專利名稱：對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量pcr檢測試劑盒及檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對蝦傳染性肌肉壞死病毒的檢測試劑盒及檢測方法，屬于海洋生物病原檢測技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
傳染性肌肉壞死病為2002年在巴西發(fā)現(xiàn)的一種危害對蝦生產(chǎn)的新的病毒性傳染病，2004年美國亞利桑納大學(xué)Lightner D V博士研究發(fā)現(xiàn)該病由一種新的病毒引起并將之定名為傳染性肌肉壞死病毒(Infectious myonecrosis virus,簡稱IMNV)。這種新型病毒為雙鏈RNA病毒，屬于整體病毒科。對蝦傳染性肌肉壞死病毒的易感對蝦種類為南美白對蝦，主要是感染60-80天的幼蝦。該病毒能造成染病對蝦全身肌肉組織壞死，一般情況下， 病理死亡發(fā)生緩慢，死亡率不高，但整個養(yǎng)殖過程都有死亡，累積死亡率可達70%。該病毒目前已傳入亞洲，正威脅著中國的南美白對蝦養(yǎng)殖。Andrade T P D等2007年建立了 IMNV的熒光定量PCR檢測方法，最低可檢測到 10拷貝的IMNV，此檢測方法靈敏度有待進一步提高。因熒光定量PCR檢測方法是進行對蝦病毒定量及早期預(yù)防的重要有效手段，所以建立高靈敏度的熒光定量PCR檢測方法，以及配合該檢測方法使用的病毒檢測試劑盒極為重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有熒光定量PCR檢測方法中存在的靈敏度不高的問題， 提供對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒，同時還提供了利用該試劑盒進行檢測的檢測方法，該檢測方法靈敏、特異，便于操作。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的
對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒，包括盒體1，盒體1內(nèi)設(shè)有管孔支架5，其特殊之處在于管孔支架5上擺放有以下管件
(1)、熒光定量PCR反應(yīng)液管6，內(nèi)裝2X熒光定量PCRbuffer、對蝦傳染性肌肉壞死病毒正反引物及熒光標(biāo)記的TaqMan探針的混合液；
正向引物序列5，- GATGG CAGCA CGTCA AAATG -3’ ； 反向引物序列5，- CAGCT GTTCC TGGGA CTTCC T -3，；
TaqMan 探針序列5'-CTATT TCCTC CACTA ATTCA GAGC-3，，探針序列的 5，端用 FAM 標(biāo)記，3’端用TAMRA標(biāo)記；
(2)、去離子水管3，內(nèi)裝無菌去離子水；
(3)、陰性對照管4，內(nèi)裝SPF(無特定病原體)對蝦核酸；
(4)、標(biāo)準(zhǔn)品管2，分別內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒107，106，IO5,IO4, IO3, IO2, 10，1拷貝cDNA陽性克隆。對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測方法如下(1)熒光定量PCR反應(yīng)體系
權(quán)利要求
1.對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測試劑盒，包括盒體(1)，盒體(1)內(nèi)設(shè)有管孔支架(5)，其特征在于管孔支架(5)上擺放有以下管件1)、熒光定量PCR反應(yīng)液管(6)，內(nèi)裝2X熒光定量PCRbuffer、對蝦傳染性肌肉壞死病毒正反引物及熒光標(biāo)記的TaqMan探針的混合液；正向引物序列5，- GATGG CAGCA CGTCA AAATG -3，； 反向引物序列5，- CAGCT GTTCC TGGGA CTTCC T -3，；TaqMan 探針序列5，-CTATT TCCTC CACTA ATTCA GAGC-3’，探針序列的 5’ 端用 FAM 標(biāo)記，3’端用TAMRA標(biāo)記；2)、去離子水管(3)，內(nèi)裝無菌去離子水；3)、陰性對照管(4)，內(nèi)裝SPF(無特定病原體)對蝦核酸；4)、標(biāo)準(zhǔn)品管(2)，分別內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒107，106，IO5,IO4, IO3, IO2, 10,1 拷貝cDNA陽性克隆。
2.權(quán)利要求1所述檢測試劑盒用于檢測對蝦傳染性肌肉壞死病毒。
3.采用權(quán)利要求1或2所述檢測試劑盒對蝦傳染性肌肉壞死病毒熒光定量PCR檢測方法，其特征在于(1)熒光定量PCR反應(yīng)體系
全文摘要
本發(fā)明涉及對蝦傳染性肌肉壞死病毒的檢測試劑盒及檢測方法，屬于海洋生物病原檢測技術(shù)領(lǐng)域。包括盒體，盒體內(nèi)設(shè)有管孔支架，管孔支架上擺放有以下管件(1)熒光定量PCR反應(yīng)液管；正向引物序列；反向引物序列；TaqMan探針序列；(2)去離子水管，內(nèi)裝無菌去離子水；(3)陰性對照管，內(nèi)裝SPF(無特定病原體)對蝦核酸；(4)標(biāo)準(zhǔn)品管，分別內(nèi)裝傳染性肌肉壞死病毒107,106,105,104,103,102,10,1拷貝cDNA陽性克隆。本發(fā)明具有很高的推廣應(yīng)用價值，檢測方法靈敏、特異、便于操作。
文檔編號C12R1/93GK102559484SQ20121002143
公開日2012年7月11日 申請日期2012年1月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月31日
發(fā)明者劉鴻玲, 閆冬春 申請人:魯東大學(xué)