專利名稱：：對組胺h3受體具有親和性的哌嗪衍生物的制作方法對組胺H3受體具有親和性的脈嗪衍生物發(fā)明背景本發(fā)明涉及新的具有藥理學(xué)活性的哌嗪衍生物，它的制備方法，含有它的組合物以及它在治療神經(jīng)或精神疾病例如認(rèn)知缺損如阿爾茨海默氏病中的認(rèn)知缺損中的用途。組胺H3受體主要在哺乳動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中表達(dá)，除在一些交感神經(jīng)上夕卜，其在外周組織中的表達(dá)極少(Leurs等，(1998)，TrendsPharmacol.Sci.19，177-183)。通過選擇性激動劑或組胺對H3受體的激活導(dǎo)致抑制神經(jīng)遞質(zhì)從各種不同神經(jīng)群包括組胺能神經(jīng)元和膽堿能神經(jīng)元中釋放(Schlicker等，(1994)，F(xiàn)undam.Clin.Pharmacol.8,128-137)。此外，體外和體內(nèi)研究已經(jīng)表明，H3拮抗劑可以促進(jìn)大腦區(qū)域如大腦皮層和海馬中神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，這些區(qū)域與認(rèn)知有關(guān)(Onodera等，(1998)，In=TheHistamineH3receptor,edLeurs禾口Timmerman,pp255_267,ElsevierScienceB.V.)。此夕卜，文獻(xiàn)中有許多報道證實了H3拮抗劑(例如噻普酰胺、clobenpropit、ciproxifan和GT-2331)在包括五種選擇任務(wù)、目標(biāo)識別、高架十字型迷宮(elevatedplusmaze)、獲取新任務(wù)和被動躲避在內(nèi)的嚙齒動物模型中具有改善認(rèn)知的特性(Giovanni等人，(1999)，Behav.BrainRes.104,147-155)。組胺H3受體拮抗劑GSK189254在口服給藥于大鼠后抑制來自活體的在大鼠皮質(zhì)中結(jié)合的[3H]R-a_甲基組胺，并且在一定的口服劑量下改善大鼠的下列認(rèn)知示例的行為被動躲避、水迷宮、目標(biāo)識別和注意定勢轉(zhuǎn)移(attentionalsetshift)(A.D.Medhurst等，J.Pharmacol.Exp.Therap.，2007，321(3)，1032-1045.)。這些數(shù)據(jù)表明，新的H3拮抗劑和/或反激動劑可以在神經(jīng)疾病如阿爾茨海默氏病或相關(guān)的神經(jīng)變性疾病中用于治療認(rèn)知缺損。WO2005/040144A1(GlaxoGroupLimited)公開了一系列對組胺H3受體具有親和性的，并且為組胺H3受體的拮抗劑和/或反激動劑的1-苯甲?；鵢取代的二氮雜環(huán)庚烷基衍生物。WO2005/040144A1的實施例10公開了1_(異丙基)_4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}六氫-1H-1，4-二氮雜革鹽酸鹽WO2004/037801Α1(JanssenPharmaceutica，N.V.)公開了一系列具有調(diào)節(jié)組胺受體特別是組胺H3受體活性能力的哌嗪基和二氮雜環(huán)庚烷基苯甲酰胺和硫代苯甲酰胺。WO2004/101546A1(GlaxoGroupLimited)公開了大量(哌啶_4_羰基)-哌嗪衍生物和(哌啶-4-羰基)-[1，4]-二氮雜環(huán)庚烷衍生物，其對組胺H3受體具有親和性的，并且為組胺H3受體的拮抗劑和/或反激動劑。WO03/004480A2(NovoNordiskA/S禾口BoehringerIngelheimInternationalGmbH)公開了一系列對組胺H3受體具有結(jié)合親和性的取代的哌嗪和二氮雜環(huán)庚烷。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了化合物或其鹽，其對組胺H3受體具有親和性的，并且為組胺H3受體的拮抗劑和/或反激動劑。第一方面，本發(fā)明提供了1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪，或其鹽。圖1是1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1的X-射線粉末衍射(XRPD)譜圖，其以2Θ角(單位為度)表示，其是采用利用銅Ka(copperK-alpha)X-射線的衍射計獲得的，步長為0.0167°2θ，每步時間為31.75秒，并使用裝在硅晶片板上的樣品。圖2是1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2的X-射線粉末衍射(XRPD)譜圖，其以2Θ角(單位為度)表示，其是采用利用銅Ka(copperK-alpha)X-射線的衍射計獲得的，步長為0.0167°2θ，每步時間為31.75秒，并使用裝在硅晶片板上的樣品。圖3是1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1(頂部)和晶型2(底部)的XRPD譜圖的重疊式譜圖。圖4是1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1的傅里葉變換紅外(FT-IR)譜圖，其顯示的為4000至675CHT1光譜區(qū)范圍內(nèi)的譜圖。圖5是1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1的傅里葉變換紅外(FT-IR)譜圖，其顯示的為2000至675CHT1光譜區(qū)范圍內(nèi)的譜圖。圖6是1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2的傅里葉變換紅外(FT-IR)譜圖，其顯示的為4000至675CHT1光譜區(qū)范圍內(nèi)的譜圖。圖7是1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2的傅里葉變換紅外(FT-IR)譜圖，其顯示的為2000至675CHT1光譜區(qū)范圍內(nèi)的譜圖。圖8是1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1(頂部)和晶型2(底部)的FT-IR譜圖的重疊式譜圖，其顯示的為2000至675CHT1光譜區(qū)范圍內(nèi)的譜圖。圖9是1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1(頂部)和晶型2(底部)的13C固態(tài)核磁共振(固態(tài)NMR)譜圖的重疊式譜圖。圖10是顯示通過特定地結(jié)合于受體的放射性配體的減少，可測定受體在體內(nèi)如何占據(jù)測試化合物(“藥物候選物”)的圖解。Ba是有效的受體位點的濃度。注意Ba在基線和給藥測試化合物后10分鐘、2.5小時、6小時之間如何變化，這是由于在組織中存在不同濃度的藥物候選物。圖11是顯示豬-PET實驗設(shè)計的圖解，其測定了H3受體占據(jù)1_(1_甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(“鹽A”，本發(fā)明的化合物)和1-(異丙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}六氫-1H-1，4-二氮雜革鹽酸鹽(“鹽B”，對比化合物)。圖12中的A圖顯示在靜脈內(nèi)給藥于豬50微克/kg后，1-(1_甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(“鹽A”，本發(fā)明的化合物，實心的圓形)和1-(異丙基)_4-{[4-(四氫-2!1-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}六氫-1H-1，4-二氮雜革鹽酸鹽(“鹽B”，對比化合物，實心的菱形)隨時間推移的平均(均值)血漿濃度的曲線圖。圖12中的B圖顯示將鹽A或鹽B以50微克/kg靜脈內(nèi)給藥于豬后，在體內(nèi)豬-PET研究過程中三個時間點測量的H3受體占據(jù)時間過程的平均值(均值)的曲線圖，并且將kon-koff限制模型擬合成，對于本發(fā)明的“鹽Α”(測定結(jié)果為實心的圓形，并且模型擬合為實線)，對于對比化合物“鹽B”(測定結(jié)果為實心的菱形，并且模型擬合為虛線)。圖13中的A和B部分分別顯示了“鹽A”(單獨的)隨時間推移的平均(均值)血漿濃度和平均(均值)H3受體占據(jù)時間過程，其如圖12的A和B圖的部分中所示。圖13中的C和D部分分別顯示了“鹽B”(單獨的)平均(均值)血漿濃度和平均(均值)H3受體占據(jù)時間過程，其如圖12的A和B圖的部分中所示。圖14顯示就所研究的每只個體豬而言的個體血漿濃度和H3受體占據(jù)時間過程的一系列的圖，其是圖12和13中所示的均值測量結(jié)果所獲得的數(shù)據(jù)，針對1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(“鹽A”，本發(fā)明的化合物，左手邊的圖，η=3)，并且針對1-(異丙基)-4-{[4-(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}六氫-1Η-1，4-二氮雜革鹽酸鹽(“鹽B”，對比化合物，右手邊的圖，η=3)。發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明提供了化合物或其鹽，其對組胺Η3受體具有親和性的，并且為組胺Η3受體的拮抗劑和/或反激動劑。第一方面，本發(fā)明提供了1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2Η-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其鹽。在包括口服給藥于大鼠或豬1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪(以其鹽酸鹽的形式)的初步實驗中，在大鼠和豬中已顯示出腦組胺Η3受體占據(jù)的某些時間過程(隨時間的衰變)(參見大鼠離體結(jié)合研究以及下文中的豬-PET研究)，其表明1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽對于人的醫(yī)藥用途，特別是在治療人中的認(rèn)知缺損如阿爾茨海默氏病中的認(rèn)知缺損中具有某些合適的特性。在本發(fā)明的上下文中，所涉及的1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪(“游離堿”)或其鹽包括游離堿或其鹽的溶劑化物和水合物。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪(“游離堿”)。由于它在藥品中的潛在用途，1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的鹽優(yōu)選是其藥學(xué)上可接受的鹽，特別是其藥學(xué)上可接受的酸加成鹽ο1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫_2!1-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的藥學(xué)上可接受的酸加成鹽包括氫溴酸鹽(如單氫溴酸鹽)、鹽酸鹽(如單鹽酸鹽)、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、甲酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乳酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、谷氨酸鹽、天冬氨酸鹽、對甲苯磺酸鹽、苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、萘磺酸鹽(如2-萘磺酸鹽)、或己酸鹽。這種鹽通常可通過下面方法形成將化合物與合適的酸任選在合適的溶劑如有機溶劑中混合，得到該鹽，其可例如通過結(jié)晶和過濾，通常隨后進(jìn)行干燥而分離出來。本發(fā)明包括在其范圍內(nèi)所有可能的化學(xué)計量和非化學(xué)計量形式的本發(fā)明化合物的鹽，包括水合物和溶劑化物。在一個優(yōu)選實施方案中，該化合物或鹽為鹽酸鹽形式，1-(1_甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽，典型地為單鹽酸鹽。1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽，例如單鹽酸鹽可為固體形式，特別是晶型，更特別是晶型1或晶型2。因此，本發(fā)明還提供了1-(1-甲基乙基)_4-{[4-(四氫-2!1-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽如單鹽酸鹽的晶型1(下文稱作“晶型1”)。1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽如單鹽酸鹽的晶型1，其特征在于X-射線粉末衍射(XRPD)譜圖具有五個或更多，例如八個或更多，例如所有的下列峰，所述峰定義為°2θ角，其是采用利用銅Kα(copperK-alpha)X-射線的衍射計獲得的6.4士0.1，12.7士0.1，15.4士0.1，15.7士0.1，17.1士0.1，19.1士0.1,19.7士0.1，21.9士0.1,25.5士0.1，27.0士0.1，和28.2士0.1°2θ；條件是X-射線粉末衍射譜圖具有下列兩個峰15.7士0.1和25.5士0.1°2Θ?？蛇x擇地或另外地，本發(fā)明提供了1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽如單鹽酸鹽的晶型1，其特征在于X-射線粉末衍射(XRPD)譜圖基本上與圖1所示的相同，其以2θ角(單位為度)表示，其是采用利用銅Ka(copperK-alpha)X-射線的衍射計獲得的。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了晶型1，其特征在于本文中所定義的XRPD譜圖峰基本上與圖1所示的相同和/或其特征在于XRPD譜圖基本上與圖1所示的相同，并且另外的特征在于其是利用衍射計獲得的，使用步長為0.0167°2θ或更小，和/或每步時間為31.75秒或更長，和/或使用裝在硅晶片板上的樣品?？蛇x擇地或另外地，本發(fā)明提供了1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽如單鹽酸鹽的晶型1，其特征在于固體形式的傅里葉變換紅外(FT-IR)譜圖基本上與圖5所示的相同。圖5顯示了在2000至675CHT1光譜區(qū)范圍內(nèi)的晶型1的FT-IR譜圖。該FT-IR譜圖例如可以使用NicoletAvatar360FT-IR光譜儀測定，和/或例如可以4CHT1或2CHT1分辨率測定。每個峰允許有約士2CHT1的變化?？蛇x擇地或另外地，本發(fā)明提供了1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽如單鹽酸鹽的晶型1，其特征在于13C固態(tài)核磁共振(固態(tài)NMR)譜圖具有下列共振現(xiàn)象的化學(xué)位移18.5士0.3、30.4士0.3、31.8+0.3,37.6+0.3,45.8+0.3,49.4+0.3,52.3+0.3,59.2+0.3,63.6+0.3,68.4士0.3、110.3士0.3、118.8士0.3、128.4士0.3、131.2士0.3、133.9士0.3、159.1士0.3和167.6士0.3ppm。該固態(tài)NMR譜圖可例如在90.55MHz頻率的13C觀測下，例如使用4_mmBrukerHFXMAS(魔角旋轉(zhuǎn))探針，在296K溫度下，和/或例如使用8kHz的自旋速度獲得。數(shù)據(jù)可例如使用具有旁帶抑制的交叉極化序列獲得。在掃描過程中可使用10秒的弛豫衰減時間。在一個實施方案中，根據(jù)晶型純度，本發(fā)明的鹽酸鹽基本上(例如60重量或摩爾％或更多，或者70重量或摩爾％或更多，或者80重量或摩爾％或更多)為晶型1。本發(fā)明還提供了1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽如單鹽酸鹽的晶型2(下文稱作“晶型2”)。不受理論的限制，晶型2比晶型1表現(xiàn)出更好的熱力學(xué)穩(wěn)定性，其可獲得貯存、制劑和/或使用方面的某些優(yōu)勢。1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽如單鹽酸鹽的晶型2，其特征在于X-射線粉末衍射(XRPD)譜圖具有五個或更多，例如八個或更多，例如所有的下列峰的，所述峰定義為。2Θ角，其是采用利用銅Ka(copperK-alpha)X-射線的衍射計獲得的6.4士0.1，12.8士0.1，15.4士0.1，19.2士0.1，19.7士0.1,20.0士0.1,21.8士0.1，21.9士0.1，23.5士0.1,24.65士0.1(或24.7士0.1)，25.8士0.1和27.0士0.1°2θ；條件是X-射線粉末衍射譜圖具有下列兩個峰20.0士0.1°2Θ，以及24.65士0.1或24.7士0.1°2Θ。可選擇地或另外地，本發(fā)明提供了1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽如單鹽酸鹽的晶型2，其特征在于X-射線粉末衍射(XRPD)譜圖基本上與圖2所示的相同，其以2θ角(單位為度)表示，其是采用利用銅Ka(copperK-alpha)X-射線的衍射計獲得的。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了晶型2，其特征在于本文中所定義的XRPD譜圖峰基本上與圖2所示的相同和/或其特征在于XRPD譜圖基本上與圖2所示的相同，并且另外的特征在于其是利用衍射計獲得的，使用步長為0.0167°2θ或更小，和/或每步時間為31.75秒或更長，和/或使用裝在硅晶片板上的樣品?？蛇x擇地或另外地，本發(fā)明提供了1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽如單鹽酸鹽的晶型2，其特征在于固體形式的傅里葉變換紅外(FT-IR)譜圖基本上與圖7所示的相同。圖7顯示了在2000至675CHT1光譜區(qū)范圍內(nèi)的晶型2的FT-IR譜圖。該FT-IR譜圖例如可以使用NicoletAvatar360FT-IR光譜儀測定，和/或例如可以4cm—1或2cm—1分辨率測定。每個峰允許有士2cm—1如士IcnT1的變化?？蛇x擇地或另外地，本發(fā)明提供了1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽如單鹽酸鹽的晶型2，其特征在于13C固態(tài)核磁共振(固態(tài)NMR)譜圖具有下列共振現(xiàn)象的化學(xué)位移18.8士0.3、19.5士0.3、32.4+0.3,37.5+0.3,45.7+0.3,49.3+0.3,52.7+0.3,59.1+0.3,66.3+0.3,71.1士0.3、109.4士0.3、119.6士0.3、128.4士0.3、131.3士0.3、134.3士0.3、158.7士0.3和167.8士0.3ppm。固態(tài)NMR譜圖可例如在90.55MHz頻率的13C觀測下，例如使用4_mmBrukerHFXMAS(魔角旋轉(zhuǎn))探針，在296K溫度下，和/或例如使用8kHz的自旋速度獲得。數(shù)據(jù)可例如使用具有旁帶抑制的交叉極化序列獲得。在掃描過程中可使用10秒的弛豫衰減時間。根據(jù)晶型純度，本發(fā)明的鹽酸鹽合適地可基本上(例如70重量或摩爾％或更多，或者80重量或摩爾％或更多，或者90重量或摩爾％或更多，或者95重量或摩爾％或更多)為晶型2。合成方法本發(fā)明還提供了制備1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其鹽(如可藥用鹽)的方法，所述方法包括a)使4_(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯甲酰氯與1_異丙基哌嗪反應(yīng)；或者b)使4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸或其非?；妊苌?其中所述羧酸基團(tuán)已經(jīng)被活化)與1-異丙基哌嗪反應(yīng)；并任選地制備1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的鹽(例如可藥用鹽)。方法(a)典型地包括使用酰胺形成條件，在合適的堿如三乙胺或負(fù)載型固體堿(例如二乙基氨基甲基聚苯乙烯)存在下，在合適的溶劑例如非水有機溶劑如二氯甲烷中，在合適的溫度例如由約-10°c至約40°C如室溫下。在方法(a)的一個具體實施方案中，力口入催化量的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)以催化該反應(yīng)。在該合成方法中，室溫(環(huán)境溫度)通常為12-35°C，例如18_30°C或18_25°C，如約22°C。方法(b)典型地包括例如在合適的溶劑例如極性非質(zhì)子有機溶劑如N，N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜、乙腈或丙腈中，使用偶合劑來活化4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸，隨后與1-異丙基哌嗪反應(yīng)。在一個實施方案中，偶合劑是有機的二取代的碳化二亞胺，例如1-(3_二甲基氨基丙基)-3_乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)或二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)，在該情況下該反應(yīng)可任選在1-羥基苯并三唑(HOBT)存在下，和/或反應(yīng)溶劑可例如為N，N-二甲基甲酰胺，和/或反應(yīng)溫度可例如在由約0°C至約40°C如室溫下進(jìn)行。在方法(b)中，在一個實施方案中，偶合劑為羰基二咪唑、特戊酰氯(三甲基乙酰氯)或2-丙基磷酸酐。然而，對于使用偶合劑來活化4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸，特別是對于在中等規(guī)?；虼笠?guī)模進(jìn)行的方法，優(yōu)選偶合劑為羰基二咪唑(CDI)。在中等規(guī)?；虼笠?guī)模下，與使用特戊酰氯(三甲基乙酰氯)或2-丙基磷酸酐作為偶合劑相比，使用羰基二咪唑作為偶合劑被認(rèn)為可得到更好的產(chǎn)率和/或更完全的反應(yīng)。在方法(b)中，更特別地，使用羰基二咪唑偶合劑活化4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸，并隨后與1-異丙基哌嗪反應(yīng)，兩步都在包括乙腈和/或丙腈，更優(yōu)選乙腈的反應(yīng)溶劑(或者在一個具體的實施方案中，基本上由乙腈和/或丙腈，更優(yōu)選乙腈組成的反應(yīng)溶劑)中進(jìn)行。當(dāng)使用羰基二咪唑(⑶I)作為活化4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸的偶合劑時，在與1-異丙基哌嗪反應(yīng)后，然后反應(yīng)條件可特別為下面獨立的條件或下面任何條件的組合-羰基二咪唑典型地以0.5至1.5mole當(dāng)量(以4_(四氫_2H_吡喃_4_基氧基)苯甲酸的摩爾數(shù)為基準(zhǔn))，合適地以0.9至1.Imole當(dāng)量，優(yōu)選1.0至1.Imole當(dāng)量例如1.Imole當(dāng)量存在；和/或-1-異丙基哌嗪典型地以0.5至1.5mole當(dāng)量(以4_(四氫_2H_吡喃_4_基氧基)苯甲酸的摩爾數(shù)為基準(zhǔn))，合適地以1.0至1.25mole當(dāng)量，優(yōu)選1.1至1.2mole當(dāng)量例如1.15或1.2mole當(dāng)量存在；和/或-該反應(yīng)(使用CDI活化4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸的反應(yīng)，或者隨后與ι-異丙基哌嗪的反應(yīng)，或者這兩個反應(yīng)都)典型地在合適的有機溶劑如極性非質(zhì)子有機溶劑中，例如在包括乙腈、丙腈、二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)和/或1，4_二噁烷的溶劑(例如基本上由乙腈、丙腈、二甲亞砜、N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、N-甲基吡咯烷酮(NMP)和/或1，4_二噁烷組成的溶劑)中進(jìn)行；優(yōu)選地反應(yīng)溶劑包括乙腈和/或丙腈，更優(yōu)選乙腈(例如基本上由乙腈和/或丙腈，更優(yōu)選乙腈組成)；和/或-反應(yīng)溶劑典型地為干燥的，盡管有時候可以允許反應(yīng)溶劑中存在少量的水；和/或-當(dāng)反應(yīng)溶劑為乙腈或丙腈時，反應(yīng)溫度(或者對于使用羰基二咪唑活化4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸的反應(yīng)，或者對于隨后的與1-異丙基哌嗪的反應(yīng)，或者這兩個反應(yīng)都)可例如為由約0°C至溶劑的沸點或回流溫度。活化反應(yīng)的溫度可例如在約20至約40°C范圍內(nèi)(例如約30°C)，隨后例如在約20°C至反應(yīng)溶劑的沸點或回流溫度(例如約40至約60°C，例如約50°C)下與1-異丙基哌嗪反應(yīng)；該低的活化反應(yīng)溫度可有助于最大極限的增加產(chǎn)率，這是因為減少了CDI分解，但認(rèn)為活化反應(yīng)后任何殘余的過量CDI然后更有可能與后來加入的1-異丙基哌嗪反應(yīng)以形成很難除去的雜質(zhì)，其被認(rèn)為是ι-異丙基-哌嗪-4-基-C(0)-咪唑或其鹽。因此，為了有可能地減少該雜質(zhì)，一般認(rèn)為例如優(yōu)選在約50°C至反應(yīng)溶劑的沸點/回流溫度或者約60°C至沸點/回流溫度(例如約60至約70°C，例如65至70°C，例如在乙腈溶劑中)下，使用羰基二咪唑來活化4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸，并任選還將該溫度范圍(約50°C至沸點/回流溫度例如約60至約70°C)作為隨后的與1-異丙基哌嗪的反應(yīng)的溫度；和/或-4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸和羰基二咪唑典型地一起反應(yīng)(例如在攪拌下)至少0.5小時，合適的至少2小時，例如0.5至5小時如0.5至3小時，例如2至5小時，或2至3小時，隨后將1-異丙基哌嗪與活化的4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸混合；和/或-通過羰基二咪唑活化4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸所得到的產(chǎn)物與1-異丙基哌嗪典型地一起反應(yīng)(例如在攪拌下)至少0.5小時(例如0.5至24小時)，合適的至少1小時(例如1至3小時)，例如至少2小時(例如2至3小時)。用于制備1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪的鹽(例如鹽酸鹽)的一般方法為了制備、結(jié)晶和分離本發(fā)明化合物的鹽(例如鹽酸鹽)，在一個實施方案中，在使用偶合劑(例如羰基二咪唑)活化4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸后，使該活化的酸與1-異丙基哌嗪在反應(yīng)溶劑例如乙腈或丙腈中所進(jìn)行的反應(yīng)結(jié)束時，可進(jìn)行下列的方法-在減壓下將反應(yīng)溶劑(例如乙腈或丙腈)的體積減少至例如約2-5體積，例如約3體積，和-然后將合適的用于形成鹽的酸(例如HCl)在合適的溶劑(例如如下所定義的結(jié)晶溶劑例如異丙醇)中的溶液(例如為了制備鹽酸鹽其可為HCl的異丙醇溶液，例如5至6NHCl的異丙醇溶液，例如約0.9體積的該溶液)加入到反應(yīng)混合物中；合適的用于形成鹽的酸例如HCl優(yōu)選地以0.5至1.3mole當(dāng)量，例如0.85至1.05mole當(dāng)量，例如1.Omole當(dāng)量加入(以所用的4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸的摩爾數(shù)為基準(zhǔn))，和-優(yōu)選地，在加入合適的用于形成鹽的酸之前或之后或同時加入結(jié)晶溶劑(其中該結(jié)晶溶劑可例如包括或可為醇，該醇為(V3醇或正丁醇(包括不同醇的混合物)，例如異丙醇、正丙醇、正丁醇、乙醇或甲醇；水和醇的混合物，該醇為Ch醇或正丁醇，例如異丙醇水，乙醇水，或甲醇冰；乙酸異丙酯；乙酸乙酯；C3_6酮例如甲基異丁基酮(MIBK)、甲基乙基酮、或丙酮；乙腈；或二氯甲烷；并且其中該結(jié)晶溶劑合適地包括或為醇，該醇為Cm醇或正丁醇(包括不同醇的混合物)，或水和醇的混合物，該醇為Cu醇或正丁醇；例如優(yōu)選為異丙醇、異丙醇水，例如約2-10%如約2-5%如約5%的水的異丙醇溶液，或者乙醇水，例如約1-5%的水的乙醇或工業(yè)用甲醇變性酒精的溶液)(例如可加入例如6至20體積，例如約12體積的結(jié)晶溶劑)，和-包括鹽(例如HCl鹽)產(chǎn)物的含溶劑的混合物于或加熱至約50°C至溶劑的沸點或回流溫度(例如約50-75°C，例如約60-70°C，例如約60_65°C)，和-使或引起1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪的鹽(例如鹽酸鹽)從熱的混合物中結(jié)晶或重結(jié)晶(例如通過冷卻該熱的混合物)，和-1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的結(jié)晶鹽(例如鹽酸鹽)從溶劑中分離出來(例如通過過濾)，并通常進(jìn)行干燥(例如通過在減壓下于約40-6(TC例如約50°C進(jìn)行干燥，或例如通過在室溫下干燥，例如在抽吸下或在氣流如空氣或氮氣流下干燥)。對于1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的鹽酸鹽(例如單鹽酸鹽)，不受理論的限制，根據(jù)上述對于不同類型的HCl-鹽的形成和結(jié)晶的初步試驗，顯示出晶型1經(jīng)常易于為鹽形成方法中的動力學(xué)產(chǎn)物，并且晶型2為熱力學(xué)產(chǎn)物(即熱力學(xué)上更穩(wěn)定的產(chǎn)物)。取決于條件(例如溶劑的種類以及晶型1在其中的溶解性，和/或溫度和/或溫度時間過程，和/或晶型1與溶劑的接觸時間)，常常最初形成晶型1(或晶型1占多數(shù))，然后當(dāng)晶型1與合適的溶劑(即用于將晶型1轉(zhuǎn)化為晶型2的合適的溶劑)接觸時，通?？蓪⒕?或多或少地轉(zhuǎn)化為晶型2。因此，本發(fā)明一方面提供了一種用于制備1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(例如單鹽酸鹽)的晶型2的方法，該方法包括通過將晶型1與合適的轉(zhuǎn)化溶劑接觸(例如通過將晶型1在合適的轉(zhuǎn)化溶劑中制成漿料)足夠長的時間和/或處于足夠高的溫度以實現(xiàn)晶型1到晶型2的轉(zhuǎn)化，從而使晶型1轉(zhuǎn)化為晶型2。該合適的轉(zhuǎn)化溶劑典型地包括(例如基本上由下列溶劑組成)醇或正丁醇或水和醇的混合物，該醇為C"醇或正丁醇。實現(xiàn)該轉(zhuǎn)化所需的時間和/或溫度可例如取決于溶劑和晶型1在其中的溶解性。在該轉(zhuǎn)化方法中，根據(jù)晶型的純度，該方法的結(jié)晶產(chǎn)物合適地基本上(例如70重量或摩爾(molarity)%或更多，或80重量或摩爾％或更多，或90重量或摩爾％或更多，或95重量或摩爾％或更多)為晶型2的形式。為了制備1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1，-上述形成HCl鹽的方法合適地使用結(jié)晶溶劑如包括下列的溶劑而_3醇或正丁醇或水和醇的混合物，該醇為C"醇或正丁醇，特別是異丙醇、正丙醇、正丁醇、乙醇或其混合物，和-形成HCl鹽后，使或引起I-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫_2H_吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(例如單鹽酸鹽)從熱的混合物中，通過用2-4小時或更少的時間(例如用1.5-3小時或更少的時間，例如用約1.5小時)(該時間是從開始結(jié)晶時測定的)冷卻該熱的混合物至例如約0至約25°C來結(jié)晶，和-在與溶劑接觸不超過6小時(優(yōu)選不超過4小時，例如不超過2-3小時，例如約1.5小時)(該時間是從開始結(jié)晶時測定的)后，將包含晶型1的1-(1_甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的結(jié)晶鹽酸鹽從溶劑中分離出來。為了制備1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2，例如通過將晶型1轉(zhuǎn)化為晶型2，-⑴上述形成HCl鹽的方法使用結(jié)晶溶劑(例如醇，該醇為CV3醇或正丁醇(包括不同醇的混合物)，或水和醇的混合物，該醇為Ci_3醇或正丁醇，特別是異丙醇、正丙醇、正丁醇、乙醇、甲醇、異丙醇水，乙醇水，或甲醇水；優(yōu)選地為異丙醇，或異丙醇水如約2-10%例如約2-5%例如約5%水的異丙醇溶液，或乙醇水例如約1-5%水的乙醇或工業(yè)用甲醇變性酒精溶液)；和-(ii)(a)在結(jié)晶溶劑為甲醇、異丙醇水、正丙醇水、正丁醇水、乙醇水、或甲醇水的情況下，在形成1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(例如單鹽酸鹽)后，通過4小時或更多的時間(例如5-6小時或更多的時間)(該時間是從開始結(jié)晶時測定的)冷卻該熱的混合物至例如約0至約30°C使該鹽或引起該鹽從熱的混合物(例如于約50-75°C，例如約60-70°C，例如約60_65°C)中結(jié)晶或重結(jié)晶(優(yōu)選使用梯度冷卻)；并且任選地，在冷卻前，通過在約50°C至溶劑的沸點或回流溫度(例如于約50-75°C，例如約60-70°C，例如約60_65°C)下老化(ageing)鹽和溶劑的混合物(例如漿料)0.5小時或更長時間(例如1小時或更長時間，例如1-3小時，或2小時或更長時間，例如約2小時)(該時間是從開始結(jié)晶時測定的)；或者"(ii)(b)在結(jié)晶溶劑為乙醇、異丙醇、正丙醇或正丁醇的情況下，在形成1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(例如單鹽酸鹽)后，使該鹽或引起該鹽從熱的混合物中結(jié)晶或重結(jié)晶，并將鹽和溶劑的混合物(例如漿料)于約50°C至溶劑的沸點或回流溫度(例如于約50-75°C，例如約60-75°C，例如約60_70°C)下老化(ageing)6小時或更長時間(例如10小時或更長時間，例如15小時或更長時間，例如約18-24小時)(該時間是從開始結(jié)晶時測定的)；并然后將該熱的混合物冷卻至例如約0至約30°C，例如使用梯度冷卻；禾口-(iii)將基本上(例如80重量或摩爾(molarity)%或更多，或90重量或摩爾％或更多，或95重量或摩爾％或更多)為晶型2形式的1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的結(jié)晶鹽酸鹽從溶劑中分離出來(例如通過過濾)，并通常進(jìn)行干燥(例如通過在減壓下于約40-60°C例如約50°C進(jìn)行干燥，或例如通過在室溫下干燥，例如在抽吸下或在氣流如空氣或氮氣流下干燥)。合成方法，繼續(xù)4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酰氯(V)或4_(四氫_2H_吡喃_4_基氧基)苯甲酸(IV)可根據(jù)下面的方案進(jìn)行制備，其中P代表合適的保護(hù)基，例如CV6直鏈烷基(例如甲基、乙基、正丙基或正丁基)或異丙基或異丁基或芐基；例如甲基或乙基；特別是甲基。步驟⑴典型地包括使用膦如三苯基膦，在合適的溶劑如四氫呋喃、甲苯和/或二甲苯(其中“二甲苯”可為鄰-二甲苯、間-二甲苯、對-二甲苯、或上述二甲苯的混合物)中，隨后加入(例如緩慢加入和/或滴加)偶氮二甲酸酯如偶氮二甲酸二乙酯或偶氮二甲酸二異丙酯，在合適的溫度例如由室溫至約80°C，如室溫下。反應(yīng)時間(包括任何偶氮二甲酸酯的加入時間)可為例如0.5小時至72小時。當(dāng)使用四氫呋喃作為反應(yīng)溶劑時，可使用室溫，且反應(yīng)時間例如為3至72小時。當(dāng)反應(yīng)溶劑包括或基本上由甲苯和/或二甲苯，特別是甲苯組成時，可使用的反應(yīng)溫度為約40至約80°C，例如約40至約70°C，例如約55°C；和/或可使用的反應(yīng)時間(包括任何偶氮二甲酸酯的加入時間)為約0.5至6小時，例如0.5至3小時，例如1-2小時。在一個具體的實施方案中，反應(yīng)溶劑包括或基本上由甲苯和/或二甲苯，優(yōu)選甲苯組成，并且反應(yīng)步驟(i)使用三苯基膦和偶氮二甲酸二異丙酯；在該情況下，合適地可將加熱的(例如約40-70°C)反應(yīng)混合物冷卻(例如冷卻至-10至25°C，例如至約0-5°C，條件是不要將該混合物冷卻至溶劑的熔點或更低)例如0.5至2小時，并然后將生成的固體副產(chǎn)物例如通過過濾除去。使用甲苯作為反應(yīng)溶劑可有助于使三苯基氧膦和二異丙基胼二甲酸酯的副產(chǎn)物加合物從該溶液中結(jié)晶出來(特別是當(dāng)例如在冷卻后將該反應(yīng)混合物用該加合物種晶(seed)時)，其有助于減少粗產(chǎn)物(III)中的三苯基氧膦的含量。當(dāng)在反應(yīng)步驟(i)中使用甲苯和/或二甲苯作為溶劑時，在一個實施方案中，沒有分離式(III)的反應(yīng)產(chǎn)物化合物。任選地，在該實施方案中，式(III)化合物的甲苯和/或二甲苯溶液直接用于隨后的反應(yīng)(例如通過水解來脫保護(hù)基)步驟(ii)，特別是當(dāng)P代表(V6直鏈烷基(例如甲基、乙基、正丙基或正丁基)或異丙基或異丁基的時候，并且隨后的步驟(ii)包括堿(例如NaOH或K0H)水解該酯。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了制備式(III)化合物的方法，其中p代表保護(hù)基如cv6直鏈烷基(例如甲基、乙基、正丙基或正丁基)或異丙基或異丁基，或芐基(特別是Cm直鏈烷基或異丙基，例如甲基或乙基)，其中所述方法包括(i)使式⑴化合物與其中的0H被活化的式(II)的4-羥基四氫吡喃或其衍生物反應(yīng)，在式(I)中，P代表如式(III)化合物中所定義的保護(hù)基；其中該反應(yīng)步驟⑴在包括或基本上由甲苯和/或二甲苯(特別是甲苯)所組成的反應(yīng)溶劑中進(jìn)行。“二甲苯”可為鄰-二甲苯、間-二甲苯、對-二甲苯或上述二甲苯的混合物。在本發(fā)明的該方法中，使用包括甲苯和/或二甲苯的步驟(i)反應(yīng)溶劑，特別地對于步驟(i)的反應(yīng)條件可為文中對于一般合成方法中所述的步驟(i)的反應(yīng)條件。特別地，該反應(yīng)步驟(i)可使用三苯基膦和偶氮二甲酸二異丙酯。對于步驟(i)可使用的反應(yīng)溶劑包括甲苯和/或二甲苯，特別是甲苯，反應(yīng)溫度為約40至約80°C，例如約40至約70°C，例如約55°C;和/或反應(yīng)時間(包括任何偶氮二甲酸酯的加入時間)為約0.5至6小時，例如0.5至3小時，例如1-2小時。在一個特別的實施方案中，當(dāng)步驟⑴的反應(yīng)溶劑包括甲苯和/或二甲苯，優(yōu)選甲苯，且反應(yīng)步驟(i)使用三苯基膦和偶氮二甲酸二異丙酯時，可將該加熱的(例如約40-70°C)反應(yīng)混合物冷卻(例如冷卻至-10至25°C，例如冷卻至約0-5°C，條件是不要將該混合物冷卻至溶劑的熔點或更低)例如0.5至2小時，并然后將生成的固體副產(chǎn)物(三苯基氧膦和二異丙基胼二甲酸酯的加合物)例如通過過濾除去。具體地，例如在將反應(yīng)混合物冷卻后，可使用三苯基氧膦和二異丙基胼二甲酸酯的加合物將反應(yīng)混合物種晶(seed)。使用甲苯作為反應(yīng)溶劑可有助于使三苯基氧膦和二異丙基胼二甲酸酯的副產(chǎn)物加合物從該溶液中結(jié)晶出來(特別是當(dāng)例如在冷卻后將該反應(yīng)混合物用該加合物種晶(seed)時)，其有助于減少粗產(chǎn)物(III)中的三苯基氧膦的含量。對于本發(fā)明的用于制備式(III)化合物的方法，使用包括甲苯和/或二甲苯的步驟(i)反應(yīng)溶劑；本發(fā)明還提供了制備式(IV)化合物(其為4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸)的方法，所述方法包括-進(jìn)行步驟(i)，該步驟(i)使用包括或基本上由甲苯和/或二甲苯組成的反應(yīng)溶劑，并然后，-(ii)通過下面的方法將式(III)化合物轉(zhuǎn)化為式(IV)化合物；例如當(dāng)P代表(V6直鏈烷基(例如甲基、乙基、正丙基或正丁基)或異丙基或異丁基(特別是甲基或乙基)時，通過例如在堿性條件(例如使用氫氧化鈉或氫氧化鉀，例如氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液)下水解式(III)化合物中的酯，或者例如當(dāng)P代表芐基時，通過氫化將式(III)化合物轉(zhuǎn)化為式(IV)化合物。在本發(fā)明的此方法方面，還提供了一種制備1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其鹽的方法，所述方法包括-進(jìn)行步驟(i)，該步驟⑴使用包括或基本上由甲苯和/或二甲苯組成的反應(yīng)溶劑，然后，-(ii)例如按照文中所述的將式(III)化合物轉(zhuǎn)化為式(IV)化合物(其為4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸)；并然后-或者a)將4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸轉(zhuǎn)化為4_(四氫_2H_吡喃-4-基氧基)苯甲酰氯，并然后將其與1-異丙基哌嗪反應(yīng)；-或者b)使4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸與1-異丙基哌嗪反應(yīng)，或?qū)?_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸轉(zhuǎn)化為其非酰基氯衍生物(其中羧酸基團(tuán)已經(jīng)被活化)，并然后將其與1-異丙基哌嗪反應(yīng)；-并任選地制備1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的鹽(例如可藥用鹽)。步驟a)和/或b)可例如文中所述。步驟(ii)為脫保護(hù)基的反應(yīng)。當(dāng)P代表(V6直鏈烷基(例如甲基、乙基、正丙基或正丁基)或異丙基或異丁基(特別是甲基或乙基)時，該反應(yīng)典型地包括用合適的堿(例如堿的水溶液)如氫氧化鈉或氫氧化鉀(例如氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液)，在合適的溶劑如甲醇(例如當(dāng)P=Me時)，或乙醇(例如當(dāng)P=Et時)，或甲苯和/或二甲苯中；例如在合適的溫度如70-100°C(例如95°C或80°C)和/或在回流下處理例如1至24小時如2_6小時或2-3小時；典型地直到水解基本上完成時停止處理。在一個具體的實施方案中，當(dāng)步驟(ii)反應(yīng)溶劑為甲苯和/或二甲苯，且反應(yīng)包括用合適的堿水溶液如氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液處理時，該反應(yīng)包括有效地(例如劇烈地)攪拌或混合。在一個具體的實施方案中，步驟(i)中生成的包含式(III)化合物的甲苯和/或二甲苯溶液直接用于隨后的水解步驟(ii)，即不分離式(III)化合物，特別是當(dāng)隨后的步驟(ii)包括用堿(例如NaOH或K0H)來水解該酯的時候。特別地，步驟⑴和/或(ii)的反應(yīng)條件可如文中所述，例如反應(yīng)步驟(i)可使用三苯基膦和偶氮二甲酸二異丙酯。當(dāng)P代表芐基時，該脫保護(hù)基的反應(yīng)(ii)可包括氫化反應(yīng)。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了制備式(IV)化合物(其為4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸)的方法，其中所述方法包括(i)使式⑴化合物(其中P代表(V6直鏈烷基(例如甲基、乙基、正丙基或正丁基)或異丙基或異丁基(特別是甲基或乙基))與其中的0H被活化的式(II)的4-羥基四氫吡喃或其衍生物反應(yīng)來制備式(III)化合物(其中P具有與式(I)化合物相同的定義)，禾口(ii)例如在堿性條件(例如使用氫氧化鈉或氫氧化鉀，例如氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液)下水解式(III)化合物中的酯以形成式(IV)化合物，其中該反應(yīng)步驟⑴和(ii)都在包括或基本上由甲苯和/或二甲苯(特別是甲苯)組成的反應(yīng)溶劑中進(jìn)行?！岸妆健笨蔀猷?二甲苯、間-二甲苯、對-二甲苯，或這些二甲苯的混合物。在本發(fā)明該方法的一個具體實施方案中，步驟(i)中生成的式(III)化合物的甲苯和/或二甲苯溶液直接用于隨后的水解步驟(ii)，即不分離式(III)化合物，特別是當(dāng)隨后的步驟(ii)包括用堿(例如NaOH或K0H)來水解該酯的時候。特別地，步驟(i)和/或(ii)的反應(yīng)條件可如文中所述，例如反應(yīng)步驟(i)可使用三苯基膦和偶氮二甲酸二異丙酯。在本發(fā)明該方法的一個具體實施方案中，還提供了制備1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其鹽的方法，所述方法包括-進(jìn)行步驟⑴和(ii)，其中該反應(yīng)步驟⑴和(ii)都在包括或基本上由甲苯和/或二甲苯，例如上文中所述的溶劑所組成的反應(yīng)溶劑中進(jìn)行；并然后-或者a)將4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸轉(zhuǎn)化為4_(四氫_2H_吡喃-4-基氧基)苯甲酰氯，并然后將其與1-異丙基哌嗪反應(yīng)；-或者b)使4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸與1-異丙基哌嗪反應(yīng)，或?qū)?_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸轉(zhuǎn)化為其非?；妊苌?其中羧酸基團(tuán)已經(jīng)被活化)，并然后將其與1-異丙基哌嗪反應(yīng)；-并任選地制備1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的鹽(例如可藥用鹽)。步驟a)和/或b)可例如文中所述。步驟(iii)典型地包括用合適的氯化劑如草酰氯或亞硫酰氯，例如在合適的溶劑(例如非水有機溶劑)如二氯甲烷或乙酸乙酯(合適地為二氯甲烷)中，或(對于亞硫酰氯)不需要溶劑下，在合適的溫度如室溫下進(jìn)行處理。式⑴化合物可市售獲得(例如4-羥基苯甲酸甲酯是由Aldrich獲得的)，或它們可由市售獲得的化合物使用標(biāo)準(zhǔn)的方法制備得到。1-異丙基哌嗪和4-羥基四氫吡喃是市售獲得的，例如購自Aldrich。用途1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽對組胺H3受體具有親合性并且是組胺H3受體的拮抗劑和/或反激動劑，并例如具有潛在的治療用途。更特別地，1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽在治療或預(yù)防(特別是治療)下列疾病中具有潛在的用途-神經(jīng)疾病(neurologicaldiseases)(例如在哺乳動物如人中)；例如認(rèn)知缺損、認(rèn)知缺陷、阿爾茨海默氏病、癡呆(如路易體癡呆(Lewybodydementia)或血管性癡呆)、與年齡有關(guān)的記憶功能障礙、癲癇癥、偏頭痛、帕金森氏病、多發(fā)性硬化癥(包括疲勞)、疲勞(特別是多發(fā)性硬化癥中的疲勞、抑郁癥中的疲勞、癌癥中的疲勞或癌癥化療中的疲勞、或慢性疲乏綜合征)例如認(rèn)知和/或精神疲勞、中風(fēng)、神經(jīng)性來源的疼痛(例如神經(jīng)痛如皰疹后神經(jīng)痛、神經(jīng)炎、神經(jīng)性背痛、異常性疼痛等)、炎性痛(特別是慢性炎性痛例如骨關(guān)節(jié)炎中的疼痛或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的疼痛或炎性背痛；或急性炎性痛)或睡眠障礙(例如嗜睡病、白天睡眠過多、發(fā)作性睡眠、或與帕金森氏病相關(guān)的睡眠缺乏、多動腿綜合征和/或疲勞，特別是多發(fā)性硬化癥中的疲勞)；其中認(rèn)知缺損可為下列疾病中的認(rèn)知缺損阿爾茨海默氏病、癡呆(例如路易體癡呆或血管性癡呆)、輕度認(rèn)知缺損或相關(guān)的神經(jīng)變性疾病(arelatedneurodegenerativedisorder)；或帕金森氏病中的認(rèn)知缺損，或精神分裂癥中的認(rèn)知缺損；或-精神疾病(例如在哺乳動物如人中)；例如精神障礙(例如精神分裂癥或雙相性精神障礙)、注意力缺陷過動癥(attentiondeficithypereactivitydisorder)(ADHD)、抑郁癥(包括嚴(yán)重的抑郁性障礙)、焦慮癥或上癮；或-其他疾病(例如在哺乳動物如人中)；例如肥胖癥或胃腸道病癥。因此，本發(fā)明還提供了1-(1-甲基乙基)_4-{[4-(四氫-211-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽，其在治療或預(yù)防(特別是治療)上述任何疾病特別是認(rèn)知缺損，例如下列疾病中的認(rèn)知缺損例如阿爾茨海默氏病、癡呆(例如路易體癡呆或血管性癡呆)、輕度認(rèn)知缺損、或相關(guān)的神經(jīng)變性疾病，或帕金森氏病中的認(rèn)知缺損，或精神分裂癥中的認(rèn)知缺損；或疲勞；或睡眠障礙中用作治療物質(zhì)。本發(fā)明還提供了1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽，其在治療或預(yù)防(特別是治療)哺乳動物(例如嚙齒目動物例如大鼠或豬或人)例如人中的上述任何疾病特別是認(rèn)知缺損、疲勞或睡眠障礙中用作治療物質(zhì)。本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防(特別是治療)哺乳動物例如人中的上述任何疾病例如神經(jīng)疾病的方法，所述方法包括給藥于患者(需要該治療的哺乳動物)治療有效量的1-(1"甲基乙基)_4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽。本發(fā)明還提供了治療或預(yù)防(特別是治療)需要該治療的哺乳動物(例如嚙齒目動物例如大鼠或豬或人)例如人中的下列疾病的方法-認(rèn)知缺損；例如下列疾病中的認(rèn)知缺損例如阿爾茨海默氏病、癡呆(例如路易體癡呆或血管性癡呆)、輕度認(rèn)知缺損、或相關(guān)的神經(jīng)變性疾病，或帕金森氏病中的認(rèn)知缺損、或精神分裂癥中的認(rèn)知缺損；_或疲勞(特別是多發(fā)性硬化癥中的疲勞、抑郁癥中的疲勞、癌癥中的疲勞或癌癥化療中的疲勞、或慢性疲乏綜合征)；-或睡眠障礙(例如嗜睡病、白天睡眠過多、發(fā)作性睡眠、或與帕金森氏病有關(guān)的睡眠缺乏、多動腿綜合征和/或疲勞)；所述方法包括給藥于哺乳動物治療有效量的1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽。在另一方面，本發(fā)明提供了1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防(特別是治療)上述任何疾病特別是神經(jīng)疾病和/或特別是認(rèn)知缺損、疲勞或睡眠障礙的藥物中的用途。特別地，本發(fā)明提供了1-(1-甲基乙基)_4-{[4-(四氫-211-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防(特別是治療)哺乳動物(例如嚙齒目動物例如大鼠或豬或人)例如人中的上述任何疾病特別是神經(jīng)疾病和/或特別是認(rèn)知缺損、疲勞或睡眠障礙的藥物中的用途。更特別地，本發(fā)明提供了1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防(特別是治療)例如哺乳動物(例如嚙齒目動物例如大鼠或豬或人)例如人中的下列疾病的藥物中的用途-認(rèn)知缺損；例如下列疾病中的認(rèn)知缺損例如阿爾茨海默氏病、癡呆(例如路易體癡呆或血管性癡呆)、輕度認(rèn)知缺損、或相關(guān)的神經(jīng)變性疾病，或帕金森氏病中的認(rèn)知缺損，或精神分裂癥中的認(rèn)知缺損；_或疲勞(特別是多發(fā)性硬化癥中的疲勞、抑郁癥中的疲勞、癌癥中的疲勞或癌癥化療中的疲勞、或慢性疲乏綜合征)；-或睡眠障礙(例如嗜睡病、白天睡眠過多、發(fā)作性睡眠、或與帕金森氏病有關(guān)的睡眠缺乏、多動腿綜合征和/或疲勞)。藥物組合物、劑量和給藥方案當(dāng)在治療中被使用時，通常將本發(fā)明化合物或其可藥用鹽配制成藥物組合物。這些組合物可以使用不同的方法制備。因此，本發(fā)明還提供了藥物組合物，其用于治療或預(yù)防(例如治療)上述任何疾病例如神經(jīng)疾病和/或認(rèn)知缺損、疲勞或睡眠障礙，該藥物組合物包括1-(1_甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽以及可藥用載體。本發(fā)明還提供了藥物組合物，其包括1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽以及可藥用載體。本發(fā)明的藥物組合物，其可以通過例如在環(huán)境溫度下和/或在大氣壓力下混合制備，該藥物組合物通常適合于口服、腸胃外或直腸給藥，并且本發(fā)明的藥物組合物可以為片劑、膠囊、口服液體制劑、散劑、粒劑、錠劑、可重構(gòu)散劑(reconstitutablepowders)、可注射或可輸注的溶液或懸浮液或栓劑的形式?？诜o藥的藥物組合物，例如通常優(yōu)選片劑或膠囊。用于口服給藥的片劑或膠囊可以是單位劑量形式，并且可以含有一種或多種賦形劑，例如粘合劑(例如聚維酮、羥基丙基甲基纖維素或淀粉)，填充劑(例如甘露醇或乳糖)，微晶纖維素，潤滑劑例如壓片潤滑劑(例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或硬脂酸)，崩解劑例如片劑崩解劑和/或可藥用潤濕劑。片劑可以例如根據(jù)片劑包衣方法進(jìn)行包衣例如膜包衣。膠囊可為硬膠囊或軟膠囊，其含有例如為粉劑形式或小顆粒形式的本發(fā)明的化合物或鹽以及一種或多種賦形劑。口服液體制劑可以以例如含水或含油懸浮液、溶液、乳液、糖漿或酏劑的形式存在，或者可以以干產(chǎn)品的形式，這種干產(chǎn)品在使用前與水或其它合適的媒介重構(gòu)(reconstitution)。這些液體制劑可以含有添加劑例如助懸劑、乳化劑、非水媒介(其可以包括食用油)和/或防腐劑，和/或如果需要的話，可以含有調(diào)味劑和/或著色劑。對于腸胃外給藥，通常使用本發(fā)明的化合物或其可藥用鹽以及無菌媒介配制成液體單位劑量形式。例如取決于媒介和/或所用的濃度，可將所述化合物或鹽懸浮或溶解在所述媒介中。在配制溶液的過程中，可將所述化合物或鹽溶解用于注射和過濾滅菌，隨后填充到合適的小瓶(vial)或安瓿中，然后密封。可將助劑例如局部麻醉劑、防腐劑和/或緩沖劑溶于媒介中。為了提高穩(wěn)定性，可將組合物填充到小瓶中后，將其冷凍并在真空下除去水。除了將所述化合物或鹽懸浮在媒介中而不是溶于媒介中，并且不能通過過濾滅菌外，以基本上相同的方式典型地配制腸胃外懸浮液。在一個實施方案中，在將化合物或鹽懸浮于無菌媒介中之前，例如通過暴露于環(huán)氧乙烷中來對所述化合物或鹽進(jìn)行滅菌。在一個實施方案中，將表面活性劑或潤濕劑加入到所述組合物中，以便促進(jìn)化合物或鹽的均勻分布。藥物組合物可以含有0.1重量％-99重量％的組合物的活性物質(zhì)(即1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽)，特別是含有1-60重量％或10-60重量％的組合物的活性物質(zhì)。例如其可根據(jù)給藥途徑和/或所要使用的組合物而變化。藥物組合物中的可藥用載體的總量例如可根據(jù)藥物組合物和/或其預(yù)期的用途和/或給藥途徑而變化。在一個實施方案中，藥物組合物中的可藥用載體的總量(例如或即其中所存在的一種或多種賦形劑(例如文中所述的一種或多種賦形劑種類)的總量)占組合物的1重量％至99.9重量％的量，例如占組合物的40重量％至99重量％，例如40重量％至90重量％的量。另外的或可選擇地，在一個實施方案中，對于單位劑型中的組合物(例如用于口服給藥的組合物，例如片劑或膠囊)，單位劑型藥物組合物中的可藥用載體的總量(例如或即其中所存在的一種或多種賦形劑的總量)可為IOmg至2000mg，例如20mg至1500mg，例如IOOmg至約lOOOmg。例如在治療或預(yù)防上述障礙/疾病/癥狀中使用的和/或包含在藥物組合物中的ι-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽的劑量例如口服劑量可例如以常見方式隨疾病的嚴(yán)重程度、患者的體重和/或其它類似因素而改變。然而，作為一般性的指導(dǎo)，在一個實施方案中，例如在本發(fā)明的藥物組合物中(例如在口服藥物組合物中，和/或例如在單位劑型中)，可使用的合適的單位劑量(例如口服單位劑量)為0.02-1000mg或0.05_1000mg，例如0.l_200mg，例如1.0至200mg和/或例如0.02至200mg或0.05至200mg，例如0.05至45mg或0.1至45mg的本發(fā)明的化合物或可藥用鹽(根據(jù)“游離堿”化合物測定)。在一個實施方案中，該單位劑量可以一天給藥一次例如口服給藥和/或給藥于哺乳動物例如人；或者，該單位劑量可以一天多于一次的給藥，例如一天兩次或三次給藥例如口服給藥和/或給藥于哺乳動物例如人。這種治療可以持續(xù)數(shù)周、數(shù)月或數(shù)年。藥物劑型的一個實施方案在一個實施方案中，本發(fā)明提供了藥物劑型(例如口服給藥的劑型)，其包括a)1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫_2H_吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽(例如鹽酸鹽)；b)任選的穩(wěn)定劑，當(dāng)與不含所述穩(wěn)定劑的劑型相比時，該穩(wěn)定劑降低該劑型中1-(1"甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其鹽的降解；禾口c)可藥用賦形劑。在該實施方案中的一個具體實例中，所述藥物劑型(例如口服給藥的劑型)包括載體片(carriertablet)，該載體片至少部分(例如部分地或全部地，例如僅僅是部分地)被膜覆蓋，該膜包含a)1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫_2H_吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽(例如鹽酸鹽)，和b)任選的穩(wěn)定劑，當(dāng)與不含所述穩(wěn)定劑的劑型相比時，該穩(wěn)定劑降低該劑型中1-(1"甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其鹽的降解。在該實施方案中，術(shù)語“載體片”是指基本上不含1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽的可藥用片。在一個實施方案中，該載體片通過直接壓片工藝形成。在一個實施方案中，該載體片包括-稀釋劑(例如占載體片的50至100重量％，例如80至98重量％的量)，例如微晶纖維素，如具有約50微米(例如AvicelPH-101)或100微米(例如AvicelPH-102)的標(biāo)稱平均粒徑的微晶纖維素，或乳糖，或甘露醇；和/或-粘合劑(例如占載體片的0.5至15重量％，例如2至10重量％的量)，例如淀粉(例如玉米淀粉、馬鈴薯淀粉或預(yù)膠化的淀粉)，聚乙烯吡咯酮(聚維酮)，或羥基丙基甲基纖維素；和/或-潤滑劑(例如占載體片的0.1至5重量％，例如0.3至3重量％的量)，例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或硬脂酸。在一個實施方案中，該載體片為包含微晶纖維素(例如AvicelPH-102)(例如占載體片的90重量％的量)、預(yù)膠化的淀粉(例如淀粉1500)(例如占載體片的9重量％的量)和硬脂酸鎂(例如占載體片的1重量％的量)的片劑。上述包含任選的穩(wěn)定劑的藥物劑型，當(dāng)以存在的游離堿的量檢測時，該藥物劑型可例如含有0.02mg至2mg(例如0.05mg至Img)的1_(1-甲基乙基)~4~{[4-(四氫-2H-口比喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽(例如鹽酸鹽)。在一個實施方案中，該劑型不包括穩(wěn)定劑。在一個具體的實施方案中，該劑型包括穩(wěn)定劑。在上述藥物劑型中，穩(wěn)定劑可典型地包括檸檬酸或其鹽、蘋果酸或其鹽、抗壞血酸或其鹽、碳酸氫鈉，任選地包括丁羥茴醚和/或丁化羥基甲苯。在一個具體的實施方案中，穩(wěn)定劑任選地包括丁羥茴醚，例如丁羥茴醚，或更特別地，包括檸檬酸或其鹽，例如檸檬酸。在該劑型中，檸檬酸或其鹽(根據(jù)檸檬酸測定)與1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其鹽(根據(jù)游離堿測定)的摩爾比可例如為5501至12，例如5001至23。在一個實施方案中，該載體片被載體片膜包衣涂覆，例如該包衣使重量增加2-6%，例如使用不溶于水(或不溶于甲醇或乙醇)的包衣，例如使用乙基纖維素(例如Surelease)或異丁烯酸共聚物(例如Eudragit)作為載體片膜包衣。所述覆蓋載體片并包含本發(fā)明的化合物或鹽以及任選的穩(wěn)定劑的膜典型地在載體片膜包衣的外面和/或涂覆在載體片膜包衣的上面。在一個實施方案中，在上述包含任選的穩(wěn)定劑的劑型中，1-(1_甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽基本上不被載體片吸收。特別地，該載體片可具有一個或多個凹槽或凹窩。在一個具體的實施方案中，所述膜(其至少部分地，例如僅僅部分地覆蓋所述載體片，并且該膜包含本發(fā)明的化合物或鹽以及任選的穩(wěn)定劑)基本上存在于載體片的一個或多個凹槽或凹窩中。在一個實施方案中，上述劑型(例如包含至少部分被膜覆蓋的載體片，所述膜含有本發(fā)明的化合物或鹽以及任選的穩(wěn)定劑)進(jìn)一步用外部的膜包衣涂覆。在本發(fā)明的另一個實施方案中，本發(fā)明提供了制備上述藥物劑型(包含至少部分被膜覆蓋的載體片，所述膜含有本發(fā)明的化合物或鹽以及任選的穩(wěn)定劑)的方法，其中所述方法包括使1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽和穩(wěn)定劑(例如檸檬酸或其鹽，例如以約2-3%w/v的量存在)的溶液或混懸液分布(dispense)到載體片上?？梢允褂萌魏稳軇?，條件是膜(其至少部分地覆蓋所述載體片)中存在的穩(wěn)定劑和任何其它賦形劑可溶在該溶劑中。該溶劑通常是揮發(fā)性的。該溶劑在最終劑型中的任何(殘余)量應(yīng)當(dāng)是可藥用的。在該方法中所用的溶劑可包括水、和/或有機溶劑例如甲醇、乙醇、丙酮、乙酸和/或二氯甲烷?？墒褂萌軇┑幕旌衔?例如水-乙醇)。在一個實施方案中，溶劑為甲醇。在用于制備該劑型的方法中，載體片和被分布的溶液或混懸液可被加熱(如在強力空氣干燥箱中)以蒸發(fā)過量的液體并可導(dǎo)致在載體片的至少部分表面上形成膜。然后該劑型可任選例如根據(jù)已知的方法被膜包衣以形成外部的膜包衣。在制備該劑型的方法中所用的載體片可具有凹槽或凹窩，其提供了1-(1_甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽和穩(wěn)定劑的溶液或混懸液在分布后到達(dá)的凹形部分(basin)。通常，使用在片的兩面具有凹槽的雙面凹的片劑。在一個任選的實施方案中，上述包含本發(fā)明的載體片的劑型可使用W02005/123569中描述的裝置制備，并且更特別地，本發(fā)明的劑型可使用包括分布組件(dispensingmodule)的裝置制備，所述分布組件用于精確地將預(yù)定量的1_(1_甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽和穩(wěn)定劑的溶液或混懸液分布到載體片上。該裝置還可具有用于保持載體片的保持組件(holdingmember)，隨著分布組件將溶液或混懸液分布到每個載體片上，該保持組件可沿著該裝置連續(xù)移動。該裝置也可具有干燥體系，其從置于每個載體片上的溶液或混懸液中干燥或蒸發(fā)溶劑。隨著干燥體系干燥每個載體片上的藥物(dosage)，保持組件可沿著該裝置連續(xù)移動。該干燥體系可通過使用熱空氣、或紅外線或微波加熱來干燥該劑型。該裝置也可具有包衣體系，其將外部膜包衣施加到該劑型上。組合(Combinations)1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽可與其他的治療劑組合使用。當(dāng)打算將1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽用于治療或預(yù)防(特別是治療)例如哺乳動物例如人中的阿爾茨海默氏病、癡呆、輕度認(rèn)知缺損、或相關(guān)的神經(jīng)變性疾病，特別是用于治療或預(yù)防(特別是治療)阿爾茨海默氏病、癡呆(例如路易體癡呆或血管性癡呆)、輕度認(rèn)知缺損、或相關(guān)的神經(jīng)變性疾病中的認(rèn)知缺損時，其可以與聲稱用于阿爾茨海默氏病、癡呆、輕度認(rèn)知缺損、或相關(guān)的神經(jīng)變性疾病的疾病緩解或癥狀治療的藥物組合使用。所述其它治療劑的適合實例可以為對癥藥物(symptomaticagents)，例如已知調(diào)節(jié)膽堿能傳遞的那些藥物，例如Ml毒蕈堿受體激動劑或變構(gòu)調(diào)節(jié)劑、M2毒蕈堿拮抗劑、乙酰膽堿酯酶抑制劑(例如四氫氨基吖啶、多奈哌齊如多奈哌齊鹽酸鹽、利凡斯的明或加蘭他敏如加蘭他敏氫溴酸鹽)、煙堿受體激動劑或變構(gòu)調(diào)節(jié)劑(例如α7激動劑或變構(gòu)調(diào)節(jié)劑或α4β2激動劑或變構(gòu)調(diào)節(jié)劑)、PPAR激動劑(例如PPARγ激動劑)、5-HT4受體部分激動劑、5_HT6受體拮抗劑[例如3-(苯基磺?；?-8-(1-哌嗪基)喹啉或其鹽，例如W003/080580中所公開的鹽酸鹽(實施例2)和游離堿(實施例16)]、5HT1A受體拮抗劑、NMDA受體拮抗劑或調(diào)節(jié)劑(例如二甲金剛胺例如二甲金剛胺鹽酸鹽)，或疾病調(diào)養(yǎng)劑例如β或Y-分泌酶抑制劑。當(dāng)打算將1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2Η-吡喃~4~基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽用于治療發(fā)作性睡眠時，其可與聲稱用于治療發(fā)作性睡眠的藥物組合使用。所述其它治療劑的適合的實例包括莫達(dá)非尼、armodafinil和單胺吸收阻斷劑。當(dāng)打算將1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃~4~基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽用于治療精神分裂癥時，其可以與聲稱用于治療精神分裂癥的藥物組合使用，所述藥物包括i)抗精神病藥，包括典型的抗精神病藥(例如氯丙嗪、硫利達(dá)嗪、美索達(dá)嗪、氟奮乃靜、奮乃靜、丙氯拉嗪、三氟拉嗪、氨砜噻噸(thiothixine)、氟哌啶醇、嗎茚酮或洛沙平)、非典型的抗精神病藥(例如氯氮平、奧氮平、利培酮、喹硫平、齊拉西酮、氨磺必利(amisulpride)或阿立哌唑)、甘氨酸轉(zhuǎn)運蛋白1抑制劑和代謝型受體配體；ii)用于錐體束外副作用的藥物，例如抗膽堿能藥(例如苯扎托品、比哌立登、丙環(huán)定或苯海索)和多巴胺能藥(例如金剛烷胺)；iii)抗抑郁藥，包括5-羥色胺重吸收抑制劑(例如西酞普蘭、依他普侖、氟西汀、帕羅西汀、達(dá)泊西汀或舍曲林)，二重5-羥色胺/去甲腎上腺素重吸收抑制劑(例如文拉法辛、度洛西汀或米那普侖)，去甲腎上腺素重吸收抑制劑(例如瑞波西汀)、三環(huán)抗抑郁劑(例如阿米替林、氯米帕明、丙米嗪、馬普替林、去甲替林或曲米帕明)、單胺氧化酶抑制劑(例如異卡波胼、嗎氯貝胺、苯乙胼或反苯環(huán)丙胺)、和其它藥物(例如丁氨苯丙酮、米安色林、米氮平、奈法唑酮或曲唑酮)；iv)抗焦慮劑包括苯并二氮雜革類，例如阿普唑侖或勞拉西泮；和ν)認(rèn)知增強劑，例如乙酰膽堿酯酶抑制劑(例如他克林、多奈哌齊、利凡斯的明或加蘭他敏)。當(dāng)本發(fā)明化合物或其可藥用鹽與其他治療劑組合使用時，該化合物可通過任何常規(guī)的途徑分開或同時給藥。因此，在另一方面，本發(fā)明提供了一種組合，其包含1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽以及另外的一種或多種治療劑。上述組合可方便地以藥物制劑的形式存在，并因此包含如上所定義的組合以及可藥用載體或賦形劑的藥物制劑包括在本發(fā)明的另一方面中。這些組合的各個組分可以在分開(separate)的或混合(combined)的藥物制劑中依次給予或同時給予。當(dāng)本發(fā)明化合物或其可藥用鹽與有效對抗相同疾病狀態(tài)的第二種治療劑組合使用時，每一化合物的劑量可以不同于當(dāng)所述化合物單獨使用時的劑量。實施例部分下面的描述例和實施例舉例說明了本發(fā)明化合物、其鹽酸鹽及其制備方法，以及用于該制備方法中的中間體(“描述例”)。描述例14_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸甲酯(Dl)方法A在室溫下，將4-羥基苯甲酸甲酯(1.498，9.8讓01，例如由六1(11^吐獲得)、4-羥基四氫吡喃(lg，9.8mmol，例如由Aldrich獲得)和三苯基膦(3.85g,14.7mmol)在四氫呋喃(60ml)中的攪拌溶液通過滴加偶氮二甲酸二乙酯(2.32ml，1.5mole當(dāng)量)來處理。將該反應(yīng)攪拌過夜。蒸除溶劑，并將粗產(chǎn)物再溶于乙酸乙酯(50ml)中，用5%碳酸鈉溶液(2x40ml)、水(3x40ml)、鹽水(40ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)。將粗產(chǎn)物裝載在硅膠柱上，并進(jìn)行快速色譜法處理，用10%至30%乙酸乙酯的石油醚(40°-600C)梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物(2.12g)。方法B將偶氮二甲酸二異丙酯(7.8ml，39.6mm0l，2m0le當(dāng)量)加入到4-羥基苯甲酸甲酉旨(3.0g，19.7mmol)、4-羥基四氫吡喃(2.8ml，28.2mmol，約1.4mole當(dāng)量)和三苯基膦(10.3g，39.3mm0l，2m0le當(dāng)量)在四氫呋喃(120ml)中的攪拌溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌68小時。然后將溶劑真空除去，并將粗殘余物溶于乙酸乙酯(IOOml)中。然后將有機溶液用飽和的碳酸氫鈉水溶液(40ml)、水(40ml)和鹽水(40ml)洗滌。干燥有機相(相分離柱)并濃縮。將粗殘余物通過硅膠色譜法純化，用0%至30%乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物為淡黃色油狀物(3.14g)(1HNMR(在CDCl3中)表明產(chǎn)物被大量偶氮二甲酸二異丙酯殘余物污染)。方法C在0°C下，將偶氮二甲酸二異丙酯(2.89ml,14.68mmol,1.5mole當(dāng)量)加入到4-羥基苯甲酸甲酯(1.49g，9.80mmol,1.Omole當(dāng)量)、4_羥基四氫吡喃(1.OOg,9.79mmol,1.Omole當(dāng)量)和三苯基膦(3.85g,14.68mmol,1.5mole當(dāng)量)在四氫呋喃(60ml)中的攪拌溶液中。將該反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?，并攪?1小時。在室溫下，將4-羥基四氫吡喃(0.3ml)、三苯基膦(1.Ilg)和偶氮二甲酸二異丙酯(0.9ml)依次加入到反應(yīng)混合物中，并繼續(xù)攪拌2小時。真空除去溶劑，并將殘余物溶于乙酸乙酯(50ml)中。將有機相用飽和的碳酸氫鈉水溶液(30ml)、水(30ml)和鹽水(30ml)洗滌。干燥有機相(相分離柱)并濃縮。將粗殘余物通過硅膠色譜法純化，用0%至30%乙酸乙酯的己烷溶液梯度洗脫，得到標(biāo)題化合物，為淡黃色油狀物(2.19g)(被痕量偶氮二甲酸二異丙酯殘余物污染)。方法D在室溫下，用15分鐘的時間向4-羥基苯甲酸甲酯(30g，197mmol，l.Omole當(dāng)量)、四氫-4-吡喃醇(24ml，251mmol，1.3mole當(dāng)量)和三苯基膦(78g，297mmol，1.5mole當(dāng)量)在四氫呋喃(600ml)中的攪拌溶液中加入偶氮二甲酸二異丙酯(58ml，298mm0l，1.5m0le當(dāng)量)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時。加入另一部分的偶氮二甲酸二異丙酯(5ml)和四氫-4-吡喃醇(2ml)，并將該反應(yīng)混合物在室溫下再攪拌2小時。然后將該反應(yīng)混合物通過加入飽和的碳酸氫鈉水溶液(500ml)和乙酸乙酯(500ml)來終止。將有機相用水(2x250ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)，并然后真空濃縮得到粗產(chǎn)物4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯甲酸甲酯，為粘稠的黃色油狀物(182g)。描述例24-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸(D2)方法A在室溫下，將4_(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯甲酸甲酯(2.12g；按照描述例1方法A所述的進(jìn)行制備)在甲醇(20ml)中的攪拌溶液用IM氫氧化鈉溶液(17.9ml，約2mole當(dāng)量)處理。將該反應(yīng)混合物回流4小時，并然后冷卻至室溫。蒸除甲醇，并將含水混合物用二氯甲烷(3x10ml)洗滌，然后用濃鹽酸酸化至pH為2。將水層用乙醚(IOOml)萃取，并將乙醚溶液用水(3x50ml)、鹽水(50ml)洗滌，干燥(硫酸鎂)并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物(1.27g，通過NMR測定含有大約15%的4-羥基苯甲酸)?；蛘?，在將該反應(yīng)冷卻至室溫后，蒸除甲醇，將含水混合物用二氯甲烷(3x10ml)洗滌，并然后用濃鹽酸酸化至PH為2，并然后將產(chǎn)物直接過濾出來。方法B向4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸甲酯(3.14g，按照描述例1方法B所述的進(jìn)行制備)在甲醇(28ml)中的攪拌溶液中加入1.OM氫氧化鈉水溶液(28ml，28mmol)。將該反應(yīng)混合物于95°C加熱18小時，并然后冷卻至室溫。真空除去甲醇，并將殘余的水相用二氯甲烷(2x30ml)洗滌。然后將水層使用1.OM的HCl水溶液酸化至pH為2。濾出生成的白色沉淀并干燥(在真空干燥箱中，在40°C下，3小時)，得到標(biāo)題化合物(1.52g)。方法C在室溫下，向4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸甲酯(2.19g，按照描述例1方法C所述的進(jìn)行制備)在甲醇(20ml)中的溶液中加入1.0M氫氧化鈉水溶液(19ml，19mmol)。然后將該反應(yīng)混合物加熱回流15小時。然后將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，并真空除去甲醇。將生成的水相用二氯甲烷(2x15ml)洗滌，并然后使用1.OM的HCl水溶液酸化至PH為2。濾出生成的白色沉淀并干燥(在真空干燥箱中，在40°C下，2小時)，得到標(biāo)題化合物(1.32g)。方法D向粗品4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸甲酯(182g，按照描述例1方法D所述的進(jìn)行制備)在甲醇(800ml)中的攪拌溶液中加入1.0M氫氧化鈉水溶液(900ml，900mmol)。將該反應(yīng)混合物于50°C加熱4小時，并然后冷卻至室溫。真空除去甲醇，將殘余的水相用乙酸乙酯(2x400ml)洗滌。然后將水相用2.5M的HCl水溶液酸化。濾出生成的白色固體，得到標(biāo)題化合物(36.5g)。描述例34-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸(D3)短的概要方法描述所有的重量、體積(“vol”)和當(dāng)量都是相對于4-羥基苯甲酸甲酯而言的。在氮氣下，將4-羥基苯甲酸甲酯(lwtamole當(dāng)量)、三苯基膦(2.6wt，1.5mole當(dāng)量)、4_羥基四氫吡喃(0.75V0l，1.2m0le當(dāng)量)在甲苯(3.5vol)中的溶液加熱至55°C，并用60分鐘的時間滴加偶氮二甲酸二異丙酯(1.95vol,1.5mole當(dāng)量)，同時保持內(nèi)容物處于60士2°C下。加入后，將該反應(yīng)攪拌30分鐘，并然后冷卻至0-5°C。然后將該批料用預(yù)先制備的三苯基氧膦-胼二甲酸二異丙酯加合物種晶(seed)，并然后再攪拌1小時，隨后過濾。將濕的濾餅用甲苯(2Xlvol)洗滌，并將合并的母液轉(zhuǎn)移到干凈的容器中。將甲苯溶液在0-5°C下用2M氫氧化鈉溶液(5vol)洗滌，并然后加入3M氫氧化鈉溶液(5vol)，并將該反應(yīng)加熱至80°C。將該反應(yīng)攪拌至少2.5小時，直至HPLC顯示沒有起始物。然后將混合物冷卻至50°C，并加入甲苯(5vol)和水(5vol)。分離各層，并將水層用甲苯(IOvoI)洗滌，并然后用2.5M的HCl溶液(7.5vol)酸化至pH為1。將生成的漿料過濾，并將濕的濾餅用水(2X2vol)洗滌。將標(biāo)題產(chǎn)物在真空干燥箱中在約50°C下通過使用氮氣吹掃至恒定的探針溫度來干燥。詳細(xì)的方法描述1.將4-羥基苯甲酸甲酯(lwt,482.3g，由Fluka獲得)加入到容器1中。2.將4-羥基四氫吡喃(0.75vol，362mL，1.2mole當(dāng)量，由Sigma-Aldrich獲得)加入到容器1中。3.將三苯基膦(2.6wt,1253g，1.5mole當(dāng)量)加入到容器1中。4.使用氮氣吹掃容器1。5.將甲苯(3.5vol,1690mL)加入到容器1中。6.將內(nèi)容物在攪拌下加熱至55°C。7.用2小時的時間通過振動泵將偶氮二甲酸二異丙酯(DIAD，1.95vOl，940mL，1.5mole當(dāng)量，由Aldrich獲得)加入到容器1中，同時保持內(nèi)容物的溫度為60士2°C。8.將容器1中的內(nèi)容物在60士2°C下攪拌50分鐘。9.取樣反應(yīng)混合物用于HPLC分析。10.冷卻容器1中的內(nèi)容物至0_5°C。11.使用三苯基氧膦-胼二甲酸二異丙酯加合物(0.001wt，0.482g)種晶該批料。12.將容器1中的內(nèi)容物攪拌81分鐘。13.在裝配有WhatmanNo.113濕的加強型濾紙(粗糙面朝上)的PTFE微過濾器上用5分鐘的時間濾出副產(chǎn)物。使用20LBuchner燒瓶作為接受器。14.用甲苯(2x約lvol，2x490mL)洗滌濕的濾餅，并抽吸濾餅使其不含溶劑。15.通過PTFE吸收管線(suck-upline)，將合并的濾液和濾餅洗滌液轉(zhuǎn)移到容器2中。16.將容器2中的內(nèi)含物冷卻至0_5°C。17.將2M氫氧化鈉溶液(5vol，2400mL)加入到容器2中。18.于0_5°C將容器2中的內(nèi)含物攪拌5分鐘，隨后使各層澄清。19.將下面的水層轉(zhuǎn)移到貼上標(biāo)簽的Schott瓶中。20.將3M氫氧化鈉溶液(5vol，2410mL)加入到容器2中。21.將內(nèi)容物加熱至80°C，并攪拌2小時45分鐘。22.通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)直至水解完成。23.將容器2中的內(nèi)容物冷卻至50°C，并然后將甲苯(5vol，2410mL)加入到容器2中。24.將水(5vol,2410mL)加到容器2中。25.于50士5°C攪拌內(nèi)容物5分鐘，隨后使各層澄清。26.將下面的水層轉(zhuǎn)移到貼上標(biāo)簽的Schott瓶中用于貯存。27.將上面的有機層轉(zhuǎn)移到貼上標(biāo)簽的Schott瓶中用于清除。28.將水層從貼上標(biāo)簽的Schott瓶中再填充到容器2中。29.將甲苯(約IOvol，4900mL)加入到容器2中。30.于50士5°C將內(nèi)含物攪拌5分鐘，隨后使各層澄清。31.將下面的水層轉(zhuǎn)移到貼上標(biāo)簽的Schott瓶中用于貯存。32.將上面的有機層轉(zhuǎn)移到貼上標(biāo)簽的Schott瓶中用于清除。33.將水層再填充到容器2中。34.通過振動泵加入2.5M鹽酸水溶液(7.5vol，3620mL)，直至pH達(dá)到1。35.將生成的漿液攪拌15分鐘。36.在裝配有Whatman113濕的加強型濾紙(粗糙面朝上)的PTFE微過濾器上濾出產(chǎn)物。10分鐘過濾時間。37.將濾餅用水(2x2vol，970mL)洗滌。38.將該固體產(chǎn)物在用軟棉布覆蓋的聚乙烯內(nèi)搪層鋼托盤中，在真空并排出氮氣下，于50°C干燥過夜，并于75°C再干燥3天。39.得到灰白色固體的標(biāo)題產(chǎn)物(568.9g)。分析數(shù)據(jù)IHNMR(400MHz，DMS0-d6)δppm1.55-1.64(m,2H)1.95-2.03(m,2H)3.49(ddd,J=11.74，9.41，2.57Ηζ，2Η)3·85(ddd,J=11.80，4.34，4.16Ηζ，2Η)4·69(ddd,J=8.56，4.65,4.40Ηζ，1Η)7·03-7.09(m，2Η)7·84-7.90(m,2Η)和12·31(br-s，1Η)·上述方法的一種替換方法，在步驟37中，可將濾餅用甲苯代替水來洗滌，隨后于50-75°C進(jìn)行步驟38的真空干燥。實施例11-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(El)方法A在室溫下，將4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸(200mg；按照描述例2方法A所述的進(jìn)行制備)的二氯甲烷(IOml)溶液用草酰氯(0.16ml，約2mole當(dāng)量)和1滴10%N，N-二甲基甲酰胺的二氯甲烷溶液處理。30分鐘后，蒸除溶劑，并將產(chǎn)物再次由二氯甲烷(x2)蒸發(fā)。在室溫下，將該?；犬a(chǎn)物的二氯甲烷溶液加入到二乙基氨基甲基聚苯乙烯(844mg，3.2mmol/g,2.7mmol，約3mole當(dāng)量)和1_異丙基哌嗪(115mg，0.90mmol，例如由Aldrich獲得)在二氯甲烷(IOml)中的攪拌的混合物中。30分鐘后，將混合物直接裝載在硅膠快速柱上，并用2%至6%甲醇(含有10%0.88氨水)的二氯甲烷溶液梯度洗脫。將含產(chǎn)物的級分蒸發(fā)。將產(chǎn)物再溶于二氯甲烷中，并用過量的4MHC1的二噁烷溶液處理。蒸發(fā)溶劑，并將產(chǎn)物用丙酮結(jié)晶，濾出，用丙酮洗滌并干燥，得到標(biāo)題化合物(247mg)。1H匪R(D6-DMSO,250MHz)δ10.9to11.0(1H,br),7.43(2H,d,J=8.7Hz)，7.04(2H,d,J=8.7Hz)，4.65(1H,m)，4.18(2H,br)，3.90-3.81(2H,m)，3.57-3.41(7H,m)，3.12-3.00(2H,m)，2.02-1.95(2H,m)，1.66-1.52(2H,m)，1.28(6H,d,J=6.6Hz)；MS(電噴射)m/z(M+H)+333；C19H28N2O3計算值(requires)332。方法B在室溫下，向4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸(2.56g，11.5mmol；其可按照描述例2方法B和/或方法C所述的進(jìn)行制備)在N，N-二甲基甲酰胺(40ml)中的攪拌溶液中加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(3.32g，17.3mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌15分鐘，隨后加入1-異丙基哌嗪(2.50ml,17.5mmol)。將生成的混合物攪拌20小時。將二氯甲烷(IOml)加入到反應(yīng)混合物中，并真空除去溶劑。將淡黃色油狀的殘余物經(jīng)硅膠色譜法純化，用0%至10%(2N氨水/甲醇)的二氯甲烷溶液梯度洗脫，得到淡黃色油狀的游離堿(1.80g)(LCMS(堿性的(basic)):m/z(M+H)+333)。將游離堿溶于二氯甲烷(20ml)中，隨后加入4.OMHCl的二噁烷溶液(5ml)。然后將溶劑真空除去以得到相應(yīng)的鹽酸鹽，1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽，為灰白色固體(1.81g)；LCMS(堿性的):m/z(M+H)+333。方法C向4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸(0.205g，0.92mmol；其可按照描述例2方法C所述的進(jìn)行制備)的N，N-二甲基甲酰胺(3.5ml)的攪拌溶液中加入1_(3_二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(0.268g，1.39mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌15分鐘，隨后加入1-異丙基哌嗪(0.20ml,1.4mmol)。將生成的混合物在室溫下攪拌66小時。將二氯甲烷(5ml)加入到反應(yīng)混合物中，并真空除去溶劑。將淡黃色的粗的殘余物經(jīng)硅膠色譜法純化，用0%至10%(2M氨水/甲醇)的二氯甲烷溶液梯度洗脫，得到淡黃色油狀的游離堿(204mg)(LCMS(堿性的)m/z(M+H)+333)。將游離堿溶于二氯甲烷(5ml)中，隨后加入4.OMHCl的二噁烷溶液(Iml)。然后將溶劑真空除去，得到相應(yīng)的鹽酸鹽，1_(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽，為灰白色固體(0.196g)；LCMS(堿性的)m/z(M+H)+333。方法D在室溫下，向4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸(36.5g，164mmol，其可按照描述例2方法D所述的進(jìn)行制備)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(38g，198mmol)、l-羥基苯并三唑(31g,203mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(500ml)中的攪拌溶液中加入1-異丙基哌嗪(26ml，182mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌1.5小時，并然后通過加入飽和的碳酸氫鈉水溶液(500ml)和乙酸乙酯(1升)來終止。將水層用乙酸乙酯(400ml)萃取，并將合并的有機萃取物用水(2x400ml)洗滌。真空除去溶劑，并將殘余物溶于二氯甲烷(150ml)中，隨后加入1.0MHCl的乙醚溶液(200ml)。然后將該生成的白色固體通過過濾分離，并用二氯甲烷洗滌，得到相應(yīng)的鹽酸鹽。將該物質(zhì)用乙醇重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物，1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽，為固體(32g)。實施例21-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1短的概要方法描述所有的重量、體積(“vol”)和當(dāng)量都是相對于4_(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯甲酸而言的。將4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸(lwt，例如其可按照描述例3所述的進(jìn)行制備)和羰基二咪唑(CDI)(0.8wt,l.Imole當(dāng)量)裝填到20L容器中。然后加入乙腈(12體積)，并將該懸浮液/漿液溫?zé)嶂?0°C，并攪拌約2至2.25小時。將N-異丙基哌嗪(1-異丙基哌嗪，0.66wt，l.15mole當(dāng)量)以一批加入，并用約15-30分鐘的時間將生成的渾濁溶液加熱至50°C，并然后攪拌約2至2.25小時。將該反應(yīng)通過HPLC監(jiān)測。反應(yīng)完成后，將混合物冷卻至20°C，并通過過濾除去不溶物(例如在4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸中遺留的任何無機物)。將澄清的溶液分批轉(zhuǎn)移至IOL容器中，并在減壓下通過蒸餾濃縮至大約3體積以除去乙腈(例如使用50°C夾套溫度并將200mbar壓力減至IOOmbar壓力)。蒸餾后，加入丙-2-醇(6體積)，并將該溶液在減壓下進(jìn)一步通過蒸餾濃縮至5體積。加入另外的丙-2-醇(8體積)后，在攪拌下將該溶液加熱至70°C，并用至少10分鐘的時間加入5-6NHCl的異丙醇溶液(0.9體積)。在加入過程中逐漸開始結(jié)晶。加入后，用1.5小時的時間將生成的漿液快速冷卻至20°C。濾出產(chǎn)物，并將濾餅用異丙醇(3體積)洗滌。用至少2小時將溶劑從濾餅中吸除。在真空干燥箱中，于50°C至恒定的探針溫度下，用至少22小時的時間將產(chǎn)物干燥以得到標(biāo)題產(chǎn)物。詳細(xì)的方法描述1.將4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸(lwt,1000.Og)加入到容器1(20L)中。2.將羰基二咪唑(CDI)(0.8wt,1.Imole當(dāng)量，800.Og)(由Fluorochem獲得)加入到容器1中。3.將乙腈(12vol，12L)加入到容器1中，并啟動攪拌器(觀察到放出氣體)。4.將容器1中的內(nèi)容物小心地加熱至30°C，并然后攪拌2小時10分鐘。5.將N-異丙基哌嗪(I-異丙基哌嗪)(由Fluorochem獲得)(0.66wt,1.15mole當(dāng)量，666.4g)加入到容器1中。6.用約15-20分鐘的時間，將容器1中的內(nèi)容物小心地加熱至50°C，并然后攪拌2小時15分鐘。7.取樣該混合物用于HPLC(在丁胺上終止，并且如果產(chǎn)物與丁酰胺的比例>501則視為該反應(yīng)完成)。8.將容器1中的內(nèi)容物冷卻至20°C。9.通過5微米Dominic過濾器將該溶液轉(zhuǎn)移至容器2中以除去不溶物。10.用乙腈(0.2vol，200mL)沖洗容器1，并作為管線(line)洗入到容器2中。11.通過減壓蒸餾將容器2中的內(nèi)容物濃縮至3.0體積。以50°C夾套溫度和200mbar真空開始，并逐步減壓至lOOmbar。12.將容器1用水沖洗，并用甲醇煮沸蒸發(fā)來清除。13.將丙-2-醇(6體積，6L)加入到容器2中。14.通過減壓蒸餾將容器2中的內(nèi)容物濃縮至5體積。15.將丙-2-醇(8體積，8L)加入到容器2中。16.將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到容器1中用于結(jié)晶。17.在攪拌下將容器1中的內(nèi)容物加熱至70°C。18.用至少10分鐘的時間，通過裝有硅酮管的振動泵將5-6N鹽酸的丙-2-醇溶液(0.9體積，900mL)加入到容器1中。19.用1.5小時的時間將容器1中的內(nèi)容物快速冷卻至20°C。20.在裝配有WhatmanNo.113濕的加強型濾紙(粗糙面朝上)的PTFE微過濾器9上濾出產(chǎn)物。21.用丙-2-醇(3體積，3L)洗滌濾餅，并吸除產(chǎn)物上的溶劑。22.在50°C下，在真空下，將該固體產(chǎn)物在用軟棉布覆蓋的聚乙烯內(nèi)搪層鋼托盤中干燥約22小時至恒定的探針溫度，得到固體的標(biāo)題化合物(1515.Ig)。通過分析，據(jù)信通過實施例2制備的1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫_2H_吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1并不是完全純的晶型，并相信其含有非常接近于20%的晶型2。通過實施例2制備的晶型1的產(chǎn)物的分析結(jié)果包括下列X-射線粉末衍射(XRPD)XRPD數(shù)據(jù)是在裝配有X，Celerator檢測器的PANalyticalX'PertPro粉末衍射計上獲得的。其獲得條件為輻射CuKa(銅K-alpha)，發(fā)電機電壓40kV，發(fā)電機電流45mA，起始角2.0°2Θ，終止角40.0°2θ，步長0.0167°2θ。每步的時間為31.750秒。通過將幾毫克樣品安置在Si晶片(無背景(zerobackground))板上而制備樣品，從而制備粉末薄層。實施例2所制備的晶型1產(chǎn)物的一些特征峰位置和計算的d-間距總結(jié)在下表中(注意這些峰不是所示的僅有的峰)。這些峰是使用Highscore軟件由原始數(shù)據(jù)計算得到的。實施例2所制備的晶型1的XRPD譜圖如圖1中所示。為了進(jìn)行比較，實施例2的晶型1的XRPD峰(頂部)與實施例3的晶型2的XRPD峰(底部)相對比的XRPD疊合譜圖示于圖3中。在15.7°2θ和25.5°2θ處的晶型1的XRPD峰可認(rèn)為是晶型1的特征峰，因為這些峰并沒有出現(xiàn)在晶型2的XRPD譜圖中。FT-IR(FT-紅外)譜圖FT-IR譜圖是使用裝配有Diamond/ZnSeATRAccessory的NicoletAvatar360FT-IR光譜儀經(jīng)64個掃描，以km—1的分辨率獲得的。實施例2中所制備的晶型1的FT-IR譜圖如圖4和5中所示，其分別顯示了4000至675CHT1的光譜區(qū)域和2000至675CHT1的光譜區(qū)域。為了進(jìn)行比較，實施例2的晶型1的這些峰與實施例3的晶型2的那些峰相對比的FT-IR疊合譜圖示于圖8中，其顯示了2000至675CHT1的光譜區(qū)域。固態(tài)NMR譜圖固態(tài)匪R譜圖是在90.55MHz頻率的13C觀測下，使用4_mmBrukerHFXMAS(魔角旋轉(zhuǎn))探針，在296K溫度下，使用8kHz的自旋速度獲得。數(shù)據(jù)使用具有旁帶抑制的交叉極化序列獲得。獲得具有10秒的弛豫衰減時間的多個掃描。實施例2制備的晶型1所觀察到的共振現(xiàn)象的化學(xué)位移如下所示(單位為ppm)18.5+0.3,30.4+0.3,31.8+0.3,37.6+0.3,45.8+0.3,49.4+0.3,52.3士0.3,59.2士0.3，63.6士0.3，68.4士0.3，110.3士0.3，118.8士0.3，128.4+0.3,131.2士0.3，133.9士0.3，159.1士0.3和167.6ppm。在19.5士0.3，71.1士0.3，109.5士0.3和119.6士0.3ppm還觀察到另外的共振現(xiàn)象，被認(rèn)為是與作為雜質(zhì)的晶型2的峰一致。作為對比，實施例2所制備的晶型1的固態(tài)NMR譜圖與晶型2的固態(tài)NMR譜圖的疊合圖示于圖9中。實施例31-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2將4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸(lwt，20g；例如其可如描述例3中所述的制備)懸浮于乙腈(80mL)中。在環(huán)境溫度下，將預(yù)先溫?zé)嶂?5-40°C的羰基二咪唑(⑶I)(0.8wt,16g,l.lmole當(dāng)量)的乙腈(80mL)溶液以一批加入到該懸浮液中。還加入乙腈管線洗滌液(linewash)(20mL,1體積)。將該反應(yīng)混合物在氮氣下于60°C加熱1小時。將N-異丙基哌嗪(1-異丙基哌嗪，0.66wt,13.33g，由FluorochemACI獲得)加入到反應(yīng)混合物中，并繼續(xù)加熱2小時。將混合物通過真空蒸餾濃縮至約2.5體積(50mL)以得到粘稠的可流動的油狀物。然后加入丙-2-醇(240mL，12體積)，并將混合物通過減壓下(lOOmbar)蒸餾來濃縮以除去2體積(40mL)。將混合物在攪拌下加熱至70°C。用10分鐘的時間，將5-6N鹽酸的丙-2-醇溶液(20mL，l體積)加入到混合物中。直到所有的酸加完后沒有結(jié)晶生成。將該反應(yīng)混合物在70°C下保持過夜。將混合物冷卻，并將漿液過濾。將過濾的固體用1至1.5小時的時間在過濾器上在抽吸空氣下干燥。得到淡粉色固體的標(biāo)題產(chǎn)物(25g)。通過實施例3所制備的晶型2產(chǎn)物的分析包括下列X-射線粉末衍射(XRPD)XRPD數(shù)據(jù)是在裝配有X，Celerator檢測器的PANalyticalX'PertPro粉末衍射計上獲得的。其獲得條件為輻射CuKa(銅K-alpha)，發(fā)電機電壓40kV，發(fā)電機電流45mA，起始角2.0°29，終止角40.0°2e，步長0.0167°2e。每步的時間為31.750秒。通過將幾毫克樣品安置在Si晶片(無背景(zerobackground))板上而制備樣品，從而制備粉末薄層。實施例3所制備的晶型2產(chǎn)物的一些特征峰位置和計算的d_間距總結(jié)在下表中(注意這些峰不是所示的僅有的峰)。這些峰是使用Highscore軟件由原始數(shù)據(jù)計算得到的。實施例3所制備的晶型2的XRPD譜圖如圖2中所示。為了進(jìn)行比較，實施例3的晶型2的XRPD峰(底部)與實施例2的晶型1的XRPD峰(頂部)相對比的XRPD疊合譜圖示于圖3中。在20.0°2Θ和24.65°(或24.7°)2θ處的晶型2的XRPD峰可認(rèn)為是晶型2的特征峰，因為這些峰并沒有明顯地出現(xiàn)在晶型1的XRPD譜圖中。FT-IR(FT-紅外)譜圖FT-IR譜圖是使用裝配有Diamond/ZnSeATRAccessory的NicoletAvatar360FT-IR光譜儀經(jīng)64個掃描，以km—1的分辨率獲得的。實施例3中所制備的晶型2的FT-IR譜圖如圖6和7中所示，其分別顯示了4000至675CHT1的光譜區(qū)域和2000至675CHT1的光譜區(qū)域。為了進(jìn)行比較，實施例3的晶型2的這些峰與實施例2的晶型1的那些峰相對比的FT-IR疊合譜圖示于圖8中，其顯示了2000至675CHT1的光譜區(qū)域。固態(tài)NMR譜圖固態(tài)匪R譜圖是在90.55MHz頻率的13C觀測下，使用4_mmBrukerHFXMAS(魔角旋轉(zhuǎn))探針，在296K溫度下，使用8kHz的自旋速度獲得。數(shù)據(jù)使用具有旁帶抑制的交叉極化序列獲得。獲得具有10秒的弛豫衰減時間的多個掃描。實施例3制備的晶型2所觀察到的共振現(xiàn)象的化學(xué)位移如下所示(單位為ppm)18.8+0.3,19.5+0.3,32.4+0.3,37.5+0.3,45.7+0.3,49.3+0.3,52.7士0.3,59.1士0.3,66.3士0.3，71.1士0.3，109.4士0.3，119.6士0.3，128.4+0.3,131.3士0.3，134.3士0.3，158.7士0.3禾口167.8士0.3ppm。作為對比，實施例3所制備的晶型2的固態(tài)NMR譜圖與實施例2的晶型1的固態(tài)NMR譜圖的疊合譜圖示于圖9中。實施例41-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽所有的重量、體積和當(dāng)量都是相對于4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸而言的。在氮氣下，在約65°C(夾套溫度為70°C)下，用10分鐘的時間，將4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸(10g，lwt，lVOl，lmOle當(dāng)量)分批加入(小心，發(fā)出氣體)到羰基二咪唑(CDI，8.0g，0.8wt，l.lmole當(dāng)量)在乙腈(100mL,lOvol)中的攪拌溶液中。使用乙腈(1.5體積，15mL)作為4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸的容器的管線洗滌液(linewash)，并使用漏斗來加入試劑。將生成的懸浮液/漿料于約65°C下攪拌至少約2小時(例如約2-2.5小時)，隨后取樣。通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)展該樣品通過將一滴反應(yīng)混合物淬滅到lmL的5%丁胺的乙腈溶液中制備得到；其可以通過使活化的酸-咪唑烷(imidazolide)衍生為相應(yīng)的丁酰胺來確定殘余的4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸。其通常僅僅作為信息被記錄下來，因為漿料的多相性可能引起不一致的結(jié)果(典型地，在此階段<2%的殘余的4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸是令人滿意的)。隨后，在約65°C下，將1-異丙基哌嗪(0.667wt，6.67g，l.15mole當(dāng)量)以一批加入，隨后使用乙腈(0.5vol,5mL)作為管線洗滌液。將生成的渾濁溶液于約65°C下保持?jǐn)嚢柚辽偌s2小時(例如約2-2.5小時)，隨后取樣。使用上述方法通過HPLC監(jiān)測反應(yīng)進(jìn)展。然后將該反應(yīng)冷卻，并將不溶物通過過濾除去。然后將澄清的溶液通過真空蒸餾濃縮至2.5至3體積，并在環(huán)境溫度下加入5%水的異丙醇溶液(5體積，50mL)。然后將該溶液加熱至約65°C，并以一批物料加入5-6NHC1的異丙醇溶液(0.9體積)。加入后不久可開始結(jié)晶。將生成的漿料于65°C老化(aged)1.5小時。然后用約20分鐘的時間將該漿料冷卻至55°C，并于55°C下保持1.5小時，然后用約20分鐘的時間冷卻至45°C，并于45°C下保持1.5小時，并然后冷卻至環(huán)境溫度，濾除固體(總共1小時)；因此總的冷卻時間為約4.5至4.75小時。將通過過濾分離的固體1-(1_甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽用4體積的異丙醇洗滌，并于50°C下真空干燥例如過夜。現(xiàn)在相信上述方法可生成1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2。實施例51-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的重結(jié)晶短的方法描述所有的重量、體積(“vol”)和當(dāng)量都是相對于1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽而言的。將1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(lwt，例如可按照實施例1方法D中所述的制備)在乙醇(50vol)中的懸浮液加熱回流，并攪拌直至形成溶液為止。將該溶液冷卻至65士3°C，并使其澄清。加入熱的乙醇的管線洗滌液(3vol)，并將溶液冷卻至58士3°C。加入1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(0.Olwt)的晶種，并將生成的懸浮液于58士3°C下攪拌30分鐘。然后將懸浮液用2小時的時間冷卻至O士3°C，隨后在此溫度下老化(aged)1小時。然后在真空下濾除該固體，并用冷的乙醇(3vol)洗滌。將產(chǎn)物在40°C下真空干燥直至恒定的探針溫度。詳細(xì)的方法描述1.將1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(lwt，140g，例如可按照實施例1方法D中所述的制備)加入到反應(yīng)器1中。2.使用氮氣凈化反應(yīng)器。3.力口入乙醇(50vol，7100mL)。4.加熱至回流，并攪拌直至形成溶液為止。5.將該溶液冷卻至65士3°C。6.通過裝有硅酮管的振動泵和5微米的在線過濾器，將反應(yīng)器1中的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器2中。7.將乙醇加入到反應(yīng)器l(3vol，420mL)中，并加熱至65士3°C。8.按照步驟6，將反應(yīng)器1中的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器2中。9.將該溶液冷卻至58士3°C。10.加入1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(O.Olwt)晶種，并將生成的懸浮液于58士3°C攪拌30分鐘。11.然后用2小時的時間將懸浮液冷卻至0士3°C，隨后在此溫度下老化1小時。12.然后在真空下濾出該固體，并用冷的乙醇(3vol)洗滌。13.將該產(chǎn)物在40°C下真空干燥直至恒定的探針溫度。14.通常獲得白色固體的產(chǎn)物。生物數(shù)據(jù)根據(jù)下列方法可以制備含組胺H3受體的膜制品⑴組胺H3細(xì)胞系的產(chǎn)生將編碼人組胺H3基因的DNA(Huvar，A.等人(l"9)Mol.Pharmacol.55(6)，1101-1107)克隆到夾持載體(holdingvector)，pCDNA3.1T0P0(InVitrogen)中，然后通過用酶BamHl和Not_l對質(zhì)粒DNA限制酶切消化，將它的cDNA從這種載體中分離出來，然后連接到用相同酶消化的誘導(dǎo)型表達(dá)載體pGene(InVitrogen)中。如美國專利號5，364，791；5，874，534和5，935，934中所述運行GeneSwitch體系(一種在沒有誘導(dǎo)劑的情況下使轉(zhuǎn)基因表達(dá)關(guān)閉以及在誘導(dǎo)劑存在下轉(zhuǎn)基因表達(dá)開放的體系)。將連接的DNA轉(zhuǎn)化至感受態(tài)的(competent)DH5a大腸桿菌宿主細(xì)菌細(xì)胞并平鋪到含50ygmriZeocin1^是一種允許對存在于pGene和pSwitch上的shble基因進(jìn)行細(xì)胞表達(dá)選擇的抗生素)的LuriaBroth(LB)瓊脂上。含重新連接(re-ligated)質(zhì)粒的菌落通過限制性酶切分析確認(rèn)。從含pGeneH3質(zhì)粒的宿主細(xì)菌的250ml培養(yǎng)物制備用于轉(zhuǎn)染至哺乳動物細(xì)胞的DNA，接著使用DNA制備試劑盒(QiagenMidi-Pr印)按照廠商的指示(Qiagen)進(jìn)行分離。在使用前24小時，將先前用pSwitch調(diào)節(jié)性質(zhì)粒(InVitrogen)轉(zhuǎn)染的CH0K1細(xì)胞以每T75瓶2X10e6細(xì)胞種晶到完全培養(yǎng)基中，該完全培養(yǎng)基含有補充有10%v/v透析的胎兒牛血清、L-谷氨酰胺和潮霉素(100ugml-1)的HamsF12(GIBC0BRL，LifeTechnologies)培養(yǎng)基。使用Lipofectamine和根據(jù)廠家指南(InVitrogen)將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到所述細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染后48小時，將細(xì)胞置于補充有500ygmF1zeocin的完全培養(yǎng)基中。選擇10-14天后，將lOnM米非司酮(InVitrogen)加入到培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)受體表達(dá)。誘導(dǎo)18小時后，使用乙二胺四乙酸(EDTA；15000；InVitrogen)將細(xì)胞從瓶上解離，接著用pH7.4的磷酸鹽緩沖鹽水洗滌數(shù)次并重新懸浮在分選(Sorting)培養(yǎng)基中，該培養(yǎng)基含有極限必需培養(yǎng)基(MinimumEssentialMedium)(MEM)，沒有酚紅，并且補充有Earles鹽和3%的FoetalCloneII(Hyclone)。通過下列方法檢測約lX10e7細(xì)胞的受體表達(dá)用抗組胺H3受體的N-末端區(qū)域的兔多克隆抗體，4a染色，在冰上孵育60分鐘，然后用分選培養(yǎng)基洗滌兩次。通過將細(xì)胞與山羊抗兔抗體在冰上孵育60分鐘，來檢測結(jié)合于受體的抗體，所述山羊抗兔抗體與Alexa488熒光標(biāo)記(MolecularProbes)絡(luò)合。用分選培養(yǎng)基再洗滌兩次后，將細(xì)胞通過50iimFilcon(BDBiosciences)過濾，然后在裝有自動細(xì)胞沉積裝置(AutomaticCellDepositionUnit)的FACSVantageSE流式細(xì)胞儀上進(jìn)行分析。對照細(xì)胞是以類似方式處理的非誘導(dǎo)細(xì)胞。將陽性染色細(xì)胞以單細(xì)胞形式分選到96孔板中，該96孔板中含有含500ygml—1Zeocin的完全培養(yǎng)基，并且在通過抗體和配體結(jié)合研究對受體表達(dá)進(jìn)行再次分析之前，使其擴(kuò)增。選擇一個克隆3H3用于膜制備。(ii)由培養(yǎng)細(xì)胞制備膜本方法的所有步驟在4°C下進(jìn)行并且使用預(yù)冷卻的試劑。將所述的細(xì)胞沉淀(pellet)重新懸浮在10體積的勻化緩沖液(50mMN_2_羥乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)，ImM乙二胺四乙酸(EDTA)、用K0H調(diào)節(jié)pH7.4，含有10e_4M亮肽素(乙酰基-亮氨?；?亮氨?；?arginal；SigmaL2884)和25yg/ml桿菌肽(SigmaB0125))中，該緩沖液補充有ImM苯甲基磺酰氟(PMSF)和2X10e-6M胃酶抑素(p印stain)A(Sigma)。然后，在ι升玻璃韋林氏攪切器(Waringblender)中通過2X15秒破裂(burst)將細(xì)胞勻漿，接著以500g離心20分鐘。然后，將所述上清液在48，OOOg下旋轉(zhuǎn)30分鐘。通過渦旋5秒將所述沉淀(pellet)再懸浮在勻漿緩沖液(4X原始的細(xì)胞沉淀的體積)中，并然后用注射器將其用力通過0.6mm內(nèi)徑的針頭。此時，將配制品等分至聚丙烯試管中并在-80°C下儲存。(iii)組胺Hl細(xì)胞系的產(chǎn)生使用在文獻(xiàn)中描述的已知方法克隆人Hl受體[Biochem.Biophys.Res.Commun.1994，201(2)，894]。根據(jù)在文獻(xiàn)中描述的已知方法產(chǎn)生穩(wěn)定表達(dá)的人Hl受體的中國倉鼠卵巢細(xì)胞[Br.J.Pharmacol.1996，117(6)，1071]。根據(jù)下列試驗可以測試本發(fā)明化合物或其可藥用鹽的體外生物學(xué)活性(I)組胺H3功能性拮抗劑試驗對于每個被測試的化合物，向固體白色的384孔板中加入(a)0.5μ1(0.5ul)在DMSO中稀釋至所需濃度的測試化合物(或0.5μ1(0.5ul)DMSO作為對照)；(b)30ul(30ul)珠膜/⑶P混合物，通過如下方法制備混合小麥胚芽凝集素聚苯乙烯(WheatGermAgglutininPolystyrene)LeadSeekerφ(WGAPSLS)閃爍親近測定法(SPA)珠與膜(例如根據(jù)上面描述的方法制備的)和ΙΟμΜ(ΙΟιιΜ)最終濃度的鳥嘌呤核苷5’二磷酸(⑶P)，并稀釋在試驗緩沖液(20mMN-2-羥乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸(HEPES)+IOOmMNaCl+10mMMgCl2,pH7.4NaOH)中，得到30μ1(30ul)最終體積，其每個孔含有5μg(5ug)蛋白和0.25mg珠，并在室溫下在回旋器上培養(yǎng)60分鐘；(c)15μl(15ul)的0.38nM[35S]-GTPγS([35S]-GTP-gamma-S)(Amersham；放射性濃度=37MBq/ml；比活度=1160Ci/mmol)、組胺(在導(dǎo)致組胺的最終試驗濃度是EC8tl的濃度下)。將板密封2-6小時后，將所述板以1500rpm離心5分鐘并在Viewlux計數(shù)器上使用613/55濾膜(filter)對每個板計數(shù)5分鐘。使用4-參數(shù)logistical方程分析數(shù)據(jù)。將基礎(chǔ)活性用作最小值，即其中組胺H3拮抗劑iOdOphenprOpit(30uM，0.5ul)已被加入到孔中。(II)組胺Hl功能性(functional)拮抗劑測定將穩(wěn)定表達(dá)重組人Hl受體的貼壁的中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞在Alpha最低基礎(chǔ)培養(yǎng)基(MinimumEssentialMedium)(GibcoInvitrogen)中維持在37°C、5%CO2的培養(yǎng)狀態(tài)下，所述Alpha最低基礎(chǔ)培養(yǎng)基不含核糖核苷并且補充以10%透析的胎牛血清和200mM谷氨酰胺。將這些表達(dá)人Hl受體的細(xì)胞快速冷凍并儲存用于測定。測定前24或72小時，將這些細(xì)胞以分別為12000或4000細(xì)胞/孔的密度種晶于黑壁透明底384孔板(blackwalledclear-base384-wellplate)中，并在37°C、5%CO2培養(yǎng)。細(xì)胞種晶密度導(dǎo)致在約24小時(12000細(xì)胞/孔的密度)或72小時(4000細(xì)胞/孔的密度)的時間點產(chǎn)生了匯合的細(xì)胞單層(confluentmonolayerofcell)。將培養(yǎng)基吸出，然后將細(xì)胞用HBSS培養(yǎng)基(CaCl2.2H201.26mM,葡萄糖5.55mM,KCl5.36mM,MgSO4(無水)0·81mM,NaCl136.89mM,KH2PO4(無水)0.41mM,HEPES20mM,NaHCO34.16mM)在37°C孵育60分鐘，所述HBSS培養(yǎng)基含有細(xì)胞質(zhì)鈣指示劑(即呈乙?；谆问降腇luo-4)(4mM)、2.5mM丙磺舒(Probenecid)和250uM亮黑(BrilliantBlack,MolecularDevices)。然后將裝載的細(xì)胞與測試化合物在37°C—起孵育30分鐘。然后將板置于FLIPR(MolecularDevices,UK)中用于在拮抗劑模式下測試，其中在對細(xì)胞熒光(入ex488nm,Aem540nm)進(jìn)行監(jiān)測的同時加入預(yù)定濃度的組胺(約4xEC50)。功能性拮抗作用(Functionalantagonism)通過對組胺誘導(dǎo)的熒光增加的抑制來指示，這是由FLIPR系統(tǒng)(MolecularDevices)測量的。借助濃度效應(yīng)曲線，使用標(biāo)準(zhǔn)藥理學(xué)數(shù)學(xué)分析來確定功能性親和力。H3和HI功能性拮抗劑測定的結(jié)果1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(例如實施例E1)在組胺H3功能性拮抗作用測定中進(jìn)行測試。結(jié)果表示為功能性pKjfpig值。功能性是在H3功能性拮抗劑測定中使用從培養(yǎng)的H3細(xì)胞制備的膜確定的拮抗劑平衡解離常數(shù)的負(fù)對數(shù)。結(jié)果作為多次實驗的平均數(shù)給出。1-(1_甲基乙基)_4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(例如實施例E1)顯示出fpKi為約7.6的拮抗作用(27次實驗的平均值)，其中所觀測到的fpKi范圍為6.9至8.2。1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(例如實施例E1)在組胺HI功能性拮抗劑測定或類似的HI功能性拮抗劑測定中進(jìn)行測試。同樣地，結(jié)果表示為功能性pKjfpig值，并且是多次實驗的平均數(shù)。1-(1_甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(例如實施例E1)顯示出約<5.6fpKi的拮抗作用。大鼠離體結(jié)合研究_大鼠腦組胺H3受體占據(jù)進(jìn)行離體結(jié)合研究以確定在口服給予測試化合物后在某些時間點大鼠中腦組胺H3受體的占據(jù)情況。成年雄性大鼠(Listerhooded200_250g，CharlesRiver,UK)通過口服管飼法(oralgavage)接受媒介物(1%w/v甲基纖維素水溶液)(對照)或測試化合物(10mg/kg)(每組n=3)，并在口服給予后1或4小時處死。1小時和4小時研究不一定在同一日中完成。收集終末點血樣，并快速移除腦。從每個腦的一半(half)剖離大腦皮層組織用于離體結(jié)合；另一半腦可用于各種化合物的腦中濃度的藥物代謝動力學(xué)分析。將所有剖離的組織試樣在液氮中快速冷凍，并儲存在-80°C直到使用。將組織快速解凍，然后在約30體積的冰冷的測定反應(yīng)緩沖液中勻漿。測定反應(yīng)緩沖液含有50mMTris-HCl(使用Trizma預(yù)置晶體pH7.7i25°C,Sigma目錄號T8068-250G制得)和5mMEDTA，最終緩沖液pH為7.2至7.8，通常為約7.4。然后使用粗制勻漿(600-800yg/孔)測量H3受體結(jié)合，使用[3H]-R_a-甲基組胺作為放射性配體。測量[3H]-R_a-甲基組胺總結(jié)合量的測定反應(yīng)混合物由50u1測定反應(yīng)緩沖液、400yl勻漿(相當(dāng)于600-800yg/孔)禾P50yl2nMR㈠a-甲基[咪唑-2，5(n)-3H]組胺二鹽酸鹽([3H]-R-a-甲基組胺；比活度，24CimmoF1,AmershamBiosciences,目錄號TRK1017)組成。用[3H]-R-a-甲基組胺在30°C孵育45分鐘。使用相同測定來平行確定[3H]-R_a-甲基組胺的非特異性結(jié)合，不同的是使用50yl10iiMimetit(H3受體激動劑，例如可獲自Tocris)而不是50yl測定反應(yīng)緩沖液。通過WhatmanGF/B濾紙(在0.3%v/v聚乙烯亞胺(PEI)中預(yù)浸)快速過濾從而終止實驗，然后將濾紙用4X5ml的冰冷的收集緩沖液充分洗滌。收集緩沖液含有50mMTris-HCl(來自Trizma預(yù)置晶體pH7.7@25V)和5mMMgCl2，最終緩沖液的pH為7.2至7.8，通常為約7.4。將濾紙干燥，然后加至各含有4mlUltimaGoldMV閃爍液(HewlettPackard)的小瓶中，通過液體閃爍光譜法使用PackardTri-Carb2500TR液體閃爍計數(shù)器確定放射性。[3HJ-R-Q-甲基組胺與H3受體的特異性結(jié)合如下確定從針對總結(jié)合獲得的值中減去針對非特異性結(jié)合獲得的值。蛋白質(zhì)濃度使用Bradford測定法(Bio-Rad蛋白質(zhì)測定染色試劑濃縮物(ProteinAssayDyeReagentConcentrate),目錄號500-0006；獲自Bio-RadLaboratoriesGmbH,Heidemannstrasse164,80939Muenchen,Germany-MWiUBio-Rad,York,UK)石角胃，ffi+血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn)品。就蛋白質(zhì)而言，對試樣中的比活性進(jìn)行校正(即每毫克蛋白質(zhì))。[3H]-R-a-甲基組胺與H3受體的特異性結(jié)合表示為平均值(η=3只大鼠士SEM(平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差)，為媒介物處理的對照組動物的百分?jǐn)?shù)。數(shù)據(jù)也表示為對[3HJ-R-Q-甲基組胺與Η3受體的特異性結(jié)合的抑制，作為測試化合物引起的Η3受體占據(jù)的替代量度，其計算為100%減去[3H]-R_a-甲基組胺與H3受體的平均特異性結(jié)合％值。大鼠離體結(jié)合研究結(jié)果就1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽而言，在本發(fā)明中，將其以10mg/kg的劑量口服給予大鼠(η=3)，口服給予1小時后將大鼠處死，[3H]-R-a-甲基組胺與H3受體的特異性結(jié)合確定為40%士2%(相對于對照組的百分?jǐn)?shù))。因此，對[3H]-R-α-甲基組胺與H3受體的特異性結(jié)合的抑制為約60%，為對口服給予(10mg/kg)l小時后測試化合物引起的大鼠腦H3受體占據(jù)的替代量度。就1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽而言，在本發(fā)明中，將其以10mg/kg的劑量口服給予大鼠(η=3)，口服給予4小時后將大鼠處死，[3H]-R-a-甲基組胺與Η3受體的特異性結(jié)合確定為84%士6%(相對于對照組的百分?jǐn)?shù))。因此，對[3H]-R-α-甲基組胺與H3受體的特異性結(jié)合的抑制為約16%，為對口服給予(10mg/kg)4小時后測試化合物引起的大鼠腦H3受體占據(jù)的替代量度。就1_(異丙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}六氫-1H-1，4-二氮雜鹽酸鹽即對比化合物而言，將其以10mg/kg的劑量口服給予大鼠(η=3)，口服給予1小時后將大鼠處死，[3H]-R-a-甲基組胺與H3受體的特異性結(jié)合確定為40%士4%(相對于對照組的百分?jǐn)?shù))。因此，對[3H]-R-a-甲基組胺與H3受體的特異性結(jié)合的抑制為約60%，為對口服給予(10mg/kg)1小時后測試化合物引起的大鼠腦H3受體占據(jù)的替代量度。就1_(異丙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}六氫-1H-1，4_二氮雜革鹽酸鹽即對比化合物而言，將其以10mg/kg的劑量口服給予大鼠(η=3)，口服給予4小時后將大鼠處死，[3H]-R-α-甲基組胺與Η3受體的特異性結(jié)合確定為88%士6%(相對于對照組的百分?jǐn)?shù))。因此，對[3H]-R-α-甲基組胺與Η3受體的特異性結(jié)合的抑制為約12%，為對口服給予(10mg/kg)4小時后測試化合物引起的大鼠腦H3受體占據(jù)的替代測量。組胺H3受體拮抗劑“豬-PET”研究，在Yorkshire-Landrace豬中使用正電子發(fā)射斷層掃描(PET)豬腦H3受體占據(jù)隨時間的分布這些研究以及從中得到的結(jié)果部分闡述在已簡要描述的附圖10、11、12、13和14中。正電子發(fā)射斷層掃描(PET)的理論PET是核成像技術(shù)，其能夠測量活體中放射性藥物的四維(三個空間維度，一個時間維度)分布。對生物活性分子(其在與有關(guān)受體(在這種情況下為組胺H3受體)結(jié)合)如下進(jìn)行修飾用發(fā)射正電子的核(例如150、"C、18F等)交換所述生物活性分子的一個原子。然后將放射性分子(放射性藥物)靜脈注射到受試者中。理論上，發(fā)射正電子的原子通過從其核中釋放正電子而進(jìn)行放射性衰變。通常與環(huán)境進(jìn)行幾次相互作用后，正電子損失動能，然后通過湮滅與電子進(jìn)行相互作用。湮滅導(dǎo)致彼此呈180°地放出兩個高能量光子(2X511keV)。通過正電子-電子湮滅產(chǎn)生的高能量光子對(在180°放出)可從外部檢測到。PET掃描儀中的晶體檢測器的環(huán)感知同時產(chǎn)生的兩個光子的存在并記錄感知兩個光子的兩個檢測器對的數(shù)據(jù)，從而能夠定位活性。在PET掃描的過程中通常這樣進(jìn)行數(shù)百萬次。使用斷層重建技術(shù)連續(xù)產(chǎn)生三維圖像。PET的性能是固有定量的，因此可使用放射性藥物的比活度(SA)以Bq/ml或nM為單位表示放射性藥物的三維分布。用PET測量體內(nèi)受體占據(jù)非放射標(biāo)記的測試化合物(“藥物候選物”)的受體占據(jù)可如下間接測量測量放射性配體的特異性結(jié)合由于競爭性結(jié)合的減少(圖10)。如圖10所示，藥物候選物的占據(jù)可通過測量放射性配體與受體的特異性結(jié)合的減少來間接測量。ba為可得的受體位點的濃度。注意由于組織中存在不同濃度的藥物候選物而導(dǎo)致ba如何在基線和給予測試化合物后10分鐘、2.5小時和6小時之間變化。進(jìn)行基線掃描，在此將少量的放射性配體(在Pg級的范圍，從而使放射性配體的自身占據(jù)最小化，<10%)給予受試者。使用來自靶標(biāo)區(qū)域和參照區(qū)域(不包括特異性結(jié)合位點的區(qū)域)的區(qū)域時間活性曲線和數(shù)學(xué)模型可以估計結(jié)合潛能(bindingpotential,BPm)，其與各靶標(biāo)區(qū)域的可得受體Ba的濃度成比例。基線掃描后，將未標(biāo)記的藥物候選物給予受試者，隨后在有關(guān)時間點獲得掃描，并估計結(jié)合潛能。將藥物候選物在不同時間點的占據(jù)計算為結(jié)合潛能測量相對于基線變化的百分比(J.Passchier，A.Gee,A.ffillemsen,ff.Vaalburg,andA.vanWaarde,"Measuringdrug-relatedreceptoroccupancywithpositronemissiontomography,，，Methods,2002,vol.27,pp.278-286)。在Yorkshire-Landrace豬中的臨床前PET研究1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(“鹽A”，本發(fā)明的化合物)和1_(異丙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}六氫-1H-1，4-二氮雜革鹽酸鹽(“鹽B”，對比化合物)的H3受體占據(jù)(R0)時間過程使用選擇性H3受體拮抗劑["C]GSK189254和PET在Yorkshire-Landrace豬中測量。["C]GSK189254為["C-N-甲基]_6_(3_環(huán)丁基_2，3，4，5-四氫_1H_苯并[d]氮雜革-7-基氧基)-煙酰胺和/或其可藥用鹽，["C-N-甲基]-6-(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-IH-苯并[d]氮雜革-7-基氧基)-煙酰胺的結(jié)構(gòu)為關(guān)于["C]GSK189254的制備參見WO2006/072596A1(GlaxoGroupLimited)第5頁第8行至第6頁第11行，其中的實施例1(化合物A)使6-(3-環(huán)丁基-2，3，4，5-四氫-IH-苯并[d]氮雜革-7-基氧基)-煙酰胺與[11C]碘甲烷在130°C在二甲亞砜中在四丁基氟化銨的存在下反應(yīng)，然后進(jìn)行HPLC純化。關(guān)于["C]GSK189254在(豬)PET成像研究中的用途，參見例如WO2006/072596A1的第7頁第32行至第9頁第2行。使用1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(“鹽A”)進(jìn)行豬-PET研究Yorkshire-Landrace豬(η=3，豬重量約38士Ikg)在麻醉下(氯胺酮-咪達(dá)唑侖誘導(dǎo)+異氟烷維持)在同一日進(jìn)行四次PET掃描，如圖11中闡述的豬-PET方案中所示。放射性配體["C]GSK189254在合成后立即進(jìn)行各次PET掃描。使含有[11C]GSK189254的粗反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行HPLC純化，使用反相C18柱(Waters,X-terraRP18，19X100mm，5mm)，流速為IOmL/分鐘，流動相為17%乙腈/pH為4的0.IN甲酸銨緩沖水溶液。將收集的含有["C]GSK189254的產(chǎn)物級分真空濃縮以除去乙腈，然后在0.9%氯化鈉水溶液中重新配制。針對各次PET掃描，將于上述媒介物(其實際上是甲酸銨緩沖水溶液和鹽水的混合物)中的放射性配體["C]GSK189254，歷時約1分鐘以推注的方式靜脈(i.v.)給予。注射總量少于2微克的["C]GSK189254，就重約38士Ikg的豬而言，注射的平均總劑量少于53ng/kg。經(jīng)由["C]GSK189254注入到每只豬中的放射性的量通常為約250至約400MBq(理想地為約300MBq)。每只豬所注射的["C]GSK189254+媒介物的體積取決于從末次HPLC純化獲得的產(chǎn)率，但通常范圍為約2至約11ml。血液和組織放射性濃度(activityconcentration)數(shù)據(jù)記錄90分鐘。基線掃描后，歷時約1分鐘通過推注方式靜脈給予未標(biāo)記的1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(“鹽A”，50μg/kg，50微克/kg)(lml鹽水媒介物水溶液)。隨后的PET采集在給予鹽A后的10、150和360分鐘開始。測定動脈血樣的["C]GSK189254血漿活性和代謝物和1_(1_甲基乙基)_4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的血漿濃度。使用1-(異丙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}六氫-1H-1，4-二氮雜革鹽酸鹽(“鹽B”)進(jìn)行豬-PET研究使用1_(異丙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}六氫-1H-1，4-二氮雜革鹽酸鹽(“鹽B”，50yg/kg，50微克/kg于媒介物中的溶液)在Yorkshire-Landrace豬(η=3，豬重量約38士Ikg)中重復(fù)基本上相同的實驗操作。結(jié)合潛能和占據(jù)測量將PET圖像定位(align)到立體定位圖上，并獲得有關(guān)靶標(biāo)區(qū)域(額皮質(zhì)、海馬、殼核(putamen)、尾部(caudate)、間腦、丘腦內(nèi)側(cè)、丘腦外側(cè)、小腦蚓、腦橋、中腦和延髓)的區(qū)域時間活性曲線。使用小腦作為參照區(qū)域?qū)⒑唵位膮⒄战M織模型(SRTM)(A.A.LammertsmaandS.P.Hume,“SimplifiedreferencetissuemodelforPETreceptorstudies,“Neuroimage，1996，vol.4，pp.153-158)擬合成每個區(qū)域時間活性曲線·其中Ct(t)為靶標(biāo)區(qū)域中的放射性濃度，Cr(t)為參照區(qū)域(小腦)的放射性濃度，R1為靶標(biāo)和參照區(qū)域之間的流入(influx)(Ic1)比率，k2為靶標(biāo)區(qū)域中的組織-血漿流出速率常數(shù)，BPnd為靶標(biāo)區(qū)域的結(jié)合潛能。此外，結(jié)合潛能可定義為β其中fND為組織中無放射性配體部分的分?jǐn)?shù)，Ba為結(jié)合位點的可得濃度，Kd為放射性配體_受體復(fù)合物的平衡解離常數(shù)。受體占據(jù)可計算為基線和給藥后掃描之間的BPnd變化百分?jǐn)?shù)(J.Passchier，A.Gee,A.ffillemsen,W.Vaalburg,andA.vanWaarde,"Measuringdrug-relatedreceptoroccupancywithpositronemissiontomography,"Methods,2002,vol.27,pp.278-286)(在["C]GSK189254的情況中，小腦不是真正的參照區(qū)域，因為在這個區(qū)域存在少量特異性信號。這可使用小腦結(jié)合潛能(BPNDref)的群體估計值和以下方程進(jìn)行校正對占據(jù)分布進(jìn)行模型化使用給予藥物候選物后10、150和360分鐘的時間占據(jù)分布(Occ(t))和在整個PET整體掃描中測量的藥物候選物的血漿濃度(Cp(t))，從間接模型(k。n-k。ff限制模型)得至IJPK/R0(藥物代謝動力學(xué)/受體占據(jù))得到模型參數(shù)估計化、、和k。ff)其中k。n和k。ff分別為定義測試化合物與H3受體結(jié)合或脫離的速度的速率常數(shù)，fp為測試化合物(此處為鹽A或鹽B)的血漿中無蛋白質(zhì)部分的分?jǐn)?shù)。該模型假定限速步驟為受體_配體結(jié)合和解離(k。n，k。ff)，而血漿_組織交換足夠快以至于被視為瞬時發(fā)生平衡。豬-PET研究的結(jié)果圖12中A圖顯示1-(1-甲基乙基)_4_{[4_(四氫_2H_吡喃_4_基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(“鹽A”，本發(fā)明的化合物，實心的圓形)和1_(異丙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}六氫-1H-1，4-二氮雜萆鹽酸鹽(“鹽B”，對比化合物，實心的菱形)隨時間推移的平均(均值)血漿濃度。圖12中B圖顯示在三個時間點測量的H3受體占據(jù)時間過程的平均(均值)，以及對其擬合的k。n-k。ff限制模型本發(fā)明的“鹽A”(測定結(jié)果為實心的圓形，并且模型擬合為實線)，對比化合物“鹽B”(測定結(jié)果為實心的菱形，并且模型擬合為虛線)。圖13中的A和B部分為顯示從圖12得到的單獨鹽A的數(shù)據(jù)的圖，從而分別顯示“鹽A”隨時間推移的平均(均值)血漿濃度和平均(均值)H3受體占據(jù)時間過程。圖13中的C和D部分為顯示從圖12得到的單獨鹽B的數(shù)據(jù)的圖，從而分別顯示“鹽B”隨時間推移的平均(均值)血漿濃度和平均(均值)H3受體占據(jù)時間過程。圖14顯示就所研究的每只個體豬而言分別的個體血漿濃度和H3受體占據(jù)時間過程，針對1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(“鹽A”，本發(fā)明的化合物，左手邊的圖，η=3)，1-(異丙基)-4-{[4-(四氫-2Η-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}六氫-1Η-1，4-二氮雜革鹽酸鹽(“鹽B”，對比化合物，右手邊的圖，η=3)。表1顯示了每次個體研究(即每只個體豬)的所估計的參數(shù)k。n、k。ff、Kd(koff/kon)和血漿清除率。表1的最后一行(“平均模型”)顯示了從平均血漿數(shù)據(jù)和平均占據(jù)(圖12,13)得到的估計參數(shù)；可以注意的是，這些“平均模型”參數(shù)似乎大體上與針對各次掃描各自估計的平均參數(shù)(“均值”)(從下面數(shù)第二行)一致。表1針對每次個體研究(每只個體豬)估計的模型參數(shù)以及從平均數(shù)據(jù)得到的參數(shù)。_^A__^lB_KonKflKd血菜清除率Konk.(fKi血漿清除率(min'1)(min"1)(ng/ml)(L/小時)(mir"1)(min"1)(ng/ml)(L/小時)表2顯示了在三個時間點測量的H3受體占據(jù)，在每個時間點針對各測試化合物鹽A和鹽B進(jìn)行了三次個體研究(在所研究的三只個體豬中的每只豬進(jìn)行)。表2在給予測試化合物后10分鐘、2.5小時和6小時在三只個體豬中測量的各測試化合物鹽A和鹽B的H3受體占據(jù)(和均值占據(jù)士標(biāo)準(zhǔn)偏差)。豬-PET研究的結(jié)論通過PET和["C]GSK189254在Yorkshire-Landrace豬(η=3)中獲得的初步測量結(jié)果似乎表明，在測試的條件(即以50微克/kg將測試化合物靜脈給予豬后，以及在其他所述的條件下)下，與1-(異丙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}六氫-1H-1，4-二氮雜革鹽酸鹽(“鹽B”，對比化合物)相比，在豬腦中1-(1-甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(“鹽A”，本發(fā)明的化合物)的H3受體占據(jù)通常更快地減少。如上表2所示，本發(fā)明的化合物鹽A與對比化合物鹽B相比在豬腦中的H3受體占據(jù)明顯更快的降低見于用鹽A進(jìn)行測試的研究2和3(即豬2和3)，但明顯沒有體現(xiàn)在用鹽A進(jìn)行測試的研究1(即豬1)中。毒性研究1在雄性SpragueDawley大鼠7日口服重復(fù)劑量研究中1_(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的毒性毒性研究1的設(shè)計方案該研究的目的是確定在雄性SpragueDawley大鼠7日口服重復(fù)劑量研究中1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2!1-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的毒性以及1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]-羰基}哌嗪鹽酸鹽(作為游離堿形式測量)的毒物代謝動力學(xué)。將1-(1-甲基乙基)-4-{[4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽配制成于(w/v)甲基纖維素水溶液中的懸浮液，然后給予雄性大鼠(每組四只)，口服管飼法的7日劑量為0(媒介物，對照)、30、100或300mg/kg/日，劑量體積為10mL/kg。在每個非零劑量水平加入三只雄性大鼠，用于進(jìn)行毒物代謝動力學(xué)評價。所有劑量和濃度，包括血漿中的分析物濃度，都以母體“游離堿”化合物的方式表示。針對毒理學(xué)動物評價以下終末點/參數(shù)臨床觀察、體重、食物消耗測量、所選擇的血液病學(xué)和所選擇的臨床化學(xué)結(jié)果、肝重、所選擇的肉眼觀察和顯微鏡觀察，以及所選擇的肝基因表達(dá)分析。在從第1日和第7日的隨體動物(satelliteanimal)中收集的試樣上進(jìn)行毒物代謝動力學(xué)評價(連續(xù)分布)。針對劑量為30或100mg/kg/日的雄性大鼠，僅對腎、腸系膜和下頌淋巴結(jié)進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。針對劑量為Omg/kg/日(對照)和300mg/kg/日的雄性大鼠，對腎上腺、腦、心臟、腎、肝、肺、下頌淋巴結(jié)、腸系膜、胃、睪丸和胸腺(不同的是僅針對劑量為Omg/kg/日的大鼠進(jìn)行下頌淋巴結(jié)觀察)進(jìn)行組織病理學(xué)觀察。毒性研究1的主要結(jié)果的概括-在劑量為300mg/kg/日的雄性大鼠中觀察到體重增量(bodyweightgain)減少(約0.38X對照)和食物消耗減少(約0.80X處置前)。-在劑量為100mg/kg/日的雄性大鼠中觀察到體重增量增加(約1.43X平均對照)。-在用300mg/kg/日的劑量處置的所有四只雄性大鼠的腎門區(qū)(hilarregionofthekidney)均注意到嚴(yán)重程度為最小的動脈周炎性細(xì)胞浸潤，并且是單側(cè)的(4只大鼠中的2只)或兩側(cè)的(4只大鼠中的2只)。該現(xiàn)象并未在腸系膜動脈或所檢查的任何其他動脈中發(fā)現(xiàn)，并且其意義是不清楚的。-檢查劑量為0(媒介物)、30和100mg/kg/日的雄性大鼠的腎；在這些劑量下未發(fā)現(xiàn)腎門動脈周炎性細(xì)胞浸潤。-在劑量為300mg/kg/日的雄性大鼠中膽固醇濃度稍微降低(約0.65X平均對照)。-在所有非零劑量的雄性大鼠(主要是劑量為300mg/kg/日的雄性大鼠)中均注意到大鼠在籠中的地板上摩擦下顎，伴隨有咀嚼活動。-在劑量為300mg/kg/日或100和300mg/kg/日的雄性大鼠中注意到某些其他現(xiàn)象，但通常是偶發(fā)的、短暫的和顯著輕微的。在雄性SpragueDawley大鼠中，持續(xù)7日以30或100mg/kg/日口服重復(fù)劑量的1-(1"甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(作為游離堿測量)似乎是耐受良好的。在雄性SpragueDawley大鼠中，持續(xù)7日以300mg/kg/日口服重復(fù)劑量的這種鹽(作為游離堿測量)似乎是中度耐受良好的。毒性研究2在SpragueDawley大鼠7日口服劑量范圍探測研究中1_(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的毒性將配制成于1%(w/v)甲基纖維素水溶液中的懸浮液的1-(1-甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽，以如下的10mL/kg劑量體積給予各組SpragueDawley大鼠(所有劑量和濃度都以母體“游離堿”化合物的方式表示)-通過口服管飼法每日一次給予雄性大鼠(每組4只)0(媒介物，對照)或600mg/kg/日的劑量，至多7日(僅2日的劑量為600mg/kg/日)；-通過口服管飼法每日一次給予雌性大鼠(每組4只)0(媒介物，對照)或300或600mg/kg/日的劑量，至多7日(僅2日的劑量為600mg/kg/日)。加入劑量為600mg/kg/日的三只雄性大鼠和三只雌性大鼠，加入劑量為300mg/kg/日的3只雌性大鼠用于毒物代謝動力學(xué)評價。針對毒理學(xué)動物評價以下終末點/參數(shù)臨床觀察、體重、食物消耗、所選擇的血液病學(xué)、所選擇的臨床化學(xué)、肝重、所選擇的肉眼觀察和顯微鏡觀察。毒物代謝動力學(xué)評價在第1日(300和600mg/kg/日劑量)和第7日(僅300mg/kg/日劑量)收集的試樣上進(jìn)行。無論是雄性還是雌性SpragueDawley大鼠對600mg/kg/日的劑量都不耐受。在劑量為300mg/kg/日的雌性大鼠中-臨床征兆包括咀嚼活動、在籠中的地板上摩擦下顎和某些其他臨床征兆；-某些血液病學(xué)和其他臨床化學(xué)參數(shù)增加；-尿素和膽固醇濃度降低(尿素約0.81X對照或平均對照，膽固醇約0.52X對照或平均對照)；以及-肝重增加(約1.24X對照或平均對照)，盡管似乎沒有相關(guān)的肉眼或顯微鏡觀察。在多數(shù)給予300mg/kg/日劑量的雌性大鼠中觀察到嚴(yán)重程度為最小的胃底部區(qū)域腺狀膨脹(Glandulardilation)。這種變化也存在于兩只對照動物中(一只雄性，一只雌性)，在這個階段其意義是不清楚的。在雌性SpragueDawley大鼠中，持續(xù)7日以300mg/kg/日口服重復(fù)劑量的1-(1"甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(作為游離堿測量)似乎是中度耐受良好的。毒性研究1和2的初步結(jié)論在持續(xù)7日以至多300mg/kg/日口服重復(fù)劑量后的雄性和雌性SpragueDawley大鼠中，1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽(作為游離堿測量)似乎是耐受良好的或中度耐受良好的。權(quán)利要求化合物，其為1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪，或其可藥用鹽FPA00001132940400011.tif2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其為1-(1_甲基乙基)_4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽。3.1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1，其特征在于X-射線粉末衍射譜圖具有五個或更多個定義為。20角的下列峰，其是采用利用銅KaX-射線的衍射計獲得6.4士0.1，12.7士0.1，15.4士0.1，15.7士0.1，17.1士0.1，19.1士0.1，19.7士0.1，21.9士0.1,25.5士0.1,27.0士0.1和28.2士0.1°20；條件是X-射線粉末衍射譜圖具有下列兩個峰15.7士0.1和25.5士0.1°29。4.根據(jù)權(quán)利要求3的1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1，其中所述X-射線粉末衍射譜圖具有八個或更多個權(quán)利要求3所限定的峰。5.1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1，其特征在于固體形式的傅里葉變換紅外譜圖基本上與圖5所示的相同。6.1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型1，其特征在于13C固態(tài)核磁共振譜圖具有下列的共振現(xiàn)象的化學(xué)位移18.5士0.3，30.4+0.3,31.8+0.3,37.6+0.3,45.8+0.3,49.4+0.3,52.3+0.3,59.2+0.3,63.6士0.3,68.4士0.3，110.3士0.3，118.8士0.3，128.4士0.3，131.2士0.3，133.9士0.3，159.1士0.3和167.6士0.3ppm。7.1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2，其特征在于X-射線粉末衍射譜圖具有五個或更多個定義為。20角的下列峰，其是采用利用銅KaX-射線的衍射計獲得6.4士0.1，12.8士0.1，15.4士0.1，19.2士0.1，19.7士0.1,20.0士0.1,21.8士0.1，21.9士0.1，23.5士0.1,24.65士0.1(或24.7士0.1)，25.8士0.1和27.0士0.1°20；條件是X-射線粉末衍射譜圖具有下面兩個峰20.0士0.1°29，以及24.65士0.1或24.7士0.1°20。8.根據(jù)權(quán)利要求7的1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2，其中X-射線粉末衍射譜圖具有八個或更多個權(quán)利要求7所限定的峰。9.1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2，其特征在于固體形式的傅里葉變換紅外譜圖基本上與圖7所示的相同。10.1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2，其特征在于13C固態(tài)核磁共振譜圖具有下列共振現(xiàn)象的化學(xué)位移18.8士0.3，19.5+0.3,32.4+0.3,37.5+0.3,45.7+0.3,49.3+0.3,52.7+0.3,59.1+0.3,66.3士0.3,71.1士0.3，109.4士0.3，119.6士0.3，128.4士0.3，131.3士0.3，134.3士0.3，158.7士0.3禾口167.8士0.3ppm。11.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其為1-(1_甲基乙基)_4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪。12.藥物組合物，其含有1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽以及可藥用載體或賦形劑。13.根據(jù)權(quán)利要求12的藥物組合物，其用于口服給藥，并且該藥物組合物含有1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽。14.根據(jù)權(quán)利要求12的藥物組合物，其用于口服給藥，并且該藥物組合物含有如權(quán)利要求7、8、9或10中任一項或多項所限定的1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽的晶型2。15.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項所限定的化合物、鹽或晶型，其用于治療。16.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項所限定的化合物、鹽或晶型，其用于治療或預(yù)防神經(jīng)疾病。17.1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防神經(jīng)疾病的藥物中的用途。18.1-(1-甲基乙基)_4-{[4-(四氫-211-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽在制備用于治療或預(yù)防哺乳動物中的認(rèn)知缺損、疲勞或睡眠障礙的藥物中的用途。19.根據(jù)權(quán)利要求18的用途，其中所述藥物用于治療或預(yù)防人的認(rèn)知缺損或疲勞。20.根據(jù)權(quán)利要求19的用途，其中所述藥物用于治療或預(yù)防人的認(rèn)知缺損，并且其中所述認(rèn)知缺損是下列疾病中的認(rèn)知缺損阿爾茨海默氏病、癡呆、輕度認(rèn)知缺損、或相關(guān)的神經(jīng)變性疾病，或者其中所述認(rèn)知缺損是帕金森氏病中的認(rèn)知缺損，或者其中所述認(rèn)知缺損是精神分裂癥中的認(rèn)知缺損。21.根據(jù)權(quán)利要求17、18、19或20的用途，其中所述1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽是1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪鹽酸鹽。22.用于治療或預(yù)防認(rèn)知缺損、疲勞或睡眠障礙的藥物組合物，其包括1-(1_甲基乙基)-4_{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽以及可藥用載體。23.治療需要該治療的哺乳動物例如人的神經(jīng)疾病的方法，所述方法包括給藥于哺乳動物有效量的1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽。24.治療或預(yù)防需要該治療的哺乳動物例如人的認(rèn)知缺損、疲勞或睡眠障礙的方法，所述方法包括給藥于哺乳動物治療有效量的1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽。25.制備1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其鹽的方法，所述方法包括a)使4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酰氯與1-異丙基哌嗪反應(yīng)；或b)使4_(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸或其非酰基氯衍生物(其中所述羧酸基團(tuán)已經(jīng)被活化)與1-異丙基哌嗪反應(yīng)；并任選地制備1-(1_甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪的鹽。26.根據(jù)權(quán)利要求25的方法，所述方法包括方法步驟b)，并且其中方法步驟b)包括在合適的溶劑中使用偶合劑來活化4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸，隨后與1-異丙基哌嗪反應(yīng)。27.根據(jù)權(quán)利要求26的方法，其中偶合劑為羰基二咪唑。28.根據(jù)權(quán)利要求27的方法，其中使用羰基二咪唑偶合劑活化4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯甲酸，以及隨后的與1-異丙基哌嗪的反應(yīng)兩者都在包含乙腈和/或丙腈的反應(yīng)溶劑中進(jìn)行。全文摘要本發(fā)明涉及1-(1-甲基乙基)-4-{[4-(四氫-2H-吡喃-4-基氧基)苯基]羰基}哌嗪或其可藥用鹽，特別是其鹽酸鹽以及鹽酸鹽的晶型；涉及制備該化合物或其鹽的方法；涉及含有它的組合物；并且涉及其在治療或預(yù)防例如在哺乳動物例如人中神經(jīng)病或精神病例如認(rèn)知缺損、疲勞或睡眠障礙中的用途。所述化合物或其鹽對組胺H3受體具有親和性，并且為組胺H3受體的拮抗劑和/或反激動劑。文檔編號A61P25/00GK101848903SQ200880115043公開日2010年9月29日申請日期2008年9月4日優(yōu)先權(quán)日2007年9月6日發(fā)明者巴里·S·奧萊克,帕梅拉·J·西奧博爾德,德斯蒙德·J·貝斯特,杰拉西莫斯·拉西亞斯,麥星洋申請人:葛蘭素集團(tuán)有限公司