專利名稱：：勃起功能障礙治療和性欲提高的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種男人或雄性動物受試者的勃起功能障礙的治療和性欲提高。更具體地，本發(fā)明涉及用于所述治療的物質(zhì)或組合物；所述物質(zhì)或組合物在藥物或制劑的制備中的應(yīng)用；所述治療；用于所述治療的化合物和所述化合物的衍生物；和所述治療的方法。
發(fā)明內(nèi)容總的來說，本發(fā)明提供一種用于男人或雄性動物受試者的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療，和性欲提高的物質(zhì)或組合物生產(chǎn)的方法，所述方法包括由徙牛兒苗(Geram'aceae)科的至少一種植物品種的植物材料和植物材料萃取物中的至少一種配制所述物質(zhì)或組合物的步驟。本發(fā)明還提供一種物質(zhì)或組合物在用于男人或雄性動物體的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療或性欲提高的藥物或制劑的制備中的應(yīng)用，所述物質(zhì)或組合物,包括徙牛兒苗科的至少一種植物品種的植物材料和植物材料萃^l物中的至少一種的配制劑。所述才直物的實(shí)例包4舌M！(3wgMWzyb/Za、M".a/exa"(irae"w'、M！a"ewM"/e卩又稱6(/7ora」、M6reWmsrato、M6e/,aWe腦、MZwrfeawa卩又稱g/a麗/a/a,6她c/wam'ca」，MGfe尸re^a、McfeseWco/<2、M.<irMcfea"a、Mga/p/m'、Mg/awdw/c^/M/m"、Mg/鼎c"、Mgraw^yb//"f又稱丄a"ceo/她」、M./owg/pes、M/weder/z/a腦>M附a/vae/7ora、M附m/0/油、Mwa附ae腦^、M腦to/e腦S、Mm,vea、M06coni齒、Mov她卩又稱e附arg7'wato」、M./an^/o/z'a、Mre/wn7、Mrada"s"、M.sewec/o/cfes卩又稱戶nae脂/^"」、M""ega/e腦、卩又稱W/o6flto」、Ms/ec/os"fl丄、M—wara卩又稱/o厶ato,、MWn'"a、M所述方法可包括通過減小尺寸成顆粒形狀來配制所述物質(zhì)或組合物，例如經(jīng)過研磨(包括碾磨)和/或切割莖和/或根和/或花和/或種子和/或葉子形式的植物材料。所述研磨和/或切割可以是濕植物材料的，后續(xù)可選擇地經(jīng)過干燥，例如經(jīng)過烘爐干燥。或者，所述研磨和/或切割可以是干植物材料的，該方法可選擇地包括在研磨和/或切割前干燥植物材料的步驟。然后該方法可包括將干燥的研磨后的植物材料包裝在茶包性質(zhì)的多孔袋中，或經(jīng)過尺寸減小后將該顆粒植物材料配制形成粒劑、片劑、膠嚢劑、口腔噴劑、膏狀物或洗劑。當(dāng)然，植物材料要減小到的顆粒尺寸將根據(jù)適宜于最終所要產(chǎn)品來選擇。通過如下過程進(jìn)行采用適宜溶劑對所述植物材料進(jìn)行溶劑萃取，來得到包含所述物質(zhì)或組合物的溶劑萃取物，所述植物材料可選擇地經(jīng)過預(yù)先尺寸減小。同樣，用于萃取的植物材料可以是濕的，或可以是干的，在萃取之前經(jīng)過可選擇地干燥步驟。如有需要，在萃取之后，可將所述溶劑去除以留下包括所述物質(zhì)或組合物的干萃取物。所以，所述萃取物可選自有機(jī)和水萃取物。所述萃取物可選自采用有機(jī)溶劑萃取植物材料制備的有機(jī)萃取物，和用水萃取植物材料制備的水萃取物，所述有機(jī)溶劑選自由乙醚、異丙醚、曱醇、乙醇、氯仿、二氯曱烷、乙酸乙酯、己烷和其中兩種或多種的適宜混合物或它們與水的混合物構(gòu)成的組中。其實(shí)例包括分別以例如1:1和9:1的體積比混合的曱醇/二氯曱烷混合物和曱醇/水混合物。或者，所述萃取物可以是通過釆用超臨界流體萃取植物材料的有機(jī)萃取物。所述超臨界流體可以是超臨界二氧化碳。無論是以溶液形式還是干燥后的形式，例如經(jīng)過在大氣壓(包括超臨界流體溶劑)下、在取決于環(huán)境溫度和壓力(有機(jī)溶劑)的減壓下蒸發(fā)有機(jī)溶劑來干燥，或經(jīng)過冷凍干燥或噴霧干燥(水溶劑)，所述溶劑萃取物可以采用諸如溶劑/溶劑相分配和/或色鐠分離的適宜技術(shù)被提煉和/或分離成單個組分或化合物。如上所述，該方法包括對經(jīng)過尺寸減小的細(xì)粒狀的植物材料進(jìn)行溶劑萃取，其尺寸減小是為了便于后續(xù)溶劑萃取，例如通過濕或干研磨或碾磨以具有最大6000|am的粒徑，優(yōu)選為最大5000)um。已發(fā)現(xiàn)在室內(nèi)或環(huán)境溫度下的冷溶劑萃取，比方說15~30°C,對于本發(fā)明的目的是適當(dāng)?shù)模景l(fā)明預(yù)期不排除在高至100。C高溫下熱萃取的可能性。申請人特別對由南非比勒陀利亞的南非國立生物多樣性研究所(SANBI)鑒定為物種Mo"c^om'a(3wg^^/o/^z的才直物實(shí)施了本發(fā)明的方法。Mowosom'"屬植物是櫳牛兒苗科的一部分，且M⑧gM^/b/^是具有五片花瓣的粉紅色花的多年生草本植物，其地理分布在整個南非的寬闊草地。其臘葉標(biāo)本已存放在比勒陀利亞的SANBI，編號為Genspec.No.39250002下。由Mo"osom'a⑧gw^/b/Za得到的萃取物，尤其是采用曱醇/二氯曱烷混合物作為溶劑的溶劑萃取物，已表明有望用于雄性受試者的勃起功能障礙的治療和性欲提高。諸如二氯曱烷或體積比為l:l的曱醇/二氯曱烷溶劑萃取物的有機(jī)溶劑萃取物分餾，例如通過溶劑/溶劑相分配及后續(xù)通過柱色譜分離，已分離出五種確信對勃起功能障礙的治療或預(yù)防和/或性欲提高具有活性的化合物。所以所述方法可包括從所述萃取物中分離活性化合物，例如通過分餾，諸如色譜，例如柱色譜，隨后經(jīng)過活性化合物的重新組合。所以最終產(chǎn)品可以是活性化合物和/或所述植物萃取物中含有的其它化學(xué)成份的組合形式。如上所述，所述活性化合物可通過包括水萃取、有機(jī)溶劑萃取和超臨界流體萃取或相關(guān)化學(xué)萃取方法的萃取技術(shù)萃取，然后通過噴霧干燥、冷凍干燥或蒸發(fā)來干燥(去除萃取溶劑)。因而所述萃取物可通過溶劑-溶劑相分配加上色譜分離技術(shù)來分離提供所述活性化合物。所述活性化合物可示例性和具體地配制成適宜的片劑、膠嚢和口腔噴劑。根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，提供了選自通式(1)和(2)的化合物中的至少一種化合物在用于對男人或雄性動物受試者的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療或性欲提高的藥物的制備中的應(yīng)用，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中RPR2、R4、R5、R6分別獨(dú)立選自H和d4烷基，且R3獨(dú)立選自H和OCm烷基，或R,和R2—起形成CR8R9，其中Rg和119分別獨(dú)立選自H和Cm坑基，且R3R6如上述限定，或Rs和R6—起形成CR8R9,其中Rg和R9分別獨(dú)立選自H和C!4烷基，.且R,R4如上述限定，和A是CH2且B是CO或B是CH2且A是CO，和R7是CH2-芳基。RpR2和R4R6可選自曱基和H,且Rs和R9可是H。CH^芳基取代基可是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>其中R，和R2如以上所做限定。具體地，通式(1)和(2)的化合物可選自9-(l',3'-苯并二氧雜環(huán)戊二烯-5'-基)-4，5,6,7-四曱氧基萘并[2，3-c]呋喃-l(3H)-酮(化合物3)、9-(l'，3'-苯并二氧雜環(huán)戊二烯-5'-基)-4,6,7-三曱氧基萘并[2,3-c]呋喃-1(3H)-酉同(化合物4)、9-(3',4'-二曱氧基苯基)-4-羥基-6,7-亞曱二氧基萘并[2,3-c]吹喃-l(3H)-酉同(化合物5)、3-(1',3'-苯并二氧雜環(huán)戊二烯-5'-基-亞曱基)-4-(3",4"-二曱氧基芐基)二氫呋喃-2(5H)-酮(化合物6)、4-(3'，4'-二曱氧基苯基)-9-曱氧基-6,7_亞曱二氧基萘并[2,3-c]呋喃-l(3H)-酉同(化合物7)。這些化合物也稱作5-曱氧基爵床脂素A(化合物3),爵床脂素A(化合物4)，金不換萘酚(化合物5),蘇齊內(nèi)酯(化合物6)和逆金不換萘酚曱醚(化合物7)。本發(fā)明提供一種用于男人或雄性動物體的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療或性欲提高的藥用組合物，所述組合物包括雄牛兒苗科的至少一種植物品種的植物材料和植物材料萃取物中的至少一種的配方。所述植物材料和所述萃取物可如上所述。本發(fā)明提供一種用于對男人或雄性動物受試者的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療或性欲提高的藥用組合物，所述組合物包括至少一種選自通式(1)和P)的化合物。R，O其中(i)(2)R2、R4、R5、R6分別獨(dú)立選自H和d-4烷基，且R3獨(dú)立選自H和OCM烷基，或R!和R2—起形成CR8R9,其中Rs和R9分別獨(dú)立選自H和Ci—4烷基，且R3R6如上述限定，或Rs和R6—起形成CR8R9，其中Rg和R9分別獨(dú)立選自H和d4烷基，且RiR4如上述限定，和A是CH2且b是CO或b是ch2且a是c:o，和R7是CH2-芳基。R!、R2和R4R6可選自曱基和H，及Rs和R9可是H。所述Ci力-芳基取代基是其中Ri和R2如權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所限定。所述通式(1)和(2)的化合物可選自化合物(3)~(7)?；衔?3)~(7)的結(jié)構(gòu)列出如下3:5-甲氧基爵床脂素A4:爵床脂素AOCH37:逆金不換萘酚曱醚所分離的成分3~7的結(jié)構(gòu)說明主要基于波譜分析，所述化合物的分離過程如下將采用體積比為1:1的曱醇/二氯曱烷混合物對Moraom'a"^^/^//"植物材料進(jìn)行溶劑萃取，接著經(jīng)過干燥，在90:10的曱醇/水的混合物和己烷之間相分配，然后將得到的曱醇/水層與二氯曱烷分相，再蒸發(fā)二氯曱烷層，將得到的樣品經(jīng)過柱色譜分離得到所述化合物。^和13CNMR(核磁共振)波i普數(shù)據(jù)提供了化合物鑒定的第一階段。必要時，使用諸如COSY(質(zhì)子相關(guān)波鐠，protoncorrelationspectroscopy)、HMQC(異核多量子相關(guān))和HMBC(異核多鍵相關(guān))的高級同核和異核二維NMR方法將分離的化合物的^和"C相關(guān)譜完全歸屬。由質(zhì)子去偶DEPT(通過偏振轉(zhuǎn)移來提高不失真)脈沖序列亞譜，根據(jù)它們的多重性可歸屬質(zhì)子化的碳。得到的分離的活性化合物3~7的13C和的化學(xué)位移的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)列于下列表1、2、3、4和5中。為驗(yàn)證已確定的結(jié)構(gòu)，將所得的化學(xué)位移數(shù)據(jù)在線或采用結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫與已鑒定出的和已知的化合物相比較。所述五種化合物的結(jié)構(gòu)被描述成通過稠和至少兩個苯丙基(phenylpropanyl)(C6-C3)單元來生物合成形成的芳基萘木酚素類(arylnaphthalenelignans)?；衔?被明確鑒定為與已經(jīng)從爵床(Jw幼'c/a;racMm^ra)植物中分離出來的物質(zhì)一樣，現(xiàn)在已知為5-曱氧基爵床月旨素A(Siani,AntonioCetalJournalofNaturalProducts,61(6),796-797，1998)，其具有分子式(323112()08及對應(yīng)的m/z424[M]+的分子離子峰?；衔?被鑒定為具有分子離子峰w/z394[M]+(分子式<:22111807)的爵床脂素A。該化合物是發(fā)現(xiàn)于植物中的最為公知的木酚素之一(M.Okigawaetal，Tetrahedron,26,4301—4305，1970，L.Badhekaetal，Phytochemistry,25(2),487-4891986)?；衔?被公認(rèn)為是金不換萘酚，且它是以前從爵床中分離出來的(Z.HoriietalChemicalCommunications,653，1968)。得到該化合物的質(zhì)荷比為m/z380,該質(zhì)荷比與假定的分子式(32^1607相符。發(fā)現(xiàn)化合物6(分子式C21H2()06)具有w/z368[M]+,且基于文獻(xiàn)和NMR波i普數(shù)據(jù)，與已出版的鑒定數(shù)據(jù)(S.Ghosaletal,Phytochemistry,13，1933,1974，BiswanathDasandRatnaDas,Phytochemistry,40(3),931—932，1995)相，于比，凈皮歸屬為蘇齊內(nèi)酯的命名。結(jié)合波譜數(shù)據(jù)(Z.Horiietal，ChemicalandPharmaceuticalBulletin,19(3),535—537，1971)，化合物7(分子式C22H1807)-故說明為逆金不換萘酚曱醚，并得到m/z394的分子離子[M]+。本發(fā)明提供一種物質(zhì)或組合物在用于對男人或雄性動物體的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療或性欲提高的藥物或制劑生產(chǎn)中的應(yīng)用，所述物質(zhì)或組合物包4舌由Momwomb屬的才直物，特別是Mowom'aawg^s^/b/^的才直物材料得到的配制劑。能障礙的治療或預(yù)防性治療或性欲提高的藥物或制劑生產(chǎn)中的應(yīng)用，所述物質(zhì)或組合物包括從由上述確定的化合物3、化合物4、化合物5、化合物6和化合物7構(gòu)成的組中選擇的至少一種化合物。所述物質(zhì)或化合物可包括所述化合物3、4、5、6和7的多種，且它可包括所述化合物3、4、5、6和7的一種或多種衍生物。本發(fā)明還提供用于男人或雄性動物體的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療和性欲提高的物質(zhì)和組合物，所述物質(zhì)或組合物包括從來自Mo"osom'a屬植物的植物材料中得到的配制劑，尤其是溶劑萃取物，(和其中含有的所述活性化合物)。更具體地，本發(fā)明提供一種物質(zhì)或組合物，用于通過給予人體或動物體以有效劑量的所述物質(zhì)或組合物來治療男人或雄性動物體的勃起功能障礙或性欲提高的方法中，所述組合物的物質(zhì)形成由Mowwomb屬的一種植物的植物材料得到的配制劑、尤其是其植物萃取物的一部分。所述物質(zhì)或組合物可包括上述確定的化合物3~7中的至少一種或其至全部和可選的一種或多種衍生物。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種物質(zhì)或組合物，用于通過給予人體或動物體以有效劑量的所述物質(zhì)或組合物來用于男人或雄性動物體的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療的方法中和用于性欲提高，所述物質(zhì)或組合物可包括上述確定的化合物3~7中的至少一種。所述化合物或組合物可包括上述化合物3~7中的多種，優(yōu)選為全部上述化合物3~7，且可包括一種或多種其書t生物。所述化合物3~7的一種或多種，或它們的^f汙生物，在所述物質(zhì)或組合物中可存在的總濃度或比例為至少5wt%,優(yōu)選為至少10wt。/。和更優(yōu)選為至少20wt%。具體地，所述物質(zhì)或組合物可存在的形式可以是選自已經(jīng)過尺寸減小的植物材料顆粒并可選地包在茶包性質(zhì)的多孔袋中、或以片劑、膠嚢、口腔噴劑、糖漿和可能的草藥酊劑的形式。因此，所述物質(zhì)或組合物可用于治療或預(yù)防的方法中，或提高的方法中，其中所述物質(zhì)或組合物按單位劑量形式給予。優(yōu)選地，所述物質(zhì)或組合物的給予量為一種或多種上述已確定的化合物3~7或一種或多種衍生物可以在人體或動物體內(nèi)達(dá)到效總血清質(zhì)量濃度的。更具體地，所述物質(zhì)和組合物的給予量可以是有效日劑量率，所述比率取決于受試者的體重。本發(fā)明進(jìn)一步提供可從Mowoww'a屬植物、特別是Mo似om'a.a"gw幼/o"a的萃取物得到的上述已確定的化合物3~7中的任一個的新型衍生物。本發(fā)明更進(jìn)一步提供一種用于男人或雄性動物體的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療和提高性欲的方法，所述方法包括對男人或雄性動物受試者給予有效劑量的包括Mowosom》屬植物、尤其是Ma"g^y"/b//a的植物萃取物的物質(zhì)或組合物。本發(fā)明還進(jìn)一步包括一種用于男人或雄性動物體的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療和提高性欲的方法，所述方法包括對男人或雄性動物受試者給予有效劑量的包括上述已確定的化合物3~7的至少一種的物質(zhì)或組合物。所述化合物可包括所述化合物3~7中的多種，優(yōu)選為全部。所述物質(zhì)或組合物的給予可以是單位劑量的形式。具體地，所述物質(zhì)或組合物的給予量為可以在人體或動物體內(nèi)達(dá)到所述化合物3-5的一種或多種的含有效總血清質(zhì)量濃度。更具體地，所述物質(zhì)或組合物的給予量可以是有效日劑量率，所述比率取決于受試者的體重。以下在某些程度上更具體地說明，本發(fā)明提供一種用于雄性受試者的緩解勃起功能障礙和提高性欲的源自植物的治療。根據(jù)所謂的性交頻率/受孕測試模型(MFM),已論證了本發(fā)明的所述物質(zhì)或組合物對提高雄性大鼠的性欲是有效的。根據(jù)以上性欲提高，可推斷出所述物質(zhì)和組合物對緩解雄性受試者的勃起功能障礙也有效的。明實(shí)施例1從由在比勒陀利亞的SANBI所確定的植物物種Mo"som'aawgw^yb/Za的植物材料制備萃取物。所述植物材料包括根、莖、葉和紫色的花，從這些植物材料中可制得萃取物。所述萃取物的初始液-液相分配提供了己烷、二氯曱烷和水部分?；赑DE5抑制作用，與原始的未經(jīng)處理的萃取物相比，二氯曱烷部分表現(xiàn)出活性提高了20%。在快速硅膠(flashsilicagel)中重復(fù)柱色譜得以分離已確定為芳基萘木酚素的五種化合物3~7,它們由兩個苯丙基(C6-C3)單元生物合成形成。5-甲氧基錄床脂素A(化合物3)的表征分離后的5-甲氧基爵床脂素A(化合物3)為白色無定形固體。根據(jù)正的LRESIMS中對應(yīng)于[M+l]+的m/z425.4處和AutoSpecETOFEI+中的m/z424處的分子離子峰，都對應(yīng)于分子式C23H2Q08。由二極管陣列檢測器(DAD)得到的UV光譜和觀測到于X365、263和237nm的吸收。在化合物3的NMR波譜(表l)中，可發(fā)現(xiàn)存在亞曱二氧基基團(tuán)、SH6.02(1H，d)和有Jl,3Hz的非常小的耦合的SH6.07(1H,d)。在5H5.41處觀察到的另一個亞曱基的單線是木酚素中戊內(nèi)酯環(huán)的亞曱基基團(tuán)的特征。在5H3.74、3.95、3.97和4.01處觀察到的四條單線歸屬于曱氧基。在§H6.94處觀察到H-8的芳香性質(zhì)子單線?？砂l(fā)現(xiàn)三個芳香性質(zhì)子呈現(xiàn)的鄰位耦合C/=7.9Hz)和間位耦合(J^1.6Hz)，這與1,3,4-三取代苯基相一致。l3CNMR語顯示了23個共振信號?？闪⒓磳?c55.8、61.4、62.4、和62.0處的四個信號歸屬于四個曱氧基碳共振。其他碳信號的多重性由顯示10個質(zhì)子化碳信號的DEPT譜得到，除了已被歸屬為曱氧基的四個，其中兩個是CH2和四個是CH。在5C169.5處還證實(shí)有羰基基團(tuán)，它是五元環(huán)中內(nèi)酯官能團(tuán)的特征。在芳香區(qū)也沒發(fā)現(xiàn)C-3，在Sc66.5處歸屬于連接到羰基上形成內(nèi)酯的亞曱基基團(tuán)。由HMBC實(shí)驗(yàn)中的"々H相關(guān)可證實(shí)所述結(jié)構(gòu)。Siani等已經(jīng)從/Vo"wm腦^//。/0^附'木材中分離出5-曱氧基爵床脂素A(化合物3)。在該文獻(xiàn)中，一些NMR信號的歸屬不正確(C-9、C-9a、C-8和C-8a),因而我們可通過借助于2D實(shí)驗(yàn)來歸屬它們。作者承認(rèn)了錯誤的歸屬，因而我們提議的歸屬可認(rèn)為是正確的。表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>C薩R(125.7MHz)和iH麗R(500MHz)爵床脂素A(化合物4)的表征該化合物經(jīng)分離成白色無定形薄片。化合物4的iHNMR譜與化合物3的相似。它們主要的差異在于化合物4的譜圖表現(xiàn)出只存在三個曱氧基基團(tuán)((SH3.79,4.04,4.11))而不是化合物3中的四個。C-5處的一個曱氧基由5H7.52處的質(zhì)子共振所取代。SH7.52和7.04處兩個質(zhì)子共振間不存在可觀察到的耦合，表明了它們之間的對位關(guān)系。與形成1，3,4-三取代苯基基團(tuán)的三個芳香性質(zhì)子一樣，在5h5.51處也存在形成部分呋喃酮環(huán)的亞曱基信號。觀察到亞曱二氧基取代基的具有非常弱的耦合(0.9HzJhh但的5h6.02和6.06)的一對質(zhì)子雙線。觀察到22個"CNMR信號與少于1個的曱氧基基團(tuán)相對應(yīng)。三個曱氧基基團(tuán)歸屬于5C55.8、56.1和59.7。在低場的5C169.5處觀察到有羰基信號。形成部分呋喃酮環(huán)的亞曱基基團(tuán)歸屬于5C66.6。在Sc101.2處發(fā)現(xiàn)了亞曱二氧基的碳信號。發(fā)現(xiàn)其他的碳信號支持具有與5-曱氧基爵床脂素A(3)一樣的取代模式的結(jié)構(gòu)框架。爵床脂素A顯示了EMIMS正性模式中對應(yīng)于[M+l]+的m/z395.4分子離子峰和分子式為C22H1807。由二極管陣列檢測器得到的該化合物的UV譜圖中，在261.7nm處有強(qiáng)吸收的最大值。該化合物普遍歸類于爵床(JwWc/aJ科中的不同物種，其抗病毒活性"、抗血小板活性&~和細(xì)胞毒性v此前已得到廣泛研究，但是沒有此處所述的活性。公開的爵床脂素Avl'vi、々NMR數(shù)據(jù)支持爵床脂素A(4)的結(jié)構(gòu)歸屬。表2:CDCb中的爵床脂素A的NMR數(shù)據(jù)fcScDept和HMQCSHC/HH/Hz)COSYHMBC"JCH相關(guān)1169.5OO366.6CH25.51C陽9a,C-4,C-l3a119.3C4147.8c4a126.0c5100.6c7.526-OCH36151.6c7]50.4c8106.2CH7,047-OCH3C-4a,C-9,C-6130.7c9134.4c9a124.5c4-OCH359.7OCH34.11C-46-OCH356.1OCH34.04C-67-OCH355.8OCH33.79C-72'101.2CH26.02,6.06(d,1.0)C-7a'，C-3a'3a'147.5C4,110.8CH6.8(s)C-6'，C-9,C-7a'5,128.5C6,123.6CH6.76,6.78(dd,7.9,H-7'C-4',C-9,C-7a'1.4)7,108.2CH6.92,6.94(d,7.9)H-6'C-5',C-3a'7a'147.4C*13CNMR(125.7MHz)和'HNMR(500MHz)金不換萘酚(化合物5)的表征通常將化合物5認(rèn)為是金不換萘酚，已經(jīng)從^Wc/a,oc"m6e似中分離，并在Z.Horii等1968"中記錄了抗血小板性能的測試。在LRESIMS的正性模式中觀察到381.4的荷質(zhì)比(m/z),歸屬于與分子式C2,H^07相對應(yīng)的分子離子峰[M+l]+。DAD圖譜中該化合物的UV最大峰在322.0、266.4和228.8nm處的吸收，這是芳基萘分子的特征?；衔?通過快速硅膠色語來提純，且在遠(yuǎn)程UV254nm可看到紫色斑點(diǎn)，而在366nm可看到非常強(qiáng)的藍(lán)色焚光。得到的白色無定形物質(zhì)不能在單一溶劑中再溶解。然而，它可溶于用作NMR實(shí)驗(yàn)的CDCl3和MeOH-d4的混合物中，得到的數(shù)據(jù)整理于表6.3中。^NMR數(shù)據(jù)顯示的SH5.35處的單線可歸屬于內(nèi)酯亞甲基基團(tuán)，以及5H6.15(s，H-10)處的共振是亞曱二氧基基團(tuán)的特征，以及出現(xiàn)在SH3.71和3.84的單線的兩個曱氧基基團(tuán)。在上述兩種結(jié)構(gòu)(化合物3和化合物4)中，亞曱基二氧基基團(tuán)連接到C環(huán)且曱氧基基團(tuán)連接到A環(huán)。然而，在HMBC實(shí)驗(yàn)中觀察到的"VcH相關(guān)表明在所述化合物中，亞曱基基團(tuán)是在A環(huán)上的且甲氧基取代基在B環(huán)上。上述三個芳香性C環(huán)質(zhì)子形成如木酚素化合物3和化合物4中觀察到的三取代苯基的ABX體系特征。這些質(zhì)子在SH6.83(H-2'，d，8.24)、6.77(H-6',dd，2.07和8.03),7.05(H-5'，d,8.24)的共振且它們的耦合由COSY2D相關(guān)i普支持。表3:CDC13和CD3OD中的金不換萘酚(化合物5)的NMR數(shù)據(jù)*<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>*13CNMR(100.6MHz)禾口!HNMR(400MHz)含有21個碳的13CNMR波譜數(shù)據(jù)支持了假定的結(jié)構(gòu)5，且得到質(zhì)譜數(shù)據(jù)。內(nèi)酯環(huán)的羰基C-1和同一個環(huán)中的亞曱基基團(tuán)C-3分別歸屬于5C169.4和66.4處的共振。其它重要信號是共振于Sc55.4和55.5處的兩個曱氧基基團(tuán)和共振于5C101.9處的亞曱二氧基C-IO。基于波譜數(shù)據(jù)和2DNMR實(shí)驗(yàn)中觀察到的支持性相關(guān)譜，化合物5被確定為金不換萘酚。蘇齊內(nèi)酯(化合物6)的表征黃色晶體的化合物6是從Ma"g船^/b/Z"的曱醇-二氯甲烷萃取物中分離出來的，且它的i普圖數(shù)據(jù)整理于表6.4中。其結(jié)構(gòu)可借助于2DNMR相關(guān)譜提供的C-H連接方式的信息來推導(dǎo)。假定的結(jié)構(gòu)也可通過與文獻(xiàn)數(shù)據(jù)K比較來驗(yàn)證。化合物6的ESIMS(+)顯示出與分子式(321112()06相一致的m/z368的分子離子峰。在質(zhì)譜中，在m/z151觀察到的碎片歸屬于碎片6.1,而在m/z217的歸屬于碎片6.2。兩個曱氧基基團(tuán)在^NMR譜的SH3.84和3.86處觀察到為單線。與其他只觀察到一個1,3,4-三取代苯環(huán)的化合物相比，在化合物6的iHNMR譜中，出現(xiàn)第二套ABX質(zhì)子。此外，在&7.50處可觀察到雙鍵質(zhì)子。6.16.2表4:CDCl3中蘇齊內(nèi)酉旨(化合物6)的NMR數(shù)據(jù)頭DEPTc5c禾口畫QCCOSYHMBC>VCH相關(guān)2172.5C=0126.1C440.13.75Cm)CHH-7",H-5C-8',C-2,c-r569.84.26(m)CH2H-4C-7",C-3，C-22'101.76.02(d，1.9)CH2C-3a',C-7a'3a,148.4C4'126.37.08(s)CHC-6',C-7a',C-8'5'128.3CH-6'6'108,57.06(s)CHH-7',H-4'C-4',C-8',C-7a'7'跳86.87(dd，8.5,1.9)CHH-6'C-5'，C-3a'7a,149.2C8'137.27.50Cd，1.9)CHC-4',C-6',C-2,C-44"-OCH355.93.86(s)OCH3C-4"3"-OCH355.93.84(s)OCH3C-3"*13CNMR(100.6MHz),1HNMR(400MHz)由COSY相關(guān)譜可觀察到與H-5和H-7"處質(zhì)子耦合的H-4處的質(zhì)子。這些關(guān)鍵相關(guān)都示于圖6.4中并用紅色箭頭表示。其他觀察到的相關(guān)是H-6'~H-4'和H-7',也在H-5"和H6"間有強(qiáng)相關(guān)的C環(huán)中。化合物6的l3CNMR表示了兩個曱氧基基團(tuán)重疊于Sc55.9處的21個碳信號。內(nèi)酯環(huán)中的羰基共振于Sc172.5和同一環(huán)中的亞曱基基團(tuán)出現(xiàn)在Sc69.8。內(nèi)酯環(huán)的環(huán)外雙4囊的共振峰出現(xiàn)在5C126.1和137.2,分別為C-3和C-8'處的碳。C-7"處的亞曱基碳?xì)w屬于Sc37.7處的信號。C-2'處的亞曱二氧基的共振峰出現(xiàn)在Sc101.7處。DEPT譜用于歸屬多重碳共振。兩個重疊的r130.42"120.96.73(dd，2.0，8.2)3"149.24"148.15"111.56.85(d,8.1)6"112.26.69(d,2.0)7"37.72.63(dd,14.13,4.31);3.01(dd14.12，10,02)C-4"'C-6",C-7"H-6"C-l",C-3"C-2",C-4",C-7"H-4C-3,C-5，C-2",C-6"HHHHccccccc曱氣基峰、三個CH2和八個CH峰，將剩下的八個碳信號歸屬為季碳原子。逆金不換萘酚曱醚(化合物7)的表征化合物7(C22H,807)被確定為逆金不換萘酚曱醚x。得到的質(zhì)荷比W/Z395.4[M+l]+(ESIMS)證明了C22H1807的分子式。該化合物的結(jié)構(gòu)與5的相似，不同之處在于內(nèi)酯環(huán)的亞曱基和羰基基團(tuán)的四周被取代，且C-4位的羥基基團(tuán)此處被曱氧基基團(tuán)取代。表5:CDC13中化合物7的NMR數(shù)據(jù)*c5CDept和畫QC5H(週z)COSYHMBC"■/CH相關(guān)1169.1C=0368.8CH25.11(d,15.0;d,C-l,C-4,C-9a15.0)3:i139.4C4127.5C4a135.3C5102.2CH6.98(s)H-8C-7,C-8a，C-46148.2C7150.8C800.2CH7.71(s)C-4a,C-6,C-98a125.3C9155.7c9a110.1c10101.8CH26.06(s)C-6，C-79-OCH363.5OCH34.31(s)C-93'-OCH356.1OCH33,86(s)C-3'4'-OCH356.0OCH3_3.96(s)_^_13CNMR(100.6MHz)和'HNMR(400MHz)將上述化合物7的'H和13CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)x中報(bào)道的相比且對比化26r128,5C2'112.6CH3'149.4C4'149.0C5'111,8CH6'121.9CH6.79(d,2.0)6.99(d,8.0)6.84,6.86(dd,2.0,8.0)C-4',C-6',C-4c-r,c-3'C-2',C-4',C-46652HHHH合物5中觀察到的，得出化合物7的歸屬為逆金不換萘酚曱醚。實(shí)施例2將來自7kforaom'aaMg^^/b/Za的才直物材4牛于35~45°C(例如40±5°C)烘干至質(zhì)量基本恒定，再于錘磨機(jī)中研磨至粒徑為l~2mm。質(zhì)量為408g的干燥初始材料，經(jīng)研磨，得到352g在12mm的粒徑范圍內(nèi)的材料。加1升去離子水到86g所述干燥的植物材料中形成混合物，將該混合物沸騰1小時。沸騰的混合物被放置冷卻到室溫，過濾和冷凍干燥24小時，得到22.16g褐色膨松粉末，形成水萃取物。在266g類似的干燥和研磨的植物材料中加入6升體積比為1:1的曱醇/二氯曱烷的混合物，形成溶劑/植物材料混合物，將該混合物置于室溫1小時并不斷攪拌。過濾所述溶劑/植物材料混合物，對殘留的植物材料類似地采用所述體積比為1:1的曱醇/二氯甲烷的混合物于室溫1小時并不斷攪拌再次萃取。合并兩次得到的過濾液并在取決于大氣溫度和濕度的低大氣壓下真空蒸發(fā)得到27.32g粘性深綠色萃取物形式的殘留物。將數(shù)量為1.5g的上述粘性深綠色曱醇/二氯曱烷萃取物于1升體積比為9:1的曱醇/水混合物和500毫升己烷中分相成兩層。分離出己烷層并將曱醇/水混合物于40。C蒸發(fā)得到395.8mg的粘性深綠色組分，在該組分中加入水至總體積為500毫升，再進(jìn)一步用500毫升分批的二氯曱烷萃取。所述二氯甲烷的分批也從水中分離，然后會用另一批也是從水中分離的500毫升的二氯曱烷進(jìn)一步對水萃取，再用最后一批500毫升的由此分離的二氯曱烷對水最后萃取。將這三批從水分離出的二氯曱烷合并且在40。C蒸發(fā)得到542.6mg的褐色萃取物，同時將分離出的殘留水冷凍干燥得到473.8mg的褐色粉末。將質(zhì)量為6g的粘性深綠色二乙基曱醇/二氯曱烷萃取物分餾并用快速色語(flashchromatography)(硅膠60，默克，230-400目)提純，再用體積比為1.5:8.5的乙酸乙酯/己烷混合物為洗提液得到163.6mg的甾類化合物卩-谷甾醇和以上確定的所述化合物3~7,它們是木酚素類化合物且分別得到的量為35mg(化合物3)、19.3mg(化合物4)、27.2mg(化合物5)、36.4mg(化合物6)和16.5mg(化合物7)。測試了適于人類使用形式的最終產(chǎn)品的生產(chǎn)方法，且計(jì)劃將其用于最終劑量形式的生產(chǎn)。兩種方法用于制備所述產(chǎn)品，其中一種方法中，將新鮮的濕的植物根、莖、葉和花切斷、在水中煮沸、過濾和通過噴霧干燥或冷凍干燥，干燥成粉末?；蛘邔⑶袛嗟闹参锔⑶o、葉和花用烘烤設(shè)備在35-45。C(例如40土5。C)或用藥草干燥器烘干。干燥的植物部分經(jīng)研磨至粒徑最大為6000pm的顆粒，然后在約97。C下用熱水萃取，過濾和用噴霧干燥或冷凍干燥技術(shù)干燥得到粉末。在所述干燥植物材料的萃取中，將16.00kg的莖、葉和花切成5mm長并用以下表6中列出的干燥循環(huán)在草藥干燥器內(nèi)干燥。所述干燥(褐綠色)材料研磨至細(xì)顆粒(3.38g粒徑最大為6000(im),并在75升水中煮沸萃取一小時。所述水經(jīng)過濾，將殘留的植物材料在另75升水中煮沸30分鐘。將合并的過濾水萃取物(115升)在冷室中放置一晚。數(shù)量為500毫升的水萃取物冷凍干燥24小時得到40.6g干燥褐色粉末。將剩下的114.5升經(jīng)噴霧干燥(所用噴霧干燥條件見下列表7)并得到804g與40.6g冷凍干燥的樣品在視覺和化學(xué)上都非常相似的干燥褐色粉末。這兩種萃取物通過HPLC-MS和TLC方法來比較，比較顯示，和開始說明的冷凍干燥水萃取物得到的22.1g褐色膨松粉體一樣，它們彼此相似。表6:藥草干燥器的干燥參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>在新鮮的濕植物材料的萃取中，將新鮮植物的莖、葉和花(5.65kg)切至5mm長并在40升水中煮沸一小時。將所得的水過濾，并將殘留的植物材料在另40升水中煮沸30分鐘。合并得到的萃取物并過濾得到46.62升褐色汁液狀的水萃取物。將所得汁液置于冷室一晚。噴霧干燥(噴霧干燥條件見下列表5)所得汁液產(chǎn)生242g褐色粉末。所得粉末通過HPLC-MS和TLC方法顯示出與開始說明的冷凍干燥水萃取物得到的22.16g褐色膨松粉體相類似，且與以上說明的噴霧干燥干植物材料的水萃取物得到的804g褐色粉末。表7:噴霧干燥參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>以上說明的噴霧干燥干植物材料的水萃取物得到的804g粉末的6.00g部分配制成20片劑量為300mg的噴霧干燥粉末/片(配制組合物見下列表8)的泡騰片劑。表8:用于配制泡騰片劑的成分<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>以上說明的噴霧干燥干植物材料的水萃取物制得的804g粉末的另外6.00g部分配制成20個各包含300mg的噴霧干燥粉末的膠嚢。所述膠嚢的配制和包含的成分列于以下表9。表9:用于膠嚢配制的成分<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>為確定本發(fā)明的功效，測試了以上說明的所述水和有機(jī)萃取物。分相前，將部分前述22.16g水萃取物的褐色膨松粉體與部分27.32g粘性深綠色曱醇/二氯曱烷萃取物按4:6的質(zhì)量比混合形成混合物，根據(jù)可測得的活體性活動、性交頻率/受孕模型(MFM)來測試。該模型是雄性性欲的測量方法。將所述萃取混合物給3只雄性老鼠以300mg/kg的劑量連續(xù)8天口服。在夜間例如從17:00到午夜通過視頻監(jiān)視來記錄性活動。所用載體對照物質(zhì)是蒸餾水，每只動物的口服劑量為一個白天1OmL/kg的劑量。與載體對照相比，所述萃取物混合物表現(xiàn)出的性交頻率和受孕雌體數(shù)量明顯增加，因而證明提高了雄性性欲。由生物分析得到的結(jié)果示于以下表10和11。表10:由性活動、性交頻率分析得到的結(jié)果治療組性交頻率(各組)詢t平均值±偏差第2第3第4第5第6第7第8天天天天天天天載體113000431116882.0±10.7(蒸餾242031100175水)3381050171122103測試物1397550488720301243.0±55.5質(zhì)261185674410129631091155121718132表ll:由性活動、受孕檢驗(yàn)得到的結(jié)果治療組號單組受孕數(shù)受孕總數(shù)平均值土偏差載體(蒸餾水)132282.7±0.3315測試物質(zhì)25144.7±0.334為確定所制得的萃取物用于MFM活動時在老鼠中觀察到的行為可能模式，也可在體外檢測所述萃取物對磷酸二酯酶5酶的抑制作用。磷酸二酯酶5酶的抑制作可限制環(huán)鳥苷酸單磷酸(cGMP)水解成非環(huán)鳥苷酸單磷酸(5'GMP),因而增加cGMP的細(xì)胞內(nèi)濃度，這會導(dǎo)致海綿體平滑肌放松。當(dāng)該肌肉放松時血液流過和填充動脈會使得陰莖勃起。所述水萃取物和曱醇/二氯曱烷萃取物，質(zhì)量比為4:6的混合物是上述表6和7中的測試物質(zhì)，以1:1的質(zhì)量比混合形成另一種混合物，該1:1的混合物用于測試磷酸二酯酶5酶的體外抑制作用。它在100|ag/mL時呈現(xiàn)顯著(80%)的抑制作用(見下表12)。進(jìn)一步對部分所述27.32g的粘性深綠色曱醇/二氯曱烷萃取物和部分所述22.16g的褐色膨松粉末的體外分析分別在磷酸二酯酶5酶抑制作用試驗(yàn)中進(jìn)行，以確定哪種萃取物在1:1的混合物的活性中起的作用最大。所述曱醇/二氯曱烷萃取物表現(xiàn)出磷酸二酯酶5酶的最高抑制作用(見表12)。還值得注意的是由1:1質(zhì)量比的混合物觀察到的所述酶抑制作用近似于由各曱醇/二氯曱烷和水的萃取物觀察到的抑制作用的平均值，且它的測定是顯著的(例如若測得超過50%的抑制作用，該結(jié)果就可認(rèn)為是顯著的)。臺灣的MDS藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了磷酸二酯酶5酶的抑制作用試驗(yàn)。所使用的磷酸二酯酶5酶，部分提純于人類血小板。測試化合物和/或載體與3.5|ig酶和包含O.OljiM[3H]cGMP的l(aMcGMP—起于pH7.5的Tris緩沖液中在30。C培育20分鐘。所述反應(yīng)通過煮沸2分鐘終止，通過加入10mg/mL的蛇毒液核苷酸酶再進(jìn)一步于3(TC培育IO分鐘，將得到的GMP轉(zhuǎn)化為鳥苷。不水解的cGMP粘結(jié)到AG1-X2樹脂上，并通過閃爍計(jì)數(shù)來定量水相中保留的卩H]鳥香。于lOOjaM的濃度檢測化合物。由于酶的活性在批與批之間可變化，需要時可調(diào)整所用濃度。為分離和確認(rèn)對磷酸二酯酶5酶有抑制活性的活性成分，對部分27.32g的粘性深綠色曱醇/二氯曱烷萃取物通過液-液相分配進(jìn)行進(jìn)一步分離。檢測由曱醇/水和己烷之間相分配得到的二氯曱烷、己烷和水的部分和如上所述的另外的二氯曱烷萃取物對體外磷酸二酯酶5酶的抑制作用。與未處理的植物萃取物相比，只有二氯曱烷部分導(dǎo)致對磷酸二酯酶5酶的抑制作用大幅度增長。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>是9HZ。以上兩種萃取物都證明了放松兔子海綿體平滑肌的可能性，其中與曱醇/二氯曱烷萃取物相比，水萃取物的這種可能性更顯著(見下列表13)。表13:由兔子海綿體平滑肌實(shí)驗(yàn)分析得到的結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>盡管與所述曱醇/二氯曱烷萃取物相比，所述水萃取物顯示出更顯著的平滑肌放松，上述差異不是決定性的。然而，與水萃取物相比，曱醇/二氯曱烷萃取物表現(xiàn)出更高的磷酸二酯酶5酶抑制作用(見上表12)。曱醇/二氯曱烷萃取物表現(xiàn)出的顯著的磷酸二酯酶5酶活性有必要通過色譜提純來分離具有觀察到的活性的成分來進(jìn)一步研究。所述曱醇/二氯曱烷萃取物的分餾出分離化合物3~7，如上文所做說明，已表明它們都是木酚素類。利用薄層色譜(TLC)和HPLC方法還表明了這五種木酚素存在于所述二氯甲烷部分。如上所述，MDS藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室檢測這些木酚素對磷酸二酯酶的酶抑制作用，如以下所作說明將檢測它們對預(yù)先收縮的兔子平滑肌的放松作用和如以下所作說明將檢測它們對中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO)的細(xì)胞毒性，上述結(jié)果匯總于以下表14。MDS藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室測定了兔子的海綿體平滑肌的放松/收縮。所用的海綿體來自新西蘭來源的重2.5~3kg的白化變種雄兔并經(jīng)過度置于C02中而死亡。從海綿體的基域切除一條，并于2g張力下置于32。C的含有pH7.4的Krebs溶液的10毫升槽中，用苯腎上腺素(3pM)引起低于最大值記錄的等軸緊張收縮。所述測試物質(zhì)(30(iM)5分鐘內(nèi)引起50%或更高(>50%)的放松，相對于所述對照0.3pM硝普鈉的反應(yīng)，表明了顯著放松。由南非開普敦大學(xué)的藥理學(xué)部醫(yī)學(xué)系的分析實(shí)驗(yàn)室用中國倉鼠卵巢細(xì)胞分析了對體外哺乳動物細(xì)胞系的細(xì)胞毒性。測試了化合物3~7的樣品用于中國倉鼠卯巢細(xì)胞系的體外細(xì)胞毒性，采用3-(4，5-二曱基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)分析法。所有樣品都用單個場合的一式三份測試。所述MTT分析法用作細(xì)胞培育和存活的比色測定，完全比得上其它現(xiàn)有分析法(Mosman,JournalofImmunologicalMethods65,55-63(1983)和Rubinstein等，JournaloftheNationalCancerInstitute82,1113-8(19卯))。所述四唑鹽MTT用于測定所有的生長和化學(xué)敏感性。將水樣樣品溶于水，及將有機(jī)樣品溶于體積比l:9的曱醇:水混合物。所有樣品的儲存溶液的初始濃度都是2mg/mL。樣品在使用前都儲存于-2(TC。細(xì)胞暴露于其中的最高曱醇濃度對細(xì)胞的存活能力沒有可測量的效果(數(shù)據(jù)未列出)。依米丁用作所有實(shí)驗(yàn)中的陽性對照。依米丁的初始濃度是100ng/mL，它在完全培養(yǎng)基中逐漸被稀釋，用10倍梯度稀釋來提供6個濃度，最低為0.00嗎/mL。同樣的稀釋應(yīng)用于所有其他樣品，用初始濃度為100嗎/mL的提供5個濃度，最低濃度為0.01嗎/mL。由劑量-效應(yīng)曲線得到上述樣品的50%抑制濃度(IC5。)值，采用經(jīng)GraphPadPrismv.2.01軟件擬合分析的非線性劑量-效應(yīng)曲線。表14:化合物3~7的生物分析結(jié)果化合物編10|iM時;壽酸二酯酶5酶抑制作用(％)30pM時平滑肌放松(％)中國倉鼠卵巢細(xì)胞測試IC50(|ig/ml)分子式311629G23H20O842201C22H18C)7297528.5G2iH160763571>100G21H20O675357>100C22H18O735碌#《二游^5濰的#賴#^和乎;放在、的值250%#"^^€昱,的，#茵合篇伊^^皮應(yīng)iW試f好乂^才勿應(yīng)毒'絲，值為0.0々g/m丄的該求T刀斧^,裙。/井者^人Sx70-g/wi:矽4^A7卯％的^在、，減4Jx^-M^/<:50值對禪^二游雄5在磷酸二酯酶5酶分析中得到化合物7有顯著抑制作用。觀察到化合物3、5、6和7有兔子海綿體平滑肌放松。所述結(jié)果表明，雖然上述化合物證明兔子海綿體平滑肌的顯著放松，但是它們對磷酸二酯酶5酶的抑制能力有限(化合物7除外)。這表明化合物3、5、6和7可通過不同的生效方式起作用。此外，因協(xié)同效應(yīng)所述整個植物萃取物可通過抑制磷酸二酯酶5酶生效。還測試了所述分離的木酚素化合物對中國倉鼠卯巢細(xì)胞的細(xì)胞毒性(以上表14),IC50值為0.04嗎/mL的依米丁用作對照(值^1.0被認(rèn)為是細(xì)胞毒性)。對預(yù)先收縮的兔子平滑肌有放松效果的所述化合物3、5、6和7在測試濃度下無細(xì)胞毒性，毒性最小的是化合物6和7。根據(jù)以上中國倉鼠卯巢細(xì)胞測試的具有細(xì)胞毒性的化合物3在該測試濃度下未表現(xiàn)出任何兔子平滑肌的放松，并表現(xiàn)出對磷酸二酯酶5酶的不顯著的抑制作用。因此，化合物3、5、6和7具有基于所評價的濃度的所關(guān)心的治療窗。實(shí)施例3將Mo似om'aawgMS^/b/z'a的萃取物與M!ga/;/m7和Af.Z^evz'ras/raZa萃取物相比，表明在這些植物中存在化合物(3)(7)。所述結(jié)果示于表15。萃取物制備方法將所述干燥的植物材料研磨，接著用曱醇/二氯曱烷(1:1,v/v)萃取。所述溶劑經(jīng)過濾并于旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器中蒸發(fā)至干燥。不用時將得到的有機(jī)萃取物儲存于-20。C的冷室中。HPLC分析36樣品制備將樣品在50:50的甲醇乙腈混合物中復(fù)原，渦旋30分鐘，過濾和注射。始終采用Romil甲醇和乙腈。HPLC方法Waters2695HPLC泵溶劑梯度<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>柱HypersilGoldDim150x2.1mm,3|i粒徑柱溫40°C檢測UV條件Waters996PDA起始波長(nm):200鄉(xiāng)冬止波長(nm):450分辨率(nm):LOO波譜每秒MS條件MicromassQuattroLC錐體電壓(伏特)25掃描時間(秒)1.50間掃描延遲時間(秒)0.10模式ESI+全掃描100~600m/z(質(zhì)心)進(jìn)樣fC):120表15<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>本發(fā)明可，至少可能，被認(rèn)為是具有以下有益特性a)可治療勃起功能障礙和提高雄性性欲；b)可使先收縮的海綿體平滑肌放松的所述植物萃取物，證明可能治療勃起功能障礙。c)從所述植物萃取物中分離的化合物3、5、6和7證明不通過抑制磷酸二酯酶5酶而放松預(yù)先收縮的海綿體平滑肌來治療勃起功能障礙的可負(fù)fe,從而減少在上述酶抑制作用中出現(xiàn)的有害副作用；和d)所述萃取物和化合物用于勃起功能障礙和提高雄性性欲的治療。參考文獻(xiàn)i.Siani,A.C.,Zoghbi,M.dasG.B.，Wolter,E丄.A.andVencato,I"1998.J淑尸rad，61，796-797.ii.Asano,J.,Chiba，K.,Tada,M.，andYoshii,T.，1996.P/zytocAemz.Wry,42，713-717.iii.Gonzalez,A.G.，Perez,T.RandTrujillo,J.M.,1978.T^ra/zedra",34，1011-1013.ivChen,C.,Hsin,W"Ko,F.,Huang,Y.，Ou,J.andTeng,C.,1996，《/iW.59,1149-1150.v.Fukamiya,N.andLee，K.，1986.7Va/.Prad.49，348-350.vi.Okigawa，M.，Maeda，T.andKawano，N.,1970.rera/zet/腦，26,4301—4305.vii.Badheka，L.P.,Prabhu,B.R.andMulchandani,N.B.,1986.尸/^toc/em/Wr少，25，487—489.viii.Horri，Z.,Ohkawa,K.,Kim,S.andMomose,T"1968.C7zem.Cbmwww.,653-655,ix.Ghosal，S.,Chauhan,R.P.S.andSrivastava,R.S.,1974./V^toc/zem&^y,13，1933-1936.x.Horii，Z.，Ohkawa,K.,Kim,S.W.andMomose,T.1971.CTzem.P/z"削.歸.，19,535-537.權(quán)利要求1、一種用于男人或雄性動物受試者的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療，或性欲提高的物質(zhì)或組合物的生產(chǎn)方法，所述方法包括從牻牛兒苗科的至少一種植物品種的植物材料和植物材料萃取物中的至少一種配制所述物質(zhì)或組合物的步驟。2、如權(quán)利要求1所述的方法，其中植物是從由Ma"gM^/o/^、Ma/ex朋(iraem7'、M(又稱6辨ora」、MZvev/rastrato、M6e^xste服5、_M/wfe朋af又稱g/a，/ato、6她c/zM"w'ca」、M(ie/ms^a、McfeseWco/a、M^M(ie""a、Mga//z'm、Mg7a"dM/os7'肌'ma、Mg/awca、Mgra"c/i/b/z'<a卩又稱丄awceo/ate」、M/ze/Zo^cip/o/fias1、M/g"e"、M/g"ona^a、M/7en."en.、/朋wg/wos16、Ms、M、Mma/vaey/ora、M附幽ycia、Mw函ae,、、M"flto/e服、、Mra'vea、MoZconiato、M卩X稱，arg/"ato」、M戸rw》/z.a、Mre/ww7、MrM(iato"、Msewec/o/^卩又稱Praemor—、M化"ega/e腦.s卩又稱^7o厶ato」、Ms/e"'os<a丄、M一wasaf"又稱/oZato、jw7osay)、MWn'cto、M^msvaa/e"w^禾口Mwm6e〃ato構(gòu)成的組中選擇。3、如權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述萃取物選自有機(jī)萃取物和水萃取物。4、如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述萃取物選自采用有機(jī)溶劑萃取植物材料制備的有機(jī)萃取物，和通過用水萃取植物材料制備的水萃取物，所述有機(jī)溶劑選自由乙醚、異丙醚、曱醇、乙醇、氯仿、二氯曱烷、乙酸乙酯、己烷和其中兩種或多種的適宜的混合物或它們與水的混合物構(gòu)成的組中。5、如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述萃取物是采用超臨界流體萃取植物材料制備的有機(jī)萃取物。6、如權(quán)利要求5所述的方法，其中所述超臨界流體是超臨界二氧化碳。7、一種物質(zhì)或組合物在用于男人或雄性動物體的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療或性欲提高的藥物或制劑的制備中的應(yīng)用，所迷物質(zhì)或組合物包括維牛兒苗科的至少一種植物品種的植物材料和植物材料的萃取物中的至少一種的配制劑。8、如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其中所述植物選自M""gMW/o//a、Ma/exawt/raeww.、M！a"ewwate卩又一爾&i//on3」、MZrev/rastn2fa、M6e^aw/ewwi、Mf又稱g/朋w/ato、6efec/7wam'ca」、Mtfe_pms^<2、MdeseWco/a、M丄awceo/o/ej、M/2e//o^op/o/(ias、M/g"ea、M/g"ona^"、M〃/zer///eW、Mw函ae服^、Mwato/e脂X、Mm'vea、Mo6coni"to、Movato卩又稱e附arg/w齒」、M戸m》/Za、Mre/ww7、Mrwt/加'w7、Msewe"'o/tfes卩又稱尸raewor一、M化"ega/e服、卩又稱/n7o6齒」、Ms/ec/osa丄、M—wom卩又稱/oZato、/z7osa」、MW"'cto、M加ravaa/e服S和Mw柳6e〃ato。9、如權(quán)利要求7或8所述的應(yīng)用，其中所述萃取物選自有機(jī)萃取物和水萃取物。10、如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其中萃取物選自采用有機(jī)溶劑進(jìn)行植物材料萃取制備的有機(jī)萃取物，和用水進(jìn)行植物材料萃取制備的水萃取物，所述有機(jī)溶劑選自由乙醚、異丙醚、曱醇、乙醇、氯仿、二氯曱烷、乙酸乙酯、己烷和其中兩種或多種的適宜的混合物或它們與水的混合物構(gòu)成的組中。11、如權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其中所述萃取物是通過采用超臨界流體萃取植物材料制備的有機(jī)萃取物。12、如權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其中所述超臨界流體是超臨界二氧化碳。13、從通式(1)和(2)的化合物中選擇的至少一種化合物在用于男人或雄性動物受試者的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療或其性欲提高的藥物的制備中的應(yīng)用，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>(2)其中R,、R2、R4、R5、Rs分別獨(dú)立選自H和d，4烷基，且R3獨(dú)立選自H和OCm烷基，或R,和R2—起形成CR8R9，其中Rs和R9分別獨(dú)立選自H和Cw烷基，且R3R6如上述限定，或Rs和R6—起形成CR8R9，其中Rs和R9分別獨(dú)立選自H和Cw烷基，且R4R4如上述限定，和A是CH2且B是CO或B是CH2且A是CO，和R7是CHr芳基。14、如權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其中RpR2和R4R6選自曱基和H。15、如權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其中Rs和R9是H。16、如權(quán)利要求14~16中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中CH2-芳基是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中R^和R2如權(quán)利要求14所限定。17、如權(quán)利要求14~16中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中通式(1)和(2)的化合物選自9-(l',3'-苯并二氧雜環(huán)戊二烯-5'-基)-4,5,6,7-四曱氧基萘并[2,3-c]呋喃-l(3H)-酮(化合物3)、9-(r,3'-苯并二氧雜環(huán)戊二烯-5'-基)-4,6，7-三曱氧基萘并[2，3-c]呋喃-l(3H)-酉同(化合物4)、9-(3',4'-二甲氧基苯基)-4-羥基-6,7-亞甲二氧基萘并[2,3-c]吹喃-l(3H)-酮(化合物5)、3-(1',3'-苯并二氧雜環(huán)戊二烯-5'-基-亞曱基)-4-(3",4"-二曱氧基芐基)二氫呋喃-2(5H)-S同(化合物6)和4-(3'，4'-二甲氧基苯基)-9-甲氧基-？-亞曱二氧基萘并[2,3-c]呋喃-l(3H)-酮(化合物7)。18、一種用于男人或雄性動物體的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療或性欲提高的藥用組合物，所述組合物包括條牛兒苗科的至少一種植物品種的植物材料和植物材料萃取物中的至少一種的配制劑。19、如權(quán)利要求18所述的藥用組合物，其中所述植物選自M朋gw^/b/^、Ma/ex朋(irae腦'、M卩又稱Zuy7om」、M6wWm^rato、M6e一fe腦's、M卩又稱g7朋M/ato、6她c/z,m'ca」、Mcfepmsra、M(ieseWco/a、M(imie朋a、Mga/p/w/、Mg7amMas7'加'附a、Mg7m/ca、Mgrawt/z/o//a卩又稱丄awce0/0^)、M/2e/,o/rapz.oz.cfes1、M、M/gworato、M/7ze"'"en'、Mwawaeww.51、Mwafa/eww、、w/vea、MoZconic^a、ovafa〈X^爾e附arg7'wa/a)、sewega/e脂's卩又稱？n7oZa;to」、Mspec/as^丄、M—卩又稱/oZ)ato、、Ms/n'c^z、Mrawsvaa/eww^禾口Mww6e//ato;。20、如權(quán)利要求18或19所述的藥用組合物，其中所述萃取物選自有才幾萃取物和水萃取物。21、如權(quán)利要求20所述的藥用組合物，其中所述萃取物選自采用有才幾溶劑進(jìn)行植物材料萃取制備的有機(jī)萃取物，和用水進(jìn)行植物材料萃取制備的水萃取物，所述有機(jī)溶劑選自由乙醚、異丙醚、曱醇、乙醇、氯仿、二氯曱烷、乙酸乙酯、己烷和其中兩種或多種的適宜混合物或它們與水的混合物構(gòu)成的組中。22、如權(quán)利要求21所述的藥用組合物，其中所述萃取物是通過采用超臨界流體來萃取植物材料制備的有機(jī)萃取物。23、如權(quán)利要求22所述的藥用組合物，其中所述超臨界流體是超臨界二氧化碳。24、一種用于對男人或雄性動物受試者的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療或其性欲提高的藥用組合物，所述組合物包括至少一種選自通式(1)和(2)的化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(1)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(2)其中RpR2、R4、R5、R6分別獨(dú)立選自H和d4烷基，且R3獨(dú)立選自H和OCw烷基，或R!和R2—起形成CR8R9,其中Rg和R9分別獨(dú)立選自H和Cw烷基，且R3R6如上述限定，或R5和R6—起形成CR8R9，其中Rs和R9分別獨(dú)立選自H和d-4烷基，且RjR4如上述限定，和A是CH2且B是CO或B是CH2且A是CO，和R7是CH2-芳基。25、如權(quán)利要求24所述的組合物，其中R!、R2和R4R6選自曱基和H。26.<image>imageseeoriginaldocumentpage6</image>27、如權(quán)利要求25所述的組合物，其中Rs和R9是H。28、如權(quán)利要求2427中任一項(xiàng)所述的組合物，其中CH2-芳基是其中&和R2如權(quán)利要求24所做限定。29、如權(quán)利要求24~27中任一項(xiàng)所述的組合物，其中通式(1)和(2)的化合物選自9-(1'，3'-苯并二氧雜環(huán)戊二烯-5'-基)-4,5,6，7-四曱氧基萘并[2,3《]呋喃-1(3印-酮(化合物3)、9-(l'，3'-苯并二氧雜環(huán)戊二烯-5'-基)-4,6,7-三曱氧基萘并[2,3-c]呋喃-1(3H)-酮(化合物4)、9-(3',4'-二曱氧基苯基)-4-羥基-6,7-亞曱二氧基萘并[2，3-c]p夫喃-l(3H)-酮(化合物5)、3-(1',3'-苯并二氧雜環(huán)戊二烯-5'-基-亞曱基)-4-(3",4"-二曱氧基千基)二氫呋喃-2(5H)-酮(化合物6)、4-(3'，4'-二曱氧基苯基)-9-曱氧基0亞曱二氧基萘并P，3-c]呋喃-l(3H)-酉同(化合物7)。全文摘要一種用于男人或雄性動物受試者的勃起功能障礙的治療或預(yù)防性治療，或提高性欲的物質(zhì)或組合物的生產(chǎn)方法，所述方法包括從牻牛兒苗科的至少一種植物品種的植物材料和植物萃取物中的至少一種配制所述物質(zhì)或組合物的步驟。文檔編號A61K31/365GK101454001SQ200780019206公開日2009年6月10日申請日期2007年5月23日優(yōu)先權(quán)日2006年5月25日發(fā)明者埃里克·霍羅比,杰爾達(dá)·福凱,維內(nèi)什·扎伊安德·馬哈拉杰申請人:Csir