一種簡化的甘蔗試管苗生根及育苗方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物試管苗的異養(yǎng)+光合自養(yǎng)生根方法，具體涉及一種簡化的甘 蔗試管苗生根及育苗方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 植物組織培養(yǎng)一般要經(jīng)過四個(gè)階段，即初代培養(yǎng)（或建立無菌培養(yǎng)體系）、繼代增 殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)和煉苗移栽。目前，已在生產(chǎn)上大規(guī)模應(yīng)用的甘蔗試管苗快速繁育技術(shù)也 包括了以上四個(gè)階段。然而這種傳統(tǒng)的甘蔗試管苗生產(chǎn)過程復(fù)雜，且對培養(yǎng)環(huán)境條件高，致 使甘蔗組織培養(yǎng)工廠化生產(chǎn)試管苗的成本居高不下，已經(jīng)不能為市場所接受，限制了甘蔗 健康種苗的種植和推廣。因而，簡化甘蔗試管苗生產(chǎn)程序，降低生產(chǎn)成本，是解決制約甘蔗 健康種苗大規(guī)模生產(chǎn)推廣這一難題的最有效途徑。
[0003] 研宄表明，在植物組織培養(yǎng)過程中，試管苗的生根成本占整個(gè)試管苗生產(chǎn)成本的 35%~75%，因此簡化試管苗生根技術(shù)可使植物試管苗生產(chǎn)成本大幅度下降。試管苗瓶外 生根技術(shù)是近年研宄成功的一項(xiàng)先進(jìn)的組培生根技術(shù)，是植物試管苗簡化生產(chǎn)技術(shù)的重要 組成部分。試管苗瓶外生根技術(shù)是將無根試管苗直接栽培于溫室苗圃中進(jìn)行生根，將傳統(tǒng) 的生根和馴化兩個(gè)階段結(jié)合起來，省去了無根試管苗的試管內(nèi)生根的傳統(tǒng)程序，用自養(yǎng)生 根代替?zhèn)鹘y(tǒng)的異養(yǎng)生根，縮短育苗周期，節(jié)約生產(chǎn)成本。同時(shí)，植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展非 常迅速，國內(nèi)外對滿天星、羅漢果、牡丹、甘蔗、草莓等一大批植物試管苗瓶外生根技術(shù)進(jìn)行 了研宄，并獲得了成功。
[0004] 一般的甘蔗試管苗生根需要15天以上，且試管苗素質(zhì)差，生產(chǎn)成本高，嚴(yán)重制約 了生產(chǎn)效率和降低了生產(chǎn)效益。研宄一種科學(xué)合理的甘蔗試管苗生根及育苗方法，縮短試 管苗生根時(shí)間和育苗周期，對提高甘蔗試管苗的生產(chǎn)能力和應(yīng)用范圍，具有十分重要的意 義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是克服傳統(tǒng)甘蔗試管苗生根培養(yǎng)基及育苗方法的不足，提供一種簡 化的甘蔗試管苗生根及育苗方法。
[0006] 本發(fā)明是通過如下方式實(shí)現(xiàn)的：
[0007] -種簡化的甘蔗試管苗生根及育苗方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0008] (1)配制生根培養(yǎng)基：按照如下配方配制生根培養(yǎng)基：1/2MS大量元素+MS微量元 素+MS鐵鹽+MS有機(jī)物+萘乙酸5~20mg/L+蔗糖50g/L。MS培養(yǎng)基各成分及含量如表1 所示。
[0009] 表1 MS培養(yǎng)基成分及含量 [0010]
[0011] (2)生根培養(yǎng)基滅菌：將生根培養(yǎng)基在121 °C下高溫高壓滅菌5~lOmin。本發(fā)明 的生根培養(yǎng)時(shí)間由原來的14-15天縮短為1-4天，因此將傳統(tǒng)滅菌時(shí)間15min適當(dāng)縮短不 會引起培養(yǎng)基污染，也不會影響試管苗的生長。
[0012] (3)無菌轉(zhuǎn)管：在無菌室或超凈工作臺中將完成增殖培養(yǎng)周期的甘蔗試管苗轉(zhuǎn)移 到冷卻的生根培養(yǎng)基中。本發(fā)明的生根培養(yǎng)時(shí)間由原來的14-15天縮短為1-4天，甘蔗試 管苗不易受污染，無菌操作標(biāo)準(zhǔn)可適當(dāng)降低，如減少擦洗超凈工作臺次數(shù)。
[0013] (4)生根培養(yǎng)：將生根培養(yǎng)基中的甘蔗試管苗移入培養(yǎng)室，控制培養(yǎng)室環(huán)境為溫 度25~30°C，濕度65~80%，光照強(qiáng)度1000~20001ux，培育24-96小時(shí)。甘蔗試管苗不 定根發(fā)生理論上要經(jīng)過4個(gè)階段，即脫分化階段（生根處理后0-24小時(shí)）、誘導(dǎo)階段（24-96 小時(shí)）和分化階段（96小時(shí)后），在分化階段根原基伸長，并突破表皮，形成可見根。傳統(tǒng)的 甘蔗試管苗生根培養(yǎng)周期要14-15天，即不定根完成上述三個(gè)生長發(fā)育階段，且80%的試 管苗都出現(xiàn)可見根時(shí)，即完成生根培養(yǎng)后方可移栽苗圃。本發(fā)明利用了甘蔗試管苗不定根 發(fā)生發(fā)育在脫分化階段后其生根進(jìn)程不可逆轉(zhuǎn)的原理，將生根培養(yǎng)1-4天的無根試管苗直 接移栽于苗圃中進(jìn)行自養(yǎng)生根。
[0014] (5)分割試管苗：生根培養(yǎng)完成后，從瓶中取出試管苗，高度大于Icm的試管苗單 株分割，高度小于Icm的試管苗按2~3株連體分割，用清水洗凈培養(yǎng)基，清除老葉。
[0015] (6)消毒：分割清潔后的試管苗用0. 2~0. 3%的高錳酸鉀溶液浸泡消毒3~6分 鐘。
[0016] (7)種植：將消毒后的試管苗分成單株或小叢種植于放有栽培基質(zhì)的種植盆中， 澆足定根水。
[0017] (8)培育管理：將帶有試管苗的種植盆移入自動調(diào)節(jié)溫度濕度的育苗溫室，蓋 上遮陽網(wǎng)，調(diào)節(jié)育苗溫室環(huán)境：種植后的10天內(nèi)，溫室濕度控制在80%以上，光照強(qiáng)度 2000~lOOOOlux ;種植10天后，溫室濕度控制在70 %以上，光照強(qiáng)度2000~lOOOOlux ; 當(dāng)90%的甘蔗試管苗長出新葉后，即揭開遮陽網(wǎng)，溫室濕度控制為70%，每隔30分鐘淋水 30秒，直到試管苗出圃；試管苗長出新葉后，開始施液體肥和除草，苗圃管理與常規(guī)甘蔗試 管苗育苗方法相同。
[0018] 優(yōu)選的，所述增殖培養(yǎng)其培養(yǎng)基為MS+6-芐氨基腺嘌呤lmg/L+萘乙酸0. 01mg/L+ 鹿糖20g/L。
[0019] 優(yōu)選的，所述栽培基質(zhì)為體積比1:1的育苗蛭石與有機(jī)營養(yǎng)土混合物，或風(fēng)化的 田園土，或體積比1:1的黃泥與河沙混合物。
[0020] 優(yōu)選的，所述有機(jī)營養(yǎng)土的成分包括：有機(jī)質(zhì)多30%，腐植酸多5%， Ν+Ρ205+Κ20 多 3%〇
[0021] 本發(fā)明的有益效果是：
[0022] 1.本發(fā)明的甘蔗試管苗生根時(shí)間從傳統(tǒng)的15天縮短至1-4天，試管苗存活率最高 達(dá)90%以上，試管苗素質(zhì)好，青綠，無黃葉，存活率達(dá)到有根試管苗圃移栽存活率水平，顯著 提高了甘蔗試管苗的生產(chǎn)效率和經(jīng)濟(jì)效益。
[0023] 2.本發(fā)明的生根培養(yǎng)基高溫高壓滅菌時(shí)間從15分鐘縮短為5至10分鐘，節(jié)省了 高壓時(shí)間、人力、電力。
[0024] 3.本發(fā)明的無菌轉(zhuǎn)管操作簡便，利于節(jié)約人力、物力，降低了生產(chǎn)成本。
[0025] 4.本發(fā)明用無根試管苗代替?zhèn)鹘y(tǒng)的有根試管苗進(jìn)行移植，以異養(yǎng)+自養(yǎng)生根方法 代替?zhèn)鹘y(tǒng)的異養(yǎng)生根，節(jié)省培養(yǎng)室占用空間、提高培養(yǎng)室利用周轉(zhuǎn)率、提高產(chǎn)量、節(jié)省勞動 力和能源投入，顯著地提高了生產(chǎn)效率。
[0026] 5.本發(fā)明的試管苗生根栽培基質(zhì)為價(jià)格較為低廉且營養(yǎng)較豐富的育苗蛭石與有 機(jī)營養(yǎng)土混合物，或風(fēng)化的田園土，或黃泥與河沙混合物，代替昂貴的MS生根培養(yǎng)基，利于 降低成本。
[0027] 6.本發(fā)明將試管苗生根與苗圃馴化進(jìn)行有機(jī)結(jié)合，生產(chǎn)周期比傳統(tǒng)方法縮短 12-15 天。
[0028] 7.本發(fā)明操作簡單、成本低廉、經(jīng)濟(jì)效益好，具有良好的市場前景。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述，但不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍和應(yīng)用 范圍。
[0030] 實(shí)施例1
[0031] 一種簡化的甘蔗試管苗生根及育苗方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0032] (1)配制生根培養(yǎng)基：按照如下配方配制生根培養(yǎng)基：1/2MS大量元素+MS微量元 素+MS鐵鹽+MS有機(jī)物+萘乙酸5~20mg/L+蔗糖50g/L ;
[0033] (2)生根培養(yǎng)基滅菌：將生根培養(yǎng)基在121 °C下高溫高壓滅菌5min ;
[0034] (3)無菌轉(zhuǎn)管：在無菌室或超凈工作臺中將完成增殖培養(yǎng)周期的甘蔗試管苗轉(zhuǎn)移 到冷卻的生根培養(yǎng)基中；
[0035] (4)生根培養(yǎng)：將生根培養(yǎng)基中的甘蔗試管苗移入培養(yǎng)室，控制培養(yǎng)室環(huán)境為溫 度25°C，濕度80%，光照強(qiáng)度12001UX，培育24小時(shí)；
[0036] (5)分割試管苗：生根培養(yǎng)完成后，從瓶中取出試管苗，高度大于Icm的試管苗單 株分割，高度小于Icm的試管苗按2株連體分割，用清水洗凈培養(yǎng)基，清除老葉；
[0037] (6)消毒：分割清潔后的試管苗用0. 3%的高錳酸鉀溶液浸泡消毒3分鐘；
[0038] (7)種植：將消毒后的試管苗分成單株或小叢種植于放有栽培基質(zhì)的種植盆中， 澆足定根水；
[0039] (8)培育管理：將帶有試管苗的種植盆移入自動調(diào)節(jié)溫度濕度的育苗溫室，蓋 上遮陽網(wǎng)，調(diào)節(jié)育苗溫室環(huán)境：種植后的10天內(nèi)，溫室濕度控制在80 %以上，光照強(qiáng)度 400011?;種植10天后，溫室濕度控制在70%以上，光照強(qiáng)度600011?;當(dāng)90%的甘蔗試管 苗長出新葉后，即揭開遮陽網(wǎng)，溫室濕度控制為70%，每隔30分鐘淋水30秒，直到試管苗出 圃；試管苗長出新葉后，開始施液體肥和除草，苗圃管理與常規(guī)甘蔗試管苗育苗方法相同。
[0040] 其中，所述增殖培養(yǎng)其培養(yǎng)基為MS+6-芐氨基腺嘌呤lmg/L+萘乙酸0. 01mg/L+蔗 糖20g/L ;所述栽培基質(zhì)為體積比1:1的育苗蛭石與有機(jī)營養(yǎng)土混合物，所述有機(jī)營養(yǎng)土的 成分包括：有機(jī)質(zhì)彡30%，腐植酸彡5%，Ν+Ρ 205+Κ20彡3%。
[0041] 種植第20天對試管苗進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，種植50株/叢，存活46株/叢，存活率為92%。
[0042] 實(shí)施例2
[0043] 一種簡化的甘蔗試管苗生根及育苗方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0044] (1)配制生根培養(yǎng)基：按照如下配方配制生根培養(yǎng)基：1/2MS大量元素+MS微量元 素+MS鐵鹽+MS有機(jī)物+萘乙酸5~20mg/L+蔗糖50g/L ;
[0045] (2)生根培養(yǎng)基滅菌：將生根培養(yǎng)基在121 °C下高溫高壓滅菌IOmin ;
[0046] (3)無菌轉(zhuǎn)管：在無菌室或超凈工作臺中將完成增殖培養(yǎng)周期的甘蔗試管苗轉(zhuǎn)移 到冷卻的生根培養(yǎng)基中；
[0047] (4)生根培養(yǎng)：將生根培養(yǎng)基中的甘蔗試管苗移入培養(yǎng)室，控制培養(yǎng)室環(huán)境為溫 度28°C，濕度70%，光照強(qiáng)度lOOOlux，培育48小時(shí)；<