專利名稱：新的羥基吲哚、其作為磷酸二酯酶4抑制劑的應(yīng)用及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及通式1的取代的羥基吲哚， 它們制備方法，含有這些化合物的藥物制劑，以及這些磷酸二酯酶4抑制劑化合物作為活性化合物在治療疾病中的藥物應(yīng)用，通過本發(fā)明化合物對磷酸二酯酶4在免疫活性細(xì)胞(例如巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞)中的活性的抑制作用可以對所述疾病產(chǎn)生影響。
背景技術(shù)：
通過遞質(zhì)使細(xì)胞膜受體活化導(dǎo)致“第二信使”系統(tǒng)活化。腺苷酸環(huán)化酶由AMP和GMP合成活性環(huán)AMP(cAMP)或環(huán)GMP(cGMP)。這就導(dǎo)致例如平滑肌細(xì)胞松弛或介體釋放的抑制或炎性細(xì)胞的合成。磷酸二酯酶(PDE)使“第二信使”cAMP和cGMP破壞。迄今已知有7類PDE酶(PDE1-7)，它們不同于其底物的特異性(cAMP，cGMP或兩者均包括)并依賴于其他底物(例如鈣調(diào)蛋白)。這些同工酶在體內(nèi)具有不同的功能，并且在各種類型的細(xì)胞中具有不同程度的顯著性(Beave JA，Conti M和Heaslip RJ，多環(huán)核苷酸磷酸二酯酶，Mol.Pharmacol.1994，46399-405；Hall IP，同工酶選擇性磷酸二酯酶抑制劑；可能的臨床應(yīng)用，Br.J.clin.Pharmacol.1993，351-7)。各種類型PDE同工酶抑制的結(jié)果是導(dǎo)致可以起治療作用的cAMP或cGMP在細(xì)胞中累積(Torphy TJ，Livi GP，Christensen SB，用于治療氣喘的新的磷酸二酯酶抑制劑，Drug News and Perspectives 1993，6203-214)。
在對變應(yīng)性炎癥重要的細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、巨噬細(xì)胞)中，占優(yōu)勢的PDE同工酶是4型的(Torphy，J T.和Undem，B.J.，磷酸二酯酶抑制劑治療氣喘的新機(jī)遇，Thorax 1991，46512-523)。因此，合適的抑制劑對PDE 4的抑制作用是治療許多變應(yīng)性誘導(dǎo)疾病的重要起點(diǎn)(Schudt Ch，Dent G，Rabe K，磷酸二酯酶抑制劑，Academic Press London 1996)。
磷酸二酯酶4抑制劑的重要性質(zhì)是抑制由炎性細(xì)胞釋放腫瘤壞死因子α(TNFα)。TNFα是重要的原炎性細(xì)胞因子，該細(xì)胞因子影響很多生物過程。TNFα是例如從活化的巨噬細(xì)胞、活化的T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和腦中的星形細(xì)胞中釋放的。它對于中性白細(xì)胞、嗜曙紅細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞具有自活化作用，結(jié)果是各種組織破壞介質(zhì)被釋放出來。在單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞中，TNFα使原炎性細(xì)胞因子例如GM-CSF(粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子)或白介素-8的產(chǎn)生增加。由于其炎性促進(jìn)和分解代謝作用，TNFα在許多疾病例如呼吸系統(tǒng)炎癥、關(guān)節(jié)炎、內(nèi)毒素休克、組織排斥、AIDS和各種其他免疫疾病中起關(guān)鍵作用。因此，磷酸二酯酶4的抑制劑也適用于治療與TNFα有關(guān)的該類疾病。
慢性阻塞性肺病(COPD)在人群中非常普遍并且具有重大的經(jīng)濟(jì)重要性。在發(fā)展中國家COPD疾病造成占所有疾病大約1O-15％的花費(fèi)，并且在美國該原因占所有死亡病例的約25％(Norman P.COPD新的發(fā)展和治療機(jī)遇，Drug News Perspect.11(7)，431-437，1998)，但是這些患者死亡時通常超過55歲(Nolte D.ChronischeBronchitis-eine Volkskrankheit multifaktorieller Genese.Atemw.-Lungenkrkh.[慢性支氣管炎-普遍的多因子起因疾病]。20(5)，260-267，1994)。WHO估計在未來20年中COPD將是引起死亡的第三位原因。
慢性阻塞性肺病(COPD)綜合征包括了慢性支氣管炎的各種征群，包括咳嗽和咳痰以及漸近性和不可逆的肺功能損傷癥狀(呼出氣體尤其受到影響)。該疾病的過程是偶發(fā)性的并且經(jīng)常伴有細(xì)菌感染(Rennard S.I.COPD定義的綜述，流行病學(xué)，以及影響其發(fā)展的因素。Chest，113(4)Suppl.，235S-241S，1998)。在疾病的進(jìn)程中，肺功能不斷下降、肺氣腫不斷增加并且患者的呼吸明顯困難。該疾病對患者的生活質(zhì)量造成明顯的負(fù)面影響(呼吸困難、低運(yùn)動耐受性)并且大大減少他們的生命預(yù)期。除了環(huán)境因素之外，主要的危險因素是吸煙(Kummer F.氣喘和COPD。Atemw.-Lungenkrkh 20(5)，299-302，1994；Rennard S.I.COPD定義的綜述，流行病學(xué)，以及影響其發(fā)展的因素。Chest，113(4)Suppl.，235S-241S，1998)，因此男性比女性顯然更經(jīng)常受到影響。無論如何，隨著生活習(xí)慣的改變以及吸煙者人數(shù)的增加，這種狀況在未來將會改變.
目前的治療僅僅有助于緩解癥狀、而不能干預(yù)疾病的進(jìn)程。使用可以與蕈毒堿能(muscarinergic)拮抗劑(例如異丙托溴銨(ipratropium))結(jié)合的長效β2興奮劑(例如沙美特羅)可以通過支氣管擴(kuò)張改善肺功能，并且這是常規(guī)使用的(Norman P.COPD新的發(fā)展與治療機(jī)遇，Drugs News Perspect.11(7)，431-437，1998)。COPD偶發(fā)的主要原因是細(xì)菌感染，這就必需用抗菌素治療(Wilson R.在COPD中感染的作用，Chest，113(4)Suppl.，242S-248S，1998；Grossman R.F.在COPD加重情況下抗菌素的價值和抗菌素治療的結(jié)果。Chest，113(4)Suppl.，249S-255S，1998)。迄今為止，該疾病的治療尚不能令人滿意，對于持續(xù)減少肺部感染尤其如此。影響炎性介質(zhì)、蛋白酶或粘連分子的新的治療途徑將是非常有前途的(Barnes P.J.慢性阻塞性疾病藥物開發(fā)的新機(jī)遇，TiPS 10(19)，415-423，1998)。
在支氣管中發(fā)現(xiàn)了與該疾病并發(fā)的獨(dú)立的細(xì)菌感染，嗜中性的粒細(xì)胞起主導(dǎo)作用的慢性炎癥。已經(jīng)推定，特別是由嗜中性的粒細(xì)胞釋放的介質(zhì)和酶對呼吸系統(tǒng)中觀察到的結(jié)構(gòu)變化(肺氣腫)負(fù)有責(zé)任。因此，抑制嗜中性的粒細(xì)胞的活性是預(yù)防或減緩COPD(肺功能參數(shù)損傷)進(jìn)程的合理途徑。粒細(xì)胞活化的重要刺激物是原炎性細(xì)胞因子TNFα(腫瘤壞死因子)。因此，已知TNFα通過嗜中性的粒細(xì)胞刺激氧自由基的形成(Jersmann，H.P.A.；Rathjen，D.A.和Ferrante A.LPS-誘導(dǎo)的由TNFα產(chǎn)生嗜中性氧自由基的增強(qiáng)，感染與免疫，4，1744-1747，1998)。PDE4抑制劑可以非常有效地抑制TNFα從許多細(xì)胞中釋放，因而抑制嗜中性的粒細(xì)胞的活性。非特異性PDE抑制劑己酮可可堿既能抑制氧自由基的形成，也能抑制嗜中性的粒細(xì)胞的吞噬能力(Wenisch，C.；Zedtwitz-Liebenstein，K.；Parschalk，B.和Graninger W.通過流動血細(xì)胞計數(shù)評價己酮可可堿在體外對嗜中性活性氧產(chǎn)生和噬吞細(xì)胞能力的影響，Clin.Drug.Invest.，13(2)99-104，1997)。
各種PDE 4抑制劑是已知的。從先后順序看，這些抑制劑是黃嘌呤衍生物、咯利普蘭類似物或硝喹宗衍生物(全面調(diào)查Karlsson J-A，Aldos D，用于治療氣喘的磷酸二酯酶4抑制劑，Exp.Opin.Ther.Patents 1997，7989-1003)。到目前為止，還沒有將這些化合物中的任何一種應(yīng)用于臨床。還必須確定已知的PDE 4抑制劑還具有目前尚無法適當(dāng)抑制的各種副作用例如惡心和嘔吐。因此需要開發(fā)具有較好治療范圍的新的PDE 4抑制劑。
盡管多年來在用于各種適應(yīng)癥的新的活化化合物的開發(fā)中吲哚是非常重要的部分，但是迄今為止，作為PDE 4抑制劑的羥基吲哚是完全未知的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及通式1的取代的羥基吲哚 其中R1、R5是-直鏈或支鏈C1…12-烷基，該基團(tuán)任選地被下列基團(tuán)單取代或多取代-OH，-SH，-NH2，-NHC1…6-烷基，-N(C1…6-烷基)2，-NHC6…14芳基，-N(C6…14芳基)2，-N(C1…6烷基)(C6…14芳基)，-NHCOR6，-NO2，-CN，-F，-Cl，-Br，-I，-O-C1…6-烷基，-O-C6…14-芳基，-O(CO)R6，-S-C1…6-烷基，-S-C6…14芳基，-SOR6，-SO3H，-SO2R6，-OSO2C1…6烷基，-OSO2C6…14芳基，-(CS)R6；-COOH，-(CO)R6，具有3…14個環(huán)原子的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和碳環(huán)，具有5…15個環(huán)原子和1…6個雜原子、優(yōu)選N、O和S的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和雜環(huán)，其中C6…14-芳基以及作為其一部分所包括的碳環(huán)和雜環(huán)取代基可以任選地被R4一-或多取代，-一-或多不飽和的、直鏈或支鏈C2…12-鏈烯基，該基團(tuán)任選地被下列基團(tuán)單取代或多取代-OH，-SH，-NH2，-NHC1…6-烷基，-N(C1…6-烷基)2，-NHC6…14芳基，-N(C6…14芳基)2，-N(C1…6烷基)(C6…14芳基)，-NHCOR6，-NO2，-CN，-F，-C1，-Br，-I，-O-C1…6-烷基，-O-C6…14-芳基，-O(CO)R6，-S-C1…6-烷基，-S-C6…14芳基，-SOR6，-SO3H，-SO2R6，-OSO2C1…6烷基，-OSO2C6…14芳基，-(CS)R6；-COOH，-(CO)R6，具有3…14個環(huán)原子的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和碳環(huán)，具有5…15個環(huán)原子和1…6個雜原子、優(yōu)選N、O和S的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和雜環(huán)，其中C6…14-芳基以及作為其一部分所包括的碳環(huán)和雜環(huán)取代基可以任選地被R4一-或多取代，-具有3…14個環(huán)原子的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和碳環(huán)，該基團(tuán)任選地被下列基團(tuán)單取代或多取代-OH，-SH，-NH2，-NHC1…6-烷基，-N(C1…6-烷基)2，-NHC6…14芳基，-N(C6…14芳基)2，-N(C1…6烷基)(C6…14芳基)，-NHCOR6，-NO2，-CN，-F，-Cl，-Br，-I，-O-C1…6-烷基，-O-C6…14-芳基，-O(CO)R6，-S-C1…6-烷基，-S-C6…14芳基，-SOR6，-SO3H，-SO2R6，-OSO2C1…6烷基，-OSO2C6…14芳基，-(CS)R6；-COOH，-(CO)R6，具有3…14個環(huán)原子的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和碳環(huán)，具有5…15個環(huán)原子和1…6個雜原子、優(yōu)選N、O和S的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和雜環(huán)，其中C6…14-芳基以及作為其一部分所包括的碳環(huán)和雜環(huán)取代基可以任選地被R4一-或多取代，-具有5…15個環(huán)原子和1…6個雜原子、優(yōu)選N、O和S的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和雜環(huán)，該基團(tuán)任選地被下列基團(tuán)單取代或多取代-OH，-SH，-NH2，-NHC1…6-烷基，-N(C1…6-烷基)2，-NHC6…14芳基，-N(C6…14芳基)2，-N(C1…6烷基)(C6…14芳基)，-NHCOR6，-NO2，-CN，-F，-Cl，-Br，-I，-O-C1…6-烷基，-O-C6…14-芳基，-O(CO)R6，-S-C1…6-烷基，-S-C6…14芳基，-SOR6，-SO3H，-SO2R6，-OSO2C1…6烷基，-OSO2C6…14芳基，-(CS)R6；-COOH，-(CO)R6，具有3…14個環(huán)原子的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和碳環(huán)，具有5…15個環(huán)原子和1…6個雜原子、優(yōu)選N、O和S的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和雜環(huán)，其中C6…14-芳基以及作為其一部分所包括的碳環(huán)和雜環(huán)取代基可以任選地被R4一-或多取代，-具有3…10個環(huán)原子的飽和或一-或多不飽和碳環(huán)狀-或雜環(huán)狀螺環(huán)，其中雜環(huán)系含有1…6個雜原子、優(yōu)選N、O和S，該基團(tuán)任選地被下列基團(tuán)單取代或多取代-OH，-SH，-NH2，-NHC1…6-烷基，-N(C1…6-烷基)2，-NHC6…14芳基，-N(C6…14芳基)2，-N(C1…6烷基)(C6…14芳基)，-NHCOR6，-NO2，-CN，-F，-Cl，-Br，-I，-O-C1…6-烷基，-O-C6…14-芳基，-O(CO)R6，-S-C1…6-烷基，-S-C6…14芳基，-SOR6，-SO3H，-SO2R6，-OSO2C1…6烷基，-OSO2C6…14芳基，-(CS)R6；-COOH，-(CO)R6，具有3…14個環(huán)原子的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和碳環(huán)，具有5…15個環(huán)原子和1…6個雜原子、優(yōu)選N、O和S的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和雜環(huán)，其中C6…14-芳基以及作為其一部分所包括的碳環(huán)和雜環(huán)取代基可以任選地被R4一-或多取代，其中R1和R5可以相同或不同；R2、R3可以是氫或-OH，其中兩個取代基中至少一個必須是-OH；R4是-H，-OH，-SH，-NH2，NHC1…6-烷基，N(C1…6-烷基)2，-NHC6…14-芳基，-N(C6…14芳基)2，-N(C1…6-烷基)(C6…14-芳基)，-NHCOR6，-NO2，-CN，-COOH，-(CO)R6，-(CS)R6，-F，-Cl，-Br，-I，-O-C1…6-烷基，-O-C6…14芳基，-O(CO)R6，-S-C1…6-烷基，-S-C6…14-芳基，-SOR6，-SO2R6，R6可以是-H，-NH2，-NHC1…6-烷基，-N(C1…6-烷基)2，-NHC6…14-芳基，-N(C6…14芳基)2，-N(C1…6-烷基)(C6…14-芳基)，-O-C1…6-烷基，-O-C6…14芳基，-S-C1…6-烷基，-S-C6…14-芳基，-直鏈或支鏈-C1…12-烷基，-一-或多不飽和的、直鏈或支鏈-C2…12-鏈烯基，-具有3…14個環(huán)原子的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和碳環(huán)，-具有5…15個環(huán)原子和1…6個雜原子、優(yōu)選N、O和S的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和雜環(huán)，A是一個鍵，或是-(CH2)m-，-(CH2)m-(CH＝CH)n-(CH2)p-，-(CHOZ)m-，-(C＝O)-，-(C＝S)-，-(C＝N-Z)-，-O-，-S-，-NZ-，其中m、p＝0…3，并且n＝0…2，以及Z是-H，或-直鏈或支鏈-C1…12-烷基，-一-或多不飽和的、直鏈或支鏈-C2…12-鏈烯基，-具有3…14個環(huán)原子的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和碳環(huán)，-具有5…15個環(huán)原子和1…6個雜原子、優(yōu)選N、O和S的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和雜環(huán)；B可以是碳或硫或-(S＝O)-；D可以是氧、硫、CH2或N-Z，其中如果B是碳，則D僅僅是S或CH2；E可以是一個鍵，或者-(CH2)m-，-O-，-S-，-(N-Z)-，其中m和Z的含義如上所述。
本發(fā)明還涉及式1化合物的生理上可耐受的鹽。
生理上可耐受的鹽是以常規(guī)方式、通過用無機(jī)酸或有機(jī)酸中和堿或者用無機(jī)堿或有機(jī)堿中和酸制得?？赡艿臒o機(jī)酸是例如鹽酸、硫酸、磷酸或氫溴酸，有機(jī)酸是例如羧酸、磺酸例如乙酸、酒石酸、乳酸、丙酸、乙醇酸、丙二酸、馬來酸、富馬酸、丹寧酸、琥珀酸、藻酸、苯甲酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、檸檬酸、蘋果酸、水楊酸、3-氨基水楊酸、抗壞血酸、撲酸、煙酸、異煙酸、草酸、氨基酸、甲磺酸、乙磺酸、2-羥基乙磺酸、乙-1，2-二磺酸、苯磺酸、4-甲基苯磺酸或萘-2-磺酸?？赡艿臒o機(jī)堿是例如氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、氨水，可能的有機(jī)堿是胺，但是優(yōu)選叔胺例如三甲胺、三乙胺、吡啶、N，N-二甲基苯胺、喹啉、異喹啉、α-甲基吡啶、β-甲基吡啶、γ-甲基吡啶、2-甲基喹啉或嘧啶。
此外，本發(fā)明式1化合物的生理上可耐受的鹽可以按照本身已知的方式、通過用季銨化試劑將具有叔胺基的衍生物轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的季銨鹽制得。可能的季銨化試劑是例如烷基鹵例如碘甲烷、溴乙烷和正丙基氯，還包括芳烷基鹵例如芐基氯或2-苯乙基溴。
再者，本發(fā)明具有不對稱碳原子的式1化合物涉及D構(gòu)型、L構(gòu)型和D，L構(gòu)型混合物，并且如果有多個不對稱碳原子，則包括非對映體。含有不對稱碳原子、并且通常以外消旋體獲得的那些式1化合物可以采用本身已知的方式、例如用旋光活性的酸分離成旋光活性異構(gòu)體。當(dāng)然，也可以從原料開始使用旋光活性的起始物質(zhì)，由此得到相應(yīng)的旋光活性的非對映體化合物作為最終產(chǎn)物。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了本發(fā)明化合物的重要藥學(xué)性質(zhì)，可以利用這些性質(zhì)進(jìn)行治療。
本發(fā)明化合物是TNFα的釋放抑制劑。
因此，本發(fā)明的目的是，式1化合物及其鹽、以及含有這些化合物或其鹽的藥物制劑可用于治療其中對TNFα的抑制有益的疾病。
這些疾病包括例如關(guān)節(jié)炎癥，包括關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)疾病例如類風(fēng)濕性脊椎炎和骨關(guān)節(jié)炎。其他可能的應(yīng)用是治療患以下疾病的患者膿毒病、膿毒性休克、革蘭氏陰性膿毒病、中毒性休克綜合征、呼吸窘迫綜合征、氣喘或其他慢性肺病、骨吸收病或移植物排斥反應(yīng)或其他自免疫疾病例如紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、腎小球性腎炎和眼色素層炎、胰島素依賴型糖尿病和慢性脫髓鞘(demyelinization)。
此外，本發(fā)明化合物還可以用于治療感染例如病毒感染和寄生蟲感染，例如治療瘧疾、與感染有關(guān)的發(fā)熱、與感染有關(guān)的肌痛、AIDS和惡病質(zhì)。
本發(fā)明化合物是磷酸二酯酶4抑制劑。
因此，本發(fā)明的目的是，式1化合物及其鹽、以及含有這些化合物或其鹽的藥物制劑可用于治療其中對磷酸二酯酶4的抑制有益的疾病。
因此，本發(fā)明的化合物可以用作支氣管擴(kuò)張藥并用于預(yù)防氣喘。
此外，式1化合物還是嗜曙紅細(xì)胞積聚及其活性的抑制劑。因此，本發(fā)明化合物還可用于其中嗜曙紅細(xì)胞起作用的疾病。這些疾病包括例如炎性呼吸道疾病例如支氣管氣喘、變應(yīng)性鼻炎、變應(yīng)性結(jié)膜炎、特應(yīng)性皮炎、濕疹、變應(yīng)性血管炎、嗜曙紅細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥例如嗜曙紅的筋膜炎、嗜曙紅肺炎和PIE綜合征(伴有嗜曙紅細(xì)胞增多的肺浸潤)、蕁麻疹、潰瘍性結(jié)腸炎、節(jié)段性回腸炎和增生性皮膚病例如牛皮癬或角化病。
本發(fā)明的目的是，式1化合物及其鹽可抑制脂多糖(LPS)-誘導(dǎo)的TNFα從體外人血中釋放以及LPS-誘導(dǎo)的雪貂和家養(yǎng)豬的體內(nèi)肺嗜中性浸潤。所有藥理學(xué)重要性質(zhì)的發(fā)現(xiàn)證實(shí)了式1化合物及其鹽、以及含有這些化合物或其鹽的藥物制劑可用于治療慢性阻塞性肺病。
本發(fā)明化合物還具有神經(jīng)保護(hù)性質(zhì)，并且可用于治療其中對神經(jīng)保護(hù)有益的疾病。這些疾病是例如老年性癡呆(阿耳茨海默氏病)、失去記憶、帕金森氏病、抑郁、中風(fēng)和間歇性跛行。
本發(fā)明化合物的其他可能的應(yīng)用是預(yù)防和治療前列腺病例如良性前列腺增生、頻尿、夜尿癥、以及治療由腎結(jié)石引起的膀胱和結(jié)腸張力缺乏。最后，本發(fā)明化合物還可用于抑制對反復(fù)使用止痛劑例如嗎啡造成藥物依賴的發(fā)展，并用于減少對反復(fù)使用這些止痛劑耐受性的發(fā)展。
在制備藥物時，除了常規(guī)的助劑、載體和添加劑之外，使用有效劑量的本發(fā)明化合物或其鹽。
活性化合物的劑量可以根據(jù)給藥途徑、患者的年齡和體重、所治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度等類似因素而變化。
日劑量可以以單次劑量或分成每天1或多次劑量的形式給藥，通常日劑量為0.001-100mg。
可能的給藥形式為口服、非腸道、靜脈內(nèi)、經(jīng)皮、局部、吸入和鼻內(nèi)給藥制劑。
用于給藥的可能的常規(guī)藥物制劑形式是例如片劑、包衣片、膠囊、可分散粉末、顆粒、水溶液、水懸浮液或油懸浮液、糖漿、汁或滴劑。
固體藥物形式可以含有惰性成分和載體，例如碳酸鈣、磷酸鈣、磷酸鈉、乳糖、淀粉、甘露糖醇、藻酸鹽、明膠、瓜爾膠、硬脂酸鎂或硬脂酸鋁、甲基纖維素、滑石、高度分散的硅酸、硅油、高分子量脂肪酸(例如硬脂酸)、明膠、瓊脂或植物或動物脂肪和油、固體高分子量聚合物(例如聚乙二醇)；如果需要，適于口服的制劑可以含有另外的矯味劑和/或甜味劑。
液體藥物形式可以是無菌的和/或任選地含有助劑例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑、滲透劑、乳化劑、鋪展劑、加溶劑、鹽、糖或糖醇以調(diào)節(jié)滲透壓或用于緩沖和/或粘度調(diào)節(jié)劑。
這類添加劑是例如酒石酸鹽和檸檬酸鹽緩沖劑、乙醇、配合劑(例如乙二胺四乙酸及其無毒鹽)。用于調(diào)節(jié)粘度的可能的高分子量聚合物是例如液體聚環(huán)氧乙烷、微晶纖維素、羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、葡聚糖或明膠。固體載體是例如淀粉、乳糖、甘露糖醇、甲基纖維素、滑石、高度分散的硅酸、高分子量脂肪酸(例如硬脂酸)、明膠、瓊脂、磷酸鈣、硬脂酸鎂、動物和植物脂肪、固體高分子量聚合物例如聚乙二醇。
非腸道或局部使用的油懸浮液可以是植物合成或半合成油，例如在脂肪酸鏈中具有8-22個碳原子的液體脂肪酸酯，例如用具有1-6個碳原子的一元醇至三元醇(如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇或它們的異構(gòu)體、乙二醇或甘油)酯化的棕櫚酸、月桂酸、十三酸、十七酸、硬脂酸、花生酸、肉豆蔻酸、二十二烷酸、十五烷酸、亞油酸、反油酸、巴西烯酸、芥酸或油酸。該類型的脂肪酸酯是例如商售Miglyols、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸異丙酯、PEG6-癸酸、飽和脂肪醇的辛酸/癸酸酯、聚氧乙烯甘油三油酸酯、油酸乙酯、蠟狀脂肪酸酯例如人造鴨尾羽腺脂肪、椰子脂肪酸異丙酯、油酸油酯、油酸癸酯、乳酸乙酯、鄰苯二甲酸二丁酯、己二酸二異丙酯、多元醇脂肪酸酯等。其他適合的有不同粘度的硅油或脂肪醇(例如異十三醇、2-辛基十二烷醇、鯨蠟基硬脂醇或油醇)、脂肪酸例如油酸。此外，還可以使用植物油例如蓖麻油、杏仁油、橄欖油、芝麻油、棉籽油、花生油或大豆油。
可能的溶劑、膠凝劑和加溶劑是水或可與水互溶的溶劑。這些適宜的溶劑是例如醇如乙醇或異丙醇、芐醇、2-辛基十二烷醇、聚乙二醇、鄰苯二甲酸酯、己二酸酯、丙二醇、甘油、二或三丙二醇、蠟、甲基溶纖劑、溶纖劑、酯、嗎啉、二噁烷、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、四氫呋喃、環(huán)己酮等。
可以使用的成膜劑是可溶于水或有機(jī)溶劑或者可在水或有機(jī)溶劑中膨脹的纖維素醚，例如羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素或可溶性淀粉。
在膠凝劑與成膜劑之間的混合形式同樣也是可能的。尤其可以使用的是離子型大分子，例如羧甲基纖維素鈉、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸及其鹽、支鏈淀粉半羥乙酸鈉、藻酸或丙二醇藻酸鈉、阿拉伯膠、黃原膠、瓜爾膠或角叉菜膠。
可以使用的其他制劑助劑甘油、不同粘度的石蠟、三乙醇胺、膠原、尿囊素、novantisolic acid。
制劑還需要使用表面活性劑、乳化劑或潤濕劑，例如十二烷基硫酸鈉、脂肪醇醚硫酸鹽、N-月桂基-β-亞氨基二丙酸二鈉、聚乙氧基化蓖麻油或脫水山梨醇一油酸酯、脫水山梨醇一硬脂酸酯、聚山梨醇酯(例如吐溫)、鯨蠟醇、卵磷脂、甘油一硬脂酸酯、聚氧乙烯硬脂酸酯、烷基酚聚乙二醇醚、氯化鯨蠟基三甲基銨或一/二烷基聚乙二醇醚正磷酸一乙醇胺鹽。
制備所需的制劑還任選地需要穩(wěn)定劑，例如使乳液穩(wěn)定的蒙脫石或膠態(tài)硅酸，或者防止活性物質(zhì)破壞的物質(zhì)例如抗氧化劑如生育酚或丁基羥基苯甲醚，或者防腐劑例如對羥基苯甲酸酯。
非腸道給藥制劑可以以單獨(dú)的劑量單位形式存在，例如安瓿或小瓶。優(yōu)選的是使用活性化合物的溶液，優(yōu)選水溶液，特別優(yōu)選等滲溶液，還有懸浮液。這些注射劑型可以制成完成配制的制劑，或者僅僅制成在使用前根據(jù)需要與其他固體載體和所需的溶劑或懸浮劑混合的活性化合物的制劑，例如凍干粉末。
鼻內(nèi)制劑可以是水溶液或油溶液，或是水懸浮液或油懸浮液。鼻內(nèi)制劑還可以是在使用前用合適的溶劑或懸浮劑配制的凍干粉末。
在常規(guī)的抗菌和無菌條件下進(jìn)行該制劑的制備、分裝和密封。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物的制備方法。
按照本發(fā)明，通過除去R7，將其中R2或R3或者R2和R3為-O-R7的式1化合物轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的式1化合物，來制備其中R1、R2、R3、R4、R5、A、B、D和E的含義如上所述的通式1化合物 此處R7表示適于作為離去基團(tuán)的取代基，例如烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基、雜芳基、?；?、烷氧羰基、芳氧羰基、氨基羰基、N-取代的氨基羰基、甲硅烷基或磺?；?，以及配合劑例如硼酸的化合物、磷酸的化合物和共價或配位鍵合的金屬例如鋅、鋁或銅。
特別優(yōu)選的在本發(fā)明制備方法中除去R7的反應(yīng)是用合適的堿例如氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液或碳酸鈉或碳酸鉀水解。
當(dāng)R7是以下基團(tuán)時優(yōu)選進(jìn)行該水解?；?、烷氧羰基、芳氧羰基、氨基羰基、N-取代的氨基羰基、甲硅烷基或磺?；约芭浜蟿├缦铝械幕衔锱鹚?、磷酸和共價或配位鍵合的金屬例如鋅、鋁或銅。
特別優(yōu)選的在本發(fā)明制備方法中從其中R7是烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基或雜芳基的化合物中除去R7的反應(yīng)是醚裂解，例如在有或無另外的活化劑(例如乙-1，2-二硫醇或芐基硫醇)存在下、用氫溴酸、鹽酸、氫碘酸并且使用活化的Lewis酸，例如AlCl3、BF3、BBr3或LiCl進(jìn)行醚裂解，以及在升高的壓力或常壓下，在合適的催化劑例如鈀或銥催化劑存在下，用氫進(jìn)行醚裂解。
按照本發(fā)明，還可以采用已知的反應(yīng)，通過轉(zhuǎn)化下列結(jié)構(gòu)，將式1化合物轉(zhuǎn)化為本發(fā)明其他的式1化合物，制備其中R1、R2、R3、R4、R5、A、B、D和E的含義如上所述的通式1化合物
特別優(yōu)選的本發(fā)明式1化合物的轉(zhuǎn)化方法是，例如，用本身已知的還原劑例如硼氫化鈉或者通過氫化，將A＝-(C＝O)-還原成A＝-(CH-OH)-或A＝-CH2-，該還原反應(yīng)可以任選地立體專一地進(jìn)行。
其他優(yōu)選的轉(zhuǎn)化反應(yīng)是將其中D和E是氧的化合物轉(zhuǎn)化為其中只有D是氧、而E是-(N-Z)-(其中Z的含義如上所述)的物質(zhì)。
具體實(shí)施例方式
下面舉例說明由所述類型的物質(zhì)制備本發(fā)明式1化合物的方法，其中R7是烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基或雜芳基實(shí)施例1N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟芐基)-5-羥基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(1)將1.4g N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟芐基)-5-甲氧基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(3mmol)溶于100ml二氯甲烷中。將該溶液加熱回流并在攪拌下用在15ml二氯甲烷中的14mmol BBr3處理。使反應(yīng)混合物回流3小時。冷卻后，在20℃將該溶液與200ml碳酸氫鈉水溶液一起劇烈攪拌3小時。在此過程中產(chǎn)物結(jié)晶出來。分離產(chǎn)物，在60℃干燥，并從80ml乙醇中重結(jié)晶。
產(chǎn)量1.1g(理論值的8O％)熔點(diǎn)213-214℃實(shí)施例2N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟芐基)-5-羥基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(1)向50ml乙-1，2-二硫醇中加入5g(38mmol)無水氯化鋁。在0℃加入在50ml二氯甲烷中的4.7g N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟芐基)-5-甲氧基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(10mmol)。在0℃攪拌該混合物4小時。在0-10℃和攪拌下，滴加50ml濃度為10％的鹽酸。分離結(jié)晶產(chǎn)物，用水洗滌，并在20℃干燥。從乙醇(180ml)中重結(jié)晶得到純的產(chǎn)物。
產(chǎn)量3.1g(理論值的67％)熔點(diǎn)212-214℃下面舉例說明由所述類型的物質(zhì)制備本發(fā)明式1化合物的方法，其中R7是?；?、烷氧羰基、芳氧羰基、氨基羰基、N-取代的氨基羰基、甲硅烷基或磺酰基實(shí)施例3N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟芐基)-5-羥基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺鈉鹽(2)在40-50℃，將5g N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[5-乙酰氧基-1-(4-氟芐基)-吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(10mmol)在50ml稀氫氧化鈉溶液中攪拌1小時。在冰冷卻下，用鹽酸(濃度10％)中和該溶液，并濃縮至干。殘余物溶于80ml丙酮中。除去不溶的成分。澄清的溶液用在3ml水中的0.4g NaOH處理，并在20℃攪拌2小時。分離結(jié)晶的產(chǎn)物，用丙酮洗滌并在60℃干燥。
產(chǎn)量2.44g(理論值的51％)熔點(diǎn)265℃下面舉例說明由本發(fā)明的其他式1化合物制備本發(fā)明式1化合物的方法。
實(shí)施例4N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟芐基)-5-羥基吲哚-3-基]-2-羥基乙酰胺(3)將1g N-(3，5-二氯吡啶-4-基)-2-[1-(4-氟芐基)-5-羥基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺(1；2mmol)懸浮在75ml甲醇中。加入在3ml稀氫氧化鈉溶液中的0.2g硼氫化鈉溶液后，將反應(yīng)混合物在20℃攪拌6小時。蒸餾除去溶劑后，殘余物從40ml乙醇中重結(jié)晶。
產(chǎn)量0.5g(理論值的50％)熔點(diǎn)205-207℃
采用上述各種實(shí)例的變化方法，可以制備例如下列舉例給出的許多其他的式1化合物

本發(fā)明化合物是磷酸二酯酶4和TNFα釋放的強(qiáng)抑制劑。其治療的可能性已經(jīng)在體內(nèi)得到證實(shí)，例如抑制豚鼠的氣喘晚期反應(yīng)，以及影響有效致敏的棕色挪威大鼠變應(yīng)原引起的血管透過性。
磷酸二酯酶的抑制在人多形核淋巴細(xì)胞(PMNL)的酶制劑中測定PDE 4活性，用人血小板的PDE測定PDE 2、3和5活性。用檸檬酸防止人血凝集。通過在室溫以700xg的轉(zhuǎn)速離心20分鐘，將上清液中富含血小板的血漿與紅細(xì)胞和白細(xì)胞分離通過超聲處理使血小板溶解，并用于PDE 3和PDE 5分析。為了測定PDE 2活性，將胞質(zhì)血小板部分在陰離子交換柱上純化，用氯化鈉梯度洗脫，回收PDE 2峰用于分析。通過隨后的葡聚糖沉淀以及之后用Ficoll-Paque梯度離心，分離用于PDE 4測定的PMNL。在洗滌細(xì)胞兩次后，向仍然含有的紅細(xì)胞中加入10ml低滲緩沖劑(155mM NH4Cl，10mM NaHCO3，0.1mM EDTA，pH7.4)，在4℃溶解6分鐘。依然完整的PMNL用PBS洗滌兩次，并進(jìn)行超聲處理使其溶解。經(jīng)過在4℃、以48,000xg的轉(zhuǎn)速離心1小時后，上清液中含有胞質(zhì)PDE 4成分，將該成分用于PDE 4測定。
采用Thompson等所述的、經(jīng)過某些改變的方法測定磷酸二酯酶活性(Thompson，W.J.；Appleman，M.M.，環(huán)核苷酸磷酸二酯酶的分析和酶的多分子形式的拆分，Adv.Cycl.Nucl.Res.1979，10，69-92)。
該反應(yīng)混合物含有50mM tris HCl(pH7.4)、5mM MgCl2、不同濃度的抑制劑、相應(yīng)的酶制劑以及測定單個同工酶所需的其他成分(參見如下)。加入底物0.5μM[3H]cAMP或[3H)-cGMP(約6000CPM/試驗(yàn))開始反應(yīng)。最終的體積是100ml。將試驗(yàn)物質(zhì)制成在DMSO中的儲液形式。在反應(yīng)混合物中DMSO的濃度是1％v/v。在此DMSO濃度，PDE活性不受影響。加入底物開始反應(yīng)后，將樣品在37℃孵育30分鐘。在110℃加熱反應(yīng)管2分鐘以終止反應(yīng)。使樣品在冰上保持10分鐘。加入30μl 5’-核苷酸酶(1mg/ml，衲脊響尾蛇毒懸浮液)后，在37℃孵育10分鐘。將樣品放置在冰上停止反應(yīng)，加入各為400μl的Dowex-水-乙醇(1+1+1)混合物，并將樣品充分混合，再在冰上孵育15分鐘。將反應(yīng)瓶以3000xg的轉(zhuǎn)速離心20分鐘。將200μl等分的上清液直接移入閃爍瓶中。加入3ml閃爍劑之后，對樣品進(jìn)行β計數(shù)測量。
用[3H]-cAMP作為測定PDE 4、3和2活性的底物，用[3H]-cGMP測定PDE 5活性。在各種情況，對于PDE 4，在100μM咯利普蘭存在下測定非特異性酶活性，并且在100μM IBMX存在下測定PDE 3和5的活性，并減去試驗(yàn)值。PDE 3的分析培養(yǎng)液含有10μM咯利普蘭以抑制被PDE 4污染的可能。使用Amersham公司的SPA分析儀對PDE 2進(jìn)行試驗(yàn)。該分析在PDE 2活化劑(5μM cGMP)存在下進(jìn)行。
本發(fā)明化合物抑制磷酸二酯酶4的IC50值為10-9至10-5M。PDE 2、3和5的選擇性因子為100至10,000。
TNFα從鼻息肉細(xì)胞中釋放的抑制基本上采用Campbell，A.M.和Bousquet J所述方法進(jìn)行試驗(yàn)(H1-阻滯劑的抗變應(yīng)性活性，Int.Arch.Allergy Immunol.，1993，101，308-310)。原料是需要接受手術(shù)治療患者的鼻息肉(手術(shù)取得的原料)。
將組織用RPMI 1640洗滌，然后在37℃用蛋白酶(2.0mg/ml)、膠原酶(1.5mg/ml)、透明質(zhì)酸酶(0.75mg/ml)和DNA酶(0.05mg/ml)(1g組織比4ml含有酶的RPMI 1640)破碎2小時。所得細(xì)胞是上皮細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和粒細(xì)胞的混合物，將其過濾并通過在營養(yǎng)液中反復(fù)離心進(jìn)行洗滌，加入人IgE使其被動致敏，并將該細(xì)胞懸浮液用RPMI 1640(補(bǔ)充有抗菌素、10％胎牛血清、2mM谷酰胺和25mM Hepes)調(diào)節(jié)至2百萬細(xì)胞/ml的濃度。將該懸浮液分布于6-孔細(xì)胞培養(yǎng)板(1ml/孔)中。將細(xì)胞與不同終濃度的試驗(yàn)物質(zhì)一起預(yù)孵育30分鐘，然后加入抗IgE(7.2μg/ml)刺激THFα釋放。在約18小時后發(fā)生了向營養(yǎng)基中的最大釋放。在此期間，將細(xì)胞在37℃和5％ CO2存在下孵育。離心(5分鐘，4000rpm)回收營養(yǎng)基(上清液)，并貯存在-70℃直至進(jìn)行細(xì)胞因子測定。采用所謂的夾心ELISA方法(basic material Pharmingen)測定上清液中的TNFα，其中可檢測的細(xì)胞因子濃度范圍是30-1000pg/ml。
未用抗IgE刺激的細(xì)胞幾乎不產(chǎn)生THFα，而刺激的細(xì)胞則分泌出大量的TNFα，TNFα的產(chǎn)生可以以劑量依賴的方式、用PDE 4抑制劑降低。由不同濃度試驗(yàn)物質(zhì)的百分抑制(用抗IgE刺激的細(xì)胞的TNFα釋放＝100％)計算IC50值(50％抑制濃度)。
所測定的本發(fā)明化合物的IC50值為10-7至10-5M。
在吸入卵白蛋白激發(fā)有效致敏豚鼠24小時后晚期嗜曙紅細(xì)胞增多的抑制使用以卵白蛋白(OVA)有效激發(fā)的雄性Dunkin-Hartley豚鼠(200-250g)進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)，以研究各種物質(zhì)對肺嗜曙紅細(xì)胞浸潤的抑制。在連續(xù)兩天內(nèi)，通過給每只動物腹膜內(nèi)注射2次20μg OVA與20mg氫氧化鋁輔劑在0.5ml生理鹽水溶液中的懸浮液，使動物敏化。在第二次注射14天后，用馬來酸美吡拉敏(10mg/kg，腹膜內(nèi)注射)預(yù)處理動物，以保護(hù)這些動物防止其過敏性死亡。30分鐘后，將動物在塑料盒中與OVA氣霧劑(0.5mg/ml)接觸30秒，OVA氣霧劑是通過壓縮空氣(19.6kPa)驅(qū)動的噴霧器產(chǎn)生的(變應(yīng)原激發(fā))。對照組動物僅僅用生理鹽水溶液噴霧。激發(fā)后24小時，用過量的乙基烏拉坦(1.5g/kg體重，腹膜內(nèi)注射)使動物麻醉，并用2×5ml生理鹽水溶液進(jìn)行支氣管肺泡灌洗(BAL)。收集BAL液，以300rpm離心10分鐘，然后將細(xì)胞沉淀物再懸浮于1ml生理鹽水溶液中。使用自動細(xì)胞鑒別裝置(BayerDiagnostics Technicon H1)對BAL進(jìn)行嗜曙紅細(xì)胞計數(shù)。在每一試驗(yàn)中還包括2個對照組(用生理鹽水溶液噴霧以及用OVA溶液噴霧)。
按照下式計算用活性物質(zhì)處理的試驗(yàn)組嗜曙紅細(xì)胞增多的抑制百分?jǐn)?shù) A＝用OVA激發(fā)并用賦形劑處理的對照組的嗜曙紅細(xì)胞數(shù)B＝用OVA激發(fā)并用活性物質(zhì)處理的試驗(yàn)組的嗜曙紅細(xì)胞數(shù)C＝用0.9％NaCl激發(fā)并用賦形劑處理的對照組的嗜曙紅細(xì)胞數(shù)試驗(yàn)物質(zhì)在變應(yīng)原激發(fā)之前2小時，以在10％聚乙二醇300和0.5％5-羥乙基纖維素中的懸浮液形式經(jīng)腹膜內(nèi)注射或經(jīng)口服給藥。對照組則采用與試驗(yàn)物質(zhì)同樣的給藥方式、用賦形劑處理。
腹膜內(nèi)注射10mg/kg本發(fā)明化合物后可以30％-80％抑制晚期嗜曙紅細(xì)胞增多，而口服30mg/kg本發(fā)明化合物后可以40％-70％抑制晚期嗜曙紅細(xì)胞增多。
因此，本發(fā)明化合物特別適用于制備治療與嗜曙紅細(xì)胞的作用有關(guān)疾病的藥物。
在有效致敏的棕色挪威大鼠中變應(yīng)原誘導(dǎo)的血管透過性的作用在連續(xù)兩天內(nèi)，通過給每只動物腹膜內(nèi)注射兩次1mg卵白蛋白與100mg氫氧化鋁在1ml生理鹽水溶液中的懸浮液，使重280-300g的雄性棕色挪威大鼠有效敏化。在敏化3周后，用硫噴妥鈉使大鼠麻醉，并取仰臥位置固定。為了進(jìn)行鼻腔灌注，將聚乙烯導(dǎo)管向后方插入氣管、盡可能使鼻后孔內(nèi)部張開，以使得溶液能夠滴出鼻腔。直體步行的方式將一個短氣管導(dǎo)管插入氣管中以使其能夠呼吸。用滾筒泵將磷酸鹽緩沖的鹽水溶液(PBS)連續(xù)泵入鼻腔(0.5ml/分鐘)，并用餾分收集器收集。用伊文思藍(lán)作為血漿標(biāo)記物，并通過導(dǎo)管、經(jīng)靜脈內(nèi)注射(每只動物分別注射1ml在PBS中的1％濃度溶液)進(jìn)頸靜脈中。
試驗(yàn)物質(zhì)經(jīng)局部給藥。在給藥過程中，將試驗(yàn)物質(zhì)加入灌注基質(zhì)(PBS)中。用含有PDE 4抑制劑的溶液灌注鼻粘膜30分鐘。然后在開始灌注含卵白蛋白的溶液(激發(fā))時立即注入伊文思藍(lán)。在用卵白蛋白激發(fā)(溶于PBS中的10mg/ml卵白蛋白)開始后15分鐘，在60分鐘內(nèi)，用餾分收集器每15分鐘收集一次餾分。用Digiscan光度計，在620nm波長處測定伊文思藍(lán)的濃度。在此過程中自動減去空白值。用AUC程序計算此60分鐘的過程。計算制劑組中試驗(yàn)物質(zhì)相對于賦形劑對照的％作用。
經(jīng)測定，本發(fā)明化合物的IC50值為10-8至10-5M。
通過抑制LPS-引起的TNFα在人血中的釋放以及通過抑制LPS-引起的雪貂和家養(yǎng)豬的肺嗜中性浸潤，證實(shí)了本發(fā)明式I化合物在治療慢性阻塞性肺病中的應(yīng)用。
刺激分離的白細(xì)胞釋放細(xì)胞因子可以以多種方式發(fā)生。脂多糖(LPS)是適于研究TNFα釋放的刺激物。LPS是細(xì)菌細(xì)胞壁的成分，并且通過殺死細(xì)菌釋放出來(抗菌素或免疫系統(tǒng))。LPS尤其刺激吞噬白細(xì)胞的活性(組織巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、單核細(xì)胞)并引起白細(xì)胞從血流中向受影響組織的浸潤。細(xì)胞因子對于這些機(jī)理的重要性在于TNFα，TNFα從受影響細(xì)胞中大量分泌出來(單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是主要來源)并與其他介質(zhì)一起引發(fā)和保持炎癥。
LPS-引起的THFα從稀釋至1∶5的人血中釋放為了調(diào)查對THFα釋放的影響，從不同的供體獲得血液(用檸檬酸鹽抑制血凝固)并用RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋至1∶5。將試驗(yàn)物質(zhì)加入不同濃度的樣品中，然后用LPS激發(fā)。用得自馬流產(chǎn)沙門氏菌(Salmonella abortus equi)的終濃度為10μg/ml的脂多糖刺激白細(xì)胞30分鐘。將每批試驗(yàn)物在保溫箱中于37℃和5％ CO2中孵育24小時，然后將稀釋的血液離心，并通過ELISA法測定無細(xì)胞上清液中TNFα的濃度。
經(jīng)測定，本發(fā)明試驗(yàn)化合物的IC50值為10-7至10-5M。例如，制備實(shí)施例1化合物的IC50值為0.8μmol/l，而參照標(biāo)準(zhǔn)物SB 207499的IC50值為7.0μmol/l。
抑制脂多糖(LPS)-引起的雪貂中性白細(xì)胞增多采用雄性雪貂(0.6-2kg)體內(nèi)試驗(yàn)測定試驗(yàn)物質(zhì)對肺嗜中性浸潤的抑制。用戊巴比妥鈉(40mg/kg體重，腹膜內(nèi)注射)使實(shí)驗(yàn)動物麻醉，將其分別置于5升容積的關(guān)閉的噴霧盒中，并與超聲霧化的濃度為0.01％的LPS(脂多糖)氣溶膠溶液(另外含有在PBS中的0.1％羥胺)接觸10分鐘。氣溶膠是通過壓縮空氣(0.2Mpa)驅(qū)動的噴霧器產(chǎn)生的。對照組動物僅僅用生理鹽水氣溶膠溶液噴霧。在整個過程中對動物進(jìn)行觀察，并在供給新鮮空氣后將動物從噴霧盒中移出。一旦吸入霧化的LPS，立即引起呼吸道炎癥，其特征是嗜中性粒細(xì)胞大量浸潤到實(shí)驗(yàn)動物的肺中。與LPS接觸4-6小時后中性白細(xì)胞增多達(dá)到最大值。為了測定浸潤的嗜中性粒細(xì)胞的數(shù)目，在LPS激發(fā)后6小時，用過量的乙基烏拉坦(1.5g/kg體重，腹膜內(nèi)注射)使動物麻醉，并用2×10ml生理鹽水溶液對支氣管肺泡進(jìn)行灌洗。用Technicon H1E自動細(xì)胞計數(shù)裝置(Bayer Diagnostic)測定合并的原始BAL液(100μl)中細(xì)胞的數(shù)目，并鑒別每μl中不同的白細(xì)胞。在每一試驗(yàn)中還包括2個對照組(用生理鹽水溶液或者用LPS溶液噴霧)。具有抗炎活性的物質(zhì)，特別是影響THFα釋放或嗜中性粒細(xì)胞功能的物質(zhì)，抑制白細(xì)胞的浸潤。通過與未處理實(shí)驗(yàn)動物(使用或不使用LPS激發(fā))中浸潤的嗜中性白細(xì)胞數(shù)目相比，測定對浸潤的抑制。
經(jīng)測定，本發(fā)明化合物腹膜內(nèi)注射的ID50值為1-20mg/kg。例如，在LPS激發(fā)前2小時，以1、3和10mg/kg的劑量經(jīng)腹膜內(nèi)注射施用制備實(shí)施例1的化合物，每一劑量最多對3只動物給藥。BAL中的中性白細(xì)胞增多以劑量依賴的方式受到抑制(18％、64％和78％)。腹膜內(nèi)注射的ID50值為2.4mg/kg。
腹膜內(nèi)注射1mg/kg選擇性PDE 4抑制劑RPR 73401(參照物)引起中性白細(xì)胞增多49％抑制。
如果是肺內(nèi)給藥，在麻醉(腹膜內(nèi)注射40mg/kg，3％戊巴比妥鈉，1.3ml/kg)下，將動物的氣管切開，插入7厘米長的PVC導(dǎo)管，并在LPS激發(fā)前2小時用注射器向肺內(nèi)注入粉末形式的實(shí)驗(yàn)物質(zhì)(以乳糖混合成20mg/kg)。
以1、3和10mg/kg的劑量經(jīng)肺內(nèi)注射施用制備實(shí)施例1的化合物，以劑量依賴的方式抑制LPS-引起的中性白細(xì)胞增多(43％、65％和100％)。ID50值為1.65mg/kg肺內(nèi)。
LPS-引起家養(yǎng)豬中性白細(xì)胞增多可以按照與雪貂類似的方法在家養(yǎng)豬中引起肺中性白細(xì)胞增多。使動物麻醉(戊巴比妥，10mg/kg，靜脈內(nèi)注射)并插管。用支氣管鏡進(jìn)行不完全的支氣管肺泡灌洗，以測定在生理?xiàng)l件下嗜中性粒細(xì)胞的比例。然后施用實(shí)驗(yàn)物質(zhì)，并通過氣管導(dǎo)管給動物吸入超聲霧化的0.03％ LPS(脂多糖)氣溶膠溶液(另外含有在PBS中的0.1％羥胺)20分鐘。吸入LPS引起呼吸道陽性炎癥以及大面積的嗜中性粒細(xì)胞浸潤。與LPS接觸4-6小時后中性白細(xì)胞增多達(dá)到最大值。6小時后，重復(fù)對支氣管肺泡進(jìn)行灌洗，并且計算測定嗜中性白細(xì)胞數(shù)目的增加。
所選擇的豬特別適用于這些試驗(yàn)，因?yàn)樗鼈冊诮馄蕦W(xué)和生理學(xué)上與人具有非常大的相似性。
經(jīng)測定，給每只動物肺內(nèi)施用10mg本發(fā)明化合物使LPS-引起的中性白細(xì)胞增多抑制20-65％。
經(jīng)測定，給每只動物肺內(nèi)施用10mg制備實(shí)施例1化合物(約0.75mg/kg)使LPS-引起的肺中性白細(xì)胞增多抑制51％。
權(quán)利要求
1.式1的羥基吲哚 其中R5是代表苯基，它被至少兩個獨(dú)立選自-F、-Cl、-Br和-I的鹵素殘基取代，并且含有或不含有下列取代基-OH，-SH，-NH2，-NHC1...6-烷基，-N(C1...6-烷基)2，-NHC6...14芳基，-N(C6...14芳基)2，-N(C1...6烷基)(C6...14芳基)，-NHCOR6，-NO2，-CN，-F，-Cl，-Br，-I，-O-C1...6-烷基，-O-C6...14-芳基，-O(CO)R6，-S-C1...6-烷基，-S-C6...14芳基，-SOR6，-SO3H，-SO2R6，-OSO2C1...6烷基，-OSO2C6...14芳基，-(CS)R6；-COOH，-(CO)R6，具有3...14個環(huán)原子的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和碳環(huán)，具有5...15個環(huán)原子和1...6個雜原子選自N、O和S的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和雜環(huán)，其中C6...14-芳基以及作為其一部分所包括的碳環(huán)和雜環(huán)取代基可以任選地被以下取代基一-或多取代-H，-OH，-SH，-NH2，NHC1...6-烷基，N(C1...6-烷基)2，-NHC6...14-芳基，-N(C6...14芳基)2，-N(C1...6-烷基)(C6...14-芳基)，-NHCOR6，-NO2，-CN，-COOH，-(CO)R6，-(CS)R6，-F，-Cl，-Br，-I，-O-C1...6-烷基，-O-C6...14芳基，-O(CO)R6，-S-C1...6-烷基，-S-C6...14-芳基，-SOR6，-SO2R6；R1是被具有3...14個環(huán)原子的單環(huán)飽和或單不飽和或多不飽和碳環(huán)單取代或未取代的直鏈或者支鏈的C1...12烷基，其中碳環(huán)取代基未取代或被下列基團(tuán)取代-NO2，-F，-Cl，-Br，-I，-O-C1...6-烷基，C1...6-烷基；R6可以是-H，-NH2，-NHC1...6-烷基，-N(C1...6-烷基)2，-NHC6...14-芳基，-N(C6...14芳基)2，-N(C1...6-烷基)(C6...14-芳基)，-O-C1...6-烷基，-O-C6...14芳基，-S-C1...6-烷基，-S-C6...14-芳基，直鏈或支鏈-C1...12-烷基，一-或多不飽和的、直鏈或支鏈-C2...12-鏈烯基，具有3...14個環(huán)原子的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和碳環(huán)，具有5...15個環(huán)原子和1...6個雜原子并選自N、O和S的一-、二-或三環(huán)飽和或一-或多不飽和雜環(huán)；R2和R3可以是氫或-OH，其中兩個取代基中至少一個必須是-OH；R4為氫；A為一個鍵、-(CHOH)-或-(C＝O)-；B為碳；D為氧以及E為-(N-H)-。
2.權(quán)利要求1的式1化合物，具有不對稱碳原子，為D構(gòu)型、L構(gòu)型和D，L構(gòu)型混合物，并且如果有多個不對稱碳原子，則包括非對映體。
3.權(quán)利要求1的式1化合物，是下列化合物N-(2，6-二氯苯基)-2-[1-(4-氟芐基)-5-羥基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺；N-(2，6-二氯-4-三氟甲基苯基)-2-[1-(4-氟芐基)-5-羥基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺；N-(2，6-二氯-4-三氟甲氧基苯基)-2-[1-(4-氟芐基)-5-羥基吲哚-3-基]-2-氧代乙酰胺。
4.權(quán)利要求1的式1化合物的生理上可耐受的鹽，其特征在于用無機(jī)酸或有機(jī)酸中和堿或者用無機(jī)堿或有機(jī)堿中和酸或者將叔胺季銨化制得。
5.制備權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的化合物的方法，其特征在于通過除去適于作為離去基團(tuán)的取代基R7，將其中R2或R3或者R2和R3為-O-R7的式1化合物轉(zhuǎn)化為本發(fā)明的式1化合物，其中R2和R3如權(quán)利要求1中所定義。
6.權(quán)利要求5的化合物的制備方法，從其中R7是烷基、環(huán)烷基、芳烷基、芳基、雜芳基、?；?、烷氧羰基、芳氧羰基、氨基羰基、N-取代的氨基羰基、甲硅烷基或磺?；蜻x自硼酸的化合物、磷酸的化合物和共價或配位鍵合的選自鋅、鋁或銅的配合劑的金屬的式1化合物，開始制備式1化合物。
7.制備權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的化合物的方法，其特征在于通過轉(zhuǎn)化下列結(jié)構(gòu)，將通式1化合物轉(zhuǎn)化為本發(fā)明其他的式1化合物 其中A，B，D，E和R5如權(quán)利要求1中所定義。
8.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的化合物作為治療活性化合物在制備治療疾病的藥物中的應(yīng)用，其中對TNFα的抑制有助于治療所述疾病。
9.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的化合物作為治療活性化合物在制備治療疾病的藥物中的應(yīng)用，其中對磷酸二酯酶4的抑制有助于治療所述疾病。
10.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的化合物作為治療活性化合物在制備治療與嗜曙紅細(xì)胞作用有關(guān)的疾病的藥物中的應(yīng)用。
11.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的化合物作為治療活性化合物在制備治療與磷酸二酯酶4的抑制有關(guān)的慢性阻塞性肺病的藥物中的應(yīng)用。
12.藥物組合物，含有一種或多種權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的化合物以及常規(guī)的生理上可耐受的載體和/或稀釋劑或助劑。
13.制備權(quán)利要求12的藥物組合物的方法，其特征在于使用常規(guī)的生理上可耐受的載體和/或稀釋劑或其他助劑，將一種或多種權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的化合物加工成可治療給藥形式的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(1)的羥基吲哚，其中R
文檔編號A61P11/00GK1699342SQ20051007465
公開日2005年11月23日 申請日期1999年4月24日 優(yōu)先權(quán)日1998年4月28日
發(fā)明者N·赫夫根, U·埃格爾蘭德, H·波佩, D·馬克斯, S·斯策倫伊, T·克隆巴赫, E·波利梅洛普羅斯, S·赫爾 申請人:埃爾比昂股份公司