專利名稱：測(cè)定鈣的試劑和測(cè)定方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用于測(cè)定鈣的試劑和測(cè)定方法。更具體地講，本發(fā)明涉及用于測(cè)定鈣的改進(jìn)的試劑，和能夠準(zhǔn)確測(cè)定來(lái)自活體的樣品中的鈣的改進(jìn)了的測(cè)定方法，并且特別適用于臨床診斷，所述樣品，如血液樣品(例如，全血，血漿或血清)或來(lái)自活體的含水的液體樣品(例如，腦脊髓液，淋巴，唾液或尿液)。另外，本發(fā)明涉及用于螯合的空白對(duì)照試劑和用于測(cè)定金屬離子的產(chǎn)生顏色的試劑，包括讓螯合和產(chǎn)生顏色的試劑與所述金屬離子起反應(yīng)。
相關(guān)技術(shù)的說(shuō)明作為定量分析樣品中鈣離子的方法，采用螯合和產(chǎn)生顏色的試劑的比色方法，通常適用于臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，并且適用于一般的化學(xué)分析領(lǐng)域。作為螯合和產(chǎn)生顏色的試劑，主要使用了o-甲酚酞絡(luò)合酮(o-CPC)，它的pH值最適合在堿性pH范圍內(nèi)呈色，其中，它與鈣結(jié)合，以便形成的螯合物是穩(wěn)定的。具體地講，pH10或以上的高pH范圍，例如，在JP-A-54-36996中所披露的。還有一種通過(guò)將8-羥基喹啉摻入偶氮胂-III中獲得的已知試劑，它被用作螯合和產(chǎn)生顏色試劑，以便穩(wěn)定這種試劑，正如在日本專利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)06-505560中所披露的。另外，還有一種已知的用于鈣分析的集成型多層分析元件，它是將偶氮氯膦-III用作螯合和產(chǎn)生顏色的試劑而獲得的，并且具有通過(guò)使用光反射顆粒擴(kuò)大的測(cè)定范圍，正如在JP-A-06-50976中所披露的。另外，JP-A-04-120464披露了通過(guò)將偶氮氯膦-III用作螯合和產(chǎn)生顏色的試劑能夠同時(shí)對(duì)鈣和鎂進(jìn)行定量。
不過(guò)，通過(guò)使用螯合和產(chǎn)生顏色的試劑獲得的用于鈣測(cè)定的每一種常規(guī)試劑都留有改進(jìn)的空間。例如，通過(guò)使用o-CPC獲得的用于測(cè)定的試劑應(yīng)當(dāng)改進(jìn)，因?yàn)樗膒H為10或更高。就是說(shuō)，由于這種試劑具有高pH，在使用時(shí)，通過(guò)吸收空氣中的碳酸氣體使它的pH顯著降低。另外，當(dāng)所述試劑以溶液形式長(zhǎng)時(shí)間保存時(shí)，它的pH會(huì)降低，使得測(cè)定值在某些場(chǎng)合下變得不準(zhǔn)確。另一方面，通過(guò)使用偶氮胂-III獲得的用于鈣測(cè)定的試劑由于具有比使用o-CPC的方法更低的pH而是有利的。不過(guò)，偶氮胂-III是有機(jī)胂化合物，因此，無(wú)法避免由于處理這種試劑而導(dǎo)致的環(huán)境污染問(wèn)題。對(duì)于偶氮氯膦-III來(lái)說(shuō)，最適合它的顏色改變的pH范圍是弱酸性的，并且偶氮氯膦-III是不含胂的試劑。因此，相對(duì)于由高pH和毒性導(dǎo)致的問(wèn)題而言，偶氮氯膦-III是優(yōu)選的。不過(guò)，用于鈣分析的集成型多層分析元件不是液體試劑，并且不會(huì)使它能夠處理大量的樣品，以便在短時(shí)間內(nèi)完成測(cè)定。另外，在同時(shí)定量鎂和鈣時(shí)，將偶氮氯膦-III添加到樣品中，以便同時(shí)將鎂和鈣結(jié)合在它上面，并且產(chǎn)生顏色，然后添加EGTA以便將鈣從它上面解離下來(lái)，并且導(dǎo)致顏色減弱，并且根據(jù)顏色減弱程度對(duì)鈣進(jìn)行定量。由于偶氮氯膦-III能產(chǎn)生高的空白值，它限制了可以進(jìn)行測(cè)定的范圍。
就是說(shuō)，盡管業(yè)已提出了通過(guò)使用螯合和產(chǎn)生顏色的試劑獲得的用于鈣測(cè)定的若干種試劑，尚沒(méi)有提供能夠解決上述所有問(wèn)題的試劑，即由高pH導(dǎo)致的碳酸氣體的吸收問(wèn)題，使用有毒的胂化合物的問(wèn)題，不能在短時(shí)間內(nèi)測(cè)定大量樣品的問(wèn)題，以及高空白值，并因此導(dǎo)致可測(cè)定的范圍較窄的問(wèn)題。
發(fā)明概述因此，本發(fā)明的目的是為了解決上述問(wèn)題，并且提供在保存穩(wěn)定性方面出色，不存在環(huán)境污染問(wèn)題，并且能夠以溶液形式進(jìn)行精確的鈣測(cè)定的試劑。
本發(fā)明人研究了用于鈣測(cè)定的與所述問(wèn)題相關(guān)的試劑，并因此意外地發(fā)現(xiàn)，在有釩酸鹽離子的情況下，偶氮氯膦-III能大大降低空白值。結(jié)果，發(fā)現(xiàn)了在通過(guò)使用偶氮氯膦-III或與它類似的化合物作為螯合和產(chǎn)生顏色的試劑，在足以與體液中的鈣起反應(yīng)的量的條件下，并且在與釩酸鹽離子組合使用時(shí)，能夠很好地解決由于高空白值導(dǎo)致的窄的測(cè)定范圍問(wèn)題和低的測(cè)定精確度問(wèn)題，這些問(wèn)題是使用偶氮氯膦-III或類似化合物時(shí)的最大的缺陷，因此，擴(kuò)大了要檢測(cè)的物種的測(cè)定范圍，并且能夠以高的精確度進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明正是基于這一發(fā)現(xiàn)。
因此，本發(fā)明提供了用于測(cè)定鈣的試劑，它包括釩酸鹽離子和偶氮氯膦-III或與它類似的化合物。
另外，本發(fā)明提供了用于測(cè)定樣品中的鈣的方法，其特征在于在有釩酸鹽離子的條件下，讓樣品中的鈣與偶氮氯膦-III或與它類似的化合物起反應(yīng)，并且根據(jù)反應(yīng)產(chǎn)物導(dǎo)致的光學(xué)變化測(cè)定所述樣品中的鈣。
另外，本發(fā)明提供了用于螯合和產(chǎn)生顏色的試劑的空白對(duì)照試劑，它被用于根據(jù)通過(guò)螯合和產(chǎn)生顏色的試劑與金屬離子的反應(yīng)導(dǎo)致的光學(xué)變化測(cè)定金屬離子，該試劑包括作為活性成分的能夠抑制所述螯合和產(chǎn)生顏色的試劑本身呈色的釩酸鹽離子。
本發(fā)明的用于測(cè)定鈣的試劑和測(cè)定方法在以下各個(gè)方面都是出色的它們不存在由于高pH值導(dǎo)致的吸收碳酸氣體的問(wèn)題；它們不存在使用含有胂酸鹽的有毒試劑的問(wèn)題；它們能夠處理大量的樣品，以便在短時(shí)間內(nèi)完成測(cè)定，因?yàn)榭蓪⑺鼈冇迷谧詣?dòng)分析儀上，并且由于樣品空白值低，它們能夠測(cè)定寬的范圍。
優(yōu)選實(shí)施方案的說(shuō)明本發(fā)明用于測(cè)定鈣的試劑的特征是，包括釩酸鹽離子和偶氮氯膦-III或與它類似的化合物。
在本發(fā)明的用于測(cè)定鈣的試劑中，將2，7-雙[(4-氯-2-磷酸苯基)偶氮]-4，5-二羥基-2，7-萘二磺酸二鈉(偶氮氯膦-III)[1914-99-4]或與它類似的化合物用作能夠結(jié)合鈣離子以便發(fā)生可檢測(cè)的光學(xué)變化的指示劑。偶氮氯膦-III是具有以下結(jié)構(gòu)式的化合物或它的鹽。作為鹽，鈉鹽是優(yōu)選的。
所述類似化合物沒(méi)有特別的限制，只要它是，例如，具有以下構(gòu)架的化合物或它的鹽就行，它能與鈣離子結(jié)合產(chǎn)生顏色。
在上述化合物中，迄今已知的化合物包括3-[(4-氯-2-磷酸苯基)偶氮]-4，5-二羥基-2，7-萘二磺酸二鈉(偶氮氯膦-I)[1938-82-5]，3，3-[(乙酰苯基)偶氮]-6(4-氯-2-磷酸苯基)偶氮]-4，5-二羥基-2，7-萘二磺酸二鈉(偶氮氯膦-mA)[86167-87-5]以及它的鹽。作為鹽，鈉鹽是優(yōu)選的。
在本發(fā)明中，釩酸鹽離子與偶氮氯膦-III或它的類似化合物同時(shí)使用。釩酸鹽離子能夠有效作用于作為空白對(duì)照試劑的偶氮氯膦-III或類似的化合物，即，它們能有效發(fā)揮作用，以便抑制偶氮氯膦-III本身或它的類似化合物呈色。
盡管用于本發(fā)明的測(cè)定鈣的試劑中的釩酸鹽離子沒(méi)有特別的限制，只要它們適合本發(fā)明的目的就行，但包括諸如VO3-VO43-等的五價(jià)釩酸鹽離子是優(yōu)選的。當(dāng)上述釩酸鹽離子在實(shí)踐中使用時(shí)，從溶解度角度看，優(yōu)選以鹽的形式使用它們，如與堿金屬(例如，鋰，鈉，或鉀)形成的鹽，或銨鹽等。
盡管任何樣品都可以作為用本發(fā)明的用于測(cè)定鈣的試劑進(jìn)行測(cè)定的樣品，但來(lái)自活體的樣品是合適的，就是說(shuō)，所述試劑適合測(cè)定來(lái)自活體的樣品中的鈣。來(lái)自活體的樣品包括例如，血液樣品(例如，全血，血漿和血清)，來(lái)自活體的含水液體樣品(例如，腦脊髓液、淋巴，唾液，和尿液)，以及它們的稀釋劑。在本發(fā)明中，即使在將諸如含有諸如EDTA的螯合劑的血清用作來(lái)自活體的樣品時(shí)，也可以精確地測(cè)定所述樣品中的鈣。而在使用所述血清時(shí)，使用o-CPC的方法卻不能精確測(cè)定。因此，本發(fā)明的用于測(cè)定鈣的試劑，在可應(yīng)用于各種樣品方面同樣是有利的。
本發(fā)明的用于測(cè)定鈣的試劑沒(méi)有特別的限制，只要它是包括釩酸鹽離子和偶氮氯膦-III或它的類似化合物就行。作為所述試劑，包括兩種試劑的試劑(下面，在某些場(chǎng)合下稱之為“雙試劑系統(tǒng)”)是優(yōu)選的，因?yàn)榭蓪⑺糜谏锘瘜W(xué)自動(dòng)分析儀上。在本發(fā)明中，對(duì)于所述雙試劑系統(tǒng)來(lái)說(shuō)，它的第一種試劑優(yōu)選包括常用的緩沖劑(例如，乙酸鈉)和表面活性劑。所述雙試劑系統(tǒng)的第二種試劑包括偶氮氯膦-III作為必需成分，優(yōu)選包括常用的緩沖劑(例如，乙酸鈉)和表面活性劑，并且可以包括鹽(例如，氯化鈉)和防腐劑(例如，疊氮化鈉)。對(duì)于雙試劑系統(tǒng)來(lái)說(shuō)，從試劑的穩(wěn)定性角度來(lái)看，優(yōu)選將釩酸鹽離子摻入諸如偶氮氯膦-III的第二種試劑。
優(yōu)選對(duì)本發(fā)明的用于測(cè)定鈣的試劑進(jìn)行調(diào)節(jié)，以便用于使樣品與偶氮氯膦-III起反應(yīng)的液體的pH，例如，當(dāng)本發(fā)明的試劑由兩種試劑組合時(shí)，通過(guò)將第一種試劑和第二種試劑混合獲得的液體的pH可以優(yōu)選為3.5-7.5，更優(yōu)選4.5-6.5，特別優(yōu)選4.8-6.2。當(dāng)該液體的pH低于3.5時(shí)，在測(cè)定鈣時(shí)，樣品中的蛋白和偶氮氯膦-III傾向于彼此結(jié)合，因此難于精確地測(cè)定鈣。當(dāng)所述液體的pH超過(guò)7.5時(shí)，獲得了高的試劑空白值，或?qū)︽V產(chǎn)生了影響。因此，在某些場(chǎng)合下不能夠精確測(cè)定。所述雙試劑系統(tǒng)的第一種試劑和第二種試劑優(yōu)選分別具有2.0-9.0的pH。同樣在這種情況下，通過(guò)混合第一種試劑和第二種試劑獲得的液體的pH優(yōu)選為3.5-7.5。從偶氮氯膦-III和釩酸鹽離子的穩(wěn)定性角度考慮，第二種試劑的pH更優(yōu)選為7.5-9.0，特別是，7.7-8.5的pH。
當(dāng)在本發(fā)明中通過(guò)使用由兩種試劑，即第一種試劑和第二種試劑組成的用于測(cè)定的試劑測(cè)定鈣時(shí)，所使用的樣品，第一種試劑和第二種試劑之間的體積比例優(yōu)選為例如1∶(10-100)∶(2-25)。盡管它是根據(jù)所使用的自動(dòng)分析儀等而改變的。
下面，將解釋本發(fā)明的測(cè)定方法。本發(fā)明的用于測(cè)定鈣的方法的特征是，在有釩酸鹽離子的條件下，讓樣品中的鈣與偶氮氯膦-III或它的類似化合物起反應(yīng)。
在本發(fā)明中，作為在與鈣起反應(yīng)時(shí)的濃度(下面在某些場(chǎng)合下稱之為“最終濃度”)，偶氮氯膦-III的最終濃度優(yōu)選為，例如0.01-10mM，更優(yōu)選0.05-2mM，特別優(yōu)選0.1-0.7mM，不過(guò)，可以根據(jù)所使用的樣品的量等對(duì)該濃度進(jìn)行調(diào)整。當(dāng)所述濃度不夠時(shí)，在某些場(chǎng)合下偶氮氯膦-III不容易結(jié)合鈣。當(dāng)所述濃度太高時(shí)，獲得了高的空白值，因此，準(zhǔn)確測(cè)定是困難的。
對(duì)于釩酸鹽離子的濃度(mM)來(lái)說(shuō)，它們的最終濃度優(yōu)選為偶氮氯膦-III的濃度的1-300倍，更優(yōu)選3-200倍，特別優(yōu)選5-100倍。當(dāng)釩酸鹽離子的濃度太低時(shí)，在某些場(chǎng)合下獲得了高的空白值。
下面披露了通過(guò)使用用于測(cè)定鈣的由兩種試劑，即第一種試劑和第二種試劑組成的本發(fā)明的試劑測(cè)定血漿中鈣的具體例子。
將含有緩沖劑的第一種試劑和來(lái)自活體的樣品在特定溫度，優(yōu)選25-37℃下混合特定時(shí)間，例如，5分鐘。向所得到的液體中添加含有偶氮氯膦-III和釩酸鹽離子的第二種試劑，并且在特定溫度下，優(yōu)選25-37℃，將它們混合特定的時(shí)間，例如5分鐘，以便完成樣品中的鈣與偶氮氯膦-III的呈色反應(yīng)。測(cè)定了在由于偶氮氯膦-III而呈色之前和之后反應(yīng)溶液的吸光度值，并且計(jì)算由于著色而導(dǎo)致的吸光度值的改變。例如，來(lái)自活體的樣品中的鈣的濃度，可以通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較吸光度值的改變而測(cè)定。所述吸光度值通常可以在660nm波長(zhǎng)下測(cè)定。
當(dāng)通過(guò)使用用于本發(fā)明測(cè)定的試劑測(cè)定鈣時(shí)，可以使用生物化學(xué)自動(dòng)分析儀，如日立公司Model 7150，日立Model 7170S，或類似儀器。
下面將說(shuō)明本發(fā)明的用于螯合和產(chǎn)生顏色的試劑的空白控試劑。本發(fā)明的空白控試劑以含有釩酸鹽離子為特征。
偶氮氯膦-III等能結(jié)合諸如鈣離子的各種金屬離子，并因此能夠測(cè)定金屬離子。不過(guò)，偶氮氯膦-III的溶液本身是高度有色的溶液，并因此在測(cè)定金屬離子時(shí)產(chǎn)生高的樣品空白值。結(jié)果，存在窄的金屬離子測(cè)定范圍的問(wèn)題。釩酸鹽離子能將偶氮氯膦-III溶液的著色有效抑制在對(duì)照空白值上。因此，在通過(guò)使用偶氮氯膦-III或它的類似物測(cè)定諸如鈣離子的金屬離子時(shí)，可以將釩酸鹽離子用作偶氮氯膦-III或類似化合物的空白控試劑。
本發(fā)明的空白控試劑包括作為活性成分的釩酸鹽離子，當(dāng)諸如鎂，鋇，或鈣離子等的金屬離子在通過(guò)使用除了偶氮氯膦-III或它的類似化合物之外的螯合和產(chǎn)生顏色的試劑進(jìn)行測(cè)定時(shí)也可以使用，如二甲基砜偶氮(dimethylsulfonazo)-3，或偶氮胂-I等。為了在實(shí)踐中使用本發(fā)明的空白對(duì)照試劑，在本發(fā)明的用于測(cè)定鈣的上述方法中，在所述螯合和產(chǎn)生顏色的試劑與金屬離子起反應(yīng)時(shí)，添加釩酸鹽離子就足夠了。
實(shí)施例1和比較實(shí)施例1-4在有釩酸鹽離子的情況下用偶氮氯膦-III進(jìn)行鈣測(cè)定1.方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以便判斷在有釩酸鹽離子的情況下，來(lái)自活體樣品中的鈣是否能用偶氮氯膦-III(在某些場(chǎng)合下稱之為CPZ-3)精確地測(cè)定。將在有釩酸鹽離子的情況下獲得的測(cè)定結(jié)果，與在有鎢酸鈉，硫酸錳(II)，硫酸銅(II)和沒(méi)有金屬離子的情況下獲得的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。
作為樣品，第一種試劑和第二種試劑，使用了以下樣品和試劑。
樣品樣品來(lái)自活體，并且含有7.9mg/dL的鈣(通過(guò)使用o-CPC方法測(cè)定的值)。
第一種試劑磷酸二氫鈉50mM，pH6.0表面活性劑1.0％第二種試劑偶氮氯膦-III(CPZ-3)1.25mM氯化鈉150mM釩酸銨40mM表面活性劑1.0％比較實(shí)施例如下。在比較實(shí)施例1中沒(méi)有添加金屬離子。在比較實(shí)施例2中，添加了40mM的鎢酸鈉。在比較實(shí)施例3中，添加了40mM的硫酸錳(II)。在比較實(shí)施例4中，添加了40mM的硫酸銅(II)。
測(cè)定方法如下。使用自動(dòng)分析儀日立Model 7170S，在37℃下混合2.5μl的樣品和200μl的第一種試劑5分鐘，向得到的液體中添加50μl的第二種試劑，并且在相同溫度下進(jìn)行5分鐘的著色反應(yīng)。在660nm的顯性波長(zhǎng)下，測(cè)定著色反應(yīng)之前和之后的吸光度值差異。通過(guò)以下公式計(jì)算鈣濃度 公式1EAbs測(cè)定的吸光度值E空白空白溶液的吸光度值ESTD標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值STD濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度2.結(jié)果表1表示所獲得的結(jié)果。
表1
根據(jù)表1中的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)在有釩酸鹽離子的條件下，來(lái)自活體的樣品中的鈣能夠通過(guò)與CPZ-3起反應(yīng)精確地測(cè)定。還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)所述測(cè)定是通過(guò)不添加金屬或者在有其它金屬而不是釩離子的情況下進(jìn)行時(shí)，不能夠精確地測(cè)定鈣。在有釩酸鹽離子的情況下，CPZ-3與釩酸鹽離子形成了螯合復(fù)合物，以便改變接近660nm波長(zhǎng)下的吸光度值。由此形成的CPZ-3和釩酸鹽離子的螯合復(fù)合物，抑制了CPZ-3與蛋白的非專一性反應(yīng)。另外，由于CPZ-3對(duì)Ca的專一性，比對(duì)釩酸鹽離子的專一性高，CPZ-3能夠在有釩酸鹽離子的情況下精確地測(cè)定Ca。另一方面，在不添加金屬離子的情況下，在測(cè)定來(lái)自活體的樣品中的鈣時(shí)，會(huì)發(fā)生CPZ-3與來(lái)自活體的樣品中的蛋白的非專一性反應(yīng)，因此提高了吸光度值，從而導(dǎo)致陽(yáng)性誤差。在有任何其他添加的金屬的情況下，CPZ-3和添加的金屬的螯合復(fù)合物抑制了Ca與CPZ-3的反應(yīng)，因此，不能夠計(jì)算準(zhǔn)確的鈣含量。以上事實(shí)表明，CPZ-3與每一種成分的結(jié)合強(qiáng)度如下Cu2+＞Ca2+＞VO3-＞蛋白＞W(wǎng)O42-，Mn2+例2研究反應(yīng)溶液中的pH通過(guò)在有釩酸鹽離子的條件下將發(fā)生螯合反應(yīng)的液體調(diào)整到各種不同的pH(pH4.0，5.0和6.0)，測(cè)定血清中的鈣。作為樣品，第一種試劑和第二種試劑，使用了以下成分樣品樣品來(lái)自活體，并且含有7.6mg/dL的鈣。
第一種試劑甘氨酸100mM(當(dāng)pH4.0時(shí))或乙酸鈉100mM(當(dāng)pH5.0或6.0時(shí))表面活性劑1.0％第二種試劑CPZ-3 1.25mM氯化鈉 150mM釩酸銨 40mM表面活性劑1.0％表2表示所獲得的結(jié)果表2
根據(jù)表2所示出的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)特別是在pH5.0或6.0的條件下進(jìn)行所述反應(yīng)，對(duì)于鈣的測(cè)定來(lái)說(shuō)是特別優(yōu)選的。
例3和比較實(shí)施方案5-7測(cè)定來(lái)自活體的并且含有EDTA的樣品中的鈣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以便判斷來(lái)自活體并且含有EDTA(螯合劑)的樣品中的鈣是否能夠在有釩酸鹽離子的條件下，通過(guò)它與一種螯合和產(chǎn)生顏色的試劑-CPZ-3起反應(yīng)而精確地測(cè)定。
在比較實(shí)施例5中，所述測(cè)定是在有鎢酸鹽離子的情況下進(jìn)行的。在比較實(shí)施例6中，所述測(cè)定是在沒(méi)有添加金屬離子的條件下進(jìn)行的。作為比較實(shí)施例7，檢驗(yàn)了使用甲酚肽絡(luò)合酮(o-CPC)并且不添加金屬離子的方法，它是用于測(cè)定鈣的一般方法。用于測(cè)定的第一種試劑和第二種試劑的組成如下樣品樣品來(lái)自活體并且含有EDTA(0，7.5或15mM)，并且鈣的含量為7.6mg/dL。
第一種試劑磷酸二氫鈉 50mM pH5.0表面活性劑 1.0％第二種試劑CPZ-3 1.25mM氯化鈉 150mM各種類型的金屬離子 40mM表面活性劑 1.0％表3示出了所獲得的結(jié)果，即鈣的測(cè)定值和相對(duì)值[(測(cè)定值×100)/實(shí)際含量]表3通過(guò)添加EDTA測(cè)定鈣濃度(確切含量7.6mg/dL)
從表3中的結(jié)果可以看出，在有釩酸鹽離子的情況下，來(lái)自活體的并且含有EDTA的樣品中的鈣可以通過(guò)它與CPZ-3的反應(yīng)精確地測(cè)定。另一方面，發(fā)現(xiàn)在用鎢酸鹽離子取代釩酸鹽離子的情況下，不能夠精確地測(cè)定鈣。另外，在不添加釩酸鹽離子的情況下，通過(guò)采用CPZ-3的方法和采用o-CPC的方法(常規(guī)方法)不能測(cè)定鈣。
本發(fā)明的用于測(cè)定鈣的試劑和測(cè)定方法具有以下優(yōu)點(diǎn)所述試劑即使是在長(zhǎng)時(shí)間保存時(shí)也是穩(wěn)定的，并且不會(huì)出現(xiàn)毒性問(wèn)題，并且所述試劑和方法能夠準(zhǔn)確并且快速地測(cè)定大量樣品中的鈣，在用于臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的診斷藥物領(lǐng)域是非常有效的。
權(quán)利要求
1.一種用于測(cè)定鈣的試劑，包括釩酸鹽離子和偶氮氯膦-III或與它類似的化合物。
2.如權(quán)利要求1的用于測(cè)定鈣的試劑，它是用于測(cè)定來(lái)自活體的樣品中的鈣的試劑，它可能含有螯合劑。
3.如權(quán)利要求1或2的用于測(cè)定鈣的試劑，對(duì)它進(jìn)行調(diào)整，以便所述試劑與樣品起反應(yīng)的反應(yīng)溶液的pH可以為3.5-7.5。
4.如權(quán)利要求1-3中任意一項(xiàng)的用于測(cè)定鈣的試劑，它是雙試劑系統(tǒng)，由包括緩沖劑和選擇性地包括表面活性劑的第一種試劑，和包括釩酸鹽離子和偶氮氯膦-III或與它類似的化合物的第二種試劑組成。
5.如權(quán)利要求4的用于測(cè)定鈣的試劑，對(duì)它進(jìn)行調(diào)整，以便通過(guò)混合所述第一種試劑和第二種試劑所獲得的液體的pH可以為3.5-7.5。
6.一種用于測(cè)定樣品中的鈣的方法，其特征在于在有釩酸鹽離子的情況下，讓所述樣品中的鈣與偶氮氯膦-III或與它類似的化合物起反應(yīng)，并且根據(jù)由于所述反應(yīng)產(chǎn)物導(dǎo)致的光學(xué)變化測(cè)定所述樣品中的鈣。
7.如權(quán)利要求6的測(cè)定方法，其中，所述樣品是來(lái)自活體的樣品，它可能含有螯合劑。
8.如權(quán)利要求6或7的測(cè)定方法，其中，所述樣品中的鈣與偶氮氯膦-III或與它類似的化合物起反應(yīng)時(shí)的pH為3.5-7.5。
9.一種用于螯合和產(chǎn)生顏色的試劑的空白對(duì)照試劑，其被用于根據(jù)由螯合和產(chǎn)生顏色的試劑與金屬離子的反應(yīng)所導(dǎo)致的光學(xué)變化測(cè)定金屬離子，該試劑包括能夠抑制所述螯合和產(chǎn)生顏色的試劑本身著色的作為活性成分的釩酸鹽離子。
10.如權(quán)利要求9的空白對(duì)照試劑，其中，所述螯合和產(chǎn)生顏色的試劑是偶氮氯膦-III或與它類似的化合物。
11.如權(quán)利要求9或10的空白對(duì)照試劑，它被用于測(cè)定鈣。
全文摘要
一種用于測(cè)定來(lái)自活體的樣品中的鈣的方法，包括在有釩酸鹽離子的條件下，讓所述樣品中的鈣與偶氮氯膦－III或與它類似的化合物起反應(yīng)，然后根據(jù)由所述反應(yīng)產(chǎn)物導(dǎo)致的光學(xué)變化，測(cè)定所述樣品中的鈣，該方法在以下各個(gè)方面都是出色的它不存在由于高pH導(dǎo)致的吸收碳酸氣體的問(wèn)題；它不存在使用含有胂的有毒試劑的問(wèn)題；它能夠在短時(shí)間內(nèi)對(duì)大量樣品進(jìn)行測(cè)定，因?yàn)榭蓪⑺鼞?yīng)用在自動(dòng)分析儀上；并且它具有大的測(cè)定范圍，因?yàn)榫哂械偷臉悠房瞻字怠?br> 文檔編號(hào)G01N33/50GK1719235SQ200510083250
公開(kāi)日2006年1月11日 申請(qǐng)日期2005年7月7日 優(yōu)先權(quán)日2004年7月8日
發(fā)明者野田健太, 小島良, 片山勝博 申請(qǐng)人:日東紡績(jī)株式會(huì)社