本發(fā)明屬于塊菌種植技術(shù)領(lǐng)域,具體涉及一種塊菌接種菌丸及其制備和使用方法。
背景技術(shù)：
塊菌(t.ruffles)為子囊菌類塊菌目(tuberales)塊菌科(tuberaceae)塊菌屬(tuber)，是世界上最珍貴的共生食用真菌，具有奇特的香味和營養(yǎng)價(jià)值，因此產(chǎn)量有限，國際市場上價(jià)格昂貴，供不應(yīng)求，其中又被譽(yù)為“黑鉆石”。
為了能夠提高塊菌根苗培育質(zhì)量和野生塊菌的產(chǎn)量，有效保護(hù)現(xiàn)有資源，實(shí)現(xiàn)塊菌持續(xù)利用，通常采用塊菌菌丸接種宿主植物培育塊菌菌根苗,從而開展人工栽培，也可通過野外菌塘補(bǔ)種的方式提高菌塘的野生塊菌產(chǎn)量。塊菌的生長必需與合適的宿主植物根系營共生生活，否則將無法形成子囊果，這就意味著人工栽培塊菌離不開活體宿主植物，因而塊菌人工栽培比較困難，技術(shù)含量高。
目前國外接種培育菌根苗主要采用液體菌丸和固體菌丸來接種,固體菌丸接種通常采用先培育無菌裸根苗，接種時(shí)更換營養(yǎng)缽，這種接種方法的缺點(diǎn)接種苗死亡率高，接種后有一段時(shí)間的緩苗期，影響苗木生長。液體菌丸接種不均勻,塊菌孢子有多、有少，接種后形成菌根的質(zhì)量不一致，甚至接種少的不能感染植株形成菌根，且液體菌種保存時(shí)間很短，一般都不超過7天。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題為：接種苗死亡率高、塊菌菌種保存時(shí)間短、接種感染率不一致和使用不方便等問題。
本發(fā)明解決技術(shù)問題的技術(shù)方案為：提供一種塊菌接種菌丸及其制備和使用方法。
本發(fā)明提供一種塊菌接種菌丸，其組成包括：按重量份數(shù)計(jì)，塊菌粉末30～35份，石灰石粉末8～12份，蛭石粉20～25份，泥炭粉10～20份，em酵母菌1～2份，白糖4～6份，枯草芽孢桿菌1～2份。
優(yōu)選的，上述塊菌接種菌丸，其組成包括：按重量份數(shù)計(jì),塊菌粉末33份，石灰石粉末10份，蛭石粉23份，泥炭粉15份，em酵母菌2份，白糖5份，枯草芽孢桿菌2份。
其中，上述塊菌接種菌丸中，所述的石灰石粉末、蛭石粉、泥炭粉的粒徑均≤0.5mm。
其中，上述塊菌接種菌丸中，所述的塊菌為印度塊菌、夏塊菌、攀枝花塊菌、波氏塊菌、黑孢塊菌、闊孢塊菌或李玉塊菌中的一種。
本發(fā)明還提供一種上述塊菌接種菌丸的制備方法，包括以下步驟：
a、塊菌菌種的收集和保藏
選取成熟塊菌，滅菌后粉碎成直徑≤0.5mm的粉末；
b、配制塊菌菌丸
按塊菌粉末30～35份，石灰石粉末8～12份，蛭石粉20～25份，泥炭粉10～15份，em酵母菌1～2份，白糖4～6份，枯草芽孢桿菌1～2份稱取上述原料，于1000～1200轉(zhuǎn)/min攪拌混勻，采用壓片機(jī)壓制成重1.5～2g/粒的菌丸，干燥后進(jìn)行包裝，制得塊菌菌丸。
其中，上述塊菌接種菌丸的制備方法中，步驟a中所述的成熟塊菌是指孢子的成熟度＞95％的塊菌；所述孢子的成熟度是指顯微鏡下成熟的孢子數(shù)占總孢子數(shù)的百分比。
其中，上述塊菌接種菌丸的制備方法中，步驟a中所述的滅菌的方法為：用70～75％的酒精浸泡2～3min。
其中，上述塊菌接種菌丸的制備方法中，步驟b中所述壓制時(shí)溫度≤35℃。
其中，上述塊菌接種菌丸的制備方法中，步驟b中所述的干燥為真空干燥或陰干，真空干燥溫度為30～35℃，真空度0.06～0.08mpa。
其中，上述塊菌接種菌丸的制備方法中，步驟b中所述干燥后的菌丸含水量為9～12％。
本發(fā)明還提供一種上述塊菌接種菌丸的使用方法，接種量為2～10粒/株，接種深度為距土表面5～10cm。
本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明提供一種塊菌接種菌丸，可改善菌根培養(yǎng)基質(zhì)和微生物結(jié)構(gòu)，大幅度提高植物須根數(shù)量，能將感染率提高20％左右。還能縮短菌根形成的時(shí)間，采用本發(fā)明菌丸比常規(guī)菌丸形成菌根的時(shí)間縮短2個(gè)月以上。本發(fā)明的菌丸制備和使用方法簡單，可為無菌苗培育接種、人工栽培的增產(chǎn)接種、野生塊菌菌塘增產(chǎn)接種提供基礎(chǔ)，值得推廣使用。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明提供一種塊菌接種菌丸，其組成包括：按重量份數(shù)計(jì)，塊菌粉末30～35份，石灰石粉末8～12份，蛭石粉20～25份，泥炭粉10～15份，em酵母菌1～2份，白糖4～6份，枯草芽孢桿菌1～2份。
優(yōu)選的，上述塊菌接種菌丸，其組成包括：按重量份數(shù)計(jì)，塊菌粉末33份，石灰石粉末10份，蛭石粉23份，泥炭粉15份，em酵母菌2份，白糖5份，枯草芽孢桿菌2份。
其中，上述塊菌接種菌丸中，所述的石灰石粉末、蛭石粉、泥炭粉的粒徑均≤0.5mm。
本發(fā)明選擇石灰石粉末、蛭石粉、泥炭粉和em酵母菌與攀枝花塊菌配合使用，石灰石粉末可以使菌種保持干燥，還能提供塊菌生長的鈣質(zhì)，調(diào)節(jié)ph值；蛭石粉可以維持菌丸的疏松度，起填充作用，還能補(bǔ)充礦物質(zhì)；泥炭粉含有腐殖酸，能夠促進(jìn)塊菌孢子萌發(fā)，促進(jìn)植物根系生長；em酵母菌和枯草芽孢桿菌能夠改善培養(yǎng)基質(zhì)的微生物結(jié)構(gòu)，促進(jìn)菌根的形成；白糖能夠補(bǔ)充氮源，并具有粘合作用；將上述物質(zhì)進(jìn)行配合使用，使得塊菌接種菌丸營養(yǎng)豐富，接種感染率高，還能有效提高須根數(shù)量。
其中，上述塊菌接種菌丸中，所述的塊菌為印度塊菌、夏塊菌、攀枝花塊菌、波氏塊菌、黑孢塊菌、闊孢塊菌或李玉塊菌中的一種。
本發(fā)明還提供一種上述塊菌接種菌丸的制備方法，包括以下步驟：
a、塊菌菌種的收集和保藏
選取成熟塊菌，滅菌后粉碎成直徑≤0.5mm的粉末；
b、配制塊菌菌丸
按塊菌粉末30～35份，石灰石粉末8～12份，蛭石粉20～25份，泥炭粉10～15份，em酵母菌1～2份，白糖4～6份，枯草芽孢桿菌1～2份稱取原料，放置于1000～1200轉(zhuǎn)/min攪拌機(jī)中攪拌1～2分鐘，充分混合均勻后，再采用壓片機(jī)壓制成重1.5～2g/粒的菌丸或菌片，真空干燥進(jìn)行包裝，制得塊菌菌丸。
其中，上述塊菌接種菌丸的制備方法中，步驟a中所述的成熟塊菌是指孢子的成熟度＞95％的塊菌；所述孢子的成熟度是指顯微鏡下成熟的孢子數(shù)占總孢子數(shù)的百分比。
其中，上述塊菌接種菌丸的制備方法中，步驟a中所述的滅菌的方法為：用70～75％的酒精浸泡2～3min。
其中，上述塊菌接種菌丸的制備方法中，步驟b中所述壓制時(shí)溫度≤35℃。
其中，上述塊菌接種菌丸的制備方法中，步驟b中所述的干燥為真空干燥或陰干，真空干燥溫度為30～35℃，真空度0.06～0.08mpa。
其中，上述塊菌接種菌丸的制備方法中，為了使菌丸有效保藏，并保證塊菌孢子的萌發(fā)能力，本發(fā)明步驟b中所述干燥后的菌丸含水量為9～12％。
本發(fā)明還提供一種上述塊菌接種菌丸的使用方法，接種量為2～10粒/株，接種深度為距土表面5～10cm。
下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式做進(jìn)一步的解釋說明，但不表示將本發(fā)明的保護(hù)范圍限制在實(shí)施例所述范圍內(nèi)。
本發(fā)明實(shí)施例中的em酵母菌購至山西昌泰動(dòng)物藥業(yè)有限責(zé)任公司,執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為q/scy010-213；枯草芽孢桿菌購至武漢天惠生物工程有限公司，產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)證號(hào)為q/wth05-2012；
實(shí)施例中所述的印度塊菌、夏塊菌、攀枝花塊菌均購至攀枝花彝人塊菌有限公司。
實(shí)施例中所述的傳統(tǒng)印度塊菌、傳統(tǒng)夏塊菌、傳統(tǒng)攀枝花塊菌是否指的是采用以往的方法制備的印度塊菌、夏塊菌和攀枝花塊菌。具體的制備方法如下：
固體塊菌菌種制備方法：先將塊菌粉碎與滅菌蛭石或者細(xì)土混合，得到塊菌菌丸，低溫5℃條件下保持7天。
液體菌種制備：將塊菌粉碎按照1：10的比例加入水放到攪拌機(jī)中攪拌均勻及得到液體菌種，現(xiàn)用現(xiàn)配，低溫5℃條件下保持3天。
實(shí)施例1用本發(fā)明方法制備塊菌接種菌丸
制備塊菌接種菌丸，其組成包括：塊菌粉末33份，石灰石粉末10份，蛭石粉23份，泥炭粉15份，em酵母菌2份，白糖5份，枯草芽孢桿菌2份。
上述塊菌接種菌丸的制備方法操作如下：
按上述組成稱取原料，粉碎成≤0.5mm的粉末，于1000轉(zhuǎn)/min條件下攪拌混勻，采用壓片機(jī)壓制成重2g/粒的菌丸，干燥至水分含量為10％，制得塊菌菌丸。
將實(shí)施例1制備得到的塊菌菌丸用于塊菌菌根苗培育
采用育苗盤和營養(yǎng)缽培育云南松、華山松、板栗、美國山核桃、麻櫟、青岡、槲櫟、榛子等無菌幼苗3～5個(gè)月，待有側(cè)根長出后，選擇粗細(xì)、高度一致的苗木進(jìn)行接種，接種時(shí)用直徑略大于菌丸直徑的潔凈木棒或金屬棒打孔，孔深5～10cm，每株苗木打2～3孔，接種2～3個(gè)菌丸，接種完成后放置于20～25℃的育苗大棚中培養(yǎng)，培育1個(gè)月左右，開始形成菌根，培育6個(gè)月后，菌根感染率均在85％以上，較傳統(tǒng)接種感染率高。詳見表1。塊菌菌根感染率＝感染菌根數(shù)/檢測菌根數(shù)×100％。
表1本發(fā)明的菌丸接種菌根培育6個(gè)月后的效果
實(shí)施例2用本發(fā)明方法制備塊菌接種菌丸
制備塊菌接種菌丸，其組成包括：塊菌粉末30份，石灰石粉末8份，蛭石粉20份，泥炭粉10份，em酵母菌份，白糖4份，枯草芽孢桿菌1份。
上述塊菌接種菌丸的制備方法操作如下：
按上述組成稱取原料，粉碎成≤0.5mm的粉末，于1100轉(zhuǎn)/min條件下攪拌混勻，采用壓片機(jī)壓制成重2g/粒的菌丸，干燥至水分含量為10％，制得塊菌菌丸。
將實(shí)施例2制備得到的塊菌菌丸用于塊菌人工栽培
在塊菌人工栽培園，沿樹冠的投影范圍外沿須根較多的位置，從4個(gè)不同方位，在樹冠的垂直方向進(jìn)行打孔，孔深5～10cm。根據(jù)樹勢的大小接種2～4丸/孔，接種后覆蓋表土即可。接種1次，4個(gè)月后觀察得到表2所示的結(jié)果。
表2本發(fā)明的接種菌丸塊菌人工栽培中的應(yīng)用效果
實(shí)施例3用本發(fā)明方法制備塊菌接種菌丸
制備塊菌接種菌丸，其組成包括：塊菌粉末35份，石灰石粉末12份，蛭石粉25份，泥炭粉20份，em酵母菌2份，白糖6份，枯草芽孢桿菌2份。
上述塊菌接種菌丸的制備方法操作如下：
按上述組成稱取原料，粉碎成≤0.5mm的粉末，于1200轉(zhuǎn)/min條件下攪拌混勻，采用壓片機(jī)壓制成重2g/粒的菌丸，干燥至水分含量為10％，制得塊菌菌丸。
將實(shí)施例3制備得到的塊菌菌丸用于野生塊菌菌塘接種
選擇野外塊菌產(chǎn)量較低的菌塘和曾產(chǎn)塊菌現(xiàn)在不產(chǎn)的菌塘，用赤耙挖深5～10cm，選擇須根發(fā)達(dá)的位置接種塊菌菌丸，每個(gè)接種點(diǎn)4～6丸，接種一次，接種完成后覆蓋表土即可。觀察得到表3所示的結(jié)果。
表3本發(fā)明的接種菌丸在野生塊菌促繁中的應(yīng)用效果
由實(shí)施例可看出，采用本發(fā)明的塊菌接種菌丸，具有較高的根苗培育感染率和成活率，適宜用在塊菌根苗培育上；另外，其能增加塊菌菌根數(shù)量，在人工栽培時(shí)工作效率高，菌根數(shù)量多；本發(fā)明的塊菌菌丸還適用于野生菌塘的塊菌接種，能使不產(chǎn)菌菌塘開始產(chǎn)菌，并提高低產(chǎn)菌塘的產(chǎn)菌量。