專利名稱：一種提高肌細(xì)胞生成素(MyoG)基因啟動(dòng)子活性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提高肌細(xì)胞生成素(MyoG是myogenin的縮寫)基因啟動(dòng)子活性的方法，屬于遺傳工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
真核生物的基因表達(dá)調(diào)控是一個(gè)復(fù)雜而嚴(yán)密的過(guò)程。在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的研究中，獲得能廣泛應(yīng)用的高效特異性的啟動(dòng)子對(duì)于外源基因的表達(dá)具有十分重要的意義。哺乳動(dòng)物核心啟動(dòng)子包括TATA盒以及啟動(dòng)子近端元件,位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游大約200至300bp。廣義啟動(dòng)子包括啟動(dòng)子近端元件、增強(qiáng)子和沉默子等所有順式調(diào)控元件，一般至少有2至3kb以上的長(zhǎng)度。實(shí)際上核心啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合，并使基因轉(zhuǎn)錄的主要位點(diǎn)。編碼蛋白的基因核心啟動(dòng)子主要與通用轉(zhuǎn)錄因子II (TFII)結(jié)合。通用轉(zhuǎn)錄因子II (TFII)的成分TFIID,可識(shí)別TATA盒，(又名TATA框、TATA box / Hogness box,位于轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游約25bp處)。TF I1-D、B、F及RNA聚合酶II結(jié)合形成一個(gè)基本的起始復(fù)合物，使RNA聚合酶II磷酸化，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，RNA聚合酶可以特異性識(shí)別和結(jié)合的DNA序列。啟動(dòng)子是基因(gene)的一個(gè)組成部分，控制基因表達(dá)(轉(zhuǎn)錄)的起始時(shí)間和表達(dá)的程度。啟動(dòng)子(Promoters)就像“開關(guān)”，決定基因的活動(dòng)。既然基因是成序列的核苷酸(nucleotides),那么啟動(dòng)子也應(yīng)由DNA組成。啟動(dòng)子本身并不控制基因活動(dòng)，而是通過(guò)與稱為轉(zhuǎn)錄(transcription)因子的這種蛋白質(zhì)(proteins)結(jié)合而控制基因活動(dòng)的。轉(zhuǎn)錄因子就像一面“旗子”，指揮著酶(enzymes) (RNA聚合酶polymerases)的活動(dòng)。這種酶制造著基因的RNA復(fù)制本。一般分為廣譜表達(dá)型啟動(dòng)子、組織特異性啟動(dòng)子、腫瘤特異性啟動(dòng)子等多種形式。基因的啟動(dòng)子部分發(fā)生改變(突變)，則導(dǎo)致基因表達(dá)的調(diào)節(jié)障礙。這種變化常見于惡性腫瘤。真核細(xì)胞含有3類不同的RNA聚合酶，根據(jù)其對(duì)α-鵝膏蕈堿的敏感性不同，分為RNA聚合酶 I (A)、RNA聚合酶II (B)、RNA聚合酶III(C)，如下:
權(quán)利要求
1.一種提高肌細(xì)胞生成素(My0G)基因啟動(dòng)子活性的方法，其特征在于通過(guò)克隆MyoG基因5'端調(diào)控區(qū)長(zhǎng)度為2125bp的核酸序列，采用啟動(dòng)子缺失片段活性分析的方法獲得I個(gè)長(zhǎng)度為373bp，且具有較高肌肉特異性啟動(dòng)子活性的較為理想的缺失片段即pGL3-My0Gpix)373，該片段是MyoG基因啟動(dòng)子的核心片段，在373bp缺失片段內(nèi)部通過(guò)生物信息學(xué)分析結(jié)果，又對(duì)其內(nèi)部具有SPl正調(diào)控作用的啟動(dòng)子元件進(jìn)行克隆，并將這兩個(gè)片段進(jìn)行串聯(lián)，即將新克隆的具有SPl正調(diào)控作用的啟動(dòng)子元件連接到pGL3-My0Gpr0373的373缺失片段之前，從而構(gòu)建了一個(gè)含有兩個(gè)拷貝數(shù)啟動(dòng)子調(diào)控元件的表達(dá)載體，稱為pGL3-MyoGpro373_double,即 具有“double”特征的啟動(dòng)子序列,其堿基組成Seq ID No: 2所示。
全文摘要
一種提高肌細(xì)胞生成素(MyoG)基因啟動(dòng)子活性的方法，屬于遺傳工程技術(shù)領(lǐng)域，其特征在于通過(guò)克隆MyoG基因5′端調(diào)控區(qū)長(zhǎng)度為2125bp的核酸序列，采用啟動(dòng)子缺失片段活性分析的方法獲得1個(gè)長(zhǎng)度為373bp，且具有較高肌肉特異性啟動(dòng)子活性的缺失片段即pGL3-MyoGpro373，又對(duì)其內(nèi)部具有SP1正調(diào)控作用的啟動(dòng)子元件進(jìn)行克隆，并將這兩個(gè)片段進(jìn)行串聯(lián)，從而構(gòu)建了一個(gè)含有兩個(gè)拷貝數(shù)啟動(dòng)子調(diào)控元件的表達(dá)載體，稱為pGL3-MyoGpro373-double，即具有“double”特征的啟動(dòng)子序列，其堿基組成Seq ID No:2所示。
文檔編號(hào)C12N15/10GK103194450SQ201310113028
公開日2013年7月10日 申請(qǐng)日期2013年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月2日
發(fā)明者李樹峰, 佟慧麗, 嚴(yán)云勤, 金慧然, 王鑫, 李光鵬 申請(qǐng)人:東北農(nóng)業(yè)大學(xué)