專利名稱：液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)含洛伐他汀菌體粉的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種菌種粉體的制備方法，尤其涉及一種液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)含1.2％洛伐他汀菌體粉的方法。
背景技術(shù)：
紅曲霉是用于生產(chǎn)紅曲酒和紅曲色素的主要菌種在中國已有上千年的歷史《本草綱目)》、《獸醫(yī)本章)》、《天工開物)》等著作中對其發(fā)酵物紅曲的食品著色，食品防腐及藥物醫(yī)療方面的應(yīng)用已有加載。1979年日本遠藤章教授從紅色紅曲霉中分離出膽固醇合成抑制劑后，紅曲霉的功能及應(yīng)用受到國內(nèi)外廣泛關(guān)注，得到了全面深入的研究，日本已有多家食品公司投入大量人力物力進行紅曲保健食品的開發(fā)上市的產(chǎn)品能夠降血脂很受歡迎而對于紅曲的發(fā)明者我國卻未見紅曲保健食品占有優(yōu)勢。功能性紅曲產(chǎn)品在我國只有福建、浙江、河北等幾處有生產(chǎn)，另外北京的血脂康、成都的脂必妥等由紅曲霉發(fā)酵制成的紅曲作為降血脂藥物也占有一定市場。但總的來說，功能性紅曲產(chǎn)品所占市場份額并不大，紅曲霉菌產(chǎn)生的洛伐他汀對降血脂作用很大而且沒有副作用，而我國現(xiàn)在生產(chǎn)的功能性紅曲還是用曲盤或通風(fēng)制曲的古老方法，勞動強度大，產(chǎn)品易污染，產(chǎn)品含洛伐他汀低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種制備液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)含1.2％洛伐他汀菌體粉的方法，該方法具有生產(chǎn)工藝簡單易行，產(chǎn)品純度和產(chǎn)品的保健效果明顯等效果。
本發(fā)明是選擇幾十株紅曲霉菌經(jīng)過分離、篩選，得到一株產(chǎn)洛伐他汀較高的紅色紅曲霉再經(jīng)過紫外線和鈷60(Co60)反復(fù)照射進行誘變。得到一株高產(chǎn)洛伐他汀的紅色紅曲霉的誘變菌株T-180。
申請人已于2004年5月19日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其簡稱為CGMCC，保藏編號為1148。中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(其簡稱為CGMCC)的地址為北京市海淀區(qū)中關(guān)村北一條13號，中國科學(xué)院微生物研究所(100080)。
該高產(chǎn)洛伐他汀的紅色紅曲霉的誘變菌株T-180分類命名為屬于紅色紅曲霉菌種。
本發(fā)明利用該該菌制成的紅曲霉菌體粉含洛伐他汀的含量為1.2％，遠遠高于目前我國的功能紅曲洛伐他汀的含量，而且我是采用全套密封自動控制液體深層發(fā)酵的生產(chǎn)，純度高，生產(chǎn)穩(wěn)定，不易污染的現(xiàn)代生產(chǎn)工藝。
本發(fā)明是采用我自己誘變的一株高產(chǎn)洛伐他汀的紅色紅曲霉誘變菌株T-180經(jīng)斜面培養(yǎng)一級搖瓶培養(yǎng)，二級搖瓶培養(yǎng)，再經(jīng)種子罐培養(yǎng)，再到發(fā)酵罐培養(yǎng)經(jīng)磨漿，均質(zhì)噴霧干燥成粉，即含1.2％洛伐他汀紅曲霉菌體粉為粉紅色，用制造各種降血脂的藥品和食品。
本發(fā)明紅曲霉菌體粉的生產(chǎn)共分菌種生產(chǎn)和發(fā)酵兩部分一、菌種生產(chǎn)1、斜面純種的制備①、斜面培養(yǎng)基的制備麥芽汁100毫升，瓊脂3克，調(diào)PH4.2-4.5，加熱瓊脂充分溶解后分裝試管塞好棉塞1公斤/30分滅菌后擺成斜面待用；②、斜面純種的制備將制好斜面培養(yǎng)基在無菌條件下，接入紅色紅曲霉純種在32℃±1培養(yǎng)10-15天待用。
2、搖瓶種子的制備①、一級搖瓶種子的制備a、種子培養(yǎng)基的制備大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米漿1％，麥芽糖1％，氨基酸0.1％，磷酸二氫鉀0.25％，硫酸鎂0.1％，PH4.2-5大米粉充分糊化后分裝到500毫升三角瓶內(nèi)，裝液量80毫升，1公斤/30分滅菌后冷卻待用。
b、一級搖瓶種子的制備將制備好的500毫升(三角瓶培養(yǎng)液在無菌條件下接入純種，塞好棉塞放在32℃±1的恒溫搖床，轉(zhuǎn)數(shù)300轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24小時待用。
②、二級搖瓶種子的制備a、種子培養(yǎng)基的制備大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米漿1％，氨基酸0.1％，麥芽糖1％，磷酸二氫鉀0.25％，硫酸鎂0.1％，PH4.2-5大粉米充分糊化后分裝在2000毫升瓶內(nèi)，裝液量為300毫升，1公斤/30分滅菌后冷卻待用。
b、二級搖瓶種子的制備，在無菌條件下將培養(yǎng)好一級種液按6％的接種量接入2000毫升三角瓶的培養(yǎng)基中，塞好棉塞，放在32℃±1的恒溫搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)數(shù)300轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24小時待用。
C、將培養(yǎng)好二級搖瓶種子在無菌條件下倒入接種瓶中待用。
二、發(fā)酵1、50升種子罐的培養(yǎng)①、種子培養(yǎng)基大米粉5％，麥芽糖1％，玉米漿1％，氨基酸0.1％，蛋白胨1.5％，磷酸氨二鉀0.2％，硫酸鎂0.1％，調(diào)整PH值4.2-5；②、裝液量70％，控制裝入量為35公斤培養(yǎng)基，殺菌1公斤/30分；③、接種溫度45℃，按6％接種量將接種，并用壓力差法接入搖瓶種子；④、罐壓0.1MPA攪拌轉(zhuǎn)數(shù)380轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)比為1∶0.7；⑤、培養(yǎng)溫度32℃±1；⑥、培養(yǎng)時間24小時。
2、500升發(fā)酸罐的培養(yǎng)；①、發(fā)酸培養(yǎng)基大米粉7％，麥芽糖1.5％，玉米漿1.5％，蛋白胨2％，磷酸二氫鉀0.2％，硫酸鎂0.1％，PH4.2-5，殺菌1公斤/30分；②、裝液量70％為350公斤，接種溫度45℃；③、接種量按6％接種，壓力差法將培養(yǎng)好的種子接入發(fā)酵罐；④、培養(yǎng)溫度32℃，通氣量為1∶0.7，控制PH5.2-5.5，罐壓0.1MPA；⑤、培養(yǎng)時間7天(168小時)攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為320轉(zhuǎn)/分；3、磨漿將培養(yǎng)好的發(fā)酵液用膠體磨，磨2次細度為120目。
4、均質(zhì)將磨好的紅曲霉發(fā)酵液經(jīng)均質(zhì)機均質(zhì)，均質(zhì)，均質(zhì)后細度300目。
5、干燥將均質(zhì)好的紅曲霉發(fā)酵液用噴霧干燥機進口溫度130℃，出口溫度62℃，噴霧干燥成粉，即得到含洛伐他汀1.2％紅曲霉菌體粉。
本發(fā)明含洛伐他汀紅曲霉菌體粉的制造方法是目前我國生產(chǎn)含洛伐他汀紅曲獨有生產(chǎn)方法，生產(chǎn)出紅曲菌體粉含洛伐他汀1.2％，該方法生產(chǎn)含洛伐他汀紅曲霉體粉全部自己控制密封生產(chǎn)，不污染，雜質(zhì)少，易控制，勞動強度小，洛伐他汀含量高。制成的降血脂的保健食品效果好。
具體實施例方式本發(fā)明提供的紅曲霉菌體粉的生產(chǎn)的具體實施方法共分五部分1、紅曲霉斜面純種培養(yǎng)。
2、一、二級搖瓶種子的培養(yǎng)。
3、紅曲霉種子罐的培養(yǎng)。
4、紅曲霉發(fā)酵的培養(yǎng)；5、磨漿、勻質(zhì)到噴霧干燥成粉即成品——含1.2％洛伐他汀的紅曲霉體粉。
下面我們通過具體的實施辦法詳細描述本發(fā)明1、斜面純種的培養(yǎng)①斜面培養(yǎng)基的制備將麥芽汁100毫升，瓊脂3克混合，將PH值調(diào)正到3.5，加熱，使瓊脂充分溶解后分裝試管塞好棉塞1公斤/30分滅菌后擺成斜面待用；②斜面純種的制備將上述制好斜面培養(yǎng)基在無菌條件下，接入紅色紅曲霉純種在32℃±1培養(yǎng)15天待用。
2、搖瓶種子的制備①一級搖瓶種子的制備a、種子培養(yǎng)基的制備按照如下成分和比例以及方法進行配制該種子培養(yǎng)基大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米漿1％，麥芽糖1％，氨基酸0.1％，磷酸二氫鉀0.25％，硫酸鎂0.1％，將PH值4.5的大米粉充分糊化后，分裝到500毫升三角瓶內(nèi)，裝液量為80毫升，1公斤/30分滅菌后冷卻待用；b、一級搖瓶種子的制備
將制備好的培養(yǎng)液在500毫升三角瓶中，無菌條件下接入純種，塞好棉塞放在32℃±1的恒溫搖床，轉(zhuǎn)數(shù)300轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24小時待用。
②、二級搖瓶種子的制備a、種子培養(yǎng)基的制備按照如下成分和比例以及方法進行配制該種子培養(yǎng)基大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米漿1％，氨基酸0.1％，麥芽糖1％，磷酸二氫鉀0.25％，硫酸鎂0.1％，將PH值4.5的大粉米充分糊化后分裝在2000毫升三角瓶內(nèi)，裝液量為300毫升，1公斤/30分滅菌后冷卻待用；b、二級搖瓶種子的制備在無菌條件下將培養(yǎng)好一級種液按6％的接種量接入2000毫升三角瓶的培養(yǎng)基中，塞好棉塞，放在32℃±1的恒溫搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)數(shù)300轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24小時待用；C、將培養(yǎng)好二級搖瓶種子在無菌條件下倒入接種瓶中，待用；發(fā)酵過程1、50升種子罐的培養(yǎng)①、種子培養(yǎng)基的配方大米粉5％，麥芽糖1％，玉米漿1％，氨基酸0.1％，蛋白胨1.5％，磷酸氨二鉀0.2％，硫酸鎂0.1％，將PH值調(diào)整為4.5；具體的操作方法為②、裝液量70％，裝入35公斤培養(yǎng)基；殺菌1公斤/30分；
③、接種溫度控制在45℃左右，按6％接種量進行接種，并用常規(guī)壓力差法接入搖瓶種子；④、罐壓控制在0.1MPA左右，同時進行攪拌，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)380轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)比為1∶0.7；⑤、培養(yǎng)溫度控制在32℃左右；⑥、培養(yǎng)時間為24小時；2、500升發(fā)酸罐的培養(yǎng)①、發(fā)酸培養(yǎng)基的配方為大米粉7％，麥芽糖1.5％，玉米漿1.5％，蛋白胨2％，磷酸二氫鉀0.2％，硫酸鎂0.1％，調(diào)整PH值4.5，殺菌1公斤/30分；②、裝液量70％，大約控制在350公斤，接種溫度45℃；③、壓力差法將培養(yǎng)好的種子接入發(fā)酵罐，將種子罐培養(yǎng)的種子按接種量6％的比例進行接種；④、培養(yǎng)溫度32℃，通氣量為1∶0.7，控制PH5.2-5.5左右，罐壓控制在0.1MPA左右；⑤、培養(yǎng)時間7天(168小時)，攪拌轉(zhuǎn)數(shù)為320轉(zhuǎn)/分。
3、磨漿將培養(yǎng)好的發(fā)酵液用膠體磨，磨2次，細度為120目。
4、均質(zhì)將磨好的紅曲霉發(fā)酵液經(jīng)均質(zhì)機均質(zhì)，均質(zhì)，均質(zhì)后細度300目。
5、干燥將均質(zhì)好的紅曲霉發(fā)酵液用噴霧干燥機進口溫度130℃，出口溫度62℃，噴霧干燥成粉，即得到含洛伐他汀1.2％紅曲霉菌體粉。
權(quán)利要求
1.一種液體深層發(fā)酵法生產(chǎn)含1.2％洛伐他汀菌體粉的方法，其特征在于該方法是采用一株高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲紅曲霉誘變菌株T-180，經(jīng)菌種純種培養(yǎng)、搖瓶種子培養(yǎng)、種子罐培養(yǎng)、發(fā)酵培養(yǎng)、磨漿均質(zhì)、噴霧干燥方法制備含洛伐他汀1.2％紅曲霉菌體粉。
2.如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)含1.2％洛伐他汀菌體粉的方法，其特征在于所述菌種培養(yǎng)的方法為1、斜面純種的制備①、斜面培養(yǎng)基的制備麥芽汁100毫升，瓊脂3克，調(diào)PH4.2-4.5，加熱瓊脂充分溶解后分裝試管，塞好棉塞，1公斤/30分滅菌后擺成斜面待用；②、菌種純種的培養(yǎng)將制好斜面培養(yǎng)基在無菌條件下，接入紅曲紅曲霉純種，在32℃±1培養(yǎng)10-15天，待用。
3.如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)含1.2％洛伐他汀菌體粉的方法，其特征在于所述搖瓶種子培養(yǎng)的方法為①、一級搖瓶種子的制備；a、種子培養(yǎng)基的制備大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米漿1％，麥芽糖1％，氨基酸0.1％，磷酸二氫鉀0.25％，硫酸鎂0.1％，PH4.2-5大米粉充分糊化后分裝到500毫升容器內(nèi)，裝液量80毫升，1公斤/30分滅菌后冷卻待用；b、一級搖瓶種子的制備將制備好的500毫升培養(yǎng)液在無菌條件下接入純種，在32℃±1的恒溫搖床，轉(zhuǎn)數(shù)300轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24小時待用；②、二級搖瓶種子的制備；a、種子培養(yǎng)基的制備大米粉5％，蛋白胨1.5％，玉米漿1％，氨基酸0.1％，麥芽糖1％，磷酸二氫鉀0.25％，硫酸鎂0.1％，PH4.2-5大粉米充分糊化后分裝在2000毫升容器內(nèi)，裝液量為300毫升，1公斤/30分滅菌后冷卻待用；b、二級搖瓶種子的制備，在無菌條件下將培養(yǎng)好一級種液按6％的接種量接入2000毫升的培養(yǎng)基中，在32℃±1的恒溫搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)數(shù)300轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)24小時待用；C、將培養(yǎng)好二級搖瓶種子在無菌條件下接種待用。
4.如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)含1.2％洛伐他汀菌體粉的方法，其特征在于所述種子罐培養(yǎng)的方法為1、50升種子罐的培養(yǎng)；①、種子培養(yǎng)基大米粉5％，麥芽糖1％，玉米漿1％，氨基酸0.1％，蛋白胨1.5％，磷酸氨二鉀0.2％，硫酸鎂0.1％，PH4.2-5；②、裝液量70％，裝入35公斤培養(yǎng)基殺菌1公斤/30分；③、接種溫度45℃，按6％接種量將接種，并用壓力差法接入搖瓶種子；④、罐壓0.1MPA攪拌轉(zhuǎn)數(shù)380轉(zhuǎn)/分，通風(fēng)比為1∶0.7；⑤、培養(yǎng)溫度32±1℃；⑥、培養(yǎng)時間24小時；2、50升發(fā)酸罐的培養(yǎng)；發(fā)酵液的配方PH4.2-4.5大米粉7％，麥芽粉1.5％，玉米漿1.5％，蛋白胨2％，磷酸二氫鉀0.2％，硫酸鎂0.1％；(1)、其培養(yǎng)方法為①、裝液量70％，殺菌1公斤/30分鐘；②、壓力差法將二級搖瓶種子接入，接種量6％；③、接種溫度45℃；④、培養(yǎng)溫度35±1℃；⑤、通風(fēng)量1∶0.6；⑥、電動機轉(zhuǎn)數(shù)380轉(zhuǎn)/分；⑦、罐壓0.1MPA；⑧、培養(yǎng)時間24小時；(2)、發(fā)酵罐的培養(yǎng)條件①、裝液量70％；②、接種溫度45℃；③、壓力差法將種子罐的種子接入，接種量6％；④、通風(fēng)量1∶0.6；⑤、培養(yǎng)溫度35℃±1；⑥、控制PH5.2-5.5；⑦、電動機轉(zhuǎn)數(shù)320轉(zhuǎn)/分；⑧、罐壓0.1MPA；⑨、培養(yǎng)時間168小時；
5.如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)含1.2％洛伐他汀菌體粉的方法，其特征在于所述磨漿的方法為將培養(yǎng)好的發(fā)酵液用膠體磨，磨2次細度為120目。
6.如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)含1.2％洛伐他汀菌體粉的方法，其特征在于所述均質(zhì)的方法為將磨好的紅曲霉發(fā)酵液經(jīng)均質(zhì)機均質(zhì)，均質(zhì)，均質(zhì)后細度300目。
7.如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)含1.2％洛伐他汀菌體粉的方法，其特征在于所述干燥的方法為將均質(zhì)好的紅曲霉發(fā)酵液用噴霧干燥機進口溫度130℃，出口溫度62℃，噴霧干燥成粉，即含洛伐他汀1.2％紅曲霉菌體粉。
全文摘要
本發(fā)明是通過一珠高產(chǎn)洛伐他汀的紅曲紅曲霉誘變菌T－180經(jīng)液體深層發(fā)酵得到紅曲霉菌體粉含有洛伐他汀(含洛伐他汀1.2％)，可以用來制成各種降血脂的食品和藥品。紅曲霉菌體粉生產(chǎn)分以下五步①斜面純種；②兩級搖瓶種子；③種子罐培養(yǎng)；④發(fā)酵罐發(fā)酵培養(yǎng)；⑤紅曲霉菌體經(jīng)磨漿，均質(zhì)，噴霧干燥即得到含洛伐他汀1.2％的紅曲菌體粉。該方法工藝簡單，反應(yīng)參數(shù)容易控制，密封生產(chǎn)，不易污染，菌體純度大，勞動強度低，產(chǎn)品質(zhì)量好，含洛伐他汀高。
文檔編號C12N1/14GK1580272SQ20041003829
公開日2005年2月16日 申請日期2004年5月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月21日
發(fā)明者王衛(wèi)民, 曹云龍 申請人:湖北化纖集團有限公司