蘆薈多糖5個(gè)劑量組、5-Fu組，設(shè)3個(gè)平行復(fù)孔。每 孔加入相應(yīng)的藥物，使藥物終濃度分別為100、10、1、0. 1及0. Olmg · L^^-Fu的終濃度為 25!^·!^，空白對(duì)照組加入等體積的PBS。培養(yǎng)24h后，MTT法測(cè)定細(xì)胞活力。酶標(biāo)儀測(cè)定 570nm處OD值，按下式計(jì)算腫瘤細(xì)胞抑制率抑制率％ =(對(duì)照組OD值-給藥組OD值)/ 對(duì)照組OD值X 100%。結(jié)果見表3表3、蘆薈多糖對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721增殖的影響(χ士s，η = 3) 注:*P < 0. 05，** 實(shí)施例4、聯(lián)合應(yīng)用提高藥效的用途對(duì)數(shù)生長期肝癌細(xì)胞SMMC-7721，細(xì)胞數(shù)為3 X IO4接種于96孔板中。CO2培養(yǎng)箱 中培養(yǎng)24h后加藥，分別設(shè)空白對(duì)照組、蘆薈多糖分別與順鉬(DDP)和5氟嘧啶(5-FU)聯(lián)合用藥組，設(shè)3個(gè)平行復(fù)孔。每孔加入相應(yīng)的藥物，兩藥聯(lián)用時(shí)采用1 1方案，配置藥物終濃度為實(shí)驗(yàn)所需濃度。具體濃度聯(lián)合如下AP/DDP 1. 25/1. 5625 2. 5/3. 125 5. 0/6. 25 10. 0/12. 5 20. 0/25AP/5-FU 1. 25/15. 625 2. 5/31. 25 5. 0/62. 5 10. 0/125. 0 20. 0/250培養(yǎng)24h后，MTT法測(cè)定細(xì)胞活力。酶標(biāo)儀測(cè)定570nm處OD值，按下式計(jì)算腫瘤 細(xì)胞抑制率抑制率％=(對(duì)照組OD值-給藥組OD值)/對(duì)照組OD值X 100%。結(jié)果見 表4，表5。表4、不同濃度蘆薈多糖與DDP聯(lián)合對(duì)SMMC-7721細(xì)胞生長的影響(η = 10) AJ/~DDP (μ^Δ )"ODvaiue —MiibItionraje7%"~—..ICgp..(μ /η ) 注:a vs control group, P < 0. 05 ；b vs 實(shí)驗(yàn)組，P < 0. 05.表5、不同濃度蘆薈多糖與5-FIJ聯(lián)合對(duì)SMMC-7721細(xì)胞生長的影響(η = 10) 注:a vs control group, P < 0. 05 ；b vs 實(shí)驗(yàn)組，P < 0. 05。
權(quán)利要求
蘆薈多糖藥理新用途，其特征在于將蘆薈多糖應(yīng)用于制備抗肝癌細(xì)胞增殖的藥物，或與其他抗腫瘤藥物組合制備減少化療藥物毒副作用，或與其他抗腫瘤藥物組合制備減少化療藥物毒副作用，提高抗腫瘤藥物效果的復(fù)方制劑。動(dòng)物移植瘤的體內(nèi)抗腫瘤和體外抑制肝癌細(xì)胞增殖的應(yīng)用，通過與順鉑類抗腫瘤藥物聯(lián)合應(yīng)用，提高抗腫瘤效果。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘆薈多糖藥理新用途，其特征在于蘆薈多糖為百合科植物， 庫拉索蘆薈和木立蘆薈(Aloe arboresecens Miller)或其他近緣植物中提取分離得到的 多糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的蘆薈多糖藥理新用途，其特征在于所述的蘆薈多糖的 來源為庫拉索聲菩(Aloe barbadensis Miller)、木立聲菩(Aloe arboresecens Miller)、 元江蘆薈(Aloe yuan-jiangensis)、華蘆薈(Aloe chinenesis)及其他近緣植物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘆薈多糖藥理新用途，其特征在于給藥途徑包括外用、口 服和注射給藥；給藥劑型為片劑、散劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑、糖漿劑、口服液、乳劑、納米 粒、脂質(zhì)體、軟膏齊IJ、貼劑、注射劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蘆薈多糖藥理新用途，其特征在于，所述蘆薈多糖給藥劑量， 小鼠的劑量為2. Og. kg—1 4. 0g. kg—1，健康成人用劑量為20g 50g/日。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的蘆薈多糖藥理新用途，其特征在于在組方制劑中，蘆薈 多糖占0. 0001%— 99. 9%重量。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了蘆薈多糖藥理新用途，將蘆薈多糖應(yīng)用于制備抗肝癌細(xì)胞增殖的藥物，或與其他抗腫瘤藥物組合制備減少化療藥物臨床毒副作用，提高抗腫瘤藥物效果的復(fù)方制劑。所述的蘆薈多糖為百合科植物，來源于庫拉索蘆薈、木立蘆薈、元江蘆薈、華蘆薈及其他近緣植物。采用肝癌小鼠移植瘤體內(nèi)模型和體外細(xì)胞增殖的方法，發(fā)現(xiàn)了蘆薈多糖在體內(nèi)外抑制腫瘤細(xì)胞增殖，抑制腫瘤細(xì)胞生長的作用，與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用，提高療效，減少毒副作用。本發(fā)明可用于蘆薈多糖及其藥物組合物開發(fā)為臨床治療肝癌的藥物。
文檔編號(hào)A61K31/715GK101879180SQ20091005717
公開日2010年11月10日 申請(qǐng)日期2009年5月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月6日
發(fā)明者劉萍, 唐帥, 邱琳 申請(qǐng)人:邱琳;唐帥;劉萍