專(zhuān)利名稱(chēng)：一種治療帕金森氏綜合癥的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物，特別是關(guān)于一種用于治療帕金森氏綜合癥的藥物。
背景技術(shù)：
帕金森氏綜合癥是慢性進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，主要癥狀是震顫、肌僵直、運(yùn)動(dòng)遲緩和姿勢(shì)障礙。發(fā)病率約為0.1-0.15％，世界患病人數(shù)約有400萬(wàn)，我國(guó)約有150萬(wàn)名患者，隨著我國(guó)人口老齡化問(wèn)題進(jìn)一步嚴(yán)重，抗帕金森綜合癥藥將在我國(guó)有著較大的市場(chǎng)。近年國(guó)外上市的抗帕金森氏綜合癥新藥主要為多巴胺D2激動(dòng)劑羅匹尼羅；兒茶酚O-甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑托卡朋；選擇性a2/多巴胺D2激動(dòng)劑他克利索等藥物。國(guó)內(nèi)主要有多巴胺激動(dòng)劑左旋多巴、金鋼烷胺；多巴脫羧酶抑制劑如卡比多巴等藥物用于臨床，但仍不能滿足臨床需求。并且該病長(zhǎng)期使用上述藥物治療僅能消除癥狀，開(kāi)關(guān)現(xiàn)象和自動(dòng)癥等副作用發(fā)生較為普遍，患者需要終生服藥控制。因此尋找和制備具能夠治療帕金森氏綜合癥無(wú)毒副作用的藥物十分必要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，它采用生化制劑治療帕金森氏綜合癥，具有無(wú)毒，副作用小，有效率高的特點(diǎn)。
本發(fā)明的技術(shù)方案是設(shè)計(jì)一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是它將α-溶血鏈球菌33號(hào)菌種搭載往返式太空飛行器，在太空的特殊條件下導(dǎo)致α-溶血鏈球菌33號(hào)菌種遺傳特性發(fā)生變異，返回地面后優(yōu)選出其中的正變異、遺傳特性穩(wěn)定的菌種，經(jīng)培養(yǎng)及生物發(fā)酵后生產(chǎn)出治療帕金森氏綜合癥的藥物；該菌種已經(jīng)在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1082。
所述的治療帕金森氏綜合癥的藥物是口服液，1000ml中含太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽0.8g-15.0g。
所述的口服液是搭載、變異、優(yōu)選后的菌種，經(jīng)培育發(fā)酵的生產(chǎn)原液，加入其它附料。
所述的口服液是搭載、變異、優(yōu)選后的菌種，經(jīng)培育發(fā)酵的生產(chǎn)原液，加入純化水溶解攪勻。
所述的附料是香精、糖精鈉、木糖醇。
所述甘露聚糖肽制備方法是；優(yōu)選α-溶血性鏈球菌33菌種進(jìn)行太空搭載，經(jīng)過(guò)太空誘變精心選育的α-溶血性鏈球菌33號(hào)菌珠作為生產(chǎn)菌種制備；經(jīng)一級(jí)發(fā)酵和二級(jí)發(fā)酵，將發(fā)酵液提純，最終生產(chǎn)出太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽。
所述的菌種制備A.斜面種子培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％，瓊脂1-5％，綿羊血5-10％；pH 7.2-7.4；斜面種子培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；啟封菌種冷凍管，用無(wú)菌肉湯培養(yǎng)基稀釋?zhuān)跓o(wú)菌條件下接入血斜面，接種后置25-40℃恒溫培養(yǎng)24-30小時(shí)；B.肉湯種子培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％；pH 7.0-7.4；肉湯種子培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；將培養(yǎng)好的斜面菌種在無(wú)菌條件下按1-9％接種量接入肉湯種子培養(yǎng)基內(nèi)，25-40℃恒溫培養(yǎng)10-30小時(shí)。
所述的發(fā)酵過(guò)程用發(fā)酵培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.9％，氯化鈉0.2-0.6％；發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；A.一級(jí)發(fā)酵罐將優(yōu)良的肉湯菌種在無(wú)菌條件下按1-10％接種量接入一級(jí)種子罐，在25-40℃恒溫培養(yǎng)10-50小時(shí)，罐壓不超過(guò)0.02Mpa，通氣量以能翻動(dòng)培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分?jǐn)嚢?；B.二級(jí)發(fā)酵罐將一級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下按2-20％接種量接入發(fā)酵罐，在25-40℃恒溫培養(yǎng)20-100小時(shí)，罐壓不超過(guò)0.02Mpa；滅活放罐，滅活采用加溫使發(fā)酵液溫度達(dá)到70-120℃，保溫20-60分鐘，冷卻靜置。
所述的提取過(guò)程a、發(fā)酵液進(jìn)行濃縮，使?jié)饪s液體積與發(fā)酵液體積比控制在1∶15-1∶20或酌情而定；b、發(fā)酵液的濃縮液加入80-99％乙醇，體積量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定，充分?jǐn)嚢桁o置后，離心去除上清液，沉淀用蒸餾水溶解，調(diào)pH1.0-5.0，得到溶解液并將溶解液靜置；c、再將溶解液離心去除雜質(zhì)得到上清液，準(zhǔn)確量取上清液體積，按上清液體積計(jì)算出所需乙醇量，將乙醇緩慢加入到上清液中，并充分?jǐn)嚢瑁o置后離心去除上清液得到沉淀物；d、沉淀物再用蒸餾水溶解，調(diào)pH、離心，上清液再加乙醇沉淀，這樣的工藝反復(fù)操作至含量檢測(cè)合格為止，得到的沉淀物為太空誘變菌種所生產(chǎn)的甘露聚糖肽粗品；真空干燥3-8小時(shí)即得太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽產(chǎn)品。
本發(fā)明的特點(diǎn)是由于本發(fā)明將α-溶血鏈球菌菌種搭載返回式太空飛行器(宇宙飛船或返回式衛(wèi)星)，利用太空中微(零)重力、宇宙射線、交變磁場(chǎng)、高真空、高熱深冷等因素的綜合作用，使菌株的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)斷裂，基因組發(fā)生重排，從而產(chǎn)生新的菌株。返回地面后，對(duì)經(jīng)過(guò)太空搭載的菌株進(jìn)行培養(yǎng)和篩選，通過(guò)研究其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化反應(yīng)、代謝產(chǎn)物、遺傳性狀及蛋白表達(dá)、遺傳穩(wěn)定性、中試生產(chǎn)指標(biāo)等內(nèi)容，優(yōu)選出其中的正變異、遺傳特性穩(wěn)定的菌種，經(jīng)培養(yǎng)發(fā)酵后得到治療帕金森氏綜合癥的藥物。該菌種已經(jīng)在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1082。
特別是α-溶血鏈球菌D33菌株經(jīng)太空搭載誘變，地面上的篩選、分離和純化后，選育出發(fā)酵單位更高、所分泌的甘露聚糖肽含量更高的高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)菌株T33株。通過(guò)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所對(duì)T33菌株及D33菌株的全細(xì)胞蛋白SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)分析和菌株的基因組DNA限制性酶切分析(RFLP/PFGE)比較，可以證明空間誘變及地面篩選出的T33菌株其基因有變異。該突變菌株在遺傳上穩(wěn)定，有較強(qiáng)的生產(chǎn)適應(yīng)性，由其發(fā)酵產(chǎn)生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(80％)提高3至5倍，西安市藥品檢驗(yàn)所送樣測(cè)定達(dá)到271.6％，發(fā)酵含量比對(duì)照組產(chǎn)物含量平均高出三倍以上。經(jīng)過(guò)收集大量服藥患者病歷資料，深入研究歸納總結(jié)，證實(shí)該菌株經(jīng)培養(yǎng)、發(fā)酵、提純及精制等高科技手段制備而成的口服液對(duì)治療帕金森氏綜合癥有顯著的療效。(見(jiàn)附件附件材料1陜西省科學(xué)技術(shù)廳陜西省科學(xué)技術(shù)成果鑒定證書(shū)材料。
附件材料2太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株經(jīng)“神舟三號(hào)”飛船搭載公證書(shū)。
附件材料3太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株經(jīng)“神舟三號(hào)”飛船搭載返回地面篩選報(bào)告附件材料4中國(guó)科學(xué)院微生物所關(guān)于“神舟三號(hào)”飛船搭載太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株與地面對(duì)照菌的形態(tài)生理生化鑒定報(bào)告書(shū)附件材料5中國(guó)科學(xué)院微生物所關(guān)于“神舟三號(hào)”飛船搭載太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽生產(chǎn)菌株與地面對(duì)照菌的SDS-PAGE及RFLP/PFGE分析鑒定報(bào)告書(shū)附件材料6陜西省藥品檢驗(yàn)所“神舟三號(hào)”太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽口服液檢測(cè)報(bào)告附件材料7科技查新報(bào)告復(fù)印件附件材料8中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏菌種保藏受理通知書(shū)復(fù)印件)新藥理作用試驗(yàn)分析驗(yàn)證帕金森氏病最根本的病理?yè)p害是黑質(zhì)-紋狀體系統(tǒng)多巴胺能神經(jīng)元的變性壞死。從而造成DA功能降低。當(dāng)黑質(zhì)致密區(qū)DA神經(jīng)元退變超過(guò)80％以后，就出現(xiàn)類(lèi)似去神經(jīng)支配的超敏現(xiàn)象，有運(yùn)動(dòng)不能，肌肉僵硬，和震顫等表現(xiàn)。
有關(guān)治療帕金森氏病甘露聚糖肽新的藥理作用是l、甘露聚糖肽激活促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子bFGF，使中樞神經(jīng)損傷修復(fù)。促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。詳見(jiàn)李校坤著《生長(zhǎng)因子與創(chuàng)傷修復(fù)的基礎(chǔ)與臨床應(yīng)用研究》。
2、甘露聚糖肽調(diào)節(jié)紅細(xì)胞變形能力，有利于腦部損傷后微循環(huán)障礙的改善。詳見(jiàn)唐玉和藺桂芬著《人參多糖和多抗甲素對(duì)動(dòng)物紅細(xì)胞變形能力的影響》首都醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào)，1995；16(3)204。
3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)口服甘露聚糖肽500微克/100克每天兩次共三周可完全緩解由利血平持續(xù)給藥引起的大鼠震顫麻痹樣癥狀。對(duì)6-羥多巴胺單側(cè)黑質(zhì)注射造成的大鼠慢性震顫模型，用藥四周后可以觀察到大鼠向健側(cè)(右側(cè))轉(zhuǎn)動(dòng)，可以判斷甘露聚糖肽存在DA激動(dòng)作用。
新用途驗(yàn)證經(jīng)過(guò)對(duì)一千例使用“神舟三號(hào)”甘露聚糖肽口服液患者的調(diào)查發(fā)現(xiàn)12例60歲以上的帕金森氏病患者，在服藥四周后肌僵直，震顫，運(yùn)動(dòng)遲緩等癥狀不同程度緩解或消失。三個(gè)月后回訪其中6例停藥復(fù)發(fā)，繼續(xù)服藥一周后癥狀再次緩解。服藥24周回訪8例患者停藥無(wú)復(fù)發(fā)。完全緩解10例，兩例震顫消失，但肌僵直，運(yùn)動(dòng)遲緩改善不明顯。所有患者在治療期間均于三周內(nèi)停用美多巴，病史最長(zhǎng)者15年，合并腦萎縮者5例，有腦梗塞，腦出血病史者11例，總有效率90％。
新療效驗(yàn)證陳光明，男，74歲，家住建國(guó)路?；寂两鹕喜∈迥?。十五年前無(wú)明顯誘因出現(xiàn)右手顫抖，逐漸右上肢、左上肢先后出現(xiàn)振顫，面部肌肉緊張，呈現(xiàn)面具臉，長(zhǎng)期口服安坦等藥物無(wú)效，拿筷子，系鞋帶，扣扣子等精細(xì)運(yùn)動(dòng)困難。在市中心醫(yī)院診斷為帕金森氏病。2003年5月服神舟三號(hào)甘露聚糖肽口服液每天兩支共6盒，服藥四周上述癥狀減輕，繼續(xù)服用6盒后，雙上肢不再振顫，面部表情自如，生活能夠自理。三個(gè)月后回訪已停藥癥狀無(wú)復(fù)發(fā)。臨床判斷為痊愈。
具體實(shí)施方案菌種選育在α-溶血鏈球菌生長(zhǎng)規(guī)律的基礎(chǔ)上，選定較合適生長(zhǎng)時(shí)期的菌種，采用平皿生長(zhǎng)的菌落、浸入其它物質(zhì)中的菌懸液、帶菌的砂土等方法，于2002年3月25日搭載“神舟三號(hào)”宇宙飛船。在太空軌道(近地點(diǎn)高度200公里、遠(yuǎn)地點(diǎn)高度350公里)進(jìn)行了6天零18小時(shí)的在軌飛行。太空的特殊條件主要體現(xiàn)為微重力、高真空、高輻射、交變磁場(chǎng)等特殊環(huán)境。在外層空間飛行的菌種被置于一個(gè)與地球上的生態(tài)環(huán)境完全不同的環(huán)境中，主要包括來(lái)自磁場(chǎng)俘獲的電子、質(zhì)子及低能重粒子；來(lái)自銀河系的宇宙射線如質(zhì)子、粒子及更重的高能重粒子；來(lái)自太陽(yáng)磁暴的質(zhì)子及重粒子等。這些粒子作用于微生物細(xì)胞核中的DNA雙鏈結(jié)構(gòu)，可導(dǎo)致雙鏈斷裂。微重力、高真空環(huán)境可使DNA的堿基序列發(fā)生重組，即基因組的重組和變異。變異后產(chǎn)生的新菌株，其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化反應(yīng)、代謝產(chǎn)物、遺傳性狀及蛋白表達(dá)、中試生產(chǎn)指標(biāo)等均會(huì)發(fā)生不同程度的變化。在宇宙飛船返回地面后，經(jīng)過(guò)進(jìn)一步篩選，僅優(yōu)選出其中0.2％的正變異且遺傳特性穩(wěn)定的菌株，經(jīng)培育制成生產(chǎn)菌種。這種經(jīng)航天搭載誘變后選育出的菌種已經(jīng)在在2003年12月29日由中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1082。
實(shí)驗(yàn)及中試生產(chǎn)結(jié)果表明，經(jīng)空間誘變后的新型太空菌種在遺傳特性上穩(wěn)定，有較強(qiáng)的生產(chǎn)適應(yīng)性，由其發(fā)酵產(chǎn)生的甘露聚糖肽含量提高，多肽含量比國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(80％)提高3至5倍，西安市藥品檢驗(yàn)所送樣測(cè)定達(dá)到271.6％，發(fā)酵含量比對(duì)照組產(chǎn)物含量平均高出三倍以上，發(fā)酵周期大大縮短。
制備方法太空誘變菌種生產(chǎn)甘露聚糖肽的制備過(guò)程本發(fā)明所述的太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽是由以下方法制備太空菌種制備---一級(jí)發(fā)酵---二級(jí)發(fā)酵----發(fā)酵液提純，最終生產(chǎn)出甘露聚糖肽。
①太空菌種制備以經(jīng)過(guò)空間誘變育種精心選育的α-溶血鏈球菌作為生產(chǎn)菌種。
A.斜面種子培養(yǎng)基牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％，瓊脂3％，綿羊血8％；pH 7.4。
斜面種子培養(yǎng)基滅菌溫度121℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
啟封菌種冷凍管，用無(wú)菌肉湯培養(yǎng)基稀釋?zhuān)跓o(wú)菌條件下接入血斜面，接種后置38℃恒溫培養(yǎng)30小時(shí)。
B.肉湯種子培養(yǎng)基牛肉膏0.5％，酵母膏0.6％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％；pH 7.4。
肉湯種子培養(yǎng)基滅菌溫度121℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
將培養(yǎng)好的斜面菌種在無(wú)菌條件下按9％接種量，接入肉湯種子培養(yǎng)基內(nèi)，38℃恒溫培養(yǎng)30小時(shí)。
②發(fā)酵過(guò)程發(fā)酵培養(yǎng)基牛肉膏0.4％，酵母膏0.5％，蛋白胨0.5％，葡萄糖0.4％，氯化鈉0.5％。
發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌溫度121℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.12Mpa。
A.一級(jí)發(fā)酵罐將優(yōu)良的肉湯菌種在無(wú)菌條件下按10％接種量，接入一級(jí)種子罐，在29℃恒溫培養(yǎng)30小時(shí)，罐壓不超過(guò)0.02Mpa，通氣量以能翻動(dòng)培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分?jǐn)嚢琛?br> B.二級(jí)發(fā)酵罐將一級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下按20％接種量，接入發(fā)酵罐，在29℃恒溫培養(yǎng)70小時(shí)，罐壓不0.02Mpa，滅活放罐。滅活采用加溫使發(fā)酵液溫度達(dá)到100℃，保溫60分鐘，冷卻靜置。
③提取過(guò)程a、發(fā)酵液進(jìn)行濃縮，使?jié)饪s液體積與發(fā)酵液體積比控制在1∶15-1∶20或酌情而定。
b、發(fā)酵液的濃縮液加入80-99％乙醇，體積量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定。充分?jǐn)嚢桁o置后，離心去除上清液，沉淀用蒸餾水溶解，調(diào)pH5.0，得到溶解液并將溶解液靜置。
c、再將溶解液離心去除雜質(zhì)得到上清液，準(zhǔn)確量取清液體積，按上清液體積計(jì)算出所需乙醇量，調(diào)pH值，將乙醇緩慢加入到上清液中，并充分?jǐn)嚢?，靜置后離心去除上清液得到沉淀物。
d、沉淀物再用蒸餾水溶解，調(diào)pH，離心，上清液再加乙醇沉淀。這樣的工藝反復(fù)操作至中間檢測(cè)合格為止，得到的沉淀物為太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽粗品。真空干燥3-8小時(shí)，即得到太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽產(chǎn)品。
上述方法得到的產(chǎn)品的檢驗(yàn)[性狀]本品為白色或微黃色無(wú)定形粉末；無(wú)臭、無(wú)味。
本品在水中易溶，在乙醇、氯仿及丙酮中不溶。
比旋度取本品，精密稱(chēng)定，加水溶解并稀釋成每1ml中約含10mg的溶液，依法測(cè)定(中國(guó)藥典2000年版二部附錄vIE)，比旋度為+70℃至+80℃。
1、取本品10mg，加水0.5ml使溶解，加a-萘酚乙醇溶液(5-100)1ml，搖勻，沿管壁緩緩加硫酸0.5ml，數(shù)分鐘后，界面呈紫紅色。
2、取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，取約10ul點(diǎn)于濾紙上，晾干，用無(wú)水乙醇固定，置高硝酸溶液(取高碘酸1.2g，加水30ml溶解后.加0.2mol/L醋酸鈉溶液1.5ml與乙醇100ml，混勻即得。置暗處保存，可使用數(shù)月)中浸泡5分鐘，取出，用70％乙醇溶液沖洗，置還原液(取碘化鉀5g，硫代硫酸鈉5g，加水100ml使溶解，再加乙醇150ml、2mol/L鹽酸液2.5ml，隨加隨攪拌，臨用時(shí)配)中浸泡5分鐘，取出，用70％乙醇溶液沖洗，置品紅業(yè)硫酸試液中浸泡約30分鐘，取出，用焦亞硫酸鈉溶液(取焦亞硫酸鈉0.4g，加鹽酸1ml，加水溶解使成100ml，即得)，沖洗，晾干，在濾紙片點(diǎn)樣處應(yīng)呈紫紅色。
3、取供試品和對(duì)照品適量，分別加氯化鈉注射液制成每1ml中含1mg的溶液作為供試品溶液和對(duì)照品溶液，按甘露聚糖肽免疫原性測(cè)定法試驗(yàn)，供試品和對(duì)照品管應(yīng)均無(wú)溶血發(fā)生。
1、酸度取本品，加水制成每1ml中含I0mg的溶液，依法測(cè)定(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIH)，pH值應(yīng)為3.0-5.0。
2、吸收度取本品，加水制成每1ml中含0.4mg的溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIA)，在260nm的波長(zhǎng)處，其吸收度不得大于0.25，在280nm的波長(zhǎng)處，其吸收度不得大于0.20。
3、總氮量取本品，照氮測(cè)定法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIID第二法)測(cè)定.按干燥品計(jì)算，含總氮量應(yīng)為0.8-2.0％。
4、免疫原性取供試品和對(duì)照品適量，分別加氯化鈉注射液制成每1ml中含10mg的溶液，再分別用磷酸鹽緩沖液制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256的稀釋液作為供試品溶液和對(duì)照品溶液，依法檢查(附甘露聚糖肽免疫原性測(cè)定法)，供試品不溶血管的最低濃度應(yīng)不得高于對(duì)照品相應(yīng)濃度的一倍以上。
5、干燥失重 取本品，在105℃干燥至恒重，減失重量不得過(guò)5.0％(中國(guó)藥典2000年版二部附錄VIIIL)。
6、重金屬 取本品，在1.0g，依法檢查(中國(guó)藥典2000年版VIIIH)含重金屬不得過(guò)百萬(wàn)分之二十。
7、異常毒性取本品，加氯化鈉注射液制成每1ml中含0.5mg的溶液，依法檢查(中國(guó)藥典2000年版附錄XIC).按靜脈注射法給藥，應(yīng)符合規(guī)定(供注射用)。
1.對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取經(jīng)105℃干燥至恒重的D-甘露糖對(duì)照品0.1g置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度.搖勻；精密量取5ml，置100ml的量瓶中，加水至刻度，搖勻。每1ml中含甘露糖50ug。
2.供試品溶液備取本品適量，精密稱(chēng)定，加水溶解制成每1ml中含40ug的溶液。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱(chēng)取對(duì)照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分別置具塞試管中，各加水至1.0ml，再加3％苯酚溶液1.0ml，搖勻，沖入硫酸4.5ml，搖勻，放置于室溫，以0管為空白。照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄IVA)在490nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以甘露糖ug數(shù)對(duì)相應(yīng)的吸收度，計(jì)算回歸方程。
4.測(cè)定法精密量取供試品溶液1.0ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下自“再加3％苯酚溶液1.0ml”起，依法操作，測(cè)定吸收度，由回歸方程計(jì)算甘露糖的含量。
甘露聚糖肽免疫原性測(cè)定法(補(bǔ)體結(jié)合法)；1、試液A.酸鹽緩沖液(pH7.2)取氯化鈉8.5g、磷酸氫二鈉0.565g及磷酸二氫鉀0.135g，加水至1000ml使其溶解，加10％硫酸鎂溶液1ml，搖勻。
B.1％羊紅細(xì)胞懸液羊血紅細(xì)胞的制備由綿羊頸靜脈無(wú)菌采血于盛有等量阿氏液(取葡萄糖20.5g、枸椽酸鈉8.0g、氯化鈉4.2g，枸椽酸5.5g，加水至1000mI使溶解，100℃滅菌30分鐘)的無(wú)菌容器中，4℃保存。
1％羊血紅細(xì)胞懸液的制備取上述羊血紅細(xì)胞適量，用氯化鈉注射液洗滌三次，每次離心5分鐘(2000轉(zhuǎn)/分)，取壓積羊血紅細(xì)胞，用氯化鈉注射液制成1％羊血紅細(xì)胞懸液。取懸液，用氯化鈉注射液稀釋20倍制成供試品溶液，另取等量懸液加水稀釋20倍作為空白溶液，照分光光度法(中國(guó)藥典2000年版二部附錄IVA)，在541nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，其吸收度應(yīng)為0.65-0.70，如超出限度應(yīng)調(diào)節(jié)1％羊紅細(xì)胞懸液的濃度。
C.溶血素及致敏羊血紅細(xì)胞溶血素的制備取上述壓積羊血紅細(xì)胞，用氯化鈉注射液制成25％羊血紅細(xì)胞懸液.取家兔1只，靜脈注射上述羊血紅細(xì)胞懸液，每日一次，共七次，前三次3ml，后三次5ml，末次注射后七日采血。分離血清，56℃。30分鐘滅活，分裝，0℃以下保存。
溶血素單位的測(cè)定取溶血素適量，加磷酸鹽緩沖液分別制成1∶1000、1∶2000、1∶3000、1∶4000、1∶5000、1∶6000、1∶7000、1∶8000、1∶9000、1∶10000的稀釋液，各取0.1ml置試管中，加1％羊血細(xì)胞懸液0.1ml，搖勻，加稀釋度為1∶30的豚鼠血清(補(bǔ)體)0.2ml及磷酸鹽緩沖液0.2ml，搖勻，37℃保溫30分鐘，完全溶血管最高稀釋度為1單位溶血素。
致敏羊血紅細(xì)胞的制備臨用前，將2％的羊血紅細(xì)胞懸液與2單位溶血索等體積混合，37℃保溫15分鐘即得。
補(bǔ)體取三只以上的豚鼠，心臟采血，離心分離血清，0℃以下保存。
補(bǔ)體單位的測(cè)定取補(bǔ)體適量，加磷酸鹽緩沖液，分別制成1∶40、1∶60、1∶80、1∶100、1∶120、1∶140、1∶160、1∶180的稀釋液，各取0.2ml置試管中，加0.2ml磷酸鹽緩沖液，搖勻，37℃保溫30分鐘后，分別加致敏羊血紅細(xì)胞0.2ml，搖勻，37℃再保溫30分鐘.完全溶血管的最高稀釋度為1單位的補(bǔ)體。
抗體取甘露聚糖肽對(duì)照品適量，加氯化鈉注射液制成每1ml中含10mg的對(duì)照品溶液免疫家兔，隔日采用耳靜脈注射對(duì)照品溶液一次。第一次注射0.2ml，第二次至第五次各注射0.5ml，第六次至第十次各注射1.0ml，第十一次至第十五次各注射2.0ml，末次注射后三日采血，離心分離血清，56℃下30分鐘滅活，分裝，0℃以下保存(臨用前，需56℃30分鐘再次滅活)。
抗體單位的測(cè)定取抗體適量，加磷酸鹽緩沖液分別制成1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32。1∶64、1∶128的稀釋液，各取0.1ml置試管中，加甘露聚糖肽對(duì)照品溶液0.1ml及2單位補(bǔ)體0.2m]，搖勻，于4-8℃放置4小時(shí)以上，置37℃保溫30分鐘，不溶血管的最高稀釋度為1單位抗體。同時(shí)設(shè)抗原(不加抗體，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、抗體(不加抗原，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、補(bǔ)體(不加抗原，抗體，以0.2ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管，以上三種對(duì)照管應(yīng)全溶血；另設(shè)的致敏羊血紅細(xì)胞(不加抗原、抗體和補(bǔ)體，以0.4ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管應(yīng)不溶血。
2、免疫原性測(cè)定法取甘露驟糖肽對(duì)照品與供試品適量，照藥品項(xiàng)下的規(guī)定制成不同濃度的對(duì)照品溶液和供試品溶液，各取0.1ml置試管中，加入2單位抗體0.1ml及2單位補(bǔ)體0.2ml。搖勻，于4-8℃放置4小時(shí)以上，置37℃保溫30分鐘，加入致敏羊血紅細(xì)胞0.2ml，搖勻，37℃再保溫30分鐘。觀察各管的溶血情況，不溶血管的最低濃度代表甘露聚糖肽的免疫原性。同時(shí)設(shè)抗原(不加抗體，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、抗體(不加抗原，以0.1ml磷酸鹽緩沖液代替)、補(bǔ)體(不加抗原、抗體、以0.2ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管，以上三種對(duì)照管應(yīng)全溶血另設(shè)的致敏羊血紅細(xì)胞(不加抗原、抗體和補(bǔ)體，以0.4ml磷酸鹽緩沖液代替)對(duì)照管應(yīng)不溶血。
太空誘變菌種生產(chǎn)“神舟三號(hào)”甘露聚糖肽口服液的制備方法取太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽，加適量香精、矯味劑溶解，加純化水到全量，攪拌均勻后過(guò)濾，灌裝，熱壓滅菌105-121℃，20-30分鐘，經(jīng)燈檢合格后包裝入庫(kù)。
實(shí)施例1太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽1克；加甜味劑適量和香精適量；制成1000ml。
將太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽1g，糖精鈉0.10g，用少量純化水溶解，加入香精0.1ml、加純化水至1000ml攪勻，過(guò)濾，化驗(yàn)合格后，灌封，流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘.
實(shí)施例2太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽原料液1000ml，活性炭0.25g，木糖醇0.8g，，制成1000ml。
取太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽原料液1000ml，加入活性炭0.25g，攪勻，過(guò)濾，加入木糖醇0.5g，攪勻，化驗(yàn)合格后，灌封，流通蒸汽滅菌121℃，30分鐘。
權(quán)利要求
1.一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是它將α-溶血鏈球菌33號(hào)菌種搭載往返式太空飛行器，在太空的特殊條件下導(dǎo)致α-溶血鏈球菌33號(hào)菌種遺傳特性發(fā)生變異，返回地面后優(yōu)選出其中的正變異、遺傳特性穩(wěn)定的菌種，經(jīng)培養(yǎng)及生物發(fā)酵后生產(chǎn)出治療帕金森氏綜合癥的藥物；該菌種已經(jīng)在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1082。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是所述的治療帕金森氏綜合癥的藥物是口服液，1000ml中含太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽0.8g-15.0g。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是所述的口服液是α-溶血鏈球菌33號(hào)菌種搭載空間飛行器、變異、優(yōu)選后的菌種，經(jīng)培育發(fā)酵的生產(chǎn)原液，加入其它附料制成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是所述的口服液是α-溶血鏈球菌33號(hào)菌種搭載空間飛行器、變異、優(yōu)選后的菌種，經(jīng)培育發(fā)酵的生產(chǎn)原液，加入純化水溶解攪勻制成。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是所述的附料是香精、糖精鈉、木糖醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是所述甘露聚糖肽制備方法是；優(yōu)選α-溶血性鏈球菌33菌種進(jìn)行太空搭載，經(jīng)過(guò)太空誘變精心選育的α-溶血性鏈球菌33號(hào)菌珠作為生產(chǎn)菌種制備；經(jīng)一級(jí)發(fā)酵和二級(jí)發(fā)酵，將發(fā)酵液提純，最終生產(chǎn)出太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是所述的菌種制備A. 斜面種子培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％，瓊脂1-5％，綿羊血5-10％；pH7.2-7.4；斜面種子培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；啟封菌種冷凍管，用無(wú)菌肉湯培養(yǎng)基稀釋?zhuān)跓o(wú)菌條件下接入血斜面，接種后置25-40℃恒溫培養(yǎng)24-30小時(shí)；B.肉湯種子培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.8％，氯化鈉0.2-0.6％；pH7.0-7.4；肉湯種子培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；將培養(yǎng)好的斜面菌種在無(wú)菌條件下按1-9％接種量接入肉湯種子培養(yǎng)基內(nèi)，25-40℃恒溫培養(yǎng)10-30小時(shí)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是所述的發(fā)酵過(guò)程用發(fā)酵培養(yǎng)基牛肉膏0.2-0.8％，酵母膏0.2-0.8％，蛋白胨0.3-0.8％，葡萄糖0.1-0.9％，氯化鈉0.2-0.6％；發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌溫度105-125℃，時(shí)間30分鐘，蒸汽壓力0.11-0.14Mpa；A.一級(jí)發(fā)酵罐將優(yōu)良的肉湯菌種在無(wú)菌條件下按1-10％接種量接入一級(jí)種子罐，在25-40℃恒溫培養(yǎng)10-50小時(shí)，罐壓不超過(guò)0.02Mpa，通氣量以能翻動(dòng)培養(yǎng)液為宜，連續(xù)充分?jǐn)嚢瑁籅.二級(jí)發(fā)酵罐將一級(jí)發(fā)酵培養(yǎng)液在無(wú)菌條件下按2-20％接種量接入發(fā)酵罐，在25-40℃恒溫培養(yǎng)20-100小時(shí)，罐壓不超過(guò)0.02Mpa；滅活放罐，滅活采用加溫使發(fā)酵液溫度達(dá)到70-120℃，保溫20-60分鐘，冷卻靜置。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是所述的提取過(guò)程a、發(fā)酵液進(jìn)行濃縮，使?jié)饪s液體積與發(fā)酵液體積比控制在1∶15-1∶20或酌情而定；b、發(fā)酵液的濃縮液加入80-99％乙醇，體積量比控制在1∶1.5-1∶5.5或酌情而定，充分?jǐn)嚢桁o置后，離心去除上清液，沉淀用蒸餾水溶解，調(diào)pH1.0-5.0，得到溶解液并將溶解液靜置；c、再將溶解液離心去除雜質(zhì)得到上清液，準(zhǔn)確量取上清液體積，按上清液體積計(jì)算出所需乙醇量，將乙醇緩慢加入到上清液中，并充分?jǐn)嚢?，靜置后離心去除上清液得到沉淀物；d、沉淀物再用蒸餾水溶解，調(diào)pH、離心，上清液再加乙醇沉淀，這樣的工藝反復(fù)操作至含量檢測(cè)合格為止，得到的沉淀物為太空誘變菌種所生產(chǎn)的甘露聚糖肽粗品；真空干燥3-8小時(shí)即得太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療帕金森氏綜合癥的藥物，其特征是它將α－溶血鏈球菌33號(hào)菌種搭載往返式太空飛行器，在太空的特殊條件下導(dǎo)致α－溶血鏈球菌33號(hào)菌種遺傳特性發(fā)生變異，返回地面后優(yōu)選出其中的正變異、遺傳特性穩(wěn)定的菌種，經(jīng)培養(yǎng)及生物發(fā)酵后生產(chǎn)出治療帕金森氏綜合癥的藥物；該菌種已經(jīng)在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，編號(hào)為CGMCCNo.1082。所述的治療帕金森氏綜合癥的藥物是口服液，1000ml中含太空誘變菌種生產(chǎn)的甘露聚糖肽0.8g－15.0g。這種治療帕金森氏綜合癥的藥物，它采用生化制劑治療帕金森氏綜合癥，具有無(wú)毒，副作用小，有效率高的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P25/16GK1634558SQ20031012224
公開(kāi)日2005年7月6日 申請(qǐng)日期2003年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2003年12月31日
發(fā)明者趙恒 , 劉恒 申請(qǐng)人:趙恒