一種百合培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物栽培領(lǐng)域，尤其涉及一種百合培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人們對(duì)百合日益增長(zhǎng)的消費(fèi)需求，國(guó)內(nèi)對(duì)百合種植的研宄也越來越深入與廣 泛。通過對(duì)百合種球的處理及設(shè)施栽培，使得原本只能秋植的百合一年四季皆可種植與開 花。傳統(tǒng)的百合栽培，以地栽為主，由于封粘重易板結(jié)，容易滋生各種土傳病，不利于百合生 長(zhǎng)，進(jìn)而嚴(yán)重影響了百合的品質(zhì)，盡管每年都要對(duì)封進(jìn)行消毒與改良，但效果不明顯。百合 忌連作，種植過百合的土壤，通常要間隔四年左右再種植，才能保證百合的相對(duì)品質(zhì)，對(duì)于 專業(yè)業(yè)種植百合者來說，土地利用率太低。因此，開發(fā)選擇一種百合快速繁育種球，不受土 地資源限制的栽培方法及其應(yīng)用方法，對(duì)于滿足人們?nèi)找嬖鲩L(zhǎng)的百合消費(fèi)需求，提高百合 種球繁育，緩解土地資源壓力和種球需求，具有重大意義。
[0003] 傳統(tǒng)的百合繁殖方法主要采用常規(guī)分球、分珠芽鱗片扦插、鱗片包埋等。但采用這 些方法繁殖，繁殖系數(shù)較小不能滿足大面積生產(chǎn)對(duì)種苗的需求，特別是經(jīng)多代分殖以后，常 造成種性退化，甚至病毒積累，影響百合的產(chǎn)量和質(zhì)量。利用組織培養(yǎng)技術(shù)，能夠迅速去除 病毒和更新品種，加快了百合的快速繁殖速度，縮短了百合的生育周期。在百合雜交育種 中也存在著基因庫(kù)貧乏、種間雜交不親和等局限性，而組織培養(yǎng)技術(shù)則可克服這些弊端。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種百合培養(yǎng)方法，旨在解決傳統(tǒng)的百合栽培方法土地利 用率低，容易造成種性退化和病毒積累的問題。
[0005] 本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種百合培養(yǎng)方法包括百合胚無(wú)菌培養(yǎng)方法、百合快速組 培方法、百合黑暗變溫立體育種方法；
[0006] 所述百合胚無(wú)菌培養(yǎng)方法以百合幼胚為外植體在無(wú)菌條件下進(jìn)行胚的離體培養(yǎng)， 觀察不同百合胚的萌發(fā)和生長(zhǎng)情況，并選出適合百合胚在無(wú)菌條件下萌發(fā)\增殖和生根的 培養(yǎng)基；
[0007] 所述百合快速組培方法采用鱗片作為外植體進(jìn)行誘導(dǎo)后再進(jìn)行初代培養(yǎng)，將生長(zhǎng) 最好的愈傷組織切割成適當(dāng)大小，移栽到最適培養(yǎng)基中，繼代培養(yǎng)后移栽組培苗；
[0008] 所述百合黑暗變溫立體育種方法將從鱗莖上剝?nèi)〉镊[片放到培養(yǎng)箱里，洗凈除菌 處理后，置于暗光中，在變溫條件下培養(yǎng)。
[0009] 進(jìn)一步，所述百合胚無(wú)菌培養(yǎng)方法將不同品種的百合和在不同劑量的培養(yǎng)基中無(wú) 菌培養(yǎng)，具體包括：
[0010] 步驟一、胚培養(yǎng)：取授粉后的蒴果，在無(wú)菌條件下用75%酒精棉球擦拭表面，再用 〇. 1 %的升汞溶液浸泡15min，然后再用無(wú)菌水沖洗；在無(wú)菌接種箱里將蒴果切開，選取有 胚種子剝?nèi)》N胚，接種到培養(yǎng)基MS+6-BA0. lmg/L+NAAO. 2mg/L上，放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)；
[0011] 步驟二、增殖培養(yǎng)：在無(wú)菌條件下，將胚培養(yǎng)所得幼苗的鱗片剝離，移 植到MS+NAAO. Olmg/L+6-BAO~1.0 mg/L的增殖培養(yǎng)基上，6~BA濃度分別為 0\0. 25\0. 5\0. 75\1. Omg/L.
[0012] 步驟三、生根培養(yǎng)：將所得種苗接種在MS+6-BA1. Omg/L+2. 4-DO. 5mg/L+NAA0~ I. 〇mg/L的生根培養(yǎng)基上，NAA的濃度分別為0\0. 2\0. 5\0. 75\1. Omg/L，分為加質(zhì)量比 0.1 %的活性炭與不加活性炭?jī)煞N情況。
[0013] 進(jìn)一步，所述百合快速組培方法中的繼代培養(yǎng)包括：
[0014] 步驟一、叢生芽的誘導(dǎo)：將繼代培養(yǎng)后的愈傷組織接種到不同配比初代培養(yǎng)基上 進(jìn)行培養(yǎng)；
[0015] 步驟二、增殖繼代培養(yǎng)：取培養(yǎng)出來的初生代叢生芽，將莖切成數(shù)段，接種到繼代 培養(yǎng)基上，待腋芽萌發(fā)，并于切口處膨大形成愈傷組織，培養(yǎng)若干天；
[0016] 步驟三、生根培養(yǎng)：將叢生芽切割下來，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，接種在MS+NAAO. 5mg/ L或ΙΒΑ0. 5mg/L的培養(yǎng)基中。
[0017] 進(jìn)一步，百合快速組培方法中，培養(yǎng)基是以MS為基本培養(yǎng)基，附加不同激素構(gòu)成 的；誘導(dǎo)和分化培養(yǎng)基，附加白糖30g/L，生根培養(yǎng)基附加白糖20g/L，優(yōu)選0. lmg/1 NAA和 1. 0mg/l的BA單獨(dú)或混合使用。
[0018] 進(jìn)一步，百合快速組培方法中，根據(jù)MS培養(yǎng)基中元素分類，分為以下四種母液：
[0019] 母液 I :NH4N03、KN03、CaCl2 · 2H20、MgSO4 · 7H20、KH2PO4;
[0020] 母液 II :KI、H3BO3' MnSO4 · 4H20、ZnSO4 · 7H20、Na2MoO4 · 2H20、CuSO4 · 5H20、 CoCl2 · 6H20 ;
[0021] 母液III :FeS04 · 7H20、Na2-EDTA · 2H20 ;
[0022] 母液IV :肌醇、煙酸、鹽酸吡哆醇、鹽酸硫胺素、甘氨酸。
[0023] 進(jìn)一步，母液I、母液II及母液IV的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢 后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容；
[0024] 母液III的配制方法是：將稱好的FeSO4 · 7H20和Na2-EDTA · 2H20分別放到蒸餾水 中，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙猓缓髮煞N溶液混合，并將pH調(diào)至5. 5,最后定容。
[0025] 使用百合黑暗變溫立體育種方法能夠減短種球的形成時(shí)間，利用組織培養(yǎng)技術(shù)， 能夠迅速去除病毒和更新品種，加快了百合的快速繁殖速度，縮短了百合的生育周期，通 過對(duì)胚的無(wú)菌培養(yǎng)，能有效的縮短百合種籽的培育周期。
【附圖說明】
[0026] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例提供的百合胚無(wú)菌培養(yǎng)方法流程圖；
[0027] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例提供的百合快速組培方法流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0028] 為能進(jìn)一步了解本發(fā)明的
【發(fā)明內(nèi)容】
、特點(diǎn)及功效，茲例舉以下實(shí)施例，并配合附圖 詳細(xì)說明如下。
[0029] 本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種百合培養(yǎng)方法包括百合胚無(wú)菌培養(yǎng)方法、百合快速組 培方法、百合黑暗變溫立體育種方法；
[0030] 所述百合胚無(wú)菌培養(yǎng)方法以百合幼胚為外植體在無(wú)菌條件下進(jìn)行胚的離體培養(yǎng)， 觀察不同百合胚的萌發(fā)和生長(zhǎng)情況，并選出適合百合胚在無(wú)菌條件下萌發(fā)\增殖和生根的 培養(yǎng)基；
[0031] 實(shí)施例1
[0032] 食用百合（松花嶺1號(hào)）的胚選擇及培養(yǎng)基：
[0033] 步驟a:采集松花嶺1號(hào)授粉后30~60d的蒴果，在無(wú)菌條件下用75%酒精棉球 擦拭表面3次，再用0. 1 %的升汞溶液浸泡15min，然后再用無(wú)菌水沖洗3次.在無(wú)菌接 種箱里將蒴果切開，選取有胚種子剝?nèi)》N胚，接種到培養(yǎng)基MS+6-BA0. lmg/L+NAAO. 2mg/L 上，放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)，溫度為24°C~27°C，光照3000Lx，光照時(shí)數(shù)12h/d ;
[0034] 步驟b:在無(wú)菌條件下，將胚培養(yǎng)所得幼苗的鱗片剝離，移植到MS+NAAO. Olmg/ L+6-BA0~1.0 mg/L的增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng).6~BA濃度分別為0\0. 25\0. 5\0. 75\1. Omg/L ;
[0035] 步驟 c:將所得種苗接種在 MS+6-BA1. Omg/L+2. 4-DO. 5mg/L+NAA0 ~1.0 mg/L 的生 根培養(yǎng)基上，NAA的濃度分別為0\0. 2\0. 5\0. 75\1. Omg/L，分為加活性炭（0. 1 % )與不加 活性炭?jī)煞N情況；
[0036] 步驟d:觀察每種培養(yǎng)基，記錄生長(zhǎng)情況。
[0037] 實(shí)施例2
[0038] 藥用百合（鐵炮百合）的胚選擇及培養(yǎng)基：
[0039] 步驟a:采集鐵炮百合授粉后30~60d的蒴果，在無(wú)菌條件下用75%酒精棉球擦 拭表面3次，再用0. 1 %的升汞溶液浸泡15min，然后再用無(wú)菌水沖洗3次.在無(wú)菌接種箱 里將蒴果切開，選取有胚種子剝?nèi)》N胚，接種到培養(yǎng)基MS+6-BA0. lmg/L+NAA0. 2mg/L上， 放置到培養(yǎng)室培養(yǎng)，溫度為24°C~27°C，光照3000Lx，光照時(shí)數(shù)12h/d ;
[0040] 步驟b:在無(wú)菌條件下，將胚培養(yǎng)所得幼苗的鱗片剝離，移植到MS+NAAO. Olmg/ L+6-BA0~I. 0mg/L的增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng).6~BA濃度分別為0\0. 25\0. 5\0. 75\1. 0mg/L ;
[0041] 步驟 c:將所得種苗接種在 MS+6-BA1. Omg/L+2. 4-DO. 5mg/L+NAA0 ~1.0 mg/L 的生 根培養(yǎng)基上，NAA的濃度分別為0\0. 2\0. 5\0. 75\1. 0mg/L，分為加活性炭（0.1 % )與不加 活性炭?jī)煞N情況；
[0042] 步驟d:觀察每種培養(yǎng)基，記錄生長(zhǎng)情況。
[0043] 實(shí)施例3
[0044] 觀賞百合（西伯利亞））的胚選擇及培養(yǎng)基：