水稻OsDRAP1基因在增強植物抗旱性中應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了水稻OsDRAP1基因在增強植物抗旱性中應(yīng)用。本發(fā)明提供了序列表中序列2所示的蛋白在增強植物抗旱性中的應(yīng)用、序列表中序列2所示的蛋白的編碼基因在增強植物抗旱性中的應(yīng)用。本發(fā)明的實驗結(jié)果表明，OsDRAP1基因在受到高鹽和干旱脅迫時表達量迅速增加，但受到低溫脅迫時增加幅度較小；OsDRAP1轉(zhuǎn)錄因子可以通過結(jié)合下游基因啟動子區(qū)域的GCC?box和DRE來調(diào)控下游基因的表達，參與植物脅迫應(yīng)答反應(yīng)；在水稻中超表達OsDRAP1基因能夠在一定程度上改善水稻抗旱脅迫的能力。本發(fā)明為改良、增強水稻抗逆性，加速抗逆分子育種進程，具有十分重要的理論和實際意義。
【專利說明】水稻OsDRAPI基因在增強植物抗旱性中應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】中水稻AP2/EREBP轉(zhuǎn)錄因子家族基因OsDRAPI在增強植物抗旱性中應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]各種生物和非生物脅迫是影響水稻生長和產(chǎn)量的重要因素，發(fā)掘能夠改善水稻抵抗逆境脅迫能力的基因?qū)榛蚬こ谈牧妓拘缕贩N打下基礎(chǔ)。在長期進化過程中，植物在分子、細胞、生理和生物化學水平上發(fā)展出多種機制應(yīng)對逆境脅迫，轉(zhuǎn)錄因子作為上游調(diào)控基因在植物的脅迫應(yīng)答途徑中扮演重要的角色。植物中參與脅迫應(yīng)答反應(yīng)的主要有AP2/EREBP、bZIP、NAC、MYB和WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族。其中AP2/EREBP轉(zhuǎn)錄因子家族基因廣泛參與植物的發(fā)育、激素信號轉(zhuǎn)導、病原反應(yīng)與干旱、高鹽及低溫等脅迫應(yīng)答反應(yīng)。該家族轉(zhuǎn)錄因子的共同特點是含有一個60個氨基酸左右的AP2結(jié)構(gòu)域，它在與DNA結(jié)合中具有重要的作用。根據(jù)AP2結(jié)構(gòu)域的特點，AP2/EREBP轉(zhuǎn)錄因子家族被分為:AP2、EREBP, RAV和其它共4個亞類。AP2成員含有2個重復的AP2結(jié)構(gòu)域，而RAV成員含一個AP2結(jié)構(gòu)域和一個類似B3結(jié)構(gòu)域；EREBP亞家族成員含有一個AP2結(jié)構(gòu)域，且有ERF和DREB/CBF兩個分支。
[0003]研究表明，EREBPs轉(zhuǎn)錄因子廣泛參與植物的生物和非生物脅迫應(yīng)答反應(yīng)。ERFs類轉(zhuǎn)錄因子主要參與植物的生物脅迫應(yīng)答反應(yīng)，如病原反應(yīng)、傷害反應(yīng)、乙烯信號途徑。最早發(fā)現(xiàn)的ERF轉(zhuǎn)錄因子是從煙草中分離得到的4個乙烯誘導病程相關(guān)(pathegenesis-related, PR)蛋白EREBP1-4,它們通過結(jié)合下游基因啟動子區(qū)域的乙烯應(yīng)答元件GCC box調(diào)控下游基因的表達。GCC box廣泛存在于煙草和其他植物PR蛋白基因的
UTR區(qū)域，核心序列是AGCCGCC。1997年，Zhou等在番茄中發(fā)現(xiàn)3個ERF蛋白(Pti_4、Pt1-5和Pt1-6)能夠和疾病防御蛋白Pto相互作用，進一步驗證了 ERFs轉(zhuǎn)錄因子在植物的病原反應(yīng)中具有重要作用。在植物中超表達一些ERFs基因亦能夠提高植物的抗病能力，如ERFKPti4,ATERFI基因。最近的研究表明水稻中的ERF轉(zhuǎn)錄因子在乙烯應(yīng)答、淹水脅迫應(yīng)答、干旱脅迫應(yīng)答等多種生物途徑中起著正向調(diào)節(jié)作用。
[0004]DREBs轉(zhuǎn)錄因子在植物的冷、干旱、高鹽、過氧化物等脅迫應(yīng)答途徑中具有重要的作用，參與不依賴于ABA的脅迫應(yīng)答反應(yīng)。DREBs轉(zhuǎn)錄因子通過結(jié)合下游基因啟動子區(qū)的干旱應(yīng)答順式作用元件DRE/CRT而調(diào)控下游基因的表達。干旱應(yīng)答順式作用元件DRE(dehydration-responsive element)最早在逆境脅迫誘導基因rd29A的啟動子區(qū)域被發(fā)現(xiàn)，核心序列為A/GCCGAC。與DRE相似的順式作用元件CRT (C-repeat)則是在一個冷誘導基因corl5a的啟動子區(qū)被發(fā)現(xiàn)，其核心序列是TGGCCGA。DRE/CRT被發(fā)現(xiàn)存在于多個受干旱和低溫誘導的基因的啟動子區(qū)域。在擬南芥、水稻等植物中超表達DREB家族的基因大多能提高植株應(yīng)對非生物脅迫的能力。迄今為止，越來越多的DREBs基因從不同植物中被克隆。在水稻中發(fā)現(xiàn)的DREB基因有0sDREBlA-G、0sDREB2A、0sDREB2B，其中OsDREBlA、OsDREBIE, OsDREBIG、0sDREB2A、0sDREB2B能夠特異性地結(jié)合DRE。研究發(fā)現(xiàn)在擬南芥中超表達OsDREBlA能夠提高擬南芥植株耐受低溫、高鹽和干旱的能力(Dubouzet J G, SakumaY, Ito Y, Kasuga M, Dubouzet E G,Miura S, Seki Μ, Shinozaki K, Yamaguch1-ShinozakiK.0sDREB genes in rice, Oryza sativa L., encode transcription activators thatfunction in drought-, high-salt—and cold-responsive gene expression.Plant J,2003，33:751-763);在水稻中超表達OsDREBIG和0sDREB2B也能夠明顯地提高轉(zhuǎn)基因水稻的抗旱性，而超表達OsDREBlE僅僅能夠輕微地提高水稻抵抗干旱的能力(Chen J Q，MengX P, Zhang Y, Xia M, Wang X P.0ver-expression of OsDREB genes lead to enhanceddrought tolerance in rice.Biotechnol Lett,2008,30(12):2191-2198)。
[0005]ERFs和DREBs轉(zhuǎn)錄因子功能的差異主要體現(xiàn)在它們能夠結(jié)合的順式作用元件和調(diào)節(jié)的下游基因不同。有些EREBPs轉(zhuǎn)錄因子既能結(jié)合DRE，也能結(jié)合GCCbox，如TINY、TINY2、BnDREBIII, AtERFU AtERF4、AtEBP 和 CBFl ;而部分只能結(jié)合 DRE,如 CBF2/DREBlC和CBF3/DREB1A等。ERFs轉(zhuǎn)錄因子傾向于結(jié)合GCC box, DREBs轉(zhuǎn)錄因子則傾向于結(jié)合DRE。為了發(fā)掘影響兩類轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的關(guān)鍵氨基酸，Sakuma等(Sakuma Y,Liu Q, Joseph G.DNA-binding specificity of the ERF/AP2domain of ArabidopsisDREB, transcription factors involved in dehydration-and cold—inducible geneexpression.Biochem Biophy Res Commun, 2002, 290:998-1009)通過多序列比對分析發(fā)現(xiàn)擬南芥中的DREBs轉(zhuǎn)錄因子的AP2結(jié)構(gòu)域第15和第20個氨基酸分別是纈氨酸(Val，V)和谷氨酸(Glu，E)，而ERFs轉(zhuǎn)錄因子的AP2結(jié)構(gòu)域第15和20個氨基酸是丙氨酸(Ala，A)和天冬氨酸(Asp，D)，進一步研究表明Val-15和Glu_20特別是Val_15對于結(jié)合DRE有重要的作用，但不影響對GCC box的結(jié)合,這可能是造成ERFs和DREBs轉(zhuǎn)錄因子功能不同的原因。為了發(fā)掘影響GCC box結(jié)合的關(guān)鍵氨基酸，孫山等(Sun S，Yu J P, Chen F，Zhao TJ, Fang X H, Li Y Q, Sui S F.TINY, a dehydration-responsive element(DRE)-bindingprotein-like transcription factor connecting the DRE—and ethylene-responsiveelement-mediated signaling pathways in Arabidopsis.Biol Chem,2006,283:6261-6271)比較能夠結(jié)合兩種順式作用元件的蛋白序列和只能結(jié)合DRE的蛋白序列發(fā)現(xiàn)兩類蛋白的AP2保守區(qū)的第16個氨基酸不同，進一步研究表明Ser-16對于擬南芥中的DREB轉(zhuǎn)錄因子TINY結(jié)合GCC box是必不可少的。TINY既參與生物脅迫反應(yīng)途徑，也參與非生物脅迫途徑，說明DRE介導的調(diào)控途徑和GCC box介導的調(diào)控途徑存在一定的重疊。
[0006]水稻中有些AP2/EREBP轉(zhuǎn)錄因子基因在受到非生物脅迫時表達量明顯升高，其中大部分基因為DREBs和ERFs，這些基因很有可能與水稻的非生物脅迫應(yīng)答反應(yīng)相關(guān)。雖然近年來對于EREBPs轉(zhuǎn)錄因子參與非生物脅迫應(yīng)答反應(yīng)的機制有了較全面的研究，但是水稻中還有很多的EREBPs基因的功能未知。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是提供序列表中序列I所示的蛋白及其編碼基因(OsDRAPl)。
[0008]本發(fā)明提供了序列表中序列I所示的蛋白及其編碼基因在增強植物抗旱性中的應(yīng)用；所述蛋白的編碼基因為如下1)-4)中任一所述的基因；
[0009]1)序列表中序列2、3的自5'末端第505位-1347位所示的DNA分子；
[0010]2)序列表中序列2、3所示的DNA和RNA分子；
[0011]3)在嚴格條件下與I)所不的DNA分子雜交且編碼所述蛋白的DNA分子；[0012]4)與I)或2)所述的DNA分子具有90%以上的同源性且編碼所述蛋白的DNA分子。
[0013]含有序列表中序列2所示蛋白的編碼基因的重組表達載體在增強植物抗旱性中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0014]所述重組表達載體的構(gòu)建過程中,在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前加上4個Myc蛋白標簽，在pCUbil390的多克隆位點間，即Ubiquitin啟動子后插入所述序列表中序列I所示蛋白的編碼基因得到的重組表達載體。
[0015]所述植物為單子葉植物-水稻，包括雙子葉植物。
[0016]本發(fā)明所提供的培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，是將序列表中序列I所示的蛋白的編碼基因?qū)胫参镏?，得到轉(zhuǎn)基因植物；所述轉(zhuǎn)基因植物與目的植物相比抗旱性增強。
[0017]本發(fā)明通過干旱、高鹽、低溫脅迫下OsDRAPl基因在不同水稻品種中的表達差異，結(jié)合凝膠阻滯實驗中其對順式元件GCC box和DRE的結(jié)合情況，以及超表達和RNAi抑制表達水稻植株的表型變化，開展其基因克隆與功能分析，分析候選基因與水稻非生物脅迫應(yīng)答的關(guān)系。結(jié)果表明，OsDRAPl基因在受到高鹽和干旱脅迫時表達量迅速增加，但受到低溫脅迫時增加幅度較?。?sDRAPl轉(zhuǎn)錄因子可以通過結(jié)合下游基因啟動子區(qū)域的GCC box和DRE來調(diào)控下游基因的表達，參與植物脅迫應(yīng)答反應(yīng)；在水稻中超表達OsDRAPl基因能夠顯著改善水稻抵御干旱脅迫的能力。本發(fā)明為改良、增強水稻抗逆性，加速抗逆分子育種進程，具有十分重要的理論和實際意義。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]圖1為以實時定量PCR分析OsDRAPl在非生物脅迫下的表達量差異。
[0019]圖2為以實時定量PCR分析OsDRAPl在典型抗逆水稻品種中脅迫前后的表達量差平。
[0020]圖3為以實時定量PCR分析OsDRAPl在不同組織中的表達模式。
[0021]圖4為OsDRAPl的AP2結(jié)構(gòu)域結(jié)合GCC box和DRE元件的EMSA分析圖譜。
[0022]圖5為PCR檢測轉(zhuǎn)基因T-DNA插入及qPCR、Westren blot檢測目的基因表達水平。
[0023]圖6為超表達OsDRAPl和RNAi轉(zhuǎn)基因植株抗旱相關(guān)表型。
【具體實施方式】
[0024]下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0025]下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0026]實施例1、不同脅迫處理條件下OsDRAPl基因在不同水稻品種中的時空表達差異
[0027]日本晴(Nipponbare,Oryza sativa ssp.japonica)(公眾可從中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所獲得，記載過該材料的非專利文獻是:Yongqing Jiao, Yonghong Wang, DaweiXue，Jing Wang，Meixian Yan，Guifu Liu，Guojun Dong,Dali Zeng,Zefu Lu，Xudong Zhu,Qian Qian and Jiayang Li (2010)Regulation of 0sSPL14by 0smiR156defines idealplant architecture in rice.Nature Genetics，42，541-544)；
[0028]典型耐旱旱稻品種IRAT109(公眾可從中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所獲得，記載過該材料的非專利文獻是:San-Hong Liu, Bin-Ying Fu, Hua-Xue Xu, Ling-Hua Zhu,Hu-Qu Zhai,Zh1-Kang Li (2007)Cell death in response to osmotic and salt stressesin two rice(Oryza sativa L.) ecotypes, Plant Science,172,897-902)；
[0029]耐鹽水稻FL478(請說明FL478的來源)(公眾可從中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所獲得，記載過該材料的非專利文獻是:Harkamal ffalia, Clyde Wilson*, PascalCondamine, Xuan Liu, Abdelbagi M.1smail, Linghe Zeng, Steve 1.Wanamaker, JayatiMandal, Jin Xu,Xinping Cui,and Timothy J.Close(2005)Comparative TranscriptionalProfiling of Two Contrasting Rice Genotypes under Salinity Stress during theVegetative Growth Stage.Plant Physiology,139，822-835)；
[0030]耐冷水稻云南地方品種麗江新團黑谷(LTH)(公眾可從中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所獲得，記載過該材料的非專利文獻是:凌忠專，雷財林，王久林(2004)稻瘟病菌生理小種研究的回顧與展望，中國農(nóng)業(yè)科學,37 (12): 1849-1859)。
[0031]1、水稻的低溫、高鹽和干旱脅迫
[0032]水稻日本晴、典型耐旱旱稻品種IRAT109、抗旱水稻品種FL478和耐冷水稻z?南地方品種麗江新團黑谷(LTH)種子經(jīng)消毒處理，室溫浸種2d，37°C催芽ld，萌發(fā)后選發(fā)芽一致的種子播于塑料盒泡沫架上，每孔2粒，二葉前水培，二葉后用Yoshida營養(yǎng)液培養(yǎng)。于五葉期開始低溫(4°C )、高鹽(150mmol T1NaCl)和滲透脅迫(20% PEG)處理，日本晴于脅迫處理0h、0.5h、lh、3h、6h、12h、24h后取葉片；IRAT109、FL478、LTH處理兩天后分別取根和葉片；取正常生長條件下日本晴的幼穗、成熟葉片、莖、莖節(jié)、基座、老根、幼葉、幼根、愈傷組織，液氮速凍，-70°C低溫保存，用于RNA提取。
[0033]2、實時定量PCR分析
[0034]采用TRIZOL試劑提取 實驗樣品總RNA，并進行RNA純度的分析:用I %瓊脂糖凝膠電泳快速檢測提取的總RNA的完整性，DNase I消化RNA中的基因組DNA，具體方法和步驟參照說明書。
[0035]反轉(zhuǎn)錄:
[0036]第一鏈cDNA的合成用反轉(zhuǎn)錄用試劑盒(Promega公司，Code no:A3500)。
[0037]Real Time PCR 分析:
[0038]Real Time PCR 分析，所用 OsDRAPl 的 PCR 引物如下:F:5' -TGGTCTGATTTGGTAGCC-3' ；R:5/ -TCCAA GAACTGGCAGACGA-3';內(nèi)參基因 Actinl 引物序列為 F:5' -GACTCTGGTGATGGTGTCAGC-3' ；R:5/ -GG CTGGAAGAGGACCTCAGG-3' ?RealTime PCR 的分析使用 TaKaRa 的 SYBR Premix Ex Taq 試劑盒(Code no:DRR041A)，應(yīng)用的Real Time PCR擴增儀為ABI7300，方法見說明書。
[0039]數(shù)據(jù)分析:
[0040]用相對定量法計算目的基因相對表達量Rel.Exp = 2_Λ'其中Λ Λ Ct =[(待測樣品目的基因的Ct-待測樣品看家基因的Ct)-(對照組目的基因的Ct-對照組看家基因的 Ct)]。
[0041]標準方差的計算用Excel完成，先用統(tǒng)計函數(shù)STDEV算出樣品和對照的S值，再將兩個S值算平方，算出(SpS22) /3的值，進而算出X = Power ((S1^S22) /3,0.5)，最后算出方
^— (2 (-ddct-X) _2 (-ddct+x))丨[0042]結(jié)果表明日本晴中OsDRAPl在低溫、高鹽、PEG和旱脅迫下的表達量變化譜:結(jié)果如圖1所示(圖1中，cold:4°C處理(低溫脅迫)；NaCl:150mM NaCl處理(鹽脅迫)；PEG:20 % PEG處理(滲透脅迫)，從圖中可見，在3種脅迫下OsDRAPI表達量都有增高，但是表達模式存在差異。在低溫和PEG脅迫下，OsDRAPl表達量均呈逐漸上升趨勢，并在脅迫處理3h達最高水平。然而相比于低溫脅迫，在PEG脅迫下OsDRAPl表達量增加幅度較大，并且在脅迫后期仍能保持較高水平。在鹽脅迫下OsDRAPl呈逐步升高的趨勢，并且表達量變化幅度較大，最高點到達20倍以上。以上結(jié)果表明OsDRAPl參與水稻對低溫、鹽和干旱脅迫的早期應(yīng)答，并在應(yīng)答模式上存在差別。[0043]OsDRAPl在典型抗逆水稻品種中脅迫前后的表達差異:結(jié)果如圖2所示(N:日本晴；L:麗江新團黑谷；F:FL478 ；I:IRAT109)，圖2A:冷脅迫下OsDRAPl在日本晴(N)和麗江新團黑谷(L)中的表達量差異；圖2B:鹽脅迫下OsDRAPl在日本晴和FL478 (F)中的表達量差異；圖2C:干旱脅迫下OsDRAPl在日本晴和IRAT109(I)中的表達量差異。結(jié)果表明無論是在葉片中還是在根系中，OsDRAPl在典型抗逆水稻品種中的表達模式與日本晴基本相同，而且在脅迫前后的表達量和日本晴相比差異也不太顯著。然而，在脅迫前后OsDRAPl在葉和根中的表達量變化稍有差異，在低溫和干旱脅迫下，OsDRAPl在根中的表達量增幅高于葉片；在鹽脅迫下，OsDRAPl在葉片中的表達量增幅高于根系。
[0044]OsDRAPl組織表達模式(I為幼穗；2為成熟葉片；3為葉鞘；4為莖節(jié)；5為節(jié)間；6為基座為成熟根；8為幼葉；9為幼根；10為愈傷組織):從圖3可以看出，OsDRAPl在水稻所有組織中均表達，但在成熟組織(成熟葉片、成熟根)表達水平高于幼嫩組織。
[0045]實施例2、OsDRAPl可以結(jié)合GCC box和DRE順式元件以調(diào)節(jié)下游基因的表達
[0046]1、原核表達蛋白的制備
[0047]以PCR擴增出OsDRAPl的AP2保守域(67~193aa)的基因編碼序列(即序列表中序列I第703位-1083位所示的核苷酸序列)，并構(gòu)建到質(zhì)粒pET-32a(Novagen, USA,69015-3)中，在大腸桿菌 BL2I (DE3)PLysS (TransGen Biotech, China, Cat.No:DR101)中進行蛋白表達，產(chǎn)物經(jīng)His-trap柱子純化(GE), Miliproe超濾管濃縮和脫鹽后，采用Bradford法測定蛋白濃度。具體方法如下:
[0048](I)PCR擴增目的基因AP2結(jié)構(gòu)域編碼區(qū):
[0049]所用弓丨物分別為:OsDRAP1-AP2-F:5/ -GCACTGCAGCAACTCCACATGCAGCGG-3 '(下劃線部分為 Pst I 酶切位點)；OsDRAP1-AP2-R:5' -TAAGGATCCCCTGGATGAGGCGTTCTTGG-3;
(下劃線部分為BamH I酶切位點)。
[0050]目的基因的擴增采用高保真酶KOD-Plus (Τ0Υ0Β0 Code no:K0D-201)，PCR擴增反應(yīng)程序為:95°C變性30s，退火30s，72°C延伸(lKb/min) ;34個循環(huán)后72°C延伸IOmin, I %瓊脂糖凝膠電泳檢測。
[0051]采用TIANGEN公司的普通瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒(離心柱型，Code no:DP209)，具體操作步驟見產(chǎn)品說明書。利用Pst I和BamH I雙酶切并連接插入pET_32a載體中，
[0052]測序結(jié)果表明該PCR產(chǎn)物與Gramene數(shù)據(jù)庫中OsDRAPl基因(0s08g31580)序列AP2結(jié)構(gòu)域相同(即序列表中序列I第703位-1083位所示的核苷酸序列)，將重組質(zhì)粒命名為 pET-32a-DRAPl (AP2)。[0053](2)目的蛋白的制備:
[0054]原核表達目的蛋白的步驟參照分子克隆實驗指南，將上述重組質(zhì)粒pET-32a-DRAPl (AP2)轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21 (DE3) pLysS (TransGen Biotech, China, Cat.No:DR101)o 25度，低溫誘導表達目的蛋白。
[0055]使用AKTA purifier 儀器和 Iml 的 His-trap HP 柱子(GE, Code N0.17-5247-01)純化目的蛋白，具體實驗步驟按照蛋白純化系統(tǒng)進行。然后用Mi I iproe4000超濾管脫鹽和濃縮蛋白。Bradford法測定蛋白質(zhì)濃度:測定得到目的蛋白濃度約為I μ g/ μ I。
[0056]2、目的DNA序列及突變序列的制備
[0057]將順式作用元件GCC box (CATAAGAGCCGCCACT)和突變序列(CATAAGATCCTCCACT)，DRE序列(ATACTACCGACATGAG)和突變序列(ATACTACTGATATGAG)串聯(lián)重復3次。以化學合成法分別合成雙鏈后，將其等量混合(單鏈濃度IOOnmol L—1)，95°C溫育IOmin后慢慢冷卻，復性為雙鏈。
[0058]EMSA實驗使用invitrogen的EMSA試劑盒(Code no:E33075)。具體方法和步驟如下:結(jié)合反應(yīng)體系的配制:
[0059]I)在把EMSA試劑盒的組分E (Componentn E)、目的蛋白及目的DNA放置在冰上使
之完全融化。按下列組分配制目的蛋白和目的DNA的結(jié)合反應(yīng)體系:
[0060]
【權(quán)利要求】
1.序列表中序列I所示的蛋白在增強植物抗旱性中的應(yīng)用。
2.序列表中序列I所示的蛋白的編碼基因在增強植物抗旱性中的應(yīng)用；所述蛋白的編碼基因為如下I)-4)中任一所述的基因； 1)序列表中序列2、3的自5'末端第505位-1347位所示的DNA分子； 2)序列表中序列2、3所示的DNA和RNA分子； 3)在嚴格條件下與I)所示的DNA分子雜交且編碼所述蛋白的DNA分子； 4)與I)或2)所述的DNA分子具有90%以上的同源性且編碼所述蛋白的DNA分子。
3.含有序列表中序列I所示蛋白的編碼基因的重組表達載體在增強植物抗旱性中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述重組表達載體為在pCUbil390的多克隆位點間插入所述序列表中序列I所示蛋白的編碼基因得到的重組表達載體。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的應(yīng)用，其特征在于:所述植物為單子葉植物或雙子葉植物；所述單子葉植物為水稻。
6.含有權(quán)利要求2、3或4所述編碼基因的表達載體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于:所述序列表中序列I所示的蛋白的編碼基因或與所述基因具有90%以上同源性且編碼相同蛋白的DNA序列導入植物組織、細胞或器官，植物抗旱性獲得提高。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述重組表達載體的構(gòu)建過程中，在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前加上增強型、組成型、組織特異型或誘導型啟動子。
【文檔編號】C12N15/84GK103468740SQ201310465916
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年10月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月9日
【發(fā)明者】傅彬英, 黃立鈺, 黎志康, 王文生 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學院作物科學研究所