專利名稱：酶法檢測(cè)肌酸激酶試劑盒及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物試劑，具體涉及一種檢測(cè)試劑盒，尤其涉及一種酶法檢測(cè)肌酸激酶試劑盒及其制備方法。
背景技術(shù)：
肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)通常存在于動(dòng)物的心臟、肌肉以及腦等組織的細(xì)胞漿和線粒體中，是一個(gè)與細(xì)胞內(nèi)能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶，它可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷?；磻?yīng)。肌酸激酶有四種同功酶形式:肌肉型(MM)、腦型(BB)、雜化型(MB)和線粒體型(MiMi)。MM型主要存在于各種肌肉細(xì)胞中，BB型主要存在于腦細(xì)胞中，MB型主要存在于心肌細(xì)胞中，MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌線粒體中。肌酸激酶在臨床上主要用于診斷心肌梗塞。心肌梗塞患者發(fā)病后2-4小時(shí)，血液中此酶活動(dòng)即開始升高。比血清中谷草轉(zhuǎn)酸酶和乳酸脫氫酶的活力變化都出現(xiàn)得早。此酶是繼轉(zhuǎn)氨酶后至今臨床上最重要的酶，特別是在診斷心肌梗死上有較高價(jià)值。和常用的谷草轉(zhuǎn)氨酶、乳酸脫氫酶相比，有下列優(yōu)點(diǎn):肌酸激酶最先升高，疼痛出現(xiàn)后4小時(shí)肌酸激酶急劇上升，最高可達(dá)正常上限的10 12倍，是目前最敏感的酶試驗(yàn)。因肝中肌酸激酶含量很少，心臟疾病伴有肝郁血或肝損傷時(shí)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氨酶往往升高而肌酸激酶無變化，特異性較強(qiáng)。紅細(xì)胞中此酶活力很低，溶血標(biāo)本對(duì)此酶測(cè)定干擾較谷草轉(zhuǎn)氨酶和乳酸脫氫酶小，已成為臨床化學(xué)方面常用酶之一，每年全世界約進(jìn)行一億次肌酸激酶測(cè)定。在心肌梗死病程中，如肌酸激酶活力再次升高，往往說明心肌再次梗死。但此酶活力增高持續(xù)時(shí)間短，2 4天后就可恢復(fù)正常。所以如用此酶診斷心肌梗死，一定要注意病程時(shí)間。發(fā)病時(shí)間較長(zhǎng)的病例，應(yīng)測(cè)定能較長(zhǎng)維持增高的酶活力的乳酸脫氫酶，此時(shí)肌酸激酶活性正常并不能否定心肌梗死診斷。另一方面，肌酸激酶可用于肌肉疾病診斷。在Duchenne肌萎縮患者血中，肌酸激酶極度增高，甚至可高出正常值上限50倍，而后隨病程延長(zhǎng)下降。此病是和性染色體有關(guān)的遺傳病，在無癥狀的女性，隱性攜帶者約75%肌酸激酶也高于正常。其他類型的原發(fā)性肌萎縮患者肌酸激酶也有不同程度的升高，這可用于區(qū)別繼發(fā)性肌病如神經(jīng)性或廢用性肌萎縮，此時(shí)肌酸激酶活力往往正常。此外，肌酸激酶還可用于腦疾病診斷。高肌酸激酶活力常見于發(fā)作性癲癇、破傷風(fēng)。肌酸激酶增高也見于器質(zhì)性神經(jīng)疾病，如腦梗死、腦膜炎和腦炎等。肌酸激酶檢測(cè)方法:
權(quán)利要求
1.一種酶法檢測(cè)肌酸激酶試劑盒，其特征在于，該試劑盒由下列試劑I和試劑2，按4份:I份的比例組成: 所述試劑I由下列重量配比的成分組成:1L 咪唑3-10g醋酸鎂2-1 OgN-乙酰半胱氨酸2-10g羥基亞乙基二膦酸l-5g疊氮鈉0.l-3g 輔酶Il-5g 丙醇1-1OgD-葡萄糖2-8g己糖激酶2-10KU 去離子水加至IL ； 試劑2由下列重量配比的成分組成:1L咪唑2-10g羥基亞乙基二膦酸1-1Og單磷酸腺苷，二鈉鹽3-20g二磷酸腺苷，一鉀鹽2-10g二(5-腺苷)五磷酸，鋰鹽0.0l-1g葡萄糖-6-磷酸脫氫酶5-50KU磷酸肌酸10-80g 疊氮鈉0.2-2g 去離子水加至1L。
2.如權(quán)利 要求1所述肌酸激酶試劑盒的制備方法，其特征在于，該方法包括下列步驟: (一)制備試劑1:1L (1)先向容器內(nèi)加入為總量80%的去離子水； (2)依次加入咪唑、醋酸鎂、N-乙酰半胱氨酸、羥基亞乙基二膦酸、疊氮鈉、輔酶1、巖藻糖、D-葡萄糖； (3)加入己糖激酶； (4)最后加入剩余量的去離子水至總體積為IL混合均勻，即得； (二)制備試劑2:1L 向容器內(nèi)依次加入咪唑、羥基亞乙基二膦酸、單磷酸腺苷、二鈉鹽二磷酸腺苷，一鉀鹽、二(5-腺苷)五磷酸，鋰鹽、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、磷酸肌酸疊氮鈉，去離子水加至總體積為IL混合均勻，即得。
全文摘要
本發(fā)明提供一種酶法檢測(cè)肌酸激酶試劑盒，該試劑盒由試劑1和試劑2，按4份∶1份的比例組成試劑1由下列重量配比的成分組成咪唑3-10g，醋酸鎂2-10g，N-乙酰半胱氨酸2-10g，羥基亞乙基二膦酸1-5g，疊氮鈉0.1-3g，輔酶I1-5g，丙醇1-10g，D-葡萄糖2-8g，己糖激酶2-10KU去離子水加至1L。試劑2由下列重量配比的成分組成咪唑2-10g，羥基亞乙基二膦酸1-10g，單磷酸腺苷二鈉鹽3-20g，二磷酸腺苷一鉀鹽2-10g，二(5-腺苷)五磷酸鋰鹽0.01-1g，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶5-50KU，磷酸肌酸10-80g，疊氮鈉0.2-2g，去離子水加至1L。本發(fā)明的試劑盒檢測(cè)效果好，對(duì)試劑中的巰基有很強(qiáng)的保護(hù)作用，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的增加，巰基的保護(hù)作用很顯著，確保了試劑的穩(wěn)定，有利于檢測(cè)的敏感性和正確性，有較大的臨床應(yīng)用價(jià)值。
文檔編號(hào)C12Q1/50GK103173519SQ201110431140
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2011年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月20日
發(fā)明者孫衛(wèi)兵 申請(qǐng)人:上海復(fù)星醫(yī)藥(集團(tuán))股份有限公司, 上海復(fù)星長(zhǎng)征醫(yī)學(xué)科學(xué)有限公司