專利名稱：：一種塊菌的提取物、其制備方法及其在制備卷煙紙產(chǎn)品中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種塊菌提取物、其制備方法及其在制備巻煙紙中的用途。所述提取物從印度i央菌發(fā)酵液中提取，其中含有芪多酚類化合物A。
背景技術(shù)：
：塊菌(Truffles)屬子囊菌亞門(Ascornycotina)盤菌綱(Helotiales)塊菌目(Tuberales)塊菌科(Tuberaceae)真菌，通常與林木根系具有共生關(guān)系，主要分布在北半球，全球種屬逾60余種，80%以上塊菌分布于西歐洲地區(qū)，主要為法國、意大利、西班牙等國。塊菌在我國全國均有分布，約有20余種。在歐洲塊菌中，黑孢塊菌71//er/z7e2朋卿or湖Vittad、白塊菌鵬,z^K7Pico、夏塊菌Zaesz^V鵬Vittad、勃良第塊菌r.朋ci/az^77Chatin，均為重要的商業(yè)塊菌。被譽(yù)為林中"黑鉆石"的黑包塊菌，是其中價(jià)值較高的一種，為西歐許多國家最喜愛的食品之一。該菌最早發(fā)現(xiàn)于法國的P6rigord省，法國、意大利、西班牙為其主產(chǎn)區(qū)。我國的塊菌品種主要有中國塊菌Zsj'77e/iseK.TaoetLiu、印度±央菌Zj'/必c，CookeetMassee、太原塊菌7]^'，a/seLiu、巨孢塊菌Zg/辟/7tasp9/Y/flY.Wang、劉氏±央菌Z力'〃j'A.S.Xu、西藏±央菌7:zi幼/^e/zseA.S.Xu為塊菌屬新種。喜峰±央菌ZAz'鵬7aymseZhangetMinter、擬喜峰塊菌Z;5"e〃flb力j'鵬JaymseMorens.。我國目前出口歐洲的塊菌種類主要是西南出產(chǎn)的印度±央菌，該菌子囊果與黑孢i央菌極其相似。塊菌是一種珍貴的食用菌，目前i央菌來源主要為野生或半人工栽培。塊菌獨(dú)特的口感和香味使其廣泛的應(yīng)用于食品、釀酒、高檔香水、化妝品和香精香料等領(lǐng)域，其經(jīng)^j介值令人矚目。我國西南地區(qū)擁有豐富的印度塊菌資源，除出口量夕卜，仍有大量的資源需要進(jìn)行深度的開發(fā)和加工。i央菌的化學(xué)成分研究發(fā)現(xiàn)其成分較為復(fù)雜，包括含S化合物、鞘脂、多種脂肪酸、氨基酸、甾醇類物質(zhì)和多種揮發(fā)性物質(zhì)。這些物質(zhì)除具有獨(dú)特的香氣外，還具有一定的藥用價(jià)值，如用于治療內(nèi)分泌失調(diào)疾病。結(jié)合巻煙輔料的工作，我們對(duì)多種植物和真菌的提取物進(jìn)行了系列的篩選，發(fā)現(xiàn)塊菌的部分提取物添加到巻煙紙或水松紙中可增加巻煙紙的附加功能，主要包括(1)協(xié)香作用。協(xié)調(diào)巻煙的香韻，掩蓋巻煙的地方雜氣。(2)加香作用。補(bǔ)償巻煙因降低焦油帶來的香味不足的確定。(3)減少煙氣中包括自由基在內(nèi)的有害物質(zhì)。另外，與一般的植物或真菌提取物相比，經(jīng)處理過的在巻煙輔料的可用性上具有特色。其一，提取物的色澤為白色到淺黃色，添加到巻煙紙等巻煙輔料中不會(huì)對(duì)產(chǎn)品白度等外觀參數(shù)造成影響，亦不會(huì)在生產(chǎn)過程中對(duì)機(jī)器設(shè)備著色而造成損失。其二，該提取物屬于"潛香"性質(zhì)的物質(zhì)，在常溫常壓下不揮發(fā)出約，其獨(dú)特的協(xié)香、償香作用是通過巻煙高溫或燃燒的過程得以釋放。因此，將其應(yīng)用于巻煙輔料產(chǎn)品，不會(huì)對(duì)輔料產(chǎn)品本身的氣味指標(biāo)造成干擾和影響。深入的成分分析首次發(fā)現(xiàn)i央菌的提取物中含有芪多酚類成分A，從結(jié)構(gòu)上看，該化合物是一個(gè)強(qiáng)的自由基清除劑，極可能是提取物功效的物質(zhì)基礎(chǔ)。目前，±央菌揮發(fā)性精油在國外有用于巻煙領(lǐng)域的研究和實(shí)踐，但其無香氣的具有抗自由基活性提取物部分用于煙草領(lǐng)域尚未見任何報(bào)道。
背景技術(shù)：
：本發(fā)明的目的之一是發(fā)明一種塊菌提取物，所述提取物從塊菌的子實(shí)體中提取，其中含有芪多酚類化合物A，其化學(xué)式如下化合物A本發(fā)明所述塊菌為印度塊菌朋ew/〗Agsae/75"eA.J.LietP.K.Haiao。來源可以是野生的，也可以是半人工種植的，半人工栽培可以進(jìn)一步擴(kuò)大原料來源。本發(fā)明目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種塊菌提取物，其特征在于±央菌為子囊菌類中的塊菌目(Tuberales)塊菌科(Tuberaceae)的真菌的印度塊菌(7^eri/7必c鵬C00keetMassee)，所述提取物是從塊菌子實(shí)體中提取，其中含有芪多酚類化合物A，芪多酚類化合物A結(jié)構(gòu)式是-化合物A<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>其中所述塊菌為野生或半人工栽培印度±央菌。以重量百分比計(jì)，其中所述提取物中芪多酚類化合物A的含量為50%65%。塊菌提取物的制備方法包括下列步驟(1)前處理前處理步驟包括塊菌子實(shí)體的采集、凈制、干燥和粉碎；(2)提取所述提取是采用0%50%的乙醇或甲醇的水溶液作為提取溶劑對(duì)步驟(1)所述±央菌子實(shí)體進(jìn)行常規(guī)提取并進(jìn)行濃縮得到提取液；(3)后處理后處理步驟包括將步驟(2)的提取液上吸附樹脂進(jìn)行純化和脫色，并用1050%的乙醇或甲醇水溶液洗脫，經(jīng)MI和TM得到i央菌提取物。其步驟(3)所述樹脂為弱極性或中極性大孔吸附樹脂。't央菌提取物用于在制備巻煙紙中的用途。按本發(fā)明方法所獲得的提取物發(fā)現(xiàn)塊菌的部分提取物添加到巻煙紙或水松紙中可增加巻煙紙的附加功能，主要包括(1)協(xié)香作用。協(xié)調(diào)巻煙的香韻，掩蓋巻煙的地方雜氣。(2)加香作用。補(bǔ)償巻煙因降低焦油帶來的香味不足的確定。(3)顯著降低煙氣中包括自由基在內(nèi)的有害物質(zhì)。另外，與一般的植物或真菌提取物相比，經(jīng)處理過的在巻煙輔料的可用性上具有特色。其一，提取物的色澤為白色到淺黃色，添加到巻煙紙等巻煙輔料中不會(huì)對(duì)產(chǎn)品白度等外觀參數(shù)造成影響，亦不會(huì)在生產(chǎn)過程中對(duì)機(jī)器設(shè)備著色而造成損失。其二，該提取物屬于"潛香"性質(zhì)的物質(zhì)，在常溫常壓下不揮發(fā)出香氣，其獨(dú)特的協(xié)香、償香作用是通過巻煙高溫或燃燒的過程得以釋放。因此，將其應(yīng)用于巻煙輔料產(chǎn)品，不會(huì)對(duì)輔料產(chǎn)品本身的氣味指標(biāo)造成干擾和影響。另外，深入的成分分析驚奇發(fā)現(xiàn)本發(fā)明所得塊菌的提取物中含有50%60%的芪多酚類成分A，從結(jié)構(gòu)上看，該化合物是一個(gè)強(qiáng)的自由基清除劑，是提取物對(duì)煙氣中自由基清除物質(zhì)基礎(chǔ)的體現(xiàn)。由此，本發(fā)明進(jìn)一步提供本發(fā)明之塊菌提取物在制備巻煙紙中的用途。按照常規(guī)的生產(chǎn)工藝，可在多個(gè)環(huán)節(jié)將本發(fā)明之提取物添加到巻煙紙、水松紙和/或煙絲上直接加以利用，也可通過涂布的方法加載于巻煙紙上。同樣，本發(fā)明之i央菌提取物也可以與其它物質(zhì)^使用形成新的添加物。顯然，這些含有本發(fā)明所述提取物的添加物在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍內(nèi)。本發(fā)明之±央菌提取物在作為制備巻煙輔料方面具有明確的功能和特點(diǎn)，不影響各級(jí)產(chǎn)品的品質(zhì)，因此具有較強(qiáng)的可用性。所述的提取物中功能成分的結(jié)構(gòu)清楚、含量明確，有利于各級(jí)產(chǎn)品的質(zhì)量監(jiān)測(cè)和控制。另外，本發(fā)明所述有效部位的制備方法簡(jiǎn)單易行，生產(chǎn)成本低，可連續(xù)操作，具有極強(qiáng)的實(shí)用性。具體實(shí)案以下通過具體實(shí)施例將進(jìn)一步說明本發(fā)明的內(nèi)容。下文實(shí)施例僅為就本發(fā)明所述提取物的來源、制備方法、化學(xué)組成及其用途的特殊說明，顯然，本發(fā)明權(quán)利范圍不受這些實(shí)施例限制。本發(fā)明中所述提取物中，以重量百分比計(jì)，芪多酚類化合物A含量為5065%。本發(fā)明所提供的一種塊菌提取物是一種以芪多酚類化合物A為主要化學(xué)成分的混合物?？梢岳斫猓颂崛∥镏谢衔顰的含量隨原料批次不同、處理工藝參數(shù)變化而有所變化。本發(fā)明提供上述提取物的制備方法，所述制備方法包括下列步驟(1)前處理前處理步驟包括塊菌子實(shí)體的采集、凈制、干燥和粉碎。(2)提取所述提取是采用0%50%的乙醇或甲醇的水溶液作為提取溶劑對(duì)步驟(1)所述塊菌子實(shí)體進(jìn)行常規(guī)提取并進(jìn)行濃縮得到提取液。(3)后處理后處理步驟包括將步驟(2)的提取液上吸附樹脂進(jìn)行純化和脫色，并用1050%的乙醇或甲醇水溶液洗脫，經(jīng)濃縮和干燥得到權(quán)利要求13所述塊菌提取物。采集的新鮮塊菌一般需要經(jīng)過凈制、切制和/或粉碎等前處理。所述凈制可包括去除附著于子實(shí)體上的泥土等雜物，可以應(yīng)用其鮮品，也可以采用其風(fēng)干、曬干或機(jī)器干燥的干品；所得原料,進(jìn)行適當(dāng)切制或粉碎以利提取。步驟(2)所述有機(jī)溶劑為含水低于50%的甲醇、乙醇和水。其中優(yōu)選乙醇水溶液作為提取溶劑；進(jìn)一步地，本發(fā)明優(yōu)選采用20%的乙醇水溶液作為提取溶劑。步驟(2)所得塊菌提取液需經(jīng)適當(dāng)?shù)暮筇幚矸娇色@得塊菌提取物。步驟(3)中吸附樹脂優(yōu)選大孔吸附樹脂為弱極性和中極性的樹脂，例如商品型號(hào)D101型吸附樹脂作為層析純化和脫色的層析材料。步驟(3)所述洗脫液優(yōu)選20%的乙醇水溶液。fe^體積一般按每100ml吸附樹脂(裝柱后體積)吸附13g塊菌提取物設(shè)置，這時(shí)一般可以獲得良好的吸附轉(zhuǎn)移率。上清液上樣吸附后，可順次采用水、約15%20%的乙醇洗脫。收集15%20%的乙醇洗脫液并進(jìn)行干燥，得到本發(fā)明所述塊菌提取物。實(shí)施例l:化合物A的檢測(cè)測(cè)定(1)樣品來源標(biāo)準(zhǔn)品化合物A，自制，純度99%(高液相色譜圖中相對(duì)峰面積)。待測(cè)樣品見實(shí)施例2(2)薄層色譜法(TLC)檢査化合物本法采用硅膠薄層層析。取標(biāo)準(zhǔn)品溶液及待測(cè)樣品溶液液各41，分別點(diǎn)于同一硅膠薄層層析板(Gf254)板上，以石油醚丙酮(體積比，7:13)為展開劑展開，取出，晾干，在紫外燈下觀査或置于碘缸中顯色，在標(biāo)準(zhǔn)品相同的位置，觀察待測(cè)樣品是否有相應(yīng)的斑點(diǎn)。(3)高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定化合物A色譜條件用(4.5X100mm)反相色譜柱，15%甲醇，用紫外檢測(cè)儀進(jìn)行檢觀U，檢測(cè)波長306nm，進(jìn)樣量10^1。標(biāo)準(zhǔn)曲線建立上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別配成5、10、15、20、25嗎/ml進(jìn)行色譜測(cè)定，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以各對(duì)照品進(jìn)樣量(Y，g)對(duì)峰面積(x，A)進(jìn)行線性回歸，回歸方程Y=3.0028X+0.2031，r=0.9997(虎杖苷，n=5)。樣品測(cè)定待測(cè)樣品配成40|ig/ml，取lOpl分別注入液相色譜儀中，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待測(cè)樣品中化合物A的含量。實(shí)施例2:塊菌提取物的制備(1)材沐印度塊菌子實(shí)體收購于云南貢山地區(qū)，除去雜質(zhì)，洗凈，切成片或塊，曬干。樹脂D101大孔吸附樹脂，天津市海光化工有限公司產(chǎn)品，按照生產(chǎn)廠說明書進(jìn)行預(yù)處理；(2)制備(i)前處理收購的印度塊菌，水洗去泥土，切片，通風(fēng)處陰干，粉碎機(jī)分別將其粉碎成粗顆粒。(ii)提取取5份上述樣品，每份100g，分別以0%、25%、50%乙醇；25%甲醇；50%甲醇作為提取溶劑提取。各份原料分別以上述不同提取溶劑0.8L回流提取3次，每次2小時(shí)。分別合并提取液，薄層色譜法檢測(cè)提取物中的化合物A。表l:不同提取溶劑的提取i^結(jié)果提取液0%乙醇25%乙醇50%乙醇25%甲醇50%甲醇化合物A+++++++++++~提取物重量^^~上述提取試驗(yàn)中，各種溶劑不同濃度水溶液均可檢測(cè)到化合物a，可見它們均可作為有效提取溶劑，其中，鑒于乙醇的安全、廉價(jià)且提取物的提取率較高，因此本發(fā)明優(yōu)選約2025%的乙醇水溶液作為提取溶劑。(iii)后處理取上述i央菌粗顆粒300g，加入20。/。乙醇0.8L回流提取3次，每次2小時(shí)。合并提取液濃縮干，加入水90ml，上樣5根D101大孔吸附樹月旨柱(())4.5cm，80cm，賊體積1350ml)。薄層色譜法檢査D101樹脂柱卜.樣流出液，未見芪多酚類化合物A泄漏。3根D101樹脂柱分別以2000ml水、20%乙醇、50%乙醇、15%甲醇和50%甲醇洗滌，收集洗脫液，減壓濃縮，冷凍干燥，高效液相色譜法檢査化合物A含量。統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)如下表2:大孔樹脂層析純化結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>表2顯示，上述洗脫液除水外，均能將化合物A洗脫，但濃度較高的乙醇或甲醇水溶液洗脫制定的產(chǎn)品色澤較深，化合物A含量較低；另鑒于乙醇的安全、廉價(jià)，因此本發(fā)明優(yōu)選15-25%的乙醇水溶液作為洗脫液。(5)化合物A結(jié)構(gòu)確認(rèn)化合物A的MS、W麗R、13CNMR譜圖，其檢測(cè)數(shù)據(jù)如下白色針晶(甲醇)，mp.225-227°C。紫外燈下呈藍(lán)紫色熒光。UV:人max(MeOH)nm:217，308，319;negativeFAB+MS[m/z，％]:407[M++H]，358,228[M+H-C孔A]—;^醒R(500MHz，CD30D)Sppm:7.15(lH，d，J二8.4Hz)，7.02(1H,d，J=1.9Hz),6.93(lH,dd，J=8.0，1.9Hz)，6.91(1H，d，J二16.3Hz)，6.83(1H，d，J=16.3Hz)，6.45(2H，d，J=2.1Hz)，6.18(1H,d，J=2.1Hz),4.78(1H，d，J=7.2Hz)，3.2-3.9(4H，m，sugar—H)';13C麗R(500MHz,CD3OD)Sppm:140.9(C-l)，105.9(C一2)，160.2(C—3)，103.9(C—4)，159.5(C—5)，105.9(C—6)，134.9(C—1')，114.5(C-2')，148.4(C—3')，146.5(4')，118.7(5')，119.5(C-6')，128.9(C—a)，128.9(C—e),104.1(C—1〃)，74.7(C—2〃)，77.8(C-3〃)，71.2(C—4〃)，78.1(C—5〃)，62.7(C—6")。上述UV，MS，M雨R禾P。CNMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)(YoshikiKashiwadaetal.Chem.Pharm.Bull.1984，32(9):3501—3517)報(bào)道的3，3'，4，4'-四羥基芪，4'_D—吡喃葡萄糖苷一致(3，3，，4,4，-tetrahydraxystilbene，4，-0-glucopyranoside)。實(shí)施例3:皿添加于巻煙紙將塊菌提取物1000g溶于2L純凈水中，然后按1%。的量混入紙漿，進(jìn)行充分混合，攪拌過程中應(yīng)避免渦流和死角現(xiàn)象，防止?jié){料不均的現(xiàn)象。隨后進(jìn)行巻煙紙拋光、壓紋等正常工藝，得1#巻煙紙。實(shí)施例4:浸涂添加于巻煙紙準(zhǔn)備好符合規(guī)格的普通巻煙紙。巻煙紙應(yīng)有相宜的定量、抗張強(qiáng)度、透氣度、水分，不能有破邊現(xiàn)象。因?yàn)榻刻崛∥锏木壒?，提取物中的物質(zhì)通過紙張的毛細(xì)顯現(xiàn)會(huì)浸入紙張內(nèi)部，巻煙紙的透氣度會(huì)比原來有所下降，所以生產(chǎn)無壓紋巻煙紙時(shí)應(yīng)將透氣度在原標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上提高一定基數(shù)。將土央菌提取物、水、酒精、和調(diào)色劑按2:15:25:8投入攪拌桶中，進(jìn)行充分混合，然后適量加入粘度調(diào)節(jié)劑攪拌均勻，用2辨占度杯檢測(cè)，上機(jī)粘度應(yīng)控制在1721秒之間為宜。在兌料在過程中，將巻煙紙及涂色輥安裝至既定位置，然后將紙引至收巻軸上接好，并檢査收放巻軸充氣是否飽滿，然后將"B喿箱調(diào)至加溫位置，待烘箱溫度升至設(shè)定溫度時(shí)即可啟動(dòng)機(jī)器，輕輕放下壓輥，緩漫加速至正常速度。在此過程中，應(yīng)注意觀察顏色的變化，根據(jù)需要對(duì)料液粘度或組份適時(shí)調(diào)整。涂布后，按所需規(guī)格、長度，...分切位置進(jìn)行分切、恒濕和包裝。得2#巻煙紙。實(shí)施例5:添加和^布?jí)K菌提取物的巻煙紙巻煙(1#和2#巻煙)對(duì)煙氣中有害成分的影響表3不同巻煙紙巻煙樣品有害成分(苯并芘、亞硝胺)含量苯并芘NNN證+腿NNKTSNA總i巻煙紙ng/cigng/cigng/cigng/cigng/cig普通13.817.743.441.4212.5912.236.403.190.8310.412#11.076.674.732.3213.72從表3M可以看出，含棘附著塊菌提取物的巻煙紙1#，2#和普通巻煙娜比，主Wn中有害成分3，冬苯并^S有所下降，其中TSNAs中的NNN呈斷氐顯著。實(shí)施例6:添加和涂布?jí)K菌提取物的巻煙紙對(duì)巻煙感官抽吸品質(zhì)的影響按品析標(biāo)準(zhǔn)，共有21位專家參與品析。從表所列評(píng)吸數(shù)據(jù)可以看出，附著天然植物產(chǎn)物的巻煙紙1#，2#和普通巻煙紙相比，巻煙評(píng)吸各項(xiàng)指標(biāo)均產(chǎn)生影響。在香氣方面1#，2#巻煙香氣量增加，且香氣較圓潤柔和。在煙氣協(xié)調(diào)性方面、掩蓋煙氣雜氣產(chǎn)生較佳的影響。在減少刺激性方面也i頓U激性呈下降趨勢(shì)。在口腔余味感方面，口腔干凈度有所改善，但香氣回味1#感覺有所欠缺。表4不同巻煙紙對(duì)巻煙感官抽吸品質(zhì)的影響評(píng)分巻煙紙光澤香氣協(xié)調(diào)雜氣刺激性余味總分普通530.763.9610.0017.9222.3389.971#530.804.8311.7517.9722.2592.602#530.92510.8818.0422.3892.22總體感覺較優(yōu)，多方面感官均有所提升。權(quán)利要求1、一種塊菌提取物，其特征在于塊菌為子囊菌類中的塊菌目(Tuberales)塊菌科(Tuberaceae)的真菌的印度塊菌(TuberindicumCookeetMassee)，所述提取物是從塊菌子實(shí)體中提取，其中含有茋多酚類化合物A，茋多酚類化合物A結(jié)構(gòu)式是2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的土央菌提取物，其特征在于其中所述塊菌為野生或半人工栽培印度塊菌。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的±央菌提取物，其特征在于以重量百分比計(jì)，其中所述提取物中芪多酚類化合物A的含量為50%65%。4、根據(jù)權(quán)利要求廣3所述的i央菌提取物的制備方法，其特征在于所述制備方法包括下列步驟(1)前處理前處理步驟包括塊菌子實(shí)體的采集、凈制、干燥和粉碎；(2)提取所述提取是采用0%50%的乙醇或甲醇的水溶液作為提取溶劑對(duì)步驟(1)所述±央菌子實(shí)體進(jìn)行常規(guī)提取并進(jìn)行濃縮得到提取液；(3)后處理后處理步驟包括將步驟(2)的提取液上吸附樹脂進(jìn)行純化和脫色，并用1050%的乙醇或甲醇水溶液洗脫，經(jīng)濃縮和干'燥得到塊菌提取物。5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的塊菌提取物的制備方法，其特征在于其步驟(3)所述樹脂為弱極性或中極性大孔吸附樹脂。6、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的塊菌提取物的制備方法，其特征在于i央菌提取物用于在制備巻煙紙中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及一種塊菌的提取物、其制備方法及其在制備卷煙紙中的用途，所述提取物從塊菌子實(shí)體中提取，其中含有茋多酚類化合物A。其中所述塊菌為野生或半人工栽培印度塊菌。以重量百分比計(jì)，其中所述提取物中茋多酚類化合物A的含量為50％~65％。其特征在于塊菌為子囊菌類中的塊菌目(Tuberales)塊菌科(Tuberaceae)的真菌的印度塊菌(TuberindicumCookeetMassee)，所述提取物是從塊菌子實(shí)體中提取，其中含有茋多酚類化合物A，茋多酚類化合物A結(jié)構(gòu)式為右式。文檔編號(hào)D21H19/00GK101538295SQ2009100943公開日2009年9月23日申請(qǐng)日期2009年4月10日優(yōu)先權(quán)日2009年4月10日發(fā)明者張立新,張紅國,朱自忠,魯紅昌申請(qǐng)人:云南紅塔藍(lán)鷹紙業(yè)有限公司