專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療肺癌的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物，特別涉及用于治療肺癌的中藥組合物，同時(shí)涉及該組合物的制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
肺癌是最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。近半個(gè)世紀(jì)來(lái)許多國(guó)家和地區(qū)肺癌的發(fā)病率和死亡事都在逐年增加，在男性公民中尤為明顯。本病病因目前尚未完全明確，但是根據(jù)流行病學(xué)資料表明，本病與吸煙、大氣污染和某些職業(yè)性因子如石棉、砷、鉻、瀝青及某些放射性物質(zhì)有密切關(guān)系，內(nèi)分泌紊亂可能超綜合作用?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)本病主要采用手術(shù)、放療和化療等方法，手術(shù)切除是各種治療方法中療效最佳的一種，然而，大約90％的肺癌病人在確診時(shí)已無(wú)手術(shù)條件，在可手術(shù)治療的20％病例中，五年生存率也要下降，后期也要復(fù)發(fā)，五年生存率很低。中醫(yī)是中國(guó)幾千年傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的寶貴財(cái)富，在現(xiàn)代科技條件下，發(fā)掘、研究，利用中醫(yī)方法，研制利用中藥治療肺癌，不僅必需而且可能。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于公開(kāi)一種新的治療肺癌的中藥組合物；本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開(kāi)制備一種新的治療肺癌中藥組合物的方法；本發(fā)明目的還在于公開(kāi)一種新的中藥組合物的質(zhì)量控制方法。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比如下(按重量份)熟大黃180-350重量份急性子180-400重量份 水蛭80-280重量份全 蝎30-150重量份 蜈 蚣30-150重量份細(xì)辛30-150重量份牡 蠣450-700重量份瓜 萎150-350重量份 人參100-300重量份補(bǔ)骨脂150-350重量份金錢(qián)白花蛇10-100重量份。
本發(fā)明藥物組合物的原料藥組成及配比優(yōu)選如下(按重量份)熟大黃210-270重量份急性子210-270重量份 水蛭100-150重量份全 蝎40-80重量份 蜈蚣40-80重量份 細(xì)辛40-80重量份牡蠣500-580重量份 瓜 萎200-280重量份人參140-200重量份補(bǔ)骨脂200-260重量份 金錢(qián)白花蛇10-60重量份。
本發(fā)明藥物還可加入常規(guī)的藥物賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐劑、著色劑等。
本藥物組合物的制備方法金錢(qián)白花蛇粉碎成細(xì)粉備用；人參、補(bǔ)骨脂加60-90％乙醇，浸泡0.5-1.5小時(shí)后，加熱回流1.5-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至55-65℃下相對(duì)密度重1.20-1.25，備用，藥渣與余下的除金錢(qián)白花蛇之外的熟大黃等八味，加水煎煮3次，第一次0.5-1、5小時(shí)，第二，三次分別為0.3-1小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至55-65℃下相對(duì)密度1.20-1.25，與上述濃縮液混合均勻，加入金錢(qián)白花蛇細(xì)粉，最后經(jīng)過(guò)常規(guī)工序直接或加入藥學(xué)上可接受的賦型劑或者增溶劑制成臨床可接受的劑型，如膠囊、片劑、口服液體制劑、顆粒劑等，優(yōu)選膠囊劑。
本組合物制成藥劑的質(zhì)量控制方法包括鑒別和/或含量測(cè)定。
鑒別方法包括下列方法中的一種和/或幾種a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇15-30ml浸漬0.8-1.5小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水使溶解，再加鹽酸，置水浴上加熱25-35分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次15-25ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在25～85℃下以14-16∶4-6∶0.5-1.5比例的石油醚-甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約2ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7-9∶1-3的正己烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出；晾干，噴以8-12％氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁0.5-1.5g，拌勻、蒸干，加于中性氧化鋁柱(100～220目，5g，內(nèi)徑9～10mm)的上部，用30-50％甲醇50-70ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液；另取人參皂甙Rg1、Re、Rb1，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60-75∶30-40∶8-12氧仿-甲醇-水8-15℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90-110℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測(cè)定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-用磷酸調(diào)PH為3.00的0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，流動(dòng)相組成比例為70-90∶15-25，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱(chēng)取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流25-40分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物制劑每單位量含大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.050-0.070mg。
所述每單位量是指相當(dāng)原藥材20g的成品藥劑量。
本發(fā)明組合物治療肺癌具有能抑制腫瘤生長(zhǎng)、抗轉(zhuǎn)移、增強(qiáng)免疫功能的作用；該組合物毒性甚小，臨床應(yīng)用安全可靠，本發(fā)明組合物制備方法先進(jìn)，有效成份得到充分釋放。
下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。下列材料與儀器適用于實(shí)施例1-4。
1.藥物本組合物制劑瘀毒清(YDQ膠囊)主要成份為熟大黃，水蛭，瓜萎，蜈蚣，全蝎，牡蠣，人參等，經(jīng)水煎、濃縮，干燥而成干粉，每克干粉相當(dāng)于5克生藥，全部試驗(yàn)均按干粉計(jì)算給藥量。同北京東亞傳統(tǒng)醫(yī)藥研究開(kāi)發(fā)中心提供。批號(hào)971212。參蓮膠囊吉林省通化生化制藥廠(chǎng)生產(chǎn)，批號(hào)96001；順氨氯鉑(CDDP)濟(jì)南齊魯制藥廠(chǎng)生產(chǎn)，批號(hào)Q1014。環(huán)磷酰胺(cy)上海第十二制藥廠(chǎng)生產(chǎn)，批號(hào)940120。
2.動(dòng)物選用符合等級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)要求的SPF三級(jí)裸鼠，近交系純種動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。三級(jí)K.M種小鼠，質(zhì)量合格證京動(dòng)管質(zhì)字(1994)第079號(hào)；三級(jí)C57BL/6J小鼠，質(zhì)量合格證京動(dòng)管質(zhì)字(1994)第075號(hào)；三級(jí)BALB/c小鼠，質(zhì)量合格證京動(dòng)管質(zhì)字(1994)第074號(hào)；三級(jí)BALB/c pi-nu裸鼠，質(zhì)量合格證京動(dòng)管質(zhì)字(1994)第074號(hào)。小鼠體重均為18～22g，雌雄兼用，同一批試驗(yàn)用同一性別，由中國(guó)藥品生物制品檢定所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育中心供應(yīng)。
3.瘤種Lewis肺癌、人肺腺癌LAX-83，肝癌H22瘤株均為中國(guó)藥品生物制品檢定所藥理室傳代保存。
4.儀器血球計(jì)數(shù)儀(PC604型)，經(jīng)計(jì)量認(rèn)證合格，北京埃爾瑪產(chǎn)品。60Co照射條件軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放別醫(yī)學(xué)研究所鉆源室照射。
實(shí)驗(yàn)例1本組合物制劑(YDQ膠囊)抑瘤試驗(yàn)根據(jù)《新藥審批辦法》有關(guān)規(guī)定，按照國(guó)內(nèi)《抗腫瘤藥物篩選規(guī)程》規(guī)定方法，即按1∶3的比例以無(wú)菌生理鹽水稀釋成腫瘤細(xì)胞懸液，以0.2ml給小鼠皮下接種后，24小時(shí)后開(kāi)始灌胃給藥。實(shí)體瘤觀(guān)察14天，人肺癌裸鼠移植模型觀(guān)察24火，試驗(yàn)到期后，解剖實(shí)體瘤并稱(chēng)重，按平均瘤重計(jì)算瘤重抑制率。
YDQ膠囊設(shè)三個(gè)劑量組，選用lg/kg(相當(dāng)于人用劑量1.56倍)為低劑量組，2g/kg(相當(dāng)于人用劑量的3.1倍)為中劑量組，4g/kg(相當(dāng)于人用劑量的6.2倍)為高劑量組。CDDP，(3mg/Kg)和參蓮膠(4g/Kg)為陽(yáng)性藥.除CDDP外，其它各組給藥方法均為灌胃給藥。荷瘤對(duì)照組給等體積溶劑，每天一次，連續(xù)7天，停藥后觀(guān)察7天后解剖。計(jì)算各給藥組的瘤重抑制率。
1.1對(duì)Lewis肺癌的抑瘤作用按上述方法分組給藥，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三批，三批結(jié)果均表明察瘀毒清膠囊對(duì)C57BL、6J小鼠移植Lewis肺癌有明顯抑瘤作用。1g/kg組的瘤重抑制率三次結(jié)果分別為37.2％，26.1％和34.5％，2g/kg組的瘤重抑制率為41.9％，38.5％和48.7％，4g/kg組的瘤重抑制率為43.2％和52.6％。見(jiàn)表1-1，與參蓮膠囊比較抑瘤作用相當(dāng)。
表1-1 YDQ膠囊對(duì)小鼠Lewis肺癌的抑制作用組別鼠數(shù)體重(克) 瘤重(克) 瘤重 P值(始/終) (始 終) (x±SD) 抑制率(％)對(duì)照組 10/1017.9±0.420.9±1.41.48±0.54 ---- ----CDDP 10/1018.1±0.817.5±1.30.62±0.18 58.1 ＜0.01參蓮膠囊 10/1018.3±0.821.0±1.20.95±0.27 35.8 ＜0.05治療組1g/kg 10/1017.7±0.320.5±1.20.93±0.26 37.2 ＜0.012g/kg 10/1018.6±0.920.1±1.00.86±0.29 41.9 ＜0.014g/kg 10/1018.5±0.719.1±1.10.84±0.18 43.2 ＜0.01對(duì)照組 10/1018.4±0.721.6±1.72.18±1.00 ---- ----CDDP 10/1018.2±0.818.6±1.10.88±0.31 59.6 ＜0.0.1參蓮膠囊 10/1017.9±0.420.1±1.11.35±0.42 38.1 ＜0.05治療組1g/kg 10/1018.3±0.820.8±1.71.61±0.82 26.1 ＞0.052g/kg 10/1018.2±0.821.0±0.71.34±0.61 38.5 ＜0.054g/kg 10/1018.4±1.119.9±0.91.28±0.56 41.3 ＜0.05對(duì)照組 10/1018.7±0.622.4±1.52.32±0.92 ---- ----CDDP 10/1019.1±0.719.2±0.80.81±0.32 65.1 ＜0.01參蓮膠囊 10/1019.1±0.820.1±2.11.35±0.39 41.8 ＜0.01治療組1g/kg 10/1019.5±0.821.1±1.51.52±0.57 34.5 ＜0.052g/kg 10/1019.6±0.921.6±1.01.19±0.65 48.7 ＜0.014g/kg 10/1019.8±1.122.2±1.41.10±0.39 52.6 ＜0.01t測(cè)驗(yàn)各給藥組平均瘤重與對(duì)照組平均瘤重比較1.2對(duì)人肺腺癌LAX-83裸鼠移植模型的抑瘤作用按茁述方法稠成細(xì)胞懸液，給每只裸鼠右腋部下接種0.2ml，在移植腫瘤7天后，肉眼可見(jiàn)小米粒大小的瘤體，經(jīng)挑選后。將長(zhǎng)瘤裸鼠隨機(jī)分組。每組8只，灌胃給藥，每天一次，連續(xù)7天。停藥后觀(guān)察17天，解剖瘤體并稱(chēng)重，計(jì)算瘤重抑制率。實(shí)驗(yàn)重復(fù)三批。結(jié)果表明，YDQ膠囊對(duì)人肺腺癌LAX-83裸鼠移植模型有明顯抑瘤作用。1g/kg組的瘤重抑制率三次結(jié)果分別為16.7％、30.8％t和24.8％；2g/kg組的瘤重抑制率為34.3％、35.5和34.1％；4g/kg組的瘤重抑制率為38.1％、37.4％和41.1％。見(jiàn)表1-2，與參蓮膠囊比較抑瘤作用相當(dāng)。
表1-2 YDQ膠囊對(duì)人肺腺癌LAX-83移植裸鼠模型的抑制作用組別 鼠數(shù) 體重(克) 瘤重(克) 瘤重 P值(始/終) (始 終) (x±SD)抑制率(％)對(duì)照組 8/8 22.5±1.324.9±1.22.10±0.50--------CDDP8/8 23.4±2.220.1±1.80.72±0.1565.7 ＜0.01參蓮膠囊8/8 21.8±1.522.5±1.41.36±0.6135.2 ＜0.05治療組1g/kg 8/8 21.4±1.223.8±1.61.75±0.4316.7 ＞0.052g/kg 8/8 20.9±0.722.8±2.01.38±0.3934.3 ＜0.014g/kg 8/8 20.9±1.422.9±1.91.30±0.4338.1 ＜0.01對(duì)照組 8/8 21.0±1.322.3±2.12.11±0.36--------CDDP8/8 20.3±1.419.4±0.70.82±0.3961.6 ＜0.01參蓮膠囊8/8 20.2±1.320.9±2.61.34±0.5136.5 ＜0.01治療組1g/kg 8/8 19.4±0.920.9±0.51.46±0.4330.8 ＜0.012g/kg 8/8 20.7±1.321.3±0.61.36±0.3735.5 ＜0.014g/kg 8/8 20.8±1.522.2±2.41.32±0.4937.4 ＜0.01對(duì)照組 8/8 20.8±1.022.2±1.72.14±0.33--------CDDP8/8 20.1±1.118.9±0.60.82±0.3561.7 ＜0.01參蓮膠囊8/8 19.8±1.321.8±1.61.38±0.5035.5 ＜0.01治療組1g/kg 8/8 19.7±0.921.9±1.71.61±0.5124.8 ＜0.052g/kg 8/8 19.5±1.422.6±1.01.41±0.3534.1 ＜0.014g/kg 8/8 19.9±0.923.3±1.81.26±0.3941.1 ＜0.01t測(cè)驗(yàn)各給藥組平均瘤重與對(duì)照組平均瘤重比較1.3對(duì)Lewis肺瘤的抗轉(zhuǎn)稱(chēng)作用按前述方法制成癌細(xì)胞懸液。于每只C57 BL/6J鼠左后腿皮下接種0.2ml，24小時(shí)開(kāi)始給藥。連續(xù)7天，第八大行截肢術(shù)，切除原發(fā)灶，延長(zhǎng)已肺轉(zhuǎn)移鼠的生命，第25天解剖取腫，經(jīng)固定處理計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)移灶數(shù)。按腫瘤抑制率＝(C-T)/C×100公式計(jì)算抗轉(zhuǎn)移率。試驗(yàn)重復(fù)二批結(jié)果表明YDQ膠囊對(duì)Lewis肺癌具有抗轉(zhuǎn)移作用。1g/kg組的抗轉(zhuǎn)移率為24.8％和25.5％g/kg組的抗轉(zhuǎn)移率為45.1％和44.0％；4g/kg組的抗轉(zhuǎn)移率為48.9％和53.7％。見(jiàn)表1-3。
表1-3YDQ 囊對(duì)小鼠Lewis肺癌的抗轉(zhuǎn)移作用組別鼠數(shù) 瘤重(克)腫瘤抑制率 肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)(個(gè)) 抗轉(zhuǎn)移率P值(始/終)(x±SD)(％) (x±SD) (％)對(duì)照組 10/102.24±0.65 ---- 13.3±6.7 ---- ----CDDP10/9 0.76±0.17 66.1**3.0±1.6 77.4 ＜0.01參蓮膠囊10/101.45±0.72 35.3*8.2±3.0 38.3 ＜0.05治療組1g/kg 10/102.07±0.43 7.8 10.0±5.124.8 ＜0.052g/kg 10/101.31±0.46 41.5**7.3±3.0 45.1 ＜0.054g/kg 10/101.11±0.30 50.4**6.8±4.5 48.9 ＜0.05對(duì)照組 10/102.53±0.20 ---- 13.4±4.8---- ----CDDP10/100.89±0.26 64.8**3.1±1.9 76.9 ＜0.01參蓮膠囊10/101.50±0.59 40.7**9.8±3.3 30.6 ＜0.05治療組1g/kg 10/102.20±0.20 13.0**710.0±4.1 25.4 ＞0.052g/kg 10/101.64±0.70 35.2**7.5±3.5 44.0 ＜0.014g/kg 10/101.40±0.57 44.5**6.2±2.9 53.7 ＜0.01*P＜0.05**p＜0.01t測(cè)驗(yàn)，各給藥組平均肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)與對(duì)照組平均肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)比較實(shí)驗(yàn)例2本組合物制劑(YDQ膠囊)對(duì)增強(qiáng)荷瘤鼠機(jī)體免疫功能的影響2.1 重對(duì)荷瘤鼠血清溶菌酶含量的影響實(shí)驗(yàn)用小鼠Lewis肺癌。選生長(zhǎng)良好的瘤種按1∶3制成瘤細(xì)胞懸液，給每只C5 BL/6J小鼠右腿皮下接種0.2ml作抑瘤試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，采血分離血清，以微球菌制成菌體的瓊脂板。用前在板上打孔?？讖綖?mm，孔中加入標(biāo)準(zhǔn)溶菌酶10μl，37℃保溫一定時(shí)間，測(cè)量溶菌環(huán)直徑。繪制半對(duì)數(shù)檣準(zhǔn)曲線(xiàn)，求出血清中溶菌酶含量。試驗(yàn)結(jié)果表明.YDQ膠囊對(duì)Lewis肺癌荷瘤鼠具有活化單核巨噬細(xì)胞功能，增加荷瘤鼠血清溶菌酶含量。試驗(yàn)重復(fù)二批YDQ膠囊低、中、高三個(gè)劑量組的血清溶菌釀含量分別為34.4g/ml 36.5μg/ml 39.2μg/ml和32.7μg/ml、36.0μg/ml和38.2μg/ml。見(jiàn)表2-1與，參蓮膠囊比較，未見(jiàn)明顯差別。
表2-1YDQ膠囊對(duì)小鼠Lewis肺癌荷瘤鼠血清溶菌酶含量的影響組別鼠數(shù) 瘤重(克)腫瘤抑制率 溶菌酶含量 P值(始/終) (x±SD) (％) (μg/ml)對(duì)照組 10/101.48±0.54---- 26.2±3.7 ----CDDP 10/100.62±0.1858.7**25.4±6.9＞0.05參蓮膠囊 10/100.95±0.2735.8*34.8±7.4＜0.01治療組1g/kg 10/100.93±0.2637.2**34.4±5.2＜0.012g/kg 10/100.86±0.2942.1**36.5±8.6＜0.014g/kg 10/100.84±0.1843.5**39.2±7.5＜0.01對(duì)照組 10/102.32±0.92---- 23.5±4.7 ----CDDP 10/100.81±0.3265.1**24.7±4.6＞0.05參蓮膠囊 10/101.35±0.3941.8**32.8±5.8＜0.01治療組1g/kg 10/101.52±0.5734.5*32.7±5.8＜0.012g/kg 10/101.19±0.6548.7**36.0±5.2＜0.014g/kg 10/101.10±0.3952.6**38.2±7.7＜0.01*P＜0.05**p＜0.01t測(cè)驗(yàn)，各給藥組平均溶菌酶含量與對(duì)照組平均溶菌酶含量比較2.2對(duì)荷瘤鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(PTH)的影響試驗(yàn)用小鼠肝癌H22實(shí)體型瘤譜，選生長(zhǎng)良好的瘤種按1∶3制成瘤細(xì)胞懸液，給每只BALB/C小鼠皮下接種0.2ml。按前述方法分組給藥。另設(shè)一組正常小鼠為脾指數(shù)對(duì)照。在給藥同一天。除正常鼠組以外。將各組小鼠用1％二硝基氟苯(DNFB)10μl于腹部皮下致敏。7天后再用1％二硝基氟苯(DNFB)10μl于每只小鼠左足趾部皮下攻擊。右足趾用溶媒10μl作對(duì)照，24小時(shí)后取左、右足稱(chēng)重，以足腫脹度表示反應(yīng)強(qiáng)弱。同時(shí)解剖荷蘭鼠。取脾和瘤體稱(chēng)重。計(jì)算脾指數(shù)和瘤重抑制率。以足重差。脾指數(shù)。瘤重抑制率三項(xiàng)指標(biāo)觀(guān)察YDQ膠曩對(duì)致敏性T淋巴細(xì)胞的影響。試驗(yàn)重復(fù)2次，2次結(jié)果均表明。YDQ膠囊對(duì)T細(xì)胞介導(dǎo)的遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)具有免疫增強(qiáng)作用。
YDQ膠囊各給藥組的胖指數(shù)與正常鼠組比較明顯增高、足重差加大、遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)增強(qiáng)。并能抑制腫瘤生長(zhǎng)。見(jiàn)表2-2，與參蓮膠囊比較，未見(jiàn)明顯差異。
表2-2 YDQ膠囊對(duì)肝癌H22荷瘤鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(PTH)的影響組別 鼠數(shù) 脾指數(shù) 瘤重(克) 腫瘤抑制率 足重差(mg)(始/終) (mg/20g體重) (x±SD) (％) (x±SD)正常鼠 10/101.00 -------- ----荷瘤鼠 10/102.09**1.10±0.30---- ----致敏對(duì)照10/102.21**0.83±0.1224.5 52.5±17.5參蓮膠囊10/102.13**0.77±0.1330.3 76.8±23.6*1g/kg 10/102.55**0.75±0.1331.8 92.6±26.9**2g/kg 10/102.58**0.69±0.0837.3 84.5±18.6**4g/kg 10/102.49**0.73±0.0833.6 152.8±36.3**正常鼠 10/101.00 -------- ----荷瘤鼠 10/102.15**1.15±0.37---- ----致敏對(duì)照10/9 2.16**0.95±0.2117.4 74.0±31.7參蓮膠囊10/101.92**0.69±0.1440.0*102.0±36.01g/kg 10/102.21**0.76±0.1333.9*106.9±43.42g/kg 10/102.19**0.68±0.1140.9**122.2±47.3**4g/kg 10/102.48**0.67±0.1141.7**128.2±23.0***p＜0.05**p＜0.01t測(cè)驗(yàn)，各給藥組平均足重量差比較2.3對(duì)產(chǎn)生腫瘤壞死因子的影響腫瘤壞死因子(RNF)是油激活巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子，其抗腫瘤作用表現(xiàn)為直接的細(xì)胞毒作用(Cytotoxicity)[2]。YDQ膠囊按前述方法分組給藥，用厭氧棒狀菌苗(cp)為陽(yáng)性對(duì)照藥，0.5g/ml ip一次給藥事7天后，停藥24小時(shí)后給各組每只鼠iv LPS 10mg/0.2ml小時(shí)后采血，分離血清，檢測(cè)TNF活性，解剖小鼠取肺和瘤體，分別計(jì)算脾指數(shù)和腫瘤抑制率。
TNF活性檢測(cè)用微量細(xì)胞毒試驗(yàn)法，將傳代7天生長(zhǎng)旺盛的S180腫瘤細(xì)胞制成靶細(xì)胞，用RPNH 1640營(yíng)養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞數(shù)為4×102/ml，于96孔板上每孔加細(xì)胞懸液100ul.再加待檢血清500l，混勻，37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí)。用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)200個(gè)腫瘤細(xì)胞中死細(xì)胞數(shù)。按給藥組死細(xì)胞數(shù)/對(duì)照組死細(xì)胞數(shù)計(jì)算直接細(xì)胞毒活性指數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)二批，結(jié)果表明經(jīng)給藥7天YDQ膠囊小鼠，單核巨噬細(xì)胞功能增強(qiáng)，脾指數(shù)增高，能抑制腫瘤生長(zhǎng)。再靜脈注射誘出劑LPS后，血清中TNF活性明顯增強(qiáng)，1g/kg組的直接細(xì)胞毒指數(shù)為2.18和2.09；2g/kg組為2.36和2.05；4g/kg組為2.26和2.12。
見(jiàn)表2-3，與cP菌苗比較。未見(jiàn)明顯差異。
表2-3YDQ膠囊對(duì)增強(qiáng)巨嗜細(xì)胞功能產(chǎn)生腫瘤壞死因子的影響組別鼠數(shù)(只) 脾重(mg) 脾指數(shù)死細(xì)胞數(shù)直接細(xì)胞P值(始/終)(mg/20體重) (％)(％) 毒指數(shù)對(duì)照組 10/10 125.12±15.3---- 21.2±2.0---- ----CP菌苗 10/10 245.5±21.6 1.96*55.6±3.42.62 ＜0.01YDQ膠囊1g/kg10/10 206.6±28.2 1.65*46.±10.52.18 ＜0.012g/kg10/10 196.4±25.3 1.57*50.1±7.32.364g/kg10/10 211.0±21.2 1.69*48.6±5.42.29對(duì)照組 10/10 137.6±19.2 ---- 22.1±2.7----CP菌苗 10/10 240.6±58.1 1.75*53.7±4.32.43YDQ膠囊1g/kg10/10 200.6±36.5 1.46*46.2±1.42.092g/kg10/10 227.8±33.5 1.66*45.2±3.52.054g/kg10/10 202.7±27.1 1.47*46.8±5.7*P＜0.01t測(cè)驗(yàn)各給藥組平均死細(xì)胞數(shù)與對(duì)照組平均死細(xì)胞數(shù)比實(shí)驗(yàn)例3本發(fā)明組合物制劑(YDQ膠囊)的協(xié)同增效作用3.1與CDDP合用時(shí)對(duì)肺癌模型的增效作用試驗(yàn)用的化療藥順氨氯鉑(CDDP)3mg/kg(相當(dāng)1/5 LD50)ip，隔日給藥，連續(xù)4次，為治療高劑量0.6mg/kg(相當(dāng)1/25 LD50)ip。連續(xù)4次，為治療低劑量。低劑量(CDDP加用YDQ膠囊中或高二個(gè)劑量組。設(shè)參蓮膠囊陽(yáng)性對(duì)照組，荷瘤對(duì)照組。按前述方法用Lewis腫瘤和人肺腺癌LAX-83兩個(gè)瘤株模型，進(jìn)行組間的對(duì)比觀(guān)察，結(jié)果表明對(duì)Lewis腫癌。CDDP高劑量組瘤重抑制率為62.4％，低劑量組為20.0％。當(dāng)YDQ膠囊中、高2個(gè)劑量組分別與低劑量組CDDP合用時(shí)，其瘤重抑制率平均可達(dá)40％以上，與低劑量CDDP比較可增效2倍。對(duì)人肺腺癌LAX-83模型，CDDP高劑量組的瘤重抑制率為61.4％低劑量組為15.0％。當(dāng)YDQ膠囊中、高2個(gè)劑量分別與低劑量CDDP合用時(shí)，其腫瘤抑制率可達(dá)47.6～54.1％。與低劑量CDDP相比可增效三倍以上。見(jiàn)表3-1，照片3-1。提示YDQ膠囊與小劑量CDDP合用具有明顯增效作用。但YDQ膠囊與小劑量CDDP合用。分別與單一使用YDQ膠囊及單一使用參蓮膠囊比較，均來(lái)見(jiàn)明顯差異。
表3-1YDQ膠囊與CDDP合用時(shí)對(duì)肺癌模型的增效作用體重(克) 瘤重抑劑量鼠數(shù)(只)瘤重(克)腫瘤模型 組別 制率 P值(mg/kg) (始/終) (始 終)(x±SD)(％)對(duì)照組 同溶劑 10/1020.4±1.4 23.2±1.51.65±0.26---- ----Lewis CDDP3×4 10/1020.3±0.7 16.9±1.20.62±0.1862.4＜0.01肺癌0.6×4 10/1019.7±1.0 19.5±1.41.32±0.5220.2＞0.050.6×4+4000CDDP參蓮10/1020.5±0.7 22.3±2.31.10±0.4633.3＜0.01×70.6×4+2000CDDP+YDQ10/1019.9±0.8 22.0±2.90.98±0.3440.6＜0.01×70.6×4+400010/1019.0±0.9 21.3±1.20.93±0.3743.6＜0.01×7對(duì)照組 同溶劑 8/8 21.0±0.9 24.5±1.22.46±0.36---- ----CDDP3×4 8/7 20.4±1.6 19.8±1.90.95±0.4261.4＜0.01人部腺癌0.6×4 8/8 20.9±1.4 19.8±2.32.09±0.5015.0＞0.050.6×4+4000LAX-83 CDDP+參蓮8/8 21.0±1.1 22.7±2.11.30±0.53. 47.2＜0.05×70.6×4+2000CDDP+YDQ8/8 21.1±1.2 23.0±1.41.29±0.5647.6＜0.01×70.6×4+40008/8 19.9±1.5 23.3±1.91.13±0.4454.1＜0.01×7T檢驗(yàn)各給藥組平均瘤重與對(duì)照組平均瘤重比較3.2與60Co照射合用時(shí)對(duì)肺癌模型的增效作用試驗(yàn)用60Co倍量照射率為166.6倍量/分照射。治療劑量為4 Gy，一次性全身照射，動(dòng)物分組與造模方法同3.1項(xiàng)。結(jié)果表明，對(duì)Lewis肺癌模型，單獨(dú)4 Gy，照射劑量治療組的腫瘤抑制率為14.2％，當(dāng)瘀毒清膠囊與4 Gy用時(shí)，其腫瘤重抑制率可增高至63.9～66.2％，與單獨(dú)照射相比可增效4.5倍。對(duì)人肺腺癌LAX-83模型，單獨(dú)照射治療組的腫瘤抑制率為17.3％瘀毒清膠囊中、高劑理與照射合用時(shí)，其腫瘤制率可增高至49.2～49.7％。與單獨(dú)照射相比增效2.8倍。見(jiàn)表3-2，照片3-2。提示瘀清膠囊與照射治療合用有明顯增效作用。與參蓮膠囊比較，未見(jiàn)明顯差別。
表3-2YDQ膠囊與60Co輻射合用時(shí)對(duì)肺癌模型的增效作用劑量 鼠數(shù) 體重(克) 瘤重抑制腫瘤模 瘤重(克)組別(Gy+g/kg(只) (x±SD)率 P值型 ) (始/終) (始 終)(％)對(duì)照組 同溶劑 10/1018.9±0.9 23.2±2.62.19±0.27---- ----60Co照射4 GY 10/1019.8±1.3 19.1±2.11.88±0.4814.2＜0.01照射+參蓮4+4×7 10/1019.5±1.2 19.9±1.40.99±0.2454.8＜0.01lewis4+2×7 10/1018.5±1.3 20.1±1.00.79±0.2763.9＜0.01肺癌 照射+YDQ4+4×7 10/1019.1±0.9 20.4±2.10.74±0.3666.2＜0.01對(duì)照組 同溶劑 8/8 21.8±2.6 26.2±2.41.85±0.44---- ----60Co照射4 GY 8/5 20.2±1.4 19.1±1.7人肺腺照射+參蓮4+4×7 8/7 20.2±0.9 22.3.±3.0癌照射+YDQ 4+2×7 8/6 19.4±1.3 22.0±3.0LAX-834+4×7 8/7 19.5±1.0 22.1±2.3
T測(cè)驗(yàn)各給藥組藥前體重與給藥后體重比較實(shí)驗(yàn)例4本組合物制劑(YDQ膠囊)的減毒作用按照新藥(中藥)抗腫瘤藥效研究指南中規(guī)定方法，選用環(huán)磷酰胺(cy)、CDDP ip給藥和60Co照射使正常鼠，荷瘤鼠出現(xiàn)體重減輕、紅白細(xì)胞減少、骨髓有核細(xì)胞下降等特定毒副瓜，用YDQ膠囊以觀(guān)察對(duì)放、化療引起特定毒副瓜的減毒作用。
4.1對(duì)cy CDDP引起荷瘤鼠體重下降的影響試驗(yàn)用LewiS肺癌模型cy組為ip 100mg/kg×2d。YDQ膠囊為國(guó)，高2個(gè)劑量，在給予cy同時(shí)，口服YDQ膠囊，連續(xù)7天，停藥后24小時(shí)稱(chēng)各組小鼠體重。按3.1項(xiàng)方法分組。給藥。在觀(guān)察CDDP對(duì)Lewis肺癌、人肺腺癌兩個(gè)腫瘤模型增效作用的同時(shí)觀(guān)察對(duì)荷瘤鼠體重下降的影響。結(jié)果表明。cy、CDDP中毒模型組第8～14天體重下降3.1和0.2克。ip cy或CDDP同時(shí)口服YDQ膠囊組。體重增長(zhǎng)1.9和3.4克。見(jiàn)表4-1。提示YDQ膠囊對(duì)荷瘤鼠由cy、CDDP中毒所致體重下降有保護(hù)作用，與參蓮膠囊比較，未見(jiàn)明顯差異。
表4-1YDQ膠囊對(duì)cy，CDDP引起荷瘤鼠體重下降的影響腫瘤模組別 劑量 鼠數(shù)(只) 體重(克) 體重 P值型 (mg/kg) (始/終) (始終) 變化(克)對(duì)照組同溶劑10/1019.7±0.9 23.4±0.7 +3.7＜0.01Lewiscy100×210/1019.8±0.9 16.7±1.0 -3.1＜0.01肺癌 Cy+參蓮 100×2+4000×710/1019.1±1.0 20.5±1.5 +1.4＜0.05Cy+YDQ100×2+2000×710/1019.9±1.1 21.9±1.3 +2.0＜0.01100×2+4000×710/1019.2±0.9 22.4±1.5 +3.2＜0.01對(duì)照組同溶劑10/1020.4±1.4 23.3±1.5 +2.9＜0.01LewisCDDP 0.6×410/1019.7±1.0 19.5±1.4 -0.2＞0.05肺癌 CDDP+參蓮 100×2+4000×710/1020.5±0.7 22.3±2.3 +1.8＞0.05CDDP+YDQ 100×2+2000×710/1019.9±0.8 22.0±2.9 +2.1＜0.05100×2+4000×710/10198.0±0.921.3±1.2 -2.3＜0.01對(duì)照組同溶劑8/7 21.0±0.9 24.5±1.2 +3.5＜0.01人部腺 CDDP 0.6×48/8 20.9±1.4 19.8±2.3 -1.1＞0.05癌LAX83CDDP+參蓮100×2+4000×7 8/8 21.0±1.1 22.7±2.1 +0.7＞0.05CDDP+YDQ 100×2+2000×7 8/8 21.1±1.2 23.0±1.4 +1.9＜0.01100×2+4000×7 8/8 19.9±1.5 23.3±1.9 +3.4＜0.01T測(cè)驗(yàn)各給藥組給藥前體重與給藥后體重比較4.2對(duì)cy引起荷瘤鼠外周血象變化的影響按4.1項(xiàng)所述方法分組。給藥。試驗(yàn)結(jié)果表明。荷瘤鼠組、cy中毒模型鼠，WBC，減少當(dāng)ip cy同時(shí)口服瘀毒清膠囊WBC明顯升高，見(jiàn)表4-2。提示瘀毒清膠囊對(duì)荷瘤鼠同cy所致，骨髓血細(xì)胞腡傷有保護(hù)作用。與參蓮膠囊比較未見(jiàn)明顯差異。
表4-2YDQ膠囊對(duì)cy引起荷瘤鼠外周血毒性反應(yīng)的影響組別 劑量 鼠數(shù)(只)WBC RBCHGBHCT(mg/kg) (始/終)(109/L) (1012/L) (g/d1) (％)對(duì)照組 同溶劑 10/10 7.6±1.4 4.44±0.39 24.9±4.8 29.7±4.6Cy 100×2 10/10 7.8±1.3 3.85±0.40▲▲21.2±4.1▲23.6±1.7▲▲Cy+參蓮 100×2+4000×7 10/10 12.1±1.1**3.91±0.15 15.0±1.3**25.9±1.8*Cy+YDQ 100×2+2000×7 10/10 14.5±1.7**3.64±0.31 14.5±2.4**24.0±2.3100×2+4000×7 10/10 15.1±1.3**4.04±0.10 13.8±1.4**22.6±1.5▲t測(cè)驗(yàn)與對(duì)照組比較p＜0. 05 *t測(cè)驗(yàn)與cy組比較p＜0.05▲▲t測(cè)驗(yàn)與對(duì)照組比較p＜0.01**t測(cè)驗(yàn)與cy組比較p＜0.014.3對(duì)cy引起荷瘤鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)減少的影響按4.1項(xiàng)所述方法分組。給藥，在試驗(yàn)到期后.解剖取每只鼠股骨，沖出骨髓.計(jì)數(shù)每根股骨有核細(xì)胞數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果表明.cy中毒模型組骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯下降。當(dāng)ip注射cy同時(shí)瘀毒清膠囊。骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯升高，見(jiàn)表4-3。提示瘀毒清膠囊對(duì)正常鼠由cy所致有核細(xì)胞數(shù)下降有保護(hù)作用。參蓮膠囊亦有保護(hù)作用。
表4-3YDQ膠囊對(duì)cy抑制小鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)下降的影響組別 劑量 鼠數(shù)(只)骨髓有核細(xì)胞數(shù)p值(mg/kg) (始/終)(個(gè)×104/根股骨)(x±SD)對(duì)照組 同溶劑10/10 1227.5±174.6------Cy 100×210/10 842.5±130.2▲＜0.01Cy+參蓮 100×2+4000×710/10 1235.0±198.3*＜0.01Cy+YDQ 100×2+2000×710/10 1300.0±212.5*＜0.01100×2+4000×710/10 1430.0±148.2*＜0.01▲t測(cè)驗(yàn)與對(duì)照組比較*t測(cè)驗(yàn)與cy組比較4.4對(duì)60Co引起荷瘤鼠體重下降的影響試驗(yàn)用昆明小鼠。用60CO 6Gy亞致死劑量全身照射，瘀毒清膠囊為中，高2個(gè)劑量組。
按3.2項(xiàng)所述方法分組給藥，在照小時(shí)開(kāi)始口服瘀毒清膠囊，連續(xù)7天，停藥后24小時(shí)稱(chēng)各組小鼠重。觀(guān)察毒清膠囊與60Co照射合用時(shí)對(duì)Lewis肺癌。人肺腺癌兩個(gè)腫瘤模型增效作用的同時(shí)觀(guān)察對(duì)荷瘤鼠體重下降的影響。結(jié)果表明。經(jīng)60Co 6Gy 4Gy全身照射的正常鼠和荷瘤治療鼠，第8～14天體重下降0.7～1.1克，在照射后2小時(shí)，口服瘀毒清膠囊的正常鼠和茶瘤治療鼠體重增長(zhǎng)1.3～4.2克，見(jiàn)表4-4。提示瘀毒清膠囊對(duì)正常鼠荷瘤同60Co照射所至體重下降有保護(hù)作用。與參蓮膠囊比較，未見(jiàn)明顯差異。
表4-4YDQ膠囊對(duì)60Co照射引起荷瘤鼠體重下降的影響腫瘤模型 組別 劑量 鼠數(shù)(只)體重(克) 體重變化p值(Gy+g/Kg) (始/終)(始 終)(克)昆明種 對(duì)照組同溶劑 10/1023.1±1.530.7±1.9+7.6＜0.01正常鼠60o照射 6GY10/1023.0±0.822.2±1.4-0.8＞0.05照射+參蓮 6+4×7 10/1022.8±1.424.5±1.9+1.7＜0.05照射+YDQ 6+2×7 10/1023.2±1.027.2±1.0+4.0＜0.016+4×7 10/1022.9±1.027.1±1.2+4.2＜0.01Lewis 對(duì)照組同溶劑 10/1018.9±0.923.2±2.6+4.3＜0.01肺癌60Co照射 4GY10/1019.8±1.319.1±2.4-0.7＞0.05照射+參蓮 4+4×7 10/1019.5±1.219.9±1.4+0.1＞0.05照射+YDQ 4+2×7 10/1018.5±13 20.1±1.0+1.6＜0.054+4×7 10/1019.1±0.920.4±2.1+1.3＞0.05人肺腺癌對(duì)照組同溶劑 8/8 21.8±2.626.2±2.4+4.4＜0.01LAX8360Co照射 4GY8/5 20.2±1.419.1±1.7-1.1＞0.05照射+參蓮 4+4×7 8/7 20.0±0.922.3±3.0+2.3＜0.05照射+YDQ 4+2×7 8/6 19.4±1.322.0±3.0+2.6＜0.054+4×7 8/7 19.5±1.022.1±2.3+2.6＜0.01t測(cè)驗(yàn)各給藥組給藥前體重與給藥后體重比較4.5對(duì)60Co照射引起正常鼠外周血毒性反應(yīng)的影響按4.4所述方法分組、給藥，試驗(yàn)結(jié)果表明，正常鼠經(jīng)60Co亞致死量照射后，WBC損傷非常嚴(yán)重，60Co照射模型組WBC為1.2×100/L，照射后口服瘀毒清膠囊高劑量組為2.6×100/L(p＜0.01)。見(jiàn)表4-5。提示瘀毒清膠囊對(duì)60Co照射引起小鼠WBC損傷有一定保護(hù)作用。
表4-5YDQ膠囊對(duì)60Co亞致死量照射引起正常鼠外周血毒性反應(yīng)的影響組別 劑量 鼠數(shù)(只) WBCRBCHGB HCT(Gy+g/Kg) (始/終) (1012/L) (1012/L) (g/dl) (％)正常鼠對(duì)照組 同溶劑 10/10 5.2±1.5 6.89±0.90 19.4±1.3 37.6±3.060Co照射 6GY10/10 1.2±0.7▲5.22±0.77▲14.4±0.7▲28.9±4.0▲照射+參蓮6+4×7 10/10 1.4±1.9 5.46±1.01 14.4±2.7 29.7±4.9照射+YDQ 6+2×7 10/10 1.4±0.4 6.18±0.68**18.2±1.2**33.4±3.1**6+4×7 10/10 2.6±2.0*5.47±1.21 18.4±0.8**30.4±5.4▲t測(cè)驗(yàn)與正常鼠比較p＜0.01*t測(cè)驗(yàn)與正常鼠比較p＜0.05**t測(cè)驗(yàn)與正常鼠比較p＜0.01
4.6對(duì)60Co照射引起正常鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)減少的影響按上述及4.4項(xiàng)所述方法分組，給藥，在試驗(yàn)到期后，解剖取每只鼠股骨，沖出骨髓，計(jì)數(shù)每根股骨有核細(xì)胞數(shù)，試驗(yàn)結(jié)果表明，60Co中毒模型組骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯下降。當(dāng)照射后口服YDQ膠囊，骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯升高，接近正常鼠的水平，見(jiàn)表4-6。提示YDQ膠囊對(duì)正常鼠同60Co所致有核細(xì)胞數(shù)下降有保護(hù)作用。參蓮膠囊亦有保護(hù)作用。
表4-6YDQ膠囊對(duì)60Co亞致死量照射引起正常鼠骨髓有核細(xì)胞數(shù)減少的影響組別 劑量 鼠數(shù)(只)骨髓有核細(xì)胞數(shù) p值(Gy+g/Kg) (始/終)(個(gè)×104/根股骨) (x±SD)正常鼠對(duì)照組同溶劑 10/10 186.3±16.8 -----60Co照射6GY 10/10 103.3±9.4▲＜0.01照射+參蓮 6+4×7 10/10 125.8±29.2*＜0.05照射+YDQ6+2×7 10/10 165.3±22.5*＜0.016+4×7 10/10 174.0±13.9*＜0.01▲t測(cè)驗(yàn)與正常鼠比較*t測(cè)驗(yàn)與正常鼠比較實(shí)驗(yàn)例5本發(fā)明組合物提取工藝研究實(shí)驗(yàn)1、人參和補(bǔ)骨脂的醇提工藝優(yōu)化影響提取效果的主要因素是乙醇濃度、溶媒量、提取時(shí)間和提取次數(shù)。以HPLC測(cè)定補(bǔ)骨脂素為指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來(lái)篩選其最佳提取工藝，以下交表L9(34)安排實(shí)驗(yàn)[2]。稱(chēng)取全方1/20的相應(yīng)醇提藥人參和補(bǔ)骨脂，按表5-1安排實(shí)驗(yàn)，回流提取，測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表5-2。
表5-1 醇提正交實(shí)驗(yàn)因素水平表因素水平A(乙醇濃度)(％)B(溶媒量)(倍) C(提取時(shí)間)(h) D(提取次數(shù))(次)1 95 10 332 858 223 756 11
5-2 醇提實(shí)驗(yàn)具體實(shí)施方案及結(jié)果表試驗(yàn)號(hào) 因子 補(bǔ)骨脂數(shù)含 浸膏收率ABCD 量(mg/g)(％)1 95 10 33 17.28 8.332 95 822 17.65 7.683 95 611 14.06 7.194 85 10 21 17.02 8.815 85 813 15.82 9.886 85 632 14.88 9.347 75 10 12 15.55 10.528 75 831 14.15 9.479 75 623 15.13 9.83K1 48.9949.8546.3148.23K2 47.7247.6249.8048.08K3 44.8344.0745.4345.23R1 4.16 5.78 4.37 3.00 以補(bǔ)骨脂索含量分析K1′ 23.2027.6627.1428.04K2′ 28.1227.0326.3227.54K3′ 29.8226.3627.5925.47R2 6.62 1.30 1.27 2.57 以浸膏收率分析結(jié)果的直觀(guān)分析按浸膏收率分析，影響浸膏收率因素的排列順序A＞D＞B＞C。然而，由極差R1的大小順序可知，對(duì)補(bǔ)骨脂素含量影響較大的是B和C，A和D則處于閃要地位。影響因素的排列順序?yàn)锽＞C＞A＞D，其最佳提取條件為A1B1C2D1(1)。結(jié)合工業(yè)化生產(chǎn)的安全及成本等，把乙醇濃度(A)調(diào)整為85％。另外，考慮到此二藥的醇提藥渣還要并入水提藥材一起再提取，為了節(jié)能、省時(shí)，因此，把提取次數(shù)(D)改為提取1次。綜合各種因素，調(diào)整后較佳提取條件為A2B1C2D3(H)，這樣補(bǔ)骨脂素含量和浸膏收率都較高。分別投料5批，對(duì)最佳提取條件I和較佳提取條件II進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5-3。
表5-3醇提取實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果表實(shí)驗(yàn)號(hào) 12345 X±SD補(bǔ)骨脂素含量(mg/g) I 16.1715.5015.3815.8115.9115.75±0.32II15.3315.6315.2215.4315.4715.42±0.16浸膏收率(％) I 7.28 6.72 7.33 7.51 6.88 7.14±0.33II 8.21 7.84 8.32 7.73 7.78 7.98±0.27表5-3結(jié)果表明，結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，采用較佳條件的驗(yàn)證結(jié)果與最佳條件的驗(yàn)證結(jié)果無(wú)顯著性差別，因此，該醇提工藝條件是最佳搭配，即將人參和補(bǔ)骨脂用10倍量85％的乙醇浸泡1h，熱回流2h，提取1次。
2、牡蠣對(duì)大黃有效成分提取的影響稱(chēng)取全方1/20的大黃各5份，另稱(chēng)取全方1/20的大黃和牡蠣各5份。分別加20倍水，浸泡1h，煎煮1h，測(cè)定大黃素含量，計(jì)算出100g大黃素的收率，結(jié)果見(jiàn)表5-4。
表5-4 大黃單煎(1)及與牡蠣合煎(H)的大黃素收率(％)實(shí)驗(yàn)號(hào) 12 3 4 5 X±SDI 0.120.100.080.090.110.10±0.016II 0.080.090.100.110.080.09±0.013由表5-4的結(jié)果可知牡蠣與大黃一起煎煮，對(duì)大黃有效成分的提取無(wú)顯著性影響。
3、水煎工藝的優(yōu)化影響中藥材水煎煮提取的主要因素有浸泡時(shí)間，用水量，煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為了合理有效地優(yōu)選這些工藝條件，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，按正交表L9(34)安排實(shí)驗(yàn)。以HPLC測(cè)定本方中大黃的有效成分大黃素為指標(biāo)，來(lái)篩選較優(yōu)的條件。稱(chēng)取全方1/20的水提藥材及醇提藥渣總重為100g，按表5-6安排實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行水煎煮提取。結(jié)果見(jiàn)表5-7。
表5-5水提正交實(shí)驗(yàn)因素水平表因素水平A(浸泡時(shí)間)(h)B(總加水量)(倍) C(總煎煮時(shí)間)(h) D(提取次數(shù))(次)1 1 101 12 2 152 23 3 203 3表5-6水提正交實(shí)驗(yàn)安排表實(shí)驗(yàn)號(hào)A(h) B(倍) C(h) D(次)1 1 10 1 12 1 15(8，7) 2(1，1) 23 1 20(8，6，6)3(2，0.5，0.5)34 2 20(8，6，6)2(1，0.5，0.5)35 2 15 3 16 2 20(12，8) 1(0.5，0.5) 27 3 10(6，4) 3(2，1) 28 3 15(6，5，4)1(0.5，0.25，0.25)39 3 20 2 1
表5-7水提正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析表因子 大黃素含量 浸膏收率試驗(yàn)號(hào)A B C D (mg/g) (％)11 1 1 10.56 7.2321 2 2 20.69 9.1831 3 3 30.80 10.8942 1 2 30.75 10.0652 2 3 10.49 8.9462 3 1 20.74 9.4973 1 3 20.66 9.0183 2 1 30.76 10.2593 3 2 10.64 8.92K1 2.051.972.061.69K2 1.981.942.082.09K3 2.062.181.952.31R1 0.080.240.130.62 以大黃素含量分析K1′ 27.30 26.30 26.97 25.09K2′ 28.49 28.37 28.16 27.68K3′ 28.18 29.30 28.84 31.20R2 1.193.001.876.11 以浸膏收率分析結(jié)果的直觀(guān)分析按浸膏收率分析，影響收膏收率最主要的因素是煎煮次數(shù)，其次是加水量和煎煮時(shí)間，其最佳搭配為A2B3C3D3。按大黃素含量分析，由極差R1的大小可知，影響因素的排列順序?yàn)镈＞B＞C＞A，其最佳提取工藝為A1B3C2D3(因?yàn)锳1的K值與A3幾乎相等，所以為了省時(shí)取A1)，而且，收膏率也較高，按此最佳條件分別投料5批，進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表5-8。
表5-8水提驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)號(hào) 12 345 x±SD大黃素含量(mg/g)0.71 0.730.74 0.70 0.75 0.73±0.021浸膏收率(％)10.8110.169.9810.9210.0810.39±0.44由此可見(jiàn)，此水提工藝最佳搭配。即將藥材浸泡1h，提取3次。第1次加8倍量的水，煎煮1h；第2和第3次分別加6倍量水，煎煮0.5h。
實(shí)驗(yàn)例6制劑工藝研究1.賦形劑及其用量的選擇由于純干浸膏粉吸濕性較強(qiáng)，若直接裝膠囊，則膠囊易碎裂，不利于藥品的儲(chǔ)存，故須加入適量輔料，制粒，干燥再填裝膠囊。以成粒情況及臨界相對(duì)濕度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)淀粉、糊精、乳糖及其用量進(jìn)行優(yōu)選，結(jié)果見(jiàn)表6-1。
表6-1輔料及其用量的選擇試驗(yàn)結(jié)果表實(shí)驗(yàn)號(hào) 干浸膏粉(g) 淀粉(g)糊精(g) 乳糖(g)成粒情況臨界相對(duì)濕度(％)1 50 20 0 0不能成粒 -2 50 30 0 0不能成粒 -3 50 40 0 0能成粒644 50 50 0 0能成粒725 50 0 200不能成粒 -6 50 0 300不能成粒 *7 50 0 400成粒好668 50 0 500成粒好739 50 0 0 20 不能成粒 -10 50 0 0 30 成粒好6111 50 0 0 40 成粒好6712 50 0 0 50 成粒好76由表6-1可知乳糖無(wú)吸濕性，成粒好，但價(jià)格太貴。而糊精易于制粒，成粒好，吸濕性低，故選擇糊精為賦形劑。按干浸膏粉∶糊精為1∶0.8加糊精及金錢(qián)白花蛇細(xì)粉，混勻，制粒。
2.干燥時(shí)間與顆粒水分的關(guān)系制粒完成后，以測(cè)定水分為考察指標(biāo)來(lái)選定干燥時(shí)間，根據(jù)本方藥材中含有大量的酶類(lèi)，氨基酸、蛋白質(zhì)、多糖等有效成分，溫度太高可能破壞這些有效成分，溫度太低則干燥時(shí)間太長(zhǎng)，故確定干燥溫度為60℃。
表6-2顆粒水分與干燥時(shí)間的關(guān)系干燥時(shí)間1 2 3 4 5 6 7 8(h)水分含量9.627.956.795.965.415.385.365.35(％)由表中可看出，以干燥時(shí)間為1～5h，顆粒水分變化較大。
選定以60℃溫度干燥4h。
3、膠囊成型工藝研究將干燥顆粒整粒后，進(jìn)行填裝膠囊。為了選擇膠囊裝量大小與臨床劑量相適應(yīng)，進(jìn)行粉粒的堆密度實(shí)驗(yàn)[4]，結(jié)果表6-3。
表6-3粉粒的堆密度實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)號(hào) 1 2 3 4 5 X±SD堆密度(g/ml)0.67 0.63 0.68 0.65 0.62 0.65±0.025根據(jù)堆密度和臨床一日劑量5.6g以及各號(hào)膠囊的容量[5]，選擇1號(hào)膠囊，經(jīng)全自動(dòng)膠囊填裝機(jī)試裝，每粒膠囊裝0.35g。這樣在臨床上每日服16粒，基本上能適應(yīng)病人的需要。
下列實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。
實(shí)施例1熟大黃240g急性子240g 水蛭120g全蝎60g蜈蚣 60g 細(xì) 辛60g牡蠣530g瓜萎240g人參 180g補(bǔ)骨脂240g 金錢(qián)白花蛇30g取金錢(qián)白花蛇31.5g打粉，過(guò)100目篩，取30g備用。將人參和補(bǔ)骨脂用10倍量85％的乙醇浸泡1h，熱回流提取2h；提取液室溫靜置過(guò)夜，濾過(guò)；濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)的濃縮液。藥渣并入其余8味藥中，加水煎煮3次，加水量分別為8倍量、6倍量、6倍量，煎煮時(shí)間分別為1h、0.5h、0.5h；合并煎液，濾過(guò)，用三效濃縮器濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)的濃縮液。將醇提濃縮液和水煎濃縮液混勻噴霧干燥得干浸膏粉。加入金錢(qián)白花蛇和適量糊精，制粒，60℃干燥4h，整粒，裝入膠囊即得成品，制成1000粒膠囊。
原料藥中大黃為四川產(chǎn)掌葉大黃，按中國(guó)藥典(1995年版)大黃炮制項(xiàng)下熟大黃的炮制方法炮炙成熟大黃，即取大黃塊，加酒拌勻，置適宜容器內(nèi)，加熱蒸至內(nèi)外均呈黑色，取出，干燥。
金錢(qián)白花蛇打粉。取三批金錢(qián)白花蛇，洗凈，60℃干燥，用小型萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，計(jì)算出粉率，三次平均出粉率為95％。中國(guó)藥典(1995年版)凡例規(guī)定，制劑處方中規(guī)定的藥量，系指凈藥材或炮制品粉碎后的份量，故生產(chǎn)時(shí)，金錢(qián)白花蛇應(yīng)比處方量多取5％。
其余藥材無(wú)需另外炮制，均按中國(guó)藥典(1995年版)附錄“藥材炮制通則”的規(guī)定進(jìn)行凈切，切制，炮炙，制成制劑提取所需的飲片供用。
實(shí)施例2熟大黃240g急性子240g水蛭120g 全蝎60g蜈 蚣60g 細(xì) 辛60g 牡蠣530g 瓜萎240g人 參180g補(bǔ)骨脂240g金錢(qián)白花蛇30g金錢(qián)白花蛇粉碎成細(xì)粉備用；人參、補(bǔ)骨脂加85％乙醇，浸泡1小時(shí)后，加熱回流2小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至60℃下相對(duì)密度重1.20-1.25，備用，藥渣與余下的除金錢(qián)白花蛇之外的熱大黃等八味，加水煎煮3次，第一次1小時(shí)，第二，三次分別為0.5小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至60℃下相對(duì)密度1.20-1.25，與上述濃縮液混合均勻，噴霧干燥得干浸膏粉，加入金錢(qián)白花蛇細(xì)粉和適量糊精，制成顆粒，干燥，裝入膠囊1000粒即得。每粒裝0.35g，相當(dāng)原料藥2g，口服，1日4次，每次4粒。
實(shí)施例3熟大黃230g 急性子230g水蛭130g全蝎70g蜈 蚣70g 細(xì) 辛70g 牡蠣510g瓜萎230g人 參190g 補(bǔ)骨脂230g金錢(qián)白花蛇40g金錢(qián)白花蛇粉碎成細(xì)粉備用；人參、補(bǔ)骨脂加85％乙醇，浸泡1小時(shí)后，加熱回流2小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至60℃下相對(duì)密度重1.20-1.25，備用，藥渣與余下的除金錢(qián)白花蛇之外的熱大黃等八味，加水煎煮3次，第一次1小時(shí)，第二，三次分別為0.5小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至60℃下相對(duì)密度1.20-1.25，與上述濃縮液混合均勻，噴霧干燥得干浸膏粉，加入金錢(qián)白花蛇細(xì)粉和適量糊精，制成顆粒，顆粒和0.5％的藥用硬脂酸鎂混勻，壓制成1000片，包薄膜衣，即得；每片重0.35g，相當(dāng)于原藥材2g，口服，1日4次，每次4粒。
熟大黃180-350重量份 急性子180-400重量份水蛭80-280重量份全蝎30-150重量份 蜈蚣30-150重量份 細(xì)辛30-150重量份牡蠣450-700重量份瓜萎150-350重量份 人參100-300重量份補(bǔ)骨脂150-350重量份 金錢(qián)白花蛇10-100重量份實(shí)施例4熟大黃300g 急性子300g水蛭240g 全蝎120g蜈 蚣 120g 細(xì) 辛100g牡蠣600g 瓜萎320g人 參 220g 補(bǔ)骨脂300g金錢(qián)白花蛇70g取金錢(qián)白花打粉，過(guò)100目篩備用。將人參和補(bǔ)骨脂用10倍量85％的乙醇浸泡1h，熱回流提取2h；提取液室溫靜置過(guò)夜，濾過(guò)；濾液減壓回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)的濃縮液。藥渣并入其余8味藥中，加水煎煮3次，加水量分別為8倍量、6倍量、6倍量，煎煮時(shí)間分別為1h、0.5h、0.5h；合并煎液，濾過(guò)，用三效濃縮器濃縮至相對(duì)密度為1.20～1.25(60℃)的濃縮液。將醇提濃縮液和水煎濃縮液混勻噴霧干燥得干浸膏粉。加入金錢(qián)白花蛇和適量糊精，制粒，60℃干燥4h，整粒，裝入膠囊即得成品，制成1000粒膠囊。
實(shí)施例5本組合物制劑的質(zhì)量控制方法鑒別a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇20ml浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，燕干，加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘雪立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)子同一含羧甲基纖維索鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在30～80℃下以15∶5∶1比例的石油醚—甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出多晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色普相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視；斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿20ml，浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約20ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠C薄層析上，以8∶2的正己烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出；晾干，噴以10％氫氧化鉀甲醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；含量測(cè)定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，比例為80∶20，磷酸凋PH為3.0，該溶液作為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含重10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱(chēng)取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流30分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，每次15ml.合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物膠囊制劑每粒合大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.060mg。
實(shí)施例4鑒別a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇20ml浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在30～80℃下以15∶5∶1比例的石油醚-甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色普相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視；斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿20ml，浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水30ml研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水20ml，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁1g，拌勻、蒸干，加于中性氧化鋁柱(100～220目，5g，內(nèi)徑9～10mm)的上部，用40％甲醉60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂甙Re1、Re、Rb2，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠C薄層板上，以65∶35∶10氧仿-甲醇-水10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，365nm紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
權(quán)利要求
1.一種治療肺癌的中藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是主要是由下述原料藥制成的熟大黃180-350重量份 急性子180-400重量份 水蛭80-280重量份全 蝎30-150重量份蜈 蚣30-150重量份 細(xì)辛30-150重量份牡 蠣450-700重量份 瓜 萎150-350重量份 人參100-300重量份補(bǔ)骨脂150-350重量份金錢(qián)白花蛇10-100重量份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要是由下述原料藥制成的熟大黃210-270重量份 急性子210-270重量份 水蛭100-150重量份全 蝎40-80重量份 蜈 蚣40-80重量份細(xì)辛40-80重量份牡 蠣500-580重量份 瓜 萎200-280重量份 人參140-200重量份補(bǔ)骨脂200-260重量份 金錢(qián)白花蛇10-60重量份。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要是由下述原料藥制成的熟大黃240重量份 急性子240重量份 水蛭120重量份全 蝎60重量份蜈 蚣60重量份 細(xì)辛60重量份牡 蠣530重量份 瓜 萎240重量份 人參180重量份補(bǔ)骨脂240重量份 金錢(qián)白花蛇30重量份
4.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物主要是由下述原料藥制成的熟大黃230重量份 急性子230重量份 水蛭130重量份全 蝎70重量份蜈 蚣70重量份 細(xì)辛70重量份牡 蠣510重量份 瓜 萎230重量份 人參190重量份補(bǔ)骨脂230重量份 金錢(qián)白花蛇40重量份
5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述原料藥制成的熟大黃300重量份 急性子300重量份 水蛭240重量份全蝎120重量份蜈蚣120重量份細(xì)辛100重量份牡蠣600重量份瓜萎320重量份人參220重量份補(bǔ)骨脂300重量份 金錢(qián)白花蛇70重量份。
6.如權(quán)利要求1-5所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物還可加入賦型劑制成臨床可接受的劑型。
7.如權(quán)利要求1-5所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為金錢(qián)白花蛇粉碎成細(xì)粉備用；人參、補(bǔ)骨脂加80-90％乙醇，浸泡0.5-1.5小時(shí)后，加熱回流1.5-3小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至55-65℃下相對(duì)密度重1.20-1.25，備用，藥渣與余下的除金錢(qián)白花蛇之外的熟大黃等八味，加水煎煮3次，第一次0.5-1.5小時(shí)，第二，三次分別為0.4-1小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至55-65℃下相對(duì)密度1.20-1.25，與上述濃縮液混合均勻，加入金錢(qián)白花蛇細(xì)粉和適量糊精，最后經(jīng)過(guò)常規(guī)工序直接或加入藥學(xué)上可接受的賦型劑制成臨床可接受的膠囊、片劑、口服液體制劑、顆粒劑中的任意劑型。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為金錢(qián)白花蛇粉碎成細(xì)粉備用；人參、補(bǔ)骨脂加85％乙醇，浸泡1小時(shí)后，加熱回流2小時(shí)，濾過(guò)，濾液回收乙醇，濃縮至60℃下相對(duì)密度重1.20-1.25，備用，藥渣與余下的除金錢(qián)白花蛇之外的熟大黃等八味，加水煎煮3次，第一次1小時(shí)，第二，三次分別為0.5小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至60℃下相對(duì)密度1.20-1.25，與上述濃縮液混合均勻，噴霧干燥得干浸膏粉，加入金錢(qián)白花蛇細(xì)粉和適量糊精，制成顆粒，干燥，即得膠囊。
9.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取金錢(qián)白花打粉，過(guò)100目篩備用；將人參和補(bǔ)骨脂用10倍量85％的乙醇浸泡1小時(shí)，熱回流提取2小時(shí)；提取液室溫靜置過(guò)夜，濾過(guò)；濾液減壓回收乙醇，濃縮至60℃相對(duì)密度為1.20～1.25的濃縮液；藥渣并入其余8味藥中，加水煎煮3次，加水量分別為8倍量、6倍量、6倍量，煎煮時(shí)間分別為1小時(shí)、0.5小時(shí)、0.5小時(shí)；合并煎液，濾過(guò)，用三效濃縮器濃縮至60℃相對(duì)密度為1.20～1.25的濃縮液；將醇提濃縮液和水煎濃縮液混勻噴霧干燥得干浸膏粉；加入金錢(qián)白花蛇和適量糊精，制粒，60℃干燥4h，整粒，裝入膠囊即得。
10.如權(quán)利要求1-5所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇15-30ml浸漬0.8-1.5小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水使溶解，再加鹽酸，置水浴上加熱25-35分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次15-25ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維索鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在25～85℃下以14-16∶4-6∶0.5-1.5比例的石油醚—甲酸乙醋—甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約2ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7-9∶1-3的正己烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以8-12％氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁0.5-1.5g，拌勻、蒸干，加于中性氧化鋁柱(100～220日，5g，內(nèi)徑9～10mm)的上部，用30-50％甲醉50-70ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；另取人參皂甙Re1、Re、Rb1，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60-75∶30-40∶8-12氧仿-甲醇-水8-15℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90-110℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
11.如利要求10所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)、加甲醇15-30ml浸漬0.8-1.5小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水使溶解，再加鹽酸，置水浴上加熱25-35分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次15-25ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在25～85℃下以14-16∶4-6∶0.5-1.5比例的石油醚-甲酸乙醋-甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約2ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7-9∶1-3的正己烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出；晾干，噴以8-12％氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁0.5-1.5g，拌勻、蒸干，加于100～220目，5g，內(nèi)徑9～10mm中性氧化鋁柱的上部，用30-50％甲醇50-70ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓鳛楣┰嚻啡芤?；另取人參皂甙Rg1、Re、Rb1，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60-75∶30-40∶8-12氧仿-甲醇-水8-15℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90-110℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
12.如利要求1-5所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測(cè)定為照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-用磷酸調(diào)PH為3.00的0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，流動(dòng)相組成比例為70-90∶15-25，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱(chēng)取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流25-40分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物制劑每單位量含大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.050-0.070mg。
13.如利要求12所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法中的含量測(cè)定為照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-由磷酸調(diào)PH為3.0的0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，流動(dòng)相比例為80∶20，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含重10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱(chēng)取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流30分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，每次15ml.合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物制劑0.35g含大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.060mg。
14.如權(quán)利要求1-5所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法包括如下步驟a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇15-30ml浸漬0.8-1.5小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水使溶解，再加鹽酸，置水浴上加熱25-35分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次15-25ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在25～85℃下以14-16∶4-6∶0.5-1.5比例的石油醚—甲酸乙醋—甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視，斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約2ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以7-9∶1-3的正己烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出；晾干，噴以8-12％氫氧化鉀甲醇溶液，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿15-25ml，浸漬0.6-1.5小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁0.5-1.5g，拌勻、蒸干，加于中性氧化鋁柱(100～220目，5g，內(nèi)徑9～10mm)的上部，用30-50％甲醇50-70ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液；另取人參皂甙Rg1、Re、Rb1，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以60-75∶30-40∶8-12氧仿-甲醇-水8-15℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在90-110℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)。含量測(cè)定照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-用磷酸調(diào)PH為3.00的0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，流動(dòng)相組成比例為70-90∶15-25，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱(chēng)取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流25-40分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物制劑每單位量含大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.050-0.070mg。
15.如權(quán)利要求14所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法包括如下步驟鑒別a.取本組合物制劑0.7g，研細(xì)參加甲醇20ml浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，取濾液5ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加鹽酸1ml，置水浴上加熱30分鐘后立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取大黃對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液；再取大黃素對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，在30～80℃下以15∶5∶1比例的石油醚-甲酸乙醋—甲酸的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出多晾干，置365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的五個(gè)橙黃色熒光主斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)；置氨氣中熏后，日光下檢視；斑點(diǎn)變?yōu)榧t色；b.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿20ml，浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，濾液置水浴上蒸至約2ml，作為供試品溶液；另取補(bǔ)骨脂素，異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品，加氯仿制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液各4μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以8∶2的正己烷一醋酸乙酯為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出；晾干，噴以10％氫氧化鉀甲醇溶液，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；c.取本組合物制劑3.5g，研細(xì)、加氯仿20ml，浸漬1小時(shí)，濾過(guò)，得濾渣，置水浴上揮干溶劑，加水30ml研磨使溶解，離心，取上清液，用水飽和的正丁醇提取2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液，再加水20ml，搖勻，放置分層；取上層液置水浴上蒸至近干時(shí)，加入中性氧化鋁1g，拌勻、蒸干，加于100～220目，5g，內(nèi)徑9～10mm中性氧化鋁柱的上部，用40％甲醇60ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液；另取人參皂甙Rg1、Re、Rb1，對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液5～8μl，對(duì)照品溶液2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠C薄層板上，以65∶35∶10氧仿-甲醇-水10℃以下放置的下層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)、取出、晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘數(shù)分鐘，分別置日光及365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯三個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)，365nm紫外光燈下，顯三個(gè)相同顏色的熒光斑點(diǎn)；含量測(cè)定為照高效液相色譜法，色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為甲醇-用磷酸調(diào)PH為3.00的0.2mol/L磷酸二氫鈉溶液，流動(dòng)相組成比例為80∶20，檢測(cè)波長(zhǎng)289nm，理論塔板數(shù)按大黃素計(jì)算應(yīng)不低于4000；對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取大黃素對(duì)照品適量，加甲醇定量稀釋至每1ml含重10μg溶液；供試品溶液的制備，取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研勻、精密稱(chēng)取0.15g，置圓底燒瓶中，加水5ml，鹽酸0.5ml，置水浴上回流30分鐘，冷卻，用乙醚萃取三次，每次15ml.合并乙醚液，室溫?fù)]干，殘留物用甲醇溶解轉(zhuǎn)至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，濾過(guò)，續(xù)濾液備用；測(cè)定法吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各5～10μl注入液相色譜儀測(cè)定，記錄色譜圖，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算含量，本組合物物制劑每單位量含大黃素按干燥品計(jì)不得少于0.060mg。
16.如權(quán)利要求1-5所述的藥物組合物在制備治療肺癌的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種治療肺癌的中藥組合物及其制備方法和質(zhì)量控制方法。該組合物由熟大黃、急性子、水蛭、全蝎、蜈蚣、細(xì)辛、牡蠣、瓜蔞、人參、補(bǔ)骨脂、金錢(qián)白花蛇組成。該中藥組合物制備時(shí)對(duì)不同組分采用煎煮、乙醇提取方法，達(dá)到使有效藥物的充分發(fā)揮，同時(shí)本發(fā)明還提供了對(duì)該組合物進(jìn)行成分鑒別、含量測(cè)定的質(zhì)量控制方法。本組合物治療肺癌具有很好的抑制腫瘤生長(zhǎng)、抗轉(zhuǎn)移、增強(qiáng)免疫功能的作用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1509758SQ20031012242
公開(kāi)日2004年7月7日 申請(qǐng)日期2003年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月23日
發(fā)明者肖偉, 楊寅, 凌婭, 廖正根, 鄒紅, 劉濤, 柳于介, 肖 偉 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司