專利名稱：：肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的特異性結(jié)合物的制作方法肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子的特異性結(jié)合物〖001]本申請(qǐng)要求2003年7月18日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?0/488,681的權(quán)利，對(duì)于任何目的其通過(guò)引用結(jié)合到本文中。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的特異性結(jié)合物。本發(fā)明還描述了組合物、所述組合物的生產(chǎn)方法以及治療各種病癥的方法，所述病癥例如某些類型的癌癥，包括但不限于實(shí)體瘤和血液惡性癌癥(hematologicmalignancies)。發(fā)明背景肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)已被鑒定為肝細(xì)胞的有效促分裂原。HGF還被鑒定為成纖維細(xì)胞和平滑肌的分泌性蛋白，其誘導(dǎo)上皮細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)性。HGF在文獻(xiàn)中也稱為分散因子(SF)。HGF是主要由間充質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的多功能異源二聚體多肽，其充當(dāng)Met受體酪氨酸激酶(Met)的配體。人Met受體也稱為"c-met，，。已顯示通過(guò)Met受體酪氨酸激酶-HGF(Met-HGF)途徑的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致一系列細(xì)胞應(yīng)答，包括但不限于增殖(有絲分裂)、分散(運(yùn)動(dòng)性)、通過(guò)基質(zhì)刺激細(xì)胞運(yùn)動(dòng)(侵襲)和分支形態(tài)發(fā)生。體內(nèi)Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(Met-HGF)在例如神經(jīng)誘生、肝再生、傷口愈合、血管生成、生長(zhǎng)、侵襲、形態(tài)分化和正常胚胎發(fā)育中起到作用。除這些功能之外，Met-HGF對(duì)在人類癌癥中也起到作用。已顯示異常Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)參與腫瘤發(fā)生，特別是參與侵襲性和轉(zhuǎn)移性表型的發(fā)展。已發(fā)現(xiàn)某些病原體如瘧疾利用異常Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。參見(jiàn)Carrolo等，NatMed.20039(11):1363-9(2003年10月12日)，對(duì)于任何目的其內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。此外，一些研究小組報(bào)告說(shuō)，HGF在血管生成和在血管生成相關(guān)疾病(如增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病)中起到作用。參見(jiàn)例如Grant,D.S.等，Proc.NatAcad.Sci.U.S.A.90(5)1937-41(1993);Bussolino等，J.CellBiol"119(3):629-641(1992);Montesano等，Cell,67:901-908(1991);Canon等，Br.J.Ophthalmol.84(7):732國(guó)5(2000)。HGF在凋亡或者說(shuō)程序性細(xì)胞死亡中也可能起到作用。當(dāng)正常調(diào)節(jié)機(jī)制未能維持增殖和凋亡之間的平衡，從而導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)量積累時(shí)，即可產(chǎn)生腫瘤。取決于生物背景，HGF不但可實(shí)現(xiàn)增殖，而且可實(shí)現(xiàn)凋亡。因?yàn)镠GF參與許多生理過(guò)程，在某些情況下，擁有能調(diào)節(jié)其活性的分子是有益的。例如，在某些情況下，這種分子可用于治療各種不同類型的癌癥。發(fā)明概述在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含至少一個(gè)選自CDRla、CDR2a和CDR3a的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的分離多肽。其中CDRla包含^tJ^酸序列abcdefghijklmnopq,其中氛基酸a選自賴氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；氨基酸c是絲氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；氨基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是絲氨酸或者不存在；氨基酸j是絲氨酸或者不存在；氨基酸k選自天冬酰胺、蘇氨酸或者不存在；氨基酸l選自天冬酰胺、異亮氨酸或纈氨酸；氨基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸n選自天冬酰胺或絲氨酸；氨基酸o選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸p是亮氨酸；氨基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；其中CDR2a包含氨基酸序列rstuvwx,其中氨基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t(yī)是絲氨酸；氨基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；氨基酸v選自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸x選自絲氨酸、天冬酰胺或蘇氨酸；其中CDR3a包含氨基酸序列yza'b'c'd'e'fg'h',其中氨基酸y選自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z選自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；氨基酸b'選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或異亮氨酸；氨基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸e'是脯氨酸；氨基酸f是脯氨酸或者不存在；氨基酸g'是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；氨基酸h'是蘇氨酸或天冬酰胺；其中所述多肽與抗體重鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含至少一個(gè)選自CDRlb、CDR2b和CDR3b的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的分離多肽其中CDRlb包含氨基酸序列abcdefg，其中氨基酸a是絲氨酸或者不存在；氨基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氛基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f選自異亮氨酸、曱硫氨酸或色氨酸；氨基酸g選自組氨酸、天冬酰胺或絲氨酸；其中CDR2b包含氨基酸序列hijklmnopqrstuvwx,其中氨基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；氨基酸j選自天冬酰胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；氨基酸l選自天冬酰胺、絲氨酸或天冬氨酸；氨基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；氮基酸n選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸o選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸p選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；氨基酸q選自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r選自酪氨酸或組氨酸；氨基酸s選自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t(yī)選自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；氨基酸v選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酰胺或賴氨酸；氨基酸x選自甘氨酸或絲氨酸；其中CDR3b包含絲酸序列yza'b'c'd'e'fg'h'i'j'k'1'm'n'o'p'q'r',其中氨基酸y選自谷氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z選自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸a'選自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸b'選自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸c'選自精氨酸、絲氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸d'是甘氨酸或者不存在；氛基酸e'選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸f是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g'選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸h'是絲氨酸或者不存在；氨基酸i'選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸j'選自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸k'選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸l'選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；M酸m'選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸n'選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸o'選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸p'選自曱硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸q'是天冬氨酸；氨基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；其中所述多肽與抗體輕鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合HGF。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供分離的特異性結(jié)合物，其中所述特異性結(jié)合物包含(i)包含至少一個(gè)選自CDRla、CDR2a和CDR3a的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的第一多肽其中CDRla包含氨基酸序列abcdefghijklmnopq，其中氨基酸a選自賴氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；氨基酸c是絲氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；氨基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是絲氨酸或者不存在；氨基酸j是絲氨酸或者不存在；氨基酸k選自天冬酰胺、蘇氨酸或者不存在；氨基酸l選自天冬酰胺、異亮氨酸或纈氨酸；氨基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸n選自天冬酰胺或絲氨酸；氨基酸o選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸p是亮氨酸；氨基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；其中CDR2a包含氨基酸序列rstuvwx，其中氨基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t(yī)是絲氨酸；氨基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；氨基酸v選自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸x選自絲氨酸、天冬酰胺或蘇氨酸；其中CDR3a包含氨基酸序列yza'b'c'd'e'fg'h',其中氨基酸y選自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z選自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；氨基酸b'選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或異亮氨酸；氨基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸e'是脯氨酸；氨基酸f是脯氨酸或者不存在；氨基酸g'是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；氨基酸h'是蘇氨酸或天冬酰胺；其中所述笫一多肽與抗體重鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF);(ii)包含至少一個(gè)選自CDRlb、CDR2b或CDR3b的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的笫二多肽其中CDRlb包含M酸序列abcdefg，其中氨基酸a是絲氨酸或者不存在；氨基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f選自異亮氨酸、曱硫氨酸或色氨酸；氨基酸g選自組氨酸、天冬酰胺或絲氨酸；其中CDR2b包含氨差、酸序列hijklmnopqrstuvwx，其中氨基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；氨基酸j選自天冬酰胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；氛基酸l選自天冬酰胺、絲氨酸或天冬氨酸；氬基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；氨基酸n選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸o選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸p選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；氨基酸q選自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r選自酪氨酸或組氨酸；氨基酸s選自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t(yī)選自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；氨基酸v選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酰胺或賴氨酸；氨基酸x選自甘氨酸或絲氨酸；其中CDR3b包含氨基酸序列yza'b'c'd'e'fg'h'i'j'k'1'm'n'o'p'q'r'，其中氨基酸y選自谷氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z選自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸a'選自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸b'選自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸c'選自精氨酸、絲氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸d'是甘氨酸或者不存在；氨基酸e'選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸f是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g'選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸h'是絲氨酸或者不存在；氨基酸i'選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸j'選自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸k'選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸l'選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸m'選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸n'選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸o'選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸p'選自曱硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸q'是天冬氦酸；氨基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；其中所述笫二多肽與抗體輕鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合HGF。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含至少一種選自SEQIDNO:24，26,28,30,32,34,36,38,40和42的M酸序列的分離多肽。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含至少一種選自SEQIDNO:25，27,29,31，33，35，37，—39,41和43的M酸序列的分離多肽。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含至少一種選自SEQIDNO:1,3,5,7，9,11,13,15，17和19的核香酸序列的分離核酸分子。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含至少一種選自SEQIDNO:2，4，6,8,10,12,14,16,18和20的核苷酸序列的分離核酸分子。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供編碼包含至少一個(gè)選自CDRla、CDR2a和CDR3a的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的多肽的分離核酸分子其中CDRla包含氨基瞎列abcdefghijklmnopq，其中氨基酸a選自賴氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；氛基酸c是絲氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；氨基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是絲氨酸或者不存在；氨基酸j是絲氨酸或者不存在;氨基酸k選自天冬酰胺、蘇氨酸或者不存在；氨基酸l選自天冬酰胺、異亮氨酸或纈氨酸；氨基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸n選自天冬酰胺或絲氨酸；氨基酸o選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸p是亮氨酸；氨基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；其中CDR2a包含氨基酸序列rstuvwx,其中氨基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t(yī)是絲氨酸、氨基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；氨基酸v選自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸x選自絲氨酸、天冬酰胺或蘇氨酸；其中CDR3a包含絲酸序列yza'b'c'd'e'fg'h',其中氨基酸y選自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z選自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；氨基酸b'選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或異亮氨酸；氨基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸e'是脯氨酸；氨基酸f是脯氨酸或者不存在；氨基酸g'是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；氨基酸h'是蘇氨酸或天冬酰胺；其中所述多肽與抗體重鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供編碼包含至少一個(gè)選自CDRlb、CDR2b和CDR3b的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的多肽的分離核酸分子其中CDRlb包含氨基酸序列abcdefg，其中氨基酸a是絲氨酸或者不存在；氨基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f選自異亮氨酸、曱硫氨酸或色氨酸；氨基酸g選自組氨酸、天冬酰胺或絲氨酸；其中CDR2b包含氨基酸序列hijklmnopqrstuvwx,其中氨基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氬基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；氨基酸j選自天冬酰胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；氨基酸l選自天冬酰胺、絲氨酸或天冬氨酸；氨基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；氛基酸n選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸o選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸p選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；氨基酸q選自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r選自酪氨酸或組氨酸；氨基酸s選自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t(yī)選自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；氨基酸v選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酰胺或賴氨酸；氨基酸x選自甘氨酸或絲氨酸；其中CDR3b包含M,列yza'b'c'd'e'fg'h'i'j'k'1'm'n'o'p'q'r'，其中氨基酸y選自谷氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z選自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸a'選—自各氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸b'選自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸c'選自精氨酸、絲氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸d'是甘氨酸或者不存在；氨基酸e'選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸f是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g'選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸h'是絲氨酸或者不存在；氬基酸i'選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸j'選自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸k'選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸l'選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；氬基酸m'選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸n'選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸o'選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸p'選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸q'是天冬氨酸；氨基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；其中所述多肽與抗體輕鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合HGF。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供產(chǎn)生選自1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1的抗體的分離細(xì)^^系。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抑制HGF結(jié)合Met的方法，所述方法包括給予HGF特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含至少一種選自SEQBDNO:164和165的氨基酸序列的多肽。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供基本由至少一種選自SEQIDNO:164和165的氨基酸序列組成的多肽。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供能夠結(jié)合至少一種選自SEQIDNO:164和165的氮基酸序列的特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供能夠結(jié)合至少一種選自SEQIDNO:164和165的氨基財(cái)列的抗體或抗原結(jié)合域。在某些實(shí)施方案中，—本發(fā)明提供獲得能夠結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的抗體的方法，所述方法包括將至少一種選自SEQIDNO:164和165的多肽給予動(dòng)物和從動(dòng)物獲得能夠結(jié)合HGF的抗體。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過(guò)給予包含至少一種選自SEQIDNO:164和165的氨基酸序列的多肽，來(lái)降低或防止特異性結(jié)合物結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的方法?！?24]在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過(guò)給予由至少一種選自SEQIDNO:164和165的M酸序列組成的多肽，來(lái)降低或防止特異性結(jié)合物結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的方法。由本文提供的公開(kāi)內(nèi)容，本發(fā)明的其他實(shí)施方案將顯而易見(jiàn)。附圖簡(jiǎn)述圖1A顯示某些抗HGF抗體的K輕鏈的進(jìn)化系統(tǒng)樹(shù)，說(shuō)明它們的種系關(guān)系。種系基因標(biāo)識(shí)標(biāo)在抗體名稱的右邊。圖IB顯示某些抗HGF抗體的K輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列比對(duì)。種系基因標(biāo)識(shí)標(biāo)在左邊。比對(duì)序列上的粗線表示CDR區(qū)。圖2A顯示某些抗HGF抗體的y重鏈的進(jìn)化系統(tǒng)樹(shù)，說(shuō)明它們的種系關(guān)系。種系基因標(biāo)識(shí)標(biāo)在抗體名稱的右邊。圖2B顯示某些抗HGF抗體的Y重鏈可變區(qū)的氨基酸序列比對(duì)。種系基因標(biāo)識(shí)標(biāo)在左邊。比對(duì)序列上的粗線表示CDR區(qū)。圖3顯示編碼某些抗HGF抗體的輕鏈和重鏈的可變區(qū)的DNA序列。對(duì)于每個(gè)序列，均標(biāo)出抗體名稱、種系標(biāo)識(shí)和序列ID。下劃線為天然信號(hào)肽序列。還顯示人K、IgGl和IgG2恒定區(qū)的DNA序列。029]圖4顯示某些抗HGF抗體的輕鏈和重鏈的可變區(qū)的氨基酸序列。對(duì)于每個(gè)序列，均標(biāo)出抗體名稱、種系標(biāo)識(shí)和序列ID。下劃線為天然信號(hào)肽序列。還顯示人K、IgGl和IgG2恒定區(qū)的氨基酸序列。圖5顯示某些抗HGF抗體的輕鏈和重鏈的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的氨基酸序列。對(duì)于每個(gè)序列，均標(biāo)出抗體名稱和序列ID。圖5A顯示某些抗HGF抗體的輕鏈CDR的氨基酸序列。圖5B顯示某些抗HGF抗體的重鏈CDR的氨基酸序列。圖6顯示實(shí)施例8中討論的某些抗HGF抗體的Ko測(cè)定結(jié)果。圖6A顯示動(dòng)力學(xué)法所得數(shù)據(jù)。圖6B顯示平衡/溶液(equilibrium/solution)法所得數(shù)據(jù)。圖7顯示實(shí)施例8中討論的蛋白質(zhì)印跡的放射自顯影圖，所述蛋白質(zhì)印跡測(cè)試某些抗體結(jié)合人HGF和結(jié)合小鼠HGF的能力。左邊的圖片(1-4道)顯示在非還原條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所得的放射自顯影圖。右邊的圖片(5-8道)顯示在還原條件下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)所得的放射自顯影圖。圖8顯示實(shí)施例8中討論的實(shí)驗(yàn)所得的熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS)數(shù)據(jù)，所述實(shí)驗(yàn)評(píng)估某些抗體與某些靶標(biāo)的結(jié)合。圖8的上部顯示無(wú)特異性結(jié)合物的對(duì)照樣品FACS數(shù)據(jù)。圖片1和2(左起)顯示分別與FITC和PE孵育的無(wú)靶標(biāo)的對(duì)照樣品的數(shù)據(jù)。圖片3和4顯示分別包含F(xiàn)ITC和PE標(biāo)記的d5HGF、但無(wú)特異性結(jié)合物的對(duì)照樣品的數(shù)據(jù)。實(shí)線下面的圖片顯示測(cè)試五種抗HGF抗體的實(shí)驗(yàn)的FACS數(shù)據(jù)。對(duì)于每種抗體，笫一個(gè)圖片(左起)顯示無(wú)靶標(biāo)的對(duì)照樣品的數(shù)據(jù)，笫二至第四個(gè)圖片顯示其中靶標(biāo)分別為人HGF、小鼠HGF和人d5HGF的實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)。圖9A顯示編碼鄰近多克隆位點(diǎn)的親和素的質(zhì)粒的示意圖，如在實(shí)施例8中討論，所述質(zhì)粒用以產(chǎn)生包含親和素和靶蛋白的融合蛋白。圖9B顯示雞親和素的序列。圖IOA和IOB顯示某些融合蛋白的示意圖及實(shí)施例8C和8D討論的使用這些融合蛋白的結(jié)合測(cè)定的結(jié)果。圖IOC顯示某些含點(diǎn)突變、插入或缺失的融合蛋白的示意圖。圖IOD顯示人和小鼠HGF在氨基酸451-731區(qū)域中的氨基酸序列(分別為SEQIDNO.120和121),同時(shí)標(biāo)出相應(yīng)的共有序列(SEQIDNO.122)。圖IIA和11B顯示實(shí)施例8E中討論的人HGF的蛋白酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)的HPLC分析結(jié)果。圖11C顯示該實(shí)驗(yàn)中通過(guò)結(jié)合抗體2.12.1而被保護(hù)免受蛋白酶解消化的肽的氨基酸序列。圖12A-12D顯示實(shí)施例8中討論的竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定的結(jié)果。圖13顯示實(shí)施例9中討論的中和測(cè)定的IC50數(shù)據(jù)。圖14顯示實(shí)施例10中討論的PC3細(xì)胞中和測(cè)定的數(shù)據(jù)。圖15顯示實(shí)施例10中討論的U-87細(xì)胞抑制測(cè)定的數(shù)據(jù)。圖16顯示實(shí)施例11中討論的實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，所述實(shí)驗(yàn)評(píng)估某些抗HGF抗體對(duì)小鼠中U-87MG異種移植腫瘤的作用。圖16A顯示孩么量殘留疾病(minimalresidualdisease)模型中抗體2.4.4對(duì)U-87MG異種移植腫瘤生長(zhǎng)的劑量反應(yīng)數(shù)據(jù)。圖16B顯示確立的疾病模型中抗體2.4.4對(duì)U-87異種移植腫瘤生長(zhǎng)的劑量反應(yīng)數(shù)據(jù)。圖16C、16D、16E和16F顯示U-87微量殘留疾病模型(16C和16D)中或U-87確立的疾病模型(16E和16F)中檢測(cè)抗HGF抗體的直接比較(head-to-head)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)。某些示例性實(shí)施方案詳述應(yīng)當(dāng)理解，以上概述和以下詳迷只是示例性和說(shuō)明性的，并不是對(duì)要求保護(hù)的本發(fā)明進(jìn)行限制。在本申請(qǐng)中，除非另有具體規(guī)定，使用單數(shù)形式包含復(fù)數(shù)含義。在本申請(qǐng)中，除非另有規(guī)定，使用"或(或者)"表示"和/或"。此外，使用術(shù)語(yǔ)"包括"及其其他形式如"包括的"并不表示限制意義。還有，除非另有具體規(guī)定，術(shù)語(yǔ)如"元件"或"組分"不但涵括包含一個(gè)單位的元件和組分，而且涵括包含不只一個(gè)亞單位的元件和組分。同樣，使用術(shù)語(yǔ)"部分(portion)"可包括部分(moiety)的一部分(part)或者整個(gè)部分(moiety)?！?43]本文使用的段落標(biāo)題只是為了組織目的，不能解釋為限制所描述的主題。本申請(qǐng)中引用的所有文件或文件部分，包括但不限于專利、專利申請(qǐng)、文章、書籍和論文，對(duì)于任何目的通過(guò)引用整體清楚地結(jié)合到本文中。定義重組DNA、寡核苷酸合成和組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化(例如電穿孔、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染)可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。酶反應(yīng)和純化技術(shù)可按照廠商說(shuō)明書，或者按照本領(lǐng)域的常規(guī)，或者按照本文的描述來(lái)進(jìn)行。前述技術(shù)和方法通常可按照本領(lǐng)域公知的常規(guī)方法，或者按照本說(shuō)明書中引用和討論的各種一般的和更具體參考文獻(xiàn)的描述來(lái)進(jìn)行。參見(jiàn)例如Sambrook等，MolecularCloning:ALaboratoryManual(笫2版，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor,N.Y.(1989》，對(duì)千任何目的其通過(guò)引用結(jié)合到本文中。除非提供了具體的定義，本文描述的涉及分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)及醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)的所用術(shù)語(yǔ)以及實(shí)驗(yàn)室方法和技術(shù)是本領(lǐng)域^^知和常用的?；瘜W(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、制劑和傳遞以及患者治療可使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。按照本發(fā)明公開(kāi)內(nèi)容進(jìn)行使用的以下術(shù)語(yǔ)，除非另有指明，應(yīng)理解為具有以下含義術(shù)語(yǔ)"肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子"或"HGF"指Nakamura等,Nature342:440-443(1989)中提出的多肽或其片斷以及相關(guān)多肽，包括但不限于等位變體、剪接變體、衍生變體、置換變體、缺失變體和/或插入變體、融合多肽和種間同源物。在某些實(shí)施方案中，HGF多肽包括末端殘基，例如但不限于前導(dǎo)序列殘基、靶向殘基、氨基末端甲硫氨酸殘基、賴氨酸殘基、tag殘基和/或融合蛋白殘基?！?47]術(shù)語(yǔ)"特異性結(jié)合物"指特異性結(jié)合靶標(biāo)的天然或非天然分子。特異性結(jié)合物的實(shí)例包括但不限于蛋白質(zhì)、肽、核酸、碳水化合物、脂質(zhì)和小分子化合物。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物是抗體。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物是抗原結(jié)合區(qū)。術(shù)語(yǔ)"HGF特異性結(jié)合物"指特異性結(jié)合HGF的任何部分的特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，HGF特異性結(jié)合物是抗HGF抗體。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物是抗原結(jié)合區(qū)。術(shù)語(yǔ)"多克隆抗體"指結(jié)合同一抗原的不同表位的抗體的異質(zhì)混合物。術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體"指由同一核酸分子編碼的一組抗體。在某些實(shí)施方案中，單克隆抗體由單一雜交瘤或其他細(xì)胞系產(chǎn)生，或者由轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物產(chǎn)生。單克隆抗體通常識(shí)別同一表位。術(shù)語(yǔ)"單克隆"不限于任何具體的抗體產(chǎn)生方法?！?51]術(shù)語(yǔ)"嵌合抗體"指這樣的抗體，其中抗體的一部分與具體物種或具體抗體類別的序列同源，但抗體的另一部分與不同物種或抗體類別的序列同源。參見(jiàn)例如美國(guó)專利笫4,816,567號(hào)和Morrison等，尸^<^^^"。"^&/fUS4人81:6851-6855(1985)?！?52]術(shù)語(yǔ)"CDR移植抗體"指其中來(lái)自一種抗體的CDR插入到另一種抗體的構(gòu)架中的抗體。在某些實(shí)施方案中，CDR的來(lái)源抗體和構(gòu)架的來(lái)源抗體屬不同的種。在某些實(shí)施方案中，CDR的來(lái)源抗體和構(gòu)架的來(lái)源抗體屬不同的同種型。術(shù)語(yǔ)"多特異性抗體"指其中兩個(gè)或更多個(gè)可變區(qū)結(jié)合不同表位的抗體。表位可以在相同或不同的靶標(biāo)上。在某些實(shí)施方案中，多特異性抗體是識(shí)別相同或不同抗原上的兩種不同表位的"雙特異性抗體"。術(shù)語(yǔ)"催化抗體"指其中連接有一個(gè)或多個(gè)催化部分的抗體。在某些實(shí)施方案中，催化抗體是包含細(xì)胞毒部分的細(xì)胞毒抗體。術(shù)語(yǔ)"人源化抗體"指這樣的抗體，其中抗體構(gòu)架區(qū)的全部或部分來(lái)源于人，但一個(gè)或多個(gè)CDR區(qū)的全部或部分來(lái)源于另一物種，如小鼠。術(shù)語(yǔ)"完全人抗體"指其中CDR和構(gòu)架均基本包含人序列的抗體。在某些實(shí)施方案中，完全人抗體在非人哺乳動(dòng)物中產(chǎn)生，包括但不限于小鼠、大鼠和兔形目動(dòng)物。在某些實(shí)施方案中，完全人抗體在雜交瘤細(xì)胞中產(chǎn)生。在某些實(shí)施方案中，完全人抗體重組產(chǎn)生。術(shù)語(yǔ)"抗獨(dú)特型抗體"指特異性結(jié)合另一種抗體的抗體。術(shù)語(yǔ)"特異性結(jié)合"指特異性結(jié)合物以比其結(jié)合非靶標(biāo)更大的親和力結(jié)合靶標(biāo)的能力。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合指結(jié)合靶標(biāo)的親和力是對(duì)非靶標(biāo)的親和力的至少10、50、100、250、500或1000倍大。在某些實(shí)施方案中，親和力通過(guò)親和ELISA測(cè)定來(lái)檢測(cè)。在某些實(shí)施方案中，親和力通過(guò)BIAcore測(cè)定來(lái)檢測(cè)。在某些實(shí)施方案中，親和力通過(guò)動(dòng)力學(xué)法來(lái)檢測(cè)。在某些實(shí)施方案中，親和力通過(guò)平衡/溶液法來(lái)檢測(cè)。術(shù)語(yǔ)"表位"指能夠被特異性結(jié)合物結(jié)合的分子部分。在某些實(shí)施方案中，表位通常包含分子的化學(xué)活性表面基團(tuán)，例如氨基酸或碳水化合物側(cè)鏈，且具有特異性三維結(jié)構(gòu)特征以及特異性電荷特征。表位可以是連續(xù)的或者非連續(xù)的。在某些實(shí)施方案中，表位可以是模擬的，因?yàn)樗鼈儼c用以產(chǎn)生抗體的表位相似的三維結(jié)構(gòu)，但不包含或者只包含一些見(jiàn)于用以產(chǎn)生抗體的表位的氨基酸殘基。術(shù)語(yǔ)"抑制和/或中和表位"指這樣的表位，其當(dāng)被特異性結(jié)合物結(jié)合時(shí)，導(dǎo)致體內(nèi)、體外和/或原位生物活性下降。在某些實(shí)施方案中，中和表位位于或者涉及粑標(biāo)的生物活性區(qū)域。術(shù)語(yǔ)"激活表位"指這樣的表位，其當(dāng)被特異性結(jié)合物結(jié)合時(shí)，導(dǎo)致體內(nèi)、體外和/或原位生物活性激活或維持。在某些實(shí)施方案中，激活表位位于或者涉及靶標(biāo)的生物活性區(qū)域。本文所用的術(shù)語(yǔ)"分離多核苷酸"意指基因組、cDNA的多核苷酸，或者合成起源的多核苷酸，或者它們的某些組合，由于其來(lái)源，"分離多核苷酸"(l)與其中天然發(fā)現(xiàn)該分離多核苷酸的多核苷酸的全部或一部分無(wú)關(guān)，(2)與其天然不相連的多核苷酸相連，或者(3)沒(méi)有作為更大序列的一部分天然出現(xiàn)。本文所指的術(shù)語(yǔ)"分離蛋白"意指由cDNA、重組RNA編碼或者合成來(lái)源的蛋白質(zhì)，或者它們的某些組合，其(l)沒(méi)有至少某些其通常發(fā)現(xiàn)與其伴隨的蛋白質(zhì)，(2)基本沒(méi)有相同來(lái)源(例如相同物種)的其他蛋白質(zhì)，(3)由不同物種的細(xì)胞表達(dá)，(4)在自然界中不出現(xiàn)。術(shù)語(yǔ)"多肽"在本文中用作普通術(shù)語(yǔ)，指天然蛋白質(zhì)或這種蛋白質(zhì)缺失、插入和/或置換天然序列的一個(gè)或多個(gè)氨基酸的修飾。在某些實(shí)施方案中，多肽缺失、插入和/或置換至少一個(gè)但不超過(guò)50、30、20、15、10、8、5或3個(gè)天然序列的氨基酸。本文所用的應(yīng)用于某個(gè)對(duì)象的術(shù)語(yǔ)"天然"指該對(duì)象可在自然界中找到。例如，存在于可從自然界來(lái)源分離到的生物體(包括病毒)、且未被人們?cè)趯?shí)驗(yàn)室中或者以其他方式有意修飾的多肽或多核苷酸序列是天然的。本文所用的術(shù)語(yǔ)"有效連接"指組分處于允許它們以其預(yù)定方式發(fā)揮功能的關(guān)系之中。例如，與編碼序列"有效連接"的控制序列如此連接，使得在與控制序列相容的條件下，編碼序列的表達(dá)得以實(shí)現(xiàn)。本文所用的術(shù)語(yǔ)"控制序列"指可實(shí)現(xiàn)它們所連接的編碼序列的表達(dá)和加工的多核苷酸序列。取決于宿主生物體，這種控制序列的種類可能不同。根據(jù)某些實(shí)施方案，原核生物的控制序列可包括啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄終止序列。根據(jù)某些實(shí)施方案，真核生物的控制序列可包括啟動(dòng)子、一種或多種增強(qiáng)子和轉(zhuǎn)錄終止序列。在某些實(shí)施方案中，"控制序列"可包括前導(dǎo)序列和/或融合伴侶序列(fosionpartnersequence)。本文所指的術(shù)語(yǔ)"多核苷酸"意指長(zhǎng)度為至少IO個(gè)威基的聚合形式的核苷酸。在某些實(shí)施方案中，堿基可為核糖核酸或脫氧核糖核酸或任何一類型的核苷酸的修飾形式。該術(shù)語(yǔ)包括單鏈和雙鏈形式的DNA。本文所指術(shù)語(yǔ)"寡核苷酸"包括通過(guò)天然和/或非天然寡核苷酸鍵連接在一起的天然的和修飾的核苷酸。寡核苷酸是多核苷酸的子集，通常包含200個(gè)磁基或更少威基的長(zhǎng)度。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長(zhǎng)度為10-60個(gè)威基。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸的長(zhǎng)度為12、13、14、15、16、17、18、19或20-40個(gè)堿基。寡核苦酸可以是單鏈或雙鏈，例如用于構(gòu)建基因突變體。寡核苷酸可以是有義或反義寡核苷酸。術(shù)語(yǔ)"天然核苷酸"包括脫氧核糖核酸和核糖核酸。術(shù)語(yǔ)"修飾核苷酸，，包括帶有修飾或取代糖基等的核苷酸。術(shù)語(yǔ)"寡核苷酸鍵"包括寡核苷酸鍵如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代磷酸酯、二硒代磷酸酯、苯胺基硫代磷酸酯(phosphoroanilothioate)、苯胺基磷酸酯(phoshoraniladate)、氨基磷酸酯等。參見(jiàn)例如LaPlanche等，Nucl.AcidsRes.,14:9081(1986);Stec等，J.Am.Chem.Soc.,106:6077(1984);Stein等，Nucl.AcidsRes.,16:3209(1988);Zon等，Anti-CancerDrugDesign,6:539(1991);Zon等，OligonucleotidesandAnalogs:APracticalApproach,第87-108頁(yè)(F.Eckstein編輯，OxfordUniversityPress,OxfordEngland(1991》；Stec等，美國(guó)專利笫5,151,510號(hào)；UMmann和Peyman,ChemicalReviews,90:543(1990)，對(duì)于任何目的這些文獻(xiàn)的^Hf內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。在某些實(shí)施方案中，寡核苷酸可包括用于檢測(cè)的標(biāo)記?？赏ㄟ^(guò)^^知的方法容易地計(jì)算相關(guān)多肽的一致性和相似性。這種方法包括但不限于以下文獻(xiàn)中描述的方法ComputationalMolecularBiology,Lesk,A.M.(編輯)，OxfordUniversityPress,NewYork(1988);Biocomputing:InformaticsandGenomeProjects,Smith,D.W.(編輯),AcademicPress,NewYork(1993);ComputerAnalysisofsequenceData,Part1,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.(編輯)，HumanaPress,NewJersey(1994);SequenceAnalysisinMolecularBiology,vonHeinje,G.,AcademicPress(1987);SequenceAnalysisPrimer,Gribskov，M.和Devereux,J.(編輯)，M.StocktonPress,NewYork(1991);及Carillo等，SI4M丄^p/z^Ma仇，48:1073(1988)。某些一致性測(cè)定方法被設(shè)計(jì)成在受試序列之間產(chǎn)生最大配對(duì)。一致性測(cè)定方法在可公開(kāi)獲得的計(jì)算機(jī)程序中有描述。測(cè)定兩個(gè)序列之間一致性的計(jì)算機(jī)程序方法包括但不限于GCG程序包，包括GAP(Devereux等，AW.12:387(1984);GeneticsComputerGroup,UniversityofWisconsin,Madison,WI、BLASTP、BLASTN和FASTA(Altschul等，A/o/.說(shuō)o/.,215:403-410(1990》。BLASTX程序可從美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation,NCBI)和其他來(lái)源(SL/4Sr手,,Altschul等NCB/NLM/NIHBethesda,MD20894;Altschul等，出處同上(1990))公開(kāi)獲得。也可用著名的SmithWaterman算法測(cè)定一致性。某些用以比對(duì)兩個(gè)氨基酸序列的比對(duì)方案可能導(dǎo)致兩個(gè)序列中只有較短一段區(qū)域配對(duì)，而這個(gè)小的比對(duì)區(qū)域可具有非常高的序列一致性，盡管兩個(gè)全長(zhǎng)序列之間并沒(méi)有顯著的關(guān)系。因此，在某些實(shí)施方案中，選定的比對(duì)方法(GAP程序)將導(dǎo)致Jf爭(zhēng)越靶多肽的至少50個(gè)連續(xù)氨基酸的比對(duì)。例如，使用GAP計(jì)算機(jī)算法(GeneticsComputerGroup,UniversityofWisconsin,Madison,WI),比對(duì)兩個(gè)待測(cè)定序列一致性百分率的多肽，以對(duì)它們各自的氨基酸進(jìn)行最佳配對(duì)("配對(duì)范圍"，由算法確定)。在某些實(shí)施方案中，空位開(kāi)放罰分(計(jì)算為3乘以平均對(duì)角線；"平均對(duì)角線"是所用的比較矩陣的對(duì)角線的平均值；"對(duì)角線"是由具體比較矩陣分配給各個(gè)完全氨基酸配對(duì)的分?jǐn)?shù)或數(shù)值)和空位拓展罰分(其通常為空位開(kāi)放罰分的十分之一)，以及比較矩陣如PAM250或BLOSUM62與算法一起使用。在某些實(shí)施方案中，算法中也使用標(biāo)準(zhǔn)的比較矩陣(PAM250比較矩陣參見(jiàn)Dayhoff等,爿^wo/PraW"&we"ce""t/泣n/c加M,5(3)(1978);BLOSUM62比較矩陣參見(jiàn)Henikoff等，尸rac.iVa".Sc/美國(guó)，89:10915-10919(1992))。在某些實(shí)施方案中，用于多肽序列比較的參數(shù)包括以下算法Needleman等,Mo/.歷o/.,48:443-453(1970);比4交矩陣Henikoff等，出處同上(1992)的BLOSUM62;空位罰分12空位長(zhǎng)度罰分4相似性閾值0[O76]GAP程序可使用以上參數(shù)。在某些實(shí)施方案中，上述參數(shù)是使用GAP算法進(jìn)行多肽比較的默認(rèn)參數(shù)(末端空位無(wú)罰分)。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含這樣的重鏈，其包含的可變區(qū)包含與選自SEQIDNO:25,27，29,31,33，35,37,39,41和43的氨基酸序列有至少90%—致性的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含這樣的重鏈，其包含的可變區(qū)包含與選自SEQIDNO:25，27,29，31,33,35,37，39,41和43的氨基酸序列有至少95%一致性的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含這樣的重鏈，其包含的可變區(qū)包含與選自SEQIDNO:25,27,29,31,33,35,37,39,41和43的氨基酸序列有至少99%—致性的#^酸序列。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含這樣的輕鏈，其包含的可變區(qū)包含與選自SEQIDNO:24,26,28,30,32,34,36,38,40和42的氨基酸序列有至少90%—致性的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含這樣的輕鏈，其包含的可變區(qū)包含與選自SEQIDNO:24,26,28,30,32,34,36,38,40和42的氨基酸序列有至少95%一致性的氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含這樣的輕鏈，其包含的可變區(qū)包含與選自SEQIDNO:24,26,28,30,32,34,36,38,40和42的氨基酸序列有至少99%—致性的氨基酸序列。本文所用的二十種常見(jiàn)氨基酸及其縮寫遵循常規(guī)用法。參見(jiàn)Immunology—ASynthesis,(第2版，E.S.Golub和D.R.Gren(編輯)，SinauerAssociates,Sunderland,Mass,(1991)),對(duì)于4壬何目的其通過(guò)引用結(jié)合到本文中。二十種常見(jiàn)氨基酸的立體異構(gòu)體(例如D-氛基酸)、非天然氨基酸如a-,a-二取代氨基酸、N-烷基氛基酸、乳酸及其他非常見(jiàn)氨基酸也可以作為本發(fā)明多肽的合適組分。非常見(jiàn)氨基酸的實(shí)例包括4-羥脯氨酸、y-羧基谷氨酸、s-N,N,N-三甲基賴氨酸、s-N-乙酰賴氨酸、O-磷酸絲氨酸、N-乙酰絲氨酸、N-曱酰曱硫氨酸、3-曱基組氨酸、5-羥賴氨酸、cj-N-曱基精氨酸及其他類似的氨基酸和亞氨基酸(例如4-雍脯氨酸)。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)用法和慣例，在本文所用的多肽符號(hào)中，左手方向是氨基末端方向，右手方向是羧基末端方向。類似地，除非另有指定，單鏈多核苷酸序列的左手末端是5'末端；雙鏈多核苷酸序列的左手方向稱為5'方向。新生RNA轉(zhuǎn)錄物的5'至3'添加方向稱為轉(zhuǎn)錄方向；DNA鏈上具有與RNA相同的序列且位于RNA轉(zhuǎn)錄物的5'末端的5'的序列區(qū)域稱為"上游序列"；DNA鏈域稱為"下游序列"。保守氨基酸置換可包括非天然氨基酸殘基，其通過(guò)化學(xué)肽合成而不是通過(guò)在生物體系中合成而摻入。這些保守氨基酸置換包括肽模擬物和氛基酸部分的其他顛倒或反向形式。根據(jù)共同的側(cè)鏈性質(zhì)，可將天然殘基分類如下1)疏水性殘基正亮氨酸,Met,Ala,Val,Leu,Ile;2)中性親水性殘基Cys,Ser,Thr,Asn,Gln;3)酸性殘基:Asp,Glu;4)堿性殘基His,Lys,Arg;5)影響鏈方向的殘基:Gly,Pro;6)芳族殘基:Trp,Tyr,Phe。例如，非保守置換可包括這些類別中的某一類別的成員與另一類別的成員互換。這種置換殘基可被引入到人抗體中與非人抗體同源的區(qū)域，或者被引入到分子中的非同源區(qū)域。根據(jù)某些實(shí)施方案，在造成這種變化時(shí)，可考慮氨基酸的親水性指數(shù)。根據(jù)每種氨基酸的疏水性和電荷特征，給予其親水性指數(shù)。它們?yōu)楫惲涟彼?+4.5);纈氨酸(+4.2);亮氨酸(+3.8);苯丙氨酸(+2.8);半胱氨酸/胱氨酸(+2.5);曱硫氨酸(+1.9);丙氨酸(+1.8);甘氨酸(-0.4);蘇氨酸(-0.7);絲氨酸(-0.8);色氨酸(-0.9);酪氨酸(-1.3);脯氨酸(-1.6);組氨酸(-3.2);谷氨酸(-3.5);谷氨酰胺(-3.5);天冬氨酸(-3.5);天冬酰胺(-3.》；賴氨酸(-3.9);及精氨酸(-4.5)。親水性氨基酸指數(shù)在賦予蛋白質(zhì)活性生物功能方面的重要性為本領(lǐng)域所認(rèn)識(shí)。Kyte等乂.Mo/.S/o/.，157:105-131(1982)。已知可用某些氨基酸置換具有類似親水性指數(shù)或分?jǐn)?shù)的其他氨基酸，且仍保持類似的生物活性。在根據(jù)親水性指數(shù)造成這種變化時(shí)，在某些實(shí)施方案中，包括其親水性指數(shù)在土2之內(nèi)的氨基酸置換。在某些實(shí)施方案中，包括其親水性指數(shù)在土l之內(nèi)的氨基酸置換，還在某些實(shí)施方案中，包括其親水性指數(shù)在士0.5之內(nèi)的氨基酸置換。本領(lǐng)域還認(rèn)識(shí)到，可根據(jù)親水性有效地造成相似氨基酸的置換，特別是在所創(chuàng)建的生物功能性蛋白質(zhì)或肽意在用于免疫學(xué)實(shí)施方案中的情況下，猶如本發(fā)明的情況。在某些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)的由其鄰近氨基酸的親水性所決定的最大局部平均親水性與其免疫原性和抗原性相關(guān)，即與該蛋白質(zhì)的生物性質(zhì)相關(guān)。已給這些氨基酸殘基分配以下親水性值精氨酸(+3.0);賴氨酸(+3.0);天冬氨酸(+3.0±1);谷氨酸(+3.0±1);絲氨酸(+0.3);天冬酰胺(+0.2);谷氨酰胺(+0.2);甘氨酸(0);蘇氨酸(-0.4);脯氨酸(-0.5±1);丙氨酸(-0.5);組氨酸(-0.》；半胱氨酸(-1.0);曱硫氨酸(-1.3);纈氨酸(-1.5);亮氨酸(-1.8);異亮氨酸(-1.8);酪氨酸(-2.3);苯丙氨酸(-2.5)和色氨酸(-3.4)。在根據(jù)類似的親水性值造成變化時(shí)，在某些實(shí)施方案中，包括其親水性值在土2之內(nèi)的氨基酸置換，在某些實(shí)施方案中，包括其親水性值在土l之內(nèi)的氨基酸置換，還在某些實(shí)施方案中，包括其親水性值在±0.5之內(nèi)的氨基酸置換。還可根據(jù)親水性從一級(jí)氛基酸序列鑒別表位。這些區(qū)域也稱為"表位核心區(qū)"。示例性的氨基酸置換在表I中顯示。<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>技術(shù)人員使用公知的技術(shù)，將能夠確定本文提出的多肽的合適變體。在某些實(shí)施方案中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過(guò)以認(rèn)為對(duì)活性不重要的區(qū)域?yàn)槟繕?biāo)，鑒別可改變而又不破壞活性的合適分子區(qū)域。在某些實(shí)施方案中，能夠鑒別在類似多肽中保守的殘基和分子部分。在某些實(shí)施方案中，甚至對(duì)于生物活性或?qū)τ诮Y(jié)構(gòu)具有重要性的區(qū)域也可進(jìn)行保守氨基酸置換，而又不破壞生物活性或者對(duì)多肽的結(jié)構(gòu)產(chǎn)生不利影響。另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員可檢閱有關(guān)鑒別類似多肽中對(duì)活性或結(jié)構(gòu)重要的殘基的結(jié)構(gòu)-功能研究。根據(jù)這種比較研究，能夠預(yù)測(cè)出蛋白質(zhì)中氨基酸殘基的重要性，其對(duì)應(yīng)于類似蛋白質(zhì)中對(duì)活性或結(jié)構(gòu)重要的氨基酸殘基。本領(lǐng)域技術(shù)人員可為這種預(yù)測(cè)重要的氨基酸殘基選捧在化學(xué)上類似的氛基酸置換。本領(lǐng)域技術(shù)人員還能夠參照類似多肽中的三維結(jié)構(gòu)，對(duì)三維結(jié)構(gòu)和氨基酸序列進(jìn)行分析。根據(jù)這種信息，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參照抗體的三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)其氨基酸殘基的排列。在某些實(shí)施方案中，本領(lǐng)域技術(shù)人員可選擇不對(duì)預(yù)測(cè)位于蛋白質(zhì)表面的氨基酸殘基造成基團(tuán)變化，因?yàn)檫@種殘基可能參與與其他分子的重要相互作用。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以產(chǎn)生出在各期望氨基酸殘基處包含單個(gè)氨基酸置換的試驗(yàn)變體。然后可以使用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的活性測(cè)定法對(duì)變體進(jìn)行篩選?？梢杂眠@種變體來(lái)收集有關(guān)合適變體的信息。例如，如果發(fā)現(xiàn)特定氨基酸殘基的變化導(dǎo)致活性破壞、不合乎需要的降低或者不合適的活性，則可以避免帶有這種變化的變體。換句話說(shuō)，根據(jù)從這種常規(guī)實(shí)驗(yàn)收集到的信息，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易地確定應(yīng)避免單獨(dú)或者與其他突變一起出現(xiàn)進(jìn)一步置換的氨基酸。有許多科學(xué)出版物已致力于預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)。參見(jiàn)Moult，Cww.Op./"說(shuō)oto:/2.7:422-427(1996);Chou等，說(shuō)oc/2ewz'W/y13(2):222-245(1974);Chou等，5/oc/2em&^yU3(2):211-222(1974);Chou等，4咖.五wzymo/.ie/af.4reo5Afo/.說(shuō)o/.47:45-148(1978);Chou等，爿朋.歷oc/2ew.47:251-276(1979)及Chou等，5/op/y^/.26:367-384(1979)。此外，目前也有計(jì)算機(jī)程序可幫助預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)。一種預(yù)測(cè)二級(jí)結(jié)構(gòu)的方法基于同源性建模。例如，序列一致性大于30%或者相似性大于40%的兩種多肽或蛋白質(zhì)通常具有類似的拓樸結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)(PDB)的近期發(fā)展已使二級(jí)結(jié)構(gòu)(包括多肽或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)內(nèi)部的潛在折疊數(shù)目)的預(yù)測(cè)性提高。參見(jiàn)Holm等，M/c/.爿c"."仏27(1):244-247(1999)。有人提出(Bre皿er等，Curr.Op.Struct.BIol.7(3):369-376(1997))，在指定的多肽或蛋白質(zhì)中，折疊的數(shù)目有限，且一旦解析了臨界數(shù)量的結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)將明顯變得更加準(zhǔn)確。另外的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)方法包括"串線算法(threading)"(Jones,Cwr.說(shuō)o/.7(3):377-87(1997);Sippl等，&n/"MM4(1):15-19(1996》、"序型分析"(Bowie等，Sc/e"ce253:164-170(1991);Gribskov等，A/eA.五"z;;m.183:146-159(1990);Gribskov等，Proc.Ato.爿cfldSd.84(13):4355-4358(1987》和"進(jìn)化連鎖，，(參見(jiàn)Holm,出處同上(1999);及Brenner,出處同上(1997))。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物變體包括糖基化變體，與親本多肽的氨基酸序列相比，其中的糖基化位點(diǎn)數(shù)目和/或類型已改變。在某些實(shí)施方案中，比起天然蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)變體包含的N-連接糖基化位點(diǎn)的數(shù)目更多或更少。N-連接糖基化位點(diǎn)特征為以下序列Asn-X-Ser或Asn-X-Thr,其中標(biāo)記為X的氨基酸殘基可以是除脯氨酸之外的任何氨基酸殘基。產(chǎn)生這種序列的氨基酸殘基置換為N-連接碳水化合物鏈的添加提供潛在的新位點(diǎn)?；蛘?，消除該序列的置換將會(huì)除去現(xiàn)有的N-連接碳水化合物鏈。還提供了N-連接碳7jc化合物鏈的重排，其中除去一個(gè)或多個(gè)N-連接糖基化位點(diǎn)(通常為天然N-連接糖基化位點(diǎn))，且創(chuàng)建一個(gè)或多個(gè)新的N-連接位點(diǎn)。另外的優(yōu)選抗體變體包括半胱氨酸變體，比起親本氨基酸序列，其中有一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基缺失或被另一種氨基酸(例如絲氨酸)置換。當(dāng)抗體必須重折疊成生物活性構(gòu)象時(shí)(比如在不可溶包涵體分離之后)，半胱氨酸變體可能有用。半胱氨酸變體具有的半胱氨酸殘基通常比天然蛋白質(zhì)要少，且通常為偶數(shù)個(gè)，以使由非配對(duì)半胱氨酸產(chǎn)生的相互作用減到最少。根據(jù)某些實(shí)施方案，氨基酸置換為如下(1)降低對(duì)蛋白酶解的易感性，(2)降低對(duì)氧化作用的易感性，(3)改變形成蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)合親和性，(4)改變結(jié)合親和性和/或(5)賦予或修飾這種多肽的其他生理化學(xué)或功能性質(zhì)。根據(jù)某些實(shí)施方案，在天然序列中(在某些實(shí)施方案中，在形成分子間接觸的結(jié)構(gòu)域以外的多肽部分)，可以造成單個(gè)或多個(gè)氨基酸置換(在某些實(shí)施方案中，保守氨基酸置換)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，保守氨基酸置換通常并不實(shí)質(zhì)上改變親本序列的結(jié)構(gòu)特征(例如置換氨基酸不應(yīng)傾向于使親本序列中出現(xiàn)的螺旋斷裂，或者使表征親本序列的其他類型的二級(jí)結(jié)構(gòu)破壞)。本領(lǐng)域公認(rèn)的多肽二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的實(shí)例描述于Proteins,StructuresandMolecularPrinciples(Creighton(編l專)，W.H.Freeman和Company,NewYork(1984));IntroductiontoProteinStructure(C.Branden和J.Tooze(編輯)，GarlandPublishing,NewYork,N.Y.(1991);及Thornton等，Atowre3^4:105(1991)，以上各文獻(xiàn)通過(guò)引用結(jié)合到本文中。術(shù)語(yǔ)"衍生物"指包括除氨基酸插入、缺失或置換之外的化學(xué)修飾的分子。在某些實(shí)施方案中，衍生物包含共價(jià)修飾，包括但不限于與聚合物、脂質(zhì)或者其他有機(jī)或無(wú)機(jī)部分化學(xué)成鍵。在某些實(shí)施方案中，化學(xué)修飾的特異性結(jié)合物的循環(huán)半壽期比不經(jīng)化學(xué)修飾的特異性結(jié)合物更長(zhǎng)。在某些實(shí)施方案中，化學(xué)修飾的特異性結(jié)合物對(duì)期望細(xì)胞、組織和/或器官的靶向能力提高。在某些實(shí)施方案中，衍生的特異性結(jié)合物被共價(jià)修飾，以包含一種或多種水溶性聚合物附屬物，包括但不限于聚乙二醇、聚氧乙二醇或聚丙二醇。參見(jiàn)例如美國(guó)專利笫4,640,835號(hào)、笫4,496,689號(hào)、笫4,301,144號(hào)、第4,670,417號(hào)、笫4,791,192和笫4,179,337號(hào)。在某些實(shí)施方案中，衍生的特異性結(jié)合物包含一種或多種聚合物，包括但不限于單甲氧基-聚乙二醇、葡聚糖、纖維素或其他碳水化合物基聚合物、聚-(N-乙烯吡咯烷酮)-聚乙二醇、聚丙二醇均聚物、環(huán)氧丙烷/環(huán)氧乙烷共聚物、聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)和聚乙烯醇，以及這種聚合物的混合物。在某些實(shí)施方案中，衍生物用聚乙二醇(PEG)亞單位共《介修飾。在某些實(shí)施方案中，一種或多種水溶性聚合物連接在衍生物的一個(gè)或多個(gè)特定位置(例如氨基末端)。在某些實(shí)施方案中，一種或多種水溶性聚合物隨機(jī)連接到衍生物的一個(gè)或多個(gè)側(cè)鏈。在某些實(shí)施方案中，用PEG改進(jìn)特異性結(jié)合物的治療能力。在某些實(shí)施方案中，用PEG改進(jìn)人源化抗體的治療能力。某些這種方法在例如美國(guó)專利第6,133,426號(hào)中有討論，對(duì)于任何目的該專利通過(guò)引用結(jié)合到本文中。本文所用的術(shù)語(yǔ)"多肽片段"指具有氨基末端和/或羧基末端缺失的多肽。在某些實(shí)施方案中，片段為至少5-478個(gè)氨基酸長(zhǎng)?？梢岳斫?，在某些實(shí)施方案中，片段為至少5、6、8、10、14、20、50、70、100、150、200、250、300、350、400或450個(gè)氨基酸長(zhǎng)。肽類似物常作為性質(zhì)與模板肽類似的非肽藥物用于制藥工業(yè)中。這些類型的非肽化合物稱為"肽模擬物"。Fauchere,J.Adv.DrugRes.15:29(1986);Veber和Freidinger,TINS第392頁(yè)(1985);及Evans等，J.Med.Chem.30:1229(1987),對(duì)于任何目的它們通過(guò)引用結(jié)合到本文中。這種化合物通常是借助于計(jì)算機(jī)分子建模而被開(kāi)發(fā)出來(lái)的。在結(jié)構(gòu)上與治療有用肽類似的肽模擬物可用以產(chǎn)生類似的治療或預(yù)防效果。一般的說(shuō)，肽模擬物在結(jié)構(gòu)上與模式多肽(即具有某種生化性質(zhì)或藥理活性的多肽)如人抗體相類似，但具有一個(gè)或多個(gè)肽鍵通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法任選由選自以下的鍵替換-CH2-NH--、-CH2-S-、-CH2-CH2—、—CI^CH-(順式和反式)、—COCH2—、—CH(OH)CH2—和國(guó)國(guó)CH2SO—。用同一類型的D-氨基酸對(duì)共有序列的一個(gè)或者多個(gè)氨基酸進(jìn)行系統(tǒng)性置換(例如D-賴氨酸置換L-賴氨酸)，在某些實(shí)施方案中可用以產(chǎn)生更穩(wěn)定的肽。另外，包含共有序列或基本相同的共有序列變體的約束(constrained)肽可用本領(lǐng)域知的方法來(lái)產(chǎn)生(Rizo和Gierasch,Ann.Rev.Biochem.61:387(1992),對(duì)于任何目的其通過(guò)引用結(jié)合到本文中)；例如，通過(guò)添力。能夠形成分子內(nèi)二硫橋而使肽環(huán)化的內(nèi)部半胱氨酸殘基來(lái)產(chǎn)生。"抗體，'或"抗體肽"指完整抗體或其結(jié)合片段，后者與完整抗體竟?fàn)幪禺愋越Y(jié)合。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合片段由重組DNA技術(shù)產(chǎn)生。在另外的實(shí)施方案中，結(jié)合片段通過(guò)對(duì)完整抗體進(jìn)行酶法或化學(xué)法切割來(lái)產(chǎn)生。結(jié)合片段包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、Fv和單鏈抗體。術(shù)語(yǔ)"重鏈"包括具有足夠的可變區(qū)序列以帶來(lái)靶標(biāo)特異性的任何多肽。術(shù)語(yǔ)"輕鏈"包括具有足夠的可變區(qū)序列以帶來(lái)靶標(biāo)特異性的任何多肽。全長(zhǎng)重鏈包括一個(gè)可變區(qū)結(jié)構(gòu)域Vh及三個(gè)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域CHl、Ch2和Ch3。VH結(jié)構(gòu)域位于多肽的氨基末端，Ch3結(jié)枸域位于羧基末端。本文所用的術(shù)語(yǔ)"重鏈"涵括全長(zhǎng)重鏈及其片段。全長(zhǎng)輕鏈包括一個(gè)可變區(qū)結(jié)構(gòu)域VL和一個(gè)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域CL。如同重鏈一樣，輕鏈的可變區(qū)結(jié)構(gòu)域位于多肽的氨基末端。本文所用的術(shù)語(yǔ)"輕鏈"涵括全長(zhǎng)輕鏈及其片段。Fab片段由一條輕鏈及一條重鏈的CH1和可變區(qū)組成。Fab分子的重鏈不能與另一個(gè)重鏈分子形成二硫鍵。Fab，片段含有一條輕鏈和一條重鏈，所述重鏈含有CH1和CH2結(jié)構(gòu)域之間的更多恒定區(qū)，這樣在兩條重鏈之間可形成鏈間二硫鍵，從而形成F(ab')2分子。Fv區(qū)包含源自重鏈和輕鏈的可變區(qū)，但缺少恒定區(qū)。單鏈抗體是其中重鏈和輕鏈可變區(qū)已由柔性連接基團(tuán)連接而形成單一多肽鏈的Fv分子，所述單一多肽鏈形成抗體結(jié)合區(qū)。在國(guó)際專利申請(qǐng)公開(kāi)WO88/01649和美國(guó)專利笫4,946,778號(hào)和第5,260,203號(hào)中對(duì)單鏈抗體有更詳細(xì)的描述。術(shù)語(yǔ)"可變區(qū)"或"可變結(jié)構(gòu)域"指抗體輕鏈和/或重鏈的一部分，通常包括重鏈中的大約120-130個(gè)氨基末端氨基酸和輕鏈中的約100-110個(gè)氨基末端氨基酸。在某些實(shí)施方案中，不同抗體的可變區(qū)在氨基酸序列方面差別甚大，甚至在同一物種的抗體中也是如此。抗體的可變區(qū)通常決定具體抗體對(duì)其靶標(biāo)的特異性。術(shù)語(yǔ)"免疫功能性免疫球蛋白片段"指包含至少免疫球蛋白重鏈和免疫球蛋白輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域的多肽片段。在某些實(shí)施方案中，免疫功能性免疫球蛋白片段能夠結(jié)合配體，防止配體與其受體結(jié)合，從而中斷由配體結(jié)合受體產(chǎn)生的生物響應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，免疫功能性免疫球蛋白片段能夠結(jié)合受體，防止配體與其受體結(jié)合，從而中斷由配體結(jié)合受體產(chǎn)生的生物響應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，免疫功能性免疫球蛋白片段能夠結(jié)合受體，并使該受體活化或滅活。在某些實(shí)施方案中，"多特異性"或"多功能性"抗體之外的二價(jià)抗體通常理解為其各個(gè)結(jié)合位點(diǎn)均相同。當(dāng)過(guò)量的特異性結(jié)合物降低結(jié)合到反受體的受體量達(dá)至少約20%、40%、60%、80%、85%或更高(在體外竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定中測(cè)出)時(shí)，則特異性結(jié)合物基本抑制配體對(duì)受體的吸附。術(shù)語(yǔ)"靶標(biāo)"指能夠被特異性結(jié)合物結(jié)合的分子或分子部分。在某些實(shí)施方案中，靶標(biāo)可具有一個(gè)或多個(gè)表位。在某些實(shí)施方案中，靶標(biāo)是—抗原。術(shù)語(yǔ)"表位"包括能夠特異性結(jié)合免疫球蛋白或T細(xì)胞受體的任何多肽決定簇。在某些實(shí)施方案中，表位決定簇包括分子的化學(xué)活性表面基團(tuán)，如氨基酸、糖側(cè)鏈、磷?；蚧酋；?，而且在某些實(shí)施方案中，可具有特異性三維結(jié)構(gòu)特征和/或特異性電荷特征。表位是抗原的被抗體結(jié)合的區(qū)域。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)抗體在蛋白質(zhì)和/或大分子的復(fù)合混合物中優(yōu)先識(shí)別其草巴抗原時(shí)，則說(shuō)它特異性結(jié)合抗原。在某些實(shí)施方案中當(dāng)解離常數(shù)《1nM時(shí)，在某些實(shí)施方案中當(dāng)解離常數(shù)《100nM時(shí)，在某些實(shí)施方案中當(dāng)解離常數(shù)SlOnM時(shí)，則說(shuō)抗體特異性結(jié)合抗原。術(shù)語(yǔ)"作用物，，在本文中用以表示化學(xué)化合物、化學(xué)化合物的混合物、生物大分子或從生物材料獲得的提取物。本文所用的術(shù)語(yǔ)"標(biāo)記"或"標(biāo)記的"指將可檢測(cè)標(biāo)記的摻入，例如通過(guò)摻入放射性標(biāo)記氨基酸或者將可被標(biāo)記親和素(例如鏈霉親和素，其包含熒光標(biāo)記或者可通過(guò)光學(xué)或比色方法檢測(cè)的酶活性)檢測(cè)到的生物素部分連接到多肽來(lái)?yè)饺搿Ｔ谀承?shí)施方案中，標(biāo)記還具有治療性。各種標(biāo)記多肽和糖蛋白的方法為本領(lǐng)域所7>知且可佳_用。多肽標(biāo)記的實(shí)例包括但不限于以下放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、1251、1311)、熒光標(biāo)記(例如FITC、羅丹明、磷化鑭系(lanthanidephosphors))、酶標(biāo)記(例如辣根過(guò)氧化物酶、P-半乳糖苷酶、熒光素酶、堿性磷酸酶)、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、生物素基團(tuán)、由笫二報(bào)道分子識(shí)別的預(yù)定多肽表位(例如亮氨酸拉鏈對(duì)序列、第二抗體的結(jié)合位點(diǎn)、金屬結(jié)合結(jié)構(gòu)域、表位標(biāo)簽)。在某些實(shí)施方案中，標(biāo)記通過(guò)各種長(zhǎng)度的間隔臂連接，以減少潛在的空間位阻。本文所用的術(shù)語(yǔ)"生物樣品"包括但不限于來(lái)自生命體或以前的生命體的任何數(shù)量的物質(zhì)。這種生物體包括但不限于人類、小鼠、猴、大鼠、兔和其他動(dòng)物。這種物質(zhì)包括但不限于血液、血清、尿、細(xì)胞、器官、紐織、—骨、骨髓、淋巴結(jié)和皮膚?！g(shù)語(yǔ)"癌癥，，包括但不限于實(shí)體瘤和血液惡性癌癥。示例性的癌癥包括但不限于乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、頭和頸鱗狀細(xì)胞癌、遺傳性和散發(fā)性乳頭狀腎癌、白血病、淋巴瘤、里-費(fèi)綜合征、惡.性胸膜間皮瘤、黑素瘤、多發(fā)性骨髓瘤、非小細(xì)胞性肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、小細(xì)胞性肺癌、滑膜肉瘤、甲狀腺癌和膀胱移行細(xì)胞癌。術(shù)語(yǔ)"HGF活性"包括HGF的任何生物效應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，HGF活性是Met-HGF活性。在某些實(shí)施方案中，HGF活性是Met非依賴性HGF活性。術(shù)語(yǔ)"Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)"包括HGF與Met受體的相互作用。術(shù)語(yǔ)"Met-HGF活性"包括由Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生的任何生物活性。示例性的活性包括但不限于神經(jīng)誘生、肝再生、傷口愈合、生長(zhǎng)、侵襲、形態(tài)分化、胚胎發(fā)育、分散、增殖、凋亡、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)性、轉(zhuǎn)移(metastisis)、移動(dòng)、細(xì)胞縣著、整聯(lián)蛋白成簇、樁蛋白的磷酸化、黏著斑的形成及異常Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致的癌癥。術(shù)語(yǔ)"異常Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)"包括其中Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)未能刺激任何Met-HGF活性的任何情形(要是正常地進(jìn)行信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，則會(huì)導(dǎo)致這種活性)。異常Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)也包括其中Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致的Met-HGF活性小于正常信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)出現(xiàn)的活性的任何情形。異?；钚砸舶ㄆ渲蠱et-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致的Met-HGF活性大于正常信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)出現(xiàn)的活性的任何情形。異常Met-HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)可導(dǎo)致例如某些癌癥。術(shù)語(yǔ)"Met非依賴性HGF活性"指受HGF影響、但不依賴于HGF與Met受體結(jié)合的生物活性。這種活性包括但不限于受HGF與其他受體的相互作用影響的生物活性和受HGF通過(guò)其他途徑(例如Ron或met/ron異源二聚體)影響的生物活性?！?117]術(shù)語(yǔ)"異常HGF活性"指其中HGP活性—高于或低于其本來(lái)應(yīng)有活性的任何情形。在某些情形中，異常HGF活性由異常HGF信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致。在某些情形中，異常HGF活性由高于其本來(lái)應(yīng)有濃度的HGF濃度導(dǎo)致。在某些實(shí)施方案中，異常HGF活性由低于其本來(lái)應(yīng)有濃度的HGF濃度導(dǎo)致。本文所用的術(shù)語(yǔ)"藥物"指當(dāng)將其正確給予患者時(shí)，能夠誘導(dǎo)期望的治療效果的化學(xué)化合物或組合物。本文所用的術(shù)語(yǔ)"調(diào)節(jié)劑"是改變或更改分子的活性或功能的化合物。例如，比起不存在調(diào)節(jié)劑時(shí)觀測(cè)到的活性或功能的大小，調(diào)節(jié)劑可引起分子的某些活性或功能的大小提高或降低。在某些實(shí)施方案中，調(diào)節(jié)劑是抑制劑，其降低分子的至少一種活性或功能的大小。某些示例性的分子活性和功能包括但不限于結(jié)合親和力、酶活性和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。某些示例性的抑制劑包括但不限于蛋白質(zhì)、肽、抗體、peptibody、碳7Jc化合物或有機(jī)小分子。Peptibody描述于例如美國(guó)專利笫6，660,843號(hào)(對(duì)應(yīng)于PCT申請(qǐng)WOO1/83525)。本文所用的"基本純凈的"意指作為主要種類而存在的對(duì)象種類(即以摩爾計(jì)，它比組合物中任何其他單獨(dú)種類都豐富得多)。在某些實(shí)施方案中，基本純化的部分是其中對(duì)象種類占所有存在的大分子種類的至少約50%(以摩爾計(jì))的組合物。在某些實(shí)施方案中，基80%、85%、90%、95%或99%。在某些實(shí)施方案中，對(duì)象種類被純化至基本均一(通過(guò)常規(guī)檢測(cè)方法不能在組合物中檢測(cè)到污染種類)，其中組合物基本由單一大分子種類組成。術(shù)語(yǔ)"患者"包括人類和動(dòng)物對(duì)象。某些示例性的特異性結(jié)合物在某些情況下，HGF結(jié)合Met受體，誘導(dǎo)Met磷酸化。在某些情況下，正常HGF-誘導(dǎo)的Met磷酸化調(diào)節(jié)多種細(xì)胞過(guò)程。在某些情況下，異常Met-HGF活性與許多人類疾病狀況相關(guān)。例如，在某些情況下，過(guò)多的HGF活性與某些癌癥相關(guān)。因此，在某些情況下，調(diào)節(jié)HGF活性在治療上可能有用。在某些實(shí)施方案中，用HGF特異性結(jié)合物使HGF活性量從不正常的高水平降下來(lái)。在某些實(shí)施方案中，將HGF活性從不正常的高水平降下來(lái)降低致瘤活性和減低癌癥的嚴(yán)重性。根據(jù)某些實(shí)施方案，用HGF特異性結(jié)合物治療癌癥。在某些實(shí)施方案中，用HGF特異性結(jié)合物預(yù)防癌癥。在某些實(shí)施方案中，用HGF特異性結(jié)合物治療其中HGF活性正常的癌癥。在這種癌癥中，例如將HGF活性降至正常水平以下可提供治療效果。在某些實(shí)施方案中，用HGF特異性結(jié)合物調(diào)節(jié)至少一種Met-HGF活性。在某些實(shí)施方案中，用HGF特異性結(jié)合物調(diào)節(jié)至少一種Met非依賴性HGF活性。在某些實(shí)施方案中，用不只一種HGF特異性結(jié)合物調(diào)節(jié)HGF活性。在酵母人工染色體(YAC)中，克隆和重建兆堿基大小的人基因座并將它們引入到小鼠種系的能力，為闡明非常大的或粗略作圖的基因座的功能成分以及產(chǎn)生有用的人類疾病模型提供有利的方法。此外，應(yīng)用這種技術(shù)用人的等價(jià)物置換小鼠基因座，對(duì)發(fā)育過(guò)程中人基因產(chǎn)物的表達(dá)和調(diào)節(jié)、其與其他系統(tǒng)的聯(lián)系以及其在疾病？i發(fā)和發(fā)展中的參與情況提供T家入了解。這種策略的一種重要實(shí)際應(yīng)用是小鼠體液免疫系統(tǒng)的"人源化，，。將人免疫球蛋白(Ig)基因座引入到其中內(nèi)源Ig基因已失活的小鼠，為研究抗體的程序表達(dá)和裝配的基礎(chǔ)機(jī)制以及抗體在B細(xì)胞發(fā)育中的作用提供了機(jī)會(huì)。此外，這種策略可為完全人單克隆抗體(MAb)的生產(chǎn)提供來(lái)源。在某些實(shí)施方案中，預(yù)期完全人抗體將小鼠Mab或小鼠衍生Mab所固有的免疫原性反應(yīng)和變應(yīng)性反應(yīng)減至最少，并因此在某些實(shí)施方案中，提高所給予的抗體的效力和安全性。在某些實(shí)施方案中，完全人抗體可用于治療慢性或復(fù)發(fā)性人類疾病，如癌癥、瘧疾或增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病，所述疾病的治療可能涉及反復(fù)給予抗體。可以用大的人Ig基因座片段工程改造小鼠抗體生產(chǎn)缺陷的小鼠品系，使該小鼠不產(chǎn)生小鼠抗體而產(chǎn)生人抗體。大的人Ig片段可保持較大的可變基因多樣性以及抗體生產(chǎn)和表達(dá)的正確調(diào)節(jié)。通過(guò)充分利用小鼠抗體多樣化和選擇的機(jī)制及對(duì)人蛋白質(zhì)的免疫耐受性的缺乏，這些小鼠品系中再現(xiàn)的人抗體庫(kù)可產(chǎn)生對(duì)任何目的抗原(包括人抗原)具有高度親和性的完全人抗體。用雜交瘤技術(shù)可生產(chǎn)和選擇出具有期望特異性的抗原特異性人MAb。某些示例性的方法描述于WO98/24893、美國(guó)專利笫5,545,807號(hào)、EP546073B1和EP546073Al。在某些實(shí)施方案中，可將來(lái)自人類以外物種的恒定區(qū)與人可變區(qū)一起使用。天然抗體的結(jié)構(gòu)天然抗體的結(jié)構(gòu)單元通常包含四聚體。每個(gè)這種四聚體通常由完全相同的兩對(duì)多肽鏈組成，每對(duì)鏈具有一條全長(zhǎng)"輕"鏈(在某些實(shí)施方案中，約為25kDa)和一條全長(zhǎng)"重，，鏈(在某些實(shí)施方案中，約為50-75kDa)。每條鏈的氨基末端部分通常包括含約100-110個(gè)或者更多個(gè)氨基酸、通常負(fù)責(zé)抗原識(shí)別的可變區(qū)。每條鏈的羧基末端通常確定負(fù)責(zé)效應(yīng)子功能的—恒定區(qū)。人輕鏈通常分為K輕鏈和x輕鏈。重鏈通常分為p、S、y、a或s重鏈，并分別確定抗體的同種型為IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。IgG有幾個(gè)亞類，包括但不限于IgGl、IgG2、IgG3和IgG4。IgM的亞類包括但不限于IgMl和IgM2。IgA類似地可細(xì)分成亞類，包括但不限于IgAl和IgA2。通常在全長(zhǎng)輕鏈和重鏈內(nèi)部，可變區(qū)和恒定區(qū)通過(guò)含約12個(gè)或者更多個(gè)氨基酸的"J"區(qū)連接，重鏈同時(shí)還包括含約10個(gè)或更多個(gè)氨基酸的"D"區(qū)。參見(jiàn)例如FundamentalImmunology,第7章(Paul,W.(編輯)，笫2版，RavenPress,N.Y.(1989))(對(duì)于任何目的其通過(guò)引用整體結(jié)合到本文中)。每個(gè)輕/重鏈對(duì)的可變區(qū)通常形成抗原結(jié)合位點(diǎn)。在某些實(shí)施方案中，抗體重鏈在抗體輕鏈不存在的情況下結(jié)合抗原。在某些實(shí)施方案中，抗體輕鏈在抗體重鏈不存在的情況下結(jié)合抗原。在某些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合區(qū)在抗體輕鏈不存在的情況下結(jié)合抗原。在某些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合區(qū)在抗體重鏈不存在的情況下結(jié)合抗原。在某些實(shí)施方案中，個(gè)別的可變區(qū)在其他可變區(qū)不存在的情況下特異性結(jié)合抗原。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)解析抗體的結(jié)構(gòu)和/或解析抗體-配體復(fù)合物的結(jié)構(gòu)，來(lái)實(shí)現(xiàn)CDR的明確描繪和包含抗體結(jié)合位點(diǎn)的殘基的鑒定。在某些實(shí)施方案中，這可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的多種技術(shù)的任何一種(如X—射線晶體—學(xué))—來(lái)實(shí)現(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，可采用各種分析方法鑒定或模擬CDR區(qū)。這種方法的實(shí)例包括但不限于Kabat定義、Chothia定義、AbM定義和接觸定義。Kabat定義是抗體中的殘基的編號(hào)標(biāo)準(zhǔn)，通常用來(lái)鑒定CDR區(qū)。參見(jiàn)例如Johnson和Wu,Mic/e,c爿cz^s尺^(guò)，28:214-8(2000)。Chothia定義是類似于Kabat定義，但Chothia定義考慮了某些結(jié)構(gòu)環(huán)區(qū)的位置。參見(jiàn)例如Chothia等,JAfo/5z'o/,196:901-17(1986);Chothia等，A^wM,342:877-83(1989)。AbM定義使用OxfordMolecularGroup開(kāi)發(fā)的模擬抗體結(jié)構(gòu)的一整套計(jì)算機(jī)程序。參見(jiàn)例如Martin等，尸roc扁加"c,(^縛86:9268-9272(1989);爿Z)M，"麵/7*戸gra附wo^fe/ZwgKar/aWeieg/owso/^4/7"6o力'm,Oxford,英國(guó)；OxfordMolecular,Ltd。AbM定義使用知識(shí)數(shù)據(jù)庫(kù)和從頭(abinitio)方法的組合，從抗體的一級(jí)結(jié)構(gòu)模擬其三級(jí)結(jié)構(gòu)，所述從頭方法例如描述于Samudrala等,/46/w'"o尸ro〖e//75^rwcrt^e7Ve<i/c"owL^z'"gaCow6z>e<i州e匿c/2/ca/yl/7/wac/z,PROTEINS,Structure,FunctionandGeneticsSuppl.3:194-198(1999)。接觸定義基于對(duì)現(xiàn)有的復(fù)雜晶體結(jié)構(gòu)的分析。參見(jiàn)例如MacCallum等，JM/說(shuō)o/,5:732-45(19%)。按慣例，重鏈中的CDR區(qū)通常稱為Hl、H2和H3，并按從氨基末端到羧基末端的方向連續(xù)編號(hào)。輕鏈中的CDR區(qū)通常稱為L(zhǎng)l、L2和L3，并按從氨基末端到羧基末端的方向連續(xù)編號(hào)。雙特異性或雙功能性抗體雙特異性或雙功能性抗體通常是具有兩個(gè)不同的重鏈/輕鏈對(duì)和兩個(gè)不同結(jié)合位點(diǎn)的人工雜交抗體。雙特異性抗體可通過(guò)多種方法來(lái)生產(chǎn)，包括但不限于雜交瘤的融合或Fab'片段的連接。參見(jiàn)例如Songsivilai等，Clin.Exp.Immunol.79:315-321(1990);Kostelny等，J.Immunol148:1547-1553(1992)?？贵w的制備根據(jù)某些實(shí)施方案，本發(fā)明涵括某些特異性結(jié)合HGF的抗體。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)用抗原免疫來(lái)生產(chǎn)抗體。術(shù)語(yǔ)"抗原"指用于動(dòng)物中以產(chǎn)生能夠結(jié)合該抗原和/或另一種靶標(biāo)的抗體的分子。在某些實(shí)施方案中，可用全長(zhǎng)HGF、HGF的可溶形式、HGF的剪接變體形式或它們的片段進(jìn)行免疫來(lái)生產(chǎn)抗體。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體可以是多克隆抗體或者單克隆抗體，和/或可以是重組抗體。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明抗體是例如通過(guò)免疫能夠產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物而制備的人抗體(參見(jiàn)例如PCT申請(qǐng)公開(kāi)WO93/12227)。在某些實(shí)施方案中，可采用某些策略控制抗體的固有性質(zhì)，如抗體對(duì)其靶標(biāo)的親和力。這種策略包括但不限于使用編碼抗體的多核苷酸分子的位點(diǎn)特異性誘變或隨4幾誘變來(lái)產(chǎn)生抗體變體。在某些實(shí)施方案中，抗體產(chǎn)生后，篩選顯示期望變化(例如親和力提高或下降)的抗體變體。在某些實(shí)施方案中，在誘變策略中作為目標(biāo)的氨基酸殘基是CDR中的氨基酸殘基。在某些實(shí)施方案中，強(qiáng)可變結(jié)構(gòu)域的構(gòu)架區(qū)中的氨基酸作為目標(biāo)。在某些實(shí)施方案中，已顯示這種構(gòu)架區(qū)促成某些抗體的耙標(biāo)結(jié)合性質(zhì)。參見(jiàn)例如Hudson，Cw〃(9;/"說(shuō)c^c/,9:395-402(1999)及其中的參考文獻(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)使隨機(jī)誘變或位點(diǎn)特異性誘變局限于CDR中的高變位點(diǎn)，來(lái)產(chǎn)生更小的和更有效地得到篩選的抗體變體文庫(kù)，所迷高變位點(diǎn)是對(duì)應(yīng)于易于在體細(xì)胞親和成熟過(guò)程中易于發(fā)生突變的區(qū)域的位點(diǎn)。參見(jiàn)例如Chowdhury和Pastan,A^w"說(shuō)o&c/2,17:568-572(1999)及其中的參考文獻(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，可用某些類型的DNA元件鑒定高變位點(diǎn)，包括但不限于某些直接和反向重復(fù)序列、某些共有序列、某些二級(jí)結(jié)構(gòu)和某些回文序列。例如，這種可用來(lái)鑒定高變位點(diǎn)的DNA元件包括但不限于四威基序列，其包含噤呤(A或G)，接著是鳥(niǎo)噪呤(G),接著是嘧咬(C—或T)，再接著是腺苷或酪氨酸(A或T)(即A/G-G-C/T-A/T)。可用來(lái)鑒定高變位點(diǎn)的DNA元件的另一個(gè)實(shí)例是絲氨酸密碼子；A-G-C/T。在某些實(shí)施方案中，抗體是人源化的。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體在人類中基本上是非免疫原性的。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體的對(duì)把標(biāo)的親和力與其來(lái)源物種的抗體基本相同。參見(jiàn)例如美國(guó)專利第5,530,101號(hào)、美國(guó)專利第5,693,761號(hào)；美國(guó)專利第5,693,762號(hào)；美國(guó)專利第5,585,089號(hào)。在某些實(shí)施方案中，筌定了抗體可變結(jié)構(gòu)域的氨基酸，所述氛基酸可加以修飾，而不減少抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的天然親和力，同時(shí)又降低其免疫原性。參見(jiàn)例如美國(guó)專利笫5,766,886號(hào)和笫5,869,69號(hào)。在某些實(shí)施方案中，通常通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法設(shè)計(jì)抗體的修飾，以實(shí)現(xiàn)抗體對(duì)粑標(biāo)的結(jié)合親和力提高和/或降低抗體在接受者中的免疫原性。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體經(jīng)修飾除去糖基化位點(diǎn)，以提高抗體對(duì)其關(guān)聯(lián)抗原的親和力。參見(jiàn)例如Co等，Mo//mww"o/30:1361-1367(1993)。在某些實(shí)施方案中，用例如"改形(reshaping)"、"超嵌合(hyperchimerization)"或"鑲嵌(veneering)/改面(resurfacing)"的技術(shù)產(chǎn)生人源化抗體。參見(jiàn)例如Vaswami等，爿""a/so/^4//ergy,&/www2o/81:105(1998);Roguska等，5"g/"ew9:895-904(1996);及美國(guó)專利笫6,072,035號(hào)。在某些這種實(shí)施方案中，這種技術(shù)通常通過(guò)減少外來(lái)殘基的數(shù)目來(lái)降低抗體的免疫原性，但并不妨礙反復(fù)給予抗體后出現(xiàn)抗獨(dú)特型和抗同種異型反應(yīng)。某些其他用以降寸氐免疫原性的方法描述于例如Gilliland等，J/ww朋o/62(6):3663-71(1999)。在某些情況下，人源化抗體導(dǎo)致抗原結(jié)合能力損失。在某些實(shí)施方案中，人源化抗體發(fā)生"回復(fù)突變，，。在某些這種實(shí)施方案中，人源化抗體發(fā)生突變，將一個(gè)或多個(gè)見(jiàn)于供體抗體的氨基酸殘基包括在其中。參見(jiàn)例如Saldanha等,Mo//wm朋o/36:709-19(1^9)。在某些實(shí)施方案中，抗HGF抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)可移植到來(lái)自同一物種或另一物種的構(gòu)架區(qū)(FR)。在某些實(shí)施方案中，抗HGF抗體的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)可移植到共有人FR。為創(chuàng)建共有人FR，在某些實(shí)施方案中，比對(duì)來(lái)自幾種人重鏈或輕鏈氨基酸序列的FR，以鑒定共有氨基酸序列。在某些實(shí)施方案中，用來(lái)自不同重鏈或輕鏈的FR置換抗HGF抗體重鏈或輕鏈的FR。在某些實(shí)施方案中，HGF抗體重鏈和輕鏈的FR中的稀有氨基酸不被置換，其余的FR氨基酸則被置換。稀有氨基酸是特殊的氛基酸，其通常在FR中不能找到它們的位置。在某些實(shí)施方案中，抗HGF抗體的移植可變區(qū)可與不同于抗HGF抗體恒定區(qū)的恒定區(qū)一起使用。在某些實(shí)施方案中，移植可變區(qū)是單鏈Fv抗體的一部分。CDR移植描述于例如美國(guó)專利第6,180,370號(hào)、笫6,054,297號(hào)、笫5,693,762號(hào)、第5,859,205號(hào)、第5,693,761號(hào)、第5,565,332號(hào)、第5,585,089號(hào)和第5,530,101號(hào)，及Jones等，A^w^321:522-525(1986);Riechmann等，胸訓(xùn)，332:323-327(1988);Verhoeyen等，Scze"ce239:1534-1536(1988),Winter,F五AS丄eto430:92-94(1998),它們對(duì)于任何目的通過(guò)引用結(jié)合到本文中。在某些實(shí)施方案中，用噬菌體呈現(xiàn)技術(shù)產(chǎn)生單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，這種技術(shù)產(chǎn)生完全人單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，編碼單一Fab或Fv抗體片段的多核苷酸在噬菌體顆粒的表面上表達(dá)。參見(jiàn)例如Hoogenboom等,JA/o/說(shuō)o/227:381(1991);Marks等，JMo/說(shuō)o/222:581(1991);美國(guó)專利第5,885,793號(hào)。在某些實(shí)施方案中，篩選噬菌體，以鑒定對(duì)靶標(biāo)具有親和力的抗體片段。因此，某些這種方法通過(guò)將抗體片段庫(kù)(repertoire)呈現(xiàn)于絲狀噬菌體的表面上，隨后通過(guò)它們對(duì)靶標(biāo)的結(jié)合來(lái)選擇噬菌體，從而模擬免疫選擇。在某些這種程序中，分離出高親和力功能性激動(dòng)性抗體片段。在某些這種實(shí)施方案中，通過(guò)從外周血淋巴細(xì)胞克隆天然重排的人V基因，創(chuàng)建人抗體基因的完全庫(kù)。參見(jiàn)例如Mullinax等，尸racA^/爿cad87:8095-8099(1990)。根據(jù)某些實(shí)施方案，通過(guò)利用轉(zhuǎn)基因小鼠制備本發(fā)明抗體，所述轉(zhuǎn)基因小鼠插入了很大一部分的人抗體產(chǎn)生基因組，但被造成在產(chǎn)生內(nèi)源鼠抗體方面出現(xiàn)缺陷。因而這種小鼠能夠產(chǎn)生人免疫多求蛋白分子和抗體，而在產(chǎn)生鼠免疫球蛋白分子和抗體方面出現(xiàn)缺陷。用以獲得這種結(jié)果的技術(shù)在本說(shuō)明書中公開(kāi)的專利、專利申請(qǐng)和參考文獻(xiàn)中有公開(kāi)。在某些實(shí)施方案中，可采用如在PCT申請(qǐng)公開(kāi)WO98/24893中或者在Mendez等，NatureGenetics15:146-156(1997)中公開(kāi)的方法，以上文獻(xiàn)對(duì)于任何目的通過(guò)引用結(jié)合到本文中。根據(jù)某些實(shí)施方案，如下生產(chǎn)對(duì)HGF有特異性的完全人單克隆抗體。用目的抗原如HGF免疫含人免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，從小鼠獲得表達(dá)抗體的淋巴細(xì)胞(如B細(xì)胞)。將這種回收細(xì)胞與髓樣細(xì)胞系融合，制備無(wú)限增殖化雜交瘤細(xì)胞系，篩選和選擇這種雜交瘤細(xì)胞系，以鑒定生產(chǎn)對(duì)目的抗原有特異性的抗體的雜交瘤細(xì)胞系。在某些實(shí)施方案中，4是供生產(chǎn)對(duì)HGF有特異性的抗體的雜交瘤細(xì)胞系的生產(chǎn)。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)在宿主細(xì)胞中表達(dá)重組DNA,或者通過(guò)在雜交瘤細(xì)胞中表達(dá)，來(lái)生產(chǎn)完全人抗體。在某些實(shí)施方案中，用上述噬菌體展示技術(shù)生產(chǎn)抗體。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)在體外將人脾細(xì)胞(B細(xì)胞或T細(xì)胞)暴露于抗原，然后將已暴露細(xì)胞重建于免疫削弱的小鼠(例如SCID或nod/SCID)，來(lái)生產(chǎn)完全人抗體。參見(jiàn)例如Brams等，J/www"o/,160:2051-2058(1998);Carballido等,A^《6:103-106(2000)。在某些這種方法中，將人胚胎組織移植到SCID小鼠(SCID-hu)中導(dǎo)致長(zhǎng)期血細(xì)胞生成和人T-細(xì)胞發(fā)育。參見(jiàn)例如McCime等，Sc!e"ce241:1532-1639(1988);IfVersen等，&w/ww做o/8:243-248(1996)。在某些情況下，這種嵌合小鼠中的體液免疫應(yīng)答依賴于人T-細(xì)胞在動(dòng)物中的共發(fā)育。參見(jiàn)例如Martensson等，/mm朋o/83:1271-179(1994)。在某些方法中，將人外周血淋巴細(xì)胞移植到SCID小鼠中。參見(jiàn)例如Mosier等,A^wre335:256-259(1988)。在某些這種實(shí)施方案中，當(dāng)這種移植細(xì)胞用致敏劑如葡萄球菌腸毒素A(SEA)處理，或者用抗人CD40單克隆抗體處理時(shí)，檢測(cè)出高水平的B細(xì)胞生產(chǎn)。參見(jiàn)例如Martensson等，/www"o/84:224-230(1995);Murphy等，說(shuō)ood86:1946-1953(1995)。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)以下雜交瘤的至少之一生產(chǎn)本發(fā)明抗體:1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.1、1.74.1、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物以10-s、10力或10^M的Ko結(jié)合HGF。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物以大約0.099-0.79nM的解離常數(shù)(KD)(動(dòng)力學(xué)法測(cè)定)結(jié)合HGF(圖6A)。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物以低于10pM至大約54pM的Kd(平衡/溶液法測(cè)定)結(jié)合HGF(圖6B)。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含至少IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgA、IgD和IgM同種型之一的免疫球蛋白分子。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含人k輕鏈和/或人重鏈。在某些實(shí)施方案中，重鏈?zhǔn)荌gGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgA、IgD或IgM同種型。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中得到克隆表達(dá)。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含不同于任何IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgE、IgA、IgD和IgM同種型恒定區(qū)的恒定區(qū)。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含人K輕鏈和人IgGl重鏈。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含人K輕鏈和a人IgG2重鏈。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含人K輕鏈和人IgG3、IgG4、IgE、IgA、IgD或IgM重鏈。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包含連接到既非IgGl同種型恒定區(qū)也非IgG2同種型恒定區(qū)的恒定區(qū)的抗體可變區(qū)。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中得到克隆表達(dá)。例如，"保守氨基酸置換"可能涉及用非天然氨基酸殘基置換天然氨基酸殘基，結(jié)果對(duì)該位置的氨基酸殘基的極性或電荷有極少或沒(méi)有影響。此外，如以前對(duì)"丙氨酸掃描誘變"所述，多肽中的任何天然殘基也可用丙氨酸置換。期望的氨基酸置換(無(wú)論是保守置換還是非保守置換)可由本領(lǐng)域技術(shù)人員在需要這種置換的時(shí)候進(jìn)行確定。在某些實(shí)施方案中，可用氨基酸置換來(lái)鑒別抗HGF抗體的重要?dú)埢?，或者提高或降低本文描述的抗HGF抗體的親和力。在某些實(shí)施方案中，可在雜交瘤細(xì)胞系以外的細(xì)胞系中表達(dá)本發(fā)明抗體。在某些實(shí)施方案中，可用編碼具體抗體的序列轉(zhuǎn)化合適的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞。根據(jù)某些實(shí)施方案，可用任何已知的用以將多核苷酸引入到宿主細(xì)胞中的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)化，包括例如將多核苷酸包裝在病毒中(或包裝到病毒載體中)并用病毒(或載體)轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主細(xì)胞，或者通過(guò)本領(lǐng)域7>知的轉(zhuǎn)染方法來(lái)實(shí)現(xiàn)，如美國(guó)專利第4,399,216號(hào)、笫4,912,040號(hào)、第4,740,461號(hào)和第4,959,455號(hào)(所有這些專利對(duì)于任何目的通過(guò)引用結(jié)合到本文中)所例示的轉(zhuǎn)染方法。在某些實(shí)施方案中，所用的轉(zhuǎn)化方法可取決于待轉(zhuǎn)化的宿主。用以將異源多核苷酸引入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的方法是本領(lǐng)域公知的，包括但不限于葡聚糖介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、磷酸鈣沉淀、polybrene介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、原生質(zhì)體融合、電穿孔法、多核香酸包入脂質(zhì)體中及DNA直接顯微注射到細(xì)胞核中?？捎米鞅磉_(dá)宿主的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系是本領(lǐng)域公知的，包括但不限于可獲自美國(guó)典型培養(yǎng)物中心(ATCC)的無(wú)限增殖化細(xì)胞系，包括但不限于中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、幼倉(cāng)鼠腎(BHK)細(xì)胞、猴腎細(xì)胞(COS)、人肝細(xì)胞癌細(xì)胞(例如HepG2)和多種其他細(xì)月包系。在某些實(shí)施方案中，可通過(guò)確定哪種細(xì)胞系具有高表達(dá)水平且產(chǎn)生具有組成性HGF結(jié)合性質(zhì)的抗體，來(lái)選擇細(xì)胞系。適宜的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞表達(dá)載體是/〉知的。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合物包括一種或多種多肽。在某些實(shí)施方案中，可利用多種表達(dá)載體/宿主系統(tǒng)之任何一種來(lái)表達(dá)編碼多肽的多核苷酸分子。這種宿主系統(tǒng)包括但不限于孩t生物，如用重組噬菌體、質(zhì)?；蝠ちNA表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的細(xì)菌；用酵母表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的酵母；用病毒表達(dá)載體(例如桿狀病毒)傳染的昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)；用病毒表達(dá)載體(例如花椰菜花葉病毒(CaMV)、煙草花葉病毒(TMV))轉(zhuǎn)染或者用細(xì)菌表達(dá)載體(例如Ti或pBR322質(zhì)粒)轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞系統(tǒng)；或者動(dòng)物細(xì)胞系統(tǒng)。在某些實(shí)施方案中，多肽在酵母中重組表達(dá)。某些這種實(shí)施方案使用市售表達(dá)系統(tǒng)，例如畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)(Invitrogen,SanDiego,CA)，按廠商說(shuō)明書進(jìn)行操作。在某些實(shí)施方案中，這種系統(tǒng)依靠pre-pro-alpha序列來(lái)指導(dǎo)分泌。在某些實(shí)施方案中，插入片段的轉(zhuǎn)錄在用曱醇誘導(dǎo)時(shí)由乙醇氧化酶(A0X1)啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)。在某些實(shí)施方案中，分泌多肽從酵母生長(zhǎng)培養(yǎng)基純化。在某些實(shí)施方案中，用以從酵母生長(zhǎng)培養(yǎng)基純化多肽的方法與用以從細(xì)菌上清液和哺乳動(dòng)物細(xì)胞上清液純化多肽的方法相同。在某些實(shí)施方案中，將編碼多肽的核酸克隆到桿狀病毒表達(dá)載體中，如pVL1393(PharMingen,SanDiego,CA)。在某些實(shí)施方案中，可按照廠商說(shuō)明書(PharMingen)使用這種載體，來(lái)傳染無(wú)sF9蛋白培養(yǎng)基中的草地夜蛾(S/oi/op&ra/n/g^erafa)細(xì)胞，產(chǎn)生重組多肽。在某些實(shí)施方案中，用肝素-瓊脂糖柱(Pharmacia)從這種培喬基中純化和濃縮多肽。在某些實(shí)施方案中，多肽在昆蟲系統(tǒng)中表達(dá)。某些用于多肽表達(dá)的昆蟲系統(tǒng)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。在一個(gè)這種系統(tǒng)中，苜蓿銀紋夜蛾(^4wtogra//^ca/z/om/o)核型多角體病毒(AcNPV)用作載體，在草地夜蛾細(xì)胞或粉紋夜蛾(7y7'c/2o;/^/力幼蟲中表達(dá)外來(lái)基因。在某些實(shí)施方案中，編碼多肽的核酸分子可插入到病毒的非必需基因中，例如插入到多角體蛋白基因中，并置于該基因的啟動(dòng)子的控制之下。在某些實(shí)施方案中，成功插入核酸分子將使非必需基因失活。在某些實(shí)施方案中，所述失活導(dǎo)致出現(xiàn)可檢測(cè)的特征。例如，多角體蛋白基因的失活導(dǎo)致產(chǎn)生缺乏外被蛋白的病毒。在某些實(shí)施方案中，可用重組病毒傳染草地夜蛾細(xì)胞或粉紋夜蛾幼蟲。參見(jiàn)例如Smith等，《/F,ra/46:584(1983);Engelhard等,Proc淑^cadSdfUS4)91:3224-7(1994)。在某些實(shí)施方案中，制備于細(xì)菌細(xì)胞中的多肽作為細(xì)菌中的不可溶包涵體而生產(chǎn)。在某些實(shí)施方案中，離心收集包含這種包涵體的宿主細(xì)胞；在0.15MNaCl,10mMTris,pH8,1mMEDTA中洗滌；并在室溫下用0.1mg/ml溶菌酶(Sigma,St.Louis,MO)處理15分鐘。在某些實(shí)施方案中，超聲澄清裂解液，以12,000Xg離心沉淀細(xì)胞碎片IO分鐘。在某些實(shí)施方案中，將含多肽的沉淀重新懸浮于50mMTris,pH8和10mMEDTA;在50%甘油中分層；并以6000Xg離心30分鐘。在某些實(shí)施方案中，所述沉淀可重新懸浮于標(biāo)準(zhǔn)的無(wú)Mg—和CaW磷酸緩沖鹽溶液(PBS)。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)在變性SDS聚丙烯酰胺凝膠中分級(jí)分離重新懸浮的沉淀，進(jìn)一步純化多肽(參見(jiàn)例如Sambrook等，出處同上)。在某些實(shí)施方案中，可將這種凝膠浸泡于0.4MKC1中，以使蛋白質(zhì)顯現(xiàn)，可在無(wú)SDS的電泳用緩沖液中切除和電洗脫蛋白質(zhì)。4艮據(jù)某些實(shí)施方案，在細(xì)菌中生產(chǎn)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)融合蛋白，其為可溶性蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，用GST純化模塊(Pharmacia)純化這種GST融合蛋白。在某些實(shí)施方案中，需要使某些多肽"重折疊"。在某些實(shí)施方案中，這種多肽用本文討論的某些重組系統(tǒng)來(lái)生產(chǎn)。在某些實(shí)施方案中，多肽被"重折疊"和/或氧化，以形成所需的三級(jí)結(jié)構(gòu)和/或產(chǎn)生二硫鍵。在某些實(shí)施方案中，這種結(jié)構(gòu)和/或鍵與多肽的某些生物活性有關(guān)。在某些實(shí)施方案中，用本領(lǐng)域公知的多種方法的任何一種來(lái)實(shí)現(xiàn)重折疊。示例性的方法包括但不限于在離液劑存在下使溶解的多肽物質(zhì)暴露于通常高于7的pH。示例性的離液劑是胍。在某些實(shí)施方案中，重折疊/氧化溶液還含有還原劑和該還原劑的氧化形式。在某些實(shí)施方案中，還原劑及其氧化形式以能產(chǎn)生允許二硫化物改組發(fā)生的特定氧化還原電勢(shì)的比例存在。在某些實(shí)施方案中，這種改組允許形成半胱氨酸橋。示例性的氧化還原偶包括但不限于半胱氨酸/胱胺、谷胱甘肽/二硫雙GSH、氯化銅、二硫蘇糖醇DTT/二噻烷DTT和2-巰基乙醇(bME)/二硫-bME。在某些實(shí)施方案中，用共溶劑提高重折疊的效率。示例性的共溶劑包括但不限于甘油、各種分子量的聚乙二醇和精氨酸。在某些實(shí)施方案中，可充分純化多肽。某些蛋白質(zhì)純化技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。在某些實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)純化涉及將多肽級(jí)份與非多肽級(jí)4分進(jìn)行粗略的分級(jí)分離。在某些實(shí)施方案中，用色語(yǔ)技術(shù)和/或電泳技術(shù)純化多肽。示例性的純化方法包括但不限于用石克酸銨沉淀；用PEG沉淀；免疫沉淀；熱變性后再離心；色謙法，包括但不限于親和色譜(例如蛋白質(zhì)-A-瓊脂糖)、離子交換色譜、排阻色語(yǔ)和反相色i普；凝膠過(guò)濾；羥磷灰石色譜；等電聚焦；聚丙烯酰胺凝膠電泳；以及這種技術(shù)和其他技術(shù)的組合。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)快速蛋白質(zhì)液相色譜或通過(guò)高壓液相色譜(HPLC)純化多肽。在某些實(shí)施方案中，可改變純化步驟或者可省略某些步驟，且仍成為制備相當(dāng)純多肽的合適方法。0168]在某些實(shí)施方案中，對(duì)多肽制劑的純化程度進(jìn)行定量。某些用以定量純化程度的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員7>知的。某些示例性的來(lái)估算制劑中多肽的量。某些示例性的用以估算多肽制劑的純化量的方法包括計(jì)算制劑的結(jié)合活性和將其與初始提取物的結(jié)合活性進(jìn)行比較。在某些實(shí)施方案中，這種計(jì)算的結(jié)果以"純化倍數(shù)"表示。用來(lái)表示結(jié)合活性量的單位取決于所進(jìn)行的具體測(cè)定。在某些實(shí)施方案中，多肽進(jìn)行部分純化。在某些實(shí)施方案中，可通過(guò)使用更少的純化步驟或者通過(guò)利用相同的一般純化方案的不同形式實(shí)現(xiàn)部分純化。例如，在某些實(shí)施方案中，采用HPLC儀進(jìn)行的陽(yáng)離子交換柱色i普較之采用低壓色譜系統(tǒng)的相同技術(shù)，通常會(huì)導(dǎo)致更高的"純化倍數(shù)"。在某些實(shí)施方案中，導(dǎo)致較低純化程度的方法在多肽的總回收率或者在保持多肽的結(jié)合活性方面可能有優(yōu)勢(shì)。在某些情況下，多肽的電泳遷移可能會(huì)隨SDS/PAGE的不同條件而變化，有時(shí)變化顯著。參見(jiàn)例如Capaldi等，說(shuō)0c/2ew說(shuō)op/^Wi^sCowm,76:425(1977)?？梢岳斫?，在不同的電泳條件下，純化的或者部分純化的多肽的表觀分子量可能不同。某些示例性的表位在某些實(shí)施方案中，提供抗-HGF抗體結(jié)合的表位(參見(jiàn)例如實(shí)施例8、圖IO和11以及SEQIDN0.164和165)。在某些實(shí)施方案中，可利用HGF表位防止抗-HGF抗體或特異性結(jié)合物與HGF的結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，可利用HGF表位降低抗-HGF抗體或特異性結(jié)合物與HGF的結(jié)合?？衫肏GF表位基本抑制抗-HGF抗體或特異性結(jié)合物與HGF的結(jié)合。當(dāng)過(guò)量的表位降低結(jié)合HGF的抗-HGF抗體或特異性結(jié)合物的量達(dá)至少約20%、40%、60%、80%、85%或更高時(shí)，則表位基本抑制抗-HGF抗體或特異性結(jié)合物與HGF的結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，可利用HGF表位結(jié)合抗-HGF抗體或特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，可利用HGF表位鑒定結(jié)合HGF的抗體或特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，可利用HGF表位分離結(jié)合HGF的抗體或特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，可利用HGF表位產(chǎn)生結(jié)合HGF的抗體或特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，可利用HGF表位作為免疫原，產(chǎn)生結(jié)合HGF的抗體或特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，可將HGF表位給予動(dòng)物，隨后可從該動(dòng)物獲得結(jié)合HGF的抗體。在某些實(shí)施方案中，可利用HGF表位千擾正常的HGF-Met信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。某些治療性用途在某些實(shí)施方案中，提供治療癌癥的方法，所述方法包括給予治療有效量的一種或多種HGF特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，提供治療癌癥的方法，所述方法包括給予治療有效量的一種或多種HGF特異性結(jié)合物和另一種治療物。在某些實(shí)施方案中，提供治療或預(yù)防癡疾的方法，所述方法包括給予治療有效量的一種或多種HGF特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，提供治療或預(yù)防瘧疾的方法，所迷方法包括給予治療有效量的一種或多種HGF特異性結(jié)合物和另一種治療物。在某些實(shí)施方案中，提供治療或預(yù)防增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病的方法，所述方法包括給予治療有效量的一種或多種HGF特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，提供治療或預(yù)防增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病的方法，所述方法包括給予治療有效量的一種或多種HGF特異性結(jié)合物和另一種治療物。在某些實(shí)施方案中，單獨(dú)給予HGF特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，在給予至少一種其他治療物之前先給予HGF特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，在給予至少一種其他治療物的同時(shí)給予HGF特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，在給予至少一種其他治療物之后再給予HGF特異性結(jié)合物。治療物包括但不限于至少一種其他的癌癥治療物。示例性的癌癥治療物包括但不限于放療和化療。本發(fā)明藥物組合物可在組合療法中給予，即與其他治療物組合給予。在某些實(shí)施方案中，組合療法包含能夠結(jié)合HGF的特異性結(jié)合物與至少一種抗血管生成劑的組合。治療物包括但不限于體外合成法制備的化學(xué)組合物、抗體、抗原結(jié)合區(qū)、放射性核素及它們的組合和綴合物。在某些實(shí)施方案中，治療物可用作激動(dòng)劑、拮抗劑、變構(gòu)調(diào)節(jié)劑或毒素。在某些實(shí)施方案中，治療物可起到抑制或刺激其靶標(biāo)的作用(例如受體或酶的激活或抑制)，從而促進(jìn)細(xì)胞死亡或阻止細(xì)胞生長(zhǎng)?；熤委煱ǖ幌抻诳闺狭鰟ǖ幌抻谕榛瘎?，包括氮芥類如氮芥、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、美法侖和苯丁酸氮芥；亞硝脲如卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)和司莫司汀(甲基-CCNU);Temodal(temozolamide)、氮丙咬/甲基蜜胺如三亞乙基蜜胺(TEM)、三亞乙基硫代磷酰胺(塞替派)、六甲基蜜胺(HMM,六甲蜜胺)；磺酸烷基酯如白消安；三嗪如達(dá)卡巴嗪(DTIC);抗代謝物，包括葉酸類似物如曱氨喋呤和三甲曲沙，嘧啶類似物如5-氟脲嘧啶(SFU)、氟脫氧尿苷、吉西他濱、胞嘧啶阿拉伯糖苷(AraC,阿糖胞苷)、5-阿扎胞香、2，2'-二氟脫氧胞苷，嘌呤類似物如6-巰基嘌呤、6-硫鳥(niǎo)嘌呤、硫唑嘌呤、2'-脫氧考福霉素(噴司他丁)、赤羥基壬基腺嘌呤(EHNA)、磷酸氟達(dá)拉濱和2-氯脫氧腺苷(克拉屈濱，2-CdA);天然產(chǎn)物，包括抗有絲分裂藥物如紫杉醇，長(zhǎng)春花生物堿，包括長(zhǎng)春堿(VLB)、長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春瑞濱、泰索帝、雌莫司汀和雌莫司汀磷酸酯；表鬼臼毒素(ppipodophylotoxins)如依托泊苷和替尼泊苷；抗生素如放線菌素D、道諾霉素(紅比霉素)、多柔比星、米托蒽醌、伊達(dá)比星、博來(lái)霉素、普卡霉素(光輝霉素)、絲裂霉素C和放線菌素；酶如L-天冬酰胺酶；生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物如a干擾素、IL-2、G-CSF和GM-CSF;miscellaneousagent,包括柏配位化合物如順賴和卡鉑，蒽二酮如米托蒽醌，取代尿素如鞋基脲，甲基肼衍生物，包括N-曱基肼(MIH)和丙卡巴肼，腎上腺皮質(zhì)抑制藥如米托坦(o,p'-DDD)和氨基格魯米特；激素和拮抗劑，包括腎上腺皮質(zhì)類固醇拮抗劑如潑尼松及等價(jià)物、地塞米松和氨基格魯米特；GemzarTM(吉西他濱)，孕酮如己酸羥孕酮、醋酸曱幾孕酮和醋酸曱地孕酮；雌激素如二乙基己烯雌酚和炔雌醇等價(jià)物；抗雌激素如他莫昔芬；雄激素，包括丙酸睪酮和氟曱睪酮/等價(jià)物；抗雄激素如氟他胺、促性腺素釋放激素類似物和亮丙立德；以及非類固醇抗雄激素如氟他胺。可與HGF特異性結(jié)合物一起給予的癌癥療法還包括但不限于靶向療法。靶向療法的實(shí)例包括但不限于使用治療性抗體。示例性的治療性抗體包括但不限于小鼠抗體、小鼠-人嵌合抗體、CDR-移植抗體、人源化抗體和完全人抗體，以及合成抗體，包括但不限于通過(guò)篩選抗體文庫(kù)選擇的抗體。示例性的抗體包括但不限于如下的抗體，其結(jié)合腫瘤細(xì)胞上存在的細(xì)胞表面蛋白Her2、CDC20、CDC33、翁蛋白樣糖蛋白和表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)，且任選對(duì)呈現(xiàn)這些蛋白質(zhì)的腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞靜止和/或細(xì)胞毒效應(yīng)。示例性的抗體還包括HERCEPTIN(曲妥單抗)(其可用來(lái)治療乳腺癌和其他形式的癌癥)、RITUXAN(利妥昔單抗)、ZEVALIN(替伊莫單抗)、GLEEVEC和LYMPHOCIDE(依帕珠單抗)(其可用來(lái)治療非何杰金氏淋巴瘤和其他形式的癌癥)。某些示例性的抗體還包括ERBITUX(IMC-C225);ertinolib(Iressa);BEXXAR(碘131托西莫單抗)；KDR(激酶結(jié)構(gòu)域受體)抑制劑；抗VEGF抗體和拮抗劑(例如AvastinTM和VEGAF-TRAP);抗VEGF受體抗體和抗原結(jié)合區(qū)；抗-Ang-l和Ang-2抗體和抗原結(jié)合區(qū)；抗Tie-2和其他Ang-l和Ang-2受體的抗體；Tie-2配體；抗Tie-2激酶抑制劑的抗體；以及Campathe(阿侖單抗)。在某些實(shí)施方案中，癌癥治療物是選擇性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的多肽，包括但不限于TW-相關(guān)多肽TRAIL。在某些實(shí)施方案中，癌癥治療物是減少血管生成的抗血管生成劑。某些這種治療物包括但不限于IL-8;Campath,B-FGF;FGF拮抗劑；Tek拮抗劑(Cerretti等，美國(guó)申請(qǐng)第2003/0162712號(hào)；Cerretti等，美國(guó)專利第6，413,932號(hào)和Cerretti等，美國(guó)專利第6,521,424號(hào)，以上各文獻(xiàn)對(duì)于任何目的通過(guò)引用結(jié)合到本文中)；抗-TWEAK劑(其包括但不限于抗體和抗原結(jié)合區(qū))；可溶性TWEAK受體拮抗劑(Wiley,美國(guó)專利第6,727,225號(hào))；拮抗整聯(lián)蛋白與其配體結(jié)合的ADAM解聯(lián)蛋白結(jié)構(gòu)域(Fanslow等，美國(guó)申請(qǐng)第2002/0042368號(hào))；抗-eph受體和抗-肝配蛋白抗體；抗原結(jié)合區(qū)或拮抗劑(美國(guó)專利第5,981,245號(hào)；第5,728,813號(hào)；笫5,969,110號(hào)；第6,596,852號(hào)；笫6,232,447號(hào)；笫6，057,124及其專利族成員)；抗-VEGF劑(例如特異性結(jié)合VEGF或可溶性VEGF受體或其配體結(jié)合區(qū)的抗體或抗原結(jié)合區(qū))如Avastin"^或VEGF-TRAP,抗-VEGF受體劑(例如特異性結(jié)合VEGF受體的抗體或抗原結(jié)合區(qū))，EGFR抑制劑(例如特異性結(jié)合EGFR的抗體或抗原結(jié)合區(qū))如panitumumab、TRESSA(gefitinib)、TARCEVA(erlotinib)，抗-Ang-l和抗-Ang-2劑(例如特異性結(jié)合Ang-l和Ang-2或它們的受體的抗體或抗原結(jié)合區(qū)，例如Tie-2/TEK)，抗-Tie-2激酶抑制劑(例如特異性結(jié)合和抑制生長(zhǎng)因子活性的抗體或抗原結(jié)合區(qū)，如肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF，也稱為分散因子)的拮抗劑，以及特異性結(jié)合其受體"c-met"的抗體或抗原結(jié)合區(qū))；抗-PDGF-BB拮抗劑；PDGF-BB配體的抗體和抗原結(jié)合區(qū)；以及PDGFR激酶抑制劑。在某些實(shí)施方案中，癌癥治療物是血管生成抑制劑。某些這種抑制劑包括但不限于SD-7784(Pfizer,美國(guó))；西侖吉肽(MerckKGaA,德國(guó)，EPO770622);pegaptanib八鈉，(GileadSciences,美國(guó))；Alphastatin,(BioActa,英國(guó))；M-PGA,(Celgene,美國(guó)，US5712291);伊洛馬司他，(Arriva,美國(guó)，US5892112);semaxanib，(Pfizer,美國(guó)，US5792783);vatalanib,(Novartis,瑞士)；2-甲氧基雌二醇，(EntreMed,美國(guó))；TLCELL-12,(Elan,愛(ài)爾蘭)；阿奈可他乙酸鹽，(Alcon,美國(guó))；alpha畫D148Mab,(Amgen,美國(guó))；CEP-7055,(Cephalon,美國(guó))；抗誦VnMab,(Crucell,荷蘭)DAC:抗血管生成劑，(ConjuChem，加拿大)；Angiocidin，(InKinePharmaceutical,美國(guó))；KM-2550,(KyowaHakko，日本)；SU-0879,(Pfizer,美國(guó))；CGP陽(yáng)79787,(Novartis,瑞士，EP970070);ARGENT技術(shù)，(Ariad,美國(guó))；YIGSR-Stealth，(Johnson&Johnson,美國(guó))；血纖蛋白原-E片段，(BioActa,英國(guó))；血管生成抑制劑，(Trigen,英國(guó))；TBC-1635,(EncysivePharmaceutical,美國(guó))；SC-236,(Pfizer,美國(guó))；ABT-567,(Abbott，美國(guó))；Metastatin,(EntreMed,美國(guó))；血管生成抑制劑，(Tripep,瑞典)；maspin，(Sosei,日本)；2-曱氧基雌二醇，(OncologySciencesCorporation,美國(guó))；ER-68203-00,(IVAX,美國(guó))；Benefin,(LaneLabs,美國(guó))；Tz-93,(Tsumura,日本)；TAN-1120,(Takeda,日本)；FR畫111142,(Fujisawa,日本,JP02233610);血小板因子4,(RepliGen,美國(guó)，EP407122);血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子拮抗劑，(Borean,丹麥)；癌癥療法，(南卡羅來(lái)納大學(xué)，美國(guó))；貝伐單抗(pINN),(Genentech,美國(guó));血管生成抑制劑，(SUGEN,美國(guó));XL784,(Exelixis,美國(guó));XL647,(Exelixis,美國(guó));MAb,a5p3整聯(lián)蛋白，第二代，(AppliedMolecularEvolution,美國(guó)和Medimmune,美國(guó))；基因療法，枧網(wǎng)膜病，(OxfordBioMedica，英國(guó))；enzastaurin鹽酸鹽(USAN),(Lilly,美國(guó))；CEP7055,(Cephalon,美國(guó)和Sanofi-Synthelabo,法國(guó))；BC1,(熱那亞癌癥研究院，意大利)；血管生成抑制劑，(Alchemia,澳大利亞)；VEGF拮抗劑，(Regeneron,美國(guó))；rBPI21和BPI-衍生的抗血管生成劑，(XOMA,美國(guó))；PI88,(Progen,澳大利亞)；西侖吉肽(pINN),(MerckKGaA,德國(guó)；慕尼黑技術(shù)大學(xué)，德國(guó)，Scripps臨床研究基金會(huì)，美國(guó))；西妥昔單抗(INN),(Aventis,法國(guó))；AVE8062,(Ajinomoto,曰本)；AS1404,(癌癥研究實(shí)驗(yàn)室，新西蘭)；SG292,(Telios,美國(guó))；內(nèi)皮抑制素，(波士頓兒童醫(yī)院，美國(guó))；ATN161,(Attenuon,美國(guó))；血管生長(zhǎng)抑素，(波士頓兒童醫(yī)院，美國(guó))；2-曱氧基雌二醇，(波士頓兒童醫(yī)院，美國(guó))；ZD6474,(AstraZeneca,英國(guó))；ZD6126,(AngiogenePharmaceuticals,英國(guó))；PPI2458,(Praecis,美國(guó))；AZD9935，(AstraZeneca,英國(guó))；AZD2171，(AstraZeneca,英國(guó))；vatalanib(pINN),(Novartis,瑞士和ScheringAG,德國(guó));組織因子途徑抑制劑，(EntreMed,美國(guó))；pegaptanib(Pinn),(GileadSciences,美國(guó))；xanthorrhizol,(延世大學(xué)，韓國(guó))；疫苗，基于基因，VEGF-2,(Scripps臨床研究基金會(huì)，美國(guó))；SPV5.2,(Supratek,加拿大)；SDX1(B,(加州大學(xué)圣地亞哥分校，美國(guó))；PX478,(ProIX,美國(guó))；METASTATIN,(EntreMed，美國(guó))；肌4丐蛋白1,(哈佛大學(xué)，美國(guó))；SU6668,(SUGEN，美國(guó))；OXI4503,(OXiGENE,美國(guó))；o-胍，(DimensionalPharmaceuticals,美國(guó))；motuporamineC,(不列顛哥倫比亞大學(xué)，加拿大)；CDP791,(CelltechGroup,英國(guó))；阿替莫德(p麗)，(GlaxoSmithKline,英國(guó));E7820,(Eisai,曰本)；CYC381,(哈佛大學(xué),美國(guó))；AE941,(Aetema,加拿大)；疫苗，血管生成，(EntreMed,美國(guó))；尿激酶纖溶酶原激活物抑制劑，(Dendreon，美國(guó))；oglufanide(pl麗)，(Melmotte,美國(guó))；HIF-la抑制劑，(Xenova,英國(guó))；CEP5214,(C印halon,美國(guó))；BAYRES2622,(Bayer,德國(guó))；Angiocidin,(InKine,美國(guó))；A6,(Angstrom,美國(guó))；KR31372,(韓國(guó)化學(xué)技術(shù)研究院，韓國(guó))；GW2286,(GlaxoSmithKline,英國(guó))；EHT0101,(ExonHit,法國(guó))；CP868596,(Pfizer,美國(guó))；CP564959,(OSI,美國(guó))；CP547632,(Pfizer,美國(guó))；786034,(GlaxoSmithKline,英國(guó))；KRN633,(KirinBrewery,日本)；藥物傳遞系統(tǒng)，目艮內(nèi)，2-甲氧基雌二醇，(EntreMed,美國(guó))；anginex,(馬斯特里赫特大學(xué)，荷蘭和明尼蘇達(dá)大學(xué)，美國(guó))；ABT510,(Abbott,美國(guó))；AAL993,(Novartis，瑞士)；VEGI,(ProteomTech,美國(guó))；腫瘤壞死因子-oc抑制劑，(國(guó)家老年研究所，美國(guó))；SU11248,(Pfizer,美國(guó)和SUGEN美國(guó))；ABT518,(Abbott,美國(guó))；YH16,(榮昌制藥，中國(guó))；S-3APG,(波士頓兒童醫(yī)院，美國(guó)和EntreMed,美國(guó))；MAb,KDR,(ImCloneSystems,美國(guó))；MAb,a5|31,(ProteinDesign,美國(guó))；KDR、激酶4中制劑，(CelltechGroup,英國(guó)和Johnson&Johnson,美國(guó))；GFBll6,(南佛羅里達(dá)大學(xué)，美國(guó)和耶魯，美國(guó))；CS706,(Sankyo,曰本)；考布他汀A4藥物前體，(亞利桑那州立大學(xué)，美國(guó))；軟骨素酶AC，(IBEX,加拿大)；BAYRES26卯，(Bayer,德國(guó))；AGM1470,(哈佛大學(xué)，美國(guó)，Takeda,日本和TAP,美國(guó))；AGlW25，(Agouron,美國(guó))；四硫代鉬酸鹽，(密歇根大學(xué)，美國(guó))；GCS100,(韋恩州立大學(xué)，美國(guó))CV247,(IvyMedical,英國(guó))；CKD(ChongKunDang,韓國(guó))；MAb,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，(Xenova,英國(guó))；伊索拉定(INN),(日本新藥制藥抹式會(huì)社，日本)；RG13577,(Aventis，法國(guó))；WX360,(Wilex,德國(guó))；角篁胺(p腿)，(Genaera，美國(guó))；RPI4610,(Sirna,美國(guó))；癌癥療法，(Marinova,澳大利亞)；乙酰肝素酶抑制劑，(InSight，以色列)；KL3106,(Kolon,韓國(guó))；和厚樸酚，(艾莫雷大學(xué)，美國(guó))；ZKCDK,(ScheringAG,德國(guó))；ZKAngio,(ScheringAG，德國(guó))；ZK229561,(Novartis,瑞士和ScheringAG,德國(guó))；XMP300，(XOMA，美國(guó))；VGA1102，(Taisho,日本)；VEGF受體調(diào)節(jié)劑，(美國(guó)藥典)；VE-鈣翻著蛋白-2拮抗劑，(ImCloneSystems,美國(guó))；血管抑制素，(國(guó)立衛(wèi)生研究院，美國(guó))；疫苗，F(xiàn)lk-1,(ImCloneSystems,美國(guó))；TZ93,(Tsumura,曰本)；TumStatin,(BethIsraelHospital,美國(guó))；截短的可溶性FLT1(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1),(Merck&Co,美國(guó))；Tie-2配體,(Regeneron,美國(guó))；血小板反應(yīng)蛋白1抑制劑，(AlleghenyHealth,EducationandResearchFoundation,美國(guó))；2-苯石黃酰胺，4-(5-(4-氯苯基)-3-(三氟曱基)-lH-吡唑-l-基)-;Arriva;和C-Met.AVE8062(—鹽酸(28)-2-氨基-3-羥基-]^-[2-曱氧基-5-[(lZ)-2-(3,4,5-三曱氧基苯基)乙烯基]苯基]丙酰胺)；metelimumab(pINN)(免疫球蛋白G4,抗-(人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子.p.l(人單克隆CATl92.y本鏈)),與人單克隆CAT1W.K鏈二聚體)頁(yè)的二硫化物；Flt3配體；CD40配體；白介素-2;白介素-12;4-1BB配體；抗-4-lBB抗體；TNF拮抗劑和TNF受體拮抗劑，包括TNFR/Fc,TWEAK拮抗劑和TWEAK-R拮抗劑，包括TWEAK-R/Fc;TRAIL;VEGF拮抗劑，包括抗-VEGF抗體；VEGF受體(包括VEGF-R1和VEGF國(guó)R2，也稱為Fltl和Flkl或KDR)拮抗劑；CD148(也稱為DEP國(guó)1、ECRTP和PTPRJ,參見(jiàn)Takahashi等，J.Am.Soc.Nephrol.10:2135-45(1999),其對(duì)于任何目的通過(guò)引用結(jié)合到本文中)激動(dòng)劑；血小板反應(yīng)蛋白1抑制劑和Tie-2或Tie-2配體(如Ang-2)之一或兩者的抑制劑。多種Ang-2抑制劑是本領(lǐng)域公知的，包括抗-Ang-2抗體，其描述于公開(kāi)的美國(guó)專利申請(qǐng)第20030—124129號(hào)(對(duì)應(yīng)于PCT申請(qǐng)WO03/(^0833)和美國(guó)專利第6,166,185號(hào)，上述專利的內(nèi)容通過(guò)引用整體結(jié)合到本文中。另外，Ang-2peptibody也是本領(lǐng)域公知的，可在例如公開(kāi)的美國(guó)專利申請(qǐng)?bào)?0030229023號(hào)(對(duì)應(yīng)于PCT申請(qǐng)WO0M)S71M)和公開(kāi)的美國(guó)專利申請(qǐng)第20030236193號(hào)中找到，上述專利申請(qǐng)的內(nèi)容通過(guò)引用整體結(jié)合到本文中。某些癌癥治療物包括但不限于沙利度胺和沙利度胺類似物(N-(2,6-二氧代-3-哌咬基)鄰苯二甲酰亞胺)；替可加蘭鈉(硫酸化多糖肽聚糖)；TAN1120(8-乙酰-7,8,9,10-四氫-6,8,11-三羥基-1-甲氧基-10-[[八氬-5-羥基-2-2-(羥丙基)]-4,10-二曱基吡喃并[3,4-d]-l,3,6-二氧雜氮雜辛英國(guó)8畫基]錄)曙5,12-并四苯二酮)；suradista(7,7'-[羰基雙[亞氨基(l曙甲基-lH-吡咯-4,2-二基)羰基亞氨基(l-甲基-lH-吡咯-4,2-二基)羰基亞氨基]]雙-l,3-萘二磺酸四鈉鹽)；SU302;SU301;SU1498((E)-2-氰基-3-[4-羥基-3,5-雙(1-曱基乙基)苯基]-1^-(3-苯基丙基)-2-丙烯酰胺)；SU1433(4-(6,7-二曱基-2-會(huì)喔啉基)誦1,2國(guó)苯二醇)；ST1514;SR25989;可溶性Tie-2;SERM衍生物，Pharmos;semaxanib(pINN)(3-[(3,5-二曱基-lH-吡咯-2-基)亞曱基]-l,3-二氬-2H-。引咮-2-酮)；S836;RG8803;RESTIN;R440(3-(1-曱基-11^引咮-3-基)-4-(1-曱基-6-硝基-11"1-。引哚-3-基)-lH-吡咯-2,5-二酮)；R123942(1-[6-(1,2,4-噻二唑-5-基)-3-噠溱基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]-4-哌啶胺)；脯氨酸羥化酶抑制劑；漸進(jìn)提高(progressionelevated)基因；普啉司他(INN)((S)-2,2-二甲基-4-[[p-(4-吡啶氧基)苯基]磺酰基]-3-硫代嗎啉甲羥肟酸)；NV1030;NM3(8_羥基-6-曱氧基-a-曱基-l-氧代-lH-2-苯并吡喃-3-乙酸)；KF681;NF050;MIG;METH2;METH1;manassantinB(a-〖l-[4-[5陽(yáng)[4-[2國(guó)(3,4-二甲氧基苯基)-2-幾基-l-甲基乙氧基]-3-甲氧基苯基]四氳-3,4-二甲基-2-呋喃基]-2-曱氧基苯氧基]乙基]-1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯-5-曱醇)；KDR單克隆抗體；a5卩3整聯(lián)蛋白單克隆抗體；LY290293(2-氨基-4-(3-吡啶基)-4H-萘并[l,2-b]吡喃-3-曱腈)；KP0201448;KM2550;整聯(lián)蛋白特異性肽；INGN401;GYKI66475;GYKI66462;greenstatin(101-354-纖溶酶原(人))；類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、前列腺癌、卵巢癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、內(nèi)皮抑制素、結(jié)腸直腸癌的基因療法，ATFBTPI,抗血管生成基因，血管生成抑制劑或血管生成；明膠酶抑制劑，F(xiàn)R111142(4,5-二羥基-2-己烯酸5-甲氧基-4-[2-甲基-3-(3-曱基-2-丁烯基)環(huán)氧乙烷基]-l-氧雜螺[2.5]辛-6-基酯)；福酚美克(plNN)(S)-a-氨基-3-羥基-4-(羥基甲基)苯乙酸)；纖連蛋白拮抗劑(1-乙酰-L-脯氨酰-L-組氨酰-L-絲氨酰-L-半胱氨酰-L-天冬酰胺)；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體抑制劑；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子拮抗劑；FCE27164(7,7'-[羰基雙[亞M(l-曱基-lH-吡咯-4,2-二基)羰基亞氨基(l-曱基-lH-吡咯-4,2-二基)羰基亞氨基]]雙-l，3,5-萘三磺酸六鈉鹽)；FCE26752(8,8'-[羰基雙[亞氨基(l-曱基-lH-吡咯-4,2-二基)羰基亞氨基(l-甲基-lH-吡咯-4,2-二基)羰基亞氨基]]雙-l,3,6-萘三磺酸)；內(nèi)皮單核細(xì)胞活化多肽II;VEGFR反義寡核苷酸；抗血管生成因子和抗?fàn)I養(yǎng)因子；ANCHOR血管抑制素；內(nèi)皮抑制素；Del-l血管生成蛋白；CT3577;contortrostatin;CM101;軟骨素酶AC;CDP845;CanStatin;BST2002;BST2001;BLS0597;BIBF1000;ARRESTIN;apomigren(1304-1388-型XV膠原(人基因COL"Alal-鏈前體))；血管抑制素(angioinhibin);aaATIII;A36;9a-氟甲羥孕酮乙酸鹽((6-a)-17-(乙酰氧基)-9-氟-6-曱基-孕-4-烯-3,20-二酮)；2-甲基-2-鄰苯二甲酰亞氨基戊二酸(2-(l,3-二氫-l-氧代-2H-異吲哚-2-基)-2-曱基戊二酸)；釔90標(biāo)記的單克隆抗體BC-1;Semaxanib(3-(4,5-二曱基吡咯-2-基亞甲基)。引哚滿-2-酮)(C15m4N20);PI88(磷酸甘露戊糖硫酸鹽)；Alvocidib(4H曙l-苯并吡喃-4-S同，2-(2-氯苯基)-5,7-二羥基-8-(3-羥基-1-曱基-4-哌啶基)-順-(-)-)(C21H20ClN05);E7820;SU11248(5陽(yáng)[3-氟-2-氧代國(guó)l,2-二氫亞吲哚-(3Z)-基曱基]-2,4-二甲基-111-吡咯-3-曱酸(2-二乙基M乙基)酰胺)(C22H27FN402);角鯊胺(膽甾烷-7,24-二醇，3-[[3-[(4-氨基丁基)絲丙基〗氨基〗-，24-(硫酸氬)，(3.(3,5.ot，7.ot)-](C34H65N305S);酸性媒介黑T;AGM14兀(氨基曱酸，(氯乙酰)-,5-甲氧基-4-[2-曱基-3-(3-甲基-2-丁烯基)環(huán)氧乙烷基]-l-氧雜螺[2,5]辛-6-基酯，[3R-[3a,4cc(2R,3R),5p，6p]])(C19H28ClN06);AZD9935;BIBF歸0;AZD2171;ABT828;KS國(guó)白介素-2;子宮珠蛋白；A6;NSC639366(l-[3-(二乙基氨基)-2-羥丙基氨基]-4-(環(huán)氧乙烷-2-基甲基氨基)蒽醌fiimerate)(C24H29N304.C4H404);ISV616;抗-ED畫B融合蛋白;HUI77;肌原蛋白1;BC-1單克隆抗體；SPV5.2;ER68203;CKD731(3-(3,4,5隱三曱氧基苯基)誦2(E)-丙烯酸(3R,4S,5S,6R)-4國(guó)[2(R)誦曱基-3(R)-3(R)-(3-曱基-2-丁烯基)環(huán)氧乙烷-2-基]-5-甲氧基-l-氧雜螺[2.5]辛-6-基酉旨)(C28H3808);IMC-C11;aaATIII;SC7;CM101;Angiocol;Kringle5;CKD732(3-[4-[2-(二曱基氨基)乙氧基]苯基]-2(E)-丙烯酸)(C29H41N06);U995;Canstatin;SQ885;CT2584(l-[ll隱(十二烷基氨基)-10-羥基十一烷基-3,7-二曱基黃嘌呤](C30H55N503);Salmosin;EMAPII;TX1920(l-(4-曱基哌溱)-2-(2-硝基-lH-l-咪唑基)-l-乙烷酮)(C10H15N5O3);a-v(3畫x抑制劑；C腿11509(N-(l-丙炔基)甘氨酰-[N-(2-萘基)]甘氨酰-[N-(氨基甲?；鶗趸?]甘氨酸雙(4-曱氧基苯基)甲酰胺)(C36H37N506);BST2002;BST2001;B0829;FR111142;4,5國(guó)二雍基匿2(E)-己烯酸(3R,4S,5S,6R)-4-[l(R)，2(R)畫環(huán)氧-l,5-二曱基-4-己烯基]-5-曱氧基-l-氧雜螺[2.5]辛烷-6-基酯(C22H3407);以及激酶抑制劑，包括但不限于N-(4-氯苯基)-4-(4-吡啶基曱基)-l-酞嗪胺(phthalazinamine);4-[4-[[[[4-氯-3-(三氟曱基)苯基]氨基]羰基]氨基]苯氧基]-N-曱基-2-吡啶曱酰胺；N-[2-(二乙基氨基)乙基]-5-[(5-氟-1,2-二氫-2-氧代-311-二氫亞吲哚-3-基)曱基]-2,4-二曱基-1^吡咯-3-甲酰胺；3-[(4-溴-2，6-二氟苯基)甲氧基]-5-[[[[4-(1-晚咯烷基)丁基]絲]羰基]氨基H-異噻唑曱酰胺；N-(4-溴-2-氟苯基)-6-曱氧基-7-[(l-甲基-4-哌啶)曱氧基]-4-喹喔淋胺；3-[5,6，7,13-四氬-9-[(1-甲基乙氧基)曱基]-5-氧代-12H-茚并[2,l-a吡咯并[3,4-c啼唑-12-基]丙酯N,N-二曱基甘氨酸；N-[5-[[[5-(l,l-二甲基乙基)-2-嗨唑基]曱基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺;A43H[(3_氟苯基)甲氧基]苯基]-HH[[2-(曱基磺酰基)乙基〗氨基l曱基]-2-呋喃基]-4-喹喔啉胺；4-[(4-曱基-1-哌嗪基)甲基]-N-[4-曱基-3-[[4-(3-吡啶基)-2-嗜啶基]氨基]-苯基]苯甲酰胺；AK3-氯-4-氟苯基)-7-曱氧基-6-[3-(4-嗎啉基)丙氧基-4-喹喔啉胺；A^(3-乙炔基苯基)-6,7-雙(2-曱氧基乙氧基)-4-喹喔啉胺；N-(3-((((2R)-l-曱基-2-吡咯烷基)甲基)氧基"-(三氟甲基)苯基)-2-((3-(1,3-嚼唑-5-基)苯基)氨基)_3-吡啶曱酰胺；2-(((4-氟苯基)曱基)氨基)-N-(3-((((2R)小曱基-2-吡咯烷基)曱基)氧基)-5-(三氟曱基)苯基)-3-吡啶曱酰胺;N-[3-(氮雜環(huán)丁烷-3-基曱氧基)-5-三氟曱基-苯基]-2-(4-氟-千基氨基)-煙酰胺；6-氟-N-(4-(1-曱基乙基)苯基)-2-((4-吡啶基甲基)氨基)-3-吡啶曱酰胺；2-((4-吡啶基曱基)氨基)-N-(3-(((2S)-2-耽咯烷基曱基)氧基)-5-(三氟甲基)苯基)-3-吡啶曱酰胺；N-(3-(1,1-二曱基乙基)-1H-吡唑-5-基)-2-((4-吡啶基曱基)氨基)-3-吡啶曱酰胺；N-(3,3-二曱基-2,3-二氫-l-苯并呋喃-6-基)-2-((4-吡啶基曱基)氨基)-3-他啶曱酰胺；N-(3-((((2S)-l-曱基-2-晚咯烷基)甲基)氧基)-5-(三氟曱基)苯基)-2-((4-吡咬基曱基)氨基)-3-吡啶曱酰胺；2-((4-吡啶基曱基)氨基)-N-(3-((2-(1-吡咯烷基)乙基)氧基)-4-(三氟甲基)苯基)-3-他咬甲酰胺；N-(3,3-二甲基-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-((4-吡啶基曱基)氨基)-3-吡啶曱酰胺；N-(4-(五氟乙基)-3-(((2S)-2-吡咯烷基甲基)氧基)苯基)-2-((4-吡咬基曱基)0-3-吡啶曱酰胺;N-(3-((3-氮雜環(huán)丁烷基曱基)氧基)-5-(三氟曱基)苯基)-2-((4-吡啶基曱基)氨基)-3-吡啶曱酰胺；N-(3-(4-哌啶氧基)-5-(三氟曱基)苯基)-2-((2-(3-吡啶基)乙基)氨基)-3-吡啶甲酰胺；1^-(4,4-二曱基-1,2,3,4-四氫-異喹啉-7-基)-2-(111-吲唑-6-基氨基)-煙酰胺；2-(lH-吲唑-6-基氨基)-N-[3-(1-曱基吡咯啉-2-基曱氧基)-5-三氟曱基-苯基]-煙酰胺；N-[l-(2-二曱基氨基-乙酰)-3,3-二曱基-2，3-二氫-lH-吲咮-6-基]-2-(lH-吲唑-6-基氨基)-煙酰胺；2-(1H-p引唑-6-基氨基)-N-[3-(吡咯啉-2-基曱氧基)-5-三氟曱基-苯基-煙酰胺；N-(l-乙酰-3,3_二甲基-2,3-二氫-lH-吲哚-6-基)-2-(lH-吲唑-6-基氨基)-煙酰胺；N-(4,4-二甲基-l-氧代-l，2，3,4-四氬-異喹啉-7-基)-2-(lH-吲唑-6-基氨基)-煙酰胺；N-[4-(叔丁基)-3-(3-哌咬基丙基)苯基][2-(lH-吲唑-6-基氨基)(3-吡啶基"曱酰胺；N-[5-(叔丁基)異e唑-3-基][2-(1H-吲唑-6-基氨基X3-吡啶基)]曱酰胺；和N-[4-(叔丁基)苯基][2-(lH-吲唑-6-基氨基)(3-吡啶基)曱酰胺，以及在以下專利中公開(kāi)的激酶抑制劑美國(guó)專利笫6,258,812號(hào)；第6,235,764號(hào)；笫6,630,500號(hào)；第6，515,004號(hào)；笫6，713,485號(hào)；笫5,521,184號(hào)；笫5,770,599號(hào)；第5，747,498號(hào)；笫5,990,141;美國(guó)公開(kāi)US20030105091;以及專利合作條約公開(kāi)WO01/37820;WO01/32651;WO02/68楊；WO02/66470;WO02/55501;WO04/05279;WO04/07481;WO04/07458;WO04/09784;WO02/59110;WO99/45009;W098/35958;WO00/59509;W099/61422;WO00/12089;和W000/02871,各專利公開(kāi)對(duì)于任何目的通過(guò)引用結(jié)合到本文中。在某些實(shí)施方案中，可在用癌癥治療物治療之前、同時(shí)或之后給予HGF特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，可預(yù)防性地給予HGF特異性結(jié)合物，以防止或減輕因轉(zhuǎn)移癌而發(fā)作的骨損失。在某些實(shí)施方案中，可給予HGF特異性結(jié)合物，以治療因轉(zhuǎn)移導(dǎo)致的骨損失的現(xiàn)有癥狀。示例性的癌癥包括但不限于乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、頭和頸鱗狀細(xì)胞癌、遺傳性和散發(fā)性乳頭狀腎癌、白血病、淋巴瘤、里-費(fèi)綜合征、惡性胸膜間皮瘤、黑素瘤、多發(fā)性骨髓瘤、非小細(xì)胞性肺癌、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、'小細(xì)胞性肺癌、滑膜肉瘤、甲狀腺癌和膀胱移行細(xì)胞癌。在某些實(shí)施方案中，HGF特異性結(jié)合物可單獨(dú)〗吏用或者與至少一種用于治療癌癥的另外治療物一^^吏用。在某些實(shí)施方案中，HGF特異性結(jié)合物與治療有效量的另外治療物一起使用?？膳cHGF特異性結(jié)合物一起給予的示例性治療物包括但不限于安莎霉素(anisamycin)抗生素的格爾德霉素家族的成員；Pro-HGF;NK2;c-Met肽抑制劑；Grb2Src同源物2的拮抗劑；Gabl調(diào)節(jié)劑；顯性負(fù)性Src;von-Hippd-Landau抑制劑，包括但不限于渥曼青霉素；P13激酶抑制劑，其他抗受體療法，抗EGFR，COX-2抑制劑，Celebrex,Vioxx;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、VEGF調(diào)節(jié)劑、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、FGF調(diào)節(jié)劑、表皮生長(zhǎng)因子(EGF);EGF調(diào)節(jié)劑；角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)、KGF相關(guān)分子、KGF調(diào)節(jié)劑；^金屬蛋白質(zhì)^(MMP)調(diào)節(jié)劑。在某些實(shí)施方案中，HGF特異性結(jié)合物與特定的治療物一起使用，以治療各種癌癥。在某些實(shí)施方案中，HGF特異性結(jié)合物與特定的治療物一起使用，以治療或預(yù)防瘧疾。在某些實(shí)施方案中，HGF特異性結(jié)合物與特定的治療物一起使用，以治療或預(yù)防增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病。在某些實(shí)施方案中，考慮到病況和期望的治療水平，可給予兩種、三種或更多種治療物。在某些實(shí)施方案中，可通過(guò)將這些治療物包含在同一制劑中來(lái)一起提供。在某些實(shí)施方案中，可通過(guò)將這種治療物和HGF特異性結(jié)合物包含在同一制劑中來(lái)一起提供。在某些實(shí)施方案中，可單獨(dú)配制這些治療物，并通過(guò)包含在治療藥盒中來(lái)一起提供。在某些實(shí)施方案中，可單獨(dú)配制這種治療物和HGF特異性結(jié)合物，并通過(guò)包含在治療藥盒中來(lái)一起提供。在某些實(shí)施方案中，這種治療物可單獨(dú)提供。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)通過(guò)基因療法給藥時(shí)，可將編碼蛋白質(zhì)藥物和/或HGF特異性結(jié)合物的基因包含在同一載體中。在某些實(shí)施方案中，編碼蛋白質(zhì)藥物和/或HGF特異性結(jié)合物的基因可在同一啟動(dòng)子區(qū)的控制之下。在某些實(shí)施方案中，編碼蛋白質(zhì)藥物和/或HGF特異性結(jié)合物的基因可在單獨(dú)的載體中。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含HGF特異性結(jié)合物以及藥物可接受的稀釋劑、載體、增溶劑、乳化劑、防腐劑和/或佐劑的藥物組合物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含HGF特異性結(jié)合物和治療有效量的至少一種另外的治療物以及藥物可接受的稀釋劑、載體、增溶劑、乳化劑、防腐劑和/或佐劑的藥物組合物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含HGF特異性結(jié)合物和至少一種絲氨酸蛋白酶抑制劑的療法及使用這種療法的治療方法。在某些實(shí)施方案中，—療法包含HGF特異性結(jié)合物和絲氨酸蛋白酶抑制劑及至少一種本文描述的另外分子。在某些情況下，蛋白酶/蛋白酶抑制劑平衡的失調(diào)會(huì)導(dǎo)致蛋白酶介導(dǎo)的組織破壞，包括但不限于腫瘤侵入正常組織，導(dǎo)致轉(zhuǎn)移。在某些實(shí)施方案中，HGF特異性結(jié)合物可與至少一種炎癥治療物一起使用。在某些實(shí)施方案中，HGF特異性結(jié)合物可與至少一種免疫疾病治療物一起使用。示例性的炎癥和免疫疾病治療物包括4旦不限于1型環(huán)加氧酶(COX-l)和2型環(huán)加氧酶(COX-2)^卩制劑；38kDa促分裂原活化蛋白質(zhì)激酶(p38-MAPK)的小分子調(diào)節(jié)劑；參與炎癥途徑的胞內(nèi)分子的小分子調(diào)節(jié)劑，其中這種胞內(nèi)分子包括但不限于jnk、IKK、NF-kB、ZAP70和Ick。某些示例性的炎癥治療物描述于例如C.A.Dinarello和L丄.Moldawer尸roz力y7awm(3too^y4w"-/"7^rwmatoyQvtohwesZw朋ew腦加'(iJW/^'to:jC7/"z'c/fim第三版(2001)AmgenInc.ThousndOaks,CA。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物包含不只一種不同的HGF特異性結(jié)合物。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物包含不只一種HGF特異性結(jié)合物，其中所述HGF特異性結(jié)合物結(jié)合不只一個(gè)表位。在某些實(shí)施方案中，可接受的制劑材料優(yōu)選在所采用的劑量和濃度下對(duì)接受者無(wú)毒。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物可含有用以調(diào)節(jié)、維持或保持例如組合物的pH、摩爾滲透壓濃度、粘度、透明度、顏色、等滲性、氣味、無(wú)菌度、穩(wěn)定性、溶解或釋放速率、吸收或滲透速率的制劑材料。在某些實(shí)施方案中，合適的制劑材料包括但不限于氨基酸(如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或賴氨酸)；抗微生物劑、抗氧化劑(如抗壞血酸、亞硫酸鈉或亞硫酸氬鈉)；緩沖劑(如硼酸鹽、碳酸氬鹽、Tris-HCl、檸檬酸鹽、磷酸鹽或其他有機(jī)酸)；膨脹劑(如甘露糖醇或甘氨酸)；螯合劑(如乙二胺四乙酸(EDTA));絡(luò)合劑(如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、(5-環(huán)狀糊精或終丙基-P-環(huán)狀糊精)；填充劑；單糖；二糖；及其他碳水化合物(如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白質(zhì)(如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白)；著色劑、矯味劑和稀釋劑；乳化劑；親水性聚合物(如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成鹽反荷離子(如鈉)；防腐劑(如苯扎氯胺、苯甲酸、水楊酸、硫柳汞、苯乙醇、尼泊金曱酯、尼泊金丙酯、氯己定、山梨酸或過(guò)氧化氫)；溶劑(如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(如甘露醇或山梨醇)；懸浮劑；表面活性劑或濕潤(rùn)劑(如泊洛沙姆、PEG、脫水山梨醇酯、聚山梨酯如聚山梨酯20、聚山梨酯80、triton、氨丁三醇、卵磷脂、膽固醇、泰洛沙泊)；穩(wěn)定性增強(qiáng)劑(如蔗糖或山梨醇)；張力增強(qiáng)劑(如堿金屬卣化物，優(yōu)選氯化鈉或氯化鉀，甘露糖醇、山梨糖醇)；傳遞介質(zhì)；稀釋劑；賦形劑和/或藥物佐劑。(Rew/"gtow's尸/zarmcfcei/"ca/ScZe"ces,第18版,A.R.Gennaro(編l辱),MackPublishingCompany(1990)。在某些實(shí)施方案中，HGF特異性結(jié)合物和/或治療性分子連接到本領(lǐng)域公知的半壽期延長(zhǎng)介質(zhì)。這種介質(zhì)包括但不限于聚乙二醇和葡聚糖。這種介質(zhì)描述于例如美國(guó)申請(qǐng)系列號(hào)09/428,082和PCT申請(qǐng)公開(kāi)WO99/25044,它們對(duì)于任何目的通過(guò)引用結(jié)合到本文中。在某些實(shí)施方案中，最佳的藥物組合物由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)例如預(yù)定的給藥途徑、傳遞形式和期望的劑量來(lái)決定。參見(jiàn)例如尸/zwmacew"o/Sc/e"ces，出處同上。在某些實(shí)施方案中，這種組合物可能影響本發(fā)明抗體的物理狀態(tài)、穩(wěn)定性、體內(nèi)釋放速率和體內(nèi)清除速率。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物中的主要介質(zhì)或載體在本質(zhì)上可以是含水載體或非水載體。例如，在某些實(shí)施方案中，合適的介質(zhì)或載體可以是注射用水、生理鹽水溶液或人工腦脊液，可能補(bǔ)充有常用于胃腸外給藥組合物的其他材料。在某些實(shí)施方案中，中性緩沖鹽水或者混合有血清白蛋白的鹽水是另外的示例性載體。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物包含pH約7.0-8.5的Tris緩沖液，或者pH約4.0-5.5的乙酸緩沖液，且可進(jìn)一步包含山梨醇或其合適的替代物。在某些實(shí)施方案中，可通過(guò)將選定的具有期望純度的組合物與任選的配制物(iem/"gtow尸/207waceM"ca/Sc/ewces,出處同上)混合成凍干々并或水溶液的形式，制備包含HGF特異性結(jié)合物并含有或不含有至少一種另外治療物的組合物，以供保存。此外，在某些實(shí)施方案中，可用適當(dāng)?shù)馁x形劑如蔗糖，將包含HGF特異性結(jié)合物并含有或不含有至少一種另外治療物的組合物配制成凍干物。在某些實(shí)施方案中，可以選擇本發(fā)明藥物組合物，以供胃腸外傳遞。在某些實(shí)施方案中，也可選擇組合物，以供吸入，或者供通過(guò)消化道傳遞，如口服傳遞。這種藥物可接受的組合物的制備在本領(lǐng)域的技術(shù)范圍之內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，制劑成分以給藥部位可接受的濃度存在。在某些實(shí)施方案中，用緩沖劑將組合物維持在生理pH或者稍<氐的pH，通常在約5至約8的pH范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)設(shè)想胃腸外給藥時(shí)，用于本發(fā)明的治療性組合物可以以藥物可接受載體中的無(wú)熱原的胃腸外可接受水溶液形式提供，所述水溶液包含期望的HGF特異性結(jié)合物，并含有或不含有另外的治療物。在某些實(shí)施方案中，胃腸外注射用載體是無(wú)菌蒸餾水，HGF特異性結(jié)合物與或不與至少一種另外的治療物一起在其中配制成無(wú)菌的等滲溶液，并被適當(dāng)?shù)乇４?。在某些?shí)施方案中，制劑可能涉及將期望的分子與可為產(chǎn)品提供控釋或緩釋的物質(zhì)一起配制，所述物質(zhì)如可注射微球體、生物可腐蝕顆粒、聚合物(如聚乳酸或聚乙醇酸)、珠或脂質(zhì)體，所述產(chǎn)品然后可通過(guò)長(zhǎng)效制劑注射來(lái)傳遞。在某些實(shí)施方案中，也可使用透明質(zhì)酸，其具有提高在體循環(huán)中持續(xù)保留時(shí)間的作用。在某些實(shí)施方案中，可使用可植入藥物遞送裝置，以引入期望的分子。在某些實(shí)施方案中，可配制本發(fā)明藥物組合物，以供吸入。在某些實(shí)施方案中，HGF特異性結(jié)合物與或不與至少一種另外的治療物一起，可配制成干粉，以供吸入。在某些實(shí)施方案中，可用推進(jìn)劑配制包含HGF特異性結(jié)合物并含有或不含有至少一種另外的治療物的吸入溶液，供作氣霧劑傳遞。在某些實(shí)施方案中，可將溶液霧化。肺部給藥在PCT申請(qǐng)PCT/US94/001875中有進(jìn)一步的描述，其描述了化學(xué)修飾蛋白質(zhì)的肺部傳遞法。在某些實(shí)施方案中，設(shè)想制劑可口服給予。在某些實(shí)施方案中，與或不與至少一種另外的治療物一起以這種方式給予的HGF特異性結(jié)合物，可用或不用常用于調(diào)配固體劑型(如片劑和膠嚢劑)的載體配制。在某些實(shí)施方案中，可設(shè)計(jì)膠嚢劑，以在胃腸道中當(dāng)生物利用度最大和體循環(huán)前降解最小時(shí)釋放出制劑的活性部分。在某些實(shí)施方案中，可包括至少一種另外的介質(zhì)，以促進(jìn)HGF特異性結(jié)合物和/或任何另外治療物的吸收。在某些實(shí)施方案中，也可采用稀釋劑、矯味劑、低熔點(diǎn)蠟、植物油、潤(rùn)滑劑、懸浮劑、片劑崩解劑和粘合劑。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物可包含有效量的HGF特異性結(jié)合物并含有或不含有至少一種另外的治療物，其與適合于制造片劑的無(wú)毒賦形劑混合。在某些實(shí)施方案中，通過(guò)將片劑溶解于無(wú)菌水或另一種適當(dāng)?shù)妮d體中，可配制單位劑量形式的溶液。在某些實(shí)施方案中，合適的賦形劑包括但不限于惰性稀釋劑，如碳酸釣、碳酸鈉或碳酸氫鈉、乳糖或磷酸釣；或者粘合劑，如淀粉、明膠或阿拉伯膠；或者潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。另外的藥物組合物對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯然的，包括涉及HGF特異性結(jié)合物、與或不與至少一種另外的治療物一起在緩釋或控釋傳遞制劑中的制劑。在某些實(shí)施方案中，用以配制各種其他》爰釋或控釋傳遞方式，如脂質(zhì)體載體、生物可腐蝕樣i?；蚨嗫字楹烷L(zhǎng)效注射劑的技術(shù)，對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員也是公知的。參見(jiàn)例如PCT申請(qǐng)PCT/US93/00829,其描述了用以傳遞藥物組合物的多孔聚合物孩l粒的控制釋放。在某些實(shí)施方案中，緩釋制劑可包括定型制件形式的半透性聚合物基質(zhì)，例如薄膜或微膠嚢。緩釋基質(zhì)可包括聚酯、水凝膠、聚交酯(美國(guó)專利第3,773,919號(hào)和EP058481)、L-谷氨酸和，L-谷氨酸乙酯的共聚物(Sidman等,所opo/;/附era22:547-556(1983))、聚(甲基丙烯酸-2國(guó)幾乙酯)(Langer等，丄Mafer.i仏15:167-277(1981)和Langer,C/jem.Tec/z.12:98-105(1982))、乙烯乙酸乙烯酯(Langer等，出處同上)或聚-D(-)-3-輕基丁酸(EP133,988)。在某些實(shí)施方案中，緩釋組合物還可包括可通過(guò)任何本領(lǐng)域公知的幾種方法制備的脂質(zhì)體。參見(jiàn)例如Eppstein等，尸roc.[/&482:3688-3692(1985);EP036,676;EP088,046和EP143,949。用于體內(nèi)給藥的藥物組合物通常是無(wú)菌的。在某些實(shí)施方案中，這可通過(guò)濾過(guò)無(wú)菌過(guò)濾膜來(lái)實(shí)現(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)組合物凍干時(shí)，可在凍干和再生之前或之后用這種方法進(jìn)行滅菌。在某些實(shí)施方案中，供胃腸外給藥的組合物可以凍干形式保藏，或者以溶液形式保藏。在某些實(shí)施方案中，胃腸外組合物通常^X具有無(wú)菌入口的容器，例如具有可用皮下注射針刺穿的塞子的靜脈溶液袋或小瓶。在某些實(shí)施方案中，一旦配制好藥物組合物，其可以以溶液、懸浮液、凝膠、乳液、固體的形式，或者作為脫水或凍干粉末保藏于無(wú)菌小弁瓦中。在某些實(shí)施方案中，這種制劑可以以現(xiàn)成可用的形式或者以給藥前再生的形式(例如凍干形式)進(jìn)4亍保藏。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及用以產(chǎn)生單劑量給藥單位的藥盒。在某些實(shí)施方案中，每個(gè)本發(fā)明藥盒可裝有含有干燥蛋白質(zhì)的第一容器和含有含水制劑的第二容器。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，包括裝有單室和多室預(yù)灌裝注射器(例如液體注射器和lyosyringe)的藥盒。在某些實(shí)施方案中，待進(jìn)行治療性應(yīng)用的、包含HGF特異性結(jié)合物并含有或不含有至少一種另外治療物的藥物組合物，其有效量取決于例如治療內(nèi)容和目標(biāo)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，根據(jù)某些實(shí)施方案，用于治療的適當(dāng)劑量水平部分根據(jù)所傳遞的分子、HGF特異性結(jié)合物與或不與至少一種另外治療物一起所應(yīng)用的適應(yīng)癥、給藥途徑以及患者的大小(體重、體表面積或器官大小)和/或狀態(tài)(年齡和總體健康狀況)而變化。在某些實(shí)施方案中，臨床醫(yī)生可滴定劑量和修改給藥途徑，以獲得最佳治療效果。在某些實(shí)施方案中，取決于上述因素，典型的劑量可在約O.litig/kg至最高達(dá)約100mg/kg或更高的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，劑量可在O.liug/kg至約100mg/kg的范圍內(nèi)；或者在1pg/kg至約100mg/kg的范圍內(nèi)；或者在5pg/kg至約100mg/kg的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，給藥頻率要考慮所用制劑中HGF特異性結(jié)合物和/或任何另外治療物的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)。在某些實(shí)施方案中，臨床醫(yī)生給予組合物，直到達(dá)到實(shí)現(xiàn)期望效果的劑量。因此，在某些實(shí)施方案中，組合物可以單劑量給予，或者以兩個(gè)或更多個(gè)劑量(可含有或不含有相同量的期望分子)隨時(shí)間推移來(lái)給予，或者通過(guò)才直入裝置或插管進(jìn)行連續(xù)輸液來(lái)給予。適當(dāng)劑量的進(jìn)一步改進(jìn)可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員常規(guī)進(jìn)行，這在他們?nèi)粘?zhí)行的任務(wù)范圍內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，可通過(guò)使用適當(dāng)?shù)膭┝?反應(yīng)數(shù)據(jù)來(lái)確定適當(dāng)劑量。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物的給藥途徑與已知的方法相一致，例如口服給藥；通過(guò)靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦內(nèi)(實(shí)質(zhì)內(nèi))、腦室內(nèi)、肌肉內(nèi)、目艮內(nèi)、動(dòng)月永內(nèi)、門l爭(zhēng)樂(lè);K內(nèi)(intraporal)或病灶內(nèi)(intralesional)途徑注射給藥；通過(guò)緩釋系統(tǒng)或通過(guò)植入裝置給藥。在某些實(shí)施方案中，可通過(guò)大劑量注射或連續(xù)輸液給予組合物，或者通過(guò)植入裝置給予組合物。在某些實(shí)施方案中，可通過(guò)植入已吸收有或包入了期望分子的薄膜、海綿或其他適當(dāng)材料，局部給予組合物。在使用植入裝置的某些實(shí)施方案中，植入裝置可植入到任何合適的組織和器官中，期望分子的傳遞可通過(guò)擴(kuò)散、定時(shí)釋放大劑量或連續(xù)給予來(lái)進(jìn)行。在某些實(shí)施方案中，還可期望以活體外的方式使用包含HGF特異性結(jié)合物并含有或不含有至少一種另外治療物的藥物組合物。在這種情況下，使從患者中取出的細(xì)胞、組織或器官暴露于包含HGF特異性結(jié)合物并含有或不含有至少一種另外治療物的藥物組合物，隨后將細(xì)胞、組織和/或器官植回患者體內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，可通過(guò)植入細(xì)胞來(lái)傳遞HGF特異性結(jié)合物和/或任何另外治療物，所述細(xì)胞用本文所述方法基因工程改造以表達(dá)和分泌多肽。在某些實(shí)施方案中，這種細(xì)胞可以是動(dòng)物細(xì)胞或人類細(xì)胞，且可以是自體同源細(xì)胞、異源細(xì)胞或異種細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，細(xì)胞可以是無(wú)限增殖化細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，為降低出現(xiàn)免疫反應(yīng)的可能性，可使細(xì)胞包嚢化，以避免周圍組織的浸潤(rùn)。在某些實(shí)施方案中，包嚢材料通常是生物相容性、半透性高分子包裹物或膜，其允許蛋白質(zhì)產(chǎn)物釋放，但防止細(xì)胞被患者的免疫系統(tǒng)或者被來(lái)自周圍組織的其他有害因素破壞。實(shí)施例以下實(shí)施例，包括所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)和所得到的結(jié)果，只供說(shuō)明目的，不能被理解為限制本發(fā)明。實(shí)施例1抗-HGF雜交瘤的產(chǎn)生在XenoMouse⑧小鼠(Abgenix,Fremont,CA)中產(chǎn)生抗HGF抗體，所述小鼠攜有人免疫球蛋白基因。用三組XenoMouse⑧小鼠一一la組、lb組和2組來(lái)產(chǎn)生抗HGF抗體，在表1中作總結(jié)。la組由XenoMouseXMG2品系小鼠組成，產(chǎn)生完全人IgG2x抗體。la組用HGF免疫。使用Nakamura等，A^w"342:440-443(1989)中的序列，用標(biāo)準(zhǔn)的重組技術(shù)制備HGF。2組由XenoMouseXMG1品系小鼠組成，產(chǎn)生完全人IgGlK抗體。2組小鼠用上述綴合TCE-HGF免疫。按照表1的時(shí)間表給所有三組小鼠注射抗原(HGF或TCE-HGF)八次。在第一次免疫，每只小鼠在后足墊注射共10昭抗原(每個(gè)足墊5昭)。這些注射劑含有TiterMaxGold(Sigma,目錄號(hào)T2684)佐劑。在笫2次到笫7次注射，每只小鼠注射共5嗎抗原，所述4元原在alumgel(磷酸4呂凝月交佐劑；SuperfosBiosectora/s,由E.M.SargentPulpandChemicalCo.,CliftonNJ供應(yīng)，目錄號(hào)1452-250)佐劑中。最后一次注射每只小鼠注射共10昭，注射劑不含佐劑。<table>tableseeoriginaldocumentpage83</column></row><table>每只小鼠在第六次注射后兩天放血。通過(guò)ELISA測(cè)定放血得到的血液樣品，以確定抗HGF抗體的滴度。在這些ELISA測(cè)定中，用0.1M碳酸鹽緩沖液(pH9.6)中的HGF涂布96-孔板(FisherScientific目錄號(hào)12-565-136)。加入血液樣品，在室溫下孵育各板2小時(shí)。孵育后，用洗滌溶液(0.05%Tween20于PBS中)洗滌各板三次，加入100^0/孔的笫二抗體。該笫二抗體是綴合辣根過(guò)氧化物酶(SouthemBiotech目錄號(hào)9060-05)的山羊抗人IgGFc抗體。在室溫下孵育1小時(shí)后，洗滌各板，加入100mJ/孔的TMB顯影液(BioFXLab目錄號(hào)TMSK-0100-01)。10分鐘后，加入50pl/孔的TMB終止液(BioFXLab目錄號(hào)STPR-OIOO-OI)。各板在ELISA板讀數(shù)器中于450畫波長(zhǎng)處讀數(shù)。最后一次注射后四天，處死小鼠，收獲其引流(draining)淋巴結(jié)，回收淋巴細(xì)胞。分別集中得自所述三組的每組小鼠的淋巴細(xì)胞。為使淋巴細(xì)胞樣品富集B細(xì)胞，通過(guò)加入抗-CD90磁珠(MiltenyiBiotech目錄號(hào)491-01),然后使淋巴細(xì)胞通過(guò)LS+柱(MiltenyiBiotech目錄號(hào)424-01),耗盡T細(xì)胞。然后用electrocell融合裝置(Genetronic,Inc.,ECM2001型)，將三個(gè)B細(xì)胞富集的淋巴細(xì)胞樣品各自與P3骨髓瘤細(xì)胞融合，創(chuàng)建雜交瘤。然后將三組融合雜交瘤系平板接種于96-孔板中含次黃噪呤-重氮絲氨酸(Sigma)的雜交瘤培養(yǎng)基(成分見(jiàn)表2)中，接種密度為每孔lxl()S個(gè)B細(xì)胞富集的淋巴細(xì)胞。雜交瘤系在37。C、15%(302下培養(yǎng)14天。14天后，用上述用以測(cè)定血液樣品的相同方案，通過(guò)ELISA測(cè)定培養(yǎng)物上清液，以檢測(cè)抗HGF人IgG抗體的存在。在該ELISA中檢測(cè)為陽(yáng)性的培養(yǎng)物上清液，在笫二ELISA中檢測(cè)人K鏈的存在。在該笫二ELISA中，除了第二抗體為綴合到辣根過(guò)氧化物酶的山羊抗人K鏈抗體之外，其他條件與第一ELISA的完全相同。進(jìn)一步使在兩次ELISA測(cè)定中檢測(cè)為陽(yáng)性的雜交瘤增大，以產(chǎn)生5ml上清液，供體外功能試驗(yàn)，該試驗(yàn)在實(shí)施例8和9中討論。測(cè)試了來(lái)自對(duì)應(yīng)于la組小鼠的82個(gè)克隆的上清液、來(lái)自對(duì)應(yīng)于lb組小鼠的42個(gè)克隆的上清液和來(lái)自對(duì)應(yīng)于2組小鼠的176個(gè)克隆的上清液。根據(jù)這些功能試驗(yàn)的結(jié)果，鑒定出幾個(gè)雜交瘤系產(chǎn)生抗HGF抗體。用有限稀釋從每個(gè)雜交瘤系中分離三至六個(gè)克隆。這些克隆用雜交瘤系編號(hào)(例如1.24)和克隆編號(hào)(例如1.24.l)標(biāo)識(shí)。通過(guò)實(shí)施例8和9中討論的功能試驗(yàn)，沒(méi)有檢測(cè)出具體雜交瘤系的不同克隆之間的差別。使這些分離克隆各自在50-100ml雜交瘤培養(yǎng)基中增大，并讓其生長(zhǎng)至衰竭(即低于約10%細(xì)胞生存力)。通過(guò)ELISA和通過(guò)實(shí)施例8和9中討論的體外功能試驗(yàn)，測(cè)定這些培養(yǎng)物上清液中的抗HGF抗體的濃度和效力。鑒定出IO個(gè)具有最高滴度的抗HGF抗體的雜交瘤。這些雜交瘤標(biāo)識(shí)為1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10,1。表2.培養(yǎng)基的組成<table>tableseeoriginaldocumentpage86</column></row><table>實(shí)施例2從雜交瘤產(chǎn)生抗體用兩個(gè)不同的系統(tǒng)——Integra燒瓶和充氣旋動(dòng)瓶之一，從實(shí)施例1中討論的十個(gè)雜交瘤制備抗體。Integra燒瓶七個(gè)雜交瘤系——2.12.1、1.24.2、1.29.1、1.74.1、1.75.1、1.60.2和2.40.1各自分別生長(zhǎng)于T75燒瓶中的20mlHSFM培養(yǎng)基(培養(yǎng)基成分見(jiàn)表2)。當(dāng)雜交瘤幾乎鋪滿T75燒瓶時(shí)，將它們轉(zhuǎn)移到Integra燒瓶(IntegraBiosciences,IntegraCLIOOO，目錄號(hào)卯005)?！芎?，除去七個(gè)Integra燒瓶各自的兩室中的培養(yǎng)基，用新鮮的Integra培養(yǎng)基置換。分別保留從七個(gè)小室收集的培養(yǎng)基。再生長(zhǎng)一個(gè)周后，再次從小室收集培養(yǎng)基。將從各雜交瘤系收集的第1周培養(yǎng)基與從相同雜交瘤系收集的笫2周培養(yǎng)基合并。離心(15分鐘，3000rpm)從七個(gè)雜交瘤系所得的七個(gè)收集培養(yǎng)基樣品，除去細(xì)胞和碎片，過(guò)濾所得的上清液(0.22um)。充氣旋動(dòng)瓶(3L)將3.10.1、2.4.4和2.12.1這三個(gè)雜交瘤系分別培養(yǎng)于T75燒瓶中的20mlHSFM培養(yǎng)基。當(dāng)雜交瘤達(dá)到足夠的細(xì)胞密度時(shí)，將它們轉(zhuǎn)移到T175燒瓶。同樣，當(dāng)雜交瘤在T175燒瓶中達(dá)到足夠的細(xì)胞密度時(shí)，將它們轉(zhuǎn)移到lOOml旋動(dòng)瓶，然后轉(zhuǎn)移到500ml旋動(dòng)瓶，再然后轉(zhuǎn)移到lL旋動(dòng)瓶。當(dāng)細(xì)胞在lL旋動(dòng)瓶中達(dá)到足夠的細(xì)胞密度時(shí)，將它們轉(zhuǎn)移到3L充氣旋動(dòng)瓶(BellcoBiotechnology,目錄號(hào)1965-300,帶側(cè)臂配件(sidearmfitting),目錄號(hào)1965-30003)。該3L充氣旋動(dòng)瓶是玻璃容器，其中培養(yǎng)物用磁力平臺(tái)控制的葉輪混合。所述旋動(dòng)瓶連接到供氣線路，以提供5%032和空氣。雜交瘤3.10.1用雜交瘤系3.10.1的雜交瘤細(xì)胞接種兩個(gè)3L充氣旋動(dòng)瓶中的HSFM培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的加入物見(jiàn)表3，表3總結(jié)了所述兩個(gè)充氣旋動(dòng)瓶的生長(zhǎng)條件。表3.雜交瘤3.10.1的生長(zhǎng)條件<table>tableseeoriginaldocumentpage88</column></row><table>培養(yǎng)物生長(zhǎng)15天，當(dāng)通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)測(cè)出的生存力低于20%時(shí)進(jìn)行收獲。收獲包括以7000rpm離心15分鐘，隨后將所得上清液濾過(guò)0.22Mm過(guò)濾器。通過(guò)用蛋白質(zhì)AHPLC測(cè)量最終收獲樣品中存在的蛋白質(zhì)的量，測(cè)定產(chǎn)量，凈艮告于表3中。雜交瘤2.4.4用雜交瘤系2.4.4的雜交瘤細(xì)胞接種五個(gè)3L充氣旋動(dòng)瓶中的HSFM培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的加入物見(jiàn)表4，表4總結(jié)了所述五個(gè)充氣旋動(dòng)瓶的生長(zhǎng)條件。表4.雜交瘤2.4.4的生長(zhǎng)條件<table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table>培養(yǎng)物按表4所示生長(zhǎng)7、8或10天，如上所述，當(dāng)細(xì)胞生存力低于20%時(shí)，收獲培養(yǎng)物。雜交瘤2.12.1如實(shí)施例1所討論，鑒定出十個(gè)表達(dá)抗HGF單克隆抗體的雜交瘤(1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1)。用TRlzo產(chǎn)試劑(Invitrogen,Carlsbad,CA)從這十個(gè)雜交瘤的每一個(gè)分離總RNA。用GeneRace產(chǎn)試劑盒(Invitrogen)使這十個(gè)總RNA制品的5'-末端適應(yīng)5'cDNA末端快速擴(kuò)增(RACE)。然后將這十個(gè)5'-修飾的RNA制品用于十個(gè)單獨(dú)的RACE反應(yīng)中，各反應(yīng)使用具有延伸銜接頭的隨機(jī)引物(5'-GGCCGGATAGGCCTCCANNNN麗T-3')(SEQIDNO:48),產(chǎn)生十種cDNA分子。然后在單獨(dú)的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)中擴(kuò)增這十種cDNA分子，產(chǎn)生十種擴(kuò)增的K輕鏈序列。對(duì)于這些反應(yīng)的每一個(gè)，正向引物是正向GeneRacer"^嵌套引物(5'GGACACTGACATGGACTGAAGGAGTA-3')(SEQIDNO:49)。設(shè)計(jì)反向引物(5'國(guó)GGGGTCAGGCTGGAACTGAGG-3，)(SEQIDNO50),以結(jié)合與K輕鏈互補(bǔ)的序列。然后將這十種擴(kuò)增的K輕鏈序列的每一種分別連接到單獨(dú)的pCR4-TOPO質(zhì)粒(Invitrogen)。然后將各含十種K輕鏈序列之一的十種所得質(zhì)粒分別在細(xì)菌中擴(kuò)增，各質(zhì)粒各取幾個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序。用這些序列設(shè)計(jì)PCR引物，以如下所述從克隆的質(zhì)粒擴(kuò)增十種K輕鏈開(kāi)放閱讀框序列。十個(gè)PCR的每一個(gè)的引物組包括5'-引物和3'-引物。每種5'-引物包含與具體K輕鏈序列的氨基末端序列互補(bǔ)的部分、最優(yōu)化的Kozak序列及一個(gè)或多個(gè)限制位點(diǎn)。例如，與最終衍自雜交瘤3.10.1的質(zhì)粒一起用于反應(yīng)的5'-引物的序列是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage91</formula>(SEQED:51)每個(gè)PCR的3'-引物包含與具體K輕鏈序列的羧基末端序列互補(bǔ)的部分，包括終止密碼子和限制位點(diǎn)。例如，與最終衍自雜交瘤3.10.1的質(zhì)粒一起用于反應(yīng)的3'-引物的序列是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage91</formula>單獨(dú)的引物組與相應(yīng)克隆的質(zhì)粒一起用于單獨(dú)的PCR反應(yīng)中，以擴(kuò)增十種K輕鏈編碼區(qū)序列。使從這些反應(yīng)獲得的十種擴(kuò)增產(chǎn)物分別進(jìn)行凝膠分離，并用QIAquicl^凝膠提取試劑盒(目錄號(hào)28704,Qiagen,Valencia,CA)純化。然后這些純化產(chǎn)物各自用合適的限制酶切割，獲得與質(zhì)粒分開(kāi)的K輕鏈編碼區(qū)序列。例如，用和Sa/I切割對(duì)應(yīng)于雜交瘤3.10.1的純化產(chǎn)物，所述酶的位點(diǎn)如上所述在該克隆質(zhì)粒的PCR擴(kuò)增過(guò)程中由引物引入。所得的限制酶消化K輕鏈編碼區(qū)序列再分別進(jìn)行凝膠分離，并用QIAquick⑧凝膠提取試劑盒(目錄號(hào)28704,Qiagen,Valencia,CA)純化。然后將這十種純化的限制酶消化K輕鏈編碼區(qū)序列各自分別連接到哺乳動(dòng)物表達(dá)載體pDSRa20(WO90/14363),以創(chuàng)建對(duì)應(yīng)于十個(gè)原始雜交瘤的的十種單獨(dú)的K輕鏈表達(dá)載體。然后對(duì)這十種K輕鏈表達(dá)載體插入片段進(jìn)行測(cè)序。確認(rèn)含有最終衍自雜交瘤3.10.1的K輕鏈編碼區(qū)的pDSRa20表達(dá)栽體(pDSRa20:3.10.1)包含5473個(gè)tt^t,其中包括719個(gè)^JJftPCR片段，后者編碼3.10.1K輕鏈的235個(gè)氨基酸殘基(包括20個(gè)氨基酸的K鏈信號(hào)序列)。如表6所示，該表達(dá)栽體包含七個(gè)功能區(qū)。表6表達(dá)載體pDSRa20:3.10.lK<table>tableseeoriginaldocumentpage93</column></row><table>B.重鏈的克隆用與以上實(shí)施例3A中討論的用于克隆輕鏈的相同方法，從十個(gè)雜交瘤克隆抗HGF抗體重鏈的可變區(qū)。如以上實(shí)施例3A所述，分離得自十個(gè)雜交瘤的每一個(gè)的總RNA，進(jìn)行RACE5'-修飾，并用以產(chǎn)生cDNA分子。如實(shí)施例3A中對(duì)輕鏈所討論的，在單獨(dú)的PCR反應(yīng)中擴(kuò)增這十種cDNA分子，例外的是設(shè)計(jì)反向引物(5'-GGACACTGACATGGACTGAAGGAGTA-3'(SEQIDNO:53)),以結(jié)合重鏈可變區(qū)的互補(bǔ)序列。正向引物還是正向GeneRacer，嵌套引物(5'GGACACTGACATGGACTGAAGGAGTA畫3')(SEQIDNO:49)。將十種擴(kuò)增重鏈可變區(qū)序列的每一種分別連接到pCR4-TOPO質(zhì)粒。然后將所得的十種各含有十種重鏈可變區(qū)序列之一的質(zhì)粒分別在細(xì)菌中擴(kuò)增，并如以上實(shí)施例3A中對(duì)輕鏈所述，各質(zhì)粒各取幾個(gè)克隆進(jìn)行測(cè)序。用這些序列設(shè)計(jì)PCR引物，以如下所述從克隆的質(zhì)粒擴(kuò)增每一種重鏈可變區(qū)。十個(gè)PCR的每一個(gè)的3'-引物包含與具體重鏈可變區(qū)序列的共有序列的羧基末端互補(bǔ)的部分，包括終止密碼子和限制位點(diǎn)。例如，用以擴(kuò)增最終衍自雜交瘤3.10.1的重鏈可變區(qū)的3'-引物的序列是5*-GT<3GAGGCACTAGAGACGGTGACCAGGGTTCC-3*BsmBI(SEQIDNO:55)單獨(dú)的引物組與相應(yīng)克隆的質(zhì)粒一起用于單獨(dú)的PCR反應(yīng)中，以擴(kuò)增十種重鏈可變區(qū)序列。使從這些反應(yīng)獲得的十種擴(kuò)增產(chǎn)物分別進(jìn)行凝月交分離，用QUIAquick凝膠提取試劑盒純化，并如實(shí)施例3A中對(duì)輕鏈所述用合適的限制酶切割。如實(shí)施例3A中所述，所得的限制酶消化重鏈可變區(qū)序列再分別進(jìn)行凝膠分離，并用QUIAquick凝膠提取試劑盒純化。然后將這十種純化的限制酶消化重鏈可變區(qū)序列的三種一一最終衍自雜交瘤3.10.1、1.24.1和2.4.4的重鏈可變區(qū)序列分別連接到哺乳動(dòng)物表達(dá)載體pDSRa20:hIgGCH中，以創(chuàng)建三種重鏈IgGl表達(dá)載體。pDSRot20:hlgGCH表達(dá)載體與pDSRa20相同，例外的是它還含有IgGl恒定區(qū)序列。pDSRa20:hlgGCH表達(dá)載體在表7中總結(jié)。表7.pDSRa20:hlgGCH表達(dá)載體<table>tableseeoriginaldocumentpage95</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage96</column></row><table>對(duì)三個(gè)IgG表達(dá)載體插入序列的重鏈可變區(qū)進(jìn)行測(cè)序。含有最終源自雜交瘤3.10.1的重鏈可變區(qū)的pDSRot20:hlgGCH表達(dá)載體(pDSRa20:hlgGCH:3.10.1)在表8中總結(jié)。表8.pDSRa20:hIgGCH:3.10.1表達(dá)載體質(zhì)粒g對(duì)數(shù)目2-881牛垂體糖蛋白激素a-亞單位(a-FSH)的轉(zhuǎn)錄終止/聚腺苷酸化信號(hào)(Goodwin等，1983,M/c/e,c^cMsi仏11:6873-82;Genbank4全索號(hào)X00004)882-2027含有內(nèi)源小鼠DHFR啟動(dòng)子、cDNA編碼序列和DHFR轉(zhuǎn)錄終止/聚腺苷酸化信號(hào)的小鼠二氫葉酸還原酶(DHFR)小基因(Gasser等，1982,iVoc.爿card22:6522-6;Nunberg等，1980，Ce〃15:355-64;Setzer等，1982,/252:5143-7;McGrogan等，1985,/歷o/.Oe附.雄:2307-14)2031-3947^^有氨節(jié)青霉素抗性標(biāo)記基因和大腸桿菌中質(zhì)粒復(fù)制起點(diǎn)的pBR322序列(Genbank檢索號(hào)J01749)3949-4292SV40早期啟動(dòng)子、增強(qiáng)子和復(fù)制起點(diǎn)(Takebe等，1988,Mo/.Ce〃祝o/.S:466-72,Genbank檢索號(hào)J02400)4299-4565HTLV-1LTR結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)子元件(Seiki等，1983,Ato/.爿cadf/KSQ:3618-22,Genbank檢索號(hào)J02029)4574-4730SV4016S、19S剪接供體/接納體信號(hào)的內(nèi)含子(Okayama和Berg，1983.Mo/.CeZ/歷o/.2:280-9,Genbank檢索號(hào)J02400)4755-5473位點(diǎn)和位點(diǎn)之間的3.10.1重鏈IgGlcDNA將十種純化的重鏈可變區(qū)序列的每一種分別與編碼IgG2恒定區(qū)的序列一起連接到pDSRa20哺乳動(dòng)物表達(dá)載體,創(chuàng)建十種IgG2表達(dá)載體。所得的十種IgG2表達(dá)載體的每一種(標(biāo)識(shí)為pDSRa20:hlgG2:雜交瘤力包含編碼IgG2恒定區(qū)的序列和十種重鏈可變區(qū)序列之一。對(duì)這十種重鏈可變區(qū)序列插入序列進(jìn)行測(cè)序，以確認(rèn)它們包含來(lái)自pCR4-TOPO克隆的克隆質(zhì)粒中鑒定出的相同重鏈可變區(qū)序列。含有最終源自雜交瘤2,12.1(pDSRa20:hlgG2:2.12.1)的重鏈可變區(qū)的pDSRa20:hlgG2表達(dá)載體在表9中總結(jié)。表9.pDSRa20:hlgG2:2.12.1表達(dá)載體<table>tableseeoriginaldocumentpage98</column></row><table>K輕鏈可變區(qū)的cDNA序列(SEQEDNO.:1,3,5,7,9,11,13,15,17和19)、K輕鏈恒定區(qū)的cDNA序列(SEQIDNO:21)、重鏈可變區(qū)的cDNA序列(SEQIDNO.:2,4，6,8，10,12，14,16,18和20)以及IgGl和IgG2重鏈恒定區(qū)的cDNA序列(SEQIDNO:22和23)在圖3中顯示。對(duì)從這些cDNA序列的每一種預(yù)測(cè)的多肽序列進(jìn)行確定。K輕鏈可變區(qū)的預(yù)測(cè)多肽序列(SEQIDNO:.24,26,28,30，32,34，36,38,40和42)、K輕鏈恒定區(qū)的預(yù)測(cè)多肽序列(SEQIDN044)、重鏈可變區(qū)的預(yù)測(cè)多肽序列(SEQ.IDNO.25,27,29,31,33,35,37,39,41和43)以及IgGl和lgG2重鏈恒定區(qū)的預(yù)測(cè)多肽序列(SEQIDNO:"和46)在圖4中顯示。根據(jù)序列數(shù)據(jù)，確定衍生每種重鏈可變區(qū)或輕鏈可變區(qū)的種系基因。圖1、2、3或4中種系基因的標(biāo)記緊接標(biāo)示在相應(yīng)的雜交瘤系之后。對(duì)序列的相關(guān)性作進(jìn)一步分析(圖1B和2B),得出圖1A(k輕鏈可變區(qū))和圖2A(重鏈可變區(qū))表示的進(jìn)化系統(tǒng)樹(shù)。實(shí)施例4在293T細(xì)胞中的瞬時(shí)表達(dá)在十個(gè)單獨(dú)的共轉(zhuǎn)染中，用包含實(shí)施例3A所述的k輕鏈序列的pDSRa20表達(dá)載體(輕鏈載體)和包含實(shí)施例3B所述的重鏈序列的pDSRa20表達(dá)載體(重鏈載體)共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。在這十個(gè)單獨(dú)的共轉(zhuǎn)染中，用最終衍自實(shí)施例1中討論的雜交瘤之一的輕鏈栽體和重鏈載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。具體地說(shuō)，對(duì)于最終衍自雜交瘤3.10.1的栽體的共轉(zhuǎn)染，使用包含IgGl(pDSRot20:hlgGCH:3.10.1)的重鏈栽體。對(duì)于最終衍自其他九個(gè)雜交瘤的載體的共轉(zhuǎn)染，使用包含IgG2(pDSRoc20:hlgG2:雜交瘤^的重鏈載體。使用Fugene6或X-TremeGeneRO-1539(均來(lái)自RocheMolecularBiochemicals,Indianapolis,IN)，4姿照廠商提供的說(shuō)明書進(jìn)行共轉(zhuǎn)染。首先使用私著293T細(xì)胞在標(biāo)準(zhǔn)的滾瓶中進(jìn)行共轉(zhuǎn)染。以每滾瓶4xl0:5xl(^個(gè)細(xì)胞接種滾瓶中的DMEM,所述DMEM含有5%胎牛血清(FBS)(Hyclone,目錄號(hào)SH30(V70.03)、IX非必需氨基酸(Sigma,目錄號(hào)M7145)、IX青霉素/鏈霉素(Sigma,目錄號(hào)P7539(10,000U/ml青霉素/鏈霉素))和IX丙酮酸鈉(Invitrogen,Carlsbad,CA)。當(dāng)細(xì)胞鋪滿滾瓶的60-70%時(shí)，將最終源自特定雜交瘤的重鏈載體和輕鏈載體共轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，持續(xù)24小時(shí)，隨后將培養(yǎng)基改成不含血清的相同培養(yǎng)基。在轉(zhuǎn)染后48小時(shí)和96小時(shí)兩次收集無(wú)血清培養(yǎng)基，并用新鮮的無(wú)血清培養(yǎng)基置換，共收集到1.2SL體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。使用無(wú)血清適應(yīng)的293T細(xì)胞在上述無(wú)血清的相同培養(yǎng)基中的懸浮液，重復(fù)進(jìn)^f亍十個(gè)單獨(dú)的共轉(zhuǎn)染。將對(duì)應(yīng)于特定雜交瘤的重鏈載體和輕鏈載體共轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)體積為500mL的細(xì)胞中。轉(zhuǎn)染細(xì)月包培養(yǎng)7天后，收集無(wú)血清條件培養(yǎng)基。實(shí)施例5CHO細(xì)胞的抗體表達(dá)和克隆用DHFR缺陷的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHOcr)產(chǎn)生重組抗HGF抗體的穩(wěn)定表達(dá)。如實(shí)施例4所討論，在十個(gè)單獨(dú)的共轉(zhuǎn)染中，用最終衍自實(shí)施例1討論的雜交瘤之一的重鏈栽體和輕鏈載體共轉(zhuǎn)染CHOd—細(xì)胞。用標(biāo)準(zhǔn)的磷酸鉀方法實(shí)現(xiàn)共轉(zhuǎn)染。使十個(gè)共轉(zhuǎn)染的每一個(gè)的轉(zhuǎn)染細(xì)胞分別生長(zhǎng)于選擇性培養(yǎng)基中，所迷選擇性培養(yǎng)基無(wú)次黃嘌呤-胸苷(Gibco/BRL,Carlsbad,CA目錄號(hào)11965)，含有高葡萄糖DMEM及5。/。透析過(guò)的胎牛血清。這種無(wú)次黃噪呤-胸苷的培養(yǎng)基選擇表達(dá)重組DHFR酶的細(xì)胞的生長(zhǎng)。用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA測(cè)定篩選各生長(zhǎng)轉(zhuǎn)染子的培養(yǎng)基，以檢測(cè)人抗體的存在。實(shí)施例6CHOd'克隆中抗HGF抗體的表達(dá)實(shí)施例5所迷的十個(gè)不同穩(wěn)定CHOcT克隆(每個(gè)不同的克隆表達(dá)十種不同的抗HGF抗體之一)的每一個(gè)取六個(gè)樣品，分別生長(zhǎng)于生長(zhǎng)培養(yǎng)基中。所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基是高葡萄糖DMEM(Gibco/BRL，Carlsbad,CA目錄號(hào)11965),補(bǔ)充有5%透析過(guò)的FBS、非必需氨基酸和L-谷氨酰胺(LifeTechnologies,Carlsbad,CA)。細(xì)胞在37°C、5%C02下生長(zhǎng)。當(dāng)CHOd-克隆達(dá)到六孔(six-well)生長(zhǎng)階段時(shí)，向生長(zhǎng)培養(yǎng)基中加入10nM甲氨喋呤，增強(qiáng)抗體的表達(dá)。細(xì)胞鋪滿之后，將其轉(zhuǎn)移到100mm平皿。曱氨喋呤的濃度從10nM逐步提高至20nM、至50nM、至100nM、至250nm、至500nM、至1|nM、至2mM、至4|LiM，最后至10juM。使細(xì)胞在每種濃度下最少保持1周，直到據(jù)目測(cè)確定它們已充分適應(yīng)給定的曱氨喋呤濃度。檢測(cè)每種甲氨喋呤濃度下各克隆的條件培養(yǎng)基，以測(cè)定每種抗HGF抗體的表達(dá)水平。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的ELISA和時(shí)間分辨焚光(TRF)夾心測(cè)定法，半定量地測(cè)量抗HGF抗體與涂布人HGF的平板的結(jié)合，來(lái)檢測(cè)培養(yǎng)基。如下所述使抗體表達(dá)水平最高的曱氨喋呤增強(qiáng)克隆適應(yīng)在無(wú)血清生產(chǎn)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。用胰蛋白酶處理培養(yǎng)容器中的克隆，離心，并在250ml緊固蓋(solidcap)搖瓶中以4xl()S個(gè)細(xì)月^yml重新懸浮于50ml無(wú)血清生產(chǎn)培養(yǎng)基中。培養(yǎng)物在37。C溫室中孵育，攪拌速度大約125RPM。每隔3-4天，離心收集細(xì)胞，用新鮮的無(wú)血清生產(chǎn)培養(yǎng)基稀釋至4xl05個(gè)細(xì)胞/ml。對(duì)于每種培養(yǎng)物，大約加入十倍新鮮的無(wú)血清生產(chǎn)培養(yǎng)基，以完成此適應(yīng)期。實(shí)施例7從重組細(xì)胞條件培養(yǎng)基純化抗體收集實(shí)施例1所述的雜交瘤、實(shí)施例4所述的瞬時(shí)表達(dá)293T細(xì)胞、實(shí)施例5所述的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子和實(shí)施例6所述的曱氨喋呤增強(qiáng)克隆的培養(yǎng)基。用YM30spiralwoundcartridge(Milipore,Bedford,MA目錄號(hào)S10Y30),按照廠商提供的說(shuō)明書，將來(lái)自這些來(lái)源的各培養(yǎng)基分別濃縮約10倍。通過(guò)高效液相色傳(HPLC)估算各濃縮培養(yǎng)基樣品中的抗體濃度。用重組蛋白質(zhì)A瓊脂糖(rProA)(Amersham,Piscataway,NJ,目錄號(hào)17-1279-03),通過(guò)親和樹(shù)脂純化從濃縮培養(yǎng)基樣品純化抗體。首先用磷酸緩沖鹽水(PBS)洗滌rProA四次。最后一次洗滌之后，通過(guò)混合等體積的rProA和PBS,制備洗滌rProA在PBS中的淤漿。將該rProA淤漿加入到各濃縮培養(yǎng)基中，加入量大約為各培養(yǎng)基樣品中5|ug抗體加入lplrProA淤漿，但對(duì)于任何培養(yǎng)基樣品，加入量均不低于50nlrProA淤漿。所得培養(yǎng)U淤漿樣品在4°C攪拌下孵育過(guò)夜。然后離心培養(yǎng)J7淤漿樣品，使rProA沉淀。棄去含有未結(jié)合蛋白質(zhì)的上清液級(jí)份。將rProA沉淀分別重新懸浮于各0.5mlPBS中。然后將重新懸浮的rProA樣品轉(zhuǎn)移到0.45拜Spin-X管(CoStar,ComingNY,目錄號(hào)8162)，離心除去PBS。然后每次用0.5mlPBS洗滌Spin-X管中的rProA三次。通過(guò)加入1.5體積的0.1M甘氨酸，pH2.7并在室溫下孵育10分鐘，從Spin-X管中的rProA洗脫抗體級(jí)份。然后離心Spin-X-管，分別收集各Spin-X管的洗脫液。重復(fù)洗脫，集中得自各Spin-X-管的兩份洗脫液。用二十五分之一體積的1.0MTris,pH9.2中和集中洗脫液的pH。然后使各樣品濾過(guò)新的Spin-X管，除去顆粒物。用人IgG為標(biāo)準(zhǔn)，通過(guò)Bradford測(cè)定法檢測(cè)最終制品的蛋白質(zhì)濃度。將各最終制品的樣品分別在SDS-PAGE凝膠的不同道上跑膠，用考馬斯藍(lán)染色并進(jìn)行目測(cè)檢查，以評(píng)估純度。實(shí)施例8抗體結(jié)合HGF的特征A.親和力測(cè)定按照廠商說(shuō)明書使用BIAcore3000(Biacore,Inc.,Piscataway,NJ),對(duì)實(shí)施例6所述的六種抗HGF抗體(最終衍自雜交瘤3.10.1、2.4.4、2.12.1、1.29.1、1.75.1和1.74.3)進(jìn)行親和力分析。用于這些分析的操作緩沖液是含0.005%P20表面活性劑(BIAcore,Inc.Piscataway,NJ)的PBS。按照廠商說(shuō)明書使用胺偶聯(lián)試劑盒(Biacore,Inc.Piscataway,NJ)，通過(guò)伯胺基團(tuán)將重組G蛋白(Pierce,Rockford,IL)固定化到研究級(jí)CM5傳感器芯片(Biacore,Inc.Piscataway,NJ)。在這六個(gè)單獨(dú)的樣品中，按照廠商說(shuō)明書將約200共振單位(RU)的六種抗HGF抗體的每一種分別連接到固定化G蛋白。以50jil/min的流速將包含各種濃度(O-IOOnM)的人HGF的樣品注射經(jīng)過(guò)結(jié)合抗體表面，持續(xù)3分鐘。用BIA評(píng)估版3.1計(jì)算機(jī)程序(BlAcore,Inc.Piscataway,NJ)測(cè)定抗體結(jié)合動(dòng)力學(xué)參數(shù)，包括ka(締合速率常數(shù))、kd(解萬(wàn)速率常數(shù))和Kd(解離平衡常數(shù))。較低的解離平衡常數(shù)表明抗體對(duì)HGF的親和力4交強(qiáng)。數(shù)據(jù)在圖6A中顯示。還用平衡結(jié)合法測(cè)定四種抗HGF抗體(最終衍自雜交瘤2.4.4、1.29.1、1.74.2和2.12.1)的每一種的Kd但。該法是使用含0.005%P20表面活性劑(BIAcore,Inc.Piscataway,NJ)的PBS作為操作緩沖液，用BIAcore3000(Biacore,Inc.,Piscataway,NJ)來(lái)進(jìn)行的。按照廠商說(shuō)明書使用胺偶聯(lián)試劑盒(Biacore,Inc.Piscataway,NJ),通過(guò)伯胺基團(tuán)將這四種抗HGF抗體分別固定化到研究級(jí)CM5傳感器芯片(Biacore,Inc.Piscataway,NJ)。在單獨(dú)的測(cè)定中，在室溫下，將濃度范圍(0.01nM-50nM)內(nèi)的這四種抗HGF抗體的每一種分別與兩種不同濃度(0.05nM和1nM)的人HGF(于含0.005%P-20和0.1mg/mLBSA的PBS中)的每一種孵育至少六小時(shí)。然后將這些樣品的每一種注射經(jīng)過(guò)已固定化有相同抗HGF抗體的CM5傳感器芯片的表面。所獲得的結(jié)合信號(hào)與溶液中的游離HGF成比例。用雙曲線單點(diǎn)同質(zhì)結(jié)合模型(dual-curveone-sitehomogeneousbindingmodel)(KinExA軟件，SapidyneInstrumentsInc.,BoiseID)對(duì)竟?fàn)幥€進(jìn)行非線性回歸分析，獲得解離平衡常數(shù)(Ko)。這些解離平衡常數(shù)值在圖6B中顯示。B.抗體結(jié)合HGF的特異性人HGF在CHO細(xì)胞中表達(dá)，或者購(gòu)自R&DSystems(R&DSystems,MinneapolisMN,目錄號(hào)294-HG-005)。用Liu等，Mo/ecw/ar/""or,BiochimBiophysActa.16:1216(2):299-300(1993)中所述的序列，制備重組小鼠HGF。通過(guò)用桿狀病毒載體在昆蟲細(xì)胞中表達(dá)，或者通過(guò)在293T細(xì)胞中表達(dá)，獲得重組小鼠HGF。在任一種情況下，均通過(guò)^i酸肝素親和色i昝純化小鼠HGF。各人HGF制品和小鼠HGF制品均顯示生物活性。人HGF在人PC3細(xì)胞(ATCCManassas,VA#CRL1435)和在小鼠4T1細(xì)胞(ATCCManassas,VA#CRL2531)中誘導(dǎo)劑量依賴性人Met磷酸化。小鼠HGF在小鼠4T1細(xì)胞中誘導(dǎo)Met磷酸化，但不能在人PC3細(xì)胞中誘導(dǎo)。將人HGF和小鼠HGF在SDSPAGE凝膠的單獨(dú)道上跑膠。人HGF和小鼠HGF分別以100ng/道和10ng/道各自進(jìn)行。某些凝膠在非還原條件下進(jìn)行，其他單獨(dú)的凝膠在還原條件下(使用(3-巰基乙醇)進(jìn)行。將SDSPAGE凝膠中的人HGF和小鼠HGF轉(zhuǎn)移到硝基纖維膜上。將這些膜分別與實(shí)施例6所述的十種抗HGF抗體之一孵育。這十種抗HGF抗體的每一種分別與硝酸纖維膜一起孵育，該硝酸纖維膜得自還原條件下含人HGF和小鼠HGF的凝膠和非還原條件下含人HGF和小鼠HGF的凝膠。然后將硝酸纖維膜與連接到HRP的山羊抗人IgG抗體(Pierce,Rockford,IL,目錄號(hào)31412)—起孵育。按照廠商說(shuō)明書使用電化學(xué)發(fā)光儀(ECL;AmershamPharmaciaBiotech,Piscataway,NJ,目錄號(hào)RPN2106)檢測(cè)該連接到HRP的山羊抗人IgG抗體的信號(hào)。圖7顯示檢測(cè)實(shí)施例6所述的十種抗HGF抗體的每一種的凝膠照片。左邊的圖片顯示在非還原條件下檢測(cè)抗100ng的人HGF(道1)、10ng的人HGF(道2)、100ng的小鼠HGF和10ng的小鼠HGF(道4)的每種抗體的凝膠。右邊的圖片顯示在還原條件下檢測(cè)抗100ng的人HGF(道5)、10ng的人HGF(道6)、100ng的小鼠HGF(道7)和10ng的小鼠HGF(道8)的每種抗體的凝膠。受測(cè)的各抗HGF抗體在非還原條件下均結(jié)合人HGF(道1和2)。受測(cè)的抗HGF抗體在非還原條件下均不明顯結(jié)合小鼠HGF(道3和4),在還原條件下均不明顯結(jié)合人HGF(道5和6)或小鼠HGF(道7和8)。c.用融合蛋白進(jìn)行表位作圖用標(biāo)準(zhǔn)的分子技術(shù)構(gòu)建哺乳動(dòng)物表達(dá)載體(圖9A),所述表達(dá)載體包含編碼雞親和素的cDNA序列，后者鄰近pCEP4載體(Invitrogen,Carlsbad,CA,目錄號(hào)V044-50)的多克隆位點(diǎn)。該載體中包括雞親和素信號(hào)序列(圖9B),使隨后表達(dá)的融合蛋白能夠分泌。通過(guò)將編碼特定靶蛋白的序列插入到融合蛋白表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)，構(gòu)建表達(dá)載體。所得融合構(gòu)建物各自在靶蛋白的N端編碼親和素蛋白。使用這種技術(shù)，制備融合到以下把蛋白的包含親和素的融合蛋白全長(zhǎng)人HGF;d5HGF，其為人HGF的天然剪接變體(Rubin,J.等PNAS88:415-419(1991));全長(zhǎng)小鼠HGF;包含人HGF的N-端部分(氨基酸32-505)和小鼠HGF的C-端部分(氬基酸508-728)的嵌合體#1;包含小鼠HGF的N-端部分(氨基酸33-506)和人HGF的C-端部分(氨基酸506-728)的嵌合體#2;及包含人HGF的N-端部分(氨基酸32-582)和小鼠HGF的C-端部分(氛基酸583-728)的嵌合體#3。融合蛋白的示意圖在圖IO中顯示。HGF的N端結(jié)構(gòu)域含有四個(gè)kringle結(jié)構(gòu)域，由標(biāo)記為Kl-K4的方框表示。HGF的C端結(jié)構(gòu)域與絲氨酸蛋白酶享有同源性。該結(jié)構(gòu)域由橫條表示?？招牡姆娇蚝蛯?shí)心的橫條表示人HGF序列。帶陰影的方框和帶條紋的橫條表示小鼠的序列。通過(guò)按照廠商說(shuō)明書使用Lipofectamine(GibcoBRL,Carlsbad,CA,目錄號(hào)18324)，用單獨(dú)的融合蛋白表達(dá)栽體之一分別轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，使單獨(dú)的融合蛋白在細(xì)胞中瞬時(shí)表達(dá)。轉(zhuǎn)染約48小時(shí)后，收集條件培養(yǎng)基并進(jìn)行檢測(cè)。在單獨(dú)的樣品中，將實(shí)施例6所述的十種抗HGF抗體的五種(最終衍自雜交瘤2.4.4、1.74,1、1.75.1、3.10.1和2.12.1)分別與包含每種以下耙蛋白的融合蛋白一起孵育全長(zhǎng)人HGF、d5HGF和小鼠HGF。將育后，用涂布生物素的珠(SpherotechInc.,Libertyville,IL,目錄號(hào)TP-60-5)分別捕捉各樣品中的融合蛋白。通過(guò)加入FITC標(biāo)記的抗親和素抗體(VectorLab,Burlingame,CA,目錄號(hào)SP-2040),標(biāo)記所得珠-蛋白質(zhì)復(fù)合物。通過(guò)加入藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的山羊抗人F(ab')2抗體(SouthernBiotechAssociates,Inc,Birmingham,AL,目錄號(hào)2043-09),領(lǐng)'J定抗HGF抗體的存在。然后用熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS)對(duì)這些樣品進(jìn)行分析。在BectonDickinsonBioscienceFACScan(BD,FranklinLakes,NJ)上檢測(cè)FITC(其顯示親和素的存在)和/或PE(其顯示抗HGF抗體的存在)標(biāo)記的珠復(fù)合物。受測(cè)的五種抗HGF抗體的FACS散點(diǎn)圖在圖8中顯示。在單獨(dú)的樣品中，將實(shí)施例6所述的十種抗HGF抗體的兩種(最終衍自雜交瘤2.12.1和2.4.4)分別與包含每種以下靶蛋白的融合蛋白一起解育全長(zhǎng)人HGF、d5HGF和小鼠HGF，嵌合體#1、嵌合體#2和嵌合體#3。如上所述對(duì)這些樣品進(jìn)行FACS分析。這些結(jié)合實(shí)驗(yàn)的結(jié)果總結(jié)于圖10A示意圖的右邊?？贵w2.12.1和抗體2.4.4均不結(jié)合嵌合體#1?？贵w2.12.1和抗體2.4.4均結(jié)合嵌合體#2?？贵w2.4.4結(jié)合嵌合體#3，抗體2.12.1不結(jié)合嵌合體#3。D.用融合蛋白進(jìn)一步進(jìn)行表位作圖為提供更多的有關(guān)抗體2.4.4和抗體2.12.1所結(jié)合的HGF表位的信息，構(gòu)建另外的人/小鼠嵌合體，并如以上實(shí)施例8C所述進(jìn)行檢測(cè)(圖10B)。用以產(chǎn)生嵌合體的引物在表10中顯示。<table>tableseeoriginaldocumentpage107</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage108</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage109</column></row><table>圖IOB顯示為研究而構(gòu)建的小鼠HGF嵌合分子和人HGF嵌合分子的示意圖，抗體2.12.1和抗體2.4.4對(duì)各嵌合體的結(jié)合特性在圖的右手邊標(biāo)出。本研究的嵌合體#1-3與實(shí)施例8C和圖IOA所述的嵌合體#1-3完全相同。嵌合體#4-6將更多的小鼠HGFN端摻入到在其他方面完全屬于人的HGF分子。嵌合體#7將小鼠HGF的氨基酸507-585應(yīng)用到在其他方面屬于人的HGF分子，嵌合體#8將人HGF的氨基酸507-585應(yīng)用到在其他方面屬于小鼠的HGF分子。嵌合體#9從小鼠HGF的氨基酸1-585和人HGF的氨基酸586-731構(gòu)建。按實(shí)施例8C所述測(cè)定抗體2.4.4和抗體2.12.1與嵌合蛋白的結(jié)合?？贵w2.4.4或抗體2.12.1與一種融合蛋白孵育后，用涂布有生物素的珠(SpherotechInc.,Libertyville,IL,目錄號(hào)TP-60-5)分別捕捉各樣品中的融合蛋白。通過(guò)加入FITC標(biāo)記的抗親和素抗體(VectorLab,Burlingame,CA,目錄號(hào)SP-2040),標(biāo)記所得珠-蛋白質(zhì)復(fù)合物。通過(guò)加入藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的山羊抗人F(ab')2抗體(SouthernBiotechAssociates,Inc,Birmingham,AL,目錄號(hào)2043-09)，測(cè)定抗HGF抗體的存在。然后用熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS)對(duì)這些樣品進(jìn)行分析。在BectonDickinsonBioscienceFACScan(BD,FranklinLakes,NJ)上沖企測(cè)FITC(其顯示親和素的存在)和/或PE(其顯示抗HGF抗體的存在)標(biāo)記的珠復(fù)合物。在一些情況下，使用FITC待表達(dá)歸一化之后，抗體由PE標(biāo)記結(jié)合，然后進(jìn)行單色FACS分析。這種方法提高測(cè)定的靈敏度，并有助于測(cè)量與不以很高水平表達(dá)的構(gòu)建物的結(jié)合。如圖10B所示，抗體2.4.4和抗體2.12.1均結(jié)合嵌合體#8(圖10B),所述嵌合體含有人HGF的氨基酸507-585。這些結(jié)果提示該區(qū)域含有直接或間接參與抗體2.4.4和抗體2.12.1與HGF結(jié)合的殘基。在該相同507-585區(qū)域含有小鼠序列的嵌合體(嵌合體7和9)不結(jié)合抗體2.12.1或抗體2.4.4。嵌合體3不結(jié)合抗體2.12.1,但盡管存在人HGF的氨基酸507-585，但其確實(shí)結(jié)合抗體2.4.4。為獲得更多的有關(guān)人HGF的氨基酸507-585(GWMVSLRYRNKHICGGSLIKESWVLTARQCFPSR—(SEQIDNO:123)(參見(jiàn)圖IOD))的信息，用表10給出的引物創(chuàng)建含有特定點(diǎn)突變的突變HGF，所述點(diǎn)突變?cè)诎被?07-585區(qū)域?qū)⑷藲埢淖兂尚∈髿埢?圖IOC)。構(gòu)建了含有五個(gè)單獨(dú)的非保守氨基酸變化(人HGF序列變成小鼠HGF序列，Genbank檢索號(hào)分別為NM一000601和NM—010427)的人HGF-親和素融合蛋白。還創(chuàng)建了兩個(gè)另外的構(gòu)建物，其中一個(gè)在人HGF序列中含有兩個(gè)氨基酸插入，另一個(gè)在小鼠序列中含有兩個(gè)氛基酸缺失(圖IOC)。如實(shí)施例8C和8D所述使這些構(gòu)建物表達(dá)并進(jìn)行結(jié)合分析?？贵w2.4.4或抗體2.12.1與一種突變蛋白孵育后，用涂布有生物素的珠(SpherotechInc.,Libertyville,EL,目錄號(hào)TP-60-5)分別捕捉各樣品中的突變蛋白。通過(guò)加入FITC標(biāo)記的抗親和素抗體(VectorLab,Burlingame,CA,目錄號(hào)SP-2040),標(biāo)記所得珠-蛋白質(zhì)復(fù)合物。通過(guò)加入藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的山羊抗人F(ab')2抗體(SouthernBiotechAssociates,Inc,Birmingham,AL,目錄號(hào)2043-09),測(cè)定抗HGF抗體的存在。然后用熒光激活細(xì)胞分選儀(FACS)對(duì)這些樣品進(jìn)行分析。在BectonDickinsonBioscienceFACScan(BD,FranklinLakes,NJ)上檢溯'JFITC(其顯示親和素的存在)和/或PE(其顯示抗HGF抗體的存在)標(biāo)記的珠復(fù)合物。在一些情況下，使用FITC待表達(dá)歸一化之后，抗體由PE標(biāo)記結(jié)合，然后進(jìn)行單色FACS分析。這種方法提高測(cè)定的靈壽文度，并有助于測(cè)量與不以很高水平表達(dá)的構(gòu)建物的結(jié)合。發(fā)現(xiàn)在氨基酸561而不是氨基酸592、601或647的突變破壞突變的人HGF與抗體2.12.1之間的結(jié)合，以及突變的人HGF與抗體2.4.4之間的結(jié)合。在氨基酸555的突變破壞與抗體2.12.1的結(jié)合，但不干擾與抗體2.4.4的結(jié)合。插入540N和541K這兩個(gè)小鼠氨基酸(在人序列中不存在，參見(jiàn)圖IOD)破壞與兩種抗體的結(jié)合。小鼠HGF序列中缺失這兩個(gè)氨基酸并不導(dǎo)致兩種抗體結(jié)合小鼠HGF。E.通過(guò)蛋白酶保護(hù)測(cè)定進(jìn)4亍表位作圖還補(bǔ)充進(jìn)行經(jīng)典的蛋白酶保護(hù)測(cè)定，以鑒定被抗體2.12.1結(jié)合的HGF表位。參見(jiàn)Yi和Skalka,Mqp;/"g五;"o戸o/Mowoc/o"a/Biopolymers(PeptideScience)55:308-318(2000)。將人HGF(30ug/10ul)與抗體2.12.1(40pg/4ul)—起在200ul的0.1MTris緩沖液,pH7.5中混合，在水上賻育30分鐘。用胰蛋白酶(l昭)在37°C消化1小時(shí)。使消化物進(jìn)行反相HPLC，以分離肽。同時(shí)用胰蛋白酶進(jìn)行無(wú)抗體2.12.1、只有人HGF的類似消化。HPLC柱(VydacC18,2.1x150mm,VydacInc.,HesperiaCA)用0.1%三氟乙酸(TFA)洗脫，洗脫梯度為2-35%乙腈于0.1%TFA中。通過(guò)HP1090HPLC儀(HewlettPackard,PaloAlto)記錄洗脫出的肽的UV跡線。比較兩張HPLC圖，以查出因與抗體2.12.1結(jié)合而被保護(hù)的肽(圖11A)。隨后進(jìn)行N端測(cè)序和質(zhì)i普分析，以鑒定出具體的被保護(hù)肽。通過(guò)在ABI-Procise蛋白質(zhì)測(cè)序4義(AppliedBiosystems,FosterCity,CA)中進(jìn)行Edman降解，來(lái)進(jìn)行N端肽測(cè)序。通過(guò)氨基酸在連接的HPLC儀中的保留時(shí)間以及與氨基酸標(biāo)準(zhǔn)的比較，鑒定出每個(gè)循環(huán)中的氨基酸。在PerceptiveVoyager質(zhì)傳儀(AppliedBiosystems,Framingham,MA)上進(jìn)行保護(hù)片段的質(zhì)i脊分析。用4-幾基氰基肉桂酸(HCCA)或芥子酸基質(zhì)進(jìn)行基質(zhì)輔助激光解吸電離(MALDI)。通過(guò)與已知的標(biāo)準(zhǔn)(氧化胰島素(3鏈和細(xì)胞色素c)校準(zhǔn)測(cè)定分子量。人HGF的a亞單位跨越氨基酸32494,(3亞單位跨越^J^酸495-728(參見(jiàn)Swiss-Prot涉及人HGF的條目P1421Q)。結(jié)合人HGFin的抗體2.12.1保護(hù)T33和T38.6這兩個(gè)峰(圖IIA)。T38.6峰含有兩種肽，它們均對(duì)應(yīng)于位于或靠近成熟HGF的(3亞單位的開(kāi)頭部分的序列(參見(jiàn)圖10D,以粗體下劃線文本開(kāi)頭的序列(VVNGIPTRTN(SEQIDNO:172》,以及參見(jiàn)圖IIC)。T33衍自a亞單位(圖11C)。根據(jù)質(zhì)鐠，分別測(cè)出T38.6峰的兩種肽的觀測(cè)質(zhì)量為7165和6840道爾頓。才艮據(jù)HGF序列中可能存在的胰蛋白酶切割位點(diǎn)(參見(jiàn)例如圖10D中人HGF的氨基酸559處的粗體下劃線精氨酸殘基)，預(yù)測(cè)559號(hào)精氨酸限定了被保護(hù)的肽的C端。還設(shè)計(jì)了另一個(gè)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)，以研究抗體結(jié)合肽。如上所述用胰蛋白酶消化HGF和抗體2.12.1的混合物1小時(shí)，然后通過(guò)Microcon⑧10(MilliporeCorp.,Bedford,MA)過(guò)濾，除去未結(jié)合肽。預(yù)期結(jié)合肽與抗體2.12.1—起被膜捕捉。將完整的人HGF(15昭)加入到肽-抗體2.12.1混合物中，以使結(jié)合肽從復(fù)合物中洗脫出來(lái)。將樣品在4°C下孵育過(guò)夜，然后再次通過(guò)Microcor^lO過(guò)濾，使被HGF洗脫的肽與抗體和完整HGF分離。兩種樣品(結(jié)合肽和未結(jié)合肽)均通過(guò)反相HPLC進(jìn)行分析(圖11B)。如上所述通過(guò)HPLC分離結(jié)合肽，并進(jìn)行N端測(cè)序和質(zhì)譜分析。當(dāng)用HGF洗脫結(jié)合肽時(shí)，觀察到有大的肽峰(圖11B中的T48)從抗體-HGF復(fù)合物從洗脫出來(lái)，經(jīng)N端肽測(cè)序鑒定其含有上述T38.6所見(jiàn)的相同兩種J3亞單位序列。基于質(zhì)語(yǔ)，T48峰中的肽的大小不盡相同，因此不能從這些數(shù)據(jù)預(yù)測(cè)出精確的C端。其他三個(gè)峰(在圖11B中以#標(biāo)記)要么不含有肽，要么含有與HGF無(wú)關(guān)的未知來(lái)源的肽。這兩個(gè)實(shí)驗(yàn)共同表明，HGF的(3亞單位的N端區(qū)域是抗體2.12.1的表位的一部分。這些數(shù)據(jù)是對(duì)實(shí)施例8D中的數(shù)據(jù)的補(bǔ)充，實(shí)施例8D發(fā)現(xiàn)參與結(jié)合的表位位于人HGF的氨基酸507-585中。對(duì)被保護(hù)的肽的突變分析及其分子質(zhì)量顯示，人HGF的抗體結(jié)合表位位于人HGF的氨基酸495-556中。F.抗體的竟?fàn)幮越Y(jié)合用FITC標(biāo)記實(shí)施例6所述的最終^t自雜交瘤雜交瘤2.4.4的抗HGF抗體(抗體2.4.4)和最終衍自雜交瘤2.12.1的抗HGF抗體(抗體2.12.1)，供用于如下進(jìn)行的竟?fàn)幮詼y(cè)定。抗體2.4.4和抗體2.12.1分別在pH8.5的PBS中透析。將FITC標(biāo)記([6-熒光素-5-(和-6)-酰胺基]己酸，琥珀酰亞胺酯(5(6)-SFX)混合異構(gòu)體)(MolecularProbes.目錄號(hào)F-2181)以5:1(標(biāo)記:抗體)的摩爾比從DMSO中5mg/mlFITC標(biāo)記的貯存液加入到兩種透析抗體的每一種中。將這些混合物在室溫下(20-22。C)暗處孵育過(guò)夜。然后使混合物各自分別流過(guò)已用PBS平衡的PharmaciaPD-10柱(Amersham,Piscataway,NJ)。所得制品在分光光度計(jì)中于280nM和495nM處讀數(shù)。用280nm處的吸光度計(jì)算這些制品中的抗體濃度。用以下公式計(jì)算標(biāo)記抗體與未標(biāo)記抗體之比^XMW抗體=摩爾標(biāo)記抗體Emg抗體/ml摩爾未標(biāo)記抗體其中Ax-495nm處的標(biāo)記吸光度，E=標(biāo)記的消光系數(shù)==77500。通常抗體的標(biāo)記比例為約3:1(FITC-標(biāo)記抗體:未標(biāo)記抗體)。對(duì)兩種標(biāo)記抗體的每一種與其他九種抗HGF抗體的每一種一起竟?fàn)幗Y(jié)合的能力進(jìn)行評(píng)估。將兩種標(biāo)記的抗HGF抗體的每一種分別與HGF—起膊育，同時(shí)還在其他九種未標(biāo)記的抗HGF抗體的每一種過(guò)量存在50倍(以摩爾計(jì))下，將兩種標(biāo)記的抗HGF抗體的每一種分別與HGF—起孵育。因此，在九個(gè)單獨(dú)的樣品中，標(biāo)記抗體2.4.4分別連同其他九種未標(biāo)記的抗HGF抗體的每一種與HGF—起孵育。同樣，在九個(gè)單獨(dú)的樣品中，標(biāo)記抗體2.12.1分別連同其他九種未標(biāo)記的抗HGF抗體的每一種與HGF—起孵育。還用HGF的d5剪接變體取代全長(zhǎng)HGF重復(fù)這些組合的每一種。這些竟?fàn)幮詼y(cè)定的陽(yáng)性竟?fàn)帉?duì)照是將每一種標(biāo)記抗體與過(guò)量50倍(以摩爾計(jì))的未標(biāo)記的相同抗體一起孵育。因此，將FITC標(biāo)記抗體2.12.1在未標(biāo)記的抗體2.12.1過(guò)量存在50倍(以摩爾計(jì))下孵育，另外在不存在未標(biāo)記的抗體2.12.1下孵育。同樣，將FITC標(biāo)記抗體2.4.4在未標(biāo)記的抗體2.4.4過(guò)量存在50倍(以摩爾計(jì))下孵育，及在不存在未標(biāo)記的抗體2.4.4下孵育。不出所料，比起其中不加入未標(biāo)記抗體的樣品的熒光信號(hào)，在未標(biāo)記抗體過(guò)量存在50倍(以摩爾計(jì))下樣品的熒光信號(hào)明顯要低。圖12提供了結(jié)合曲線。圖12A和12B顯示用標(biāo)記抗體2.12.1進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。12A和12B的所有圖片中的曲線的標(biāo)示A:陰性對(duì)照(FITC-標(biāo)記抗體2.12.1,無(wú)HGF);B:陽(yáng)性對(duì)照(FITC標(biāo)記抗體2.12.1，有HGF);C:抗體1.74.1;D:抗體1.75.1;E:抗體1.29.1;F:抗體3.10.1;G:抗體1.61.3;H:抗體1.24.1;I:抗體1.60.1;J:抗體2.40.1;K:抗體2.12.1;L:抗體2.4.4。圖12A顯示用焚光抗體2.12.1與d5HGF剪接變體把蛋白一起進(jìn)行的竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定的結(jié)果。圖12B顯示用焚光抗體2.12.1與全長(zhǎng)HGF耙蛋白一起進(jìn)行的竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定的結(jié)果。圖12C和12D顯示用標(biāo)記抗體2.4.4進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。12C和12D的所有圖片中的曲線的標(biāo)示A:陰性對(duì)照(FITC-標(biāo)記抗體2.4.4,無(wú)HGF);B:陽(yáng)性對(duì)照(FITC標(biāo)記抗體2.4.4,有HGF);C:抗體1.74.1;D:抗體1.75.1;E:抗體1.29.1;F:抗體3.10.1;G:抗體1.61.3;H:抗體1.24.1;I:抗體1.60.1;J:抗體2.40.1;K:抗體2.12.1;L:抗體2.4.4。圖12C顯示用熒光抗體2.4.4與d5HGF剪接變體靶蛋白一起進(jìn)行的竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定的結(jié)果。圖12D顯示用熒光抗體2.4.4與全長(zhǎng)HGF把蛋白一起進(jìn)行的竟?fàn)幮越Y(jié)合測(cè)定的結(jié)果。數(shù)據(jù)顯示，十種抗HGF抗體的每一種與兩種標(biāo)記抗體的每一種竟?fàn)幣c全長(zhǎng)HGF或d5HGF的結(jié)合。一些抗體表現(xiàn)出與標(biāo)記抗體發(fā)生完全竟?fàn)帯?例如抗體2.12.1、1.24.1和2.4.4與FITC-標(biāo)記抗體2.12.1發(fā)生完全竟?fàn)?，分別見(jiàn)圖12A和12B的峰H、K和L)。其他抗體只是部分竟?fàn)幗Y(jié)合(例如抗體2.12.1、2.40.1和1.61.3與FITC-標(biāo)記2.4.4發(fā)生部分竟?fàn)帲謩e見(jiàn)圖和12D的K,J和G)。實(shí)施例9中和elisa測(cè)定開(kāi)發(fā)出中和ELISA測(cè)定，以評(píng)估實(shí)施例6所討論的抗體是否能阻斷Met-HGF結(jié)合。通過(guò)以6.25pg/ml向每孔加入100julHGF,用HGF涂布Delphia96孔板(目錄號(hào)AAAND-0001,WallacInc.,Ga池ersburg,MD)。將板在37。C下孵育1小時(shí)或者在4。C下孵育過(guò)夜。然后在室溫下用5%BSA(目錄號(hào)50-6-00,KPL,Ga池ersburg,MD)于含0.1%Tween20的PBS中振搖封閉1小時(shí)。通過(guò)將可溶性Met(2nM,0.256ng/ml)分別與不同濃度的具體待測(cè)抗HGF抗體混合，制備測(cè)試樣品。受測(cè)濃度為667nM、223nM、74.1nM、24.7nM、8.2nM、2.7nM、0.91nM、0.30nM、0.10nM和0.034nM。將100|Lil體積的測(cè)試樣品加入到板中的每個(gè)孔。然后將板在4°C下孵育過(guò)夜，然后再用含0.1%Tween20的PBS洗滌4次。接著以2(tig/ml每孔加入100m1生物素化抗cMetR抗體(目錄號(hào)BAF358,R&DSystemsInc.,Minneapolis,MN)。該抗體結(jié)合板上的Met-HGF復(fù)合物，但不結(jié)合板上與HGF結(jié)合的抗-HGF抗體。然后將板振搖孵育2小時(shí)，用含0.1%Tween20的PBS洗滌4次。加入Eu-鏈霉親和素(1:1000稀釋于測(cè)定緩沖液)(目錄號(hào)1244-360，WallacInc.,Ga池ersburg,MD),在室溫下將板振搖1小時(shí)。然后用含0.1%Tween20的PBS將板洗滌4次。接著，加入lOOpl增強(qiáng)緩沖液(WallacInc.,目錄號(hào)1244-105,Ga池ersburg,MD)。過(guò)了至少5分鐘后，在Victor2(1420MultilabelCounter,WallacInc.,Gaithersburg,MD)上用銪方法讀板。用4參數(shù)擬合方程Excelfit,版本2.0.6,(MicrosoftInc,Seattle,WA)計(jì)算對(duì)Met結(jié)合HGF的抑制(即中和)百分率，確定IC50值。在實(shí)施例6所討論的抗HGF抗體存在下，Met與HGF的結(jié)合被中和。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)在圖13中顯示。實(shí)施例10細(xì)胞中的中和作用A.Met磷酸化通過(guò)用含200ng/mlHGF的培養(yǎng)基(含0.1%牛血清清蛋白的低葡萄糖DMEM)進(jìn)行連續(xù)稀釋，分別制備實(shí)施例6的十種抗HGF抗體的每一種的八種不同稀釋物。各單獨(dú)稀釋物中抗HGF抗體的濃度為200nM、67nM、22nM、7nM、2.5nM、1nM、0.3nM和0.1nM的具體抗HGF抗體。將這些抗體/HGF稀釋物在37°C下孵育30分鐘。用100^含0.1%牛血清清蛋白的低葡萄糖DMEM漂洗PC-3細(xì)胞一次。然后將100pl的每種抗體/HGF稀釋物分別加入到各PC-3細(xì)胞的單獨(dú)孔中。在37。C、5%(:02下孵育10分鐘后，從孔中吸出抗體/HGF稀釋物，然后將板置于水上1-2分鐘。用100iul用水預(yù)冷的含0.3mM原釩酸鈉(Sigma,Louis,MO，目錄號(hào)S-6508)的PBS漂洗細(xì)胞一次。將洗滌細(xì)胞在60ili1裂解緩沖液中水上孵育15-30分鐘，所述裂解緩沖液含有1%TritonX-100(Pierce,Rockford,IL,目錄號(hào)28314),50mMTrispH8,10f)mMNaCl,0.3mM原釩酸鈉(Sigma,Louis,MO,目錄號(hào)S-6508)和1X蛋白酶抑制劑混合物(cocktail)(Sigma目錄號(hào)P-8340)?！?306]通過(guò)在室溫下使DynabeadsM-280鏈霉親和素(IGENInternational,Ga池ersburgh,MD,目錄號(hào)H0029)與4jug/ml的山羊抗Met-生物素(R&DSystemsInc.,Minneapolis,MN,目錄號(hào)BAF358)—起，在含有1%牛血清清蛋白(Sigma,St.Louis,MO,目錄號(hào)A-7888)、0.1%Tween20(Biorad,Hercules,CA,目錄號(hào)170-6531)的PBS中賻育30分鐘，制備涂布抗Met抗體的珠。以每孔25^的體積將涂布抗Met抗體的珠置于96孔Costar測(cè)定板(Coming,NY,目錄號(hào)3365)中。將25^體積的每種不同PC-3細(xì)胞裂解液分別加入到含有涂布抗Met抗體的珠的各孔。在室溫下將板振搖賻育1小時(shí)。每孔加入12.5pi體積的含1%牛血清清蛋白(Sigma,Louis，MO,目錄號(hào)A-7888)、0.1%Tween20(Biorad,Hercules,CA,目錄號(hào)170-6531)和0.04抗石粦酸酪氨酸抗體4G10(UpstateBiotechnology,LakePlacid,NY,目錄號(hào)05-321)的PBS,在室溫下振搖孵育1小時(shí)。加入12.5|til體積的含1%牛血清清蛋白、0.1%Tween20和8pg/ml抗小鼠ORI-TAG-標(biāo)記(IGENInternational,Ga池ersburgh,MD，目錄號(hào)110087)的PBS,將板在室溫下振搖孵育30分鐘。在IGENM8讀數(shù)器(IGENInternational,Ga池ersburgh,MD)中測(cè)定信號(hào)(以IGEN計(jì)數(shù)表示)。用四參數(shù)擬合方程和Excelfit軟件包,版本2.0.6,(MicrosoftInc.,SeattleWA)計(jì)算ICso值。使用IGEN格式的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)在圖14中顯示。對(duì)于十種抗HGF抗體的每一種，ICso值在低納摩爾至亞納摩爾的范圍內(nèi)。B.對(duì)U-87MG生長(zhǎng)/存活的中和作用U-87MG細(xì)胞(ATCC#HTB-14)是表達(dá)Met和HGF的人成神經(jīng)月M細(xì)胞瘤系。培養(yǎng)物中這些細(xì)胞的生長(zhǎng)/存活不被外源HGF增強(qiáng)。但是在生長(zhǎng)條件下內(nèi)源Met似乎被內(nèi)源HGF激活。破壞內(nèi)源HGF與內(nèi)源Met的結(jié)合可能導(dǎo)致生長(zhǎng)和/或存活減少。通過(guò)向每孔的含5%FBS的IMEM培養(yǎng)基(GibcoBRL,Rockville,MD,目錄號(hào)11125-028)中加入800個(gè)細(xì)胞，使U-87MG細(xì)胞生長(zhǎng)于96孔Costar測(cè)定板(Coraing,NY,目錄號(hào)3365)。大約24小時(shí)后，將十一種不同濃度的每種濃度下的實(shí)施例6的十種抗HGF抗體的每一種加入到U-87MG細(xì)胞的各單獨(dú)孔中。各單獨(dú)稀釋物中抗HGF抗體的濃度為100|ug/ml、33.3|ug/ml、11.1jig/ml、3.7|ng/ml、1.2|xg/ml、0.4ng/ml、0.14pg/ml、0.05jug/ml、0.015pg/ml、5.1ng/ml和1.7ng/ml的具體抗HGF抗體。加入抗HGF抗體七天后，除去板中的培養(yǎng)基，用每孔IOOpi100/o三氟乙酸(Sigmalnc.,StLouis,MO目錄號(hào)T-9159)固定細(xì)胞，并將細(xì)胞在4°C下孵育1-2小時(shí)。用自來(lái)水漂洗各孔5次。通過(guò)在室溫下用0.4%磺酰羅丹明B(Sigma,StLouis,MO目錄號(hào)S-9012)于100pi的1。/o乙酸(Fisher,Pittsburgh,PA目錄號(hào)UN2789)中孵育10分鐘，使固定細(xì)胞染色。染色后，用1%乙酸洗滌細(xì)胞5次，風(fēng)干。在微量滴定板讀數(shù)器(SpectraMaxPLUS,MolecularDevices,Sunnyvale,CA)上在540nm處讀取板的光密度。光密度與細(xì)胞單層中存在的蛋白質(zhì)總量成比例，因此是7天測(cè)定周期的細(xì)胞存活/增殖的量度。為計(jì)算ICso值，通過(guò)比較與同種型對(duì)照抗體一起或不與抗體一起孵育的細(xì)胞，計(jì)算抑制百分率。用4參數(shù)擬合方程和Excelfit軟件包，版本2.0.6,(MicmsoftInc.,SeattleWA)計(jì)算ICso值。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)在圖15中顯示。所有十種實(shí)施例6所述的抗HGF抗體抑制U-87MG細(xì)胞的生長(zhǎng)/存活。每種抗體的ICso值通常小于100nM。實(shí)施例11異種移植腫瘤中的中和作用A.U-87MG異種移植微量殘留疾病模型使U-87MG細(xì)胞生長(zhǎng)至幾乎鋪滿，然后以25xl(^個(gè)細(xì)胞/ml的濃度懸浮于無(wú)血清培養(yǎng)基中。通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)排斥試驗(yàn)，目視估算細(xì)胞達(dá)>98.5%生存。為檢測(cè)單種抗HGF抗體，將無(wú)血清培養(yǎng)基中的5xl06個(gè)U-87MG細(xì)胞皮下注射至50只雌性棵鼠(CD1Nu/Nu,CharlesRiverLaboratories,Wilmington,Mass.)的右脅腹。這50只小鼠分成5組，每組10只。通過(guò)用相同劑量的實(shí)施例7所討論的相同抗HGF抗體，或者用IgGl恒定區(qū)(同種型對(duì)照)，進(jìn)行腹膜內(nèi)注射，處理特定組(IO只)中的每只小鼠。測(cè)試的抗體劑量為每次注射l]Lig、3|iig、10嗎和30貼。自注射U-87MG細(xì)胞后笫2天起，每周注射抗體兩次，持續(xù)四周。每周記錄腫瘤測(cè)量值和體重兩次，持續(xù)30天，用公式長(zhǎng)度x寬度x高度計(jì)算腫瘤體積。用8131力6胃@統(tǒng)計(jì)程序(3八8Institute,Inc.,Cary,N.C.),使用重復(fù)測(cè)定的ANOVA，然后是Scheffe事后(posthoc)檢驗(yàn)，對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。在單獨(dú)的試驗(yàn)中，用這種模型測(cè)試實(shí)施例6所討論的十種抗HGF抗體的每一種?？贵w2.4.4的劑量-反應(yīng)實(shí)驗(yàn)在圖16A顯示。箭頭表示給藥時(shí)間，劑量在圖例中顯示。括號(hào)中表示每種劑量下(十只動(dòng)物中)沒(méi)有可測(cè)量肺瘤的動(dòng)物的數(shù)量。對(duì)于兩種最高的測(cè)試劑量——每周給予10昭兩次和每周給予30)Lig兩次，當(dāng)與每周兩次接受30昭同種型對(duì)照(人IgG2#PK16.3.1,AbgenixInc.Fremont,CA)的對(duì)照動(dòng)物相比時(shí)，腫瘤生長(zhǎng)的抑制在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著。對(duì)于2種較低劑量(1和3昭，每周兩次)的2.4.4,觀察到輕微的生長(zhǎng)抑制，但在統(tǒng)計(jì)學(xué)上不顯著。數(shù)據(jù)以平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤差表示；認(rèn)為每組n=10只動(dòng)物和p<0.05在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著。檢測(cè)實(shí)施例6的其他九種抗HGF抗體的實(shí)驗(yàn)顯示，在較高劑量下有類似的腫瘤生長(zhǎng)完全抑制作用。B.U-87MG異種移植的已確立疾病模型按照上述實(shí)施例IIA所討論的方法，將無(wú)血清培養(yǎng)基中的U-87MG細(xì)胞注射到棵鼠中。讓腫瘤生長(zhǎng)大約兩周，直到它們達(dá)到200mn^的體積后，開(kāi)始腹膜內(nèi)給予抗HGF抗體。如圖16B中的箭頭所示，自笫16天起，每周兩次給予小鼠200昭、100蹄或30|^抗體2.4.4,處理小鼠。如上所述測(cè)量和評(píng)估腫瘤體積。括號(hào)中表示在第30天(十只動(dòng)物中)沒(méi)有可測(cè)量胂瘤的動(dòng)物的數(shù)量。在所有的劑量下均觀察到U-87MG腫瘤生長(zhǎng)被完全抑制。在不遲于笫29天實(shí)現(xiàn)已確立紳瘤的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著消退。在單獨(dú)的試驗(yàn)中，用這種模型測(cè)試實(shí)施例6所討論的十種抗HGF抗體的每一種，在每種抗體的較高劑量下均觀察到完全抑制作用。C.在U-87MG微量殘留疾病模型中對(duì)抗體分級(jí)為確定實(shí)施例6所討論的十種抗HGF抗體在實(shí)施例11A所討論的U-87MG腫瘤模型中的相對(duì)效力，選擇只部分抑制微量殘留疾病模型中的肺瘤生長(zhǎng)的低劑量。初步的劑量-反應(yīng)研究(圖16A)提示，每周給予5嗎抗HGF抗體兩次會(huì)產(chǎn)生部分抑制作用。進(jìn)行了一系列的直接比較實(shí)驗(yàn)，對(duì)多達(dá)5種不同的抗HGF抗體進(jìn)行比較。這些實(shí)^r中的兩個(gè)的結(jié)果在圖16C和16D中顯示。**表示與PBS和同種型對(duì)照IgG2抗體相比顯著抑制腫瘤生長(zhǎng)的抗HGF抗體(pO.OOOl)。用實(shí)施例11B所討論的已確立U-87疾病模型，進(jìn)行類似的分級(jí)排序?qū)嶒?yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中，使用每周10嗎，2X的劑量。這些實(shí)驗(yàn)中的兩個(gè)的結(jié)果在圖16E和16F中顯示。權(quán)利要求1.一種分離的多肽，所述多肽包含至少一個(gè)選自CDRla、CDR2a和CDR3a的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)其中CDRla包含氨基酸序歹寸abcdefghijklmnopq,其中氨基酸a選自賴氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氛基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；氨基酸c是絲氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；氨基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是絲氨酸或者不存在；氨基酸j是絲氨酸或者不存在；氨基酸k選自天冬酰胺、蘇氨酸或者不存在；氨基酸1選自天冬酰胺、異亮氨酸或纈氨酸；氨基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸n選自天冬酰胺或絲氨酸；氨基酸o選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸p是亮氨酸；氨基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；其中CDR2a包含氨基酸序歹。rstuvwx,其中氨基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t(yī)是絲氨酸；氨基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；氛基酸v選自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸x選自絲氨酸、天冬酰胺或蘇氨酸；其中CDR3a包含氨基酸序列yza'b'c'd'e'fg'h',其中氨基酸y選自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z選自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；氨基酸b'選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或異亮氨酸；氨基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸e'是脯氨酸；氨基酸f是脯氨酸或者不存在；氨基酸g'是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；氨基酸h'是蘇氨酸或天冬酰胺；其中所述多肽與抗體重鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)。2.;K利要求1的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQIDNO:24,26,28,30,32，34,36,38,40和42的氨基酸序列。3.權(quán)利要求1的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQE)NO:60，61,62,63,64,65,66,67,68和69的氨基酸序列。4.權(quán)利要求1的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQIDNO:70,71,72,73,74,75,76,77,78和79的M酸序列。5.權(quán)利要求1的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQEDNO:80，81,82，83,84，85,86,87，88和89的氨基酸序列。6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽是特異性結(jié)合物。7.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多舦是抗體。8.—種分離的多肽，所述多肽包含至少一個(gè)選自CDRlb、CDR2b和CDR3b的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)其中CDRlb包含氨基酸序歹'Jabcdefg，其中氨基酸a是絲氨酸或者不存在；氨基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f選自異亮氨酸、曱硫氨酸或色氨酸；氨基酸g選自組氨酸、天冬酰胺或絲氨酸；其中CDR2b包含氨基酸序歹寸hijklmnopqrstuvwx,其中氨基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；氨基酸j選自天冬酰胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；氛基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；氨基酸l選自天冬酰胺、絲氨酸或天冬氨酸；氨基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；氨基酸n選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸o選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸p選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；氨基酸q選自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r選自酪氨酸或組氨酸；氨基酸s選自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t(yī)選自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；氨基酸v選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酰胺或賴氨酸；氨基酸x選自甘氨酸或絲氨酸；其中CDR3b包含氨基酸序列yza'b'c'd'e'fg'h'i'j'k'1'm'n'o'p'q'r',其中氨基酸y選自谷氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z選自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸a'選自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸b'選自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸c'選自精氨酸、絲氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸d'是甘氨酸或者不存在；氨基酸e'選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸f是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g'選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸h'是絲氨酸或者不存在；氨基酸i'選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸j'選自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸k'選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸l'選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸m'選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸n'選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸o'選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸p'選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸q'是天冬氨酸；氨基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；其中所述多肽與抗體輕鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合HGF。9.權(quán)利要求8的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQIDNO:25,27,29,31,33,35,37,39,41和43的氨基酸序列。10.權(quán)利要求8的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQIDNO:90,91,92,93,94,95，96,97,98和99的氨基酸序列。11.權(quán)利要求8的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQIDNO:100，101,102,103,104,105,106,107，108和109的氨基酸序列。12.權(quán)利要求8的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQIDNO:110,111,112,113,114,115,116,117,118和119的^J^酸序列。13.權(quán)利要求8-12中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽是特異性結(jié)合物。14.權(quán)利要求8-12中任一項(xiàng)的多肽，其中所述多肽是抗體。15.—種分離的特異性結(jié)合物，其中所述特異性結(jié)合物包含(i)包含至少一個(gè)選自CDRla、CDR2a和CDR3a的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的第一多肽其中CDRla包含氨基酸序列abcdefghijklmiiopq，其中氨基酸a選自賴氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；氨基酸c是絲氨酸、氨基酸d是谷氨酰胺；氨基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；氨基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是絲氨酸或者不存在；氨基酸j是絲氨酸或者不存在；氨基酸k選自天冬酰胺、蘇氨酸或者不存在；氨基酸1選自天冬酰胺、異亮氨酸或纈氨酸；氨基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸n選自天冬酰胺或絲氨酸；氨基酸o選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸p是亮氨酸；氨基酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；其中CDR2a包含氨基酸序列rstuvwx,其中M酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t(yī)是絲氨酸；氨基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；氨基酸v選自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸x選自絲氨酸、天冬酰胺或蘇氨酸；其中CDR3a包含氬基酸序列yza'b'c'd'e'fg'h'，其中氨基酸y選自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z選自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；氨基酸b'選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或異亮氨酸；氨基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸e'是脯氨酸；氨基酸f是脯氨酸或者不存在；氨基酸g'是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；氬基酸h'是蘇氨酸或天冬酰胺；其中所述笫一多肽與抗體重鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF);(ii)包含至少一個(gè)選自CDRlb、CDR2b或CDR3b的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的第二多肽其中CDRlb包含氨基酸序列abcdefg，其中氨基酸a是絲氨酸或者不存在；氨基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f選自異亮氨酸、甲硫氨酸或色氨酸；氨基酸g選自組氨酸、天冬酰胺或絲氨酸；其中CDR2b包含氨基酸序列hijklmnopqrstuvwx,其中氨基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；氨基酸j選自天冬酰胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；氨基酸l選自天冬酰胺、絲氨酸或天冬氨酸；氨基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；氨基酸n選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸o選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬酰胺；氨基酸p選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；氨基酸q選自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r選自酪氨酸或組氨酸；氨基酸s選自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t(yī)選自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；氨基酸v選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酰胺或賴氨酸；氨基酸x選自甘氨酸或絲氨酸；其中CDR3b包含氨基酸序列yza'b'c'd'e'fg'h'i'j'k'1'm'n'o'p'q'r',其中氨基酸y選自谷氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z選自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氛基酸a'選自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸b'選自亮氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氬基酸c'選自精氨酸、絲氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸d'是甘氨酸或者不存在；氨基酸e'選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸f是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g'選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸h'是絲氨酸或者不存在；氨基酸i'選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸j'選自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸k'選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸l'選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸m'選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸n'選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸o'選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸p'選自甲硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸q'是天冬氨酸；氨基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；其中所述第二多肽與抗體輕鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合HGF。16.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含至少一種選自SEQIDNO:24,26,28,30,32,34,36,38,40和42的氨基酸序列。17.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含至少一種選自SEQIDNO:25,27,29,31,33,35,37,39,41和43的^J^酸序列。18.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含SEQIDNO:24和25的氨基酸序列。19.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含SEQIDNO:26和27的氣基酸序列。20.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含SEQIDNO:28和29的氨基酸序列。21.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含SEQIDNO:30和31的氨基酸序列。22.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含SEQIDNO:32和33的氨基酸序列。23.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所迷結(jié)合物包含SEQIDNO:34和35的氨基酸序列。24.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含SEQEDNO:36和37的氨基酸序列。25.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含SEQIDNO:38和39的氨基酸序列。26.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含SEQIDNO:40和41的氨基酸序列。27.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含SEQIDNO:42和43的M酸序列。28.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含至少一種選自SEQIDNO:60,61,62,63，64,65,66，67,68和69的氨基酸序列。29.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含至少一種選自SEQIDNO:70，71,72,73，74，75,76,77,78和79的氨基酸序列。30.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含至少一種選自SEQIDNO:80,81,82,83,84,85,86,87,88和89的氨基酸序列。31.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含至少一種選自SEQIDNO:90，91,92,93，94,95,96,97,98和99的氨基酸序列。32.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含至少一種選自SEQIDNO:100,101,102，103,104，105,106,107,108和109的氨基酸序列。33.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含至少一種選自SEQIDNO:110,111，112，113,114，115,116,117，118和119的^J^酸序列。34.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含包含第一可變區(qū)的重鏈，所述笫一可變區(qū)包含選自SEQIDNO:25，27,29,31，33,35,37，39，41和43的氨基酸序列；包含笫二可變區(qū)的輕鏈，所述第二可變區(qū)包含選自SEQIDNO:24,26，28,30，32，34,36,38,40和42的氨基酸序列。35.權(quán)利要求34的特異性結(jié)合物，其中所述特異性結(jié)合物具有至少一種選自以下的性質(zhì)a)與至少一種選自1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1的抗體竟?fàn)幣cHGF的結(jié)合；b)與至少一種選自1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1的抗體結(jié)合相同的HGF表位；和c)與至少一種選自1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1的抗體結(jié)合相同的抗原。36.權(quán)利要求15的特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物包含包含第一可變區(qū)的重鏈，所述第一可變區(qū)包含的氨基酸序列與選自SEQIDNO:25,27，29,31，33,35,37,39,41和43的氨基酸序列有至少90%、95%或99%的一致性；包含笫二可變區(qū)的輕鏈，所述第二可變區(qū)包含的氨基酸序列與選自SEQIDNO:24,26,28,30,32,34,36,38，40和42的氨基酸序列有至少90%、95%或99%的一致性。37.權(quán)利要求36的特異性結(jié)合物，其中所述特異性結(jié)合物具有至少一種選自以下的性質(zhì)a)與至少一種選自1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1的抗體竟?fàn)幣cHGF的結(jié)合;b)與至少一種選自1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1的抗體結(jié)合相同的HGF表位;和c)與至少一種選自1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74,3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1的抗體結(jié)合相同的抗原。38.權(quán)利要求15-37中任一項(xiàng)的特異性結(jié)合物，其中所述特異性結(jié)合物是抗體。39.權(quán)利要求38的抗體，其中重鏈和輕鏈通過(guò)連接基團(tuán)連接。40.權(quán)利要求38的抗體，所述抗體為單Fv抗體。41.權(quán)利要求38的抗體，所述抗體為免疫功能性免疫球蛋白片段。42.權(quán)利要求38的抗體，所述抗體為Fab抗體。43.權(quán)利要求38的抗體，所述抗體為Fab，抗體。44.權(quán)利要求38的抗體，所述抗體為(Fab')s抗體。45.權(quán)利要求38的抗體，所述抗體為完全人抗體。46.權(quán)利要求38的抗體，所述抗體為人源化抗體。47.權(quán)利要求38的抗體，所述抗體為嵌合抗體。48.權(quán)利要求38的抗體，其中所述抗體抑制HGF與c-Met受體的結(jié)合。49.一種分離的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQIDNO:24,26,28，30,32,34,36，38,40和42的氨基酸序列。50.—種分離的多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQIDNO:25，27,29，31,33,35,37,39,41和43的氨基酸序列。51.—種分離的核酸分子，所述核酸分子包含至少一種選自SEQEDNO:1，3，5,7,9,11，13,15，17和19的核苷酸序列。52.—種分離的核酸分子，所述核酸分子包含至少一種選自SEQIDNO:2,4,6,8,10，12,14,16,18和20的核苦酸序歹寸。53.—種分離的核酸分子，所述核酸分子編碼包含至少一個(gè)選自CDRla、CDR2a和CDR3a的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的多肽其中CDRla包含^J^醋歹寸abcdefghijklmnopq，其中氛基酸a選自賴氨酸、精氨酸或谷氨酰胺；氨基酸b選自絲氨酸或丙氨酸；氨基酸c是絲氨酸；氨基酸d是谷氨酰胺;氨基酸e選自絲氨酸、甘氨酸或天冬氨酸；氨基酸f選自纈氨酸或異亮氨酸或者不存在；氨基酸g選自亮氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸h選自苯丙氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸i是絲氨酸或者不存在；氨基酸j是絲氨酸或者不存在；氨基酸k選自天冬酰胺，蘇氨酸或者不存在；氨基酸1選自天冬酰胺，異亮氨酸或纈氨酸；氨基酸m選自賴氨酸、精氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸；氨基酸n選自天冬酰胺或絲氨酸；氨基酸o選自酪氨酸、天冬氨酸、色氨酸或天冬酰胺；氨基酸p是亮氨酸；酸q選自丙氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；其中CDR2a包含氨基酸序列rstuvwx，其中氨基酸r選自色氨酸、丙氨酸、纈氨酸、谷氨酸或甘氨酸；氨基酸s是丙氨酸；氨基酸t(yī)是絲氨酸、氨基酸u選自蘇氨酸、絲氨酸或天冬氨酸；氨基酸v選自精氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酸、谷氨酰胺或丙氨酸；氨基酸x選自絲氨酸、天冬酰胺或蘇氨酸；其中CDR3a包含絲酸序列yza'b'c'd'e'fg'h'，其中氨基酸y選自谷氨酰胺或亮氨酸；氨基酸z選自谷氨酰胺、天冬酰胺或精氨酸；氨基酸a'選自酪氨酸、組氨酸、丙氨酸或絲氨酸；氨基酸b'選自苯丙氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺或異亮氨酸；氨基酸c'選自絲氨酸、甘氨酸或天冬酰胺；氨基酸d'選自脯氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、亮氨酸或色氨酸；氨基酸e'是脯氨酸；氨基酸f是脯氨酸或者不存在；氨基酸g'是色氨酸、亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸或異亮氨酸；氨基酸h'是蘇氨酸或天冬酰胺；其中所述多肽與抗體重鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)。54.權(quán)利要求53的核酸分子，所述核酸分子包含選自SEQIDNO:1，3,5,7,9,11,13，15,17和19的核苷酸序列。55.—種分離的核酸分子，所述核酸分子編碼包含至少一個(gè)選自CDRlb、CDR2b和CDR3b的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的多肽其中CDRlb包含氨基酸序列abcdefg,其中氨基酸a是絲氨酸或者不存在；氨基酸b選自天冬氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸c選自天冬氨酸、甘氨酸、絲氨酸、纈氨酸、蘇氨酸或異亮氨酸；氨基酸d是酪氨酸；氨基酸e選自酪氨酸或甘氨酸；氨基酸f選自異亮氨酸、曱硫氨酸或色氨酸；氨基酸g選自組氨酸、天冬酰胺或絲氨酸；其中CDR2b包含氨基酸序歹寸hijklmnopqrstuvwx,其中氨基酸h選自色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、天冬酰胺或谷氨酸；氨基酸i選自異亮氨酸、苯丙氨酸或纈氨酸；氨基酸j選自天冬酰胺、絲氨酸、色氨酸或酪氨酸；氨基酸k選自脯氨酸、絲氨酸、酪氨酸或組氨酸；氨基酸1選自天冬酰胺，絲氨酸或天冬氨酸；氨基酸m選自絲氨酸或甘氨酸；氨基酸n選自甘氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸o選自甘氨酸、蘇氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、異亮氨酸或天冬酰胺；氛基酸p選自蘇氨酸、異亮氨酸或賴氨酸；氨基酸q選自天冬酰胺或酪氨酸；氨基酸r選自酪氨酸或組氨酸；氨基酸s選自丙氨酸或天冬酰胺；氨基酸t(yī)選自谷氨酰胺、天冬氨酸或脯氨酸；氨基酸u選自賴氨酸或絲氨酸；氨基酸v選自苯丙氨酸、纈氨酸或亮氨酸；氨基酸w選自谷氨酰胺或賴氨酸；氨基酸x選自甘氨酸或絲氨酸；其中CDR3b包含^J^酸序列yza'b'c'd'e'fg'h'i'j'k'rm'n'o'p'q'r1，其中氨基酸y選自谷氨酸、天冬氨酸、絲氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸z選自亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、組氨酸、脯氨酸或甘氨酸或者不存在；氨基酸a'選自谷氨酸、酪氨酸或亮氨酸或者不存在；氨基酸b'選自亮氨酸、天冬酰胺，甘氨酸、組氨酸、酪氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸c'選自精氨酸、絲氨酸、谷氨酸、酪氨酸、甘氨酸或苯丙氨酸或者不存在；氨基酸d'是甘氨酸或者不存在；氨基酸e'選自色氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸f是天冬氨酸或者不存在；氨基酸g'選自絲氨酸或精氨酸或者不存在；氨基酸h'是絲氨酸或者不存在；氨基酸i'選自甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸j'選自酪氨酸、谷氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸k'選自酪氨酸、苯丙氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸l'選自酪氨酸、天冬氨酸、組氨酸或色氨酸或者不存在；氨基酸m'選自酪氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、脯氨酸或絲氨酸或者不存在；氨基酸n'選自甘氨酸、纈氨酸、酪氨酸或天冬氨酸或者不存在；氨基酸o'選自亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸或酪氨酸或者不存在；氨基酸p'選自曱硫氨酸、苯丙氨酸或酪氨酸；氨基酸q'是天冬氨酸；氨基酸r'選自纈氨酸、酪氨酸、異亮氨酸或脯氨酸；其中所述多肽與抗體輕鏈聯(lián)合，能夠結(jié)合HGF。56.權(quán)利要求55的核酸分子，所述核酸分子包含選自SEQIDNO:2，4,6,8，10,12,14,16，18和20的核苷酸序列。57.—種宿主細(xì)胞，所述細(xì)胞包含權(quán)利要求53的核酸分子。58.—種宿主細(xì)胞，所述細(xì)胞包含權(quán)利要求55的核酸分子。59.—種分離的細(xì)胞系，所述細(xì)胞系產(chǎn)生權(quán)利要求34或36的特異性結(jié)合物。60.權(quán)利要求59的分離的細(xì)胞系，其中所述特異性結(jié)合物是抗體。61.—種分離的細(xì)胞系，所述細(xì)胞系產(chǎn)生選自1.24.1、1.29.1、1.60.1、1.61.3、1.74.3、1.75.1、2.4.4、2.12.1、2.40.1和3.10.1的抗體。62.—種組合物，所述組合物包含權(quán)利要求34或36的特異性結(jié)合物及藥物可接受載體。63.權(quán)利要求62的組合物，其中所述特異性結(jié)合物是抗體。64.—種組合物，所述組合物包含權(quán)利要求34或36的特異性結(jié)合物及至少"種選自以下的藥物安莎霉素抗生素的格爾德霉素家族的成員；Grb2Src同源物2的拮抗劑；Gabl調(diào)節(jié)劑；顯性負(fù)性Src;;—von-Hippel-Landau抑制劑；非類固醇抗炎藥物(NSAID);COX-2抑制劑；CelebrexTM(塞來(lái)考昔)；VioxxTM(羅非考昔)；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF);VEGF調(diào)節(jié)劑；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)調(diào)節(jié)劑；表皮生長(zhǎng)因子(EGF)調(diào)節(jié)劑；角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF);KGF相關(guān)分子；KGF調(diào)節(jié)劑;基質(zhì)金屬蛋白質(zhì)酶(MMP)調(diào)節(jié)劑；IL-2;Proleukin;Herceptin;Rituxan;Zevalin;Erbitux;.依帕珠單抗；抗OPGL抗體；Ang-2抑制劑；抗VEGF-2抗體；Avastin;抗胂瘤劑；抗有絲分裂劑;.抗代謝物和磺酸烷基酯。'65.權(quán)利要求64的組合物，其中所述特異性結(jié)合物是抗體。66.—種治療患者的癌癥的方法，所述方法包括給予權(quán)利要求62的組合物。67.—種治療患者的癌癥的方法，所述方法包括給予權(quán)利要求63的纟且合物。68.—種治療患者的癌癥的方法，所述方法包括給予權(quán)利要求64的.纟且合物。69.—種治療患者的癌癥的方法，所述方法包括給予權(quán)利要求65的組合物。70.—種治療患者的實(shí)體瘤的方法，所述方法包括給予;K利要求62的組合物。71.—種治療患者的實(shí)體瘤的方法，所述方法包括給予;f又利要求63的組合物。72.—種治療患者的實(shí)體瘤的方法，所述方法包括給予權(quán)利要求64的組合物。73.—種治療患者的實(shí)體瘤的方法，所述方法包括給予權(quán)利要求65的組合物。74.—種治療患者的癌癥的方法，所述方法包括給予權(quán)利要求34或36的特異性結(jié)合物及至少一種化療治療。75.權(quán)利要求74的方法，其中所述特異性結(jié)合物在給予化療治療之前給予。76.權(quán)利要求74的方法，其中所述特異性結(jié)合物在給予化療治療的同時(shí)給予。77.權(quán)利要求74的方法，其中所述特異性結(jié)合物在給予化療治療之后給予。78.—種治療患者的癌癥的方法，所述方法包括給予權(quán)利要求34或36的特異性結(jié)合物及放療。79.權(quán)利要求78的方法，其中所述特異性結(jié)合物在給予放療之前給予。80.權(quán)利要求78的方法，其中所述特異性結(jié)合物在給予放療的同時(shí)給予。81.權(quán)利要求78的方法，其中所述特異性結(jié)合物在給予放療之后給予。82.—種檢測(cè)樣品中肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)水平的方法，所述方法包括將樣品與權(quán)利要求34或36的特異性結(jié)合物接觸。83.權(quán)利要求82的方法，其中所述特異性結(jié)合物是抗體。84.—種抑制HGF與Met結(jié)合的方法，所述方法包括給予HGF特異性結(jié)合物。85.權(quán)利要求84的方法，其中所述特異性結(jié)合物是抗體。86.權(quán)利要求84的方法，其中所述特異性結(jié)合物包含至少一種選自SEQIDNO:25,27,29,31,33,35,37,39,41和43的^J^賄列。87.權(quán)利要求84的方法，其中所述特異性結(jié)合物包含至少一種選自SEQIDNO:24,26,28,30，32,34,36,38,40和42的^J^,列。88.—種多肽，所述多肽包含至少一種選自SEQIDNO:164和165的#^*列。89.—種多肽，所述多肽基本由至少一種選自SEQIDNO:164和165的氨基酸序列組成。90.—種特異性結(jié)合物，所述結(jié)合物能夠結(jié)合至少一種選自SEQIDNO:164和165的M酸序列。91.一種抗體或抗原結(jié)合域，其能夠結(jié)合至少一種選自SEQIDNO:164和165的氨基酸序列。92.—種獲得能夠結(jié)合肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)的抗體的方法，所述方法包括給予動(dòng)物至少一種選自SEQIDNO:164和165的多肽，并從該動(dòng)物獲得能夠結(jié)合HGF的抗體。93.—種P爭(zhēng)低或防止任何一種權(quán)利要求18-27的特異性結(jié)合物與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)結(jié)合的方法，所述方法通過(guò)給予包含至少一種選自SEQIDNO:164和165的氨基酸序列的多肽來(lái)進(jìn)行。94.一種降低或防止任何一種權(quán)利要求18-27的多舦與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)結(jié)合的方法，所述方法通過(guò)給予由至少一種選自SEQIDNO:164和165的氨基酸序列組成的多肽來(lái)進(jìn)行。95.—種降低或防止特異性結(jié)合物與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)結(jié)合的方法，所述方法通過(guò)給予包含至少一種選自SEQIDNO:164和165的M酸序列的多肽來(lái)進(jìn)行。96.—種降低或防止特異性結(jié)合物與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)結(jié)合的方法，所述方法通過(guò)給予由至少一種選自SEQIDNO:164和165的氨基酸序列組成的多肽來(lái)進(jìn)行。全文摘要本發(fā)明描述與肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)相互作用的特異性結(jié)合物。本發(fā)明還描述通過(guò)給予藥物有效量的HGF特異性結(jié)合物治療癌癥的方法。本發(fā)明描述還描述用HGf特異性結(jié)合物檢測(cè)樣品中HGF的量的方法。文檔編號(hào)A61K39/395GK101124240SQ200480026298公開(kāi)日2008年2月13日申請(qǐng)日期2004年7月16日優(yōu)先權(quán)日2003年7月18日發(fā)明者A·考克森,K·張,L·L·格林,T·L·伯吉斯申請(qǐng)人:安姆根有限公司;阿布格尼克斯公司