專利名稱：作為催產(chǎn)素拮抗劑的吡咯烷衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新穎的吡咯烷衍生物，特別是用作藥物的吡咯烷衍生物，以及含有該吡咯烷衍生物的藥物制劑。所述的吡咯烷衍生物可用于治療和/或預(yù)防流產(chǎn)、早產(chǎn)、痛經(jīng)。優(yōu)選的是，所述的吡咯烷衍生物表現(xiàn)出對催產(chǎn)素受體的調(diào)節(jié)活性，更主要是拮抗活性。更優(yōu)選的是，所述化合物可用于治療和/或預(yù)防由催產(chǎn)素介導(dǎo)的疾病狀態(tài)，包括流產(chǎn)、早產(chǎn)和痛經(jīng)。
背景技術(shù)：
催產(chǎn)素(OT)是一種環(huán)狀九肽，通過特異性G蛋白-偶合的受體(目前歸類為OT受體(OT-R))的激活來介導(dǎo)它的作用(1)。
催產(chǎn)素(OT)引起分娩過程中的哺乳動物的子宮收縮。相應(yīng)的催產(chǎn)素受體屬于G-蛋白-偶合的受體家族，并且與V1和V2加壓素受體相類似。在妊娠期內(nèi)OT受體急劇增加。業(yè)已顯示，OT受體的濃度與自發(fā)性子宮活動相關(guān)聯(lián)(2-3)。在分娩過程中OT-誘導(dǎo)的子宮收縮導(dǎo)致子宮頸擴(kuò)張，最終導(dǎo)致胎兒通過陰道腔。有時，這些收縮在胎兒可完全存活之前發(fā)生，導(dǎo)致流產(chǎn)。流產(chǎn)和早產(chǎn)是產(chǎn)期發(fā)病的主要原因，因而不希望它發(fā)生。因此，在產(chǎn)科領(lǐng)域流產(chǎn)的控制是一個很重要的問題。
近年來，已經(jīng)積累了有力的證據(jù)，表明催產(chǎn)素激素在引起哺乳動物特別是人的分娩中起主要的作用。因此，認(rèn)為催產(chǎn)素通過收縮子宮肌和通過促進(jìn)在子宮內(nèi)膜/蛻膜中合成和釋放收縮前列腺素而直接和間接地發(fā)揮所述的作用。這些前列腺素在子宮頸的成熟過程中也可能進(jìn)一步發(fā)揮作用。這種催產(chǎn)素受體的“上調(diào)”和子宮敏感性的增加似乎是升高的雌激素血漿水平對它們的營養(yǎng)作用所致。通過“下調(diào)”催產(chǎn)素，預(yù)期可阻斷催產(chǎn)素對子宮的直接(收縮)和間接(增加前列腺素合成)作用。催產(chǎn)素調(diào)節(jié)劑(如阻斷劑或拮抗劑)對于治療流產(chǎn)可能是有效的。
另一種和催產(chǎn)素有關(guān)的狀況是痛經(jīng)，其特征為月經(jīng)期的疼痛和不適。該疼痛據(jù)信是由子宮收縮和局部缺血引起的，可能由在分泌內(nèi)膜中產(chǎn)生的前列腺素的作用介導(dǎo)。通過阻斷催產(chǎn)素對子宮的間接和直接作用，催產(chǎn)素拮抗劑可能是治療痛經(jīng)的侯選藥物。
一些對抗催產(chǎn)素作用的藥物目前已經(jīng)在臨床研究中使用(4)。這類安宮保胎藥(tocolytic agent)(即子宮松弛劑)包括β-2-腎上腺素激動劑、硫酸鎂和乙醇。先導(dǎo)的β-2-腎上腺素激動劑是利托君(ritodrine)，它引起許多心血管和代謝副作用，包括嬰兒的心動過速、腎素分泌增加、高血糖癥和反應(yīng)性低血糖癥。后來的β-2-腎上腺素激動劑包括特布他林(terbutaline)和沙丁胺醇(albuterol)，具有和利托君類似的副作用。硫酸鎂在高于治療范圍4-8mg/dL的血漿濃度時，會引起心臟傳導(dǎo)和神經(jīng)肌肉傳導(dǎo)的抑制、呼吸阻滯和心臟停跳，因此在腎功能受損時該藥物是不合適的。乙醇在預(yù)防流產(chǎn)中和利托君同樣有效，但它不能相應(yīng)地降低胎兒呼吸窘迫癥的發(fā)病率，而利托君能做到這一點(diǎn)。
Atosiban是OT的一種肽拮抗劑，與大多數(shù)肽一樣遇到以下問題的困擾由于腸道降解二導(dǎo)致口服生物利用度低。這些化合物必須腸胃外給藥。
開發(fā)用于肽激素受體的非肽配體可望克服這個問題。Merck已經(jīng)報道了選擇性的小分子催生素拮抗劑。除了環(huán)狀六肽之外，Merck提出2，3-二氫化茚基哌啶類和甲苯基哌嗪類作為可口服給藥的OT拮抗劑(5)。在WO 96/22775和US-5756497中，Merck報道了苯并噁嗪基哌啶或苯并噁嗪酮作為OT受體拮抗劑。
業(yè)已報道，特定的磺酰胺能拮抗在催產(chǎn)素受體上的催產(chǎn)素。Elf Sanofi的EP-A-0469984和EP-A-0526348報道了N-磺?；胚犷惸芷鸷笕~加壓素和催產(chǎn)素受體拮抗劑的作用。
美國氰胺公司的US 5889001要求保護(hù)作為加壓素和催產(chǎn)素拮抗劑的吡唑苯并二氮雜衍生物。
吡咯烷衍生物，如吡咯烷酰胺類和以稠合雜芳基取代的吡咯烷現(xiàn)在已經(jīng)開發(fā)作為催產(chǎn)素受體拮抗劑(WO 01/72705)。
發(fā)明概述本發(fā)明第一方面提供式I所示的新穎吡咯烷衍生物
式(I)中的R1選自氫、取代的或未取代的C1-C6-烷基。優(yōu)選R1是氫或甲基。
式(I)中的R2選自氫、取代的或未取代的C1-C6-烷基、取代的或未取代的C1-C6-烷基芳基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的C1-C6-烷基雜芳基、取代的或未取代的C2-C6-烯基、取代的或未取代的C2-C6-烯基芳基、取代的或未取代的C2-C6-烯基雜芳基、取代的或未取代的C2-C6-炔基、取代的或未取代的C2-C6-炔基芳基、取代的或未取代的C2-C6-炔基雜芳基、取代的或未取代的C3-C8-環(huán)烷基、取代的或未取代的雜環(huán)烷基、取代的或未取代的C1-C6-烷基環(huán)烷基、取代的或未取代的C1-C6-烷基雜環(huán)烷基、取代的或未取代的C1-C6-烷基羧基、?；?、取代的或未取代的C1-C6-烷基酰基、取代的或未取代的C1-C6-烷基酰氧基、取代的或未取代的C1-C6-烷基烷氧基、烷氧基羰基、取代的或未取代的C1-C6-烷基烷氧基羰基、氨基羰基、取代的或未取代的C1-C6-烷基氨基羰基、取代的或未取代的C1-C6-烷基?；被?、取代的或未取代的C1-C6-烷基脲基、取代的或未取代的C1-C6-烷基氨基、取代的或未取代的C1-C6-烷基磺酰氧基、磺酰基、取代的或未取代的C1-C6-烷基磺?；喕酋；⑷〈幕蛭慈〈腃1-C6-烷基亞磺?；?、取代的或未取代的C1-C6-烷基硫烷基和取代的或未取代的C1-C6-烷基磺?；被?。
式(I)中的R3選自取代的或未取代的芳基和取代的或未取代的雜芳基。
式(I)中的X選自O(shè)或NR4，其中，R4選自氫、取代的或未取代的C1-C6-烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的C1-C6-烷基芳基、取代的或未取代的C1-C6-烷基雜芳基。優(yōu)選R4是氫或C1-C6-烷基，如甲基或乙基。
或者，式(I)中的R2和R4可與和它們連接的N原子一起形成取代的或未取代的5-8元飽和的或不飽和的雜環(huán)烷基環(huán)，如，哌啶基或哌嗪基，它們可任選地與芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基環(huán)稠合。
式(I)的n是1-3的整數(shù)，優(yōu)選是1或2。
本發(fā)明第二方面提供式I的新穎吡咯烷衍生物作為藥物的用途。
本發(fā)明第三方面提供包含式I化合物及藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體的藥物組合物。
本發(fā)明第四方面提供式I化合物，用來制備可用于治療或預(yù)防流產(chǎn)、早產(chǎn)或痛經(jīng)的藥物組合物。
本發(fā)明第五方面提供式I化合物，用于調(diào)節(jié)OT受體的功能。
本發(fā)明第六方面提供式I化合物在治療與OT受體有關(guān)的疾病(如流產(chǎn)、早產(chǎn)、痛經(jīng))中的應(yīng)用。
本發(fā)明第七方面提供治療與OT受體有關(guān)的疾病如流產(chǎn)、早產(chǎn)、痛經(jīng)的方法，所述方法包括向需要此種治療的患者給予有效量的式I化合物。
本發(fā)明第八方面提供式I化合物的合成方法。
發(fā)明詳述本發(fā)明的一個目的是提供適用于治療和/或預(yù)防流產(chǎn)、早產(chǎn)和痛經(jīng)的物質(zhì)。
本發(fā)明的一個值得注意的目的是提供一些化合物，它們能夠下調(diào)，包括拮抗，哺乳動物特別是人在疾病狀態(tài)中的OT的功能。
本發(fā)明的另一個目的是提供小分子化合物，用于催產(chǎn)素受體的調(diào)節(jié)，優(yōu)選下調(diào)或拮抗。
而且，本發(fā)明還有一個目的是提供所述小分子化合物的制備方法。本發(fā)明的再一個目的是提供一類新的藥物制劑，用于治療流產(chǎn)和痛經(jīng)，和/或由催產(chǎn)素受體介導(dǎo)的疾病。
本發(fā)明的最后一個目的是提供用催產(chǎn)素拮抗劑通過例如拮抗催產(chǎn)素與其受體的結(jié)合來治療和/或預(yù)防由催產(chǎn)素受體介導(dǎo)的失調(diào)(如流產(chǎn))的方法。
以下各段提供構(gòu)成本發(fā)明化合物的各化學(xué)基團(tuán)的定義，除非另行表述的提供更為廣泛的定義，以上定義要統(tǒng)一地應(yīng)用于本說明書和權(quán)利要求書中。
“C1-C6-烷基”指具有1-6個碳原子的單價烷基。例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正己基等。
“芳基”指具有單環(huán)(如苯基)或稠合多環(huán)(如萘基)的含有6-14個碳原子的不飽和芳族碳環(huán)基團(tuán)。優(yōu)選的芳基包括苯基、萘基、菲基等。
“C1-C6-烷基芳基”指帶有芳基取代基的C1-C6-烷基，包括芐基、苯乙基等。
“雜芳基”指單環(huán)雜芳族，或雙環(huán)或三環(huán)稠環(huán)雜芳族基團(tuán)。雜芳族基團(tuán)的具體例子包括任選地取代的吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、異噻唑基、吡唑基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、1，3，4-三嗪基、1，2，3-三嗪基、苯并呋喃基、[2，3-二氫]苯并呋喃基、異苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并三唑基、異苯并噻吩基、吲哚基、異吲哚基、3H-吲哚基、苯并咪唑基、咪唑并[1，2-a]吡啶基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹嗪基、喹唑啉基、2，3-二氮雜萘基、喹喔啉基、噌啉基、1，5-二氮雜萘基、吡啶并[3，4-b]吡啶基、吡啶并[3，2-b]吡啶基、吡啶并[4，3-b]吡啶基、喹啉基、異喹啉基、四唑基、5，6，7，8-四氫喹啉基、5，6，7，8-四氫異喹啉基、嘌呤基、蝶啶基、咔唑基、呫噸基或苯并喹啉基。
“C1-C6-烷基雜芳基”指帶有雜芳基取代基的C1-C6-烷基，包括2-呋喃基甲基、2-噻吩基甲基、2-(1H-吲哚-3-基)乙基等。
“C2-C6-烯基”指優(yōu)選具有2-6個碳原子并且有至少1個或2個烯基不飽和位的烯基基團(tuán)。優(yōu)選的烯基包括乙烯基(-CH＝CH2)、n-2-丙烯基(烯丙基，-CH2CH＝CH2)等。
“C2-C6-烯基芳基”指具有芳基取代基的C2-C6-烯基，包括2-苯基乙烯基等。
“C2-C6-烯基雜芳基”指具有雜芳基取代基的C2-C6-烯基，包括2-(3-吡啶基)乙烯基等。
“C2-C6-炔基”指優(yōu)選具有2-6個碳原子并有至少1-2個炔基不飽和位的炔基基團(tuán)，優(yōu)選的炔基包括乙炔基(-C≡CH)、炔丙基(-CH2C≡CH)等。
“C2-C6-炔基芳基”指具有芳基取代基的C2-C6-炔基，包括苯基乙炔基等。
“C2-C6-炔基雜芳基”指具有雜芳基取代基的C2-C6-炔基，包括2-噻吩基乙炔基等。
“C6-C8-環(huán)烷基”指具有單環(huán)(如環(huán)己基)或多稠環(huán)(如降冰片基)的3-8個碳原子的飽和碳環(huán)基團(tuán)。優(yōu)選的環(huán)烷基包括環(huán)戊基、環(huán)己基、降冰片基等。
“雜環(huán)烷基”指如上定義的C3-C8-環(huán)烷基，其中最多3個碳原子由選自O(shè)、S、NR(R定義為氫或甲基)的雜原子取代。優(yōu)選的雜環(huán)烷基包括吡咯烷、哌啶、哌嗪、1-甲基哌嗪、嗎啉等。
“C1-C6-烷基環(huán)烷基”指有環(huán)烷基取代基的C1-C6-烷基，包括環(huán)己基甲基、環(huán)戊基丙基等。
“C1-C6-烷基雜環(huán)烷基”指有雜環(huán)烷基取代基的C1-C6-烷基，包括2-(1-吡咯烷基)乙基、4-嗎啉基甲基、(1-甲基-4-哌啶基)甲基，等。
“羧基”指基團(tuán)-C(O)OH。
“C1-C6-烷基羧基”指有羧基取代基的C1-C6-烷基，包括2-羧基乙基等。
“?；敝富鶊F(tuán)-C(O)R，其中R包括“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基酰基”指有?；〈腃1-C6-烷基，包括2-乙?；一取?br> “酰氧基”指基團(tuán)-OC(O)R，其中R包括“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基酰氧基”指有酰氧基取代基的C1-C6-烷基，包括2-(乙酰氧基乙基)等。
“烷氧基”指基團(tuán)-O-R，其中R包括“C1-C6-烷基”、或“芳基”、或“雜芳基”或“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”。優(yōu)選的烷氧基包括例如甲氧基、乙氧基、苯氧基等。
“C1-C6-烷基烷氧基”指有烷氧基取代基的C1-C6-烷基，包括2-乙氧基乙基等。
“烷氧基羰基”指基團(tuán)-C(O)OR，其中R包括H、“C1-C6-烷基”、或“芳基”或“雜芳基”或“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基烷氧基羰基”指有烷氧基羰基取代基的C1-C6-烷基，包括2-(芐氧基羰基)乙基等。
“氨基羰基”指基團(tuán)-C(O)NRR’，其中R、R’各自獨(dú)立地包括氫或“C1-C6-烷基”或“芳基”或“雜芳基”或“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基氨基羰基”指有氨基羰基取代基的C1-C6-烷基，包括2-(二甲基氨基羰基)乙基等。
“?；被敝富鶊F(tuán)-NRC(O)R’，其中R，、R’各自獨(dú)立地為氫或“C1-C6-烷基”或“芳基”或“雜芳基”或“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基?；被敝赣絮；被〈腃1-C6-烷基，包括2-(丙?；被?乙基等。
“脲基”指基團(tuán)-NRC(O)NR’R”，其中R、R’、R”各自獨(dú)立地為氫、“C1-C6-烷基”、“C2-C6-烯基”、“C2-C6-炔基”、“C3-C8-環(huán)烷基”、“雜環(huán)烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6-烷基芳基”、“C1-C6-烷基雜芳基”、“C2-C6-烯基芳基”、“C2-C6-烯基雜芳基”、“C2-C6-炔基芳基”、“C2-C6-炔基雜芳基”、“C1-C6-烷基環(huán)烷基”、“C1-C6-烷基雜環(huán)烷基”，其中R’和R”與和它們連接的氮原子一起可任選地形成3-8元雜環(huán)烷基環(huán)。
“C1-C6-烷基脲基”指有脲基取代基的C1-C6-烷基，包括2-(N’-甲基脲基)乙基等。
“氨基甲酸酯”指基團(tuán)-NRC(O)OR’，其中R，R’獨(dú)立地是氫、“C1-C6-烷基”、“C2-C6-烯基”、“C2-C6-炔基”、“C3-C8環(huán)烷基”、“雜環(huán)烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6-烷基芳基”、“C1-C6-烷基雜芳基”、“C2-C6-烯基芳基”、“C2-C6-烯基雜芳基”、“C2-C6-炔基芳基”、“C2-C6-炔基雜芳基”、“C1-C6-烷基環(huán)烷基”、“C1-C6-烷基雜環(huán)烷基”。
“氨基”指基團(tuán)-NRR’，其中R，R’各獨(dú)立地是氫或“C1-C6-烷基”或“芳基”或“雜芳基”或“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”或“環(huán)烷基”或“雜環(huán)烷基”，其中R和R’與和它們連接的氮原子一起可任選地形成3-8元雜環(huán)烷基環(huán)。
“C1-C6-烷基氨基”指有氨基取代基的C1-C6-烷基，包括2-(1-吡咯烷基)乙基等。
“銨”指帶正電荷的基團(tuán)-N+RR’R”，其中R，R’，R”獨(dú)立地是“C1-C6-烷基”、“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”或“環(huán)烷基”或“雜環(huán)烷基”，其中R和R’與和它們連接的氮原子一起可任選地形成3-8元雜環(huán)烷基環(huán)。
“鹵素”指氟、氯、溴、碘原子。
“磺酰氧基”指基團(tuán)-OSO2-R，其中R選自H、“C1-C6-烷基”、鹵素取代的“C1-C6烷基”如-OSO2-CF3基團(tuán)、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6-烷基芳基”、或“C1-C6-烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基磺酰氧基”指有磺酰氧基取代基的C1-C6烷基，包括2-(甲基磺酰氧基)乙基等。
“磺?；敝富鶊F(tuán)-SO2-R，其中R選自H、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6-烷基”、鹵素取代的“C1-C6-烷基”如-SO2-CF3基團(tuán)，“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基磺?；敝赣谢酋；〈腃1-C6-烷基，包括2-(甲基磺酰基)乙基等。
“亞磺?；敝富鶊F(tuán)-S(O)-R，其中R選自H、“C1-C6-烷基”、鹵素取代的“C1-C6-烷基”如-SO-CF3基團(tuán)，“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基亞磺?；敝赣衼喕酋；〈腃1-C6-烷基，包括2-(甲基亞磺酰基)乙基等。
“硫烷基”指基團(tuán)-S-R，其中R包括“C1-C6-烷基”、“芳基”、“雜芳基”、“C1-C6-烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”。優(yōu)選的硫烷基包括甲基硫烷基、乙基硫烷基等。
“C1-C6-烷基硫烷基”指有硫烷基取代基的C1-C6-烷基，包括2-(乙基硫烷基)乙基等。
“磺?；被敝富鶊F(tuán)-NRSO2-R’，其中各R，R’獨(dú)立地是氫或“C1-C6烷基”或“芳基”或“雜芳基”或“C1-C6烷基芳基”或“C1-C6-烷基雜芳基”。
“C1-C6-烷基磺?；被敝赣谢酋；被〈腃1-C6-烷基，包括2-(乙基磺?；被?乙基等。
“取代的”或“未取代的”除非由個別的取代基的定義所限定，否則上述的基團(tuán)，如“烷基”、“烯基”、“炔基”、“芳基”和“雜芳基”等等可任選地被1-5個取代基取代，取代基選自“C1-C6-烷基”、“C2-C6-烯基”、“C2-C6-炔基”、“環(huán)烷基”、“雜環(huán)烷基”、“C1-C6-烷基芳基”、“C1-C6-烷基雜芳基”、“C1-C6-烷基環(huán)烷基”、“C1-C6烷基雜環(huán)烷基”、“氨基”、“銨”、“?；?、“酰氧基”、“?；被?、“氨基羰基”、“烷氧基羰基”、“脲基”、“氨基甲酸酯”、“芳基”、“雜芳基”、“亞磺?；薄ⅰ盎酋；薄ⅰ巴檠趸?、“硫烷基”、“鹵素”、“羧基”、三鹵甲基、氰基、羥基、巰基、硝基等。或者所述的取代還可以包括這樣的情況相鄰的取代基發(fā)生閉環(huán)，尤其當(dāng)涉及鄰位官能取代基時，因此形成如內(nèi)酰胺、內(nèi)酯、環(huán)狀酸酐，還包括為了得到保護(hù)基團(tuán)而閉環(huán)形成的縮醛、硫縮醛、縮醛胺。
“藥學(xué)上可接受的鹽或復(fù)合物”指下面指出的式(I)化合物的鹽或復(fù)合物。這些鹽的例子包括(但不限于)由式(I)化合物和有機(jī)或無機(jī)堿反應(yīng)形成的堿加成鹽，所述的堿為例如選自堿金屬(鈉、鉀、鋰)、堿土金屬(如鈣或鎂)的金屬陽離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，或有機(jī)伯、仲、叔烷基胺。從甲胺、二甲胺、三甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、嗎啉、N-Me-D-葡糖胺、N，N’-二(苯基甲基)-1，2-乙二胺、丁三醇胺(tromethamine)、乙醇胺、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基嗎啉、普魯卡因、哌啶、哌嗪、等衍生得到的胺鹽也屬于本發(fā)明范圍。
還包括與無機(jī)酸和有機(jī)酸形成的酸加成鹽。無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等；有機(jī)酸如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、蘋果酸、富馬酸、馬來酸、抗壞血酸、苯甲酸、鞣酸、雙羥萘酸(pamoic acid)、海藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸、和聚半乳糖醛酸。
“藥學(xué)活性衍生物”指在給予病人后能夠直接或間接提供本說明書所述活性的任何化合物。
“對映體過量”(ee)指通過不對稱合成(即涉及非外消旋的起始材料和/或試劑的合成)或包含至少一個對映選擇性步驟的合成所得到的產(chǎn)物?！癳e”是主要對映體對次要對映體的過量的百分?jǐn)?shù)[％ee＝％主要-％次要]。當(dāng)不存在不對稱合成時，通常得到外消旋產(chǎn)物，但它們也具有作為OT-R拮抗劑的活性。
術(shù)語“流產(chǎn)”或術(shù)語“早產(chǎn)”應(yīng)指妊娠的正常結(jié)束之前胎兒從子宮的娩出，或更具體地，在妊娠的第37周之前發(fā)生分娩伴隨子宮頸管的消失和擴(kuò)張。這可伴隨有或可不伴隨有陰道出血或膜破裂。
術(shù)語“痛經(jīng)”應(yīng)指月經(jīng)疼痛。
術(shù)語“剖腹產(chǎn)”應(yīng)指腹部和子宮壁切開以便娩出胎兒。
本發(fā)明還包括式I化合物的幾何異構(gòu)體、光學(xué)活性形式、對映體、非對映體、它們的混合物、外消旋體以及藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明化合物是式I所示的化合物。
式(I)中R1選自氫、取代的或未取代的C1-C6烷基，較佳為R1是氫或甲基。
式(I)中R2選自氫、取代的或未取代的C1-C6-烷基、取代的或未取代的C1-C6-烷基芳基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的C1-C6-烷基雜芳基、取代的或未取代的C2-C6烯基、取代的或未取代的C2-C6-烯基芳基、取代的或未取代的C2-C6-烯基雜芳基、取代的或未取代的C2-C6炔基、取代的或未取代的C2-C6-炔基芳基、取代的或未取代的C2-C6-炔基雜芳基、取代的或未取代的C3-C8環(huán)烷基、取代的或未取代的雜環(huán)烷基、取代的或未取代的C1-C6-烷基環(huán)烷基、取代的或未取代的C1-C6-烷基雜環(huán)烷基、取代的或未取代的C1-C6-烷基羰基、?；⑷〈幕蛭慈〈腃1-C6-烷基?；?、取代的或未取代的C1-C6-烷基酰氧基、取代的或未取代的C1-C6-烷氧基、烷氧基羰基、取代的或未取代的C1-C6-烷基烷氧基羰基、氨基羰基、取代的或未取代的C1-C6-烷基氨基羰基、取代的或未取代的C1-C6-烷基?；被?、取代的或未取代的C1-C6-烷基脲基、取代的或未取代的C1-C6-烷基氨基、取代的或未取代的C1-C6-烷基磺酰氧基、磺?；?、取代的或未取代的C1-C6-烷基磺?；?、亞磺酰基、取代的或未取代的C1-C6-烷基亞磺?；⑷〈幕蛭慈〈腃1-C6-烷基硫烷基、取代的或未取代的C1-C6-烷基磺酰基氨基。
式(I)中的R3選自取代的或未取代的芳基和取代的或未取代的雜芳基。
式(I)中的X選自O(shè)或NR4，其中R4自H、取代的或未取代的C1-C6-烷基、取代的或未取代的芳基、取代的或未取代的雜芳基、取代的或未取代的C1-C6-烷基芳基和取代的或未取代的C1-C6-烷基雜芳基。優(yōu)選R4是H或C1-C6烷基，如甲基或乙基。
或者，式(I)中的R2和R4可與和它們連接的N原子一起形成取代的或未取代的5-8元飽和或不飽和的雜環(huán)烷基環(huán)，如哌啶基或哌嗪基，它們可任選地與芳基、雜芳基、環(huán)烷基或雜環(huán)烷基環(huán)稠合。
式(I)中的n是1-3的整數(shù)，優(yōu)選是1或2。
式I化合物中優(yōu)選的R2選自H，?；?優(yōu)選乙?；?，任選地被取代的或未取代的C1-C6烷氧基取代的芳基，如甲氧基苯基，C1-C3烷基如甲基或乙基，任選地被取代的或未取代的酰基或酯基取代，優(yōu)選甲酸或乙酸叔丁酯、N-(2-吡咯烷-1-基-乙基)-乙酰胺，和任選地被取代的或未取代的雜芳基取代，優(yōu)選N-吡唑。
式I化合物中優(yōu)選的R3選自芳基，任選地被取代的或未取代的芳基所取代。特別優(yōu)選的R3是聯(lián)苯基或2-甲基聯(lián)苯基。
本發(fā)明的一個特別優(yōu)選的實(shí)施方案是式I的吡咯烷衍生物，其中X是O或NH，n是1或2。
本發(fā)明的另一個優(yōu)選的實(shí)施方案是式I的吡咯烷衍生物，其中X是NR4，其中R4和R2形成飽和的或不飽和的、取代的或未取代的、稠合的或未稠合的帶有N原子的雜環(huán)，它們優(yōu)選與5或6元環(huán)連接，更優(yōu)選與哌啶、甲基哌嗪或異吲哚-1，3-二酮連接。
式I的化合物可用來治療疾病。
特別是，式I化合物適用于治療以下的失調(diào)如流產(chǎn)、早產(chǎn)、痛經(jīng)，或用于在剖腹產(chǎn)前停止分娩。本發(fā)明的化合物對治療流產(chǎn)、早產(chǎn)和痛經(jīng)特別有用。
優(yōu)選的是，式I的化合物單獨(dú)或以藥物組合物的形式適用于調(diào)節(jié)催產(chǎn)素的功能，因此特別可以治療和/或預(yù)防由催產(chǎn)素受體介導(dǎo)的失調(diào)。這樣的調(diào)節(jié)優(yōu)選涉及OT-R功能的抑制，主要是通過對哺乳動物特別是人的催產(chǎn)素受體的拮抗作用來實(shí)現(xiàn)。
催產(chǎn)素受體的異?；钚曰虺钚猿３Ｅc各種失調(diào)有關(guān)，包括上述的失調(diào)或疾病狀態(tài)。因此，本發(fā)明化合物可通過調(diào)節(jié)OT-R功能或通路來治療各種失調(diào)。OT-R功能或通路的調(diào)節(jié)可包括下調(diào)和/或抑制催產(chǎn)素受體。本發(fā)明的化合物可單獨(dú)使用或與其它藥劑(如其它OT-R調(diào)節(jié)劑)聯(lián)合使用。
當(dāng)用作藥物時，本發(fā)明的吡咯烷衍生物通常以藥物組合物的形式給藥。因此，包含式I的化合物和藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑的藥物組合物也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道適用于配制藥物組合物的各種載體、稀釋劑或賦形劑。
本發(fā)明的化合物與常規(guī)使用的助劑、載體、稀釋劑或賦形劑一起，可被配制成藥物組合物及其單位劑型，這樣的劑型可以固體(如片劑或填充的膠囊)、液體(如溶液、懸浮液、乳液、酏劑)或填充這些物質(zhì)的膠囊，它們都用來口服，或者以滅菌可注射溶液的形式腸胃外(包括皮下)使用。這樣的藥物組合物或其單位劑型可按常規(guī)的比例包含各種成分，含有或不含有另外的活性化合物或成分，這樣的單位劑型可含與要使用的日劑量范圍相當(dāng)?shù)挠腥魏魏线m的有效量的活性成分。
當(dāng)用作藥物時，本發(fā)明的吡咯烷衍生物通常以藥物組合物的形式給予。這樣的組合物可按制藥行業(yè)已知的方法制備，并且包含至少一種活性化合物。一般，本發(fā)明化合物以藥學(xué)上的有效量給予。實(shí)際上給予的化合物的量通常由醫(yī)師決定，要加以考慮的因素包括要治療的病況、所選擇的給藥途徑、給予的實(shí)際化合物、年齡、體重、和病人個體的反應(yīng)、病人癥狀的嚴(yán)重程度，等等。
本發(fā)明的藥物組合物可通過多種途徑給藥，包括口服、直腸、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)和鼻內(nèi)。取決于所選的給藥途徑，化合物優(yōu)選配制為可注射的或口服的組合物。用于口服給藥的組合物可采取大液體溶液或懸浮液或散裝粉末劑的形式。但是更為普通的是，組合物作成單位劑型，以便精確給藥。術(shù)語“單位劑型”指適用于人或其它哺乳動物的單次劑量的物理上分開的單位，每個單位含有計算好可以產(chǎn)生所需治療效果預(yù)定量的活性物質(zhì)，與合適的藥物賦形劑合在一起。典型的單位劑型包括預(yù)充填的、預(yù)測量的液體組合物的安瓿或注射劑，或固體組合物形式的藥丸、藥片、膠囊等。在這些組合物中，吡咯烷化合物通常是少量成分(約0.1-50％重量，優(yōu)選約1-40％重量)，剩余的是有助于形成所需劑型的各種賦形劑或載體和加工助劑。
適合于口服給藥的液體形式可包括合適的水性或非水性賦形劑，含有緩沖劑、懸浮劑和分配劑、色料、調(diào)味劑等。固體形式可包括例如以下成分或類似性質(zhì)的化合物的任何一種粘合劑(如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠)、賦形劑(如淀粉或乳糖)、崩解劑(如海藻酸、Primogel或玉米淀粉)、潤滑劑(如硬脂酸鎂)、助流劑(如膠體二氧化硅)、甜味劑(如蔗糖或糖精)、或調(diào)味劑(如薄荷、水楊酸甲酯或橙味香料)。
可注射組合物通?；诳勺⑸涞臏缇}水或磷酸緩沖的鹽水或本領(lǐng)域已知的其它可注射的載體。如上所述，式I的吡咯烷衍生物在這種組合物中通常是少量成分，常常是在0.05-10％重量的范圍，剩余的是可注射的載體等。
上述用于口服給藥的組分或可注射的組合物僅僅是代表性的。其它材料以及加工技術(shù)等等見文獻(xiàn)(6)的第8部分。
本發(fā)明的化合物也可以持續(xù)釋放的形式或從持續(xù)釋放給藥系統(tǒng)給藥。代表性的持續(xù)釋放材料的敘述見文獻(xiàn)(6)。
本發(fā)明的還有一個目的是制備式I所示吡咯烷衍生物的方法。
在本發(fā)明中舉例說明的吡咯烷衍生物可從容易得到的或先前敘述過的起始材料用以下的一般方法和程序進(jìn)行制備。應(yīng)該認(rèn)識，在此給出了通用的或優(yōu)選的實(shí)驗(yàn)條件(即反應(yīng)溫度、時間、試劑的摩爾數(shù)、溶劑等等)，但其它的實(shí)驗(yàn)條件也可以使用，除非有另外的說明。最優(yōu)反應(yīng)條件可隨著所用的具體反應(yīng)物或溶劑而變化，但這樣的條件可通過常規(guī)的優(yōu)化程序由本領(lǐng)域技術(shù)人員確定。
本發(fā)明化合物的合成式I化合物的合成路線的例子敘述如下。
以下的縮寫分別指如下的定義ACN(乙腈)Boc(叔丁氧羰基)CDCl3(氘化氯仿)cHex(環(huán)己烷)DCM(二氯甲烷)DECP(氰基膦酸二乙酯)DIC(二異丙基碳二亞胺)DIEA(二異丙基乙基胺)DMAP(4-二甲基氨基吡啶)DMF(二甲基甲酰胺)DMSO(二甲基亞砜)DMSO-d6(氘化二甲基亞砜)EDC(1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺)
EtOAc(乙酸乙酯)Et2O(乙醚)HATU(O-(7-氮雜苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟膦酸鹽))K2CO3(碳酸鉀)MEK(甲基乙基酮)MgSO4(硫酸鎂)NaH(氫化鈉)NaHCO3(碳酸氫鈉)nBuLi(正丁基鋰)NMO(單水合N-甲基嗎啉N-氧化物)PetEther(石油醚)OMs(O-甲基磺酸酯)OTs(O-甲苯磺酸酯)TBAF(氟化叔丁基銨)TBDMS(叔丁基二甲基甲硅烷基)TBTU(O-苯并三唑基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽)TEA(三乙胺)TFA(三氟乙酸)THF(四氫呋喃)TPAP(過釕酸四丙基銨)rt(室溫)a)烷氧基吡咯烷R2部分的引入通式Ia(式I中X是O)的烷氧基吡咯烷衍生物(其中R1、R2、R3和n如式I所定義的)可從相應(yīng)的式II(其中R1、R3和n如上定義)的吡咯烷衍生物制備。使用合適的烷基化劑R2-LG(其中LG是合適的離去基團(tuán)，包括Cl、Br、I、OMs、OTs)使式II的醇衍生物發(fā)生直接O-烷基化?；蛘?，化合物Ia可通過Mitsunobu型反應(yīng)得到，如流程1所示。
流程1 合成式Ia(式I中X是O)烷氧基吡咯烷衍生物的另一個途徑可以是制備通式IIa的中間體(其中R1、R3、n和LG如上定義)，方法是將式II所示醇與MsCl、TsCl或PPh3Br2之類鹵化劑反應(yīng)。然后用R2OM(其中R2如上定義，M是H或金屬，如Na)取代離去基團(tuán)LG，產(chǎn)生式Ia所示化合物。
肟部分的引入通式II的化合物(其中R1、R3和n如上定義)可從通式IV的化合物(其中R3和n如上定義，PG1是合適的醇保護(hù)基，優(yōu)選TBDMD)制得。將通式IV的酮與通式V的羥基胺衍生物(其中R1如上定義)反應(yīng)。經(jīng)過脫保護(hù)步驟用標(biāo)準(zhǔn)的合成技術(shù)除去PG1，如流程2所示。
流程2 羥基胺V，如果不能購得，可例如通過N-Boc-羥基胺與相應(yīng)的式VI烷基化劑(其中R1如上定義，Xa＝Cl、Br、I)在標(biāo)準(zhǔn)條件下反應(yīng)進(jìn)行合成，如流程3所示。
流程3 酮基吡咯烷的形成通式IV的酮基吡咯烷(其中R3、n、PG1如上定義)可通過用合適的氧化劑(如DMSO/(COCl)2/TEA(Swern條件))或TPAP在NMO存在下處理相應(yīng)的式VII羥基吡咯烷衍生物(其中R3、n、PG1如上定義)得到，如流程4所示。
流程4 還原步驟通式VII的羥基吡咯烷衍生物(其中R3和n如上定義，PG1是保護(hù)基)可通過還原相應(yīng)的式VIII所示吡咯烷羧酸衍生物(其中R3和n如上定義，R7是H或烷基，PG2是合適的保護(hù)基)，在合適的保護(hù)/脫保護(hù)步驟之后得到，如流程5所示。優(yōu)選的還原劑是當(dāng)R7是烷基時為LiBH4或LAH或當(dāng)R7是H時為BH3.DMS。
流程5 偶合步驟通式VIII的保護(hù)的吡咯烷羧酸衍生物(其中R3、n、R7和PG2如上定義)可通過通式IX所示化合物(其中n、R7和PG2如上定義，PG3是H或適當(dāng)?shù)腘-保護(hù)基，優(yōu)選Boc)與通式R3-CO-Y(其中R3如上定義，Y是合適的離去基團(tuán))表示的酰化劑反應(yīng)而加以制備，如流程6所示。
流程6 優(yōu)選的酰化劑是酰氯(Y＝Cl)或羧酸(Y＝OH)與合適的肽偶合劑(如DIC、EDC、HATU、DECP等)聯(lián)用。
一般，起始材料是式IX化合物，它可從商業(yè)來源得到(如保護(hù)的3-羥基脯氨酸、高-3-羥基脯氨酸、3-羥基吡咯烷5-丙酸)。
其它起始材料(如式XV、XVI、XIX和XX)可從市售的式IX化合物經(jīng)式XII中間體而得到。
在這種情況下，通式IX的第一羧酸衍生物可被還原為通式XII的衍生物，其中PG2、PG3、R7如上定義，n＝2或3，如流程7所示。
流程7 然后，將式XII所示化合物進(jìn)行經(jīng)典的保護(hù)/脫保護(hù)和官能團(tuán)轉(zhuǎn)化，特別是一或二碳同系化(homologation)程序，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的(7，8)。一個優(yōu)選的方法包括通式XII(其中PG2、PG3如上定義，n＝2或3)的化合物的一碳同系化，方法是通過用氰化物取代離去基團(tuán)，接著水解產(chǎn)生通式XV的羧酸(其中PG2、PG3和n如上定義)或者還原產(chǎn)生通式XVI的氨基化合物(其中PG2、PG3、n如上定義)，如流程8所示。
流程8 在二碳同系化的情況下，一個優(yōu)選的程序包括使通式XVIII的醛(通過通式XII的化合物的氧化得到)，其中PG2、PG3、n如上定義，與Wittig-Horner試劑反應(yīng)，如流程9所示。然后將這樣得到的化合物還原為通式XIX的化合物(其中PG2、PG3、R7如上定義)。
流程9
上述四個主要的化學(xué)轉(zhuǎn)化，即偶合步驟、還原步驟、肟形成和R2基團(tuán)的引入可以按照不同的次序進(jìn)行。合成順序的最佳選擇依賴于取代基R1-R4、n、X的性質(zhì)和其它參數(shù)，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解的。
b)氨基吡咯烷R2基團(tuán)的引入通式Ib(通式I中X是NR4)的氨基烷基吡咯烷衍生物(其中R1-R4和n如通式I所定義)可從a)中按照流程1由式II化合物得到的相應(yīng)吡咯烷衍生物IIa(其中R1、R3、n、LG如上定義)通過用相應(yīng)的胺HNR2R4取代LG基團(tuán)而制得，如流程10所示。
流程10 制備通式Ib(通式I中X是NR4)的氨基烷基吡咯烷衍生物(其中R1-R4和n如上定義)的另一個方法如流程11所示。按照這個方法，通式II所示吡咯烷衍生物(其中R1、R3和n如上定義)(可從式IV化合物得到，見流程2)的羥基部分用已知的條件如DMSO/(COCl)2，TEA(Swern條件)或Dess Martin試劑轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的醛。該醛然后與胺HNR2R4(其中R2和R4如上定義)在還原條件下反應(yīng)。
流程11 在通式Ib(其中R4是H，R1、R2、R3和n如上定義)的氨基烷基吡咯烷衍生物的情況下，可以采用另一個合成方法。通式Ib的氨基烷基吡咯烷衍生物(式I中X是NH)可以從式III所示相應(yīng)的氨基烷基吡咯烷衍生物(其中R1、R3和n如上定義)通過與R2-LG(其中R2和LG如上定義)直接烷基化得到，或者與式R2-CHO的醛(其中R2如上定義)和合適的還原劑還原烷基化而得到，如流程12所示。
流程12 式III的氨基烷基衍生物(其中R1、R3和n如上定義)可從式II的羥基烷基吡咯烷(其中R1、R3和n如上定義)(它可從式IV化合物得到，見流程2)或從通式IIa的衍生物(其中R1、R3、n和LG如上定義)(它可從式II化合物按流程1得到)通過已知的官能團(tuán)轉(zhuǎn)化程序得到。這種轉(zhuǎn)化的兩個例子見流程13。
流程13 對于式Ib化合物(式I中X是NR4)，其中R2是COR5、SO2R5、COOR5、CONR5R6、SO2NR5R6，其中R5和R6是取代的或未取代的烷基或芳基，R4是H或取代的或未取代的烷基或芳基，上述流程10、11和12的方法是不適用的。
在這種情況下，式Ib的這些化合物可通過將通式Ic(通式Ib的化合物，其中R2是H)(按照流程10、11或12的方法得到)，用適當(dāng)?shù)孽；瘎?包括酰氯或羧酸)與肽偶聯(lián)劑(如DIC或EDC)、磺化劑和其它處理聯(lián)用而得到，如流程14所示。
流程14 其它步驟，即肟部分的引入、酮基吡咯烷的形成、還原步驟和偶聯(lián)步驟已經(jīng)在上面的a)項(xiàng)敘述。
然而，如烷氧基吡咯烷的合成那樣，上述四個主要的化學(xué)轉(zhuǎn)化可用不同的順序進(jìn)行。合成順序的最合適選擇取決于取代基R1-R4、n、X的性質(zhì)和其它參數(shù)，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解的。
作為例子，通式I的化合物(其中R1-R4、n和X如上定義)可從通式X的酮基吡咯烷(其中R2、R3、n和X如上定義)與羥基胺V(其中R1如上定義)的反應(yīng)而得到，如流程15所示，這樣就引入了肟部分。
流程15 式X的酮基吡咯烷可通過通式XI的醇(其中R2、R3、n和X如上定義，PG2是H或適當(dāng)?shù)腛-保護(hù)基)的氧化得到，反應(yīng)條件與通式VII的化合物轉(zhuǎn)化為通式IV的化合物類似，如流程16所示。
流程16 通式XI的化合物(其中R2、R3、n、PG2和X如上定義)可將R2基團(tuán)引入通式VII的化合物(其中R3、n和PG1如上定義)而得到，方法按照在流程1、10、11、12、13或14中敘述的其中一種方法。方法的選擇取決于R3、R2、n和X的性質(zhì)，是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的，以及合適的保護(hù)/脫保護(hù)步驟的選擇和順序，如流程17所示。
流程17 式VII化合物的獲得類似還原步驟，見上面敘述。
如果使用對映體純的起始物質(zhì)，上述諸流程中所列的反應(yīng)順序可提供對映體純的式I化合物。取決于使用的是市售的式IX化合物的(R)-還是(S)-對映體作為起始物質(zhì)，可得到(R)-以及(S)-對映體。
上述諸流程中所列的反應(yīng)順序通常提供(E)-和(Z)-異構(gòu)體的混合物，相對于在吡咯烷環(huán)的環(huán)外雙鍵上的取代基。(E)/(Z)異構(gòu)體可通過業(yè)內(nèi)熟知的標(biāo)準(zhǔn)色譜技術(shù)加以分離，如反相高壓液體色譜(HPLC)或硅膠快速色譜(FC)?；蛘?，通過在合適的溶劑或溶劑混合物中選擇性結(jié)晶可依次富集(E)/(Z)異構(gòu)體中任何一個。環(huán)外雙鍵的絕對構(gòu)型的指認(rèn)用NMR技術(shù)進(jìn)行，這在文獻(xiàn)中有詳細(xì)的記述，也是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的(對例如肟官能團(tuán)的構(gòu)型指認(rèn)，見(9))。為了增加一個異構(gòu)體的總得率(通常是Z-異構(gòu)體)，可通過在含微量酸(如HCl)的有機(jī)溶劑中再循環(huán)來小心地重新異構(gòu)化另一個異構(gòu)體(通常是E-異構(gòu)體)，然后再通過色譜和/或結(jié)晶來進(jìn)行(E)/(Z)分離。
按照另一個的一般方法(流程18)，采用諸如以下實(shí)施例中描述的合適的相互轉(zhuǎn)化技術(shù)，可將式I化合物轉(zhuǎn)變?yōu)槠渌絀化合物。
流程18
如果上述的一般合成方法不適合得到式I化合物和/或不是合成式I化合物的必需中間體，應(yīng)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適當(dāng)?shù)闹苽浞椒?。一般，任何一個式I化合物的合成路線取決于每一分子的特定的取代基，還取決于所需的中間體是否容易得到；這樣的因素是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)該理解的。所有的保護(hù)和脫保護(hù)的方法見(7，10)。
實(shí)施例本發(fā)明通過以下實(shí)施例加以說明，但它們不構(gòu)成對本發(fā)明范圍的限制。
本發(fā)明化合物可通過以上所提供的不同的合成路線來合成。以下實(shí)施例說明合成式I化合物及測定其生物活性的優(yōu)選方法。
實(shí)施例1(3EZ，5S)-5-(羥基甲基)-1-[(2’-甲基-1，1’-聯(lián)苯-4-基)羰基]吡咯烷-3-酮O-甲基肟(1)(式II或式Ia化合物，其中R2為H) 中間體(1a)1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代-L-脯氨酸
酮基吡咯烷的形成將購得的(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-羥基-2-吡咯烷羧酸(30g，0.13mol)溶解在丙酮(1500ml)中。將機(jī)械攪拌器放在燒瓶中劇烈攪拌溶液。將三氧化鉻(66.7g，0.667mol)溶解在水(40ml)中，加入濃硫酸(53.3ml)和足夠的水，使溶液體積達(dá)到115ml，制成新鮮的8N鉻酸溶液。然后在繼續(xù)劇烈攪拌下經(jīng)30分鐘滴加此8N鉻酸溶液，用冰浴使反應(yīng)的放熱維持在最佳的溫度25℃。加完鉻酸后，再攪拌反應(yīng)混合物15分鐘，維持最佳溫度25℃。然后加入甲醇(20ml)淬滅反應(yīng)混合物。用冰浴控制放熱，如果需要，直接向反應(yīng)混合物加入少量碎冰。通過Celite墊過濾反應(yīng)混合物，然后真空濃縮。得到的酸性溶液用乙酸乙酯(3×300ml)提取，用鹽水(2×100ml)洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥并真空濃縮。粗產(chǎn)物用乙酸乙酯重結(jié)晶，得到白色結(jié)晶產(chǎn)物(2S)-1-(叔丁氧基羰基)-4-氧代-2-吡咯烷羧酸(22.55g，76％)(1a)。
1H NMR(360MHZ，CDCl3)1.4(m，9H)，2.5-3.0(m，2H)，3.7-3.9(m，2H)，4.75(dd，1H)。
中間體1b(4EZ)-1-(叔丁氧羰基)-4-(甲氧基亞氨基)-L-脯氨酸 肟部分的引入在含三乙胺(5.5g，55mmol)的氯仿(100ml)中制備含(2S)-1-(叔丁氧羰基)-4-氧代-2-吡咯烷羧酸(中間體1a，5.0g，21mmol)和O-甲基羥基胺鹽酸鹽(2.7g，32.8mmol)的溶液。將反應(yīng)混合物室溫攪拌過夜，然后除去溶劑。得到的粗反應(yīng)混合物溶解在乙酸乙酯(150ml)中，用1N HCl(40ml)快速洗滌。酸性層用乙酸乙酯(3×20ml)提取，用鹽水洗滌合并的有機(jī)層，用硫酸鎂干燥，過濾，真空除去溶劑。分離出所需的產(chǎn)物(1b)(5.3g，94％)，為淡黃色油。
1H NMR(400MHz，CDCl3)；1.45(m，9H)，2.8-3.2(m，2H)，3.9(s，3H)，4.2(m，2H)，4.5-4.7(m，1H)。
中間體1c(2S，4EZ)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-1，2-二羧酸1-叔丁基-2-甲酯 制備肟醚(2S，4EZ)-1-(叔丁氧羰基)-4-(甲氧基亞氨基)-2-吡咯烷羧酸(中間體1b，0.648g，2.5mmol)在1∶1甲醇和甲苯混合物(35ml)中的溶液。在室溫、氮?dú)?、攪拌下，將三甲基甲硅烷基重氮甲?3.8ml 2M的己烷溶液，7.5mmol)滴加到該溶液中。在氮?dú)忉尫磐瓿珊?，將得到的黃色溶液真空蒸發(fā)，殘留物經(jīng)硅膠墊過濾，用乙酸乙酯洗脫。濾液除去溶劑后得到甲酯產(chǎn)物(1c)，為黃色油(0.646g，95％得率)。
中間體1d(2S，4EZ)-4-(甲氧基亞氨基)-1-[(2’-甲基[1，1’-聯(lián)苯基]-4-基)羰基]-2-吡咯烷羧酸甲酯 R3部分的偶合制備含(2S，4EZ)-4-(甲氧基亞氨基)-1，2-吡咯烷二羧酸1-叔丁基-2-甲酯(中間體1c，0.892g，3.28mmol)在無水DCM(28ml)中的溶液。滴加TFA(20％，7ml)?；旌衔锸覝財嚢?0分鐘。蒸發(fā)溶劑，分離所需的產(chǎn)物(0.564g，定量)，為黃色油。將它直接溶解在DCM和DMF7∶3混合物(30ml)中，用2’-甲基[1，1’-聯(lián)苯]-4-羧酸(0.765g，3.60mmol)和4-二甲基氨基吡啶(0.880g，7.21mmol)處理。在0℃緩慢加入EDC(0.691g，3.60mmol)，反應(yīng)混合物室溫攪拌過夜。用水(2×20ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，過濾，真空蒸發(fā)。
中間體1e(2S，4EZ)-4-(甲氧基亞氨基)-1-[(2’-甲基[1，1’-聯(lián)苯基]-4-基)羰基]-2-吡咯烷羧酸 R2部分的引入(2S，4EZ)-4-(甲氧基亞氨基)-1-[(2’-甲基[1，1’-聯(lián)苯基]-4-基)羰基]-2-吡咯烷羧酸甲酯(中間體1d，391mg，1.06mmol)在含二噁烷(9ml)、水(3ml)和NaOH(1.13ml，1.6N溶液)的溶液中室溫攪拌4h。真空除去二噁烷，用0.1N HCl將溶液處理成酸性。用乙酸乙酯提取，用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到所需產(chǎn)物(1e)(342mg，得率＝91％)。
1H NMR(300MNz，CDCl3)2.23(s，1.5H)，2.25(s，1.5H)，3.10(m，2H)，3.83(s，1.5H)，3.85(s，1.5H)，4.10(m，2H)，5.18(m，1H)，7.18(m，4H)，7.37(m，2H)，7.57(m，2H)。
實(shí)施例I將(2S，4EZ)-4-(甲氧基亞氨基)-1-[(2’-甲基[1，1’-聯(lián)苯基]-4-基)羰基]-2-吡咯烷羧酸(中間體1e，50mg，0.14mmol)溶解在THF(1ml)中，用氯甲酸乙酯(163μl，0.17mmol)和TEA(29μl，0.76mmol)于-15℃處理。在此溫度和在氮?dú)夥障聰嚢璺磻?yīng)混合物30分鐘，然后加入硼氫化鈉(13.4mg在0.65ml水中，0.35mmol)。然后溫?zé)岬绞覝亍?h后，用2.5ml 1N HCl溶液淬滅反應(yīng)，用EtOAc提取3次。合并的有機(jī)層用0.1N HCl溶液洗滌(3次)，水洗滌(3次)，用硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到化合物(1)。
得率12％(6mg)外觀黃色油MS(APCI+)339(M+1)HPLC純度90.1％實(shí)施例II(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(2)，(3Z，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(3)，(3E，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(4)(式II或Ia化合物，其中R2是H)中間體2a(4R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-羥基-L-脯氨酸甲酯(式VIII化合物) 向4-聯(lián)苯基羧酸(17.5g，88.3mmol)在DMF(100ml)中的溶液加入EDC(16.9g，88.3mmol)、HOBt(11.9g，88.3mmol)和DIEA(27.9ml，183.9mmol)?；旌衔锸覝財嚢?0分鐘，然后加入反式-羥基-L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽(10.7g，73.6mmol)，室溫、氮?dú)夥障路胖?8h。然后在高真空下濃縮，溶解于乙酸乙酯中，用水、1N鹽酸溶液、飽和碳酸氫鈉溶液和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。得到的粗產(chǎn)物用快速色譜法純化，洗脫液為環(huán)己烷/乙酸乙酯90∶10(化合物2a)。
得率53％(12.6g)外觀棕色固體
1H NMR(CDCl3)2.11(m，1H)，2.36(m，1H)，3.58(d，J＝11.5Hz，1H)，3.77(s，3H)，3.86(dd，J＝3.4以及11.1Hz，1H)，4.51(s，1H)，4.86(t，J＝8.3Hz，1H)，7.33-7.62(m，9H)。
中間體2b(3R，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)-吡咯烷-3-醇 在0℃、氮?dú)夥罩校瑢⑴饸浠?600mg，25.8mmol)緩慢加入甲酯(2a)(5.6g，17.2mmol)在THF(80ml)的溶液中?；旌衔镌谑覝財嚢?h，然后用水中和硼氫化物。過濾含化合物(2b)的白色沉淀，用乙醚洗滌。得率82％(4.2g)外觀白色固體1H NMR(DMSO)1.90-2.02(m，2H)，3.24-3.30(m，2H)，3.57(m，2H)，3.67(m，1H)，4.18(m，1H)，4.28(m，1H)，4.80(brs，1H)，7.39-7.74(m，9H)。APCI(+)299(M+1)。
中間體2c(3R，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧}甲基)吡咯烷-3-醇(式VII化合物)
將二醇(2b)(4.2g，14.1mmol)和TBDMS-Cl(1.9g，12.6mmol)在DMF(40ml)中的溶液用DCM(150ml)稀釋，用DBU(421μl，2.81mmol)和TEA(1.96ml，14.1mmol)處理。在氮?dú)夥障率覝財嚢璺磻?yīng)混合物16h。用乙酸乙酯稀釋后，用水洗滌有機(jī)相，水相用乙酸乙酯提取，合并的有機(jī)相用飽和氯化銨溶液洗滌，并用鹽水洗滌3次，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。得到的粗產(chǎn)物用快速色譜法提純，洗脫液為DCM/MeOH 95∶5(化合物2c)。得率75％(4.39g)外觀白色粉末1H NMR(DMSO)0.03(s，6H)，0.88(s，9H)，1.92-2.04(m，2H)，3.30(m，1H)，3.54(m，1H)，3.72(brd，J＝9.0Hz，1H)，3.92(m，1H)，4.20(m，1H)，4.30(m，1H)，4.83(m，1H)，7.37-7.56(m，5H)，7.77(m，4H)。
LC/MS(ESI，+)412(M+1)中間體2d(5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧}甲基)吡咯烷-3酮(式IV化合物)
于-78℃，氮?dú)夥障聦⒏蒁MSO(2.04ml，28.8mmol)在DCM(15ml)中的溶液緩慢加入草酰氯(1.34ml，15.7mmol)在DCM(5ml)中的溶液中?；旌衔飻嚢?0分鐘，然后緩慢加入醇(2c)(5.35g，13.1mmol)在DCM(50ml)中的溶液。在-78℃攪拌混合物3h，逐滴用TEA(9.06ml，65.3mmol)處理，溫?zé)岬绞覝?。用鹽水、1N HCl溶液、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到化合物2d。得率91％(4.88g)外觀棕色油1H NMR(CDCl3)0.06(s，6H)，0.86(s，9H)，2.49-2.70(m，2H)，3.69(m，1H)，3.84(m，1H)，3.98(m，1H)，4.20(m，1H)，5.07(m，1H)，7.37-7.65(m，9H)。LC/MS(ESI，+)410(M+1)中間體2e(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-({[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧}甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟 將酮2d(4.78g，11.7mmol)、甲基羥基胺鹽酸鹽(2.44g，29.2mmol)和TEA(4.05ml，29.2mmol)在氯仿(80ml)中的混合物于65℃加熱16小時，用鹽水、1N HCl、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮，得到化合物2e。
得率86％(4.41g)外觀棕色油1H NMR(CDCl3)0.06(s，6H)，0.88(s，9H)，2.68-2.90(m，2H)，3.42(m，1H)，3.78(s，1.5H)，3.83(s，1.5H)，4.1(m，2H)，4.31(m，1H)，4.83(m，1H)，7.34-7.64(m，9H)。
LC/MSESI(+)439(M+1)最終化合物(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(2)；(3Z，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(3)(3E，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(4)(式II或式Ia化合物，R2＝H) 將TBAF(14.1ml的1M THF溶液，14.1mmol)加入到肟(2e)(4.13g，9.41mmol)在THF(100ml)的溶液中。反應(yīng)混合物室溫攪拌過夜，濃縮，用乙酸乙酯稀釋。有機(jī)相用水、1N HCl溶液、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。得率定量的EZ混合物(2)外觀白色泡沫LC/MSESI(+)325(M+1)E和Z兩個異構(gòu)體用快速色譜法分離，洗脫液為乙酸乙酯/環(huán)己烷80∶20。
低極性餾分(3E，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(3)Rf0.36(AcOEt/環(huán)己烷80∶20)得率25％(765mg)外觀白色泡沫1H NMR(DMSO)2.64(brs，2H)，3.20-3.7(m，3H)，3.80(s，3H)，3.8-4.6(m，2H)，5.00(t，J＝8.0Hz，1H)，7.37-7.60(m，9H)。
IR(film)3292，1604，1417，1040
MS(APCI，+)325(M+1)元素分析(C19H20N2O3；0.2H2O)計算值C69.58；H6.27；N8.54；實(shí)測值C69.53；H6.32；N8.36HPLC純度98.6％高極性餾分(3Z，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(4)Rf0.22(AcOEt/環(huán)己烷80∶20)得率33％(1013mg)外觀白色粉末熔點(diǎn)189℃1H NMR(DMSO)2.64-2.82(m，2H)，3.20-3.57(m，3H)，3.70-3.80(m，3H)，3.98-4.60(m，2H)，5.0(t，J＝8.0Hz，1H)，7.37-7.76(m，9H)。
IR(film)3373，1606，1417，1045MS(APCI，+)649(2M+1)，325(M+1)元素分析(C19H20N2O3)計算值C70.35；H6.21；N8.64；實(shí)測值C70.22；H6.27；N8.56HPLC純度99.9％注還分離得到E/Z混合物(470mg)的餾分。
實(shí)施例III{[(2S，4EZ)-1-(1，1’-聯(lián)苯-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基]甲氧基}乙酸叔丁酯(5)(式Ia化合物)
室溫攪拌下，向醇(2)(EZ混合物，58mg，0.18mmol)和溴乙酸叔丁酯(530μl，3.6mmol)在DCM(0.2ml)中的溶液加入50％NaOH水溶液(0.8ml)和氯化四丁銨(50mg，0.18mmol)，反應(yīng)混合物攪拌1h。用水稀釋后，混合物用乙酸乙酯提取，有機(jī)相用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，濃縮。產(chǎn)物(化合物5)用硅膠柱色譜提純，洗脫液為DCM∶MeOH，95∶5。
得率99％(85mg)。
LC/MS(ESI，-)3.81(M-tBu-H)1H NMR(CDCl3)1.45(s，9H)，2.94(m，2H)，3.60-4.20(m，8H)，4.36(m，1H)，4.90(m，H)，7.30-7.70(m，9H)。
HPLC純度92％實(shí)施例IV{[(2S，4EZ)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基]甲氧基}乙酸(6)(式Ia化合物) 室溫下，向叔丁酯(5)(45mg，0.1mmol)在DCM(0.5ml)的溶液中加入TFA(0.1ml)。反應(yīng)一完成，即將混合物真空濃縮。將粗產(chǎn)物溶解于DCM，用1M HCl洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，濃縮。
得率40％(20mg)。
LC/MS(ESI-)381(M-H)(ESI+)383(M+H)HPLC純度74％
實(shí)施例V2-{[(2S，4EZ)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基]甲氧基}-N-(2-吡咯烷-1-基乙基)乙酰胺(7)(式Ia化合物) 將酸(6)(15mg，0.04mmol)、1-(2-氨基乙基)-吡咯烷(6μl，0.05mmol)、DIC(7.2μl，0.05mmol)和DMAP(1mg，0.01mmol)在DCM(1ml)中的溶液在室溫、氬氣氛下攪拌18h?；旌衔镎婵諠饪s，用硅膠制備性色譜提純，洗脫液為DCM∶MeOH，50∶50。
得率80％(17mg)。
1H NMR(CDCl3)1.71(s，4H)，2.30-4.00(m，8H)，3.37(m，2H)，3.50-4.40(m，9H)，4.96(m，1H)，6.87(m，1H)，7.30-7.70(m，9H)LC/MS(ESI-)477(M-H)(ESI+)479(M+H)HPLC純度88％實(shí)施例VI(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(8)(式Ia化合物)
在氬氣氛中，向醇(2)(EZ混合物，20mg，0.06mmol)和氫化鈉(3mg，0.12mmol)在THF(1ml)中的溶液加入碘甲烷(7.7μl，0.12ml)。反應(yīng)混合物攪拌過夜，用水淬滅?；旌衔镉靡宜嵋阴ハ♂?，用鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，真空濃縮。粗產(chǎn)物用硅膠制備性色譜提純，洗脫液為DCM∶MeOH，100∶0、然后95∶5。
得率94％(21mg)。
1H NMR(CDCl3)2.80(m，2H)，3.35(m，3H)，3.46(m，1H)，3.67(m，1H)，3.84(s，3H)，4.27(m，2H)，4.91(m，1H)，7.30-7.70(m，9H)。
LC/MS(ESI+)339(M+1)HPLC純度93％實(shí)施例VII(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]吡咯烷-3-酮O-甲基肟(9)(式Ib合物) 中間體9a[(2S，4EZ)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基]甲基甲磺酸酯(式IIa化合物)
在0℃氮?dú)夥障?，將甲磺酰?48μl，0.62mmol)加入醇(2)(EZ混合物，80mg，0.25mmol)的DCM(8ml)溶液中。然后將反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝?，用TLC監(jiān)測。1小時30分鐘后反應(yīng)完成。有機(jī)相用飽和氯化銨溶液和鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。
得率定量(155mg)HPLC純度87％實(shí)施例VII甲磺酸酯(9a)(60mg，0.15mmol)溶解在MEK/ACN(1∶1，10ml)中，用溴化鋰(16mg，0.18mmol)處理。反應(yīng)混合物于85℃加熱，然后加入N-甲基哌嗪(22mg，0.22mmol)和TEA(31μl，0.22mmol)，并在同一溫度下攪拌過夜，濃縮，再溶解在乙酸乙酯中，用飽和碳酸氫鈉溶液、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。粗產(chǎn)物(48mg)最后用快速色譜法提純，洗脫液為DCM/MeOH/NH4OH 92∶8∶1，得到化合物9a。
Rf0.17(DCM/MeOH/NH4OH 90∶10∶1)得率36％(22mg)外觀棕色油1H NMR(CDCl3)2.31(s，3H)，2.45-2.86(m，14H)，3.85(brs，3H)，4.13(m，1H)，7.34-7.64(m，9H)。
LC/MS(ESI，+)407(M+1)HPLC純度97.1％實(shí)施例VIII(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-{[(4-甲氧基苯基)氨基]甲基}吡咯烷-3-酮O-甲基肟(10)(式Ib化合物)
將甲磺酸酯(9a)(32mg，0.08mmol)、對甲氧基苯胺(20mg，0.16mmol)和三乙胺(22μl，0.16mmol)在甲基乙基酮/乙腈(2ml，1∶1)中的溶液攪拌2天。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，用飽和NH4Cl洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，濃縮。得到的粗產(chǎn)物用PARALLEX FLEX_系統(tǒng)通過HPLC提純。
得率21％(10mg)HPLC純度72％LC/MS(ESI+)430(M+1)實(shí)施例IX(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-({[2-(1H-吡唑-1-基)乙基]氨基}甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(11)(式Ib化合物) 將甲磺酸酯(9a)(60mg，0.15mmol)、1-(2’-氨基乙基)吡唑(58mg，0.53mmol)、碳酸鉀(41mg，0.30mmol)和碘化鈉(225mg，1.50mmol)在THF(5ml)中的溶液攪拌2天。反應(yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，用1N HCl洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，濃縮。粗產(chǎn)物用C8 SPE柱體提純。得率5％(3mg)LC/MS(ESI+)418(M+H)HPLC純度79％實(shí)施例X2-{[(2S，4EZ)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基]-甲基}-1H-異吲哚-1，3-(2H)-二酮(12)(式Ib化合物)
LC/MS(ESI-)422(M-1)(ESI+)424(M+1)1H NMR(CDCl3)2.29(m，1H)，2.70(m，1H)，3.43(m，1H)，3.64(m，3H)，3.83(s，3H)，4.17(m，1H)，6.90(m，NH2)，7.20-8.00(m，9H)。
HPLC純度88％實(shí)施例XIIN-{[(4EZ，2S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基]-甲基}乙酰胺(14)(式Ib化合物) 將胺(13)(16mg，0.05mmol)、乙酐(5.6μl，0.06mmol)和三乙胺(7.9μl，0.06mmol)在DCM中的溶液攪拌30分鐘。反應(yīng)混合物用水洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，真空濃縮。粗產(chǎn)物用硅膠制備色譜提純，洗脫液為乙酸乙酯。得率42％(8mg)LC/MS(ESI-)364(M-1)(ESI+)366(M+1)1H NMR(CDCl3)2.10(s，3H)，2.40-3.00(m，2H)，3.54(m，2H)，3.87(s，3H)，4.24(m，2H)，4.81(m，1H)，7.20-8.00(m，9H)。
HPLC純度95％實(shí)施例XIII(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(哌啶-1基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(15)(式Ib化合物)
中間體15a(4R)-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧}-L-脯氨酸甲酯(式VIII化合物) 將(4R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-羥基-L-脯氨酸甲酯(中間體2a，2.07g，6.35mmol)溶解在DCM(30ml)中，用4-DMAP(776mg，6.35mmol)、TEA(2.21ml，15.88mmol)和TBDMS-Cl(1.91g，12.7mmol)處理。用LC/MS監(jiān)測反應(yīng)。24h后，反應(yīng)還沒有完成。加入TBDMS-Cl(300mg，2mmol)和TEA(1ml)。48h后，反應(yīng)完成?；旌衔镉蔑柡蚇H4Cl和鹽水(2次)洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。粗產(chǎn)物(2.85g)用快速色譜提純，洗脫液為EtOAc/cHex 50∶50。得率93％(2.61g)1H NMR(CDCl3)-0.05(s，3H)，0.02(s，3H)，0.81(s，9H)，2.04(m，1H)，2.27(m，1H)，3.45(d，J＝9.4Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.81(m，1H)，4.43(m，1H)，4.80(t，J＝8.1Hz，1H)，7.33-7.46(m，3H)，7.62(m，6H)。
中間體15b((2S，4R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧}吡咯烷2-基)甲醇
將(4R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧-L-脯氨酸甲酯(中間體5a，2.61g，5.94mmol)在THF(60ml)中的溶液冷卻到0℃，用硼氫化鋰(95％，206mg，8.9mmol)處理。反應(yīng)混合物攪拌3h，緩慢用水淬滅。減壓下除去THF，粗產(chǎn)物再溶解在AcOET中，用飽和NH4Cl、鹽水洗滌，硫酸鎂干燥，過濾，濃縮。
得率92％(2.268g)LC/MS(ESI+)412(M+1)中間體15c1-[((2S，4R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧}吡咯烷2-基)甲基]哌啶(式XI化合物) 氬氣氛下，向醇(15b)(200mg，0.49mmol)在DCM(5ml)中的溶液加入DessMartin試劑(227mg，0.53mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌24小時，然后用DCM稀釋，飽和NaHCO3洗滌。水層用DCM提取，有機(jī)相用水洗滌，硫酸鎂干燥， 將醇(2)(EZ混合物，51mg，0.16mmol)、鄰苯二甲酰亞胺(70mg，0.48mmol)、聚合物結(jié)合的三苯基膦(158mg，0.48mmol)和偶氮二羧酸二乙酯(40％的甲苯溶液，205μl，0.48mmol)在THF(5ml)中的溶液攪拌2天。濾去樹脂，反應(yīng)混合物真空濃縮。粗產(chǎn)物用硅膠制備色譜提純，洗脫液為DCM。
得率59％(50mg)1H NMR(CDCl3)2.76(m，2H)，3.60-4.50(m，7H)，5.32(m，1H)，7.20-8.00(m，13H)。
LC/MS(ESI+)454(M+1)HPLC純度85％實(shí)施例XI(3EZ，5S)-5-(氨基甲基)-1-(1，1’-聯(lián)苯-4-基羰基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(13)(式III化合物) 將鄰苯二甲酰亞胺(12)(42mg，0.09mmol)、一水合肼(45μl，0.93mmol)在乙醇∶THF(1∶1，1ml)中的溶液攪拌過夜。濾去白色沉淀，濾液真空濃縮，得到所需的胺。
得率76％(26mg)濃縮。得到的醛直接用于下一步反應(yīng)。向醛(184mg，0.45mmol)在1，2-二氯乙烷中的溶液中加入哌啶(49μl，0.50mmol)、乙酸(28μl，0.50mmol)，然后加入三乙氧基硼氫化鈉(143mg，0.68mmol)。反應(yīng)攪拌過夜，然后用乙酸乙酯稀釋。有機(jī)相用飽和NaHCO3洗滌，然后用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，濃縮，得到所需的叔胺。
得率95％(230mg)LC/MS(ESI-)513(M+Cl)(ESI+)479(M+1)1H NMR(CDCl3)-0.09(s，3H)，0.00(s，3H)，0.79(s，9H)，1.20-1.60(m，6H)，2.08(m，4H)，2.40-2.90(m，4H)，3.35(m，1H)，3.56(m，1H)，4.34(m，1H)，4.59(m，1H)，7.20-7.60(m，9H)。
HPLC純度90％中間體15d(3R，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(哌啶-1-基甲基)吡咯烷-3-醇(式XI化合物) 將受保護(hù)的醇(15c)(200mg，0.42mmol)和TBAF(0.63mml，1M的THF溶液)在THF中的溶液室溫攪拌1h。濃縮反應(yīng)混合物，用丙酮-乙酸乙酯(1-2)稀釋，用飽和NaHCO3溶液洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，濃縮，得到所需的醇。得率50％LC/MS(ESI+)365(M+1)1H NMR(CDCl3)1.20-1.60(m，6H)，2.19(m，4H)，2.25-2.90(m，4H)，3.50(m，2H)，4.43(m，1H)，4.62(m，1H)，7.30-7.70(m，9H)。
HPLC純度86％
中間體15e(5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(哌啶-1-基甲基)吡咯烷-3-酮(式X化合物) 在-78℃氬氣氛下，將DMSO(46.8μl，0.66mmol)在DCM(1ml)中的溶液滴加到草酰氯(28.2μl，0.33mmol)在DCM(2ml)的溶液中。于-78℃15分鐘后，滴加醇(15d)(80mg，0.22mmol)在DCM(1ml)中的溶液。反應(yīng)混合物于-78℃攪拌1小時，用三乙胺(0.152ml，1.1mmol)處理，并使其溫?zé)岬绞覝?。用乙酸乙酯稀釋反?yīng)混合物，用水、然后用鹽水洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，濃縮，得到預(yù)期的酮。
得率84％(78mg)LC/MS(ESI-)361(M-1)(ESI+)363(M+1)HPLC純度86％實(shí)施例XIII將酮(15e)(70mg，0.19mmol)、羥基胺甲醚鹽酸鹽(48mg，0.58mmol)和三乙胺(80μl，0.58mmol)在氯仿(3ml)中的溶液于70℃攪拌2天。反應(yīng)混合物用二氯甲烷稀釋，用1N HCl洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，濃縮，得到肟醚。
得率90％(73mg)LC/MS(ESI+)392(M+1)1H NMR(CDCl3)1.39(m，2H)，1.50-1.90(m，4H)，2.07(m，2H)，2.43(m，2H)，2.50-3.10(m，4H)，3.38(m，1H)，3.68(m，1H)，3.79(m，3H)，4.21(m，2H)，4.86(m，1H)，7.20-8.00(m，9H)。
HPLC純度94％
實(shí)施例XIV(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(2-羥基乙基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟(16)(式II化合物) 中間體16a[(2S，4R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-羥基吡咯烷-2-基]乙酸(式III化合物) 在0℃氬氣氛下，向購得的L-β-高羥基脯氨酸鹽酸鹽(245mg，1.35mmol)、三乙胺(1.13ml，8.09mmol)在水(0.8ml)和THF(2ml)中的溶液中滴加4-苯基苯甲酰氯(438mg，2.02mmol)在THF(1ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝?，攪?8h，然后用丙酮-乙酸乙酯(1-2)稀釋，用1N HCl洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，濃縮，得到所需產(chǎn)物和4-苯基苯甲酸的混合物?？梢酝ㄟ^用乙酸乙酯沉淀得到小量的酸。
1H NMR(DMSO)1.82(m，1H)，2.11(m，1H)，2.5(m，1H)，2.81(dd，J＝15.6Hz，J＝3.2，1H)，3.3(m，1H)，3.51(dd，J＝11.7Hz，J＝2.6Hz，1H)，4.16(m，1H)，4.40(m，1H)，7.30-8.00(m，9H)。
LC/MS(ESI-)280(M-1-CO2)，324(M-1)(ESI+)326(M+1)
HPLC純度84％中間體16b[(2S，4R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-羥基吡咯烷-2-基]乙酸甲酯(式VIII化合物) 向前面得到的酸混合物(中間體16a)在甲苯-甲醇(10ml，1-1)中的溶液加入重氮甲基三甲基硅烷(2.76ml，2M在己烷中)。3h后，濃縮反應(yīng)混合物，用硅膠柱色譜提純，洗脫液為乙酸乙酯。
得率40％(2步，256mg)。
1H NMR(DMSO)1.82(m，1H)，2.11(m，1H)，2.6(dd，J＝15.4Hz，J＝8.3Hz，1H)，2.97(dd，J＝15.3Hz，J＝3.4Hz，1H)，3.25(d，J＝11.4Hz，1H)，3.62(s，3H)，3.67(dd，J＝11.4Hz，J＝3.4Hz，1H)，4.16(m，1H)，4.44(m，1H)，4.86(d，J＝3.4Hz，OH)，7.30-8.00(m，9H)。
LC/MS(ESI+)340(M+1)HPLC純度98％中間體16c(3R，5R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(2-羥基乙基)-吡咯烷-3-醇(式VII化合物)
在0℃氬氣氛下，向甲酯(16b)(310mg，0.91mmol)在THF中的溶液加入硼氫化鋰(30mg，1.37mmol)。將反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝?，攪?2h。用水淬滅LiBH4，真空蒸發(fā)THF。加入乙腈，過濾白色沉淀，用乙腈然后用乙醚洗滌，最后干燥。
得率97％(280mg)1H NMR(DMSO)1.69(m，1H)，1.87(m，1H)，2.15(m，2H)，3.35(m，1H)，3.57(m，2H)，3.72(d，J＝11.3Hz，1H)，4.25(m，1H)，4.40(m，1H)，4.56(m，OH)，4.87(m，OH)，7.30-8.00(m，9H)。
LC/MS(ESI+)294(M-H2O+1)，312(M+1)+，334(M+Na)HPLC純度98.5％中間體16d(3R，5R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧}乙基)-吡咯烷-3-醇(式VII化合物) 向二醇(16c)(270mg，0.87mmol)的DMF(10ml)溶液中滴加氯化叔丁基二甲基硅烷(131mg，0.87mmol)和三乙胺(120μl，0.87mmol)的溶液。將反應(yīng)混合物于室溫攪拌2天，加入乙酸乙酯，反應(yīng)混合物用水洗滌。水相用乙酸乙酯提取。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，真空濃縮。粗產(chǎn)物用硅膠制備性色譜提純，洗脫液為乙酸乙酯∶環(huán)己烷，50∶50。
得率17％(63mg)。
LC/MS(ESI+)426(M+1)HPLC純度100％
中間體16e(5R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧}乙基)-吡咯烷-3-酮(式IV化合物) 于-78℃在氬氣氛下，將DMSO(31.4μl，0.44mmol)在DCM(1ml)中的溶液滴加到草酰氯(19μl，0.22mmol)的DCM(2ml)溶液中。-78℃，15分鐘后，滴加醇(16d)(63mg，0.15mmol)的DCM(1ml)溶液。反應(yīng)混合物于-78℃攪拌1小時，加入三乙胺(0.102ml，0.74mmol)，溫?zé)岬绞覝?。反?yīng)混合物用乙酸乙酯稀釋，用水然后用鹽水洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，濃縮，得到預(yù)期的酮。
得率100％(64mg)LC/MS(ESI-)422(M-1)(ESI+)424(M+1)HPLC純度99％中間體16f(3Z，5R)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(2-{[叔丁基(二甲基)甲硅烷基]氧}乙基)-吡咯烷-3-酮O-甲基肟 將酮(16e)(64mg，0.15mmol)、羥基胺甲基醚鹽酸鹽(38mg，0.45mmol)和三乙胺(62μl，0.45mmol)在氯仿(4ml)中的溶液于70℃攪拌5天。反應(yīng)混合物用DCM稀釋，用1N HCl洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，濃縮，得到預(yù)期的肟醚。
得率96％(68mg)1H NMR(CDCl3)0.01(s，6H)，0.84(s，9H)，1.5-2.0(m，2H)，2.66(m，1H)，2.81(m，1H)，3.67(m，2h)，3.82(s，3H)，4.20(m，2H)，4.8(m，1H)，7.20-8.00(m，9H)。
HPLC純度95％LC/MS(ESI+)453(M+1)實(shí)施例XIV將受保護(hù)的醇(16f)(68mg，0.15mmol)和TBAF(0.225ml，1M在THF中)的THF溶液在室溫攪拌1小時。濃縮反應(yīng)混合物，然后用乙酸乙酯稀釋，用水洗滌。有機(jī)相用硫酸鎂干燥，濃縮。
得率85％1H NMR(CDCl3)1.60(m，1H)，1.89(m，1H)，2.55(m，1H)，2.92(m，1H)，3.67(m，2H)，3.82(s，3H)，4.20(m，2H)，5.07(m，1H)，7.20-8.00(m，9H)。LC/MS(ESI+)339(M+1)HPLC純度96％實(shí)施例XV藥物制劑的制備以下的制劑例用以說明本發(fā)明代表性的藥物組合物。
制劑1-片劑將式I吡咯烷化合物以干粉與干明膠粘合劑以約1∶2重量比混合。加入少量硬脂酸鎂作為潤滑劑。將該混合物形成240-270mg片劑(每片80-90mg活性吡咯烷化合物)。
制劑2-膠囊將式I吡咯烷化合物以干粉與淀粉稀釋劑以約1∶1重量比混合。將混合物充入250mg膠囊(每膠囊125mg活性吡咯烷化合物)。
制劑3-液體將式I吡咯烷化合物(1250mg)、蔗糖(1.75g)和黃原膠(4mg)混合，通過No.10目美國篩，然后與預(yù)先制備的微晶纖維素和羧甲基纖維素(11∶89，50mg)在水中的溶液混合。將苯甲酸鈉(10mg)、調(diào)味劑和著色劑用水稀釋，攪拌下加入上述溶液。然后加入足量水，得到總體積5ml。
制劑4-片劑將式I吡咯烷化合物以干粉與干明膠粘合劑以約1∶2重量比混合。加入少量硬脂酸鎂作為潤滑劑。將該混合物形成450-900mg片劑(每片150-300mg活性吡咯烷化合物)。
制劑5-注射劑將式I吡咯烷化合物溶解在緩沖的滅菌鹽水可注射水性介質(zhì)中，達(dá)到大約5mg/ml的濃度。
實(shí)施例XVI生物學(xué)測試將式I化合物進(jìn)行以下的測試a)用閃爍鄰近測定(Scintillation Proximity Assay)對hOT受體進(jìn)行體外競爭性結(jié)合試驗(yàn)(11)本試驗(yàn)可測定試驗(yàn)化合物對人催產(chǎn)素(hOT)受體的親和力。將得自HEK293EBNA(表達(dá)hOT受體的細(xì)胞)的膜懸浮在含50mM Tris-HCl(pH7.5)5mM MgCl2和0.1％BSA(w/v)的緩沖液中。將膜(2-4μg)與0.1mg用小麥胚芽凝集素包衣的SPA珠(Amersham生產(chǎn)的WGA-PVT-聚乙烯亞胺珠)和0.2nM放射性標(biāo)記的[125I]-OVTA(OVTA為鳥氨酸血管活性的、用于競爭結(jié)合試驗(yàn)的OT的類似物)混合。在1μM催產(chǎn)素存在下測定非特異性結(jié)合?？傇囼?yàn)體積為100μl。將板(Corning_NBS板)在室溫培育30分鐘，然后在Mibrobeta_板閃爍計數(shù)器上讀數(shù)。競爭性結(jié)合在式I化合物存在下進(jìn)行，化合物濃度為30μM，10μM，1μM，300nM，100nM，10nM，1nM，100pM，10pM。用迭代、非線性曲線擬合程序“Prism”(GraphPda Software，Inc)分析競爭結(jié)合數(shù)據(jù)。
式I吡咯烷衍生物抑制125I-OVTA對OT-受體結(jié)合的能力用上述的體外生物學(xué)測試來評價。一些舉例的化合物的代表性數(shù)值報告在表I中，其中上述實(shí)施例的試驗(yàn)化合物的結(jié)合親和力表達(dá)為抑制常數(shù)(Ki；nM)。從這些數(shù)值，可以得到所述的式I試驗(yàn)化合物確實(shí)表現(xiàn)出顯著的對催產(chǎn)素受體的結(jié)合。
表I
b)功能測定No.1用FLIPR_(熒光計成像板閱讀器)測定催產(chǎn)素介導(dǎo)的Ca2+-遷移的抑制作用OT對OT-受體的作用在細(xì)胞中觸發(fā)復(fù)雜的級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致胞漿內(nèi)Ca2+濃度增加。這種Ca2+濃度的增加是由鈣從肌質(zhì)網(wǎng)(鈣儲庫)釋放入胞漿以及由細(xì)胞外空間通過Ca2+通道的鈣流入造成的。該Ca2+遷移入胞漿觸發(fā)子宮肌膜細(xì)胞的收縮機(jī)制，導(dǎo)致子宮收縮(1和3)。
這個試驗(yàn)可以測量OT/OT-R介導(dǎo)的鈣遷移被式(I)試驗(yàn)化合物抑制。
FLIPR_是一種熒光成像裝置，用激光(氬離子激光)同時照射并閱讀(冷的CCD照相機(jī))96-孔板的每個孔，因此能快速測量許多樣品。
制備板FLIPR-板用PLL(聚-L-賴氨酸)10μg/ml+0.1％明膠預(yù)先涂布，以便附著HEK293EBNA細(xì)胞(表達(dá)hOT受體的人胚胎腎臟細(xì)胞)，在37℃培養(yǎng)30分鐘至2天。將細(xì)胞移植到96-孔板內(nèi)(60000細(xì)胞/孔)。
用fluo-4標(biāo)記將50μg fluo-4(Ca2+敏感的熒光染料)溶解在20μl泊洛沙姆酸(pluronic acid)中(20％在DMSO中)。然后將溶解的fluo-4稀釋在10mlDMEM(Dubecco最低必需培養(yǎng)基)-F-12培養(yǎng)基中。用DMEM-F12培養(yǎng)基洗板一次。將100μl含fluo-4的DMEM-F12培養(yǎng)基加入HEK細(xì)胞，在該熒光培養(yǎng)基中培養(yǎng)1.5-2小時。fluo-4被細(xì)胞的胞漿攝取。
緩沖液145mM NaCl，5mM KCl，1mM MgCl2，10mM Hepes，10mM葡萄糖，EGTA(亞乙基二氧乙烯次氮基四乙酸)。pH調(diào)節(jié)到7.4。
進(jìn)行測定制備在上述緩沖液(1x)中最小量的80μl/孔式(I)化合物(5x)(96-孔板)。將式(I)化合物以不同濃度(30μM，10μM，1μM，300nM，100nM，10nM，1nM，100pM，10pM)加入96-孔板。加入40nM OT。
然后在式(I)化合物存在或不存在下用FLIPR測量Fluo-4的相對熒光(λex＝488nm，λem＝590nm)。標(biāo)記物的熒光對于Ca2+的量是敏感的，因此可檢測Ca2+運(yùn)動。然后，可以測定式(I)化合物拮抗由催產(chǎn)素受體介導(dǎo)的催產(chǎn)素引起的細(xì)胞內(nèi)Ca2+-遷移的能力。
式I吡咯烷衍生物的活性用上述的體外生物學(xué)測試來評價。一些舉例化合物的代表性數(shù)值在表II中列出。這些數(shù)值是指為了拮抗50％OT/OTR細(xì)胞內(nèi)Ca2+-遷移所需要的式I試驗(yàn)化合物的濃度。從這些數(shù)值可以看到，所述的式I舉例化合物確實(shí)顯示了作為催產(chǎn)素受體拮抗劑的顯著活性。
表II
c)功能測定No.2HEK/EBNA-OTR細(xì)胞中IP3(三磷酸肌醇)-合成的抑制作用OT對OT-受體的相互作用導(dǎo)致IP3合成，后者是Ca2+從肌質(zhì)網(wǎng)釋放的第二信使，參與子宮收縮觸發(fā)過程(3)。
本試驗(yàn)可用來顯示用式(I)試驗(yàn)化合物對OT/OT-R介導(dǎo)的IP3合成的抑制作用。
細(xì)胞的激活將HEK/EBNA OTR(大鼠或人)細(xì)胞移植到costar12-孔板中，用含1％FCS(0.5ml/孔)和不含肌醇的4μCi/ml放射性標(biāo)記的[3H]-肌醇平衡15-24小時。吸出含有該標(biāo)記的培養(yǎng)基。加入DMEM培養(yǎng)基(不含F(xiàn)CS，肌醇)、20mM Hepes(4-(2-羥基乙基)-1-哌嗪-乙磺酸)、含10mM LiCl的1mg/mlBSA(新鮮配制)，在37℃培養(yǎng)10-15分鐘。激動劑(即以10nM濃度使用的催產(chǎn)素)和拮抗劑(即式(I)的試驗(yàn)化合物，以10μM，1μM，300nM，100nM，10nM，1nM，100pM，10pM，3pM使用)可以在需要的時間(14-45分鐘)加入，然后吸出培養(yǎng)基。在OT存在下，放射性標(biāo)記的肌醇被轉(zhuǎn)化為放射性標(biāo)記的IP3。在OT-受體上拮抗OT，抑制IP3的形成。
可通過后續(xù)的處理測定放射性IP3的量。用1ml STOP-溶液(即0.4M高氯酸)終止反應(yīng)，室溫放置5-10分鐘。然后，將0.8ml轉(zhuǎn)移到含有0.4ml中和溶液(0.72M KOH/0.6M KHCO3)的試管中，渦旋試管，繼續(xù)冷卻至少2小時。
IP的分離在臺式離心機(jī)上以3000-4000rpm離心15分鐘。將1ml上清液轉(zhuǎn)移到含有2.5ml水的新試管中。用20ml水平衡裝好的樹脂(DowexAG1X8)，將整個樣品倒入色譜柱，分離混合物。用10ml水洗滌2次可除去游離的肌醇。
總IP的洗脫用3ml 1M甲酸銨/0.1M甲酸進(jìn)行洗脫。加入7ml閃爍液后，將洗脫液收集在閃爍記數(shù)管中。用閃爍計數(shù)器測定[3H]-IP3的量。
式(I)化合物有效地拮抗由催產(chǎn)素受體介導(dǎo)的催產(chǎn)素引起的IP3合成的能力可以用上述體外生物學(xué)試驗(yàn)方法加以評價。
d)抑制子宮收縮的體內(nèi)模型本測試評價試驗(yàn)化合物在流產(chǎn)、早產(chǎn)的體內(nèi)模型中的生物學(xué)作用。
在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，用二乙基己烯雌酚(DES)250μg/kg(i.p.)將非妊娠的Charles River CD(SD)BR雌性大鼠(9-10周齡，200-250g)處理18和24小時。為了進(jìn)行測試，將動物用氨基甲酸乙酯(1.75g/kg，i.p.)麻醉，放在恒溫手術(shù)臺上。分離出氣管，插入合適的聚乙烯(PE)管。在下腹水平做一個中線切口，暴露出一個子宮角，在其頭側(cè)端插入PE240管，用0.2ml滅菌生理鹽水充滿內(nèi)腔后，通過P23ID Gould Statham壓力轉(zhuǎn)換器將它與”Gemini”放大/記錄系統(tǒng)連接。
分離一支頸靜脈，插入PE60管，與蝶形針連接，為通過配藥注射器靜脈給予試驗(yàn)化合物提供通路。
在試驗(yàn)化合物十二指腸給藥的情況下，可分離出十二指腸，同樣在其壁上的小切口插管。
同樣分離一支頸動脈，插入PE60管，并與合適的注射器連接，以便收集血樣。
在穩(wěn)定期間之后以及整個實(shí)驗(yàn)中，以30分鐘的時間間隔重復(fù)靜脈注射相同劑量的催產(chǎn)素。當(dāng)?shù)玫阶訉m對相同的OT刺激(選定的催產(chǎn)素劑量)產(chǎn)生可重現(xiàn)的收縮反應(yīng)時，給予試驗(yàn)化合物或參照物(載體)的劑量。處理后繼續(xù)進(jìn)行相同劑量催產(chǎn)素的注射循環(huán)(以30分鐘的時間間隔進(jìn)行OT注射)一段適當(dāng)?shù)臅r間，以便評價抑制作用和這些作用的可逆性。
參考文獻(xiàn)1.Gimpl G.and Fahrenholz，F(xiàn).Physiological Reviews 2001，81，629-683.
2.Maggi，M.et al.J.Clin.Endocrinol.Metabol.1990，70，1142-1154.
3.Mitchell，B.F.and Schmid，B.J.Soc.Gynecol.Invest.2001，8，122-33.
4.Thorton，S.et al.，Experimental Physiology 2001；86，297-302.
5.Evans B.E.et al.J.Med.Chem.1992，35，3919-3927.
6.Gennaro，A.R.et al.，Remington’s Pharmaceutical Sciences.18thed.EastonThe Mack Publishing Company，1995.
7.T.W.Greene et al.John Wiley & Sons Inc，Third Ed.1999.
8.R.C.Larock，Wiley VCH 1999.
9.E.Breitmaier，W.Voelter Carbon-13 NMR Spectroscopy，3rdEd，P.240，VCH，1987.
10.Philip J.Kocienski，in“Protecting Groups”，Georg Thieme Verlag Stutgart，New York.1994.
11.Cook，N.D.et al.Pharmaceutical Manufacturing International 1992；P.49-53.
權(quán)利要求
1.通式I的吡咯烷衍生物 其幾何異構(gòu)體、其對映體、非對映體、它們的混合物及其外消旋體的光學(xué)活性形式，以及其鹽，其中R1選自氫和C1-C6-烷基；R2選自氫、C1-C6-烷基、C1-C6-烷基芳基、雜芳基、C1-C6-烷基雜芳基、C2-C6-烯基、C2-C6-烯基芳基、C2-C6-烯基雜芳基、C2-C6-炔基、C2-C6-炔基芳基、C2-C6-炔基雜芳基、C3-C8-環(huán)烷基、雜環(huán)烷基、C1-C6-烷基環(huán)烷基、C1-C6-烷基雜環(huán)烷基、C1-C6-烷基羧基、?；1-C6-烷基?；?、C1-C6-烷基酰氧基、C1-C6-烷基烷氧基、烷氧基羰基、C1-C6-烷基烷氧基羰基、氨基羰基、C1-C6-烷基氨基羰基、C1-C6-烷基酰基氨基、C1-C6-烷基脲基、氨基、C1-C6-烷基氨基、磺酰氧基、C1-C6-烷基磺酰氧基、磺酰基、C1-C6-烷基磺?；?、亞磺?；?、C1-C6-烷基亞磺?；?、C1-C6-烷基硫烷基和C1-C6-烷基磺酰基氨基；R3選自芳基和雜芳基；X選自O(shè)或NR4；R4選自氫、C1-C6-烷基、C1-C6-烷基芳基、C1-C6-烷基雜芳基、芳基、雜芳基、；或R2和R4和與它們連接的N原子一起可形成5-8元飽和的或不飽和的雜環(huán)烷基環(huán)；以及n是1-3的整數(shù)。
2.如權(quán)利要求1所述的吡咯烷衍生物，其中R1是甲基。
3.如權(quán)利要求1或2所述的吡咯烷衍生物，其中R3是苯基。
4.如前述權(quán)利要求的任何一項(xiàng)所述的吡咯烷衍生物，其中n是整數(shù)1或2。
5.如前述權(quán)利要求的任何一項(xiàng)所述的吡咯烷衍生物，其中R2和R4和與它們相連接的N原子一起形成5或6元環(huán)烷基或雜環(huán)烷基環(huán)。
6.如權(quán)利要求1-4所述的吡咯烷衍生物，其中X是O或NH。
7.如前述權(quán)利要求的任何一項(xiàng)所述的吡咯烷衍生物，選自(3EZ，5S)-5-(羥基甲基)-1-[(2’-甲基-1，1’-聯(lián)苯基-4-基)羰基]吡咯烷-3-酮O-甲基肟；(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟；(3E，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(羥基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟；(3Z，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]吡咯烷-3-酮O-甲基肟；{[(2S，4EZ)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基]甲氧基}乙酸叔丁酯；{[(2S，4EZ)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基]甲氧基}乙酸；2-{[(2S，4EZ)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基]甲氧基}-N-(2-吡咯烷-1-基乙基)乙酰胺；(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(甲氧基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟；(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]吡咯烷-3-酮O-甲基肟；(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-{[4-(甲氧基苯基)氨基]甲基}吡咯烷-3-酮O-甲基肟；(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-({[2-(1H-吡唑-1-基)乙基]氨基}甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟；2-{[(2S，4EZ)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基]-甲基}-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮；(3EZ，5S)-5-(氨基甲基)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟；N-{[(2S，4EZ)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-4-(甲氧基亞氨基)吡咯烷-2-基-甲基]乙酰胺；(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(哌啶-1-基甲基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟；(3EZ，5S)-1-(1，1’-聯(lián)苯基-4-基羰基)-5-(2-羥基乙基)吡咯烷-3-酮O-甲基肟。
8.前述權(quán)利要求的任何一項(xiàng)所述的吡咯烷衍生物作為藥物的用途。
9.權(quán)利要求1-7的任何一項(xiàng)所述的吡咯烷衍生物、它們的異構(gòu)體、對映體和非對映體及其混合物的光學(xué)活性形式、及其鹽在制備用于預(yù)防和/或治療流產(chǎn)、早產(chǎn)或痛經(jīng)的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求1-7的任何一項(xiàng)所述的吡咯烷衍生物在制備用于治療需要調(diào)節(jié)催產(chǎn)素受體的失調(diào)的藥物中的用途。
11.如權(quán)利要求10所述的用途，用于治療或預(yù)防與催產(chǎn)素受體活性有關(guān)的失調(diào)。
12.如權(quán)利要求10或11所述的用途，其中所述的調(diào)節(jié)包括阻斷催產(chǎn)素受體或拮抗催產(chǎn)素對其受體的結(jié)合。
13.一種藥物組合物，含有如權(quán)利要求1-7的任何一項(xiàng)所述的吡咯烷衍生物以及藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
14.權(quán)利要求1-7的任一項(xiàng)所述的吡咯烷衍生物的制備方法，其中X是O，該方法包含用烷基化試劑R2-LG使式(II)的醇衍生物O-烷基化的步驟，其中LG是離去基團(tuán)，R1、R2、R3和n如上定義。
15.權(quán)利要求1-7的任何一項(xiàng)所述的吡咯烷衍生物的制備方法，其中X是NR4，所述方法包含用胺HNR2R4使式(XI)的醛衍生物還原胺化的步驟，其中R1、R2、R3、R4和n如上定義。
全文摘要
本發(fā)明涉及新穎的式(I)吡咯烷衍生物、其幾何異構(gòu)體、其對映體、非對映體、它們的混合物外消旋體的光學(xué)異構(gòu)體形式、以及其鹽，其中R
文檔編號A61K31/4155GK1678576SQ03820401
公開日2005年10月5日 申請日期2003年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月5日
發(fā)明者C·喬蘭德-勒布倫, J·德拜斯, A·夸特羅帕尼, M·施瓦茨, D·瓦洛格尼斯 申請人:應(yīng)用研究系統(tǒng)Ars股份公司