專利名稱：血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種醫(yī)用試劑檢測方法，特別涉及血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法。
背景技術(shù)：
利用現(xiàn)代生物技術(shù)所開發(fā)的超微量測定方法，極大的推動了生物和醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的各項臨床和科研工作的快速發(fā)展，為人類的科學(xué)事業(yè)和社會進步作出了非凡的貢獻。
上世紀七十年代由Arakawa首先發(fā)表了應(yīng)用魯米諾——過氧化物酶的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)進行酶免分析的技術(shù)，這一技術(shù)由于靈敏度高達10-18mol，可在20分鐘內(nèi)快速測定出結(jié)果，可簡便實現(xiàn)完全自動化，有效期長達一年以上，無放射性和致畸物質(zhì)，利于環(huán)保而受到普遍歡迎，是目前發(fā)展最迅速的檢測技術(shù)。
目前，化學(xué)發(fā)光技術(shù)在免疫分析中已得到相當(dāng)普及的程度，已發(fā)展為能檢測多種生物活性物質(zhì)的常規(guī)監(jiān)床檢測方法，從免疫反應(yīng)方式分，該方法有兩種基本類型，即化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)和免疫化學(xué)發(fā)光分析(ICMA)；從發(fā)光方式上看，一是將發(fā)光物質(zhì)直接標記到抗體或抗原上，免疫反應(yīng)后，在起動劑的作用下而發(fā)光，另一種是用酶標記抗體或抗原，免疫反應(yīng)后，加入化學(xué)發(fā)光底物，在酶催作用下而發(fā)光。
該方法雖有突出的優(yōu)點，但目前僅限于免疫分析，而在生化分析中還是空白。
單胺氧化酶(MAO)存在與血液和結(jié)締組織中，能促進結(jié)締組織的成熟，在膠原形成過程中，參與膠原成熟的最后階段架橋形成，使膠原和彈性硬蛋白結(jié)合。肝硬變時，血清中的MAO活性明顯增高，陽性率高達80％以上。
現(xiàn)在普遍使用的測定血液中血清單胺氧化酶的方法為芐醛偶氮酚等比色法，該法是利用血清單胺氧化酶催化一種單胺氧化，生成相應(yīng)的醛、氨和過氧化氫，將芐胺偶氮-β-萘酚氧化成芐醛偶氮-β-萘酚，用環(huán)己烷抽提后進行比色測定。該法的不足之處主要有
1、線性范圍窄。由于檢測光吸收，其分辨率不像化學(xué)發(fā)光那么敏感，線性范圍不能完全滿足臨床檢測的需要，對高濃度的樣品需要經(jīng)稀釋后測定，帶來一定不便。
2、靈敏度不如化學(xué)發(fā)光。化學(xué)發(fā)光是測定光信號，靈敏度要比測光吸收高出許多。
3、試劑成份復(fù)雜，操作煩瑣，尤其是抽提和離心麻煩，容易造成誤差，影響測定結(jié)果的準確性。
4、干擾因素多，如遇到膽紅素增多會干擾比色。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是一種提供能克服上述缺陷、靈敏度高、線性范圍寬、方便、安全的血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法。解決該技術(shù)問題采用的主要技術(shù)方案血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法，其特征在于血清單胺氧化酶催化一種單胺氧化，生成相應(yīng)的醛、氨和過氧化氫；在過氧化物酶作用下，使化學(xué)發(fā)光物氧化而發(fā)光；光信號的大小與血清單胺氧化酶的濃度呈正相關(guān)，即血清單胺氧化酶濃度越大發(fā)出的光信號越強；記錄這種光信號即可推測血清單胺氧化酶的濃度；用已知濃度的血清單胺氧化酶與測出的光信號，作出劑量-反應(yīng)曲線；未知樣品的血清單胺氧化酶含量可從該曲線推算出來；所述的化學(xué)發(fā)光物為魯米諾；所述的單胺氧化酶可以是全血清中的血清單胺氧化酶；所述的單胺氧化酶也可以是結(jié)締組織中的血清單胺氧化酶。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比有如下優(yōu)點用化學(xué)發(fā)光物代替顯色物，達到更靈敏、更穩(wěn)定、范圍寬、更安全的目的；用該方法可以制備相應(yīng)的定量測定血清單胺氧化酶的商品試劑盒。具體優(yōu)點是①靈敏度更高。傳統(tǒng)方法是檢測顏色深淺，而化學(xué)發(fā)光是測光信號，可一個一個光子計數(shù)，所測的最低限更小，因而靈敏度更高。②線性范圍寬。測顏色的深淺的分辨率比光子計數(shù)的精度要低得多，化學(xué)發(fā)光的檢測范圍高達105。③安全適用。化學(xué)發(fā)光物如魯米諾等很安全，整個檢測過程無有害物出現(xiàn)，無論是檢測或處理廢物都很安全，有利于環(huán)境保護。④便于普及。本發(fā)明所制備的試劑盒，可用于全自動測量，也可用于手工或半自動測量，適宜大、中、小各層次的醫(yī)療和研究機構(gòu)使用。⑤巨大的社會效益。用化學(xué)發(fā)光法測定生化指標或免疫物質(zhì)，可同用一臺化學(xué)發(fā)光儀，不再需要進口昂貴的生化儀，節(jié)省大量資金，不只降低了成本，對醫(yī)療機構(gòu)、患者及社會均大有益處。
具體實施例方式現(xiàn)舉例說明本發(fā)明的實施例。血清單胺氧化酶催化一種單胺氧化，生成相應(yīng)的醛、氨和過氧化氫；在過氧化物酶作用下，使化學(xué)發(fā)光物氧化而發(fā)光；光信號的大小與血清單胺氧化酶的濃度呈正相關(guān)，即血清單胺氧化酶濃度越大發(fā)出的光信號越強；記錄這種光信號即可推測血清單胺氧化酶的濃度；用已知濃度的血清單胺氧化酶與測出的光信號，作出劑量-反應(yīng)曲線；未知樣品的血清單胺氧化酶含量可從該曲線推算出來；所述的化學(xué)發(fā)光物為魯米諾；所述的單胺氧化酶可以是全血清中的血清單胺氧化酶；所述的單胺氧化酶也可以是結(jié)締組織中的血清單胺氧化酶；這便是本發(fā)明的血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法。該方法可用于測定全血清或結(jié)締組織中的血清單胺氧化酶含量。
一、試劑包括過氧化物酶液；血清單胺氧化酶標準單一或系列濃度；底物液(含單胺)二、測定程序按下表進行，加樣單位為μl。

三、用適當(dāng)方法處理作出劑量-反應(yīng)曲線，根據(jù)樣品的RLU值從該曲線求出其血清單胺氧化酶的濃度。或直接由公式求出單胺氧化酶濃度＝(樣品RLU/標準RLU)×標準濃度四、也可用雙試劑測定。
本發(fā)明的靈敏度更高因為傳統(tǒng)方法是檢測顏色深淺，而本發(fā)明是測光信號，可一個一個光子計數(shù)，所測的最低限更小，因而靈敏度更高。線性范圍寬這是因為傳統(tǒng)的測顏色的深淺的分辨率比光子計數(shù)的精度要低得多，本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光檢測范圍高達105。安全適用本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光物如魯米諾等很安全，整個檢測過程無有害物出現(xiàn)，無論是檢測或處理廢物都很安全，有利于環(huán)境保護。便于普及本發(fā)明所制備的試劑盒，可用于全自動測量，也可用于手工或半自動測量，適宜大、中、小各層次的醫(yī)療和研究機構(gòu)使用。社會效益巨大用本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光測定方法測定生化指標或免疫物質(zhì)，可同用一臺化學(xué)發(fā)光儀，不再需要進口昂貴的生化儀，節(jié)省大量資金，不只降低了成本，對醫(yī)療機構(gòu)、患者及社會均大有益處。本發(fā)明方法簡單，適于大、中、小醫(yī)療機構(gòu)廣泛推廣應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法，其特征在于血清單胺氧化酶催化一種單胺氧化，生成相應(yīng)的醛、氨和過氧化氫；在過氧化物酶作用下，使發(fā)光物氧化而發(fā)光；光信號的大小與血清單胺氧化酶的濃度呈正相關(guān)，即血清單胺氧化酶濃度越大發(fā)出的光信號越強；記錄這種光信號即可推測血清單胺氧化酶的濃度；用已知濃度的血清單胺氧化酶與測出的光信號，作出劑量-反應(yīng)曲線；未知樣品的血清單胺氧化酶含量可從該曲線推算出來。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法，其特征在于所述的化學(xué)發(fā)光物為魯米諾。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法，其特征在于所述的單胺氧化酶可以是全血清中的血清單胺氧化酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法，其特征在于所述的單胺氧化酶也可以是結(jié)締組織中的血清單胺氧化酶。
全文摘要
本發(fā)明血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法，涉及一種在生化分析中醫(yī)用試劑的化學(xué)發(fā)光測定方法。現(xiàn)有的方法檢測范圍窄、靈敏度低、操作煩瑣、干擾因素多等技術(shù)問題。解決該技術(shù)問題的主要技術(shù)方案血液中血清單胺氧化酶的化學(xué)發(fā)光測定方法，其特征在于血清單胺氧化酶催化一種單胺氧化，生成相應(yīng)的醛、氨和過氧化氫；在過氧化物酶作用下，使化學(xué)發(fā)光物氧化而發(fā)光；血清單胺氧化酶濃度越大發(fā)出的光信號越強；記錄這種光信號即可推測血清單胺氧化酶的濃度；用已知濃度的血清單胺氧化酶與測出的光信號，作出劑量－反應(yīng)曲線；未知樣品的血清單胺氧化酶含量可從該曲線推算出來。它靈敏度更高、線性范圍寬、成本低，便于普及，適于各類醫(yī)療機構(gòu)廣泛應(yīng)用。
文檔編號C12Q1/28GK1912593SQ20061011499
公開日2007年2月14日 申請日期2006年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月10日
發(fā)明者王京, 高淑舫 申請人:福建省洪誠生物藥業(yè)有限公司