專利名稱：作為轉(zhuǎn)化生長因子(tgf)抑制劑的新的異噻唑和異噁唑化合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的異噻唑和異噁唑化合物、包括其衍生物、制備它們的中間體、含有它們的藥物組合物及它們的醫(yī)藥用途。本發(fā)明的化合物是轉(zhuǎn)化生長因子(“TGF”)-β信號通路的強抑制劑。它們可用于治療TGF-β相關性疾病狀態(tài)，包括例如癌癥和纖維化疾病。
TGF-β可激活抗增殖和促腫瘤信號級聯(lián)放大。已鑒別了三種哺乳動物TGF-β同工型(TGF-βI、-βII和-βIII)。TGF-β的產(chǎn)生可促進腫瘤進展而其阻斷可增強抗腫瘤活性。阻斷TGF-β可增強抗腫瘤免疫響應并抑制轉(zhuǎn)移。因此本領域需要抑制TGF-β信號通路的化合物。以下所述的本發(fā)明滿足了這一需求。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了含有被至少一個取代或未取代的2-吡啶基部分和至少一個如此處所述的R1部分取代的異噻唑或異噁唑中心環(huán)的新化合物、其所有可藥用鹽、前藥、互變異構體、水合物和溶劑合物。在本發(fā)明的化合物中，取代或未取代的2-吡啶基部分和R1部分可在異噻唑或異噁唑中心環(huán)周圍呈1，2-、1，3-或1，4-位關系、優(yōu)選1，2-位或鄰位關系。
本發(fā)明提供了式(A)化合物及其所有可藥用鹽、前藥、互變異構體、水合物和溶劑合物
其中X、R1、R3、R4和s均如下所示。
在以上所示式(A)中X是O或S；R1是飽和、不飽和或芳族C3-C20單-、雙-或多環(huán)，任選含有至少一個選自N、O和S的雜原子，其中R1可任選進一步獨立地被至少一個獨立地選自以下的部分取代羰基、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、全鹵代(C1-C6)烷基、全鹵代(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)炔基、羥基、氧代、巰基、(C1-C6)烷硫基、(C1-C6)烷氧基、(C5-C10)芳基或(C5-C10)雜芳基、(C5-C10)芳氧基或(C5-C10)雜芳基氧基、(C5-C10)芳基(C1-C6)烷基或(C5-C10)雜芳基(C1-C6)烷基、(C5-C10)芳基(C1-C6)烷氧基或(C5-C10)雜芳基(C1-C6)烷氧基、HO-(C＝O)-、酯、酰氨基、醚、氨基、氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基、二(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基、(C5-C10)雜環(huán)基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-和二(C1-C6)烷基氨基、氰基、硝基、氨基甲?；?C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基氨基羰基、二(C1-C6)烷基氨基羰基、(C5-C10)芳基羰基、(C5-C10)芳氧基羰基、(C1-C6)烷基磺?；?C5-C10)芳基磺?；?；優(yōu)選地，R1可任選進一步獨立地被零至兩個獨立地選自但不限于以下的部分取代鹵代(C1-C6)烷基、全鹵代(C1-C6)烷基、全鹵代(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、(C5-C10)芳基(C1-C6)烷氧基或(C5-C10)雜芳基(C1-C6)烷氧基、氨基、氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基、二(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基和(C5-C10)雜環(huán)基(C1-C6)烷基；每個R3獨立地選自氫、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)炔基、全鹵代(C1-C6)烷基、苯基、(C5-C10)雜芳基、(C5-C10)雜環(huán)基、(C3-C10)環(huán)烷基、羥基、(C1-C6)烷氧基、全鹵代(C1-C6)烷氧基、苯氧基、(C5-C10)雜芳基-O-、(C5-C10)雜環(huán)基-O-、(C3-C10)環(huán)烷基-O-、(C1-C6)烷基-S-、(C1-C6)烷基-SO2-、(C1-C6)烷基-NH-SO2-、O2N-、NC-、氨基、Ph(CH2)1-6HN-、(C1-C6)烷基HN-、(C1-C6)烷基氨基、[(C1-C6)烷基]2-氨基、(C1-C6)烷基-SO2-NH-、氨基(C＝O)-、氨基O2S-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-NH-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、苯基-(C＝O)-NH-、苯基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-、苯基-(C＝O)-、(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-、(C5-C10)雜環(huán)基-(C＝O)-、(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-、HO-(C＝O)-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-、H2N(C＝O)-、(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-、[(C1-C6)烷基]2-N-(C＝O)-、苯基-NH-(C＝O)-、苯基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)-、(C5-C10)雜芳基-NH-(C＝O)-、(C5-C10)雜環(huán)基-NH-(C＝O)-、(C3-C10)環(huán)烷基-NH-(C＝O)-和(C1-C6)烷基-(C＝O)-O-；優(yōu)選地，R3是氫或(C1-C6)烷基；更優(yōu)選地，R3是氫或甲基；其中作為R3的烷基、鏈烯基、炔基、苯基、雜芳基、雜環(huán)基、環(huán)烷基、烷氧基、苯氧基、氨基任選被至少一個獨立地選自以下的取代基取代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代、H2N-、Ph(CH2)1-6HN-和(C1-C6)烷基HN-；s是1至5的整數(shù)、優(yōu)選1至2、更優(yōu)選1；且R4選自氫、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)炔基、全鹵代(C1-C6)烷基、苯基、(C5-C10)雜芳基、(C5-C10)雜環(huán)基、(C3-C10)環(huán)烷基、羥基、(C1-C6)烷氧基、全鹵代(C1-C6)烷氧基、苯氧基、(C5-C10)雜芳基-O-、(C5-C10)雜環(huán)基-O-、(C3-C10)環(huán)烷基-O-、(C1-C6)烷基-S-、(C1-C6)烷基-SO2-、(C1-C6)烷基-NH-SO2-、O2N-、NC-、氨基、Ph(CH2)1-6NH-、烷基NH-、(C1-C6)烷基氨基、[(C1-C6)烷基]2-氨基、(C1-C6)烷基-SO2-NH-、氨基(C＝O)-、氨基SO2-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-NH-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、苯基-(C＝O)-NH-、苯基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-、苯基-(C＝O)-、(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-、(C5-C10)雜環(huán)基-(C＝O)-、環(huán)烷基-(C＝O)-、HO-(C＝O)-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-、H2N(C＝O)-、(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-、((C1-C6)烷基)2-N-(C＝O)-、苯基-NH-(C＝O)-、苯基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)-、(C5-C10)雜芳基-NH-(C＝O)-、(C5-C10)雜環(huán)基-NH-(C＝O)-、(C3-C10)環(huán)烷基-NH-(C＝O)-和(C1-C6)烷基-(C＝O)-O-；優(yōu)選地，R4為氫、(C1-C6)烷基或(C3-C10)環(huán)烷基，其中作為R4的烷基、鏈烯基、炔基、苯基、雜芳基、雜環(huán)基、環(huán)烷基、烷氧基、苯氧基和氨基任選被至少一個獨立地選自以下的取代基取代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代、H2N-、Ph(CH2)1-6-NH-和(C1-C6)烷基NH-。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(A)的R1為 或 其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(A)的R1為 或 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(A)的R1為 或 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(A)的R1為 或
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(A)的R1為 或 其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(A)的R1為 或 其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(A)的R1為 或 其中R2a如本文所示。
以上每個R1可任選進一步被至少一個如本文所示的R2a基團取代。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為
其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為
其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 其中R2a如本文所示。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(Ia)的R1為 其中R2a如本文所示且其中限制性描述不適用。
在本發(fā)明另一實施方案中，以上所示式(A)的R1選自 和 且其中限制性描述不適用。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(A)的R1選自 和 且其中限制性描述不適用。
在本發(fā)明的另一實施方案中，以上所示式(A)的R1選自
和 且其中R2a如本文所示且其中限制性描述不適用。
本發(fā)明還提供了包含至少一種本發(fā)明化合物和可藥用載體的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明化合物的方法。
本發(fā)明還進一步提供了預防或治療動物或人的TGF相關性疾病狀態(tài)的方法，其包括向患有TGF相關性疾病狀態(tài)的動物或人施用治療有效量的至少一種本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明還進一步提供了本發(fā)明的化合物在制備用于預防或治療動物或人的TGF相關性疾病狀態(tài)的藥物中的用途。
定義本文所用的冠詞“一個”既指單數(shù)也指復數(shù)形式的其所指客體。
本文所用的術語“烷基”以及本文所指的其他基團(例如烷氧基)的烷基部分指的是直鏈或支鏈飽和烴基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基。
本文所用的術語“環(huán)烷基”指的是單環(huán)或雙環(huán)碳環(huán)，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)戊烯基、環(huán)己烯基、雙環(huán)[2.2.1]庚烷基、雙環(huán)[3.2.1]辛烷基和雙環(huán)[5.2.0]壬烷基。
本文所用的術語“鹵素”或“鹵代”指的是氟代、氯代、溴代或碘代或氟化物、氯化物、溴化物或碘化物。
本文所用的術語“鹵代取代的烷基”或“鹵代烷基”指的是被一個或多個以上所示的鹵素取代的以上所示的烷基，包括但不限于氯甲基、二氯甲基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基和2，2，2-三氯乙基。
本文所用的術語“全鹵代烷基”指的是以上所示的烷基，其中烷基的每個氫均被以上所示的“鹵素”或“鹵代”所替代。
本文所用的術語“鏈烯基”指的是含有至少兩個碳原子和至少一個雙鍵的直鏈或支鏈烴鏈。實例包括但不限于乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基(烯丙基)、異丙烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-丁烯基和2-丁烯基。
本文所用的術語“炔基”指的是具有至少一個三鍵的直鏈或支鏈烴鏈基團，包括但不限于乙炔基、丙炔基和丁炔基。
本文所用的術語“羰基”指的是＞C＝O部分。
烷氧基羰基氨基(即烷氧基(C＝O)-NH-)指的是氨基甲酸烷基酯基。羰基還以相當?shù)姆绞皆诒疚闹卸x為(C＝O)。
本文所用的術語“苯基-[(烷基)-N]-(C＝O)-”指的是下式的N，N′-二取代的酰胺基 本文所用的術語“芳基”指的是芳族基團，如例如苯基、萘基、四氫萘基和二氫化茚基。
本文所用的術語“雜芳基”指的是含有至少一個選自O、S和N的雜原子的芳族基團。例如，雜芳基包括但不限于吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、噻吩基、呋喃基、咪唑基、吡咯基、噁唑基(例如1，3-噁唑基、1，2-噁唑基)、噻唑基(例如1，2-噻唑基、1，3-噻唑基)、吡唑基、四唑基、三唑基(例如1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基)、噁二唑基(例如1，2，3-噁二唑基)、噻二唑基(例如1，3，4-噻二唑基)、喹啉基、異喹啉基、苯并噻吩基、苯并呋喃基和吲哚基。
本文所用的術語“雜環(huán)基”指的是含有至少一個選自N、O和S的雜原子的飽和或不飽和C3-C20單-、雙-或多環(huán)基團。雜環(huán)基的實例包括但不限于氮雜環(huán)丁烷基、四氫呋喃基、咪唑烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、噁唑烷基、噻唑烷基、吡唑烷基、硫代嗎啉基、四氫噻嗪基、四氫噻二嗪基、嗎啉基、氧雜環(huán)丁烷基、四氫二嗪基、噁嗪基、噁噻嗪、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、奎寧環(huán)基、苯并二氫吡喃基、異苯并二氫吡喃基、苯并噁嗪等。單環(huán)飽和或不飽和環(huán)系的實例有四氫呋喃-2-基、四氫呋喃-3-基、咪唑烷-1-基、咪唑烷-2-基、咪唑烷-4-基、吡咯烷-1-基、吡咯烷-2-基、吡咯烷-3-基、哌啶-1-基、哌啶-2-基、哌啶-3-基、哌嗪-1-基、哌嗪-2-基、哌嗪-3-基、1，3-噁唑烷-3-基、異噻唑烷、1，3-噻唑烷-3-基、1，2-吡唑烷-2-基、1，3-吡唑烷-1-基、硫代嗎啉基、1，2-四氫噻嗪-2-基、1，3-四氫噻嗪-3-基、四氫噻二嗪基、嗎啉基、1，2-四氫二嗪-2-基、1，3-四氫二嗪-1-基、1，4-噁嗪-2-基和1，2，5-噁噻嗪-4-基。
本文所用的術語“可藥用酸加成鹽”指的是無毒酸加成鹽，即由藥理學可接受的陰離子衍生的鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽、酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽、酒石酸氫鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖二酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽和撲酸鹽(即1，1′-亞甲基-二-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。
本文所用的術語“可藥用堿加成鹽”指的是無毒堿加成鹽，即由藥理學可接受的陽離子如堿金屬陽離子(例如鉀和鈉離子)和堿土金屬陽離子(例如鈣和鎂離子)衍生的鹽、銨或水溶性胺加成鹽如N-甲基葡糖胺-(甲葡胺)，以及低級鏈烷醇銨和其他可藥用有機胺的堿鹽。
本文所用的術語“適合的取代基”、“取代基”或“取代的”指的是化學和藥學可接受的官能團，即對發(fā)明的化合物的抑制和/或治療活性無不利影響的部分。這種適合的取代基可由本領域技術人員按常規(guī)選擇。適合的取代基的示例性實例包括但不限于羰基、鹵代、鹵代烷基、全氟代烷基、全氟代烷氧基、烷基、鏈烯基、炔基、羥基、氧代、巰基、烷硫基、烷氧基、芳基或雜芳基、芳氧基或雜芳基氧基、芳烷基或雜芳烷基、芳烷氧基或雜芳烷氧基、HO-(C＝O)-、酯、酰氨基、醚、氨基、烷基-和二烷基氨基、氰基、硝基、氨基甲?；?、烷基羰基、烷氧基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、芳基羰基、芳氧基羰基、烷基磺?；?、芳基磺?；?。本領域技術人員將理解許多取代基可以被其他取代基取代。
本文所用的術語“TGF相關性疾病狀態(tài)”指的是由TGF-β的生成介導的任何疾病狀態(tài)。
本文所用的術語“Ph”指的是苯基。
本文所用的術語“任選含有至少一個雜原子的飽和、不飽和或芳族C3-C20單-、雙-或多環(huán)”指的是但不限于
和 其中R2a獨立地選自(C1-C6)烷基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C10)環(huán)烷基、(C5-C10)芳基、(C1-C6)烷基芳基、氨基、羰基、羧基、(C2-C6)酸、(C1-C6)酯、(C5-C10)雜芳基、(C5-C10)雜環(huán)基、(C1-C6)烷氧基、硝基、鹵代、羥基、(C1-C6)烷氧基(C1-C6)酯和那些U.S.申請No.10/094,717、10/094,760和10/115,952所述的基團，其各自在此全體引入作為參考；且其中作為R2a的烷基、鏈烯基、炔基、環(huán)烷基、芳基、氨基、酸、酯、雜芳基、雜環(huán)基和烷氧基任選被至少一個獨立地選自以下的部分取代鹵代、(C1-C6)烷基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)炔基、全鹵代(C1-C6)烷基、苯基、(C3-C10)環(huán)烷基、(C5-C10)雜芳基、(C5-C10)雜環(huán)基、甲?；?、NC-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-、苯基-(C＝O)-、HO-(C＝O)-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-、(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-、((C1-C6)烷基)2-N-(C＝O)-、苯基-NH-(C＝O)-、苯基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)-、O2N-、氨基、(C1-C6)烷基氨基、((C1-C6)烷基)2-氨基、(C1-C6)烷基-(C＝O)-NH-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、苯基-(C＝O)-NH-、苯基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、H2N-(C＝O)-NH-、(C1-C6)烷基-HN-(C＝O)-NH-、((C1-C6)烷基)2N-(C＝O)NH-、(C1-C6)烷基-HN-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、((C1-C6)烷基)2N-(C＝O)-[(C1-C6)烷基-N]-、苯基-HN-(C＝O)-NH-、(苯基)2N-(C＝O)-NH-、苯基-HN-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、(苯基-)2N-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-NH-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、苯基-O-(C＝O)-NH-、苯基-O-(C＝O)-[(烷基)-N]-、(C1-C6)烷基-SO2NH-、苯基-SO2NH-、(C1-C6)烷基-SO2-、苯基-SO2-、羥基、(C1-C6)烷氧基、全鹵代(C1-C6)烷氧基、苯氧基、(C1-C6)烷基-(C＝O)-O-、(C1-C6)酯-(C1-C6)烷基-O-、苯基-(C＝O)-O-、NH2-(C＝O)-O-、(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-O-、((C1-C6)烷基)2N-(C＝O)-O-、苯基-NH-(C＝O)-O-和(苯基)2N-(C＝O)-O-。
發(fā)明詳述以下反應方案闡述了本發(fā)明化合物的制備。本發(fā)明的化合物可通過類似于U.S.申請10/094717、10/094760和10/115952和WO 02/40476所述的方法制備。除非另外指明，反應方案及其后的討論中的X、R1、R3、R4、R2a和s如上所定義。
方案1 (A)其中X＝O方案1涉及其中X是O的式(A)化合物的制備。關于方案1，首先用芳族胺如苯胺在極性溶劑中處理、由式II的醛制備式III化合物。適合的溶劑包括乙酸乙酯、乙酸異丙酯或四氫呋喃、優(yōu)選乙酸異丙酯。將所得反應混合物加熱至約50℃至約100℃、優(yōu)選60℃的溫度，然后緩慢地用亞磷酸二苯基酯處理。將反應混合物的溫度保持約30分鐘至約3小時、優(yōu)選1小時，然后冷卻至環(huán)境溫度過夜。式II化合物根據(jù)以下所示制備E進行制備。
式V化合物由式III化合物、通過與式IV的醛在堿如叔丁醇鉀存在下、在極性溶劑中反應而制備。適合的溶劑包括乙酸乙酯、乙酸異丙酯或四氫呋喃、優(yōu)選四氫呋喃和乙酸異丙酯的混合物。使前述反應在約0℃至約100℃、優(yōu)選約22℃(環(huán)境溫度)的溫度下進行約30分鐘至約5小時、優(yōu)選2小時。然后將所得反應混合物用酸如鹽酸處理約30分鐘至約5小時、優(yōu)選約1小時。其中X＝O的式(A)化合物由式V化合物、通過用過量的羥胺在極性溶劑如乙醇中、在約0℃至約60℃、優(yōu)選約室溫下處理而制備。然后將所得加合物在N，N-二甲基甲酰胺縮二甲醇中攪拌并在約60℃至約100℃、優(yōu)選約80℃的溫度下加熱約60分鐘至約60小時、優(yōu)選約36小時。
方案2 方案2涉及作為方案I中制備式(A)化合物的中間體的式V化合物的制備。關于方案2，式V化合物如下制備用堿如丁基鋰在約-60℃的溫度下將式VI化合物處理約90分鐘，然后緩慢加入在極性非質(zhì)子溶劑如四氫呋喃中的市購可得或根據(jù)類似于以下所示制備C的方法制備的、其中R1被以下基團替代的式VII的吡啶基酰胺， 使前述反應在約-78℃至約0℃、優(yōu)選約-20℃的溫度下進行約1小時至約10小時、優(yōu)選約3小時。
備選地，根據(jù)以下方法制備式V化合物Davies，I.W.、Marcoux，J.F.、Corley，E.G.、Journet，M.、Cai，D.-W.、Palucki，M.、Wu，J.、Larsen，R.D.、Rossen，K.、Pye，P.J.、DiMichele，L.、Dormer，P.、Reider，P.J.、J.Org.Chem.，65卷，8415-8420頁(2000)。
方案3 方案3涉及其中R1為下式的式(A)化合物的制備， 關于方案3，式IX化合物由式VIII化合物制備，這兩種化合物均市購可得或可根據(jù)以下所示制備D所述的方法制備。在方案3中，式(A)化合物由式IX化合物、根據(jù)方案1所述方法制備。
方案4 方案4涉及作為方案1中制備式(A)化合物的中間體的式V化合物的制備。關于方案4，式V化合物如下制備使市購可得或根據(jù)以下所示制備B制備的式X化合物與式R1-Cl化合物在催化劑如醋酸鈀II、堿(例如叔丁醇鉀和AMPHOS(即2-二環(huán)己基膦基-2’-(N，N-二甲基氨基)聯(lián)苯，由Strem Chemicals，Newburyport，MA市購可得))存在下、在極性非質(zhì)子溶劑如四氫呋喃中反應。使前述反應在約50℃至約100℃、優(yōu)選約75℃的溫度下進行約6小時至約24小時、優(yōu)選約18小時。
方案5 方案5涉及其中X＝S的式A化合物的制備。關于方案5，式XXIX的酰胺可如下制備用亞硫酰氯處理式XV化合物(由Aldrich Chemical，Milwaukee，WI市購可得)、然后用氨淬滅。硫代酰胺XXX可由XXIX通過用Lawson′s試劑在溶劑如甲苯中、在20-100℃的溫度下處理而制備。其中X＝S的式(A)化合物可如Tetrahedron Letters，25，409-410，1984所述、由XXX通過與乙炔XXXI反應而制備。式XXXI化合物可由R1Br通過聯(lián)合催化劑如PDCl2(PPh)2、在添加劑如CuI和乙炔基-三甲基-硅烷存在下、在約0℃至約80℃、優(yōu)選約室溫下、在極性溶劑如四氫呋喃中制備。然后可在標準脫保護條件下除去三甲基硅烷基。
制備A 制備A涉及可用作制備式(A)化合物的中間體的式IV化合物的制備。在制備A中，R是簡單烷基如甲基或乙基。關于制備A，式XII化合物由其中X是氯或溴的式XI化合物通過烷氧基羰基化反應而制備。適合的條件包括與丁基鋰在溶劑如四氫呋喃中、在約0℃的溫度下進行金屬-鹵素交換達約30分鐘，然后加入約0℃下的氯甲酸乙酯，然后在約50℃下約2.4小時。式XI化合物市購可得。
式IV化合物由式XII化合物通過兩步法制備。首先，將式XII化合物用還原劑處理。適合的還原劑包括硼氫化鋰、硼氫化鈉、氫化鋁鋰和硼烷/四氫呋喃。用于前述反應的適合溶劑包括甲醇、乙醇、四氫呋喃、二乙醚和二噁烷。使前述反應在約0℃至約100℃、優(yōu)選約65℃的溫度下進行約10分鐘至約1小時、優(yōu)選約30分鐘。然后將所得伯醇通過用氧化劑如N-甲基嗎啉N-氧化物/TPAP、Dess-Martin試劑、PCC或草酰氯-DMSO、優(yōu)選草酰氯-DMSO處理而氧化為相應的式IV的醛。用于前述反應的適合溶劑包括氯仿、四氫呋喃或二氯甲烷。使前述反應在約-78℃至約22℃的溫度下進行約15分鐘至約3小時、優(yōu)選約1小時。
制備B 制備B涉及可用作制備式(A)化合物的中間體的式X化合物的制備。關于制備B，式XIII化合物由式II化合物通過與甲基溴化鎂在極性溶劑如四氫呋喃和甲苯的混合物中反應而制備。使前述反應在約-78℃至約0℃、優(yōu)選約-60℃的溫度下進行約10分鐘至約1小時、優(yōu)選約40分鐘，然后在約-10℃的溫度下進行約90分鐘。式II化合物根據(jù)以下所示制備E制備。
式X化合物由式XIII化合物、通過用氧化劑如N-甲基嗎啉N-氧化物/TPAP、Dess-Martin試劑、PCC或草酰氯-DMSO、優(yōu)選草酰氯-DMSO處理而制備。用于前述反應的適合溶劑包括氯仿、四氫呋喃或二氯甲烷。使前述反應在約-78℃至約22℃的溫度下進行約15分鐘至約3小時、優(yōu)選約1小時。
制備C 制備C涉及可用作制備式(A)化合物的中間體的式VII化合物的制備。在制備C中，R為簡單烷基如甲基或乙基。關于制備C，式XV化合物由可根據(jù)制備A所述制備或市購可得的式XIV化合物、通過用堿如氫氧化鋰在極性質(zhì)子溶劑中處理而制備。用于前述反應的適合溶劑包括甲醇、乙醇和水。使前述反應在約0℃至約30℃、優(yōu)選約22℃(室溫)的溫度下進行約15分鐘至約3小時、優(yōu)選約1小時。
式VII化合物由式XV化合物通過與適合的活化劑和下式化合物和堿反應而制備。
適合的活化劑包括亞硫酰氯、羰基二咪唑、EDCI和DCC、優(yōu)選草酰氯。適合的堿包括三乙胺、Hunig′s堿或DBU、優(yōu)選三乙胺。用于前述反應的適合溶劑包括二氯甲烷、N，N′-二甲基甲酰胺、四氫呋喃和其混合物、優(yōu)選二氯甲烷。使前述反應在約0℃至約30℃、優(yōu)選約22℃(室溫)的溫度下進行約6小時至約48小時、優(yōu)選約12小時。
制備D 制備D涉及可用作制備(A)化合物的中間體的式VIII化合物的制備，其中R1為 在制備D中，R為(C1-C6)烷基。式VIII化合物由式XVI化合物通過用鹵代烷如甲基碘、在堿如氫化鈉存在下、在極性非質(zhì)子溶劑如N，N′-二甲基甲酰胺中處理而制備。式XVI化合物市購可得。
制備E
制備E涉及可用作制備以上所示式(A)化合物的中間體的式II化合物的制備。在制備E中，R為簡單烷基如甲基或乙基。關于制備E，根據(jù)制備A中有關由式XI化合物制備化合物XII所述的方法，由其中X為氯或溴的式XVII的雜芳基鹵制備式XVIII化合物。根據(jù)制備A中有關由化合物XII制備化合物IV所述的兩步法，由式XVIII制備式II化合物。
本發(fā)明化合物的所有可藥用鹽、前藥、互變異構體、水合物和溶劑合物也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。呈堿性的本發(fā)明化合物能夠與各種無機或有機酸形成多種類型的不同的鹽。盡管對于施用于動物和人而言，這些鹽必須是可藥用的，但在實踐中常常需要首先以不可藥用鹽的形式從反應混合物中分離本發(fā)明化合物，然后再將后者通過用堿性試劑處理而簡單轉(zhuǎn)化為游離堿化合物，隨后將該游離堿轉(zhuǎn)化為可藥用酸加成鹽。本發(fā)明的堿性化合物的酸加成鹽可容易地通過用基本上等當量的所選無機或有機酸在水性溶劑介質(zhì)中或在適宜的有機溶劑如甲醇或乙醇中處理堿性化合物而制備。經(jīng)小心蒸發(fā)溶劑后，得到所需固體鹽。
可用于制備本發(fā)明堿性化合物的可藥用酸加成鹽的酸是可形成無毒酸加成鹽即含有藥理學可接受陰離子的鹽的那些酸，所述鹽例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽或硫酸氫鹽、磷酸鹽或酸式磷酸鹽、乙酸鹽、乳酸鹽、檸檬酸鹽或酸式檸檬酸鹽、酒石酸鹽或酒石酸氫鹽、琥珀酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖二酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽和撲酸鹽(即1，1′-亞甲基-二-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。
同時呈酸性性質(zhì)、例如含有COOH或四唑基部分的本發(fā)明化合物能夠與各種藥理學可接受的陽離子形成堿鹽。盡管對于施用于動物和人而言，這些鹽必須是可藥用的，但在實踐中常常需要首先以不可藥用鹽的形式從反應混合物中分離本發(fā)明的化合物，然后簡單地將后者通過用酸性試劑處理而轉(zhuǎn)化為游離酸化合物，隨后將該游離酸轉(zhuǎn)化為可藥用的堿加成鹽。這種可藥用堿加成鹽的實例包括堿金屬和堿土金屬鹽，特別是鈉鹽和鉀鹽。這些鹽可通過常規(guī)方法制備。可用作制備本發(fā)明的可藥用堿加成鹽的試劑的化學堿是可與此處所述本發(fā)明酸性化合物形成無毒堿鹽的那些堿。這些無毒堿鹽包括由藥理學可接受的陽離子如鈉、鉀、鈣和鎂等衍生的鹽。這些鹽可容易地通過用含有所需藥理學可接受的陽離子的水溶液處理相應的酸性化合物、然后將所得溶液優(yōu)選在減壓下蒸發(fā)至干而制備?；蛘撸鼈円部梢酝ㄟ^將酸性化合物的低級鏈烷醇溶液和所需堿金屬醇鹽混合在一起、然后以與上相同的方式將所得溶液蒸發(fā)至干而制備。在任一情況下，優(yōu)選使用化學計算量的試劑，以便確保反應完全并獲得最大產(chǎn)率。
本發(fā)明還包括同位素標記的化合物。此處所用的“同位素標記的化合物”指的是其中一個或多個原子被原子量或質(zhì)量數(shù)不同于通常天然存在的原子量或質(zhì)量數(shù)的原子代替的此處所述的本發(fā)明化合物、包括其藥用鹽、前藥。可摻入本發(fā)明化合物中的同位素的實例包括氫、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分別如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F和36Cl。
通過將本發(fā)明的化合物同位素標記，這些化合物可用于藥物和/或底物組織分布試驗中。氚(3H)和C-14(14C)標記的化合物因其易于制備和檢測而特別優(yōu)選。此外，用較重的同位素如氘(2H)取代可獲得因代謝穩(wěn)定性更高而帶來的某些治療益處，例如體內(nèi)半衰期增加或劑量要求降低，因此在一些情形下可能是優(yōu)選的。同位素標記的本發(fā)明化合物、包括其藥用鹽和前藥可通過本領域已知的任何方法制備。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明化合物的立體異構體(例如順式和反式異構體)和所用旋光異構體(例如R和S對映體)以及這些異構體的外消旋、非對映和其他混合物。
本發(fā)明的化合物、鹽、前藥、互變異構體、水合物和溶劑合物可以以幾種互變異構形式、包括烯醇和亞胺形式以及酮和烯胺形式和幾何異構體及其混合物形式存在。所有這些互變異構形式均包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。在溶液中，互變異構體以互變異構集的混合物形式存在。在固體形式中，通常一種互變異構體占優(yōu)勢。即使僅描述一種互變異構體，但本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的所有互變異構體。
本發(fā)明還包括本發(fā)明的阻旋異構體。阻旋異構體指的是可分離為旋轉(zhuǎn)受限異構體的本發(fā)明化合物。
以上所述的本發(fā)明化合物可用于制備用于預防性或治療性治療動物或人的TGF相關性疾病狀態(tài)的藥物。
本發(fā)明的化合物是轉(zhuǎn)化生長因子(“TGF”)-β信號通路的強抑制劑并因此可用于治療。由此，本發(fā)明提供了預防或治療動物或人的TGF相關性疾病的方法，包括向所述患有TGF相關性疾病狀態(tài)的動物或人施用治療有效量的至少一種本發(fā)明化合物的步驟。
本文所用的術語“治療有效量”指的是抑制TGF信號通路所需的本發(fā)明化合物的量。本領域技術人員將會理解，“治療有效量”將因患者而異，并可基于個例確定。所要考慮的因素包括但不限于所治療的患者、體重、健康、所施用的化合物等。
有多種疾病狀態(tài)可通過抑制TGF信號通路而治療。這種疾病狀態(tài)包括但不限于所有類型的癌癥(例如乳癌、肺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、黑素瘤、所有血液學惡性疾病等)以及所有類型的纖維化疾病(例如腎小球腎炎、糖尿病性腎病、肝纖維化、肺纖維化、動脈增生和再狹窄、硬皮病和皮膚瘢疤形成(dermal scarring))。
本發(fā)明還提供了包含至少一種本發(fā)明化合物和至少一種可藥用載體的藥物組合物。所述可藥用載體可以是任何本領域已知的這類載體，包括例如在“Remington′s藥學科學”，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro編輯1985)中所述的那些。本發(fā)明的藥物組合物可通過本領域已知的常規(guī)方法制備、例如包括將至少一種本發(fā)明化合物與可藥用載體混合。
本發(fā)明的藥物組合物可用于預防或治療以上所述的動物或人的TGF相關性疾病狀態(tài)。因此，可將本發(fā)明化合物配制為用于口服、口含、鼻內(nèi)、胃腸道外(例如靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下)、局部或直腸施用的藥物組合物或配制為適合于通過吸入或吹入施用的形式。
對于口服施用而言，藥物組合物可采取例如片劑或膠囊劑形式，其通過常規(guī)方法用如下的可藥用賦形劑制備粘合劑(例如預膠化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；填充劑(例如乳糖、微晶纖維素或磷酸鈣)；潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石粉或硅膠)；崩解劑(例如馬鈴薯淀粉或羥基乙酸淀粉鈉)；或潤濕劑(例如十二烷基硫酸鈉)。片劑可通過本領域熟知的方法包衣。用于口服施用的液體制劑可采取例如溶液劑、糖漿劑或混懸劑的形式，或它們可以以在使用前周水或其它適合的溶劑復原的干產(chǎn)物的形式存在。這種液體制劑可通過常規(guī)方法、用可藥用添加劑制備，所述可藥用添加劑如懸浮劑(例如山梨糖醇漿、甲基纖維素或氫化食用脂肪)；乳化劑(例如卵磷脂或阿拉伯膠)；非水性賦形劑(例如杏仁油、油狀酯或乙醇)；以及防腐劑(例如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。
對于口含施用，所述組合物可采取以常規(guī)方式配制的片劑或錠劑形式。
也可將本發(fā)明的化合物根據(jù)本領域技術人員熟知的方法配制用于持續(xù)遞送。這種制劑的實例可見于美國專利3,538,214、4,060,598、4,173,626、3,119,742和3,492,397，在此將其全體引入作為參考。
可將本發(fā)明的化合物配制用于通過注射胃腸道外施用，包括使用常規(guī)的導管插入技術或輸注。注射制劑可以呈單位劑量形式，例如在安瓿或添加有防腐劑的多劑量容器中。所述組合物可呈諸如在油性或水性賦形劑中的混懸劑、溶液劑或乳劑的形式，且可含有配制劑如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑?；蛘?，活性成分可以是使用前以適合的賦形劑、例如無菌無熱源的水復原的粉末形式。
還可將本發(fā)明化合物配制在直腸用組合物如栓劑或留置灌腸劑中，例如所述栓劑或保留灌腸劑含有常規(guī)的栓劑基質(zhì)如可可酯或其他甘油酯。
對于鼻內(nèi)施用或通過吸入施用，可將本發(fā)明的化合物方便地以溶液或混懸液形式由患者從噴射泵容器中擠出或抽吸而遞送，或以氣霧噴霧形式由加壓容器或霧化器中借助適宜的拋射劑遞送，所述拋射劑例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他適合的氣體。對于加壓氣霧劑，可通過提供計量遞送閥以確定劑量單位。加壓容器或霧化器可含有本發(fā)明化合物的溶液或混懸液?？蓪⒂糜谖肫骰虼等肫髦械哪z囊或藥筒(例如由明膠制成)配制為含有本發(fā)明化合物和適宜的粉末基質(zhì)如乳糖或淀粉的粉末混合物。
用于向普通成人口服、胃腸道外或口含施用以治療TGF相關性疾病狀態(tài)的本發(fā)明化合物的建議劑量為每單位劑量約0.1mg至約2000mg、優(yōu)選約0.1mg至約200mg的活性成分，可例如每天1至4次施用。
用于在普通成人中治療以上所提及病癥的氣霧制劑優(yōu)選這樣施用每一計量劑量的或每次“噴射(puff)”的氣霧劑含有約20μg至約10,000μg、優(yōu)選約20μg至約1000μg的本發(fā)明化合物。氣霧劑的總?cè)談┝靠梢詾榧s100μg至約100mg、優(yōu)選約100μg至約10mg。可每天數(shù)次施用，例如2、3、4或8次，例如每次給予1、2或3劑。
用于在普通成人中治療以上所提及病癥的氣霧組合制劑優(yōu)選這樣施用每一計量劑量的或每次“噴射”的氣霧劑含有約0.01mg至約1000mg、優(yōu)選約0.01mg至約100mg的本發(fā)明化合物、更優(yōu)選約1mg至約10mg該化合物?？擅刻鞌?shù)次施用，例如2、3、4或8次，例如每次給予1、2或3劑。
用于在普通成人中治療以上所提及病癥的氣霧制劑優(yōu)選這樣施用每一計量劑量的或每次“噴射”的氣霧劑含有約0.01mg至約20,000mg、優(yōu)選約0.01mg至約2000mg的本發(fā)明化合物、更優(yōu)選約1mg至約200mg。可每天數(shù)次施用，例如2、3、4或8次，例如每次給予1、2或3劑。
對于局部施用而言，可將本發(fā)明的化合物配制為軟膏劑或乳膏劑。
本發(fā)明還包括含有至少一種本發(fā)明化合物的前藥的藥物組合物以及包括施用至少一種本發(fā)明化合物的前藥的治療或預防方法。本文所用的術語“前藥”指的是母體藥物分子的藥理學無活性衍生物，其需要在生物體內(nèi)自發(fā)或酶促生物轉(zhuǎn)化，以釋放活性藥物。前藥是具有在代謝條件下可裂解基團的本發(fā)明化合物的變體或衍生物。當經(jīng)歷生理條件下的溶劑分解或經(jīng)歷酶促降解后，前藥即成為在體內(nèi)具有藥學活性的本發(fā)明化合物。本發(fā)明的前藥化合物可稱為單重、雙重、三重前藥等，這取決于在生物體內(nèi)釋放藥物所需的生物轉(zhuǎn)化步驟數(shù)，并且指示存在于前體形式中的官能團的數(shù)目。前藥形式通常提供在哺乳動物組織中的溶解性、組織相容性或延遲釋放的益處(參見Bundgard，“前藥的設計”，7-9，21-24頁，Elsevier，Amsterdam1985和Silverman，“藥物設計和藥物作用的有機化學”，352-401頁，Academic Press，San Diego，Calif.，1992)。本領域通常已知的前藥包括本領域從業(yè)者熟知的酸衍生物，例如通過使母體酸與適宜的醇反應所制備的酯，或通過使母體酸化合物與胺反應所制備的酰胺，或堿性基團反應形成?；膲A衍生物。此外，本發(fā)明的前藥衍生物可與其他此處教導可增強生物利用度的特征性部分聯(lián)合。例如具有游離氨基、酰胺基、羥基或羧基的本發(fā)明化合物可轉(zhuǎn)化為前藥。前藥包括這樣的化合物，其中氨基酸殘基或兩個或多個(例如2、3或4)氨基酸殘基的多肽鏈通過共價鍵結(jié)合于本發(fā)明化合物的游離氨基、羥基或羧酸基。氨基酸殘基包括通常以三個字母符號命名的20種天然存在的氨基酸，也包括4-羥基脯氨酸、羥賴氨酸、demosine、isodemosine、3-甲基組氨酸、正纈氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、同型半胱氨酸、同型絲氨酸、鳥氨酸和甲硫氨酸砜(methionine sulfone)。前藥還包括其中碳酸酯、氨基甲酸酯、酰胺和烷基酯通過羰基碳前藥側(cè)鏈共價鍵合于本發(fā)明化合物的上述取代基的化合物。
根據(jù)本發(fā)明，在治療TGF相關性疾病狀態(tài)時，單獨或作為藥物組合物一部分的本文所述的本發(fā)明化合物可與另外一種或多種本發(fā)明化合物和/或與另外一種或多種治療劑組合。適宜的治療劑的實例包括但不限于標準非甾體抗炎劑(以下稱為NSAID)(例如吡羅昔康、雙氯芬酸)、丙酸類(例如萘普生、氟比洛芬、非諾洛芬鈣、酮洛芬和布洛芬)、滅酸類(例如甲芬那酸、吲哚美辛、舒林酸、阿扎丙宗)、吡唑酮類(例如保泰松)、水楊酸類(例如阿司匹林)、COX-2抑制劑(例如塞來昔布、伐地昔布(valdecoxib)、洛芬昔布和依托昔布(etoricoxib))、止痛劑和關節(jié)內(nèi)治療劑(例如皮質(zhì)類固醇)和透明質(zhì)酸(例如Hyalgan和Synvisc)、抗癌劑(例如內(nèi)皮抑素(endostatin)和血管抑素(angiostatin))、細胞毒藥物(例如阿霉素、柔紅霉素、順鉑、依托泊苷、紫杉醇、多西他賽)、生物堿(例如長春新堿)和抗代謝藥物(例如甲氨蝶呤)、心血管藥物(例如鈣通道阻斷劑)、降脂劑(例如他汀類藥物)、貝特類、β-阻斷劑、Ace抑制劑、血管緊張素-2受體拮抗劑和血小板凝聚抑制劑、CNS藥物(例如抗抑郁劑(如舍曲林))、抗帕金森藥物(例如鹽酸司來吉蘭、L-多巴、Requip、Mirapex)、MAOB抑制劑(例如selegine和雷沙吉蘭(rasagiline))、comP抑制劑(例如Tasmar)、A-2抑制劑、多巴胺再攝取抑制劑、NMDA拮抗劑、煙堿激動劑、多巴胺激動劑和神經(jīng)元氧化氮合酶抑制劑)、抗-阿爾茨海默病藥物(例如杜尼匹次、他克林、COX-2抑制劑、丙戊茶堿或metryfonate)、骨質(zhì)疏松藥物(例如雷洛昔芬、屈洛昔芬、拉索昔芬(lasofoxifene)或Fosomax)以及免疫抑制劑(例如FK-506和雷帕霉素)。
生物學活性本發(fā)明化合物對本文所述的多種TGF相關性疾病狀態(tài)的活性可根據(jù)一種或多種以下試驗法確定。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的化合物顯示體外IC50值小于約10μM。例如，實施例5的化合物顯示TβRI IC50值約118nM。
本發(fā)明化合物還對TβRI具有相對于TβRII和TβRIII的區(qū)別活性(即選擇性)。選擇性在標準試驗中測定，以各試驗中抑制作用的IC50比值表示。
TGF-βII型受體(TβRII)激酶試驗方案TβRII激酶對髓鞘堿性蛋白(MBP)的磷酸化作用如下測量用含有50mM MOPS、5mM MgCl2的pH7.2激酶反應緩沖液(KRB)稀釋MBP(Upstate Biotechnology #13-104)，使MBP終濃度為3μM，將80μl該MBP溶液加入Millipore 96-孔multiscreen-DP 0.65微米濾板(#MADPNOB50)的每孔中。將用KRB稀釋的抑制劑以每孔20μl加入到適合的孔中以達到所需終濃度(10-0.03μM)。加入10μl用KRB稀釋的ATP(Sigma #A-5394)和33P-ATP(Perkin Elmer #NEG/602H)的混合物，以使每孔ATP終濃度為0.25μM，33P-ATP終濃度為0.02微居里。向每孔加入10μl用KRB稀釋的GST-TβRII融合蛋白(谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶位于TβRII胞質(zhì)域的N-末端-氨基酸193-567中438位A改變?yōu)閂)，使GST-TβRII的終濃度為27nM。將各板混合并在室溫下溫育90分鐘。在反應溫育后，向每孔加入100μl冷20％三氯乙酸(Aldrich #25，139-9)并將各板混合、在4℃溫育60分鐘。然后使用Millipore多頭抽真空裝置從各孔除去液體。將各板用200μl/孔冷10％三氯乙酸洗滌一次、然后用100μl/孔冷10％三氯乙酸洗滌兩次。使各板在室溫下干燥過夜。向每孔加入20μl WallacOptiPhase SuperMix閃爍合劑。將板密封并用Wallac 1450 Microbeta液閃計數(shù)儀計數(shù)。抑制劑的效能通過其減少TβRII-介導的MBP底物的磷酸化來確定。
ALK-5(TβRI)激酶試驗方案用50mM HEPES、5mM MgCl2、1mM CaCl2、1mM二硫蘇糖醇和3μM ATP中的65nM GST-ALK5和84nM GST-Smad3進行該激酶試驗。將反應物與0.5_Ci[33P]_ATP在30℃溫育3小時。將磷酸化的蛋白捕獲在P-81紙上(Whatman，Maidstone，英國)、用0.5％磷酸洗滌并通過液體閃爍法計數(shù)?；蛘?，將Smad3或Smad1蛋白涂布于FlashPlate Sterile BasicMicroplate(PerkinElmer Life Sciences，Boston，MA)上。然后于Flash-Plate中以同樣的試驗條件、使用ALK5激酶域以Smad3作為底物或ALK6激酶域(BMP受體)以Smad1作為底物進行激酶試驗。將各板用磷酸緩沖液洗滌三次并通過TopCount(Packard Bio-science，Meriden，CT)計數(shù)(Laping，N.J.等人，Molecular Pharmacology 6258-64(2002))。
以下實施例闡述了本發(fā)明化合物的制備。熔點未經(jīng)校準。所報告的NMR數(shù)據(jù)以百萬分率(d)計并以樣品溶劑(除非另外指明，使用氘代氯仿)的氘鎖信號作為參比。使用裝備有Gilson梯度高效液相色譜的MicromassZMD APCI質(zhì)譜儀獲取質(zhì)譜數(shù)據(jù)。使用以下溶劑和梯度進行分析溶劑A98％水/2％乙腈/0.01％甲酸，溶劑B含有0.005％甲酸的乙腈。通常，梯度運行約4分鐘，從95％溶劑A開始，結(jié)束于100％溶劑B。然后以正離子或負離子模式掃描分子量范圍165AMU至1100AMU，得到主要洗脫組分的質(zhì)譜圖。使用鈉D線(589nm)于室溫下測量比旋度。使用市售試劑，不經(jīng)進一步純化。THF指的是四氫呋喃。DMF指的是N，N-二甲基甲酰胺。色譜法指的是使用32-63mm硅膠并在氮壓(快速色譜法)條件下進行的柱色譜法。室溫或環(huán)境溫度指的是20-25℃。為了方便并為了獲得最高產(chǎn)率，所有非水相反應均在氮氣氛下進行。減壓濃縮意指使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
本領域技術人員可以理解在某些情況下，在制備過程中可能需要保護基。在制備目標分子后，可通過本領域技術人員熟知的方法如Greene和Wuts，“有機合成中的保護基”(第2版，Ed，John Wiley & Sons 1991)所述的方法除去保護基。
使用Polaris 2×20mm C18柱進行以質(zhì)譜檢測的分析型反相高效液相色譜法(LSMS)。使用如下梯度洗脫乙腈于0.01％甲酸水溶液中的濃度在3.75min內(nèi)從5％增至100％。使用質(zhì)譜儀Micromass ZMD進行分子離子鑒定。
實施例14-[3-(6-甲基-吡啶-2-基)-異噁唑-4-基]-喹啉的制備步驟A[(6-甲基-吡啶-2-基)-苯基氨基-甲基]-膦酸二苯基酯的制備將6-甲基-吡啶-2-甲醛(40g，330mmol)、苯胺(30.1mL，330mmol)和380mL乙酸異丙酯裝入2L圓底燒瓶中。將該反應混合物加熱至65℃并在60分鐘內(nèi)滴加亞磷酸二苯酯(112mL，495mmol)。將該混合物在65℃下再攪拌60分鐘、然后在室溫下攪拌過夜。真空濃縮，得到漿液，將其溶于1升乙酸乙酯中并用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌(3×200mL)。有機層經(jīng)硫酸鈉干燥、過濾并濃縮在硅膠上。將產(chǎn)物通過使用10-20％乙酸乙酯/己烷溶劑梯度的快速色譜法純化，得到126.5g純物質(zhì)。HPLC tR＝6.68min，LC-MS＝431(M+1)。
步驟B1-(6-甲基-吡啶-2-基)-2-喹啉-4-基-乙酮的制備將[(6-甲基-吡啶-2-基)-苯基氨基-甲基]-膦酸二苯酯(24.5g，57mmol)、喹啉-4-甲醛(11.65g，74.1mmol)、90mL四氫呋喃和180mL異丙醇裝入2L圓底燒瓶中。將該反應混合物溫至25℃并在90分鐘內(nèi)滴加叔丁醇鉀(1.0M，74.1mL，74.1mmol)。在另外攪拌30分鐘后，加入鹽酸(2M，122mL)并將混合物攪拌1小時。將該溶液加熱至45℃并用6M氫氧化鈉將pH調(diào)節(jié)至5、再攪拌1小時、然后真空濃縮。將殘余物溶于氯仿并濃縮至硅膠上。將產(chǎn)物通過使用0-10％乙酸乙酯/己烷溶劑梯度的快速色譜法純化，得到10.97g純物質(zhì)。HPLC tR＝5.02min；LC-MS＝263(M+1)。
步驟C4-[3-(6-甲基-吡啶-2-基)-1H-吡唑-4-基]-喹啉的制備將1-(6-甲基-吡啶基-2-基)-2-喹啉-4-基-乙酮(100mg，0.38mmol)、1.5mL乙醇以及羥胺(140μL，2.3mmol，50％水溶液)裝入10mL圓底燒瓶中。將該反應混合物在室溫下攪拌24小時。
LC-MS證實所需中間體已經(jīng)形成。接下來，將該反應混合物在真空下濃縮至完全干燥。將殘余物溶于N，N-二甲基甲酰胺縮二甲醇(1.6mL，12mmol)，然后將其在80℃攪拌48小時。LC-MS顯示出所需產(chǎn)物。再次將反應混合物濃縮至完全干燥。將產(chǎn)物通過使用5-100％乙腈/水溶劑梯度(兩種溶劑均含0.1％甲酸，在λ＝242nm掃描)的Shimodzu制備型HPLC純化，得到18mg所需產(chǎn)物。HPLC tR＝4.74min；LC-MS＝288(M+1)。
實施例26-[3-(6-甲基-吡啶-2-基)-異噁唑-4-基]-[1，2，4]三唑并[4，3-a]吡啶該標題化合物按照類似于實施例1所述的方法制備。HPLC＝3.71(min)；LC-MS＝278(M+1)。
實施例36-[3-(6-甲基-吡啶-2-基)-異噁唑-4-基]-喹喔啉該標題化合物按照類似于實施例1所述的方法制備。HPLC＝4.24(min)；LC-MS＝289(M+1)。
實施例44-氯-6-[3-(6-甲基-吡啶-2-基)-異噁唑-4-基]-喹啉該標題化合物按照類似于實施例1所述的方法制備。HPLC＝4.87(min)；LC-MS＝322(M+1)。
實施例56-甲氧基-4-[3-(6-甲基-吡啶-2-基)-異噁唑-4-基]-喹啉該標題化合物按照類似于實施例1所述的方法制備。HPLC＝4.64(min)；LC-MS＝318(M+1)。
本申請中引用的所用出版物、包括但不限于授權專利、專利申請和期刊文章均在此全部引入作為參考。
盡管以上已參考所公開的實施方案描述了本發(fā)明，但本領域技術人員容易理解所詳述的特定實施例僅僅是對本發(fā)明的說明。應該理解，可以進行各種改變，只要不偏離本發(fā)明的精神即可。因此，本發(fā)明僅受到以下權利要求的限制。
權利要求
1.式(A)化合物或其可藥用鹽、前藥、互變異構體、水合物或溶劑合物， 其中X是O或S；R1是飽和、不飽和或芳族C3-C20單-、雙-或多環(huán)，任選含有至少一個選自N、O和S的雜原子，其中R1可任選進一步獨立地被至少一個獨立地選自以下的部分取代羰基、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、全鹵代(C1-C6)烷基、全鹵代(C1-C6)烷氧基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)炔基、羥基、氧代、巰基、(C1-C6)烷硫基、(C1-C6)烷氧基、(C5-C10)芳基或(C5-C10)雜芳基、(C5-C10)芳氧基或(C5-C10)雜芳基氧基、(C5-C10)芳基(C1-C6)烷基或(C5-C10)雜芳基(C1-C6)烷基、(C5-C10)芳基(C1-C6)烷氧基或(C5-C10)雜芳基(C1-C6)烷氧基、HO-(C＝O)-、酯、酰氨基、醚、氨基、氨基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基、二(C1-C6)烷基氨基(C1-C6)烷基、(C5-C10)雜環(huán)基(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基-和二(C1-C6)烷基氨基、氰基、硝基、氨基甲?；?、(C1-C6)烷基羰基、(C1-C6)烷氧基羰基、(C1-C6)烷基氨基羰基、二(C1-C6)烷基氨基羰基、(C5-C10)芳基羰基、(C5-C10)芳氧基羰基、(C1-C6)烷基磺?；?C5-C10)芳基磺?；?；每個R3獨立地選自氫、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)炔基、全鹵代(C1-C6)烷基、苯基、(C5-C10)雜芳基、(C5-C10)雜環(huán)基、(C3-C10)環(huán)烷基、羥基、(C1-C6)烷氧基、全鹵代(C1-C6)烷氧基、苯氧基、(C5-C10)雜芳基-O-、(C5-C10)雜環(huán)基-O-、(C3-C10)環(huán)烷基-O-、(C1-C6)烷基-S-、(C1-C6)烷基-SO2-、(C1-C6)烷基-NH-SO2-、O2N-、NC-、氨基、Ph(CH2)1-6HN-、(C1-C6)烷基HN-、(C1-C6)烷基氨基、[(C1-C6)烷基]2-氨基、(C1-C6)烷基-SO2-NH-、氨基(C＝O)-、氨基O2S-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-NH-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、苯基-(C＝O)-NH-、苯基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-、苯基-(C＝O)-、(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-、(C5-C10)雜環(huán)基-(C＝O)-、(C3-C10)環(huán)烷基-(C＝O)-、HO-(C＝O)-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-、H2N(C＝O)-、(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-、[(C1-C6)烷基]2-N-(C＝O)-、苯基-NH-(C＝O)-、苯基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)-、(C5-C10)雜芳基-NH-(C＝O)-、(C5-C10)雜環(huán)基-NH-(C＝O)-、(C3-C10)環(huán)烷基-NH-(C＝O)-和(C1-C6)烷基-(C＝O)-O-；其中作為R3的烷基、鏈烯基、炔基、苯基、雜芳基、雜環(huán)基、環(huán)烷基、烷氧基、苯氧基、氨基任選被至少一個獨立地選自以下的取代基取代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代、H2N-、Ph(CH2)1-6HN-和(C1-C6)烷基HN-；s是1至5的整數(shù)；且R4選自氫、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷基、(C2-C6)鏈烯基、(C2-C6)炔基、全鹵代(C1-C6)烷基、苯基、(C5-C10)雜芳基、(C5-C10)雜環(huán)基、(C3-C10)環(huán)烷基、羥基、(C1-C6)烷氧基、全鹵代(C1-C6)烷氧基、苯氧基、(C5-C10)雜芳基-O-、(C5-C10)雜環(huán)基-O-、(C3-C10)環(huán)烷基-O-、(C1-C6)烷基-S-、(C1-C6)烷基-SO2-、(C1-C6)烷基-NH-SO2-、O2N-、NC-、氨基、Ph(CH2)1-6NH-、烷基NH-、(C1-C6)烷基氨基、[(C1-C6)烷基]2-氨基、(C1-C6)烷基-SO2-NH-、氨基(C＝O)-、氨基SO2-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-NH-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、苯基-(C＝O)-NH-、苯基-(C＝O)-[((C1-C6)烷基)-N]-、(C1-C6)烷基-(C＝O)-、苯基-(C＝O)-、(C5-C10)雜芳基-(C＝O)-、(C5-C10)雜環(huán)基-(C＝O)-、環(huán)烷基-(C＝O)-、HO-(C＝O)-、(C1-C6)烷基-O-(C＝O)-、H2N(C＝O)-、(C1-C6)烷基-NH-(C＝O)-、((C1-C6)烷基)2-N-(C＝O)-、苯基-NH-(C＝O)-、苯基-[((C1-C6)烷基)-N]-(C＝O)-、(C5-C10)雜芳基-NH-(C＝O)-、(C5-C10)雜環(huán)基-NH-(C＝O)-、(C3-C10)環(huán)烷基-NH-(C＝O)-和(C1-C6)烷基-(C＝O)-O-；其中作為R4的烷基、鏈烯基、炔基、苯基、雜芳基、雜環(huán)基、環(huán)烷基、烷氧基、苯氧基和氨基任選被至少一個獨立地選自以下的取代基取代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烷氧基、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代、H2N-、Ph(CH2)1-6-NH-和(C1-C6)烷基NH-。
2.權利要求1的化合物，其中R1是 ，或
3.權利要求1的化合物，其中R1是 或
4.權利要求1的化合物，其中R1是 或
5.權利要求1的化合物，其中R1是 ，或
6.權利要求1的化合物，其中R1是 ，或
7.權利要求1的化合物，其中R1是 或
8.權利要求1的化合物，其中R1是 或
9.權利要求1的化合物，其中X是O；s是1或2；R3是氫或(C1-C6)烷基；且R4是H、(C1-C6)烷基或(C3-C10)環(huán)烷基。
10.權利要求1的化合物，其中X是S；s是1或2；R3是氫或(C1-C6)烷基；且R4是H、(C1-C6)烷基或(C3-C10)環(huán)烷基。
11.包含權利要求1的化合物和可藥用載體的藥物組合物。
12.預防或治療動物和人的TGF相關性疾病狀態(tài)的方法，其包括向患有TGF相關性疾病狀態(tài)的動物或人施用治療有效量的權利要求1的化合物。
13.權利要求12的方法，其中所述TGF相關性疾病狀態(tài)選自癌癥、腎小球腎炎、糖尿病性腎病、肝纖維化、肺纖維化、內(nèi)膜增生和再狹窄、硬皮病以及皮膚瘢疤形成。
全文摘要
本發(fā)明描述了新的異噻唑和異噁唑化合物、包括其衍生物、制備它們的中間體、含有它們的藥物組合物和它們的醫(yī)藥用途。本發(fā)明的化合物是轉(zhuǎn)化生長因子(“TGF”)－β信號通路的強抑制劑。它們可用于治療各種TGF相關性疾病狀態(tài)、包括例如癌癥和纖維化疾病。
文檔編號C07D471/04GK1681809SQ03822204
公開日2005年10月12日 申請日期2003年9月12日 優(yōu)先權日2002年9月18日
發(fā)明者L·C·布倫貝格, M·J·明希霍夫 申請人:輝瑞產(chǎn)品公司