及其可藥用鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括其所有比率的混合物。

本發(fā)明以這樣的目的為基礎(chǔ)，即找到具有有價(jià)值的性質(zhì)的新型化合物，特別是可用于制備藥劑的那些。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的化合物及其鹽具有非常有價(jià)值的藥理性質(zhì)，同時(shí)耐受性良好。

它們特別對(duì)金屬蛋白酶，優(yōu)選對(duì)甲硫氨酸氨肽酶(MetAP)，特別對(duì)亞型MetAP-2表現(xiàn)出調(diào)節(jié)、調(diào)整和/或抑制作用。

它們可用作抗癌藥，以及用作積極影響脂肪代謝的藥劑，以及用作抗炎藥。

其它羥基取代的吡咯烷酮從下列文獻(xiàn)中獲知：

WO 2011/004608 (MetAP2-抑制劑)和WO 2013/149704 (MetAP2-抑制劑);

Zeitschrift für Naturforschung, B: Chemical Sciences (1994), 49(11), 1586-95;

Analytica Chimica Acta (1987), 202, 167-74;

Journal of Electroanalytical Chemistry and Interfacial Electrochemistry (1988), 239(1-2), 161-73;

Zeitschrift fuer Naturfor. B部分: Anorg. Chem. Org. Chem (1978), 33B(12), 1540-6;

J. Chem. Soc. (1965), (Oct.), 5556-62;

J. Chem. Soc. (1965), (Oct.), 5551-6。

WO 01/79157描述了取代酰肼和N-烷氧基酰胺，其具有MetAP-2抑制活性并可用于抑制血管生成，特別用于治療其發(fā)展依賴于血管生成的疾病，例如癌癥。

WO 02/081415描述了可用于治療癌癥、血管瘤、增殖性視網(wǎng)膜病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈粥樣硬化新生血管形成、牛皮癬、眼部新生血管形成和肥胖癥的MetAP-2抑制劑。

WO 2008/011114描述了作為可用于治療淋巴性白血病和淋巴瘤的血管生成抑制劑和MetAP-2抑制劑的化合物。

根據(jù)本發(fā)明的化合物的抗癌作用特別在于它們的抗血管生成作用。血管生成抑制在超過(guò)70種疾病中證實(shí)有用，例如卵巢癌(F. Spinella等人J. Cardiovasc. Pharmacol. 2004, 44, 140頁(yè))、乳腺癌(A. Morabito等人Crit. Rev. Oncol./Hematol. 2004, 49, 91)、前列腺癌(B. Nicholson等人Cancer Metastas. Rev. 2001, 20, 297)、糖尿病性失明、牛皮癬和黃斑變性(E. Ng等人Can. J. Ophthalmol. 2005, 23, 3706)。

蛋白酶調(diào)節(jié)許多不同的細(xì)胞過(guò)程，特別是肽和蛋白質(zhì)的調(diào)整，特備是蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化、蛋白質(zhì)成熟和信號(hào)肽加工、異常蛋白的分解和調(diào)節(jié)蛋白的滅活/活化。特別地，新生多肽的氨基末端修飾是最常見(jiàn)的調(diào)整。氨基蛋白酶是裂解肽或蛋白質(zhì)的未受保護(hù)的N末端氨基酸的金屬蛋白酶，所述裂解可以以共翻譯(co-translatory)進(jìn)行或翻譯后(post-translatory)進(jìn)行。。

甲硫氨酸氨肽酶(MetAP)裂解新生肽的末端甲硫氨酸，特別是如果倒數(shù)第二個(gè)氨基酸小且不帶電荷(例如Gly、Ala、Ser、Thr、Val、Pro或Cys)。

在許多疾病進(jìn)程中，血管生成是疾病的致病中心或?qū)膊〉陌l(fā)展具有惡化作用。例如在癌癥的情況下，血管生成會(huì)導(dǎo)致腫瘤尺寸變大并進(jìn)入其它器官。血管生成起到重要作用的其它疾病是牛皮癬、關(guān)節(jié)病、動(dòng)脈硬化和眼病，如糖尿病視網(wǎng)膜病變、年齡引發(fā)的黃斑變性、虹膜紅變或新生血管性青光眼，以及炎癥。因此，作為本發(fā)明的基礎(chǔ)的化合物、包含這些化合物的組合物和所述方法可用于治療這些疾病。

因此，給予本發(fā)明的化合物或其可藥用的鹽用于治療癌癥，包括實(shí)體癌，例如肺、胰腺、甲狀腺、膀胱或結(jié)腸的癌，骨髓病(例如骨髓性白血病)或腺瘤(例如絨毛狀結(jié)腸腺瘤)。

腫瘤還包括單核細(xì)胞白血病、腦癌、泌尿生殖系統(tǒng)癌、淋巴系統(tǒng)癌、胃癌、喉癌和肺癌(包括肺腺癌和小細(xì)胞肺癌)，胰腺癌和/或乳腺癌。

本發(fā)明因此涉及作為在所述疾病的治療和/或預(yù)防中的藥劑和/或藥劑活性化合物的根據(jù)本發(fā)明的化合物和根據(jù)本發(fā)明的化合物用于制備用于所述疾病的治療和/或預(yù)防的藥物的用途，以及所述疾病的治療方法，包括向需要這種給藥的患者給予一種或多種根據(jù)本發(fā)明的化合物。

可以證明，根據(jù)本發(fā)明的化合物具有抗癌作用。本發(fā)明的化合物給藥于患病的患者，例如用于抑制腫瘤生長(zhǎng)，用于減輕與淋巴增生性疾病相關(guān)的炎癥、用于抑制移植排斥或由組織修復(fù)造成的神經(jīng)損傷等。本化合物適用于預(yù)防或治療目的。本文所用的術(shù)語(yǔ)“治療”用于表示預(yù)防疾病和治療已有病況。通過(guò)在產(chǎn)生顯性疾病之前施用根據(jù)本發(fā)明的化合物，實(shí)現(xiàn)對(duì)增殖/存活的預(yù)防，例如用于預(yù)防腫瘤生長(zhǎng)?；蛘撸摶衔镉糜谕ㄟ^(guò)穩(wěn)定或改善患者的臨床癥狀來(lái)治療持續(xù)性疾病。

宿主或患者可以屬于任何哺乳動(dòng)物物種，例如靈長(zhǎng)類動(dòng)物，特別是人類；嚙齒動(dòng)物，包括小鼠、大鼠和倉(cāng)鼠；兔子；馬、牛、狗、貓等。動(dòng)物模型對(duì)實(shí)驗(yàn)研究有意義，它們?yōu)槿祟惣膊〉闹委熖峁┠Ｐ汀?/p>

可通過(guò)在體外的試驗(yàn)確定特定細(xì)胞對(duì)用根據(jù)本發(fā)明的化合物處理的易感性。通常將細(xì)胞培養(yǎng)物與根據(jù)本發(fā)明的化合物在不同的濃度下孵育一段足夠長(zhǎng)的時(shí)間，常常在約1小時(shí)至1周之間，以使活性劑誘導(dǎo)細(xì)胞死亡或抑制細(xì)胞增殖、細(xì)胞活力或遷移?？梢允褂脧幕罱M織檢查樣品培養(yǎng)得到的細(xì)胞進(jìn)行體外試驗(yàn)。然后確定處理后殘留的細(xì)胞的量。

劑量隨所用的具體化合物、具體的疾病、患者狀況等而不同。治療劑量通常相當(dāng)充分，以減少靶組織中的不希望的細(xì)胞群體，同時(shí)維持患者的生存能力。通常持續(xù)進(jìn)行治療直到存在相當(dāng)大的細(xì)胞負(fù)載的減少，例如，至少約50％的細(xì)胞負(fù)載的減少，并且可持續(xù)治療直到機(jī)體中基本上不再檢測(cè)到不希望的細(xì)胞。

已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，根據(jù)本發(fā)明的化合物造成MetAP-2的特異性抑制。根據(jù)本發(fā)明的化合物優(yōu)選表現(xiàn)出在例如本文中描述的試驗(yàn)中可檢出的有利的生物活性。在這類試驗(yàn)中，根據(jù)本發(fā)明的化合物表現(xiàn)出并造成抑制作用，所述抑制作用經(jīng)常由在合適范圍、優(yōu)選在微摩爾范圍且更優(yōu)選在納摩爾范圍的IC₅₀值表示。

此外，根據(jù)本發(fā)明的化合物可用在某些現(xiàn)有癌癥化療法和放射療法中以實(shí)現(xiàn)附加或協(xié)同效應(yīng)和/或以恢復(fù)某些現(xiàn)有癌癥化療法和放射療法的效力。

根據(jù)本發(fā)明的化合物還可用于治療肥胖癥。Henri R. Lijnen等人在Obesity，第18卷，no.12, 2241-2246 (2010)中描述了一種Met-AP2抑制劑－煙曲霉素在減少脂肪組織中的用途。

在WO 2011/085201 A1中也描述了使用Met-AP2抑制劑(煙曲霉素類型的化合物)用于治療肥胖癥。

根據(jù)本發(fā)明的化合物也可用于治療瘧疾。X. Chem等人在Chemistry & Biology, 第16卷, 193-202 (2009)中描述了一種Met-AP2抑制劑－煙曲霉素在治療瘧疾中的用途。

根據(jù)本發(fā)明的化合物也可用于治療良性前列腺肥大。

在WO 2011/085198 A1中描述了使用Met-AP2抑制劑(煙曲霉素類型的化合物)治療良性前列腺肥大。

根據(jù)本發(fā)明的化合物還意指這些化合物的水合物和溶劑合物，以及可藥用衍生物。

本發(fā)明還涉及這些化合物的旋光活性形式(立體異構(gòu)體)、鹽、對(duì)映體、外消旋物、非對(duì)映體以及水合物和溶劑合物。術(shù)語(yǔ)化合物的溶劑合物理解為由于它們的相互吸引力而形成的惰性溶劑分子加合到該化合物上。溶劑合物是例如單-或二水合物或醇化物。

術(shù)語(yǔ)可藥用衍生物意指例如根據(jù)本發(fā)明的化合物的鹽以及所謂的前藥化合物。

術(shù)語(yǔ)前藥衍生物意指已用例如烷基或?；⑻腔蚬央男揎椀母鶕?jù)本發(fā)明的化合物，其在生物體中快速裂解產(chǎn)生有效的根據(jù)本發(fā)明的化合物。

這些還包括如例如在Int. J. Pharm. 115, 61-67 (1995)中所述的根據(jù)本發(fā)明的化合物的可生物降解的聚合物衍生物。

表述“有效量”表示在組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人類中造成例如研究人員或醫(yī)生追求或想要的生物或醫(yī)療應(yīng)答的藥劑或藥物活性化合物的量。

此外，表述“治療有效量”是指與沒(méi)有接受這種量的相應(yīng)對(duì)象相比具有下列后果的量：改進(jìn)的治療、愈合、預(yù)防或消除疾病、綜合癥、病況、不適、病癥或副作用或減輕疾病、病況或病癥的發(fā)展。

表述“治療有效量”也包括有效提高正常生理機(jī)能的量。

本發(fā)明還涉及使用根據(jù)本發(fā)明的化合物的混合物，例如兩種非對(duì)映體的混合物，例如以1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:10、1:100或1:1000的比率。

這些特別優(yōu)選是立體異構(gòu)體化合物的混合物。

根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的化合物選自：

及其可藥用鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括其所有比率的混合物。

此外，根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選的化合物選自：

及其可藥用鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括其所有比率的混合物。

優(yōu)選是“A75”、“A78”和“A79”及其可藥用鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括其所有比率的混合物。

根據(jù)本發(fā)明的化合物及其鹽按對(duì)于WO 2011/004608和WO 2013/149704的式I的化合物所述制備。

根據(jù)本發(fā)明的化合物的制備類似于WO 2011/004608中所述的式I化合物及其可藥用鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體進(jìn)行，特征在于

a) 將式II化合物

其中R¹和R³具有WO 2011/004608的權(quán)利要求1所示的含義，

和L表示Cl、Br、I或游離OH基團(tuán)或反應(yīng)官能性修飾的OH基團(tuán)，

與式III化合物反應(yīng)，

其中R²和R⁴具有WO 2011/004608的權(quán)利要求1所示的含義，

或者

b) 為制備WO 2011/004608的式I化合物，其中R³表示OH，

將式IV化合物氧化

其中R¹、R²和R⁴具有WO 2011/004608的權(quán)利要求1所示的含義，

或者

c) 通過(guò)用鹵素原子置換OH基團(tuán)，或用N₃置換鹵素原子，將基團(tuán)R³轉(zhuǎn)化為另一基團(tuán)R³，

和/或?qū)⑹絀的堿或酸轉(zhuǎn)化為其鹽之一。

此外，通過(guò)本身已知的方法，更確切地說(shuō)在已知并適合所述反應(yīng)的反應(yīng)條件下，制備根據(jù)本發(fā)明的化合物及其制備用的原材料，所述方法如文獻(xiàn)中(例如在標(biāo)準(zhǔn)著作中，如Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart)描述的。在此也可以使用在本文中沒(méi)有更具體提及的本身已知的變型。

根據(jù)本發(fā)明的化合物和WO 2011/004608或WO 2013/149704中描述的式I化合物優(yōu)選可以通過(guò)式II的化合物與式III的化合物的反應(yīng)來(lái)獲得。

式II和式III的化合物通常是公知的。但是，如果它們是新穎的，則可通過(guò)本身已知的方法來(lái)制備。

在式II的化合物中，L優(yōu)選是指Cl、Br、I或游離的或反應(yīng)性修飾的OH基團(tuán)，例如活化酯、咪唑基(Imidazolide)或具有1-6個(gè)C原子的烷基磺?；趸?優(yōu)選為甲基磺?；趸蛉谆酋；趸?或具有6-10個(gè)C原子的芳基磺酰基氧基(優(yōu)選為苯基-或?qū)妆交酋；趸?。

該反應(yīng)優(yōu)選在脫水劑，任選在N-羥基苯并三唑存在下完成，所述脫水機(jī)例如為碳二亞胺，如N,N'-二環(huán)己基碳二亞胺("DCCI")、1,1'-羰基二咪唑或N-3-二甲基氨基丙基-N'-乙基碳二亞胺("DAPECI")，以及丙烷磷酸酐T3P(參見(jiàn)Angew. Chem. 92, 129 (1980))、二苯基磷酰疊氮化物或2-乙氧基-N-乙氧基羰基-1,2-二氫喹啉；

。

該反應(yīng)在惰性溶劑中進(jìn)行并通常在酸結(jié)合劑，優(yōu)選有機(jī)堿，如DIPEA、三乙胺、二甲基苯胺、吡啶或喹啉存在下進(jìn)行。

添加堿金屬-或堿土金屬-氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，或堿金屬或堿土金屬，優(yōu)選鉀、鈉、鈣或銫的另外的弱酸鹽的也會(huì)是有利的。

根據(jù)所用條件，反應(yīng)時(shí)間在數(shù)分鐘至14天之間，反應(yīng)溫度在大約-15°至150°之間，通常在40°至130°之間，特別優(yōu)選在60°至110℃之間。

合適的惰性溶劑是例如烴，如己烷、石油醚、苯、甲苯或二甲苯；氯化的烴，如三氯乙烯、1,2-二氯乙烷、四氯化碳、氯仿或二氯甲烷；醇，如甲醇、乙醇、異丙醇、正丙醇、正丁醇或叔丁醇；醚，如乙醚、二異丙基醚、四氫呋喃(THF)或二氧雜環(huán)己烷；二醇醚，如乙二醇單甲基醚或乙二醇單乙基醚、乙二醇二甲基醚(二甘醇二甲醚)；酮，如丙酮或丁酮；酰胺，如乙酰胺、二甲基乙酰胺或二甲基甲酰胺(DMF)；腈，如乙腈；亞砜，如二甲亞砜(DMSO)；二硫化碳；羧酸，如甲酸或乙酸；硝基化合物，如硝基甲烷或硝基苯；酯，如乙酸乙酯或所述溶劑的混合物。

特別優(yōu)選的是二醇醚，如乙二醇單甲基醚、THF、二氯甲烷和/或DMF。

式I的化合物還優(yōu)選通過(guò)氧化式IV的化合物獲得。

優(yōu)選使用過(guò)氧化氫叔丁基進(jìn)行所述氧化。

根據(jù)所用條件，反應(yīng)時(shí)間在數(shù)分鐘至14天之間，反應(yīng)溫度在大約-15°至150°之間，通常在40°至130°之間，特別優(yōu)選在60°至110℃之間。

作為溶劑優(yōu)選的是水，其中也優(yōu)選添加堿金屬-或堿土金屬-氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，或堿金屬或堿土金屬，優(yōu)選鉀、鈉、鈣或銫的另外的弱酸鹽。

藥用鹽和其它形式

所述根據(jù)本發(fā)明的化合物可以以它們的最終非鹽形式使用。另一方面，本發(fā)明還包括以根據(jù)本領(lǐng)域中已知的程序可衍生自各種有機(jī)和無(wú)機(jī)酸和堿的它們的可藥用的鹽形式使用這些化合物。根據(jù)本發(fā)明的化合物的可藥用的鹽形式主要通過(guò)常規(guī)方法制備。如果根據(jù)本發(fā)明的化合物含有羧基，則可以通過(guò)使該化合物與合適的堿反應(yīng)產(chǎn)生相應(yīng)的堿加成鹽來(lái)形成其合適的鹽之一。這樣的堿是例如堿金屬氫氧化物，包括氫氧化鉀、氫氧化鈉和氫氧化鋰；堿土金屬氫氧化物，如氫氧化鋇和氫氧化鈣；堿金屬醇鹽，例如乙醇鉀和丙醇鈉；和各種有機(jī)堿，如哌啶、二乙醇胺和N-甲基谷氨酰胺。同樣包括根據(jù)本發(fā)明的化合物的鋁鹽。在某些根據(jù)本發(fā)明的化合物的情況下，可以通過(guò)用可藥用的有機(jī)和無(wú)機(jī)酸，例如鹵化氫，如氯化氫、溴化氫或碘化氫、其它無(wú)機(jī)酸及其相應(yīng)的鹽，硫酸鹽、硝酸鹽或磷酸鹽等和烷基-和單芳基磺酸鹽，如乙磺酸鹽、甲苯磺酸鹽和苯磺酸鹽，和其它有機(jī)酸及其相應(yīng)的鹽，如乙酸鹽、三氟乙酸鹽、酒石酸鹽、馬來(lái)酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、水楊酸鹽、抗壞血酸鹽等處理這些化合物來(lái)形成酸加成鹽。相應(yīng)地，式I的化合物的可藥用的酸加成鹽包括下列：乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、精氨酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽(苯磺酸鹽)、硫酸氫鹽、亞硫酸氫鹽、溴化物、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、辛酸鹽、氯化物、氯苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、磷酸二氫鹽、二硝基苯甲酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、粘酸鹽(由粘酸形成)、半乳糖醛酸鹽、葡庚糖酸鹽、葡糖酸鹽、谷氨酸鹽、甘油磷酸鹽、半琥珀酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、馬尿酸鹽、鹽酸鹽、氫溴化物、氫碘化物、2-羥基乙磺酸鹽、碘化物、羥乙基磺酸鹽、異丁酸鹽、乳酸鹽、乳糖醛酸鹽、蘋(píng)果酸鹽、馬來(lái)酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、偏磷酸鹽、甲磺酸鹽、甲基苯甲酸鹽、磷酸一氫鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、油酸鹽、雙羥萘酸鹽(palmoate)、果膠酯酸鹽、過(guò)硫酸鹽、苯基乙酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、膦酸鹽、鄰苯二甲酸鹽，但這并非限制。

此外，根據(jù)本發(fā)明的化合物的堿式鹽包括鋁-、銨-、鈣-、銅-、鐵(III)-、鐵(II)-、鋰-、鎂-、錳(III)-、錳(II)-、鉀-、鈉和鋅鹽，但這無(wú)意代表限制。在上述鹽中，優(yōu)選銨；鈉和鉀的堿金屬鹽，以及鈣和鎂的堿土金屬鹽。衍生自可藥用的有機(jī)無(wú)毒堿的根據(jù)本發(fā)明的化合物的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺、取代胺，也包括天然存在的取代胺、環(huán)胺和堿性離子交換樹(shù)脂，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、氯普魯卡因、膽堿、N,N'-二芐基乙二胺(芐星)、二環(huán)己基胺、二乙醇胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、還原葡糖胺、葡糖胺、組氨酸、哈胺(Hydrabamine)、異丙胺、利多卡因、賴氨酸、葡甲胺、N-甲基-D-葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹(shù)脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙醇胺、三乙胺、三甲胺、三丙胺和三(羥基甲基)甲基胺(氨丁三醇)的鹽，但這無(wú)意代表限制。

含有堿性含氮的基團(tuán)的本發(fā)明的化合物可以用如(C₁-C₄)烷基鹵，例如甲基-、乙基-、異丙基-和叔丁基氯、-溴和-碘；二(C₁-C₄)烷基硫酸鹽，例如二甲基-、二乙基-和二戊基硫酸鹽；(C₁₀-C₁₈)烷基鹵，例如癸基-、十二烷基-、月桂基-、十四烷基-和十八烷基氯、-溴和-碘；和芳基-(C₁-C₄)烷基鹵，例如芐基氯和苯乙基溴之類的試劑季堿化。可以使用這樣的鹽制備根據(jù)本發(fā)明的水溶性和油溶性化合物。

優(yōu)選的上述藥用鹽包括乙酸鹽、三氟乙酸鹽、苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、半琥珀酸鹽、馬尿酸鹽、鹽酸鹽、氫溴化物、羥乙基磺酸鹽、扁桃酸鹽、葡甲胺、硝酸鹽、油酸鹽、膦酸鹽、特戊酸鹽、磷酸鈉、硬脂酸鹽、硫酸鹽、磺基水楊酸鹽、酒石酸鹽、硫代蘋(píng)果酸鹽、甲苯磺酸鹽和氨丁三醇，但這無(wú)意代表限制。

通過(guò)使游離堿形式與足量的所需酸接觸，由此以常規(guī)方式形成鹽來(lái)制備堿性的根據(jù)本發(fā)明的化合物的酸加成鹽。可以通過(guò)使鹽形式與堿接觸并以常規(guī)方式分離游離堿來(lái)再生游離堿。游離堿形式在某些方面，在某些物理性質(zhì)，如在極性溶劑中的溶解度方面不同于其相應(yīng)的鹽形式；但為了本發(fā)明的目的，該鹽在其它方面相應(yīng)于其各自的游離堿形式。

如所提到，用金屬或胺，如堿金屬和堿土金屬或有機(jī)胺形成根據(jù)本發(fā)明的化合物的可藥用的堿加成鹽。優(yōu)選的金屬是鈉、鉀、鎂和鈣。優(yōu)選的有機(jī)胺是N,N’-二芐基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基-D-葡糖胺和普魯卡因。

通過(guò)使游離酸形式與足量的所需堿接觸，由此以常規(guī)方式形成鹽來(lái)制備根據(jù)本發(fā)明的酸性化合物的堿加成鹽?？梢酝ㄟ^(guò)使鹽形式與酸接觸并以常規(guī)方式分離游離酸來(lái)再生游離酸。游離酸形式在某些方面，在某些物理性質(zhì)，如在極性溶劑中的溶解度方面不同于其相應(yīng)的鹽形式；但為了本發(fā)明的目的，該鹽在其它方面相應(yīng)于其各自的游離酸形式。

如果根據(jù)本發(fā)明的化合物含有多于一個(gè)能形成這種類型的可藥用的鹽的基團(tuán)，則本發(fā)明還包括復(fù)合鹽。典型的復(fù)合鹽形式包括例如，酒石酸氫鹽、雙乙酸鹽、富馬酸氫鹽、二葡甲胺、二磷酸鹽、二鈉和三鹽酸鹽，但這無(wú)意代表限制。

根據(jù)上文可以看出，表述“可藥用的鹽”在本文中意指包含以其鹽之一的形式的根據(jù)本發(fā)明的化合物的活性化合物，特別是，與之前使用的活性化合物的游離形式或該活性化合物的任何其它鹽形式相比，如果這種鹽形式賦予了該活性化合物改進(jìn)的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。該活性化合物的可藥用的鹽形式還可首次賦予這種活性化合物之前沒(méi)有的并甚至在其體內(nèi)治療效力方面對(duì)這種活性化合物的藥效學(xué)可具有積極影響的所需藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。

本發(fā)明還涉及包含至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其可藥用衍生物、溶劑合物和立體異構(gòu)體，包括它們以所有比率的混合物和任選賦形劑和/或輔助劑的藥劑。

藥物制劑可以以每劑量單位包含預(yù)定量的活性化合物的劑量單位形式給藥。根據(jù)治療的病況、給藥方法和患者的年齡、體重和狀況，這樣的單位可包含例如0.5毫克至1克，優(yōu)選1毫克至700毫克，特別優(yōu)選5毫克至100毫克的根據(jù)本發(fā)明的化合物，或藥物制劑可以以每劑量單位包含預(yù)定量的活性化合物的劑量單位形式給藥。優(yōu)選的劑量單位制劑是包含如上指示的日劑量或分劑量或其相應(yīng)部分的活性化合物的那些。此外，可以使用制藥領(lǐng)域中公知的方法制備這種類型的藥物制劑。

可調(diào)整藥物制劑經(jīng)由任意合適方法給藥，例如通過(guò)經(jīng)口(包括口腔或舌下)、直腸、經(jīng)鼻、局部(包括口腔、舌下或經(jīng)皮)、陰道或腸道外(包括皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi))方法。可以使用制藥領(lǐng)域中已知的所有方法通過(guò)例如將活性化合物與一種或多種賦形劑或一種或多種輔助劑合并來(lái)制備這樣的制劑。

適合口服給藥的藥物制劑可作為獨(dú)立單位，例如膠囊或片劑；粉劑或顆粒劑；在水性或非水性液體中的溶液或混懸液；可食用泡沫或泡沫食品；或水包油液體乳劑或油包水液體乳劑給藥。

因此，例如，在片劑或膠囊形式的口服給藥情況下，可以將活性成分組分與口服、無(wú)毒和可藥用的惰性賦形劑，例如乙醇、甘油、水等合并。通過(guò)將該化合物研碎至合適的細(xì)粒度并將其與以類似方式研碎的藥物賦形劑，例如可食用的碳水化合物，例如淀粉或甘露醇混合，制備粉劑。還可能存在矯味劑、防腐劑、分散劑和染料。

通過(guò)如上所述制備粉末混合物并用其填充成形明膠殼，制造膠囊。在填充操作之前可以將助流劑和潤(rùn)滑劑，例如固體形式的高分散二氧化硅、滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或聚乙二醇添加到該粉末混合物中。也可以添加崩解劑或增溶劑，例如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉，以改進(jìn)服用膠囊后藥劑的利用度。

此外，如果需要或必要，也可以將合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑和崩解劑以及染料摻入該混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖，例如葡萄糖或β-乳糖，由玉米制成的甜味劑、天然和合成橡膠，例如阿拉伯樹(shù)膠、黃蓍膠或藻酸鈉、羧甲基纖維素、聚乙二醇、蠟等。這些劑型中所用的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括，但不限于，淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等。通過(guò)例如制備粉末混合物、粒化或干壓該混合物，添加潤(rùn)滑劑和崩解劑并將整個(gè)混合物壓制成片劑來(lái)配制片劑。通過(guò)將以合適方式粉碎的化合物與如上所述的稀釋劑或基料和任選與粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠或聚乙烯基吡咯烷酮、溶出阻滯劑，例如石蠟，吸收促進(jìn)劑，例如季銨鹽，和/或吸收劑，例如膨潤(rùn)土、高嶺土或磷酸二鈣混合，制備粉末混合物?？梢酝ㄟ^(guò)用粘合劑，例如糖漿、淀粉糊、阿拉伯膠漿或纖維素-或聚合物材料的溶液潤(rùn)濕并將其壓過(guò)篩子來(lái)粒化該粉末混合物。代替粒化，可以使粉末混合物經(jīng)過(guò)壓片機(jī)，以產(chǎn)生形狀不均勻的團(tuán)塊，將其打碎形成顆粒。可以通過(guò)添加硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石或礦物油使顆粒涂上油脂以防止粘著到鑄片模具上。然后將經(jīng)涂脂的混合物壓成片劑。根據(jù)本發(fā)明的化合物也可以與自由流動(dòng)的惰性賦形劑合并，然后在不進(jìn)行造?；蚋蓧翰襟E的情況下直接壓成片劑。可存在由蟲(chóng)膠密封層、糖或聚合物材料層和蠟制光澤層構(gòu)成的透明或不透明保護(hù)層?？梢詫⑷玖咸砑拥竭@些包衣中以便能區(qū)分不同的劑量單位。

口服液，例如溶液、糖漿和酏劑可以以劑量單位形式制備以使所給的量包含預(yù)定量的化合物?？梢酝ㄟ^(guò)將該化合物溶解在含合適矯味劑的水溶液中來(lái)制備糖漿，而使用無(wú)毒醇類媒介物制備酏劑。可以通過(guò)將該化合物分散在無(wú)毒媒介物中來(lái)配制混懸液。也可以加入增溶劑和乳化劑，例如乙氧基化異硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚，防腐劑、矯味添加劑，例如薄荷油，或天然甜味劑或糖精，或其它人工甜味劑等。

如果期需，用于口服給藥的劑量單位制劑可包封在微囊中。也可以以延長(zhǎng)或延遲釋放的方式制備該制劑，例如通過(guò)將微粒材料包衣或包埋于聚合物、蠟等中。

根據(jù)本發(fā)明的化合物及其鹽、溶劑合物和生理功能衍生物還可以以脂質(zhì)體遞送體系，例如單層小囊泡、單層大囊泡和多層囊泡的形式給藥。脂質(zhì)體可以由各種磷脂，例如膽固醇、硬脂胺或磷脂酰膽堿形成。

根據(jù)本發(fā)明的化合物及其鹽、溶劑合物和生理功能衍生物還可以使用單克隆抗體作為該化合物分子偶聯(lián)于其上的獨(dú)立載體遞送。該化合物還可到與作為靶向藥劑載體的可溶聚合物偶聯(lián)。這樣的聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯酰氨基苯酚、聚羥乙基天冬酰氨基苯酚或聚氧化乙烯聚賴氨酸，其被棕櫚酰基基團(tuán)取代。此外，該化合物可偶聯(lián)到適合實(shí)現(xiàn)藥劑控釋的一類可生物降解的聚合物，例如聚乳酸、聚ε-己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二羥基吡喃類、聚氰基丙烯酸酯和水凝膠的交聯(lián)或兩親嵌段共聚物上。

適于經(jīng)皮施用的藥物制劑可以作為與接受者的表皮長(zhǎng)期緊密接觸的獨(dú)立硬膏劑施用。因此，例如，可以用離子電滲療法使活性化合物從硬膏劑中遞送，如Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)中的通用術(shù)語(yǔ)所述。

適合局部給藥的藥物化合物可配制為軟膏劑、乳膏劑、混懸液、洗劑、粉劑、溶液、糊劑、凝膠、噴霧劑、氣霧劑或油。

為了治療眼睛或其它外部組織，例如口腔和皮膚，該制劑優(yōu)選以局部軟膏劑或乳膏劑的形式施用。在配制成軟膏劑的情況下，活性化合物可以與石蠟族或水混溶性膏基一起使用。或者，活性化合物可以與水包油型乳膏基質(zhì)或油包水型基質(zhì)一起配制成膏劑。

適合局部施用于眼睛的藥物制劑包括滴眼液，其中將活性化合物溶解或懸浮在合適的載體，特別是水性溶劑中。

適合局部施用于口腔的藥物制劑包括錠劑、軟錠劑和漱口液。

適合直腸給藥的藥物制劑可以以栓劑或灌腸劑的形式給藥。

其中載體物質(zhì)是固體的適合經(jīng)鼻給藥的藥物制劑包括粒度為例如20-500微米的粗粉，其以鼻吸的方式給藥，即通過(guò)經(jīng)鼻腔通道從靠近鼻子的含有粉劑的容器中快速吸入。以液體作為載體物質(zhì)的適合作為鼻噴霧劑或滴鼻劑給藥的制劑包括在水或油中的活性成分溶液。

適合通過(guò)吸入給藥的藥物制劑包含可通過(guò)各種類型的含氣霧劑的加壓分配器、噴霧器或吹入器生成的細(xì)粒粉或霧。

適合陰道給藥的藥物制劑可作為子宮托、棉條、乳膏劑、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧制劑給藥。

適合腸道外給藥的藥物制劑包括包含抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和由此使得該制劑與被治療的受體的血液等滲的溶質(zhì)的水性和非水性無(wú)菌注射液；可包含懸浮介質(zhì)和增稠劑的水性和非水性無(wú)菌混懸液。該制劑可以在單劑量或多劑量容器，例如密封的安瓿和小瓶中給藥并以冷凍干燥(凍干)狀態(tài)儲(chǔ)存，以便僅需在臨用前加入無(wú)菌載體液體例如注射用水。按照處方制備的注射溶液和混懸液可以由無(wú)菌粉末、顆粒和片劑制備。

不言而喻的是，除上文特別提到的成分外，該制劑還可包含本領(lǐng)域中根據(jù)制劑的特定類型常見(jiàn)的其它試劑；因此，例如，適合口服的制劑可包含矯味劑。

根據(jù)本發(fā)明的化合物的治療有效量取決于許多因素，包括例如動(dòng)物的年齡和體重、需要治療的確切病癥及其嚴(yán)重程度、制劑的性質(zhì)和給藥方法，并最終由治療醫(yī)生或獸醫(yī)決定。但是，用于治療腫瘤生長(zhǎng)，例如結(jié)腸或乳腺癌的本發(fā)明的化合物的有效量通常在0.1至100毫克/公斤受體(哺乳動(dòng)物)體重/天的范圍，并特別通常為1至10毫克/公斤體重/天的范圍。因此，體重70公斤的成年哺乳動(dòng)物每天的實(shí)際量通常在70至700毫克之間，其中這種量可作為每天單劑給藥或通常以每天一系列分劑量(例如2、3、4、5或6)給藥，以使總?cè)談┝肯嗤??？勺鳛楦鶕?jù)本發(fā)明的化合物本身的有效量的比例確定其鹽的有效量。類似劑量被認(rèn)為適用于治療上文提到的其它疾病情況。

本發(fā)明還涉及包含至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其可藥用鹽和立體異構(gòu)體，包括它們所有比率的混合物和至少一種其它藥劑活性化合物的藥劑。

本發(fā)明還涉及套裝(試劑盒)，其由下列的單獨(dú)包裝構(gòu)成

(a) 有效量的根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其可藥用鹽和立體異構(gòu)體，包括它們所有比率的混合物，

和

(b) 有效量的其它藥劑活性化合物。

該套裝包含合適的容器，如盒、單個(gè)瓶、袋或安瓿。該套裝可例如包含分開(kāi)的安瓿，每個(gè)安瓿各自含有有效量的根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其可藥用鹽和立體異構(gòu)體，包括它們以所有比率的混合物，和有效量的溶解或凍干形式的其它藥劑活性化合物。

本發(fā)明涉及用于治療腫瘤、腫瘤轉(zhuǎn)移、腎小球系膜細(xì)胞的增殖性疾病、血管瘤、增殖性視網(wǎng)膜病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈粥樣硬化新生血管形成、牛皮癬、眼部新生血管形成、骨質(zhì)疏松癥、糖尿病和肥胖癥、淋巴性白血病、淋巴瘤、瘧疾和前列腺肥大的根據(jù)本發(fā)明的化合物及其可藥用鹽、互變異構(gòu)體和立體異構(gòu)體，包括它們所有比率的混合物。

用途

本化合物適合作為藥物活性化合物用于哺乳動(dòng)物，尤其是人類以治療和控制疾病。這些疾病包括腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)實(shí)體瘤生長(zhǎng)的病理性新生血管形成(或血管生成)、眼中的新生血管形成(糖尿病視網(wǎng)膜病變、年齡引發(fā)的黃斑變性等)和炎癥(牛皮癬、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等)和腎小球系膜細(xì)胞的增殖性疾病。

本發(fā)明包括根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其生理學(xué)可接受的鹽和溶劑合物用于制備用于治療或預(yù)防腫瘤、腫瘤病和/或腫瘤轉(zhuǎn)移的藥劑的用途。

所述腫瘤病優(yōu)選選自：鱗狀上皮、膀胱、胃、腎、頭頸、食道、子宮頸、甲狀腺、腸、肝、腦、前列腺、泌尿生殖道、淋巴系統(tǒng)、胃、喉、肺、皮膚的腫瘤，單核細(xì)胞白血病、肺腺癌、小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、乳腺癌、急性骨髓性白血病、慢性骨髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤。

還包括根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其生理學(xué)可接受的鹽和溶劑合物用于制備用于治療骨質(zhì)疏松癥、糖尿病和肥胖癥的藥劑的用途。

還包括根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其生理學(xué)可接受的鹽和溶劑合物用于制備用于治療或預(yù)防牽涉血管生成的疾病的藥劑的用途。

牽涉血管生成的這種類型的疾病是眼病，如視網(wǎng)膜血管新生、糖尿病視網(wǎng)膜病變、年齡引發(fā)的黃斑變性等。

血管生成疾病優(yōu)選選自糖尿病視網(wǎng)膜病變、關(guān)節(jié)炎、癌、牛皮癬、卡波西肉瘤、血管瘤、心肌血管生成、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊新生血管、血管生成性眼病、脈絡(luò)膜新生血管、晶狀體后纖維增生癥、黃斑變性、角膜移植排斥、虹膜紅變、神經(jīng)肌肉青光眼(neuroscular glaucoma)、Oster Webber綜合征。

腎小球系膜細(xì)胞的增殖性疾病優(yōu)選選自腎小球腎炎、糖尿病腎病、惡性腎硬化、血栓性微血管病綜合征、移植排斥、腎小球病。

根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其生理學(xué)可接受的鹽和溶劑合物用于制備用于治療或預(yù)防炎性疾病的藥劑的用途也落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這樣的炎性疾病的實(shí)例包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、牛皮癬、接觸性皮炎、遲發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)等。

所述炎性疾病優(yōu)選選自炎性腸病、關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈粥樣硬化、哮喘、過(guò)敏癥、炎性腎病、多發(fā)性硬化、慢性阻塞性肺疾病、炎性皮膚病、牙周疾病(pardontal disease)、牛皮癬、T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病。

所述炎性腸病優(yōu)選選自潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、非特異性結(jié)腸炎。

所述T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫病優(yōu)選選自變應(yīng)性腦脊髓炎、變應(yīng)性神經(jīng)炎、移植排斥、移植物抗宿主反應(yīng)、心肌炎、甲狀腺炎、腎炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、胰島素依賴性糖尿病。

所述關(guān)節(jié)炎病優(yōu)選選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、卡普蘭綜合征、費(fèi)爾蒂綜合征、干燥綜合征、強(qiáng)直性脊柱炎、斯蒂爾病、軟骨鈣質(zhì)沉著病、代謝性關(guān)節(jié)炎、風(fēng)濕熱、萊特爾氏病、Wissler綜合征。

所述炎性腎病優(yōu)選選自腎小球腎炎、腎小球損傷、腎病綜合征、間質(zhì)性腎炎、狼瘡性腎炎、肺出血性腎炎綜合征、韋格納肉芽腫、腎血管炎、IgA腎病、特發(fā)性腎小球疾病。

所述炎性皮膚病優(yōu)選選自牛皮癬、特應(yīng)性皮炎、接觸敏感、痤瘡。

還包括根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其可藥用的鹽和溶劑合物用于制備用于治療或預(yù)防哺乳動(dòng)物的疾病或病癥的藥劑的用途，在這種方法中，將治療有效量的根據(jù)本發(fā)明的化合物給予需要這種治療的生病哺乳動(dòng)物。治療量取決于具體疾病并可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員不經(jīng)過(guò)度努力來(lái)確定。

本發(fā)明還包括根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其生理學(xué)可接受的鹽和溶劑合物用于制備用于治療或預(yù)防視網(wǎng)膜血管形成的藥劑的用途。

還包括根據(jù)本發(fā)明的化合物和/或其可藥用的鹽用于制備用于治療和/或?qū)共溉閯?dòng)物的腫瘤引發(fā)的疾病的藥劑的用途，在這種方法中，將治療有效量的本發(fā)明的化合物給予需要這種治療的生病哺乳動(dòng)物。治療量取決于具體疾病并可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員不經(jīng)過(guò)度努力來(lái)確定。

所公開(kāi)的根據(jù)本發(fā)明的化合物可以與其它治療劑，包括抗癌劑聯(lián)合給藥。如這里所使用的，術(shù)語(yǔ)“抗癌劑”涉及以治療癌癥為目的給予癌癥患者的任何藥劑。

上文定義的抗癌治療可以作為單一療法應(yīng)用，或者除了本文公開(kāi)的化合物之外，還可以包括常規(guī)外科手術(shù)或放射療法或藥物治療。這樣的藥物治療，例如化療或靶向治療，可以包括下列抗腫瘤劑的一種或多種，但優(yōu)選一種：

烷基化劑

例如六甲蜜胺，苯達(dá)莫司汀，白消安，卡莫司汀，苯丁酸氮芥，氮芥(chlormethine)，環(huán)磷酰胺，達(dá)卡巴嗪，異環(huán)磷酰胺，英丙舒凡, 甲苯磺酸鹽, 洛莫司汀, 美法侖, 二溴甘露醇, 二溴衛(wèi)矛醇, 尼莫司汀, 雷莫司汀, 替莫唑胺, 塞替派, 曲奧舒凡, 氮芥(mechloretamine), 卡波醌;

apaziquone，福莫司汀，葡磷酰胺，palifosfamide，哌泊溴烷，曲磷胺，烏拉莫司汀，TH-302⁴, VAL-083⁴；

鉑化合物

例如卡鉑，順鉑，依他鉑，米鉑(miriplatine)水合物，奧沙利鉑，洛鉑，奈達(dá)鉑，吡鉑(picoplatin)，沙鉑;

洛鉑，奈達(dá)鉑，吡鉑，沙鉑;

DNA改變劑

例如氨柔比星，比生群，地西他濱，米托蒽醌，丙卡巴肼，曲貝替定，氯法拉濱;

安吖啶，brostallicin，pixantrone，laromustine^1,3;

拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑

例如依托泊苷，伊立替康，雷佐生，索布佐生，替尼泊苷，拓?fù)涮婵?

氨萘非特，貝洛替康，elliptinium乙酸鹽, voreloxin；

微管調(diào)節(jié)劑

例如卡巴他賽，多西紫杉醇，艾日布林，伊沙匹隆(ixabepilone)，紫杉醇，長(zhǎng)春堿，長(zhǎng)春新堿，長(zhǎng)春瑞濱，長(zhǎng)春地辛，長(zhǎng)春氟寧;

fosbretabulin，替司他賽;

抗代謝物

例如天冬酰胺酶³，阿扎胞苷，左亞葉酸鈣，卡培他濱，克拉屈濱, 阿糖胞苷, 依諾他濱, 氟尿苷, 氟達(dá)拉濱，氟尿嘧啶，吉西他濱，巰基嘌呤，甲氨蝶呤，奈拉濱，培美曲塞，普拉曲塞，硫唑嘌呤，硫鳥(niǎo)嘌呤，卡莫氟;

去氧氟尿苷, elacytarabine，雷替曲塞，沙帕他濱，替加氟^2,3，三甲曲沙;

抗癌抗生素

例如博來(lái)霉素, 更生霉素, 多柔比星, 表柔比星, 伊達(dá)比星, 左旋咪唑, 米替福新，絲裂霉素C，羅米地辛，鏈脲菌素，戊柔比星，凈司他丁，佐柔比星，柔紅霉素，普卡霉素;

阿柔比星，培羅霉素，吡柔比星;

激素/拮抗劑

例如阿巴瑞克，阿比特龍，比卡魯胺，布舍瑞林，卡普睪酮，氯烯雌醚，地加瑞克(degarelix)，地塞米松，雌二醇，氟可龍，氟甲睪酮，氟他胺，氟維司群，戈舍瑞林，組氨瑞林，亮丙瑞林，甲地孕酮，米托坦，那法瑞林，諾龍，尼魯米特，奧曲肽，潑尼松龍，雷洛昔芬，他莫昔芬，促甲狀腺激素α，托瑞米芬，曲洛司坦，曲普瑞林，己烯雌酚;

阿佐比芬(acolbifene)，達(dá)那唑，地洛瑞林，環(huán)硫雄醇，orteronel，enzalutamide^1,3;

芳香酶抑制劑

例如氨魯米特，阿那曲唑，依西美坦，法倔唑，來(lái)曲唑，睪內(nèi)酯;

福美坦；

小分子激酶抑制劑

例如crizotinib，達(dá)沙替尼，厄洛替尼，伊馬替尼，拉帕替尼，尼洛替尼，帕唑帕尼，regorafenib，ruxolitinib，索拉非尼，舒尼替尼，凡德他尼，vemurafenib，波舒替尼，吉非替尼，阿西替尼;

阿法替尼，alisertib，dabrafenib，dacomitinib，dinaciclib，dovitinib，enzastaurin，nintedanib，lenvatinib，linifanib，linsitinib，masitinib，米哚妥林，motesanib，來(lái)那替尼，orantinib，哌立福辛(perifosine)，ponatinib，radotinib，rigosertib，tipifarnib，tivantinib，tivozanib，trametinib，pimasertib，brivanib alaninate, cediranib, apatinib⁴, cabozantinib S-malate^1,3, ibrutinib^1,3, icotinib⁴, buparlisib², cipatinib⁴, cobimetinib^1,3, idelalisib^1,3, fedratinib¹, XL-647⁴;

光敏劑

例如甲氧沙林³;

卟吩姆鈉，他拉泊芬，替莫泊芬;

抗體

例如阿侖單抗，besileomab，brentuximab vedotin，西妥昔單抗，denosumab，ipilimumab，ofatumumab，帕尼單抗，利妥昔單抗，托西莫單抗，曲妥珠單抗，貝伐單抗，帕妥珠單抗^2,3;

catumaxomab，elotuzumab，依帕珠單抗，farletuzumab，mogamulizumab，necitumumab，尼妥珠單抗，obinutuzumab，ocaratuzumab，oregovomab，ramucirumab，rilotumumab，siltuximab，tocilizumab，扎妥木單抗，zanolimumab，馬妥珠單抗，dalotuzumab^1,2,3, onartuzumab^1,3, racotumomab¹, tabalumab^1,3, EMD-525797⁴, nivolumab^1,3;

細(xì)胞因子

例如阿地白介素，干擾素α²，干擾素α2a³，干擾素α2b^2,3;

西莫白介素，他索納明，替西白介素，奧普瑞白介素^1,3，重組干擾素β-1a⁴;

藥物綴合物

例如地尼白介素(denileukin diftitox)，替伊莫單抗，碘芐胍I123，潑尼莫司汀，曲妥珠單抗emtansine，雌莫司汀，吉姆單抗，奧佐米星，阿柏西普;

cintredekin besudotox, edotreotide, 伊替單抗奧佐米星，naptumomab estafenatox，oportuzumab monatox，锝(99mTc)阿西莫單抗^1,3，vintafolide^1,3;

疫苗

例如sipuleucel³; vitespen³, emepepimut-S³, oncoVAX⁴, rindopepimut³, troVax⁴, MGN-1601⁴, MGN-1703⁴;

其它

阿利維A酸，貝沙羅汀，硼替佐米，依維莫司，伊班膦酸，咪喹莫特，來(lái)那度胺，香菇多糖，甲酪氨酸，mifamurtide，帕米膦酸，培門冬酶，噴司他丁，sipuleucel³，西佐喃，他米巴羅汀，西羅莫司，沙利度胺，維甲酸，vismodegib，唑來(lái)膦酸，伏立諾他;

塞來(lái)昔布，西侖吉肽，entinostat，依他硝唑，ganetespib，idronoxil，iniparib，ixazomib，氯尼達(dá)明，尼莫唑，帕比司他，peretinoin，plitidepsin，pomalidomide，丙考達(dá)唑，ridaforolimus，tasquinimod，telotristat，胸腺法新，替拉扎明，tosedostat，trabedersen，烏苯美司，伐司樸達(dá)，gendicine⁴，溶鏈菌⁴, reolysin⁴, retaspimycin鹽酸鹽^1,3, trebananib^2,3, 維魯利秦(virulizin)⁴, carfilzomib^1,3, 內(nèi)皮他丁(endostatin)⁴, immucothel⁴, belinostat³, MGN-1703⁴;

¹ Prop. INN (提議的國(guó)際非專有名稱)

² Rec. INN (推薦的國(guó)際非專有名稱)

³ USAN (美國(guó)采用的名稱)

⁴ 非INN。

藥理學(xué)抑制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖/活力的作用的體外證明

1.0 背景

在本實(shí)驗(yàn)描述中，描述了通過(guò)活性化合物抑制腫瘤細(xì)胞增殖/腫瘤細(xì)胞活力。

在微滴定板(96孔形式)中以合適的細(xì)胞密度播種細(xì)胞并以濃度系列的形式加入受試物質(zhì)。在含血清的培養(yǎng)基中再培養(yǎng)4天后，可以借助阿爾瑪藍(lán)試驗(yàn)系統(tǒng)測(cè)定腫瘤細(xì)胞增殖/腫瘤細(xì)胞活力。

2.0 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

例如，市售可得的結(jié)腸癌細(xì)胞系、卵巢細(xì)胞系、前列腺細(xì)胞系或乳腺細(xì)胞系等。

在培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞。以幾天的時(shí)間間隔，借助于胰蛋白酶溶液從培養(yǎng)皿中剝離細(xì)胞并在合適稀釋度下播種在新鮮培養(yǎng)基中。在37℃和10% CO₂下培養(yǎng)細(xì)胞。

2.2. 細(xì)胞播種

用多通道移液器將規(guī)定的細(xì)胞數(shù)(例如2000個(gè)細(xì)胞)/培養(yǎng)物/在180微升體積培養(yǎng)基中的孔播種在微滴定板(96孔細(xì)胞培養(yǎng)板)中。隨后在CO₂培養(yǎng)器(37℃和10% CO₂)中培養(yǎng)細(xì)胞。

2.3. 受試物質(zhì)的添加

將受試物質(zhì)溶解在例如DMSO中并隨后以相應(yīng)濃度(如果需要，以稀釋系列)用在細(xì)胞培養(yǎng)基中?？筛鶕?jù)活性化合物的效力和所希望的濃度分布調(diào)節(jié)稀釋等級(jí)。將細(xì)胞培養(yǎng)基以相應(yīng)濃度添加到受試物質(zhì)中?？梢栽诩?xì)胞播種的同一天將受試物質(zhì)添加到細(xì)胞中。為此，在每種情況下，將來(lái)自預(yù)稀釋板的20微升物質(zhì)溶液添加到培養(yǎng)物/孔中。細(xì)胞在37℃和10% CO₂下再培養(yǎng)4天。

2.4. 顯色反應(yīng)的測(cè)量

在各情況下，每孔分別加入20微升AlamarBlue試劑，并將微滴定板在CO₂培養(yǎng)器(在37℃和10% CO₂下)中再孵育例如7小時(shí)。在帶有熒光過(guò)濾器的讀數(shù)器中在540納米波長(zhǎng)下測(cè)量板。可在臨測(cè)量前輕輕搖動(dòng)板。

3. 評(píng)估

從所有其它吸光度值中減去培養(yǎng)基對(duì)照物(未使用細(xì)胞和受試物質(zhì))的吸光度值。將對(duì)照物(無(wú)受試物質(zhì)的細(xì)胞)設(shè)定為等于100%，并相對(duì)于其表示所有其它吸光度值(例如以對(duì)照物的%)：

計(jì)算:

借助統(tǒng)計(jì)程序，例如RS1測(cè)定IC₅₀值(50%抑制)。

在BrdU增殖試驗(yàn)(細(xì)胞檢測(cè))中測(cè)定甲硫氨酸氨肽酶2的抑制劑的增殖抑制

通過(guò)將溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)加入人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC, PromoCell, C-12200)中，測(cè)定增殖抑制。在37℃和5% CO₂下，在含有補(bǔ)充劑混合物(PromoCell, C-39225)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基(PromoCell, C-22200)中培養(yǎng)HUVEC。在借助胰蛋白酶/EDTA剝離細(xì)胞后，測(cè)定活細(xì)胞數(shù)并在175微升總體積中以每孔1000個(gè)細(xì)胞的密度播種細(xì)胞(孔預(yù)先用補(bǔ)充的培養(yǎng)基在37℃下涂布1-2小時(shí)或用1.5%明膠在37℃下涂布0.5-2小時(shí))。在培養(yǎng)24小時(shí)后，以各種濃度(例如在10倍逐步稀釋中，最終濃度30 μM至0.03 nM)和25微升的體積加入受試物質(zhì)。DMSO濃度恒定保持在0.3%。在培養(yǎng)總共48或72小時(shí)后，加入20微升溴脫氧尿嘧啶核苷(Roche, # 11647229001，在培養(yǎng)基中1:1000稀釋，最終濃度10μM)，并培養(yǎng)另外20至24小時(shí)。在用受試物質(zhì)培養(yǎng)總共72或96小時(shí)后，除去培養(yǎng)基并進(jìn)行免疫組織化學(xué)測(cè)定以檢測(cè)BrdU并入(BrdU ELISA, Roche, # 11647229001)。為此，在室溫下將細(xì)胞用固定劑處理30分鐘，隨后用過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗-BrdU抗體(在抗體稀釋緩沖液中稀釋1:100)在室溫下孵育60分鐘。在用1倍濃縮的DPBS緩沖液(Gibco, # 14200)洗滌三次后，在TMB底物溶液中引發(fā)酶促反應(yīng)。在15分鐘后通過(guò)添加25微升1M硫酸溶液，停止顯色。在5分鐘內(nèi)，通過(guò)在450 nM波長(zhǎng)下測(cè)量進(jìn)行光學(xué)密度測(cè)定。所用對(duì)照物是含有DMSO處理的細(xì)胞(100%對(duì)照)的孔或空孔(空白值)。通過(guò)使用抑制劑煙曲霉素檢查和證實(shí)這一試驗(yàn)對(duì)甲硫氨酸氨肽酶抑制劑的敏感性。

MetAP-2活性測(cè)量

通過(guò)偶聯(lián)酶反應(yīng)測(cè)定MetAP-2活性。使用三肽Met-Arg-Ser (MAS)作為底物。釋放的甲硫氨酸首先通過(guò)L-氨基氧化酶(AAO)轉(zhuǎn)化成Met_ox和H₂O₂。在第二步驟中，借助于H₂O₂，過(guò)氧化物酶(POD)催化隱色染料鄰聯(lián)茴香胺生成鄰聯(lián)茴香胺_ox的氧化，在450納米下光度檢出其增加。

可以作為動(dòng)力學(xué)連續(xù)記錄MetAP-2活性。反應(yīng)圖式表明，每摩爾甲硫氨酸形成1摩爾鄰聯(lián)茴香胺_ox。因此MetAP-2酶活性可以直接計(jì)算為每時(shí)間單位的Δ吸收。可以借助鄰聯(lián)茴香胺_ox消光系數(shù)定量MetAP-2活性(摩爾Met/時(shí)間單位)。將每時(shí)間單位的消光變化繪成圖表并在該反應(yīng)的視覺(jué)線性區(qū)中進(jìn)行斜率計(jì)算。

該化合物的活性概括在表1中。

通過(guò)并入BrdU定量測(cè)定HUVEC增殖

HUVEC意指人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。

化合物的活性概述在表2。

測(cè)定的目的/定義

在5天孵育期后使用BrdU的并入作為細(xì)胞周期活性的度量，測(cè)量HUVEC增殖。在存在或不存在受試物質(zhì)的情況下孵育細(xì)胞。在孵育期的最后18-24小時(shí)期間將BrdU加入至培養(yǎng)基。在細(xì)胞發(fā)展通過(guò)細(xì)胞周期的S-期(DNA合成)時(shí)將BrdU并入DNA。固定細(xì)胞，和并入的BrdU的量可使用用于檢測(cè)BrdU的市售ELISA定量測(cè)定。

該測(cè)定法對(duì)于MetAP2項(xiàng)目而被開(kāi)發(fā)用于篩選受試物質(zhì)，但可應(yīng)用于評(píng)價(jià)影響HUVEC增殖的任何物質(zhì)的作用。

試劑

EGM MV – 細(xì)胞培養(yǎng)基

胰蛋白酶/EDTA (0.5% / 0.53 mM溶液)

不含Ca和Mg的Dulbeccos’s PBS

細(xì)胞增殖ELISA BrdU比色

DMSO

參比化合物

Abbott參比A-832234 MSC2129790

TNP-470 MSC1902850

程序

HUVEC在EGM MV培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)和在第3和8代之間使用。

第1天–接種細(xì)胞

吸取75 μl/孔生長(zhǎng)培養(yǎng)基EGM MV (Promocell)至96孔板，H行孔只接受培養(yǎng)基而無(wú)細(xì)胞，用于試劑空白。

將板在37℃孵育，同時(shí)制備細(xì)胞。

按慣例用胰蛋白酶收獲HUVEC：

吸出培養(yǎng)基，用10 ml PBS洗滌單層細(xì)胞一次，每個(gè)T75 cm²瓶加入2 ml胰蛋白酶溶液和在37℃下孵育2-5分鐘以使細(xì)胞脫離。

用10 ml EGM MV從瓶沖洗細(xì)胞和轉(zhuǎn)移至離心管。

以400 xg離心5分鐘，重懸和計(jì)數(shù)。

調(diào)整細(xì)胞濃度至1e4個(gè)細(xì)胞/ml。

在以75 ul/孔制備的板中，吸取100 ul/孔= 1000個(gè)細(xì)胞/孔，總體積175 ul/孔。

將板在37℃下孵育過(guò)夜。

第2天–加入受試物質(zhì)

一般而言，受試物質(zhì)由藥房以10 mM在REMP管中提供。

將受試物質(zhì)預(yù)稀釋在DMSO中，然后制備在細(xì)胞培養(yǎng)基中的工作稀釋液以加入細(xì)胞板。

受試物質(zhì)的濃度范圍是30 μM，連續(xù)3倍稀釋，6點(diǎn)曲線。

參比化合物 –

MSC 1902850 TNP-270 以30 nM (1:1000預(yù)稀釋)開(kāi)始

MSC 2129790 以300 nM (1:100預(yù)稀釋)開(kāi)始

參比化合物必須在DMSO中預(yù)稀釋，以產(chǎn)生濃度曲線，其中預(yù)期的EC₅₀落入6-點(diǎn)曲線的中間。參比化合物的10 mM儲(chǔ)液在DMSO中預(yù)稀釋，然后按下所述加入板中。

在DMSO中預(yù)稀釋受試物質(zhì)：

在96孔聚丙烯圓底板中：

行A – 放入20 μl在DMSO中的10 mM受試物質(zhì)儲(chǔ)液(或按上所述預(yù)稀釋的參比化合物)。

行B-H放入20 ul DMSO。

通過(guò)從行A轉(zhuǎn)移10 μl至行B連續(xù)稀釋3倍，混合和轉(zhuǎn)移10 μl至行C，等等至行F。

行G是100 % = 未處理，僅DMSO。這是無(wú)作用參考= 在Assay Explorer中0 %作用的值。

行H是無(wú)細(xì)胞的試劑空白，僅培養(yǎng)基。這是標(biāo)度參考/類型抑制 = 在Assay Explorer中-100 %作用的值。

在培養(yǎng)基中的工作稀釋液：

在96孔聚丙烯圓底板中：

放入244 μl培養(yǎng)基/孔

轉(zhuǎn)移6 μl的DMSO稀釋液至含細(xì)胞培養(yǎng)基的孔= 1:41,6稀釋= 8-倍濃度。

轉(zhuǎn)移25 μl/孔的工作稀釋液至含175 μl的細(xì)胞板，= 1:8稀釋。

對(duì)于在測(cè)試板中終濃度30 μM，自10 mM儲(chǔ)液的最終稀釋為1:333 (即41.6 x 8)。所有孔包含0.3% DMSO。

將板在37℃孵育直至第4天。

第4天–加入BrdU

BrdU儲(chǔ)液是10 mM，在PBS中(1000倍儲(chǔ)液)。

通過(guò)按1:100將其稀釋在培養(yǎng)基中，制備100 μM的工作稀釋液。各板需要2.2 ml。使用22 μl BrdU儲(chǔ)液/2.2 ml EGM MV培養(yǎng)基。

吸取20 μl/孔(1:10稀釋)。終濃度= 10 μM BrdU。

將板在37℃孵育18-24 hr。

第5天–固定，變性，ELISA –按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，具有以下體積變化：

搖出培養(yǎng)基，輕輕在紙巾上拍打，以除去所有培養(yǎng)基。

加入來(lái)自試劑盒的100 ul FixDenat溶液和在室溫下孵育30 min。

搖出FixDenat和輕輕在紙巾上拍打。

使板短暫空氣干燥(1-2分鐘)，允許固定的醇蒸發(fā)。

通過(guò)在試劑盒提供的抗體稀釋緩沖液中1:100稀釋儲(chǔ)液，每次新鮮制備抗-BrdU過(guò)氧化物酶綴合物工作溶液。

各板需要5 ml，使用50 μl/5 ml抗體稀釋緩沖液。

抗BrdU過(guò)氧化物酶綴合物儲(chǔ)液通過(guò)將凍干物質(zhì)溶解在1.1 ml MilliQ水中制備。將儲(chǔ)液在4℃下保存數(shù)周，在-20℃下長(zhǎng)期保存。

加入50 ul/孔的抗-BrdU過(guò)氧化物酶綴合物和在室溫下在Eppendorf板振蕩器上以300 rpm孵育60-90分鐘。

搖出抗體溶液，和將板用225 μl/孔洗滌溶液(試劑盒中提供，或也可使用含Ca/ Mg的PBS)洗滌3次。

加入100 μl/孔底物，和在室溫下孵育5-10分鐘。

加入25 μl/孔1 M H₂SO₄ 終止溶液和將板在450 nm /參比690 nm在Tecan InfiniteM200中讀數(shù)。

注意：

或者可使用以下底物混合物。使用100 ml/孔和50 μl 1M H₂SO₄ 終止溶液。測(cè)量波長(zhǎng)如上所述。

底物：每次新鮮混合

檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液pH 5 9 ml

1 mg/ml四甲基聯(lián)苯胺/DMSO 1 ml

對(duì)于各10 ml底物，臨用前加入2ul 30% H₂0₂

------------------------------------------------------

0.1M檸檬酸

0.2M磷酸氫二鈉

混合243 ml的檸檬酸+ 257 ml的磷酸氫二鈉得到pH 5.0

用MilliQ水使體積至1000 ml

3,3′,5,5′四甲基聯(lián)苯胺 Merck VWR 1.08622

板設(shè)計(jì) – 最終濃度

所有物質(zhì)按一式三份運(yùn)行。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法/數(shù)據(jù)分析

參比化合物在每一次測(cè)定中運(yùn)行。期望值為：

8e-10M (范圍2e-10M至1e-9M)的MSC1902850A

2e-8M (范圍8e-9M至6e-8M)的MSC2129790A

背景活性–空白值或標(biāo)度參比= 不含細(xì)胞的孔，應(yīng)該為無(wú)作用參比(未處理的細(xì)胞)值的10%或更低。

使用Assay Explorer程序分析數(shù)據(jù)。簡(jiǎn)言之，從所有值減去空白，將一式三份平均和標(biāo)準(zhǔn)化至未處理。EC50從4-參數(shù)一般S形曲線測(cè)定(Hill擬合y = (s0 - sInf) / (1 + ( x / AC50)^nHill) + sInf)，Assay Explorer, Symyx)。

處理的數(shù)據(jù)(EC50或如果未達(dá)到EC50則為%作用，功效)從Assay Explorer直接上載至MSRDB。

安全性考慮

受試物質(zhì)具有未知的活性，應(yīng)以通常的安全性預(yù)防措施操作。在所有時(shí)間應(yīng)穿戴手套和實(shí)驗(yàn)服。當(dāng)操作DMSO中的濃縮儲(chǔ)液時(shí)，建議腈而非橡膠手套。

所有污染廢物(吸頭、管、板)在用合適的標(biāo)簽標(biāo)記的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)室廢物箱中處置(2.29728.888)。

需要的化學(xué)品、一次性用品和設(shè)備清單

溶解度測(cè)量

通過(guò)“搖瓶溶解度測(cè)量法”測(cè)定

洗脫液制備：

洗脫液A: 2毫升二乙胺, 用于合成 +

1000毫升甲醇, LiChrosolv

洗脫液B: 5克乙酸銨, 用于合成 +

5毫升甲醇, LiChrosolv +

995毫升超純水

樣品溶劑：

緩沖液：3.954克一水合磷酸二氫鈉 + 6.024克氯化鈉 + 950毫升超純水，使用0.1 M NaOH或0.1 M HCl調(diào)節(jié)pH。

樣品制備：

樣品在37℃和450 rpm下?lián)u振24小時(shí)。

在大約7小時(shí)后，檢查樣品的pH，并且如果必要，調(diào)節(jié)pH。

還檢查樣品是否仍過(guò)量存在。

在24小時(shí)搖振時(shí)間臨結(jié)束前，再檢查樣品的pH值和沉淀物。

超純水裝置: MilliQ梯度, Millipore, 儀器: F3PN37462D

搖振器: TiMix control, Bühler

孵育罩: TH 15 Bühler

pH計(jì): 766 Calimatic Knick 儀器: pH 1

pH電極: InLab 423 Mettler。

根據(jù)本發(fā)明的化合物的外消旋最終產(chǎn)物或外消旋中間體可以簡(jiǎn)單地并以分析規(guī)模和以制備規(guī)模通過(guò)手性HPLC或SFC柱分離。

LC-MS

柱：Chromolith RP-18e 100-3

溶劑：

A：水+ 0.05%甲酸

B：乙腈+ 0.05%甲酸

流速：2.4 ml/min

梯度：

B: 0 -> 2.8 min; 4% -> 100%

B: 2.8 -> 3.3 min; 100%

時(shí)間：3.3 min

^* LC-MS:

柱：XBridge C8, 3.5 μm, 4.6 x 50 mm；溶劑A：水+ 10 Mm NH₄HCO₃；溶劑B：CAN；流速：1 ml/min；梯度：0 min: 5 % B, 8 min: 100 % B, 8.1 min: 100 % B, 8.5 min: 5% B, 10 min 5% B。

在上下文中，所有溫度以℃表示。在下列實(shí)施例中，“常規(guī)后處理”是指：如果必要，加入水，如果必要，根據(jù)最終產(chǎn)物的組成，將pH調(diào)節(jié)至2至10之間的值，用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取混合物，分離各相，有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸發(fā)并通過(guò)硅膠上的色譜法和/或通過(guò)結(jié)晶純化產(chǎn)物。

用于制備本發(fā)明的化合物的合成圖式：

a)

b)

c)

a) 路徑1：將酸在酰胺偶聯(lián)中轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酰胺，然后在堿性環(huán)境中使用過(guò)氧化氫叔丁基在兩個(gè)羧基之間的碳上氧化以產(chǎn)生醇(接著通過(guò)色譜法分離對(duì)映體)。

b) 路徑2：或者，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在與途徑1中描述用于酰胺的相同的氧化條件下，不能氧化原料酸的乙酯。但是，這可以用氯化鈰來(lái)實(shí)現(xiàn)。以30%獲得的氯衍生物可以與醇類似地分離成對(duì)映體，然后進(jìn)一步衍生化。(在此沒(méi)有顯示進(jìn)一步的反應(yīng)，但產(chǎn)物隨之為例如"A39"、"A43"和"A61")。

c) 但是，氟化鈰的使用不產(chǎn)生類似的氟衍生物。醇化合物與DAST(三氟化二乙基氨基硫)在二氯甲烷中的反應(yīng)產(chǎn)生所需的氟類似物。測(cè)試證實(shí)由使用DAST氟化醇的原理考慮預(yù)計(jì)到的在不對(duì)稱中心的反轉(zhuǎn)。

d)

在d)中顯示可如何制備N-芳基內(nèi)酰胺羧酸。如果氮化合物是液體，則這一途徑可容易進(jìn)行。據(jù)發(fā)現(xiàn)，如果氮-芳基化合物不是液體，則原材料的共同熔融不是有利的。但是，如果熔融氮-芳基化合物并將二羧酸酯(Meldrum’s酸)添加到這種熔體中，則獲得所需產(chǎn)物。

e)

e)顯示用以制備N-烷芳基內(nèi)酰胺羧酸的路徑。

f)

f)顯示為了可利用內(nèi)酰胺氮上的芳基而進(jìn)行的另一替代方案，其中類似的氮化合物不是液體。在此，將內(nèi)酰胺氮偶聯(lián)到芳基鹵化物上，這一步驟優(yōu)選用過(guò)渡金屬化合物催化。

實(shí)施例1

合成3-羥基-1-(4-甲烷亞磺酰亞胺基-苯基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸 3-氯-5-氟-芐基酰胺 (“A64”)

1.1

在0℃下將0.73 ml的30% H₂O₂ 溶液加入至1 g 4-溴苯甲硫醚的5 ml乙酸溶液。在RT下將混合物攪拌12 h和用10% NaOH溶液后處理。水相用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用飽和NaCl溶液洗滌，和經(jīng)Na₂SO₄干燥。除去溶劑，得到0.97 g粗產(chǎn)物，其用于下一步驟無(wú)需進(jìn)一步純化。

1.2

在0℃下將223 mg疊氮化鈉滴加至900 mg 1-溴-4-甲烷亞磺?；?苯的18 ml氯仿溶液。在0℃下將混合物攪拌12 h和加入冰水。常規(guī)后處理得到600 mg粗產(chǎn)物，其用于下一步驟無(wú)需進(jìn)一步純化。

1.3

將253 mg 3-羥基-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸 3-氯-5-氟-芐基酰胺(描述于WO 2013/149704)、359 mg碳酸鉀、382 mg N‘,N‘-二甲基-乙烷-1,2-二胺和330 mg碘化銅(I)連續(xù)加入來(lái)自步驟1.2的200 mg 亞磺酰亞胺(sulfoximin)的12 ml脫氣二噁烷溶液。在140 ℃下在微波爐中將混合物反應(yīng)2 h。混合物經(jīng)硅藻土過(guò)濾，和真空除去溶劑。制備型HPLC得到55 mg的“A64” (非對(duì)映體混合物)；

¹H NMR 400 MHz, DMSO-d₆: δ [ppm] 8.79 (t, J = 6.40 Hz, 1H), 7.90-7.96 (m, 4H), 7.26-7.29 (m, 1H), 7.20 (s, 1H), 7.10 (d, J = 9.60 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.35-4.41 (m, 1H), 4.20-4.27 (m, 2H), 3.90-3.93 (m, 2H), 3.04 (d, J = 0.80 Hz, 3H), 2.58-2.62 (m, 1H), 2.12-2.19 (m, 1H).

實(shí)施例2

合成(S)-3-羥基-1-(1H-吲唑-5-基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸 3,5-二氟-芐基酰胺(“A75”)和(R)-3-羥基-1-(1H-吲唑-5-基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸 3,5-二氟-芐基酰胺

2.1

在80 ℃下將11 g 6,6-二甲基-5,7-二氧雜-螺[2.5]辛烷-4,8-二酮和7 g 5-氨基吲唑在50 ml乙腈和50 ml DMF中的溶液攪拌12 h。

除去溶劑，常規(guī)后處理得到13 g 1-(1H-吲唑-5-基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸。

2.2

將15 ml 4-甲基嗎啉和16 g HATU (1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽)加入8.5 g 1-(1H-吲唑-5-基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸的20 ml DMF溶液。在RT下將溶液攪拌20分鐘和加入至6 g 3,5-二氟芐基胺的20 ml DMF溶液。在60 ℃下將混合物攪拌2 h。除去溶劑和常規(guī)后處理得到9 g 1-(1H-吲唑-5-基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸 3,5-二氟-芐基酰胺。

2.3

將15.5 g單過(guò)氧鈦酸鎂六水合物加入至8.5 g 1-(1H-吲唑-5-基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸 3,5-二氟-芐基酰胺的50 ml DMF溶液。在60 ℃下將黃色懸浮液攪拌12 h。除去溶劑和常規(guī)后處理后，殘留物通過(guò)色譜法純化(硅膠)；收率：5.1 g (S)-3-羥基-1-(1H-吲唑-5-基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸 3,5-二氟-芐基酰胺(“A75”)和(R)-3-羥基-1-(1H-吲唑-5-基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸 3,5-二氟-芐基酰胺的黃色油。

2.4

5.1 g對(duì)映體混合物的分離通過(guò)SF色譜法進(jìn)行。

柱：ChiralPAK AS-H

洗脫液：CO₂ : 甲醇 = 80 : 20

波長(zhǎng)：220 nm

流速：100 ml/min.

收率：

1.4 g (S)-3-羥基-1-(1H-吲唑-5-基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸 3,5-二氟-芐基酰胺(“A75”)

1.3 g (R)-3-羥基-1-(1H-吲唑-5-基)-2-氧代-吡咯烷-3-甲酸 3,5-二氟-芐基酰胺(“A75”)；

“A75”: LC-MS 1.776 min; [M+H⁺] [387.1]; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ [ppm] 13.07 (s, 1H), 8.68 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.76 (dd, J = 9.0, 2.0 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.05 (tt, J = 9.4, 2.3 Hz, 1H), 7.03 – 6.97 (m, 2H), 6.72 (s, 1H), 4.42 (dd, J = 15.8, 6.8 Hz, 1H), 4.27 (dd, J = 15.8, 6.0 Hz, 1H), 3.96 – 3.87 (m, 2H), 2.63 (ddd, J = 12.0, 6.9, 4.9 Hz, 1H), 2.16 (dt, J = 12.9, 7.5 Hz, 1H).

類似獲得以下化合物：

表1

MetAP-2的抑制

根據(jù)本發(fā)明的化合物的IC₅₀

表2

HUVEC

根據(jù)本發(fā)明的化合物的IC₅₀

比較性數(shù)據(jù)

與現(xiàn)有技術(shù)化合物相比，根據(jù)本發(fā)明的化合物，例如“A75”、“A78”和“A79”顯示更高的溶解度。當(dāng)給予化合物時(shí)，更高的溶解度導(dǎo)致更高的生物利用度。

下列實(shí)施例涉及藥劑：

實(shí)施例A：注射小瓶

使用2 N鹽酸將100克根據(jù)本發(fā)明的活性化合物和5克磷酸氫二鈉在3升重蒸餾水中的溶液調(diào)節(jié)至pH 6.5，無(wú)菌過(guò)濾，轉(zhuǎn)移到注射小瓶中，在無(wú)菌條件下凍干并在無(wú)菌條件下密封。各注射小瓶含有5毫克活性化合物。

實(shí)施例B：栓劑

將20克根據(jù)本發(fā)明的活性化合物與100克大豆卵磷脂和1400克可可油的混合物熔化，倒入模具中并使其冷卻。每個(gè)栓劑含有20毫克活性化合物。

實(shí)施例C：溶液

在940毫升重蒸餾水中由1克根據(jù)本發(fā)明的活性化合物、9.38克NaH₂PO₄ ? 2 H₂O、28.48克Na₂HPO₄ ? 12 H₂O和0.1克苯扎氯銨制備溶液。將pH調(diào)節(jié)至6.8，將該溶液配至1升并通過(guò)輻射消毒。這種溶液可以以滴眼液形式使用。

實(shí)施例D：軟膏

將500毫克根據(jù)本發(fā)明的活性化合物與99.5克凡士林在無(wú)菌條件下混合。

實(shí)施例E：片劑

將1千克根據(jù)本發(fā)明的活性化合物、4千克乳糖、1.2千克馬鈴薯淀粉、0.2千克滑石和0.1千克硬脂酸鎂的混合物以常規(guī)方式壓成片劑，其方式使各片劑含有10毫克活性化合物。

實(shí)施例F：糖衣丸

與實(shí)施例E類似地壓制片劑并隨后以常規(guī)方式用蔗糖、馬鈴薯淀粉、滑石、黃蓍膠和染料的包衣料包衣。

實(shí)施例G：膠囊

將2千克根據(jù)本發(fā)明的活性化合物以常規(guī)方式引入硬明膠膠囊中，其方式使各膠囊含有20毫克該活性化合物。

實(shí)施例H：安瓿

將1千克根據(jù)本發(fā)明的活性化合物在60升重蒸餾水中的溶液無(wú)菌過(guò)濾，轉(zhuǎn)移到安瓿中，在無(wú)菌條件下凍干并在無(wú)菌條件下密封。各安瓿含有10毫克活性化合物。