專利名稱：新的半胱氨酸蛋白酶四環(huán)抑制劑、其藥物組合物和它們的治療應(yīng)用的制作方法
專利說明新的半胱氨酸蛋白酶四環(huán)抑制劑、其藥物組合物和它們的治療應(yīng)用 本發(fā)明涉及新的半胱氨酸蛋白酶抑制劑、它們的制備方法和它們的治療用途。
蛋白酶可以根據(jù)它們的底物特異性或催化機(jī)制進(jìn)行分類?；陔乃獾臋C(jī)制，已知5種主要的蛋白酶類別絲氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸、蘇氨酸和金屬蛋白酶。半胱氨酸蛋白酶特別包括去泛素化酶、胱天蛋白酶、組織蛋白酶、鈣蛋白酶以及病毒、細(xì)菌或寄生蟲的半胱氨酸蛋白酶。
去泛素化酶包括泛素特異性蛋白酶(USP)和泛素羧基末端水解酶(Ubiquitin Carboxy Hydrolase)(UCH)。一般而言，泛素途徑調(diào)節(jié)蛋白降解，更具體地，其涉及癌癥、神經(jīng)退行性疾病(例如阿爾茲海默氏病、帕金森病)、炎癥、病毒傳染性和潛伏(特別是對(duì)于單純皰疹病毒-1、EB病毒和SARS冠狀病毒)、或涉及心血管疾病(Chem.Rev.1997，97，p.133-171；Chem.Rev.2002，102，p.4459-4488；J.Biochem.2003，134，p.9-18；J.Virology，2005，79(7)，p.4550-4551；Cardiovasc.Res.2004，61，p.11-21)。
已表明，胱天蛋白酶涉及凋亡，因此是肝炎、肝衰竭、炎癥、心肌缺血和衰竭、腎衰竭、神經(jīng)退行性變、耳聾、糖尿病或卒中的靶點(diǎn)(J.Pharmacol Exp.Ther.，2004，308(3)，p.1191-1196，J.Cell.Physiol.，2004，200(2)，p.177-200；Kidney Int，2004，66(2)，p.500-506；Am.J.Pathol.，2004，165(2)，p.353-355；Mini Rev.Chem.，2004，4(2)，p.153-165；Otol.Neurotol.，2004，25(4)，p.627-632；Ref.7，21，22，23，24，25)。
已表明，組織蛋白酶一般涉及癌癥和轉(zhuǎn)移、炎癥、免疫/免疫調(diào)節(jié)(Eur.Respir.J.，2004，23(4)，p.620-628)和動(dòng)脈粥樣硬化(Ageing Res.Rev..2003，2(4)，p.407-418)。更具體地，組織蛋白酶包括涉及癌癥和轉(zhuǎn)移以及關(guān)節(jié)炎的組織蛋白酶B和B樣組織蛋白酶(Cancer Metastasis Rev.，2003，22(2-3)，p.271-286；Biol.Chem.，2003，384(6)，p.845-854和Biochem.Soc.Symp.，2003，70，p.263-276)、特別涉及癌癥和轉(zhuǎn)移的組織蛋白酶D(Clin.Exp.Metastasis，2004，21(2)，p.91-106)、在骨質(zhì)疏松和關(guān)節(jié)炎中起作用的組織蛋白酶K(Int.J.Pharm.，2004，277(1-2)，p.73-79)、已表明在免疫學(xué)抗原呈遞中起作用的組織蛋白酶S(Drug News Perspective，2004，17(6)，p.357-363)。
鈣蛋白酶一般在衰老(Ageing Res.Rev.2003，2(4)，p.407-418)、以及更特別地在糖尿病(Mol.Cell.Biochem.，2004，261(1)，p.161-167)和白內(nèi)障(Trends Mol.Med.，2004，10(2)，p.78-84)中起作用。
已在鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腺病毒或SARS冠狀病毒中鑒定出病毒半胱氨酸蛋白酶(Chem.Rev.1997，97，p.133-171；Chem.Rev.2002，102，p.4459-4488；J.Virology，2005，79(7)，p.4550-4551和Acta Microbiol.Immunol.Hung.，2003，50(1)，p.95-101)。
細(xì)菌半胱氨酸蛋白酶包括鏈球菌熱源性毒素(streptopain)、葡萄球菌半胱氨酸蛋白酶、梭菌蛋白酶或牙齦菌蛋白酶；亦已表明，酵母菌例如黃曲霉表達(dá)半胱氨酸蛋白酶，其可以構(gòu)成毒力因子(Chem.Rev.1997，97，p.133-171)。
寄生蟲半胱氨酸蛋白酶已在例如Molecular & Biochemical Parasitology(2002，120，p.1-21)和Chem.Rev.(2002，102，p.4459-4488)中綜述。值得注意的是，造成大多數(shù)主要的寄生蟲病的寄生蟲物質(zhì)在它們的感染、滋養(yǎng)或生殖周期的某些時(shí)候會(huì)利用它們自己的半胱氨酸蛋白酶；這樣的疾病包括瘧疾、美洲錐蟲病、非洲錐蟲病、利什曼病、賈第蟲病、滴蟲病、阿米巴病、隱孢子蟲病、弓形蟲病、血吸蟲病、片形吸蟲病、盤尾絲蟲病和由某些其它扁蟲或線蟲引起的其它感染。
因此，鑒別新類別的半胱氨酸蛋白酶抑制劑在多種疾病和病態(tài)情況中是非常重要的。
US 6514927、WO01/79209和WO02/02562公開了包含4個(gè)稠合的環(huán)的化合物。但是，并未提出它們作為半胱氨酸蛋白酶抑制劑的用途。
根據(jù)第一個(gè)目的，本發(fā)明涉及式(I)的化合物
其中

適當(dāng)時(shí)是單鍵或雙鍵； ------適當(dāng)時(shí)不存在或是單鍵；

是5至7-元雜環(huán)，優(yōu)選是包含1-5個(gè)雜原子、任選地被一個(gè)或多個(gè)選自H、CN、＝O、Hal、Alk、OAlk、OH、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR’、C(O)NRR’、雜環(huán)、芳基、雜芳基的取代基取代的雜芳基，其中Alk、芳基、雜芳基、雜環(huán)任選地被Hal、NRR’、CN、OH、CF3、芳基、雜芳基、OAlk取代； 其中

和

通過T和X稠合在一起； Y是N-OR1、NR′1、CR2R′2； R1是H、烷基、烯基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳烷基、烷氧羰基烷基、羧烷基； R′1是H、烷基、芳基或芳烷基； R2、R′2各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、烷基、芳基或芳烷基； T、U、V、W、X相同或不同，且可選自C、N、O、S； Ru、Rv、Rw相同或不同，且可選自H、CN、＝O、Hal、Alk、OAlk、OH、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR’、C(O)NRR’、雜環(huán)、芳基、雜芳基、環(huán)烷基，其中Alk、芳基、雜芳基、雜環(huán)、環(huán)烷基任選地被Hal、NRR’、CN、OH、CF3、芳基、雜芳基、OAlk取代； R3、R4、R5、R6各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、OAlk、Alk、Hal、NRR’、CN、OH、OCF3、CF3、芳基、雜芳基； R和R’各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、Alk，其中Alk任選地被Hal、NRR’、CN、OH、CF3、芳基、雜芳基取代； 或它們藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、或水合鹽、或者這些化合物的多晶型晶體結(jié)構(gòu)或它們的旋光異構(gòu)體、外消旋物、非對(duì)映體或?qū)τ丑w、或者它們的區(qū)域異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體(E和Z)或者它們的混合物。
優(yōu)選地，T、U、V、W、X是C或N。
優(yōu)選地，Y是N-OR1或NR′1，更優(yōu)選是N-OR1、特別是N-OH、N-烷基、N-O烯基、N-O烷基-O-烷基、N-O-烷基-CO-O烷基、N-O-烷基-COOH。
應(yīng)理解，當(dāng)Y是CR2R2’時(shí)，R2和/或R2’不能與式(I)結(jié)構(gòu)的其余部分形成稠環(huán)。
優(yōu)選地，

包含2或3個(gè)雜原子；更優(yōu)選地2或3個(gè)N。
最優(yōu)選地，

是
優(yōu)選地，

是未取代的。
優(yōu)選地，Ru、Rv、Rw選自H、芳基、Alk、NRR′、Hal、-Alk芳基、-AlkOH、-AlkOAlk、環(huán)烷基。
優(yōu)選地，

是

其中Rw是H。
優(yōu)選地，R3、R4、R5、R6各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、Hal、Alk、OAlk、OCF3。
優(yōu)選地，R和R’各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、Alk。
優(yōu)選地，Rv、Rw是H或不存在。
優(yōu)選的式(I)化合物是式(Ia)的化合物
最優(yōu)選的化合物特別是式(I1)-(I4)的化合物
本發(fā)明優(yōu)選的化合物選自以下 -3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟 -3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1-丁基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-癸基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(2-甲氧基乙基)肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(3-苯氧基丙基)肟 -1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟 -1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-乙基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-乙基肟 -1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-芐基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-芐基肟 -[1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基]苯胺 -(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸乙酯 -(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸鋰鹽， 或它們藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、或水合鹽、或者這些化合物的多晶型晶體結(jié)構(gòu)或它們的旋光異構(gòu)體、外消旋物、非對(duì)映體或?qū)τ丑w、或者它們的區(qū)域異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體(E和Z)或者它們的混合物。
最優(yōu)選的化合物特別選自以下 -3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟 -3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-癸基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(2-甲氧基乙基)肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(3-苯氧基丙基)肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-乙基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸乙酯 -(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸鋰鹽， 或它們藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、或水合鹽、或者這些化合物的多晶型晶體結(jié)構(gòu)或它們的旋光異構(gòu)體、外消旋物、非對(duì)映體或?qū)τ丑w、或者它們的區(qū)域異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體(E和Z)或者它們的混合物。
如上文或下文所使用的 Alk表示烷基、烯基或炔基。
“烷基”指可以是直鏈或支鏈的并在鏈中具有1-20個(gè)碳原子的脂族烴基。優(yōu)選的烷基在鏈中具有1-12個(gè)碳原子。“支鏈的”指一個(gè)或多個(gè)低級(jí)烷基例如甲基、乙基或丙基連接到直鏈烷基鏈。示例性的烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基、3-戊基、辛基、壬基、癸基。
“烯基”指包含碳-碳雙鍵的脂族烴基，其可以是直鏈或支鏈的，并在鏈中具有2-15個(gè)碳原子。優(yōu)選的烯基在鏈中具有2-12個(gè)碳原子；更優(yōu)選地在鏈中具有2-4個(gè)碳原子。示例性的烯基包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、異丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基。
“炔基”指包含碳-碳三鍵的脂族烴基，其可以是直鏈或支鏈的，并在鏈中具有2-15個(gè)碳原子。優(yōu)選的炔基在鏈中具有2-12個(gè)碳原子；更優(yōu)選地在鏈中具有2-4個(gè)碳原子。示例性的炔基包括乙炔基、丙炔基、正丁炔基、2-丁炔基、3-甲基丁炔基、正戊炔基、庚炔基、辛炔基和癸炔基。
“烷氧基烷基”指烷基-O-烷基，其中所述烷基獨(dú)立地如本文所定義。烷氧基烷基的例子是甲氧基乙基。
“烷氧羰基烷基”指烷基-O-CO-烷基-，其中所述烷基獨(dú)立地如本文所定義。示例性的烷氧羰基烷基包括甲氧基-和乙氧基-羰基甲基和羰基乙基。
“鹵素原子”指氟、氯、溴或碘原子；優(yōu)選氟和氯原子。
“芳基”指6-14個(gè)碳原子、優(yōu)選6-10個(gè)碳原子的芳族單環(huán)或多環(huán)烴環(huán)體系。示例性的芳基包括苯基或萘基。
“芳烷基”指芳基-烷基-，其中所述芳基和烷基獨(dú)立地如本文所定義。芳烷基的例子是芐基。
“芳氧基烷基”指芳基-O-烷基-，其中所述芳基和烷基獨(dú)立地如本文所定義。示例性的芳氧基烷基是苯氧基丙基。
如本文所用的，術(shù)語“雜環(huán)”或“雜環(huán)的”指飽和的、部分不飽和的或不飽和的、非芳族的、穩(wěn)定的3-14、優(yōu)選5-10元單、雙或多環(huán)，其中至少一個(gè)所述環(huán)的成員是雜原子。一般地，雜原子包括但不限于氧、氮、硫、硒和磷原子。優(yōu)選的雜原子是氧、氮和硫。
適合的雜環(huán)還在The Handbook of Chemistry and Physics，第76版，CRCPress，Inc.，1995-1996，p.2-25至2-26中公開，其公開內(nèi)容通過引用結(jié)合于此。
優(yōu)選的非芳族雜環(huán)包括但不限于吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、環(huán)氧乙烷基、四氫呋喃基、二氧戊環(huán)基、四氫吡喃基、二噁烷基、二氧戊環(huán)基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、吡喃基、咪唑啉基、吡咯啉基、吡唑啉基、噻唑烷基、四氫噻喃基、二噻烷基(dithianyl)、硫代嗎啉基、二氫吡喃基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、四氫吡啶基、二氫吡啶基、四氫嘧啶基(tetrahydropyrinidinyl)、二氫噻喃基、氮雜環(huán)庚烷基(azepanyl)，以及得自與苯基縮合的稠合體系。
如本文所用的，術(shù)語“雜芳基”或芳族雜環(huán)指5-14、優(yōu)選5-10元芳族雜、單、雙或多環(huán)。例子包括吡咯基、吡啶基、吡唑基、噻吩基、嘧啶基、吡嗪基、四唑基、吲哚基、喹啉基、嘌呤基、咪唑基、噻吩基、噻唑基、苯并噻唑基、呋喃基、苯并呋喃基、1，2，4-噻二唑基、異噻唑基、三唑基、四唑基、異喹啉基、苯并噻吩基、異苯并呋喃基、吡唑基、咔唑基、苯并咪唑基、異噁唑基、吡啶基-N-氧化物、以及得自與苯基縮合的稠合體系。
“羧烷基”指HOOC-烷基-，其中所述烷基如本文所定義。優(yōu)選的基團(tuán)包括羧甲基和羧乙基。
“烷基”、“環(huán)烷基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”、“雜芳基”、“雜環(huán)”等還指通過脫去兩個(gè)氫原子而形成的相應(yīng)“亞烷基”、“亞環(huán)烷基”、“亞烯基”、“亞炔基”、“亞芳基”、“亞雜芳基”、“亞雜環(huán)”等。
如本文所用的，術(shù)語“患者”指動(dòng)物例如出于飼養(yǎng)、陪伴或保護(hù)目的的珍貴動(dòng)物、或優(yōu)選指人類或人類兒童，它們罹患或可能罹患一種或多種本文所述的疾病和病癥。
如本文所用的，“治療有效量”指本發(fā)明的化合物有效預(yù)防、減少、消除、治療或控制本文所述的疾病和病癥的癥狀的量。術(shù)語“控制”意指其中可以存在延緩、中斷、阻止或停止本文所述的疾病和病癥的進(jìn)展的所有方法，但不一定表示全部消除所有的疾病和病癥的癥狀，而且意在包括預(yù)防性治療。
如本文所用的，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”指這樣的化合物、材料、賦形劑、組合物或劑型，它們?cè)谡_的醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)適于與人類和動(dòng)物的組織接觸，而沒有與合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比相當(dāng)?shù)倪^度毒性、刺激、過敏反應(yīng)或其它問題并發(fā)癥。
如本文所用的，“藥學(xué)上可接受的鹽”指所公開的化合物的衍生物，其中母體化合物通過制備其酸式鹽或堿式鹽來修飾。藥學(xué)上可接受的鹽包括常規(guī)的無毒鹽或者由例如無毒的無機(jī)酸或有機(jī)酸形成的母體化合物的季銨鹽。例如，所述常規(guī)的無毒鹽包括得自無機(jī)酸的鹽，所述無機(jī)酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等；和由有機(jī)酸制備的鹽，所述有機(jī)酸例如乙酸、丙酸、丁二酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、苯磺酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸、甲苯磺酸、草酸、富馬酸、馬來酸、乳酸等。其它加成酸包括銨鹽，例如氨丁三醇、葡甲胺、羥乙基吡咯烷(epolamine)等；金屬鹽，例如鈉、鉀、鈣、鋅或鎂。
本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽可由包含堿性或酸性基團(tuán)的母體化合物通過常規(guī)的化學(xué)方法來合成。通常，這樣的鹽可以通過使游離酸或游離堿形式的這些化合物與化學(xué)計(jì)算量的適合的堿或酸在水或有機(jī)溶劑中或在二者的混合物中進(jìn)行反應(yīng)來制備。通常，優(yōu)選非水介質(zhì)如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈。適合的鹽的列表見于Remington′s PharmaceuticalSciences，第17版，Mack Publishing Company，Easton，PA，1985，p.1418，其公開通過引用結(jié)合于此。
具有幾何異構(gòu)體、區(qū)域異構(gòu)體和立體異構(gòu)體的通式(I)的化合物也是本發(fā)明的一部分。
根據(jù)另一個(gè)目的，本發(fā)明還涉及制備式(I)的化合物的方法。
本發(fā)明的化合物和方法可以多種本領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的方法來制備。例如可以通過應(yīng)用或調(diào)整下述方法或者對(duì)其進(jìn)行改變來合成所述化合物，技術(shù)人員會(huì)理解這一點(diǎn)。對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，適當(dāng)?shù)男揎椇腿〈鷷?huì)是容易明白和熟知的或可以容易從科技文獻(xiàn)中獲取。
具體而言，所述方法可見于R.C.Larock，Comprehensive OrganicTransformations，Wiley-VCH Publishers，1999。
應(yīng)理解，本發(fā)明的化合物可以包含一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱取代的碳原子，而且可以以旋光或消旋形式被分離。因此，意在所有的手性形式、非對(duì)映形式、消旋形式、異構(gòu)形式的結(jié)構(gòu)，除非明確指出了具體的立體化學(xué)或異構(gòu)形式。如何制備和分離所述旋光形式是本領(lǐng)域所公知的。例如，可以通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，包括但不限于通過拆分消旋形式、標(biāo)準(zhǔn)色譜法、反相色譜法和手性色譜法，優(yōu)選通過成鹽、重結(jié)晶等，或通過從手性原料手性合成，或通過刻意合成目標(biāo)手性中心來分離立體異構(gòu)體的混合物。
另外，本發(fā)明的方法可以產(chǎn)生幾種區(qū)域異構(gòu)體，它們也被本發(fā)明包括。區(qū)域異構(gòu)體通常通過色譜法分離。
本發(fā)明的化合物可以通過許多種合成路線制備。試劑盒原料是可商購的，或可由本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通過公知的技術(shù)容易地合成。除非另外說明，所有的取代基都如前面所定義。
在下文中所述的反應(yīng)中，可能有必要保護(hù)反應(yīng)性官能團(tuán)(例如羥基、氨基、亞氨基、硫基(thio)或羧基，這些基團(tuán)在終產(chǎn)物中是期望的)，以避免它們不需要地參與到所述反應(yīng)中。常規(guī)的保護(hù)基可以按照標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐來使用，例如參見T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Chemistry，第3版，John Wiley and Sons，1999；J.F.W.McOmie，Protective Groups inOrganic Chemistry，Plenum Press，1973。
某些反應(yīng)可以在堿的存在下進(jìn)行。對(duì)要用于該反應(yīng)的堿的性質(zhì)沒有特別的限制，而且任何常規(guī)地用于此類反應(yīng)的堿在此都可以相同地使用，條件是它對(duì)分子的其它部分沒有副作用。適合的堿的例子包括氫氧化鈉、碳酸鉀、三乙胺、堿金屬氫化物例如氫化鈉和氫化鉀；烷基鋰化合物，例如甲基鋰和丁基鋰；以及堿金屬醇鹽，例如甲醇鈉和乙醇鈉。
通常，在適合的溶劑中進(jìn)行反應(yīng)?？梢允褂迷S多種溶劑，條件是它對(duì)所述反應(yīng)或參與的試劑沒有副作用。適合的溶劑的例子包括烴，其可以是芳族、脂族或環(huán)脂族烴，例如己烷、環(huán)己烷、苯、甲苯和二甲苯；酰胺，例如二甲基甲酰胺；醇如乙醇和甲醇，以及醚如乙醚和四氫呋喃。
所述反應(yīng)可以在寬的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。一般而言，發(fā)現(xiàn)在0℃-150℃(更優(yōu)選大約室溫-100℃)的溫度便于進(jìn)行所述反應(yīng)。根據(jù)許多因素，特別是反應(yīng)溫度和試劑的性質(zhì)，所述反應(yīng)所需的時(shí)間也可以非常寬泛。但是，3小時(shí)-20小時(shí)的時(shí)間段一般足夠，條件是在上述優(yōu)選條件下完成所述反應(yīng)。
由此制備的化合物可以通過常規(guī)方法從反應(yīng)混合物中回收。例如，所述化合物可以通過從反應(yīng)混合物中餾出溶劑，或者，如果需要，在從反應(yīng)混合物中餾出溶劑后，將剩余物傾入水中，然后用水不混溶的有機(jī)溶劑萃取，然后從萃取物中餾出溶劑來回收。此外，如果需要，可以通過各種公知的技術(shù)，例如重結(jié)晶、再沉淀或各種色譜技術(shù)(特別是柱色譜法或制備薄層色譜法)來進(jìn)一步純化產(chǎn)物。
制備本發(fā)明的式(I)化合物的方法是本發(fā)明的另一個(gè)目的。
根據(jù)第一個(gè)方面，式(I)的本發(fā)明化合物可以通過使相應(yīng)的式(II)和式(III)的化合物進(jìn)行反應(yīng)來得到
其中R3、R4、R5、R6、T、U、V、W、X、Ru、Rv、Rw如在式(I)中所定義。
通常，所述反應(yīng)在有機(jī)質(zhì)子溶劑例如醇(優(yōu)選乙醇)中、在酸例如乙酸的存在下進(jìn)行。
可選擇地和/或附加的，式(I)的化合物可以由相應(yīng)的式(I′)的化合物通過使前體基團(tuán)轉(zhuǎn)化為期望的Ru、Rv或Rw基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)步驟來得到
其中R3、R4、R5、R6、Hetl、T、U、V、W、X、Ru、Rv、Rw如在式(I)中所定義， 其中Ru′、Rv′、Rw′各自與Ru、Rv、Rw相似或是相應(yīng)的Ru、Rv、Rw的前體基團(tuán)。
根據(jù)本發(fā)明，用語官能團(tuán)的“前體基團(tuán)”指任何能夠用一種或多種適合的試劑通過一個(gè)或多個(gè)反應(yīng)產(chǎn)生期望的官能的基團(tuán)。所述反應(yīng)包括脫保護(hù)反應(yīng)以及通常的加成、取代或官能化反應(yīng)。
式(I′)的化合物可以由相應(yīng)的式(II)和式(III)的化合物如上所述地得到。
式(I)的化合物可以特別地由EP 05292612.8中公開的式(I′)的化合物得到。
上述反應(yīng)可以由技術(shù)人員通過應(yīng)用或調(diào)整示于下文的實(shí)施例中的方法來進(jìn)行。
另外，本發(fā)明的方法還可以包括額外的分離式(I)的化合物的步驟。這可以由技術(shù)人員通過已知的常規(guī)方法例如上述回收方法來完成。
原料產(chǎn)品(II)和(III)是可商購的，或者可以通過應(yīng)用或調(diào)整任何已知的方法或在實(shí)施例中描述的方法來獲得。
所述合成也可用作為多組分反應(yīng)的一鍋法來進(jìn)行。
根據(jù)另一方面，本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含如下定義的式(I)的化合物、或它們藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、或水合鹽、或者這些化合物的多晶型晶體結(jié)構(gòu)或它們的旋光異構(gòu)體、外消旋物、非對(duì)映體或?qū)τ丑w、或者它們的區(qū)域異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體(E和Z)或者它們的混合物
其中

適當(dāng)時(shí)是單鍵或雙鍵； ------適當(dāng)時(shí)不存在或是單鍵；

是5至7-元雜環(huán)，優(yōu)選是包含1-5個(gè)雜原子、任選地被一個(gè)或多個(gè)選自H、CN、＝O、Hal、Alk、OAlk、OH、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR’、C(O)NRR’、雜環(huán)、芳基、雜芳基的取代基取代的雜芳基，其中Alk、芳基、雜芳基、雜環(huán)任選地被Hal、NRR’、CN、OH、CF3、芳基、雜芳基、OAlk取代； 其中

和

通過T和X稠合在一起； Y是N-OR1、NR′1、CR2R′2； R1是H、烷基、烯基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳烷基、烷氧羰基烷基、羧烷基； R′1是H、烷基、芳基或芳烷基； R2、R′2各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、烷基、芳基或芳烷基； T、U、V、W、X相同或不同，且可選自C、N、O、S； Ru、Rv、Rw相同或不同，且可選自H、CN、＝O、Hal、Alk、OAlk、OH、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR’、C(O)NRR’、雜環(huán)、芳基、雜芳基、環(huán)烷基，其中Alk、芳基、雜芳基、雜環(huán)、環(huán)烷基任選地被Hal、NRR’、CN、OH、CF3、芳基、雜芳基、OAlk取代； R3、R4、R5、R6各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、OAlk、Alk、Hal、NRR’、CN、OH、OCF3、CF3、芳基、雜芳基； R和R’各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、Alk，其中Alk任選地被Hal、NRR’、CN、OH、CF3、芳基、雜芳基取代。
優(yōu)選地，T、U、V、W、X是C或N。
其它優(yōu)選的式(I)的實(shí)施方案如以上關(guān)于本發(fā)明的化合物所述。
本發(fā)明優(yōu)選的用于治療用途的化合物選自以下 -3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟 -3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1-丁基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-癸基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(2-甲氧基乙基)肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(3-苯氧基丙基)肟 -1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟 -1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-乙基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-乙基肟 -1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-芐基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-芐基肟 -[1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基]苯胺 -(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸乙酯 -(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸鋰鹽， 或它們藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、或水合鹽、或者這些化合物的多晶型晶體結(jié)構(gòu)或它們的旋光異構(gòu)體、外消旋物、非對(duì)映體或?qū)τ丑w、或者它們的區(qū)域異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體(E和Z)或者它們的混合物。
本發(fā)明最優(yōu)選的用于治療用途的化合物特別選自以下 -3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟 -3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-癸基肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(2-甲氧基乙基)肟 -1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(3-苯氧基丙基)肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-乙基肟 -3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟 -(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸乙酯 -(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸鋰鹽， 或它們藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、或水合鹽、或者這些化合物的多晶型晶體結(jié)構(gòu)或它們的旋光異構(gòu)體、外消旋物、非對(duì)映體或?qū)τ丑w、或者它們的區(qū)域異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體(E和Z)或者它們的混合物。
根據(jù)又一目的，本發(fā)明涉及如以上關(guān)于所述藥物組合物所定義的式(I)的化合物用于制備用于抑制半胱氨酸蛋白酶的藥物的用途。
本發(fā)明的化合物可用于抑制有此需要的患者的半胱氨酸蛋白酶，特別是去泛素化酶(例如USP和UCH)、胱天蛋白酶、組織蛋白酶(特別是組織蛋白酶B、D、K、S等)、鈣蛋白酶以及病毒、細(xì)菌或寄生蟲的半胱氨酸蛋白酶。
本發(fā)明的化合物具體可用于治療和/或預(yù)防癌癥和轉(zhuǎn)移、更具體地是前列腺癌和/或結(jié)腸癌、神經(jīng)退行性疾病例如阿爾茲海默氏病和帕金森病、耳聾、與衰老相關(guān)的病癥、炎癥、關(guān)節(jié)炎、骨質(zhì)疏松、肝炎、肝衰竭、心肌缺血和衰竭、卒中、動(dòng)脈粥樣硬化、腎衰竭、糖尿病、白內(nèi)障；由單純皰疹病毒-1、EB病毒、SARS冠狀病毒、鼻病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、腺病毒等引起的病毒急性或潛在性感染；由屬于鏈球菌屬、葡萄球菌屬、梭菌屬、曲霉菌屬等的致病體導(dǎo)致的細(xì)菌或真菌感染；由錐蟲屬、瘧原蟲屬、利什曼原蟲屬、毛滴蟲屬、內(nèi)阿米巴屬、賈第蟲屬、弓形蟲屬、隱孢子蟲屬等種成員引起的原蟲感染；由片形屬、血吸蟲屬、盤尾絲蟲屬、蛔蟲屬、絳蟲屬、新桿狀線蟲屬、弓蛔蟲屬、血矛線蟲屬、鉤口線蟲屬、鞭蟲屬、毛線蟲屬、類圓線蟲屬、布魯絲蟲屬等種成員引起的扁蟲或線蟲感染；以及免疫性、免疫調(diào)節(jié)性或抗原呈遞性病癥。
本發(fā)明還涉及相應(yīng)的治療方法，其包括將本發(fā)明的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑一起向有此需要的患者給藥。
對(duì)需要治療本文所述的疾病和病癥的個(gè)體的鑒別也是本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)的。具有本領(lǐng)域技術(shù)的獸醫(yī)或醫(yī)師能夠容易地通過利用臨床試驗(yàn)、體格檢查、醫(yī)療史/家族史或生物學(xué)和診斷試驗(yàn)來鑒別那些需要所述治療的個(gè)體。
治療有效量可以容易地由作為本領(lǐng)域技術(shù)人員的主治診斷醫(yī)生通過利用常規(guī)技術(shù)和通過觀察得自類似情況下的結(jié)果來確定。在確定所述治療有效量方面，所述主治診斷醫(yī)生要考慮許多因素，包括但不限于個(gè)體的物種、其尺寸、年齡和一般健康；有關(guān)的具體疾??；受累程度或疾病的嚴(yán)重性；個(gè)別個(gè)體的反應(yīng)；給藥的具體化合物；給藥方式；給藥的制劑的生物利用度特性；所選的給藥方案；并行的藥物治療的使用；以及其它有關(guān)情況。
式(I)的化合物要獲得期望的生物效應(yīng)所需的量會(huì)根據(jù)許多因素而變化，包括所用的化合物的化學(xué)特性(例如疏水性)、所述化合物的效力、疾病類型、患者所屬的物種、患者的患病狀態(tài)、給藥途徑、所述化合物經(jīng)所選途徑的生物利用度、規(guī)定所需劑量的所有因素、遞送和給藥方案。
“藥學(xué)上”或“藥學(xué)上可接受的”指分子實(shí)體和組合物當(dāng)(適當(dāng)時(shí))向動(dòng)物或人類給藥時(shí)不會(huì)產(chǎn)生副反應(yīng)、過敏反應(yīng)或其它不利反應(yīng)。
如本文所用的，“藥學(xué)上可接受的賦形劑”包括任何載體、稀釋劑、輔劑或媒介物，例如防腐劑或抗氧化劑、填充劑、崩解劑、潤濕劑、乳化劑、助懸劑、溶劑、分散介質(zhì)、包衣劑、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。使用這些介質(zhì)和藥劑用于藥物活性物質(zhì)是本領(lǐng)域公知的。除了任何常規(guī)介質(zhì)或藥劑到了與所述活性成分不相容的程度之外，也考慮其在治療組合物中的使用。也可以向所述組合物中引入補(bǔ)充的活性成分作為適合的治療組合。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，如本文所用的，術(shù)語“治療(treating)”或“治療(treatment)”意指逆轉(zhuǎn)、減輕、預(yù)防所述術(shù)語所應(yīng)用于的疾病或病癥或者所述疾病或病癥的一種或多種癥狀、或者抑制它們的進(jìn)展。
“治療有效量”指本發(fā)明的化合物/藥物有效預(yù)防或治療需要抑制與其發(fā)病機(jī)制相關(guān)的激活的半胱氨酸蛋白酶的病理狀態(tài)的量。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“患者”或“有此需要的患者”意指罹患或可能罹患在其發(fā)病機(jī)制中涉及激活的半胱氨酸蛋白酶的病理狀態(tài)的動(dòng)物或人類。優(yōu)選地，所述患者是人類。
概括而言，本發(fā)明的化合物可以作為包含0.1-10％化合物的生理緩沖水溶液提供，用于腸胃外給藥。一般的劑量范圍是1μg/kg-0.1g/kg體重/天；優(yōu)選的劑量范圍是0.01mg/kg-0mg/kg體重/天或人類兒童的等效劑量。優(yōu)選的待給藥的藥物的劑量可能要取決于這樣的變量，例如所述疾病或病癥的類型和進(jìn)展的程度、具體患者的總體健康狀況、所選的化合物的相對(duì)生物效力、所述化合物的制劑、給藥途徑(靜脈內(nèi)、肌內(nèi)等)、所述化合物經(jīng)所選遞送途徑的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、以及給藥速度(推注或持續(xù)靜脈點(diǎn)滴)和時(shí)間表(在特定時(shí)間段內(nèi)的重復(fù)次數(shù))。
本發(fā)明的化合物還能以單位劑量形式來給藥，其中術(shù)語“單位劑量”指這樣的單一劑量，其能向患者給藥，且能被容易地處理和包裝，同時(shí)保持作為物理和化學(xué)穩(wěn)定的包含活性化合物本身的單位劑量或作為藥學(xué)上可接受的組合物，如下文所述。如此，一般的總?cè)談┝糠秶?.01-100mg/kg體重。通過一般的指導(dǎo)，對(duì)于人類的單位劑量介于1mg-3000mg/天。優(yōu)選地，所述單位劑量的范圍是1-500mg，每天給藥1-6次，甚至更優(yōu)選10mg-500mg，每天給藥1次。本文所提供的化合物可以通過與一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑混合而配制成藥物組合物。可以配制這樣的單位劑量組合物，以通過口服給藥來使用，特別是以片劑、普通膠囊或軟膠囊的形式；或通過鼻內(nèi)給藥來使用，特別是以散劑、滴鼻劑或氣霧劑的形式；或通過皮膚給藥來使用，例如以軟膏、乳膏、洗劑、凝膠或噴霧劑、或經(jīng)透皮貼劑來局部給藥。
所述組合物可以方便地以單位劑型的形式給藥，而且可以通過制藥領(lǐng)域公知的任何方法來制備，例如如RemingtonThe Science and Practice ofPharmacy，第20版；Gennaro，A.R.著；Lippincott Williams & WilkinsPhiladelphia，PA，2000中所述。
優(yōu)選的制劑包含這樣的藥物組合物，其中本發(fā)明的化合物被配制以用于口服或腸胃外給藥。
對(duì)于口服給藥，片劑、丸劑、散劑、膠囊、含片等可以包含一種或多種任何以下成分或具有類似性質(zhì)的化合物粘合劑，例如微晶纖維素或黃蓍樹膠；稀釋劑，例如淀粉或乳糖；崩解劑，例如淀粉和纖維素衍生物；潤滑劑，例如硬脂酸鎂；助流劑，例如膠體二氧化硅；甜味劑，例如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑，例如薄荷油或水楊酸甲酯。膠囊可以是硬膠囊或軟膠囊(它們一般由任選地與成形劑摻合的明膠摻合物制備)以及淀粉膠囊的形式。此外，劑量單位形式可以包含各種其它的改變所述劑量單位的物理形式的材料，例如糖、蟲膠或腸溶劑的包衣。其它口服劑型糖漿或酏劑可以包含甜味劑、防腐劑、染料、著色劑和調(diào)味劑。此外，所述活性化合物可以摻入到迅速溶解、控釋(modified-release)或緩釋配制品和制劑中，其中所述緩釋制劑優(yōu)選是雙峰的。優(yōu)選的片劑包含以任何組合形式的乳糖、玉米淀粉、硅酸鎂、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、聚維酮、硬脂酸鎂或滑石。
用于腸胃外給藥的液體制劑包括無菌水或非水溶液劑、混懸劑和乳劑。所述液體組合物可以包含粘合劑、緩沖劑、防腐劑、螯合劑、甜味劑、調(diào)味劑和著色劑等。非水溶劑包括醇、丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄欖油和有機(jī)酯例如油酸乙酯。含水載體包括醇和水的混合物、緩沖介質(zhì)和鹽水。具體而言，生物相容的、可生物降解的丙交酯聚合物、丙交酯/乙交酯共聚物、或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物可以是有用的控制所述活性化合物的釋放的賦形劑。靜脈內(nèi)媒介物可包括液體和營養(yǎng)補(bǔ)充劑、電解質(zhì)補(bǔ)充劑，例如基于Ringer葡萄糖的那些，等等。其它的可能有用的用于這些活性化合物的腸胃外遞送系統(tǒng)包括乙烯-乙酸乙烯酯共聚物顆粒、滲透泵、可植入的輸液系統(tǒng)和脂質(zhì)體。
另一種給藥方式包括供吸入的制劑，其包括例如干粉、氣霧劑或滴劑的方式。它們可以是包含例如聚氧乙烯-9-十二烷基醚、甘膽酸鹽和脫氧膽酸鹽的水溶液，或用于以滴鼻劑給藥的油性溶液，或鼻內(nèi)施用的凝膠。用于含服給藥的制劑包括例如錠劑(lozenge)或錠劑(pastille)，也可以包含調(diào)味基質(zhì)(例如蔗糖或阿拉伯膠)和其它賦形劑(例如甘膽酸鹽)。適于直腸給藥的制劑優(yōu)選作為具有固體系載體(例如可可脂)的單位劑量栓劑提供，而且可以包含水楊酸酯。用于局部施用到皮膚的制劑優(yōu)選采用軟膏、乳膏、洗劑、糊劑、凝膠、噴霧劑、氣霧劑或油劑的形式。可以使用的載體包括凡士林、羊毛脂、聚乙二醇、醇和它們的組合。適于經(jīng)皮膚給藥的制劑可以作為獨(dú)立的貼劑提供，可以是溶解和/或分散在聚合物或粘合劑中的親脂性乳劑或緩沖水溶液。
通過以下實(shí)施例中的描述來進(jìn)一步說明但不是限制本發(fā)明。
本發(fā)明的代表性化合物概述于下表



實(shí)驗(yàn) 本發(fā)明的代表性化合物可以根據(jù)以下方法合成 一般方法A五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮的合成
將R1取代的(1，2，4)-三唑-3，4-二胺(8.8mmol)和茚三酮(1.57g，8.8mmol)在EtOH(10ml)和AcOH(1.5ml)中的混合物回流2-16小時(shí)。減壓除去溶劑，將剩余物溶于EtOAc，用飽和K2CO3和鹽水洗滌。用Na2SO4干燥有機(jī)相，過濾，減壓蒸去溶劑。如下純化粗品用硅膠快速色譜法(甲苯/MeOH 95∶5-8∶2或CH2Cl2/EtOAc 9∶1-1∶1)純化區(qū)域異構(gòu)體混合物，然后用中性氧化鋁(II級(jí))快速色譜法(CH2Cl2/EtOAc 7∶3至CH2Cl2/MeOH 1∶1+5％HCOOH或AcOH)分離區(qū)域異構(gòu)體。
1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮(1b/A) 根據(jù)一般方法A制備，收率13％，為黃色固體。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ8.23(d，1H)，8.02(m，2H)，7.89(ddd，1H)，2.72(s，3H)。ESI+MSC12H7N5O的理論值237.22；測(cè)量值238.2(MH+)。
3-甲基-1.2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴9-酮(1b/B) 根據(jù)一般方法A制備，收率30％，為黃色固體。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ8.16(d，1H)，8.05-7.95(m，2H)，7.85(ddd，1H)，2.77(s，3H)。ESI+MSC12H7N5O的理論值237.22；測(cè)量值238.2(MH+)。
一般方法B五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮的合成
根據(jù)Eur.J.Med.Chem.-Chim.Ther.1986，21，235報(bào)道的方法制備二氨基三唑。
攪拌二氨基胍鹽酸鹽(1g，8mmol)在過量(10g)的適合羧酸中的混合物，在120-130℃加熱12-24小時(shí)。將溶液冷卻至室溫，加入37％HCl(10ml)。將混合物回流2-3小時(shí)，然后真空濃縮至干。獲得的粗品用Et2O(×3)洗滌，在不經(jīng)任何另外地純化的情況下使用。
關(guān)于粗品二氨基三唑和茚三酮間的縮合，參見一般方法A。
1-丁基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮(1f/A) 根據(jù)一般方法B制備，收率6％，為黃色固體。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ8.23(d，1H)，8.02(m，2H)，7.89(ddd，1H)，3.10(dd，2H)，1.81(m，2H)，1.42(m，2H)，0.94(t，3H)。ESI+MSC15H13N5O的理論值279.30；測(cè)量值280.2(MH+)。
3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮(1f/B) 根據(jù)一般方法B制備，收率10％，為黃色固體。
1H NMR(300MHz，DMSO d6)δ8.16(d，1H)，7.99(m，2H)，7.85(dd，1H)，3.16(dd，2H)，1.87(m，2H)，1.44(m，2H)，0.96(t，3H)。ESI+MSC15H13N5O的理論值279.30；測(cè)量值280.3(MH+)。
1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮(1g/A) 根據(jù)一般方法B制備，收率48％，為黃色固體。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.21(d，1H)，8.00(d，1H)，7.90(ddd，1H)，7.77(ddd，1H)，3.21(q，2H)，1.49(t，3H)。ESI+MSC13H9N5O的理論值251.25；測(cè)量值252.1(MH+)。
3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮(1g/B) 根據(jù)一般方法B制備，收率32％，為黃色固體。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.12(d，1H)，8.02(d，1H)，7.88(ddd，1H)，7.75(ddd，1H)，3.25(q，2H)，1.53(t，3H)。ESI+MSC13H9N5O的理論值251.25；測(cè)量值252.1(MH+)。
一般方法E五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮的O-烷基肟衍生物的合成
a R1＝Me，R2＝Me-B區(qū)域異構(gòu)體5a-e b R1＝Me，R2＝烯丙基-B區(qū)域異構(gòu)體 c R1＝Me，R2＝烯丙基-A區(qū)域異構(gòu)體 d R1＝Bu，R2＝烯丙基-B區(qū)域異構(gòu)體 e R1＝Bu，R2＝烯丙基-A區(qū)域異構(gòu)體 將1(1mmol)、O-烷基羥胺鹽酸鹽(3mmol)和分子篩在吡啶(10ml)中的懸浮液加熱至60℃，保持2-12h。濾除不溶性的殘留物，蒸去溶劑，通過硅膠快速色譜法(CH2Cl2/丙酮85∶15或甲苯/MeOH 9∶1或汽油/EtOAc 1∶1)純化粗品。
3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟(5a) 根據(jù)一般方法E由1b/B制備，收率55％，為黃色固體(2∶1E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，DMSO d6)(異構(gòu)體混合物)δ8.43(m，1H)，8.16(m，1H)，7.81(m，2H)，4.34(s，3H)，2.75(s，3H)。8.05(m，1H)，7.92(m，1H)，7.72(m，2H)，4.30(s，3H)，2.75(s，3H)。ESI+MSC13H10N6O的理論值266.26；測(cè)量值267.1(MH+)。
3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟(5b) 根據(jù)一般方法E由1b/B制備，收率65％，為黃色固體(1∶1E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ8.02(d，1H)，7.95(d，1H)，7.75-7.56(m，2H)，6.26-6.08(m，1H)，5.50(dd，1H)，5.35(d，1H)，5.05(d，2H)，2.86(s，3H)。8.49(m，1H)，8.13(m，1H)，7.77-7.56(m，2H)，6.26-6.08(m，1H)，5.50(dd，1H)，5.39(d，1H)，5.12(d，2H)，2.86(s，3H)。ESI+MSC15H12N6O的理論值292.30；測(cè)量值293.1(MH+)。
1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟(5c) 根據(jù)一般方法E由1b/A制備，收率76％，為黃色固體(7∶3E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ8.16(m，1H)，7.95(m，1H)，7.77-7.60(m，2H)，6.26-6.08(m，1H)，5.54(ddt，1H)，5.37(ddt，1H)，5.04(ddd，2H)，2.84(s，3H)。8.49(m，1H)，8.26(m，1H)，7.77-7.60(m，2H)，6.26-6.08(m，1H)，5.49(ddt，1H)，5.40(ddt，1H)，5.09(ddd，2H)，2.88(s，3H)。ESI+MSC15H12N6O的理論值292.30；測(cè)量值293.1(MH+)。
3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟(5d) 根據(jù)一般方法E由1f/B制備，收率93％，為黃色固體(6∶4E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ8.42(m，1H)，8.06(m，1H)，7.64(m，2H)，6.19-6.00(m，1H)，5.41(m，1H)，5.31(m，1H)，5.03(ddd，2H)，3.17(dd，2H)，1.88(m，2H)，1.43(m，2H)，0.93(t，3H)。7.96(m，1H)，7.87(m，1H)，7.55(m，2H)，6.19-6.00(m，1H)，5.41(m，1H)，5.26(m，1H)，4.97(ddd，2H)，3.17(dd，2H)，1.88(m，2H)，1.43(m，2H)，0.93(t，3H)。ESI+MSC18H18N6O的理論值334.38；測(cè)量值335.1(MH+)。
1-丁基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟(5e) 根據(jù)一般方法E由1f/A制備，收率95％，為黃色固體(1∶1E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ8.45(m，1H)，8.22(m，1H)，7.69(m，2H)，6.22-6.02(m，1H)，5.45(m，1H)，5.35(m，1H)，5.05(ddd，2H)，3.21(dd，2H)，1.91(m，2H)，1.45(m，2H)，.95(t，3H)。8.12(m，1H)，7.91(m，1H)，7.62(m，2H)，6.22-6.02(m，1H)，5.49(m，1H)，5.32(m，1H)，4.99(ddd，2H)，3.18(dd，2H)，1.91(m，2H)，1.45(m，2H)，0.95(t，3H)。ESI+MSC18H18N6O的理論值334.38；測(cè)量值335.2(MH+)。
1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟和/或其對(duì)應(yīng)的區(qū)域異構(gòu)體四唑(6)的合成
根據(jù)一般方法E由1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮(由茚三酮和四唑-1，5-二胺制備)的6∶4區(qū)域異構(gòu)體混合物制備該化合物，收率89％，為黃色固體(E/Z和區(qū)域異構(gòu)體混合物)。1HNMR(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ8.47(m，1H)，8.22(m，1H)，7.84-7.58(m，2H)，6.23-6.03(m，1H)，5.46(m，1H)，5.37(m，1H)，5.13(ddd，2H)。8.19(m，1H)，7，98(m，1H)，7.84-7.58(m，2H)，6.23-6.03(m，1H)，5.46(m，1H)，5.34(m，1H)，5.06(m，2H)。ESI+MSC13H9N7O的理論值279.26；測(cè)量值280.2(MH+)。
1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮肟和/或其對(duì)應(yīng)的區(qū)域異構(gòu)體四唑(7)的合成
根據(jù)一般方法E由1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮(由茚三酮和四唑-1，5-二胺制備)的6∶4區(qū)域異構(gòu)體混合物制備該化合物，收率44％，為黃色固體(E/Z和區(qū)域異構(gòu)體混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ13.87(bs，1H)，8.59(m，1H)，8.14(m，1H)，7.78-7.52(m，2H)。13.69(bs，1H)，8.05(d，1H)，7.91(d，1H)，7.78-7.52(m，2H)。ESI+MSC10H5N7O的理論值239.20；測(cè)量值240.1(MH+)。
一般方法F六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮的O-烷基肟的合成
在室溫下攪拌7(48mg，0.20mmol)、烷基溴(0.6mmol)和K2CO3(55mg，0.4mmol)在DMF(2ml)中的混合物16h，然后減壓蒸去溶劑。通過快速色譜法(CH2Cl2，以與MeOH或石油醚的可變混合物的形式)純化粗品。
1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-癸基肟和/或其對(duì)應(yīng)的區(qū)域異構(gòu)體四唑(8a) 根據(jù)一般方法F制備，收率53％，為黃綠色固體(E/Z和區(qū)域異構(gòu)體混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ8.39(m，1H)，8.24和8.15(m，1H)，7.78-7.63(m，2H)，4.61-4.47(m，2H)，1.82(m，2H)，1.47-1.06(m，14H)，0.75(m，3H)。ESI+MSC20H25N7O的理論值379.47；測(cè)量值380.2(MH+)。
1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(2-甲氧基乙基)肟和/或其對(duì)應(yīng)的區(qū)域異構(gòu)體四唑(8b) 根據(jù)一般方法F制備，收率29％，為淺褐色固體(E/Z和區(qū)域異構(gòu)體混合物)。1H NMR(300MHz，DMSO d6)(異構(gòu)體混合物)δ8.49(m，1H)，8.27(m，1H)，7.83-7.66(m，2H)，4.73(m，2H)，3.82(m，2H)，3.40(s，3H)。8.49(m，1H)，8.19(m，1H)，7.83-7.66(m，2H)，4.73(m，2H)，3.82(m，2H)，3.41(s，3H)。ESI+MSC13H11N7O2的理論值297.28；測(cè)量值298.0(MH+)。
1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(3-苯氧基丙基)肟和/或其對(duì)應(yīng)的區(qū)域異構(gòu)體四唑(8c) 根據(jù)一般方法F制備，收率42％，為黃色固體(E/Z和區(qū)域異構(gòu)體混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)(異構(gòu)體混合物)δ8.41(m，1H)，8.15(m，1H)，7.76-7.58(m，2H)，7.18(m，2H)，6.83(m，3H)，4.87-4.70(m，2H)，4.18-4.07(m，2H)，2.42-2.27(m，2H)。8.26(m，1H)，7.89(d，1H)，7.76-7.58(m，2H)，7.18(m，2H)，6.83(m，3H)，4.87-4.70(m，2H)，4.18-4.07(m，2H)，2.42-2.27(m，2H)。ESI+MSC19H15N7O2的理論值373.38；測(cè)量值374.1(MH+)。
一般方法K乙基五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮的O-烷基肟衍生物的合成
a R＝Me-A區(qū)域異構(gòu)體 b R＝Me-B區(qū)域異構(gòu)體 c R＝Et-A區(qū)域異構(gòu)體 d R＝Et-B區(qū)域異構(gòu)體 e R＝烯丙基-A區(qū)域異構(gòu)體 f R＝烯丙基-B區(qū)域異構(gòu)體 g R＝Bn-A區(qū)域異構(gòu)體 h R＝Bn-A區(qū)域異構(gòu)體 將1g/A或1g/B(1mmol)、O-烷基羥胺鹽酸鹽(2mmol)和分子篩在吡啶(10ml)中的懸浮液加熱到60℃，保持2-3h。濾除不溶性的殘留物，蒸去溶劑，通過硅膠快速色譜法純化粗品。
1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟(10a) 根據(jù)一般方法K(洗脫劑CH2Cl2/EtOAc/MeOH 80∶17∶3)由1g/A制備，定量收率，為黃色固體(7∶3E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.47(m，1H)，8.27(m，1H)，7.73(m，1H)，7.66(m，1H)，4.41(s，3H)，3.28(q，2H)，1.55(t，3H)和8.17(m，1H)，7，96(m，1H)，7.73(m，1H)，7.63(m，1H)，4.37(s，3H)，3.25(q，2H)，1.55(t，3H)。ESI+MSC14H12N6O的理論值280.29；測(cè)量值281.1(MH+)。
3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟(10b) 根據(jù)一般方法K(洗脫劑CH2Cl2/EtOAc/MeOH 80∶17∶3)由1g/B制備，定量收率，為黃色固體(7∶3E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.50(m，1H)，8.17(m，1H)，7.63(m，2H)，4.45(s，3H)，3.30(q，2H)，1.57(t，3H)和8.07(d，1H)，7.98(d，1H)，7.68(ddd，1H)，7.64(ddd，1H)，4.41(s，3H)，3.29(q，2H)，1.59(t，3H)。ESI+MSC14H12N6O的理論值280.29；測(cè)量值281.1(MH+)。
1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-乙基肟(10c) 根據(jù)一般方法K(洗脫劑CH2Cl2/EtOAc/MeOH 70∶25∶5)由1g/A制備，定量收率，為黃色固體(6∶4E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.17(m，1H)，7.96(m，1H)，7.73(m，1H)，7.65(ddd，1H)，4.60(q，2H)，3.26(q，2H)，1.55(t，3H)，1.55(t，3H)和8.47(m，1H)，8.27(m，1H)；7.72(m，1H)，7.63(ddd，1H)，4.66(q，2H)，3.30(q，2H)，1.54(t，3H)，1.51(t，3H)。ESI+MSC15H14N6O的理論值294.32；測(cè)量值295.1(MH+)。
3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-乙基肟(10d) 根據(jù)一般方法K(洗脫劑CH2Cl2/EtOAc/MeOH 70∶25∶5)由1g/B制備，定量收率，為黃色固體(1∶1E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.49(m，1H)，8.13(m，1H)，7.70(m，1H)，7.62(m，1H)，4.69(q，2H)，3.27(q，2H)，1.58-1.48(m，6H)，和8.03(m，1H)，7，96(m，1H)，7.70(m，1H)，7.62(m，1H)，4.62(q，2H)，3.27(q，2H)，1.58-1.48(m，6H).ESI+MSC15H14N6O的理論值294.32；測(cè)量值295.1(MH+)。
1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟(10e) 根據(jù)一般方法K(洗脫劑CH2Cl2/EtOAc/MeOH 80∶16∶4)由1g/A制備，定量收率，為黃色固體(6∶4E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.17(d，1H)，7.95(d，1H)，7.65(m，2H)，6.26-6.07(m，1H)，5.54(m，1H)，5，37(m，1H)，5.04(ddd，2H)，3.26(m，2H)，1.54(m，3H)和8.49(d，1H)，8，27(d，1H)，7.73(m，2H)，6.26-6.07(m，1H)，5.49(m，1H)，5，40(m，1H)，5.09(ddd，2H)，3.26(m，2H)，1.54(m，3H)。ESI+MSC16H14N6O的理論值306.33；測(cè)量值307.1(MH+)。
3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟(10f) 根據(jù)一般方法K(洗脫劑CH2Cl2/EtOAc/MeOH 80∶17∶3)由1g/B制備，收率96％，為黃色固體(65∶35E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.50(m，1H)，8.14(m，1H)，7.71(m，1H)，7.65(m，1H)，6.26-6.09(m，1H)，5.53(m，1H)，5.39(m，1H)，5.12(ddd，2H)，3.27(q，2H)，1.55(t，3H)和8.04(m，1H)，7.95(m，1H)，7.71(m，1H)，7.61(m，1H)，6.26-6.09(m，1H)，5.47(m，1H)，5.36(m，1H)，5.106(ddd，2H)，3.27(q，2H)，1.56(t，3H)。ESI+MSC16H14N6O的理論值306.33；測(cè)量值307.2(MH+)。
1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-芐基肟(10g) 根據(jù)一般方法K(洗脫劑CH2Cl2/EtOAc/MeOH 80∶17∶3)由1g/A制備，收率86％，為黃色固體(65∶35E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.16(m，1H)，7.96(m，1H)，7.70(m，1H)，7.65(m，1H)，7.52(m，2H)，7.41(m，3H)，5.58(s，2H)，3.21(q，2H)，1.49(t，3H)和8.43(m，1H)，8，26(m，1H)，7.70(m，1H)，7.65(m，1H)，7.52(m，2H)，7.41(m，3H)，H)，5.62(s，2H)，3.29(q，2H)，1.56(t，3H)。ESI+MSC20H16N6O的理論值356.39；測(cè)量值357.1(MH+)。
3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-芐基肟(10h) 根據(jù)一般方法K(洗脫劑CH2Cl2/EtOAc/MeOH 80∶17∶3)由1g/B制備，收率99％，為黃色固體(6∶4E/Z混合物)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.44(m，1H)，8，13(m，1H)，7.67(m，1H)，7.61(m，1H)，7.52(m，2H)，7.46-7.29(m，3H)，5.64(s，2H)，3.62(q，2H)，1.55(t，3H)和8.01(m，1H)，7，92(m，1H)，7.70(m，1H)，7.65(m，1H)，7.52(m，2H)，7.41(m，3H)，5，59(s，2H)，3.29(q，2H)，1.56(t，3H)。ESI+MSC20H16N6O的理論值356.39；測(cè)量值357.1(MH+)。
[1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基]苯胺(11)的合成；
向1g/A(200mg，0.79mmol)和分子篩在甲苯(4ml)中的懸浮液添加苯胺(72μl，0.79mmol)。將混合物在130℃攪拌4h，然后蒸去溶劑，通過快速色譜法(CH2Cl2/EtOAc/MeOH 80∶18∶2)純化粗品，提供11(231mg，90％)，為黃色固體(非對(duì)映異構(gòu)體比例1∶1)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.28(d，1H)，7.70(ddd，1H)，7.56-7.26(m，6H)，6.91(d，1H)，3.34(q，2H)，1.58(t，3H)和8.22(m，2H)，7.81(m，2H)，7.47(m，1H)，7.07(m，4H)，2.80(q，2H)，1.21(t，3H)。ESI+MSC19H14N6的理論值326.36；測(cè)量值327.2(MH+)。
(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸乙酯和/或其對(duì)應(yīng)的區(qū)域異構(gòu)體四唑(12)

(異構(gòu)體混合物) 將肟7(560mg，2.34mmol)和碳酸銫(1.54g，4.68mmol)的混合物在DMF(12ml)中攪拌5min。滴加溴乙酸乙酯(1.2g，7.02mmol)，在滴加的最后，將深色的混合物在室溫下攪拌3h。蒸去溶劑，將粗產(chǎn)物溶于二氯甲烷。經(jīng)二氧化硅(silice)墊過濾后，蒸發(fā)，用環(huán)己烷/乙酸乙酯重結(jié)晶，用環(huán)己烷研磨，得到717mg(94％)化合物12，為綠色粉末。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)(異構(gòu)體混合物)δ(ppm)＝1.28(m，3H)；4，21(m，2H)；5.28(m，2H)；7；70-8.60(m，4H)。LC-MS(ES)m/z＝651(2M+H+)，326(M+H+)。
(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸鋰鹽和/或其對(duì)應(yīng)的區(qū)域異構(gòu)體四唑(13)

(異構(gòu)體混合物) 在室溫下，將酯12(700mg；2.15mmol)和LiOH(451mg，10.75mmol)的甲醇(12ml)溶液攪拌12h。將深色的混合物冷卻至-20℃，1h后，濾出形成的沉淀，用冷甲醇洗滌，剩余380mg(59％)化合物13，為綠色固體。
1H-NMR(400MHz，D2O)(異構(gòu)體混合物)δ(ppm)＝4.8(s，2H)；7.40-8.40(m，4H)。LC-MS(ES)m/z＝296(M-H+)。
代表性的半胱氨酸蛋白酶 USP5活性測(cè)定 將USP5在USP緩沖液(50mM Tris HCl；0.5mM EDTA；5mM DTT；0.01％ Triton X-100；牛血清白蛋白0.05mg.ml-1 pH7.6)中稀釋?；衔锬敢?100mM)在-20℃儲(chǔ)存在DMSO中。在以下終濃度測(cè)試化合物100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。
在Black LJL 96孔板(HE微量培養(yǎng)板；Molecular Devices；20μl最終反應(yīng)體積)中進(jìn)行平行兩份反應(yīng)。USP5底物的濃度為400nM Ub-AMC(Boston Biochem)。酶(USP5)在特異性測(cè)定中的濃度為300pM。測(cè)定這些濃度，以便在固定的底物濃度下，在初速度下進(jìn)行特異性測(cè)定。在25℃用酶預(yù)孵育化合物30分鐘。通過向包含稀釋在測(cè)定緩沖液中的酶(+/-化合物)的平板添加底物來啟動(dòng)反應(yīng)。在37℃孵育反應(yīng)物60分鐘。通過加入乙酸終止反應(yīng)(最終100mM)。在Pherastar Fluorescent Reader(BMG)上進(jìn)行讀數(shù)。發(fā)射λ380nm；激發(fā)λ＝460nm。將數(shù)據(jù)(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差)分析為％對(duì)照(無化合物)，并使用GraphPad(Prism)作圖(百分比-Log化合物濃度)。數(shù)據(jù)擬合成S形曲線模型(可變斜率)。
USP7的克隆和純化 通過PCR擴(kuò)增由胎盤mRNA獲得編碼USP7的cDNA。通過PCR將USP7 cDNA亞克隆到桿狀病毒表達(dá)載體(pFastBac-HT；Invitrogen)中。通過PCR突變法產(chǎn)生編碼突變的USP7的cDNA。相應(yīng)的蛋白質(zhì)編碼223位殘基的半胱氨酸至丙氨酸取代。通過測(cè)序全部可讀框來確定序列。DH10bac轉(zhuǎn)座后產(chǎn)生編碼USP7的桿粒。將相應(yīng)的桿粒轉(zhuǎn)染到昆蟲細(xì)胞(Sf9)中。從培養(yǎng)物上清液回收病毒并擴(kuò)增兩次。將昆蟲細(xì)胞(Sf9或High Five；Invitrogen)感染72小時(shí)。收集全部細(xì)胞溶胞產(chǎn)物并在溶胞緩沖液(Tris HCl50mM pH7.6；0.75％ NP40；500mM NaCl；10％甘油；1mM DTT；10mM咪唑；蛋白酶抑制劑混合物；AEBSF 20μg.ml-1；抑肽酶10μg.ml-1)中溶解。在金屬親和樹脂(Talon Metal Affinity Resin；BD Biosciences)上親和純化蛋白質(zhì)。在洗滌緩沖液(50mM磷酸鈉pH7.0；300mM NaCl；10mM咪唑；0.5％Triton X-100；10％甘油)中充分洗滌結(jié)合的物質(zhì)，并在250mM包含咪唑的洗滌緩沖液中從該樹脂洗脫。在透析緩沖液(Tris HCl pH 7.6 20mM；NaCl200mM；DTT 1mM；EDTA 1mM；10％甘油)中透析蛋白質(zhì)。在4-12％NuPAGE(Invitrogen)上分析蛋白質(zhì)純化物。
USP7活性測(cè)定 將USP7在USP緩沖液(50mM Tris HCl；0.5mM EDTA；5mM DTT；0.01％ Triton X-100；牛血清白蛋白0.05mg.ml-1 pH7.6)中稀釋?；衔锬敢?100mM)在-20℃儲(chǔ)存在DMSO中。在以下終濃度測(cè)試化合物100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。
在Black LJL 96孔板(HE微量培養(yǎng)板；Molecular Devices；20μl最終反應(yīng)體積)中進(jìn)行平行兩份反應(yīng)。USP7底物的濃度為400nM Ub-AMC(Chem.Biol.，2003，10，p.837-846)(Boston Biochem)。酶(USP7)在特異性測(cè)定中的濃度為152pM。測(cè)定這些濃度，以便在固定的底物濃度下，在初速度下進(jìn)行特異性測(cè)定。在25℃用酶預(yù)孵育化合物30分鐘。通過向包含稀釋在測(cè)定緩沖液中的酶(/-化合物)的平板添加底物來啟動(dòng)反應(yīng)。在37℃孵育反應(yīng)物60分鐘。通過加入乙酸終止反應(yīng)(最終100mM)。在PherastarFluorescent Reader(BMG)上進(jìn)行讀數(shù)。發(fā)射λ380nm；激發(fā)λ＝460nm。將數(shù)據(jù)(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差)分析為％對(duì)照(無化合物)，并使用GraphPad(Prism)作圖(百分比-Log化合物濃度)。數(shù)據(jù)擬合成S形曲線模型(可變斜率)。
USP8的克隆和純化 通過PCR擴(kuò)增由胎盤mRNA獲得編碼USP8的cDNA。通過PCR將USP8 cDNA亞克隆到桿狀病毒表達(dá)載體(pFastBac-HT；Invitrogen)中。通過PCR突變法產(chǎn)生編碼突變的USP8的cDNA。相應(yīng)的蛋白質(zhì)編碼在786位殘基的半胱氨酸至丙氨酸取代。通過測(cè)序全部可讀框來確定序列。DH10bac轉(zhuǎn)座后產(chǎn)生編碼USP7的桿粒。將相應(yīng)的桿粒轉(zhuǎn)染到昆蟲細(xì)胞(Sf9)中。從培養(yǎng)物上清液回收病毒并擴(kuò)增兩次。將昆蟲細(xì)胞(Sf9或HighFive；Invitrogen)感染72小時(shí)。收集全部細(xì)胞溶胞產(chǎn)物并在溶胞緩沖液(TrisHCl 50mM pH7.6；0.75％ NP40；500mM NaCl；10％甘油；1mM DTT；10mM咪唑；蛋白酶抑制劑混合物；AEBSF 20μg.ml-1；抑肽酶10μg.ml-1)中溶解。在金屬親和樹脂(Talon Metal Affinity Resin；BD Biosciences)上親和純化蛋白質(zhì)。在洗滌緩沖液(50mM磷酸鈉pH7.0；300mM NaCl；10mM咪唑；0.5％ Triton X-100；10％甘油)中充分洗滌結(jié)合的物質(zhì)，并在250mM包含咪唑的洗滌緩沖液中從該樹脂洗脫。在透析緩沖液(Tris HCl pH 7.6 20mM；NaCl 200mM；DTT 1mM；EDTA 1mM；10％甘油)中透析蛋白質(zhì)。在4-12％NuPAGE(Invitrogen)上分析蛋白質(zhì)純化物。
USP8活性測(cè)定 將USP8在USP緩沖液(50mM Tris HCl；0.5mM EDTA；5mM DTT；0.01％ Triton X-100；牛血清白蛋白0.05mg.ml-1 pH8.8)中稀釋?；衔锬敢?100mM)在-20℃儲(chǔ)存在DMSO中。在以下終濃度測(cè)試化合物100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。
在Black LJL 96孔板(HE微量培養(yǎng)板；Molecular Devices；20μl最終反應(yīng)體積)中進(jìn)行平行兩份反應(yīng)。USP8底物的濃度為400nM Ub-AMC(Boston Biochem)。酶(USP8)在特異性測(cè)定中的濃度為630pM。測(cè)定這些濃度，以便在固定的底物濃度下，在初速度下進(jìn)行特異性測(cè)定。在25℃用酶預(yù)孵育化合物30分鐘。通過向包含稀釋在測(cè)定緩沖液中的酶(+/-化合物)的平板添加底物來啟動(dòng)反應(yīng)。在37℃孵育反應(yīng)物60分鐘。通過加入乙酸終止反應(yīng)(最終100mM)。在Pherastar Fluorescent Reader(BMG)上進(jìn)行讀數(shù)。發(fā)射λ380nm；激發(fā)λ＝460nm。將數(shù)據(jù)(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差)分析為％對(duì)照(無化合物)，并使用GraphPad(Prism)作圖(百分比-Log化合物濃度)。數(shù)據(jù)擬合成S形曲線模型(可變斜率)。
UCH-L3活性測(cè)定 將Uch-L3在USP緩沖液(50mM Tris HCl；0.5mM EDTA；5mM DTT；0.01％ Triton X-100；牛血清白蛋白0.05mg.ml-1 pH7.6)中稀釋?；衔锬敢?100mM)在-20℃儲(chǔ)存在DMSO中。在以下終濃度測(cè)試化合物100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。
在Black LJL 96孔板(HE微量培養(yǎng)板；Molecular Devices；20μl最終反應(yīng)體積)中進(jìn)行平行兩份反應(yīng)。Uch-L3底物的濃度為400nM Ub-AMC(Boston Biochem)。酶(Uch-L3)在特異性測(cè)定中的濃度為13pM。測(cè)定這些濃度，以便在固定的底物濃度下，在初速度下進(jìn)行特異性測(cè)定。在25℃用酶預(yù)孵育化合物30分鐘。通過向包含稀釋在測(cè)定緩沖液中的酶(+/-化合物)的平板添加底物來啟動(dòng)反應(yīng)。在37℃孵育反應(yīng)物60分鐘。通過加入乙酸終止反應(yīng)(最終100mM)。在Pherastar Fluorescent Reader(BMG)上進(jìn)行讀數(shù)。發(fā)射δ380nm；激發(fā)δ＝460nm。將數(shù)據(jù)(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差)分析為％對(duì)照(無化合物)，并使用GraphPad(Prism)作圖(百分比-Log化合物濃度)。數(shù)據(jù)擬合成S形曲線模型(可變斜率)。
胱天蛋白酶3的活性測(cè)定 將胱天蛋白酶3稀釋在胱天蛋白酶3緩沖液(100mM Hepes pH 7.5；10％蔗糖；0.1％ CHAPS)中?；衔锬敢?100mM)在-20℃儲(chǔ)存在DMSO中。在以下終濃度測(cè)試化合物100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。在Black LJL 96孔板(HE微量培養(yǎng)板；Molecular Devices；20μl最終反應(yīng)體積)中進(jìn)行平行兩份反應(yīng)。胱天蛋白酶3特異性測(cè)定的底物濃度為500nM(Ac-DEVD-AMC；Promega)。酶(胱天蛋白酶3)在特異性測(cè)定中的濃度為3.2nM。測(cè)定這些濃度，以便在固定的底物濃度下，在初速度下進(jìn)行特異性測(cè)定。在25℃用酶預(yù)孵育化合物30分鐘。通過向包含稀釋在測(cè)定緩沖液中的酶(+/-化合物)的平板添加底物來啟動(dòng)反應(yīng)。在37℃孵育反應(yīng)物60分鐘。通過加入乙酸終止反應(yīng)(最終100mM)。在Pherastar Fluorescent Reader(BMG)上進(jìn)行讀數(shù)。發(fā)射δ380nm；激發(fā)δ＝460nm。將數(shù)據(jù)(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差)分析為％對(duì)照(無化合物)，并使用GraphPad(Prism)作圖(百分比-Log化合物濃度)。數(shù)據(jù)擬合成S形曲線模型(可變斜率)。
組織蛋白酶B的活性測(cè)定 將組織蛋白酶B稀釋在組織蛋白酶B緩沖液(20mM Tris HCl pH 6.8；1mM EDTA；1mM DTT中?；衔锬敢?100mM)在-20℃儲(chǔ)存在DMSO中。在以下終濃度測(cè)試化合物100μM；33.3μM；11.1μM；3.7μM；1.23μM；412nM；137nM；45.7nM；15.2nM；5nM。在Black LJL 96孔板(HE微量培養(yǎng)板；Molecular Devices；20μl最終反應(yīng)體積)中進(jìn)行平行兩份反應(yīng)。組織蛋白酶B特異性測(cè)定的底物濃度為36μM(z-RR-AMC；Calbiochem)。酶(組織蛋白酶B)在特異性測(cè)定中的濃度為3.6nM。測(cè)定這些濃度，以便在固定的底物濃度下，在初速度下進(jìn)行特異性測(cè)定。在25℃用酶預(yù)孵育化合物30分鐘。通過向包含稀釋在測(cè)定緩沖液中的酶(+/-化合物)的平板添加底物來啟動(dòng)反應(yīng)。在37℃孵育反應(yīng)物60分鐘。通過加入乙酸終止反應(yīng)(最終100mM)。在Pherastar Fluorescent Reader(BMG)上進(jìn)行讀數(shù)。發(fā)射δ380nm；激發(fā)δ＝460nm。將數(shù)據(jù)(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差)分析為％對(duì)照(無化合物)，并使用GraphPad(Prism)作圖(百分比-Log化合物濃度)。數(shù)據(jù)擬合成S形曲線模型(可變斜率)。
細(xì)胞生存和增殖方法 HCT116細(xì)胞生存和增殖測(cè)定 HCT116結(jié)腸癌細(xì)胞得自ATCC(美國典型培養(yǎng)物保藏中心)，并保持在含有10％ FBS、3mM谷氨酰胺和1％青霉素/鏈霉素的Mc Coy’s 5A培養(yǎng)基中。在含5％CO2的增濕氣氛中，在37℃培養(yǎng)細(xì)胞。
在96孔培養(yǎng)板(CellTiter

Aqueous Non-Radioactive Cell ProliferationAssay，Promega)中，按照生產(chǎn)商的說明書，使用MTS技術(shù)測(cè)定細(xì)胞生存。MTS(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓)是MTT衍生的四唑鎓，其在代謝活躍的細(xì)胞中被還原為可溶性的、可滲透細(xì)胞的甲

。甲

的量(通過其在492nm的吸光度來檢測(cè))與活的代謝活躍的細(xì)胞數(shù)成正比。
在每個(gè)孔中接種103個(gè)HCT116細(xì)胞。24小時(shí)后，更換培養(yǎng)基，用以下濃度的各個(gè)化合物平行三份地處理細(xì)胞10μM-3.33μM-1.11μM-370nM-123nM-41nM-14nM和5nM。將化合物稀釋在100％DMSO中，其對(duì)細(xì)胞的終濃度保持在0.5％。
用化合物培養(yǎng)細(xì)胞72小時(shí)，然后通過加入MTS測(cè)定它們的存活，進(jìn)行2小時(shí)。直接由96孔培養(yǎng)板測(cè)量在492nm的吸光度。使用S形曲線可變斜率擬合(Prism 4.0，Graphpad Softwares)計(jì)算各個(gè)化合物的GI50(生長抑制50)濃度。值表示為3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值。
PC3細(xì)胞生存和增殖測(cè)定 PC-3前列腺癌細(xì)胞得自ATCC，并保持在含有7％FBS和1％青霉素/鏈霉素的F-12K培養(yǎng)基中。在含5％CO2的增濕氣氛中，在37℃培養(yǎng)細(xì)胞。
在96孔培養(yǎng)板(CellTiter

Aqueous Non-Radioactive Cell ProliferationAssay，Promega)中，按照生產(chǎn)商的說明書，使用MTS技術(shù)測(cè)定細(xì)胞生存。MTS(3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓)是MTT衍生的四唑鎓，其在代謝活躍的細(xì)胞中被還原為可溶性的、可滲透細(xì)胞的甲

。甲

的量(通過其在492nm的吸光度來檢測(cè))與活的代謝活躍的細(xì)胞數(shù)成正比。
在每個(gè)孔中接種2x103個(gè)PC3細(xì)胞。24小時(shí)后，更換培養(yǎng)基，用以下濃度的各個(gè)化合物平行三份地處理細(xì)胞10μM-3.33μM-1.11μM-370nM-123nM-41nM-14nM和5nM。將化合物稀釋在100％DMSO中，其對(duì)細(xì)胞的終濃度保持在0.5％。
用化合物培養(yǎng)細(xì)胞72小時(shí)，然后通過加入MTS測(cè)定它們的存活，進(jìn)行2小時(shí)。直接由96孔培養(yǎng)板測(cè)量在492nm的吸光度。使用S形曲線可變斜率擬合(Prism 4.0，Graphpad Softwares)計(jì)算各個(gè)化合物的GI50(生長抑制50)濃度。值表示為3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的平均值。
結(jié)果 1.半胱氨酸蛋白酶活性的抑制 USP5 USP7
USP8 UCH-L3
組織蛋白酶B 2.細(xì)胞生存和增殖的抑制 HCT116 PC3

權(quán)利要求
1.式(I)的化合物
其中
適當(dāng)時(shí)是單鍵或雙鍵；
------適當(dāng)時(shí)不存在或是單鍵；
是5至7-元雜環(huán)，優(yōu)選是包含1-5個(gè)雜原子、任選地被一個(gè)或多個(gè)選自H、CN、＝O、Hal、Alk、OAlk、OH、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR’、C(O)NRR’、雜環(huán)、芳基、雜芳基的取代基取代的雜芳基，其中Alk、芳基、雜芳基、雜環(huán)任選地被Hal、NRR’、CN、OH、CF3、芳基、雜芳基、OAlk取代；
其中
通過T和X稠合在一起；
T、U、V、W、X相同或不同，且可選自C、N、O、S；
Y是N-OR1、NR′1、CR2R′2；
R1是H、烷基、烯基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、芳烷基、烷氧羰基烷基、羧烷基；
R′1是H、烷基、芳基或芳烷基；
R2、R′2各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、烷基、芳基或芳烷基；
Ru、Rv、Rw相同或不同，且可選自H、CN、＝O、Hal、Alk、OAlk、OH、NRCN、C(CN)＝C(OH)(OAlk)、SR、NRR’、C(O)NRR’、雜環(huán)、芳基、雜芳基、環(huán)烷基，其中Alk、芳基、雜芳基、雜環(huán)、環(huán)烷基任選地被Hal、NRR’、CN、OH、CF3、芳基、雜芳基、OAlk取代；
R3、R4、R5、R6各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、OAlk、Alk、Hal、NRR’、CN、OH、OCF3、CF3、芳基、雜芳基；
R和R’各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、Alk，其中Alk任選地被Hal、NRR’、CN、OH、CF3、芳基、雜芳基取代；
或它們藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、或水合鹽、或者這些化合物的多晶型晶體結(jié)構(gòu)或它們的旋光異構(gòu)體、外消旋物、非對(duì)映體或?qū)τ丑w、或者它們的區(qū)域異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體(E和Z)或者它們的混合物。
2.權(quán)利要求1的式(I)的化合物，其中T、U、V、W、X獨(dú)立地是C或N。
3.權(quán)利要求1或2中任一項(xiàng)的式(I)的化合物，其中
包含2或3個(gè)雜原子。
4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的式(I)的化合物，其中Ru、Rv、Rw中至少一個(gè)選自H、芳基、Alk、NRR′、Hal、-Alk芳基、-AlkOH、-AlkOAlk、環(huán)烷基。
5.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其中R3、R4、R5、R6各自相同或不同，且獨(dú)立地選自H、Hal、Alk、OAlk、OCF3。
6.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其中Rv、Rw獨(dú)立地是H或不存在。
7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的式(I)的化合物，其中它們是式(Ia)
其中R3、R4、R5、R6、Y、T、U、V、W、X、Ru如在前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)中所定義。
8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的化合物，其選自
-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟
-3-甲基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟
-1-甲基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟
-3-丁基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟
-1-丁基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟
-1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟
-1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮肟
-1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-癸基肟
-1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(2-甲氧基乙基)肟
-1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-(3-苯氧基丙基)肟
-1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟
-3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-甲基肟
-1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-乙基肟
-3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-乙基肟
-1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟
-3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-烯丙基肟
-1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-芐基肟
-3-乙基-1，2，3a，4，10-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-酮O-芐基肟
-[1-乙基-2，3，4，10，10a-五氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基]苯胺
-(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸乙酯
-(1，2，3，3a，4，10-六氮雜環(huán)戊二烯并[b]芴-9-亞基氨基氧基)乙酸鋰鹽，
或它們藥學(xué)上可接受的鹽、水合物、或水合鹽、或者這些化合物的多晶型晶體結(jié)構(gòu)或它們的旋光異構(gòu)體、外消旋物、非對(duì)映體或?qū)τ丑w、或者它們的區(qū)域異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體(E和Z)或者它們的混合物。
9.制備前述權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的式(I)的化合物的方法，其包括通過使前體基團(tuán)轉(zhuǎn)化為期望的Ru、Rv或Rw基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)步驟使相應(yīng)的式(I′)的化合物反應(yīng)，并任選地分離所述式(I)的化合物
其中R3、R4、R5、R6、Hetl、T、U、V、W、X、Ru、Rv、Rw如在權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)中所定義，并且其中Ru′、Rv′、Rw′各自與Ru、Rv、Rw相似或是相應(yīng)的Ru、Rv、Rw的前體基團(tuán)。
10.制備前述權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的化合物的方法，其包括使相應(yīng)的式(II)和式(III)的化合物進(jìn)行反應(yīng)的步驟
其中R3、R4、R5、R6、T、U、V、W、X、Ru、Rv、Rw如在權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)中所定義。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述反應(yīng)在有機(jī)質(zhì)子溶劑中在酸的存在下進(jìn)行。
12.藥物組合物，其包含式(I)的化合物
其中R3、R4、R5、R6、T、U、V、W、X、Hetl、Ru、Rv和Rw如在權(quán)利要求1-8中所定義。
13.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于抑制一種或多種半胱氨酸蛋白酶的藥物的用途。
14.權(quán)利要求13的用途，其中所述半胱氨酸蛋白酶屬于去泛素化酶、胱天蛋白酶、組織蛋白酶、鈣蛋白酶以及病毒、細(xì)菌、真菌或寄生蟲的半胱氨酸蛋白酶中的一組或多組。
15.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防癌癥和轉(zhuǎn)移、神經(jīng)退行性疾病例如阿爾茲海默氏病和帕金森病、炎癥、心血管疾病和/或病毒特別是單純皰疹病毒-1、EB病毒或SARS冠狀病毒的傳染性和/或潛伏的藥物的用途。
16.權(quán)利要求15的用途，其中所述化合物抑制一種或多種去泛素化酶。
17.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防炎癥、神經(jīng)退行性疾病優(yōu)選由卒中導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞損害、由急性或慢性傳染性、缺血性或化學(xué)性肝損傷導(dǎo)致的肝損害和肝衰竭、由急性或慢性傳染性、缺血性或化學(xué)性腎損傷導(dǎo)致的腎損害和腎衰竭、由急性或慢性傳染性、缺血性或化學(xué)性心臟損傷導(dǎo)致的心臟損害和心力衰竭、由對(duì)胰島的胰島素β細(xì)胞的急性或慢性自身免疫、化學(xué)性、氧化性或代謝性損傷導(dǎo)致的糖尿病的藥物的用途。
18.權(quán)利要求17的用途，其中所述化合物抑制一種或多種胱天蛋白酶。
19.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防癌癥和轉(zhuǎn)移、心血管疾病、免疫性病癥、骨和關(guān)節(jié)疾病、骨質(zhì)疏松和關(guān)節(jié)炎的藥物的用途。
20.權(quán)利要求19的用途，其中所述化合物抑制一種或多種組織蛋白酶。
21.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防與衰老相關(guān)的病癥、遲發(fā)性糖尿病和白內(nèi)障的藥物的用途。
22.權(quán)利要求21的用途，其中所述化合物抑制一種或多種鈣蛋白酶。
23.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防病毒感染和疾病的藥物的用途。
24.權(quán)利要求23的用途，其中所述病毒感染和疾病選自甲型肝炎、丙型肝炎、SARS冠狀病毒感染和疾病、鼻病毒感染和疾病、腺病毒感染和疾病、脊髓灰質(zhì)炎。
25.權(quán)利要求23或24的用途，其中所述化合物抑制一種或多種病毒半胱氨酸蛋白酶。
26.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防細(xì)菌感染和疾病的藥物的用途。
27.權(quán)利要求26的用途，其中所述細(xì)菌感染或疾病選自鏈球菌感染和疾病、由梭菌屬細(xì)菌導(dǎo)致的感染和疾病、葡萄球菌感染和疾病、齦炎和牙周疾病。
28.權(quán)利要求26或27的用途，其中所述化合物抑制一種或多種細(xì)菌半胱氨酸蛋白酶。
29.權(quán)利要求26-28中任一項(xiàng)的用途，其中所述化合物抑制一種或多種選自鏈球菌熱源性毒素、梭菌蛋白酶、葡萄球菌半胱氨酸蛋白酶、牙齦菌蛋白酶的細(xì)菌半胱氨酸蛋白酶。
30.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防真菌感染和疾病的藥物的用途。
31.權(quán)利要求30的用途，其中所述化合物抑制一種或多種真菌半胱氨酸蛋白酶。
32.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防原蟲寄生蟲感染和疾病的藥物的用途。.
33.權(quán)利要求32的用途，其中所述化合物抑制一種或多種原蟲寄生蟲的半胱氨酸蛋白酶。
34.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防扁蟲寄生蟲感染和疾病的藥物的用途。
35.權(quán)利要求34的用途，其中所述化合物抑制一種或多種扁蟲寄生蟲的半胱氨酸蛋白酶。
36.如權(quán)利要求12中所定義的式(I)的化合物用于制備用于治療和/或預(yù)防線蟲寄生蟲感染和疾病的藥物的用途。
37.權(quán)利要求36的用途，其中所述化合物抑制一種或多種線蟲寄生蟲的半胱氨酸蛋白酶。
38.權(quán)利要求15-37中任一項(xiàng)的用途，其中所述所述藥物與一種或多種選自抗癌治療藥、神經(jīng)治療藥、溶栓治療藥、抗氧化治療藥、抗感染藥、抗高血壓治療藥、利尿治療藥、溶栓治療藥、免疫抑制治療藥、心血管治療藥、免疫調(diào)節(jié)治療藥、抗炎治療藥、抗病毒治療藥、抗細(xì)菌治療藥、抗真菌治療藥、抗原蟲治療藥、抗寄生蟲治療藥的治療藥聯(lián)合使用。
全文摘要
本發(fā)明涉及新的式(I)的化合物、它們的制備方法和它們的治療用途，式(I)其中R3、R4、R5、R6、Y、Het1、T、U、V、W、X、Ru、Rv和Rw如權(quán)利要求1所定義。
文檔編號(hào)A61K31/4196GK101611036SQ200780048928
公開日2009年12月23日 申請(qǐng)日期2007年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2006年10月30日
發(fā)明者P·格達(dá)特, X·雅克, F·科蘭德, L·達(dá)維耶, E·弗姆斯特克, J-C·蘭, M·科隆博 申請(qǐng)人:海布里詹尼克斯股份公司