專利名稱:對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量pcr檢測試劑盒及檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及對蝦傳染性肌肉壞死病毒的檢測試劑盒及檢測方法,屬于海洋生物病原檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù):
傳染性肌肉壞死病為2002年在巴西發(fā)現(xiàn)的一種危害對蝦生產(chǎn)的新的病毒性傳染病,2004年美國亞利桑納大學(xué)Lightner D V博士研究發(fā)現(xiàn)該病由一種新的病毒引起并將之定名為傳染性肌肉壞死病毒(Infectious myonecrosis virus,簡稱IMNV)。這種新型病毒為雙鏈RNA病毒,屬于整體病毒科。對蝦傳染性肌肉壞死病毒的易感對蝦種類為南美白對蝦,主要是感染60-80天的幼蝦。該病毒能造成染病對蝦全身肌肉組織壞死,一般情況下, 病理死亡發(fā)生緩慢,死亡率不高,但整個養(yǎng)殖過程都有死亡,累積死亡率可達70%。該病毒目前已傳入亞洲,正威脅著中國的南美白對蝦養(yǎng)殖。Andrade T P D等2007年建立了 IMNV的熒光定量PCR檢測方法,最低可檢測到 10拷貝的IMNV,此檢測方法靈敏度有待進一步提高。因熒光定量PCR檢測方法是進行對蝦病毒定量及早期預(yù)防的重要有效手段,所以建立高靈敏度的熒光定量PCR檢測方法,以及配合該檢測方法使用的病毒檢測試劑盒極為重要。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有熒光定量PCR檢測方法中存在的靈敏度不高的問題, 提供對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒,同時還提供了利用該試劑盒進行檢測的檢測方法,該檢測方法靈敏、特異,便于操作。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的
對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒,包括盒體1,盒體1內(nèi)設(shè)有管孔支架5,其特殊之處在于管孔支架5上擺放有以下管件
(1)、熒光定量PCR反應(yīng)液管6,內(nèi)裝2X熒光定量PCRbuffer、對蝦傳染性肌肉壞死病毒正反引物及熒光標(biāo)記的TaqMan探針的混合液;
正向引物序列5,- GATGG CAGCA CGTCA AAATG -3’ ; 反向引物序列5,- CAGCT GTTCC TGGGA CTTCC T -3,;
TaqMan 探針序列5'-CTATT TCCTC CACTA ATTCA GAGC-3,,探針序列的 5,端用 FAM 標(biāo)記,3’端用TAMRA標(biāo)記;
(2)、去離子水管3,內(nèi)裝無菌去離子水;
(3)、陰性對照管4,內(nèi)裝SPF(無特定病原體)對蝦核酸;
(4)、標(biāo)準(zhǔn)品管2,分別內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒107,106,IO5,IO4, IO3, IO2, 10,1拷貝cDNA陽性克隆。對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測方法如下(1)熒光定量PCR反應(yīng)體系
權(quán)利要求
1.對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒,包括盒體(1),盒體(1)內(nèi)設(shè)有管孔支架(5),其特征在于管孔支架(5)上擺放有以下管件1)、熒光定量PCR反應(yīng)液管(6),內(nèi)裝2X熒光定量PCRbuffer、對蝦傳染性肌肉壞死病毒正反引物及熒光標(biāo)記的TaqMan探針的混合液;正向引物序列5,- GATGG CAGCA CGTCA AAATG -3,; 反向引物序列5,- CAGCT GTTCC TGGGA CTTCC T -3,;TaqMan 探針序列5,-CTATT TCCTC CACTA ATTCA GAGC-3’,探針序列的 5’ 端用 FAM 標(biāo)記,3’端用TAMRA標(biāo)記;2)、去離子水管(3),內(nèi)裝無菌去離子水;3)、陰性對照管(4),內(nèi)裝SPF(無特定病原體)對蝦核酸;4)、標(biāo)準(zhǔn)品管(2),分別內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒107,106,IO5,IO4, IO3, IO2, 10,1 拷貝cDNA陽性克隆。
2.權(quán)利要求1所述檢測試劑盒用于檢測對蝦傳染性肌肉壞死病毒。
3.采用權(quán)利要求1或2所述檢測試劑盒對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測方法,其特征在于(1)熒光定量PCR反應(yīng)體系
全文摘要
本發(fā)明涉及對蝦傳染性肌肉壞死病毒的檢測試劑盒及檢測方法,屬于海洋生物病原檢測技術(shù)領(lǐng)域。包括盒體,盒體內(nèi)設(shè)有管孔支架,管孔支架上擺放有以下管件(1)熒光定量PCR反應(yīng)液管;正向引物序列;反向引物序列;TaqMan探針序列;(2)去離子水管,內(nèi)裝無菌去離子水;(3)陰性對照管,內(nèi)裝SPF(無特定病原體)對蝦核酸;(4)標(biāo)準(zhǔn)品管,分別內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒107,106,105,104,103,102,10,1拷貝cDNA陽性克隆。本發(fā)明具有很高的推廣應(yīng)用價值,檢測方法靈敏、特異、便于操作。
文檔編號C12R1/93GK102559484SQ20121002143
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月31日
發(fā)明者劉鴻玲, 閆冬春 申請人:魯東大學(xué)