重組載體的雙酶切鑒定方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了重組載體的雙酶切鑒定方法。首先挑選單菌落，使其分別接種于平板上；振蕩后36攝氏度培養(yǎng)過夜；將過夜后的菌液做質(zhì)粒提??；反復(fù)提取2次；酶切鑒定：在試管中加入12ulddH2O;35攝氏度條件下反應(yīng)2-2.5小時；瓊脂電泳觀察結(jié)果；觀察結(jié)果前，需要取感受態(tài)細胞與冰上解凍35分鐘；第一次質(zhì)粒提取前需9000rpm離心。本發(fā)明的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丟失，且穩(wěn)定性好，表達量高，具有成本低，操作簡單的優(yōu)點。
【專利說明】重組載體的雙酶切鑒定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種實驗方法，具體來說，重組載體的雙酶切鑒定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]質(zhì)粒是真核細胞細胞核外或原核生物擬核區(qū)外能夠進行自主復(fù)制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器(主要指線粒體和葉綠體)中和細菌細胞擬核區(qū)以外的環(huán)狀脫氧核糖核酸(DNA)分子?，F(xiàn)在習(xí)慣上用來專指細菌(大腸桿菌)、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質(zhì)粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環(huán)狀DNA分子，這就是質(zhì)粒(plasmid)(補充:部分質(zhì)粒為RNA)。質(zhì)粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環(huán)素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質(zhì)粒稱為附加體(episome)，這類質(zhì)粒能夠整合進真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質(zhì)粒在宿主細胞體內(nèi)外都可復(fù)制，通過個些特性，人們可以把ー些目的DNA片斷構(gòu)建在質(zhì)粒中，通過轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中，不斷的復(fù)制，來得到目的產(chǎn)物。這就是轉(zhuǎn)化的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服上述技術(shù)問題，我們提出了以下技術(shù)方案:
重組載體的雙酶切鑒定方法，首先挑選單菌落，使其分別接種于平板上；振蕩后36攝氏度培養(yǎng)過夜；將過夜后的菌液做質(zhì)粒提取；反復(fù)提取2次；酶切鑒定:在試管中加入12ulddH20;35攝氏度條件下反 應(yīng)2-2.5小時；瓊脂電泳觀察結(jié)果。
[0004]本發(fā)明中，觀察結(jié)果前，需要取感受態(tài)細胞與冰上解凍35分鐘。
[0005]本發(fā)明中，第一次質(zhì)粒提取前需9000rpm離心。
本發(fā)明的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丟失，且穩(wěn)定性好，表達量高，具有成本低，操作簡單的優(yōu)點。
【具體實施方式】
[0006]重組載體的雙酶切鑒定方法，首先挑選單菌落，使其分別接種于平板上；振蕩后36攝氏度培養(yǎng)過夜；將過夜后的菌液做質(zhì)粒提??；反復(fù)提取2次；酶切鑒定:在試管中加入12ul ddH20; 35攝氏度條件下反應(yīng)2.5小吋；瓊脂電泳觀察結(jié)果。觀察結(jié)果前，需要取感受態(tài)細胞與冰上解凍35分鐘。第一次質(zhì)粒提取前需9000rpm離心
以上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術(shù)領(lǐng)域】的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其發(fā)明構(gòu)思加以等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.重組載體的雙酶切鑒定方法，其特征在于，首先挑選單菌落，使其分別接種于平板上；振湯后36攝氏度培養(yǎng)過夜；將過夜后的囷液做質(zhì)粒提??；反復(fù)提取2次；酶切鑒定:在試管中加入12ul ddH20;35攝氏度條件下反應(yīng)2-2.5小時；瓊脂電泳觀察結(jié)果。
2.如權(quán)利要求1所述的重組載體的雙酶切鑒定方法，其特征在于，觀察結(jié)果前，需要取感受態(tài)細胞與冰上解凍35分鐘。
3.如權(quán)利要求1所述的重組載體的雙酶切鑒定方法，其特征在于，第一次質(zhì)粒提取前需9000rpm離心。
【文檔編號】C12Q1/68GK103602730SQ201310522641
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年10月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月30日
【發(fā)明者】徐麗 申請人:徐麗