一種預(yù)裝熒光pcr試劑的反應(yīng)管的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型涉及試劑檢測(cè)研究領(lǐng)域中的一種反應(yīng)管，特別是一種預(yù)裝熒光PCR試 劑的反應(yīng)管。
【背景技術(shù)】
[0002] eal-time PCR技術(shù)自1996年誕生以來(lái)，由于它顯著的優(yōu)越性，不僅廣泛的應(yīng)用于 分子生物學(xué)的各個(gè)研究領(lǐng)域，而且也開(kāi)始作為一種診斷手段應(yīng)用于臨床。其應(yīng)用涉及到的 范圍包括DNA、mRNA和病毒荷載量的定量，核酸多態(tài)性分析，基因突變分析等多個(gè)領(lǐng)域。
[0003] 正是由于Real-time PCR越來(lái)越多地應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)、出入境檢驗(yàn)檢疫、養(yǎng)殖動(dòng)物 檢驗(yàn)檢疫等等與人類(lèi)健康密切相關(guān)的領(lǐng)域，試劑能否穩(wěn)定地檢出病原體，變得尤為重要。
[0004] Real-time PCR的穩(wěn)定性短板主要在酶以及探針這兩種組分上。
[0005] Taq酶和mmlv酶都是蛋白質(zhì)，雖然自身都較為穩(wěn)定，但是卻經(jīng)不起反復(fù)凍融時(shí)冰 晶造成的損傷。試劑在半成品分裝、出貨、運(yùn)輸過(guò)程中，不可避免地會(huì)遇到反復(fù)凍融或者較 長(zhǎng)時(shí)間未按規(guī)定溫度存放試劑的情況，此時(shí)會(huì)對(duì)試劑的穩(wěn)定性產(chǎn)生一定的影響。部分公司 會(huì)將mmlv酶凍干成顆粒。
[0006] 熒光探針是標(biāo)記熒光基團(tuán)的合成DNA鏈，當(dāng)熒光探針溶解之后，標(biāo)記的基團(tuán)會(huì)慢 慢脫落，使得反應(yīng)結(jié)果的熒光強(qiáng)度降低，直至試劑失效。通過(guò)增加熒光探針的量可以一定程 度延長(zhǎng)有效期，但是會(huì)增加試劑成本。將熒光探針凍干后，可以穩(wěn)定存儲(chǔ)2年以上。
[0007] 冷凍干燥是利用冰晶升華的原理，在高度真空的環(huán)境下，將已凍結(jié)了的食品物料 的水分不經(jīng)過(guò)冰的融化直接從冰固體升華為蒸汽。其主要優(yōu)點(diǎn)是：（1)干燥后的物料保持 原來(lái)的化學(xué)組成和物理性質(zhì)（如多孔結(jié)構(gòu)、膠體性質(zhì)等）；（2)熱量消耗比其他干燥方法少。 缺點(diǎn)是費(fèi)用較高，不能廣泛采用。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0008] 本實(shí)用新型的目的，在于提供一種預(yù)裝熒光PCR試劑的反應(yīng)管。
[0009] 本實(shí)用新型解決其技術(shù)問(wèn)題的解決方案是：一種預(yù)裝熒光PCR試劑的反應(yīng)管，其 包括反應(yīng)管體以及至少一根塑料檔桿，所述塑料檔桿的一端固定在反應(yīng)管體的敞口端，塑 料檔桿的另一端從反應(yīng)管體的敞口端伸入反應(yīng)管體內(nèi)部后將反應(yīng)管體內(nèi)部分隔為第一放 置區(qū)和第二放置區(qū)，所述第一放置區(qū)和第二放置區(qū)直接或者間接連通，所述第一放置區(qū)內(nèi) 放置有酶顆粒混合凍干物，所述第二放置區(qū)內(nèi)放置有引物、探針、dNTP成分混合凍干物。
[0010] 作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述塑料檔桿的另一端從反應(yīng)管體的敞口端伸 入反應(yīng)管體內(nèi)部后固定在反應(yīng)管體的側(cè)壁。
[0011] 作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述第一放置區(qū)位于塑料檔桿和反應(yīng)管體的側(cè) 壁之間，所述引物、探針、dNTP成分混合凍干物位于反應(yīng)管體的底部。
[0012] 作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，遠(yuǎn)離所述塑料檔桿的反應(yīng)管體側(cè)壁上設(shè)有抽氣 孔。
[0013] 作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述反應(yīng)管體的內(nèi)側(cè)壁設(shè)有25ml刻度線(xiàn)。
[0014] 作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述塑料檔桿的數(shù)量為兩根，兩根所述塑料檔 桿之間形成連通第一放置區(qū)和第二放置區(qū)的間隙。
[0015] 本實(shí)用新型的有益效果是：
[0016] a.操作人員只需要添加反應(yīng)緩沖液和模版進(jìn)入PCR反應(yīng)管即可，不僅方便操作；
[0017] b.降低了不同實(shí)驗(yàn)人員操作時(shí)發(fā)生錯(cuò)誤操作的可能；
[0018] c.減少了實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)誤差，降低了 PCR反應(yīng)的變異系數(shù)；
[0019] d.將易失活的酶、熒光探針等成分凍干保存，增加試劑的保存時(shí)間。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 為了更清楚地說(shuō)明本實(shí)用新型實(shí)施例中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例描述中所需 要使用的附圖作簡(jiǎn)單說(shuō)明。顯然，所描述的附圖只是本實(shí)用新型的一部分實(shí)施例，而不是全 部實(shí)施例，本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其 他設(shè)計(jì)方案和附圖。
[0021] 圖1是本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 以下將結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本實(shí)用新型的構(gòu)思、具體結(jié)構(gòu)及產(chǎn)生的技術(shù)效果進(jìn)行 清楚、完整地描述，以充分地理解本實(shí)用新型的目的、特征和效果。顯然，所描述的實(shí)施例 只是本實(shí)用新型的一部分實(shí)施例，而不是全部實(shí)施例，基于本實(shí)用新型的實(shí)施例，本領(lǐng)域的 技術(shù)人員在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下所獲得的其他實(shí)施例，均屬于本實(shí)用新型保護(hù)的范 圍。另外，文中所提到的所有聯(lián)接/連接關(guān)系，并非單指構(gòu)件直接相接，而是指可根據(jù)具體 實(shí)施情況，通過(guò)添加或減少聯(lián)接輔件，來(lái)組成更優(yōu)的聯(lián)接結(jié)構(gòu)。
[0023] 參照?qǐng)D1，一種預(yù)裝熒光PCR試劑的反應(yīng)管，其包括反應(yīng)管體1以及至少一根塑料 檔桿2,所述塑料檔桿2的一端固定在反應(yīng)管體1的敞口端，塑料檔桿2的另一端從反應(yīng)管 體1的敞口端伸入反應(yīng)管體1內(nèi)部后將反應(yīng)管體1內(nèi)部分隔為第一放置區(qū)5和第二放置區(qū) 6,所述第一放置區(qū)5和第二放置區(qū)6直接或者間接連通，所述第一放置區(qū)5內(nèi)放置有酶顆 ?；旌蟽龈晌铮琓酶顆?；旌蟽龈晌餅閍q酶、mmlv酶等蛋白成分混合凍干成顆粒狀。所述 第二放置區(qū)6內(nèi)放置有引物、探針、dNTP成分混合凍干物。
[0024] 進(jìn)一步作為優(yōu)選的實(shí)施方式，所述塑料檔桿2的另一端從反應(yīng)管體1的敞口端伸 入反應(yīng)管體1內(nèi)部后固定在反應(yīng)管體1的側(cè)壁。
[0025] 進(jìn)一步作為優(yōu)選的實(shí)施方式，所述第一放置區(qū)5位于塑料檔桿2和反應(yīng)管體1的 側(cè)壁之間，所述引物、探針、dNTP成分混合凍干物位于反應(yīng)管體1的底部。
[0026] 進(jìn)一步作為優(yōu)選的實(shí)施方式，遠(yuǎn)離所述塑料檔桿2的反應(yīng)管體1側(cè)壁上設(shè)有抽氣 孔4。用注射器通過(guò)抽氣孔4對(duì)反應(yīng)管體1抽氣，減少反應(yīng)管體1中水蒸氣含量。
[0027] 進(jìn)一步作為優(yōu)選的實(shí)施方式，所述反應(yīng)管體1的內(nèi)側(cè)壁設(shè)有25ml刻度線(xiàn)3。
[0028] 進(jìn)一步作為優(yōu)選的實(shí)施方式，所述塑料檔桿2的數(shù)量為兩根，兩根所述塑料檔桿2 之間形成連通第一放置區(qū)5和第二放置區(qū)6的間隙。
[0029] 1.將反應(yīng)試劑的引物、探針、dNTP按以下比例（10000份計(jì))配制，混勻后分裝進(jìn)八 連管，每孔luL，用凍干機(jī)凍干：
[0031] 2.將廣州維伯鑫生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的taq酶、mmlv酶按以下比例配制，混勻 后分裝成luL -份，用凍干機(jī)凍干成顆粒狀：
[0033] 其中，1L的酶儲(chǔ)存液配制方法為：
[0035] 3.將1顆凍干的酶顆粒放置在反應(yīng)管內(nèi)2根塑料擋桿間。
[0036] 4.用注射器通過(guò)抽氣孔(見(jiàn)圖1)對(duì)反應(yīng)管抽氣，減少反應(yīng)管中水蒸氣含量。
[0037] 5.配制lx反應(yīng)緩沖液：
[0038]
[0039] 使用時(shí)，
[0040] 1.將21uL的lx反應(yīng)緩沖液加入反應(yīng)管體1內(nèi)，反應(yīng)緩沖液將沒(méi)過(guò)酶顆粒；
[0041] 2.用槍頭吹打幾下，使凍干的酶顆粒以及管底的引物、探針、dNTP混合物加快溶 解混勻；
[0042] 3.添加擴(kuò)增模版，上機(jī)進(jìn)行PCR程序。
[0043] 4.將以此種預(yù)裝形式預(yù)裝保存1年的禽流感N9基因熒光PCR試劑，與同樣配方現(xiàn) 配的N9基因熒光PCR試劑，進(jìn)行對(duì)比。
[0044] 以上是對(duì)本實(shí)用新型的較佳實(shí)施方式進(jìn)行了具體說(shuō)明，但本發(fā)明創(chuàng)造并不限于所 述實(shí)施例，熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在不違背本實(shí)用新型精神的前提下還可作出種種的等同 變型或替換，這些等同的變型或替換均包含在本申請(qǐng)權(quán)利要求所限定的范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種預(yù)裝熒光PCR試劑的反應(yīng)管，其特征在于：其包括反應(yīng)管體以及至少一根塑料 檔桿，所述塑料檔桿的一端固定在反應(yīng)管體的敞口端，塑料檔桿的另一端從反應(yīng)管體的敞 口端伸入反應(yīng)管體內(nèi)部后將反應(yīng)管體內(nèi)部分隔為第一放置區(qū)和第二放置區(qū)，所述第一放置 區(qū)和第二放置區(qū)直接或者間接連通，所述第一放置區(qū)內(nèi)放置有酶顆?；旌蟽龈晌?，所述第 二放置區(qū)內(nèi)放置有引物、探針、dNTP成分混合凍干物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)裝熒光PCR試劑的反應(yīng)管，其特征在于：所述塑料檔桿的 另一端從反應(yīng)管體的敞口端伸入反應(yīng)管體內(nèi)部后固定在反應(yīng)管體的側(cè)壁。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的預(yù)裝熒光PCR試劑的反應(yīng)管，其特征在于：所述第一放置區(qū) 位于塑料檔桿和反應(yīng)管體的側(cè)壁之間，所述引物、探針、dNTP成分混合凍干物位于反應(yīng)管體 的底部。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)裝熒光PCR試劑的反應(yīng)管，其特征在于：遠(yuǎn)離所述塑料檔 桿的反應(yīng)管體側(cè)壁上設(shè)有抽氣孔。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)裝熒光PCR試劑的反應(yīng)管，其特征在于：所述反應(yīng)管體的 內(nèi)側(cè)壁設(shè)有25ml刻度線(xiàn)。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)裝熒光PCR試劑的反應(yīng)管，其特征在于：所述塑料檔桿的 數(shù)量為兩根，兩根所述塑料檔桿之間形成連通第一放置區(qū)和第二放置區(qū)的間隙。
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型公開(kāi)了一種預(yù)裝熒光PCR試劑的反應(yīng)管，其包括反應(yīng)管體以及至少一根塑料檔桿，所述塑料檔桿的一端固定在反應(yīng)管體的敞口端，塑料檔桿的另一端從反應(yīng)管體的敞口端伸入反應(yīng)管體內(nèi)部后將反應(yīng)管體內(nèi)部分隔為第一放置區(qū)和第二放置區(qū)，所述第一放置區(qū)和第二放置區(qū)直接或者間接連通，所述第一放置區(qū)內(nèi)放置有酶顆?；旌蟽龈晌?，所述第二放置區(qū)內(nèi)放置有引物、探針、dNTP成分混合凍干物。操作人員只需要添加反應(yīng)緩沖液和模版進(jìn)入PCR反應(yīng)管即可，不僅方便操作；降低了不同實(shí)驗(yàn)人員操作時(shí)發(fā)生錯(cuò)誤操作的可能；減少了實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)誤差，降低了PCR反應(yīng)的變異系數(shù)；將易失活的酶、熒光探針等成分凍干保存，增加試劑的保存時(shí)。
【IPC分類(lèi)】C12M1/24, C12Q1/68
【公開(kāi)號(hào)】CN204958918
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201520645881
【發(fā)明人】張曉瑋, 徐貴峰, 徐貴云, 常桐, 唐海輝
【申請(qǐng)人】廣州維伯鑫生物科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年1月13日
【申請(qǐng)日】2015年8月25日