專利名稱：二價連接體及其軛合物的制作方法
相關(guān)申請的交叉參考
本申請要求2004年7月23日提交的美國臨時專利申請順序號60/590,580的35 U.S.C.§119(e)下的優(yōu)先權(quán)，其內(nèi)容通過引用整體結(jié)合到本文中。
發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明涉及二價連接體及其合成和用途。本發(fā)明尤其涉及在制備維生素、藥物、診斷試劑和/或顯像劑軛合物中二價連接體的合成和用途。
背景 藥物、維生素、診斷和顯像劑軛合物已用于治療、診斷和評價人和動物的各種疾病。在很多情況下，這些藥物、維生素、診斷和顯像劑軛合物包含插入連接體，這些連接體將例如靶向配體與藥物、診斷試劑或顯像劑分離。這些連接體包括各種二價片段，這些片段可用于分離或當(dāng)連接在一起包含在軛合物中時，例如將藥物、診斷試劑或顯像劑與軛合物的其它部分例如維生素或其它靶向配體分開。當(dāng)給予人或動物時，這些連接體也可對存在的代謝、生理或生物條件保持穩(wěn)定，或者這些連接體可在此類條件下經(jīng)歷各種解離和/或斷裂途徑。對通?？捎糜谒幬?、維生素、診斷和顯像劑軛合物的二價連接體有不斷的需求。
發(fā)明概述 例示性地，本發(fā)明包括二價連接體，這些連接體或者指可用于偶聯(lián)、連接、結(jié)合、連結(jié)或締合兩個或多個化學(xué)實體的二價連接體。該偶聯(lián)、連接、連結(jié)或締合可用于形成此類化學(xué)實體的軛合物。那些化學(xué)實體包括靶向配體和受體-結(jié)合配體，例如維生素。那些化學(xué)實體還包括治療各種疾病或疾病狀態(tài)的藥物，和用于診斷、檢測或監(jiān)測各種疾病或疾病狀態(tài)的顯像劑和診斷試劑。
在一個實施方案中，一個化學(xué)實體包含維生素受體-結(jié)合部分，另一個實體包含藥物、顯像劑、診斷試劑、另一種二價連接體或與藥物、顯像劑、診斷試劑軛合的另一種二價連接體。應(yīng)認識到，可在兩個或多個化學(xué)實體之間使用多種連接體以改變兩個實體之間的距離，和/或改變由其制備的軛合物的物理化學(xué)性質(zhì)。
在另一個實施方案中，所述化合物包含可被第一種親核體置換的第一離去基團、連接體區(qū)域和可被第二種親核體置換的第二離去基團，其中第一種親核體是維生素受體結(jié)合部分，連接體區(qū)域包含一個或多個二價連接體單元，它們可相同或不同，第二種親核體是藥物、顯像劑、診斷試劑或另一種二價連接體。
在另一個實施方案中，描述具有結(jié)構(gòu)(V)的化合物
其中n為1至約4的整數(shù)；Ra和Rb各自獨立選自氫和烷基，包括低級烷基例如任選為支鏈的C1-C4烷基；或Ra和Rb與所連接的碳原子結(jié)合在一起形成碳環(huán)；且X1和X2為各自獨立選擇的離去基團。在一個方面，獨立選擇的離去基團X1和X2各自可被親核體置換，該親核體為例如藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑或另一種二價連接體親核體等。
在另一個實施方案中，通過用親核體例如藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑或另一種二價連接體親核體等置換一個或多個離去基團X1和X2，由式(V)化合物形成軛合物。
在另一個實施方案中，描述具有結(jié)構(gòu)(VI)的化合物
其中m為1至約4的整數(shù)；且X1和X2為各自獨立選擇的離去基團。在一個方面，獨立選擇的離去基團X1和X2各自可被親核體置換，該親核體為例如藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑或另一種二價連接體親核體等。
在另一個實施方案中，通過用親核體例如藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑或另一種二價連接體親核體等置換一個或多個離去基團X1和X2，由式(VI)化合物形成軛合物。
在另一個實施方案中，描述具有結(jié)構(gòu)(VII)的化合物
其中m為1至約4的整數(shù)；且X1和X2為各自獨立選擇的離去基團。在一個方面，獨立選擇的離去基團X1和X2各自可被親核體置換，該親核體為例如藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑或另一種二價連接體親核體等。
在另一個實施方案中，通過用親核體例如藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑或另一種二價連接體親核體等置換一個或多個離去基團X1和X2，由式(VII)化合物形成軛合物。
在一個方面，軛合物具有以下結(jié)構(gòu)(VIII)之一
其中n為1至約4的整數(shù)；Ra和Rb各自獨立選自氫和烷基，包括低級烷基例如任選為支鏈的C1-C4烷基；或Ra和Rb與所連接的碳原子結(jié)合在一起形成碳環(huán)；X1和X2為各自獨立選擇的離去基團；且L1和L2各自為獨立選擇的二價連接體。
在另一個實施方案中，軛合物具有以下結(jié)構(gòu)(IX)之一
其中m為1至約4的整數(shù)；X1和X2為各自獨立選擇的離去基團；且L1和L2各自為獨立選擇的二價連接體。
在另一個實施方案中，軛合物具有以下結(jié)構(gòu)(X)之一
其中m為1至約4的整數(shù)；X1和X2為各自獨立選擇的離去基團；且L1和L2各自為獨立選擇的二價連接體。
附圖簡述

圖1a顯示實施例1中化合物5的質(zhì)譜； 圖1b顯示實施例1中化合物5的1H NMR圖譜； 圖2顯示實施例3中化合物10的1H NMR圖譜；和 圖3顯示實施例4中化合物12的1H NMR圖譜。
詳述 本文中描述了用于軛合物或用于制備軛合物的二價連接體。這些二價連接體可用于制備藥物軛合物、顯像劑軛合物和/或診斷試劑軛合物。藥物軛合物包括靶向藥物軛合物，例如美國專利申請公布號US-2005-0002942-A1中所述維生素受體-結(jié)合藥物軛合物，和美國專利申請公布號US-2001-0031252-A1和US-2003-0086900-A1中所述其它藥物軛合物。顯像劑軛合物和診斷試劑軛合物包括美國專利申請公布號US-2004-0033195-A1和國際專利申請公布號WO03/097647中所述那些。前述專利申請公布的公開內(nèi)容各自通過引用結(jié)合到本文中。
應(yīng)認識到，可用本文中所述二價連接體制備藥物類似物和衍生物的軛合物、維生素類似物和衍生物的軛合物、顯像劑類似物和衍生物的軛合物和診斷試劑類似物和衍生物的軛合物。另外，除非另外說明，應(yīng)理解術(shù)語藥物包括其類似物和衍生物；應(yīng)理解術(shù)語維生素包括其類似物和衍生物；應(yīng)理解術(shù)語顯像劑包括其類似物和衍生物；和應(yīng)理解術(shù)語診斷試劑包括其類似物和衍生物。
本文中所述二價連接體可用作改變藥物、維生素、顯像劑或診斷試劑與它軛合的部分之間整個長度的間隔基。另外，本文中所述二價連接體可用于改變其中包含它們的藥物、維生素、顯像劑或診斷試劑軛合物的物理化學(xué)性質(zhì)、溶解性和其它性質(zhì)。
例示性地，本文中所述二價連接體可包含在用于制備式(I)維生素受體結(jié)合藥物軛合物、維生素受體結(jié)合顯像劑軛合物和維生素受體結(jié)合診斷試劑軛合物的連接體中 V-L-D V-L-IA V-L-DA (I) 其中V為維生素受體-結(jié)合部分，包括其類似物或衍生物；L為連接體；D為藥物，包括其類似物或衍生物；IA為顯像劑，包括其類似物或衍生物；和DA為診斷試劑，包括其類似物或衍生物。連接體(L)可包含多種二價連接體，包括本文中所述二價連接體。
在一個實施方案中，本文中所述二價連接體是式(II)化合物
其中n為選自1至約4的整數(shù)；Ra和Rb各自獨立選自氫和烷基，包括低級烷基例如任選為支鏈的C1-C4烷基；或Ra和Rb與所連接的碳原子結(jié)合在一起形成碳環(huán)；R為任選取代的烷基、任選取代的?；蜻m當(dāng)選擇的氮保護基團；和(*)表示軛合物的藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑、其它二價連接體或其它部分的連接位點。
在另一個實施方案中，本文中所述二價連接體包括式(III)化合物
其中m為選自1至約4的整數(shù)；R為任選取代的烷基、任選取代的?；蜻m當(dāng)選擇的氮保護基團；和(*)表示軛合物的藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑、其它二價連接體或其它部分的連接位點。
在另一個實施方案中，本文中所述二價連接體包括式(IV)化合物
其中m為選自1至約4的整數(shù)；R為任選取代的烷基、任選取代的酰基或適當(dāng)選擇的氮保護基團；和(*)表示軛合物的藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑、其它二價連接體或其它部分的連接位點。
在另一個實施方案中，本文中所述二價連接體包括式(V)、(VI)和(VII)化合物
其中n和m各自獨立選自1至約4的整數(shù)；Ra和Rb各自獨立選自氫和烷基，包括低級烷基例如任選為支鏈的C1-C4烷基；或Ra和Rb與所連接的碳原子結(jié)合在一起形成碳環(huán)；且X1和X2為各自獨立選擇的離去基團，這些離去基團可被軛合物的藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑、另一種二價連接體或另外的部分親核置換。
例示性地，可由本文中所述二價連接體形成的維生素-藥物軛合物包括式(VIII)化合物
其中V、D和n同本文中所述；n為1至約4的整數(shù)；Ra和Rb各自獨立選自氫和烷基，包括低級烷基例如任選為支鏈的C1-C4烷基；或Ra和Rb與所連接的碳原子結(jié)合在一起形成碳環(huán)；且L1和L2各自為獨立選擇的用于制備軛合物的二價連接體。同樣可以理解，對應(yīng)于式(VIII)的維生素-顯像劑和維生素-診斷試劑軛合物也可由本文中所述二價連接體形成。
例示性地，可由本文中所述二價連接體形成的維生素-藥物軛合物包括式(IX)化合物
其中V、D和n同本文中所述；m為1至約4的整數(shù)；且L1和L2各自為獨立選擇的用于完成軛合物的二價連接體。同樣可以理解，對應(yīng)于式(IX)的維生素-顯像劑和維生素-診斷試劑軛合物也可由本文中所述二價連接體形成。
例示性地，可由本文中所述二價連接體形成的維生素-藥物軛合物包括式(X)化合物
其中V、D和n同本文中所述；m為1至約4的整數(shù)；且L1和L2各自為獨立選擇的用于完成軛合物的二價連接體。同樣可以理解，對應(yīng)于式(X)的維生素-顯像劑和維生素-診斷試劑軛合物也可由本文中所述二價連接體形成。
還應(yīng)理解，當(dāng)任一V、L2和/或D與本文中所述二價連接體例如式(VIII)、(IX)和/或(X)的二價連接體的羰基連接時，通過雜原子例如氧、硫、任選取代的氮等進行該連接。
在另一示例性實施方案中，本文中描述了用于制備藥物、維生素、顯像劑或診斷試劑軛合物的中間體。此類中間體可隨后與其它成分連接，形成維生素、顯像劑或診斷試劑軛合物。本文中所述中間體包括式XI化合物
其中V、D、L1、L2、X1和X2同本文中所述；且n為1至約4的整數(shù)。同樣可以理解，對應(yīng)于式(XI)的維生素-顯像劑和維生素-診斷試劑軛合物也可由本文中所述二價連接體形成。
例示性地，可由本文中所述二價連接體形成的維生素-藥物軛合物包括式(XII)化合物
其中V、D、L1、L2、X1和X2同本文中所述；且m為1至約4的整數(shù)。同樣可以理解，對應(yīng)于式(XII)的維生素-顯像劑和維生素-診斷試劑軛合物也可由本文中所述二價連接體形成。
例示性地，可由本文中所述二價連接體形成的維生素-藥物軛合物包括式(XIII)化合物
其中V、D、L1、L2、X1和X2同本文中所述；且m為1至約4的整數(shù)。同樣可以理解，對應(yīng)于式(XIII)的維生素-顯像劑和維生素-診斷試劑軛合物也可由本文中所述二價連接體形成。
還應(yīng)理解，當(dāng)任一V、L2和/或D與本文中所述二價連接體例如式(XI)、(XII)和(XIII)的二價連接體的羰基連接時，通過雜原子例如氧、硫、任選取代的氮等進行該連接。
在一個示例性實施方案中，離去基團X1為芳硫基。在一個方面，芳硫基為雜芳硫基，且包括但不限于任選取代的2-吡啶硫基、任選取代的4-吡啶硫基等。在另一個示例性方面，取代基包括吸電子取代基，例如氰基、硝基、烷基磺?；?、芳基磺?；Ⅺu素、鹵代烷基、?；捌溲苌铩Ⅳ然捌溲苌锏燃捌浣M合。
在另一個示例性實施方案中，離去基團X2為芳氧基。在一個方面，芳氧基為任選取代的苯基。在另一個示例性方面，芳氧基為任選取代的雜芳氧基，且包括但不限于任選取代的苯并三唑等。在另一個示例性方面，取代基包括吸電子取代基，例如氰基、硝基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、鹵素、鹵代烷基、?；捌溲苌?、羧基及其衍生物等及其組合。
示例性離去基團X1包括式(XIV)化合物
其中(*)表示本文中所述二價連接體的硫的連接位點。在一個方面，每個具有式(XIV)的離去基團X1可任選被一個或多個選自以下的取代基或另外的取代基取代鹵素、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、氰基、硝基等。其它示例性離去基團包括烷基和芳基磺?；x去基團，例如但不限于
其中R為烷基或芳基，它們各自可任選被例如鹵素、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、氰基、硝基等取代；且其中(*)表示本文中所述二價連接體的硫的連接位點。
示例性離去基團X2包括式(XV)化合物
其中(*)表示本文中所述二價連接體的羰基連接位點。在一個方面，每個具有式(XV)的離去基團X2可任選被一個或多個選自以下的取代基或另外的取代基取代鹵素、烷基、鹵代烷基、烷氧基、鹵代烷氧基、氰基、硝基等。
包含離去基團例如式XIII、XIV和XV中所示那些的二價連接體可按本文中所述實施例中所述的相應(yīng)合成方法制備。
在另一個示例性方面，本文中所述維生素受體結(jié)合藥物傳遞軛合物中間體包括具有下式的化合物或其保護的衍生物
其中Ra和Rb各自獨立選自氫和烷基，包括低級烷基例如任選為支鏈的C1-C4烷基；或Ra和Rb與所連接的碳原子結(jié)合在一起形成碳環(huán)；Y為氫或取代基，示例性地吸電子取代基包括但不限于硝基、氰基、鹵素、烷基磺?；?、羧酸衍生物等；ls為鍵或另一種二價連接體；其中V定義同本文。應(yīng)認識到，其它取代基例如長鏈和/或支鏈烷基、烷氧基、烷氧基烷基等可任選存在于這些藥物傳遞軛合物的半胱氨酸或高半胱氨酸部分上。可以理解，這些藥物傳遞軛合物的半胱氨酸部分可考慮環(huán)狀形式。在一個方面，Ra為氫，且Rb為烷基例如甲基。在另一個方面，Ra和Rb均為烷基，它們相同或不同，例如均為甲基。在另一個方面，Ra和Rb與所連接的碳結(jié)合在一起形成螺環(huán)丙基。
在本文中所述維生素受體結(jié)合藥物傳遞軛合物中間體的另一個示例性方面，該中間體包括具有下式的化合物或其保護的衍生物
其中V為維生素或其類似物或衍生物；AA為氨基酸，示例性地選自天然存在的氨基酸或其立體異構(gòu)體；Ra和Rb各自獨立選自氫和烷基，包括低級烷基，例如任選為支鏈的C1-C4烷基；或Ra和Rb與所連接的碳原子結(jié)合在一起形成碳環(huán)，Y為氫或取代基，示例性地吸電子取代基包括但不限于硝基、氰基、鹵素、烷基磺?；?、羧酸衍生物等，n和m為獨立選擇的整數(shù)，例如1、2或3，且p為整數(shù)，例如1、2、3、4或5。應(yīng)認識到，其它取代基例如長鏈和/或支鏈烷基、烷氧基、烷氧基烷基等可任選存在于這些藥物傳遞軛合物的半胱氨酸或高半胱氨酸部分上?？梢岳斫猓@些藥物傳遞軛合物的半胱氨酸部分可考慮環(huán)狀形式。AA也可以是任何其它氨基酸，例如具有以下通式的任何氨基酸 -N(R)-(CR′R″)q-C(O)- 其中R為氫、烷基、酰基或合適的氮保護基團，R′和R″為氫或取代基，每次出現(xiàn)時，它們各自獨立選擇，且q為整數(shù)，例如1、2、3、4或5。例示性地，R′和/或R″獨立對應(yīng)于但不限于存在于天然氨基酸中的氫或側(cè)鏈，例如甲基、芐基、羥甲基、硫甲基、羧基、羧甲基、胍基丙基等，及其衍生物和保護的衍生物。上述式包括所有的立體異構(gòu)體形式。例如，氨基酸可選自天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、賴氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、絲氨酸、鳥氨酸(ornitine)、蘇氨酸等。在本文中所述的維生素受體結(jié)合藥物傳遞軛合物中間體的另一個示例性方面，所述藥物或其類似物或衍生物包括烷基硫醇親核體。
可認識到，本文中所述二價連接體在某些化學(xué)、環(huán)境或生理條件下可進行解離。尤其是，本文中所述二價連接體在生理條件下，例如通過谷胱甘肽介導(dǎo)的機制作用可進行解離。在此類實施方案中，那些連接體又可稱為能釋放的連接體。
本文中所述二價連接體的示例性解離機制包括以下1，4和1，6斷裂機制
其中X為外源性或內(nèi)源性親核體、谷胱甘肽或生物還原劑等，且Z或Z′中任一個為維生素或其類似物或衍生物，或藥物或其類似物或衍生物，或與二價連接體的其它部分連接的維生素或藥物部分?？梢岳斫?，盡管以上斷裂機制描述為協(xié)同機制，但可能發(fā)生任何數(shù)目的不連續(xù)步驟，以實現(xiàn)二價連接體最終斷裂為所示終產(chǎn)物。例如可以認識到，通過氨基甲酸酯部分的酸催化消除反應(yīng)，也可發(fā)生鍵裂，它可通過由以上實例中舉例說明的β硫芳基或二硫化物提供的穩(wěn)定作用，得到鄰位協(xié)助。在該實施方案中的那些變化形式中，能釋放的連接體為氨基甲酸酯部分。或者，可通過對二硫化物基團進行親核攻擊引發(fā)斷裂，導(dǎo)致解離形成硫醇鹽。該硫醇鹽可在分子間置換碳酸或氨基甲酸部分，并形成相應(yīng)的硫雜環(huán)丙烷。在含芐基的二價連接體的情況，示例性二硫鍵斷裂后，得到的苯基硫醇鹽可通過形成共振穩(wěn)定的中間體，進一步斷裂釋放碳酸或氨基甲酸部分。在任一此類情況下，可通過可能與存在的化學(xué)、代謝、生理或生物條件有關(guān)的任何機制，實現(xiàn)本文中所述示例性二價連接體的能釋放性質(zhì)。
通用二硫化物的形成 如流程1中所示，通常可通過使烷基或芳基磺?；蛲榛苌?，或相應(yīng)的雜芳基二硫烷基衍生物例如吡啶-2-基二硫烷基衍生物等與亞烷基硫醇(alkylenethiol)衍生物反應(yīng)，形成二硫化物基團。
流程1
可用于該反應(yīng)的溶劑包括THF、EtOAc、CH2Cl2、CHCl3、CCl4、DMF、DMSO等。該轉(zhuǎn)化可采用的溫度在0℃-80℃之間變化。可用本領(lǐng)域公認的方案，也可按照Ranasinghe and Fuchs，Synth.Commun.18(3)，227-32(1988)中的方法，其公開內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中，制備需要的烷基或芳基磺酰基硫烷基衍生物。其它制備不對稱二烷基二硫化物的方法基于不對稱雜芳基-烷基二硫化物，例如2-硫基吡啶基、3-硝基-2-硫基吡啶基及類似的二硫化物與烷基硫醇的轉(zhuǎn)硫醇作用，如WO 88/01622、歐洲專利申請?zhí)?116208A1和美國專利號4,691,024中所述，它們的公開內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
通用碳酸酯硫代碳酸酯和氨基甲酸酯的形成 通?？砂戳鞒?中所示，通過使羥基-取代的化合物、硫基-取代的化合物或胺-取代的化合物分別與其中X為合適離去基團的活化烷氧基羰基衍生物反應(yīng)，形成碳酸酯、硫代碳酸酯和氨基甲酸酯。
流程2
其中Q為氧、硫、任選取代的氮、任選保護的氮等?？捎糜谠摲磻?yīng)的溶劑包括THF、EtOAc、CH2Cl2、CHCl3、CCl4、DMF、DMSO等。該轉(zhuǎn)化采用的溫度可在0℃-80℃之間變化。可使用任何堿性催化劑例如無機堿、胺堿、聚合物結(jié)合的堿等促進該反應(yīng)。
實施例 實施例16-三氟甲基-1-[2-(2-吡啶基聯(lián)硫基)乙氧基羰基氧基]苯并三唑 按流程3制備實施例1。
流程3
(a)4-二甲基氨基吡啶(DMAP)，CH2Cl2；(b)Et2O；(c)CH3CH. 步驟(a)將4-(二甲基氨基)吡啶(3.0g；24.68mmol；1.03當(dāng)量)的10mL無水甲醇溶液加入2-(2-吡啶基聯(lián)硫基)乙醇鹽酸鹽(化合物(1a)；C7H9NS2O·HCl；5.4g；24mmol)的10ml無水甲醇懸浮液中，將混合物攪拌，形成澄清溶液。幾分鐘內(nèi)，溶液變混濁，形成微粒懸浮液，使該懸浮液經(jīng)閃層析(FC)純化。用140g硅膠60和5％甲醇/CH2Cl2形成貯藏500ml溶劑的24cm×4.3cm硅膠床，進行FC。用20mLCH2Cl2將所述懸浮液上柱，柱用5％甲醇/CH2Cl2洗脫，按30mL組分進行標(biāo)準(zhǔn)收集，加上UV-檢測?？赏ㄟ^TLC(1∶1的己烷∶EtOAc)，自組分2-9中測得產(chǎn)物化合物(1b)。
步驟(b)將1-羥基-6-(三氟甲基)苯并三唑(化合物(2)；C7H4F3N3O；2.3g；0.11mol；Aldrich)溶于770mL乙醚，將上清夜傾入2L RB燒瓶中。在室溫下，在15分鐘內(nèi)，將氯甲酸三氯甲酯(化合物(3)；C2Cl4O2；107g；0.053mol；6.0mL)加入該澄清無色溶液中。將混合物溫和加熱至40-50℃，保持1小時，冷卻至室溫。將溶液過濾，將沉淀用乙醚(10×30mL)洗滌。沉淀為白色粉末，真空干燥，得到16.95g(74％收率)。其它合成細節(jié)見Ogura等在Synthesis，1987，557-560中描述，其公開內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
步驟(c)在室溫下，攪拌下將化合物(1b)(約7.5mmol)的10mL乙腈溶液在2分鐘內(nèi)加入化合物4(3.46g；8mmol)的300ml乙腈澄清溶液中。然后將混合物在室溫下攪拌24小時。24小時后，用TLC分析混合物。將混合物再攪拌14小時，至攪拌總計38小時。將混合物濃縮，用50mL 1N當(dāng)量NaHCO3和100mL乙酸乙酯洗滌。將有機層分離，再用1N當(dāng)量NaHCO3(1×10mL)洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾，得到白色固體粉末，真空干燥5小時，得到2.54g。
實施例2 按流程4制備實施例2。
流程4
(a)吡啶，CH2Cl2 將2-(2-吡啶基聯(lián)硫基)乙醇鹽酸鹽(化合物(1b)；8.8g；39.33mL)溶于78mL CH2Cl2中，且加入2當(dāng)量吡啶(C5H5N；80.88mL)。將氯甲酸對硝基苯酯(化合物(6)；8.08g；40mmol)溶于80mL CH2Cl2，在15分鐘內(nèi)，將該溶液加入2-(2-吡啶基聯(lián)硫基)乙醇鹽酸鹽和吡啶的混合物中。將得到的澄清溶液在室溫下攪拌15小時。經(jīng)15小時攪拌后，用TLC分析以上混合物，表明反應(yīng)完全。然后將混合物過濾，除去鹽酸吡啶沉淀。將淺黃色澄清濾液用去離子水(2×50mL)洗滌，除去溶解的鹽酸吡啶，干燥(Na2SO4)，過濾，真空濃縮(13.8g)。用硅膠60(250g)的CH2Cl2漿形成儲藏250mL溶劑的50cm×4.2cm硅膠床。將約13.8g產(chǎn)物化合物(7)溶于15mL(10mL+5mL)CH2Cl2，將該溶液上柱，按30mL/min速率洗脫，按30mL組分的標(biāo)準(zhǔn)收集，加上UV-檢測，得到13.3g(96％收率)。
實施例3 按流程5制備實施例3。
流程5
(a)無水CH2Cl2 將3-硝基-2-吡啶硫基氯(化合物(8))溶于15mL無水CH2Cl2。將溶液用冰浴冷卻。將4-乙?；搅蚍?化合物(9))溶于10mL CH2Cl2，并加入滴液漏斗中，該漏斗連接在含3-硝基-2-吡啶硫基氯溶液的容器。在2-5分鐘內(nèi)，加入4-乙?；搅蚍尤芤?。4-乙?；搅蚍尤芤杭尤牒?，將混合物升溫至室溫，然后攪拌2小時。在加入4-乙?；搅蚍訒r，形成沉淀。在室溫下攪拌2小時后，將混合物超聲5分鐘，使沉淀溶解。TLC分析表明除3-硝基-2-吡啶硫基氯和4-乙?；搅蚍油?，還有新的斑點形成。將反應(yīng)混合物用飽和NaHCO3洗滌。向有機層中補加另外的100mL Ch2Cl2。將產(chǎn)物真空干燥3小時。
實施例4 按流程6制備實施例4。
流程6
攪拌下，將化合物(10)(0.025g；0.085mmol)溶于無水CH2Cl2。攪拌下，將氯甲酸(cholorofomate)對硝基苯酯(化合物(11)；0.020g；1.2當(dāng)量)和1當(dāng)量三乙胺(TEA)一起加入溶液中。2小時后，TLC分析表明化合物(10)耗竭。將產(chǎn)物化合物(12)通過柱層析(7∶3的己烷∶EtOAc)分離。
實施例5 制備含半胱氨酸二硫鍵化合物的通用方法 如流程7所示，使按Ranasinghe and Fuchs，Synth.Commun.18(3)，227-32(1988)(其公開內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中)的方法制備的任一硫代磺酸酯(13)(1當(dāng)量)與藥物、藥物類似物或藥物衍生物(14)(1當(dāng)量)反應(yīng)，制備藥物硫代磺酸酯(15)的甲醇溶液。
流程7
參考流程7，R為烷基或芳基，L為合適的離去基團，例如鹵素、五氟苯基等，n為1至約4的整數(shù)，且X為-O-、-NH-、-C(O)O-或-C(O)NH-?？赏ㄟ^TLC(硅膠；CHCl3/MeOH＝9/1)觀察每種原料的消失情況，可方便地監(jiān)控轉(zhuǎn)化。最終收率為83％(從38.9mg總產(chǎn)量中取出產(chǎn)物的質(zhì)量為32mg)。
如流程8所示，通過聚合物-載體的順序方法，用Fmoc-策略，在對酸敏感的Fmoc-Cys(Trt)-Wang樹脂(16)上制備含葉酸(folate)的肽基片段Pte-Glu-(AA)n-Cys-OH(18)。
流程8
(a)20％哌啶/DMF；(b)Fmoc-AA-OH，PyBop，DIPEA，DMF；(c)Fmoc-Glu(O-t-Bu)-OH，PyBop，DIPEA，DMF；(d)1.N10(TFA)-Pte-OH；PyBop，DIPEA，DMSO；(e)TFAA，(CH2SH)2，i-Pr3SiH；(f)NH4OH，pH10.3. 參考流程8，R1為Fmoc，R2為三苯甲基，DIPEA為二異丙基乙胺。為確保有效偶聯(lián)，用PyBop作活化試劑。在標(biāo)準(zhǔn)條件下，在每個偶聯(lián)步驟后，將Fmoc保護基團除去。按流程8中所述，使用適當(dāng)保護的氨基酸構(gòu)件例如Fmoc-Glu-OtBu、N10-TFA-Pte-OH等，并在步驟(b)中由Fmoc-AA-OH代表。因此，AA是指適當(dāng)保護的任何氨基酸原料。
將涉及Fmoc-AA-OH的偶聯(lián)順序(步驟(a)和(b))進行″n″次，以便制備固體承載的肽(17)，其中n為整數(shù)，且可等于0至約100。在最后偶聯(lián)步驟后，將剩余的Fmoc基團除去，并將肽順序偶聯(lián)至谷氨酸酯衍生物(步驟(c))，脫保護，并偶聯(lián)至TFA-保護的蝶酸(步驟(d))。然后用三氟乙酸、乙二硫醇和三異丙基硅烷處理，使肽從聚合物載體解離(步驟(e))。這些反應(yīng)條件導(dǎo)致同時除去t-Bu、t-Boc和Trt保護基團。用堿處理后，將TFA保護基團除去(步驟(f))，得到含葉酸的含Cys的肽基片段(18)。
在氬氣下，通過使葉酸衍生物(18)(0.9-0.95當(dāng)量)與藥物硫代磺酸酯(15)的去離子水溶液(0.04M，用0.1N NaHCO3將pH調(diào)至7)反應(yīng)約30分鐘，形成二硫鍵，來制備藥物軛合物。將甲醇真空蒸發(fā)后，可通過制備HPLC(Prep Novapak HR C18 19×300mM柱；流動相(A)-1.0mM磷酸鹽緩沖液，pH＝6；有機相(B)-乙腈；條件-99％A和1％B至50％A和50％B的梯度，洗脫30分鐘，流速＝15mL/分鐘)，來純化軛合物。
實施例6a-6f 按照以下通用方法制備實施例6a-6f。在氬氣下，充分攪拌下，向相應(yīng)的具有-OH的藥物溶液(1當(dāng)量的無水CH2Cl2或無水THF溶液)中加入碳酸6-(三氟甲基)苯并三唑基2-(2′-吡啶基聯(lián)硫基乙基酯(1.3當(dāng)量)和N，N-二甲基氨基吡啶(1.5當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物攪拌3h，并使該吡啶基聯(lián)硫基-衍生化藥物經(jīng)硅膠層析分離(每個實施例＞65％)。將按照本文中所述方法和或者通過常規(guī)方法，例如在美國專利申請公布號US-2005-0002942-A1中所述那些方法制備的相應(yīng)肽基片段(0.5當(dāng)量)溶于DMSO。向得到的澄清黃色溶液中加入吡啶基-聯(lián)硫基衍生化藥物。30min后反應(yīng)完成，軛合物經(jīng)HPLC純化。在實施例6e的情況，先將肽基片段Pte-Glu-Asp-Arg-Asp-Asp-Cys-OH溶于水，用0.1 N HCl將溶液的pH調(diào)至2.5，使肽基片段沉淀。將肽基片段離心收集，干燥，并溶于DMSO用于隨后與吡啶基聯(lián)硫基-衍生化藥物反應(yīng)。
實施例6a
1H NMR(DMSO-d6)δ4.7(d，1H)，4.95(t，1H)，6.7(d，4H)，6.9(t，1H)，7.95(d，2H)，8.1(d，2H)，8.2(m，1H)，8.3(s，1H)，8.4(s，1H)，8.7(s，1H)，10.2(s，1H)，11.8(d，2H). 實施例6b
ES MS(m-H)-1436.4，(m+H)+1438.3. 實施例6c
1H NMR(DMSO-d6/D2O)δ1.0(s，1H)，1.1(s，1H)，1.6(s，1H)，1.8(s，1H)，2.1(s，1H)，2.25(s，3H)，2.65(dd，2H)，3.7(d，1H)，4.4(t，1H)，4.55(q，2H)，4.6(d，2H)，4.95(d，1H)，5.9(t，1H)，6.15(s，1H)，6.6(d，2H)，7.85(d，2H)，7.95(d，2H)，8.6(s，1H)，8.95(d，1H). 實施例6d
1H NMR(DMSO-d6/D2O)δ1.0(s，1H)，1.1(s，1H)，1.65(s，1H)，2.1(s，1H)，2.25(s，3H)，2.6(dd，2H)，3.25(dd，1H)，3.6(t，2H)，3.7(d，1H)，4.4(t，1H)，4.6(d，1H)，4.95(d，1H)，5.9(t，1H)，6.2(s，1H)，6.6(d，2H)，7.7(t，1H)，7.9(d，2H)，7.95(d，2H)，8.6(s，1H)，9.1(d，2H). 實施例6e
1H NMR(DMSO-d6/D2O)δ10.85(d，2H)，1.05(d，2H)，1.2(d，2H)，1.7(d，2H)，3.95(d，1H)，4.05(dd，1H)，5.4(dd，1H)，5.7(dd，1H)，6.65(d，2H)，7.6(d，2H)，7.95(s，1H)，8.65(s，1H). 實施例6f
ES MS(m+H)+1487.23；1H NMR(DMSO-d6/D2O)δ0.9(t，2H)，1.3(t，2H)，2.15(t，2H)，3.2(dd，1H)，4.0(t，1H)，4.15(q，1H)，5.3(s，2H)，5.5(s，2H)，6.6(d，2H)，7.0(s，1H)，7.4(m，2H)，7.55(d，2H)，8.0(d，2H)，8.6(s，1H). 實施例7
按照P.Senter等，J.Org.Chem.1990，55，2875所述方法(其公開內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中)，制備SN 38(10-羥基-7-乙基喜樹堿)的中間體碳酸4-(2-吡啶基聯(lián)硫基)芐酯。將按本文中所述制備的肽基片段Pte-Glu-Asp-Arg-Asp-Cys-OH溶于DMSO，并向得到的澄清黃色溶液中加入吡啶基-聯(lián)硫基衍生化藥物。30min后反應(yīng)完成，軛合物經(jīng)HPLC純化； ES MS(m+H)+1425.38；1HNMR(DMSO-d6/D2O)δ0.9(t)，1.15(t)，3.9(t)，4.0(t)，4.25(t)，5.1(m)，5.2(s)，5.4(s)，6.55(d)，7.25(d)，7.35(d)，7.5(d)，7.9(d)，8.55(s). 實施例8
由按照本文中所述方法和或者通過常規(guī)方法，例如在美國專利申請公布號US-2005-0002942-A1中所述那些方法制備的肽基片段Pte-Glu-Asp-Arg-Asp-Asp-Cys-OH，制備實施例8化合物。也可使肽基片段與硫代磺酸酯或吡啶基聯(lián)硫基-活化的長春堿反應(yīng)，形成實施例8化合物。用本文中所述方法制備其它實施例的吡啶基聯(lián)硫基-活化的長春堿中間體。
實施例9-13 按照本文中一般描述的方法，制備實施例9-13化合物，并通過電噴霧質(zhì)譜(ES MS)，和包括1D和2D NMR以及UV在內(nèi)的其它光譜技術(shù)進行表征，本文中描述了其說明性結(jié)果。
實施例9
UV(nm)233(max)，255，280；1H NMR(D2O，NaOD，CD3CN)δ1.15(d，3H)，2.3(s，3H)，3.6(s，1H)，3.85(s，3H)，4.9(s，1H)，5.3(s，1H)，6.5(d，2H)，7.3(m，1H)，7.5(d，2H)，7.65(d，2H)，8.4(s，1H). 實施例10
ES MS(m+H)+1382.3，(m+Na)+1405.4. 實施例11
實施例12
實施例13
前述示例性實施方案將用于舉例說明本發(fā)明，不應(yīng)以任何方式解釋和視為限定本文中所述的本發(fā)明。例如，通常由以下示例性維生素-藥物軛合物代表的化合物將包括在本文中所述的本發(fā)明中。

其中R1和R2各自獨立為氫或烷基，例如甲基；且lH為雜原子，例如氧、硫、任選取代的氮或任選保護的氮等。
權(quán)利要求
1.一種下式化合物
其中
n為1至約4的整數(shù)；
Ra和Rb各自獨立選自氫和烷基，包括低級烷基例如任選為支鏈的C1-C4烷基；或Ra和Rb與所連接的碳原子結(jié)合在一起形成碳環(huán)；且
X1和X2為各自獨立選擇的離去基團，其中所述離去基團各自可被獨立選擇的親核體置換。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中所述親核體是藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑或另一種二價連接體。
3.一種下式化合物
其中
m為1至約4的整數(shù)；且
X1和X2為各自獨立選擇的離去基團，其中所述離去基團各自可被獨立選擇的親核體置換。
4.權(quán)利要求4的化合物，其中所述親核體是藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑或另一種二價連接體。
5.一種下式化合物
其中
m為1至約4的整數(shù)；且
X1和X2為各自獨立選擇的離去基團，其中所述離去基團各自可被獨立選擇的親核體置換。
6.權(quán)利要求5的化合物，其中所述親核體是藥物、維生素、顯像劑、診斷試劑或另一種二價連接體。
全文摘要
描述了包括在或用于制備維生素、藥物、診斷試劑和/或顯像劑的二價連接體，該連接體衍生自式(V)、(VI)和(VII)化合物，其中X1和X2為離去基團，其它變量的定義同權(quán)利要求書。
文檔編號A61K47/48GK101098854SQ200580031404
公開日2008年1月2日 申請日期2005年7月22日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月23日
發(fā)明者I·R·弗拉霍夫, C·P·利蒙, A·薩泰亞姆, S·J·霍沃德 申請人:恩多塞特公司