一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑，按照質(zhì)量份包括以下組分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脫脂米糠15份-45份。本發(fā)明還公開一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，該調(diào)節(jié)劑能促進(jìn)石斑魚腸道發(fā)育，修復(fù)腸黏膜損傷，激活腸黏膜免疫和系統(tǒng)免疫功能，調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，維護(hù)腸黏膜的健康，降低腸炎發(fā)病率。另外，可提高腸道消化酶的活性，提高石斑魚生長(zhǎng)性能和飼料利用效率。
【專利說(shuō)明】一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于水產(chǎn)飼料添加劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào) 節(jié)劑，本發(fā)明還涉及一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 腸道不僅是水產(chǎn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化和吸收的主要場(chǎng)所，也是體內(nèi)重要的免疫器 官、代謝器官和內(nèi)分泌器官。腸道健康與水產(chǎn)動(dòng)物的健康和生產(chǎn)性能息息相關(guān)，腸道機(jī)能一 旦紊亂，動(dòng)物消化吸收出現(xiàn)障礙，營(yíng)養(yǎng)素的供給不足，動(dòng)物的生產(chǎn)性能下降。另外，腸道機(jī)能 受損后，弧菌等病原菌容易入侵，引起細(xì)菌性腸炎等腸道疾病爆發(fā)。大量研究表明，腸道菌 群平衡對(duì)于維持腸道健康具有重要作用。正常情況下，占主導(dǎo)優(yōu)勢(shì)的有益微生物菌群能使 腸道處于健康狀態(tài)，保證宿主對(duì)營(yíng)養(yǎng)素的正常消化和吸收。此外，有益微生物菌群定植于腸 內(nèi)壁黏膜，排斥潛在病原菌的定植，調(diào)節(jié)腸黏膜免疫功能，控制病原微生物的群體數(shù)量，保 護(hù)宿主動(dòng)物免受疾病的困擾。但是，當(dāng)出現(xiàn)餌料變更、養(yǎng)殖密度過(guò)大等應(yīng)激狀態(tài)時(shí)，海水魚 腸道菌群結(jié)構(gòu)容易受到?jīng)_擊而失調(diào)，菌群與宿主之間的穩(wěn)態(tài)關(guān)系被破壞，宿主對(duì)疾病的易 感性增強(qiáng)，生產(chǎn)性能下降。近年來(lái)，由于魚粉供應(yīng)不足以及價(jià)格不斷飆升，利用價(jià)格相對(duì)低 廉的豆柏等植物蛋白原料替代魚粉是大勢(shì)所趨。但是，豆柏抗?fàn)I養(yǎng)因子會(huì)引起海水魚腸道 菌群結(jié)構(gòu)的變化、腸道黏膜損傷和腸炎的出現(xiàn)，腸道的正常消化吸收功能受到影響，魚類生 產(chǎn)性能和飼料利用率下降。可見(jiàn)，腸道健康是魚類保持健康和發(fā)揮正常生產(chǎn)性能的必要條 件。因此，配合飼料中加入一些功能性添加劑改善腸道健康，提高魚類對(duì)抗?fàn)I養(yǎng)因子和環(huán)境 應(yīng)激的抵抗力，對(duì)于保證動(dòng)物健康和生產(chǎn)性能具有重要的意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
[0003] 近年來(lái)，市場(chǎng)上基于改善動(dòng)物腸道健康的各種飼料添加劑產(chǎn)品種類繁多，如益生 菌、寡糖、酸化劑、丁酸類、谷氨酰胺、中草藥等。其中，國(guó)內(nèi)外科學(xué)家對(duì)益生菌和寡糖進(jìn)行了 大量的研究，證實(shí)了益生菌和寡糖單獨(dú)或者聯(lián)用（合生素）能調(diào)節(jié)魚類腸道菌群，提高動(dòng)物 腸黏膜和系統(tǒng)免疫功能，進(jìn)而提高生產(chǎn)性能和飼料利用率。目前市場(chǎng)上已經(jīng)有一些針對(duì)水 產(chǎn)動(dòng)物的益生菌和合生素產(chǎn)品，但這些產(chǎn)品所用的益生菌多來(lái)自恒溫動(dòng)物或環(huán)境，難以在 魚類腸道定植或定植時(shí)間很短，導(dǎo)致其應(yīng)用效果不穩(wěn)定。因此，分離自海水養(yǎng)殖魚類腸道自 身的原籍有益微生物通常具有更好的應(yīng)用效果。另外，多數(shù)益生菌菌株要求在活性條件下 才能發(fā)揮益生作用，然而水產(chǎn)飼料加工過(guò)程中制?；蚺蚧瘻囟群芨撸菀讓?dǎo)致益生菌失活， 益生效果難以發(fā)揮。因此，迫切需要篩選一些滅活條件下也能發(fā)揮益生效果的菌株。
[0004] 丁酸類的杰出代表，三丁酸甘油酯在胃液中不分解，在胰脂肪酶的作用下緩慢釋 放成丁酸和甘油，丁酸可作為腸上皮細(xì)胞代謝的能源物質(zhì)，還可以起到酸化、調(diào)節(jié)胃腸道微 生態(tài)平衡等作用。谷氨酰胺能促進(jìn)腸道細(xì)胞的修復(fù)及維持正常的腸黏膜免疫功能，而且能 不斷為動(dòng)物腸黏膜細(xì)胞更新提供能量來(lái)源和代謝前體，從而能減少外界不利因素造成動(dòng)物 生產(chǎn)性能下降。近年來(lái)研究和實(shí)踐證明，三丁酸甘油酯與谷氨酰胺二肽具有很好的協(xié)同作 用，為腸上皮細(xì)胞提供能量的同時(shí)，修復(fù)小腸絨毛，有利于腸道健康及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的充分吸 收?？梢?jiàn)，若能將益生菌、寡糖、三丁酸甘油酯、谷氨酰胺二肽配伍優(yōu)化，發(fā)揮其協(xié)同作用，勢(shì) 必能很好地改善水產(chǎn)動(dòng)物腸道健康，減少腸道疾病的發(fā)生，提高動(dòng)物生產(chǎn)性能和飼料利用 率。但是，目前國(guó)內(nèi)外腸道健康調(diào)節(jié)產(chǎn)品多采用單一品種添加劑，使用效果不穩(wěn)定，尚未見(jiàn) 商品化的基于海水魚原籍有益菌的復(fù)合型腸道健康調(diào)節(jié)劑，亟待開展相關(guān)產(chǎn)品的研究和開 發(fā)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑，本發(fā)明利用白炭黑和 脫脂米糠實(shí)現(xiàn)四種單一添加劑的高效配伍，發(fā)揮其協(xié)同效果，效果明顯優(yōu)于單一添加劑。
[0006] 本發(fā)明的另一目的是提供復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法。
[0007] 本發(fā)明所采用的第一技術(shù)方案是，一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑，按照質(zhì) 量份包括以下組分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10份、 谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脫脂米糠15份-45份。
[0008] 本發(fā)明所采用的第二技術(shù)方案是，一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方 法，具體按照以下步驟實(shí)施：
[0009] 步驟1、制備益生菌粉，將短小芽孢桿菌SE5經(jīng)一級(jí)和二級(jí)搖瓶培養(yǎng)后，接種到發(fā) 酵罐，進(jìn)行液體發(fā)酵；發(fā)酵后離心收集菌體，在菌體中加入玉米淀粉作為載體，經(jīng)振動(dòng)流化 床干燥、粉碎、過(guò)濾、真空包裝，獲得可常溫保存的益生菌粉；
[0010] 步驟2、稱量，按照質(zhì)量份稱取組分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三 丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脫脂米糠15份-45 份；
[0011] 步驟3、將步驟2中稱量好的白炭黑作為載體吸附三丁酸甘油酯；再與上述稱量的 果寡糖、谷氨酰胺二肽及脫脂米糠載體進(jìn)行混合，最后該復(fù)合物與益生菌粉混合均勻，即得 復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑產(chǎn)品。
[0012] 本發(fā)明的特點(diǎn)還在于，
[0013] 一級(jí)培養(yǎng)具體為：用接種環(huán)挑取兩菌環(huán)斜面保存的短小芽孢桿菌SE5菌體接種 到6-10個(gè)裝有50mL培養(yǎng)基1的250mL三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，其中培養(yǎng)基1的組成為：牛肉 膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖18-25g，氯化鈉4-6g，蒸餾水IOOOmL;培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度 28-30°C ;初始 pH 值 6. 8-7. 2 ;搖床轉(zhuǎn)速 180-240rpm ;培養(yǎng)時(shí)間為 18-24h ;得到 300-500mL 的一級(jí)種子培養(yǎng)液。
[0014] 二級(jí)培養(yǎng)具體為：按照2-4%的比例將一級(jí)種子培養(yǎng)液接種到20-30個(gè)裝有400mL 培養(yǎng)基2的2000mL三角瓶中，其中，培養(yǎng)基2的組成為：牛肉膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖 18-25g，氯化鈉4-6g，蒸餾水IOOOmL ;培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度28-30°C ;初始pH值6. 8-7. 2 ; 搖床轉(zhuǎn)速180_240rpm ;培養(yǎng)時(shí)間為18-24h ;得到8-12L的二級(jí)種子培養(yǎng)液。
[0015] 液體發(fā)酵具體為：按照1% -5%的比例將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到培養(yǎng)基3中，其 中培養(yǎng)基3的組分為玉米粉12-18g，豆柏粉8-12g，玉米漿4-8g，硫酸銨5-8g，七水硫酸鎂 0. 8-1. 2g，三水合磷酸氫二鉀2-4g，硫酸錳0. 04-0. 06g，自來(lái)水IOOOmL;在500L發(fā)酵罐進(jìn) 行液體發(fā)酵，發(fā)酵條件為：發(fā)酵溫度28-3CTC;初始pH值6. 8-7. 2 ;攪拌轉(zhuǎn)速200-300rpm ;裝 液系數(shù)〇. 5;發(fā)酵時(shí)間為20-28h。
[0016]步驟1中離心條件為：轉(zhuǎn)速為4000-5000rpm;離心時(shí)間為10min-20min。
[0017] 菌體與玉米淀粉的質(zhì)量比為1:2-1:4。
[0018] 振動(dòng)流化床干燥條件為進(jìn)風(fēng)溫度60°C -100°C;出風(fēng)溫度40°C -60°C。
[0019] 過(guò)濾條件為80目篩。
[0020] 本發(fā)明的有益效果是：本石斑魚用復(fù)合腸道健康調(diào)節(jié)劑解決了以下問(wèn)題：第一， 存在的飼料加工過(guò)程導(dǎo)致益生菌失活進(jìn)而影響其使用效果問(wèn)題（目前市場(chǎng)上的益生菌需 要在活性狀態(tài)下才能發(fā)揮作用，然而水產(chǎn)飼料加工過(guò)程中制?；蚺蚧瘻囟群芨?，易導(dǎo)致益 生菌失活。本專利的短小芽孢桿菌SE5能在熱滅活狀態(tài)下發(fā)揮益生作用）；第二，多種添加 劑的高效配伍；該添加劑能促進(jìn)石斑魚腸道發(fā)育，修復(fù)腸黏膜損傷，激活腸黏膜免疫和系統(tǒng) 免疫功能，抑制石斑魚腸道致病菌如成團(tuán)泛菌（Pantoea agglomerans)和黑?；【╒ibrio ponticus)的生長(zhǎng)，調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，提高腸道消化酶活性，提高石斑魚生長(zhǎng)性能和飼料 利用效率。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1是本發(fā)明腸道健康調(diào)節(jié)劑對(duì)石斑魚腸道菌群的影響。

【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0023] 本發(fā)明提供一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑，按照質(zhì)量份包括以下組分：益 生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、二丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20 份、白炭黑10份 _20份、脫脂米糠15份-45份。
[0024] 其中，益生菌為分離自石斑魚腸道的原籍有益菌--短小芽孢桿菌SE5,活性和滅 活SE5能夠激活腸黏膜免疫功能和全身免疫功能，調(diào)節(jié)斜帶石斑魚腸道菌群平衡，促進(jìn)腸 道發(fā)育和消化酶分泌，提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度和飼料利用效率。該菌種經(jīng)中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè) 部《飼料添加劑品種目錄（2013)》批準(zhǔn)作為水產(chǎn)動(dòng)物飼料添加劑使用。本專利益生菌粉中短 小芽孢桿菌SE5總數(shù)達(dá)到2. OX101(lCFU/g;所述的果寡糖能選擇性促進(jìn)石斑魚腸道有益菌 增殖，與短小芽孢桿菌SE5具有協(xié)同作用（短小芽孢桿菌SE5能控制腸道致病菌的增殖）， 高效維持腸道菌群平衡；所述的三丁酸甘油酯和谷氨酰胺二肽具有很好的協(xié)同作用，為腸 上皮細(xì)胞提供能量的同時(shí)，修復(fù)腸黏膜損傷，有利于腸道健康及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，與益生菌 和果寡糖具有互補(bǔ)作用；所述的白炭黑、脫脂米糠為飼料添加劑載體，可實(shí)現(xiàn)益生菌粉、果 寡糖、三丁酸甘油酯和谷氨酰胺二肽的高效配伍，生產(chǎn)一種高效復(fù)合型石斑魚用腸道健康 調(diào)節(jié)劑，如圖1所示，該添加劑能促進(jìn)石斑魚腸道發(fā)育，修復(fù)腸黏膜損傷，激活腸黏膜免疫 和系統(tǒng)免疫功能，抑制石斑魚腸道致病菌如成團(tuán)泛菌（Pantoeaagglomerans)和黑海弧菌 (Vibrioponticus)的生長(zhǎng)。
[0025] 餌料中添加I. OX106CFU/g_l. OX108CFU/g短小芽孢桿菌SE5能夠很好發(fā)揮益生 作用。本發(fā)明益生菌粉中SE5含量為2.0X101(lCFU/g以上，因此，腸道健康調(diào)節(jié)劑產(chǎn)品中益 生菌粉比例為5份-10份，則SE5含量為L(zhǎng)0X109CFU/g-2.0X109CFU/g，按照0?1 %-0?2 % 添加到配合飼料中，則飼料中SE5的含量為I. OX106CFU/g-4. OX106CFU/g。益生菌粉比例 過(guò)大會(huì)增加成本，過(guò)低則難以發(fā)揮產(chǎn)品的效果。果寡糖20份-25份、三丁酸甘油酯5份-10 份、谷氨酰胺二肽15份-20份，均為其發(fā)揮作用的合適比例，過(guò)高則增加產(chǎn)品成本，過(guò)低則 效果欠佳。
[0026] 本發(fā)明還提供一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，具體按照以下步 驟實(shí)施：
[0027] 步驟1、益生菌發(fā)酵，用接種環(huán)挑取兩菌環(huán)斜面保存的短小芽孢桿菌SE5菌體接種 到6-10個(gè)裝有50mL培養(yǎng)基1的250mL三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，其中培養(yǎng)基1的組成為：牛肉 膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖18-25g，氯化鈉4-6g，蒸餾水IOOOmL;培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度 28-30°C;初始pH值6. 8-7. 2 ;搖床轉(zhuǎn)速180-240rpm ;培養(yǎng)時(shí)間為18-24h ;得到300-500mL的 一級(jí)種子培養(yǎng)液；按照2-4%的比例將一級(jí)種子培養(yǎng)液接種到20-30個(gè)裝有400mL培養(yǎng)基 2的2000mL三角瓶中，其中，培養(yǎng)基2的組分為牛肉膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖18-25g， 氯化鈉4-6g，蒸餾水IOOOmL ;培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度28-3CTC ;初始pH值6. 8-7. 2 ;攪拌轉(zhuǎn) 速180-240rpm ;培養(yǎng)時(shí)間為18-24h ;得到8-12L的二級(jí)種子培養(yǎng)液；之后，按照1% -5% 的比例將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到培養(yǎng)基3中，其中培養(yǎng)基3的組分為玉米粉12-18g，豆柏 粉8-12g，玉米漿4-8g，硫酸銨5-8g，七水硫酸鎂0. 8-1. 2g，三水合磷酸氫二鉀2-4g，硫酸 錳0. 04-0. 06g，自來(lái)水1000mL。在500L發(fā)酵罐進(jìn)行液體發(fā)酵，其中，發(fā)酵條件為：發(fā)酵溫度 28-30°C;初始pH值6. 8-7. 2 ;攪拌轉(zhuǎn)速200-300rpm ;裝液系數(shù)0. 5 ;發(fā)酵時(shí)間為20-28h ;發(fā) 酵后4000-5000rpm離心10min-20min收集菌體，在菌體中加入菌體質(zhì)量2-4倍玉米淀粉作 為載體，經(jīng)振動(dòng)流化床干燥（進(jìn)風(fēng)溫度60-100°C ;出風(fēng)溫度40-60°C )、粉碎、80目過(guò)篩、真 空包裝，獲得可常溫保存的益生菌粉；
[0028] 步驟2、稱量，按照質(zhì)量份稱取組分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三 丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脫脂米糠15份-45 份；
[0029] 步驟3、利用上述步驟1中稱量的白炭黑作為載體吸附三丁酸甘油酯；再與上述稱 量的果寡糖、谷氨酰胺二肽及脫脂米糠載體進(jìn)行混合，最后該復(fù)合物與益生菌粉混合均勻， 即得復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑產(chǎn)品。
[0030] 本方法的關(guān)鍵步驟為：（1)益生菌粉生產(chǎn)工藝的優(yōu)化。腸道原籍有益短小芽孢桿 菌SE5菌粉是腸道健康調(diào)節(jié)劑的核心成分。通過(guò)優(yōu)化其大規(guī)模液體發(fā)酵培養(yǎng)參數(shù)，確定高 產(chǎn)的培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)條件。經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)、菌體收集、加入載體、干燥、粉碎、過(guò)篩、真空包 裝，獲得益生菌菌粉。（2)四種單一添加劑的高效配伍。本發(fā)明利用白炭黑和脫脂米糠實(shí)現(xiàn) 四種添加劑的高效配伍，發(fā)揮其協(xié)同效果，效果優(yōu)于單一品種添加劑。
[0031] 在制備方法中，益生菌粉中短小芽孢桿菌SE5含量不低于2. 0X101(lCFU/g ;腸道健 康調(diào)節(jié)劑產(chǎn)品中3￡5含量為1.0\1090?"8-2.0\10 90?"8。該產(chǎn)品按照0.1%-0.2%添 加到配合飼料中，則飼料中SE5的含量為I. 0X106CFU/g-4. 0X106CFU/g，可保證其益生作 用的發(fā)揮。腸道健康調(diào)節(jié)劑產(chǎn)品中SE5含量過(guò)高會(huì)增加成本，過(guò)低則難以發(fā)揮益生菌的作 用。
[0032] 實(shí)施例1
[0033] -種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，具體按照以下步驟實(shí)施：益生 菌發(fā)酵，用接種環(huán)挑取兩菌環(huán)斜面保存的短小芽孢桿菌SE5菌體接種到10個(gè)裝有50mL培 養(yǎng)基1的250mL三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，其中培養(yǎng)基1的組成為：牛肉膏5g，蛋白胨10g，葡萄 糖20g，氯化鈉5g，蒸餾水IOOOmL ;培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度28°C ;初始pH值7. 0 ;搖床轉(zhuǎn)速 210rpm;培養(yǎng)時(shí)間為24h;得到500mL的一級(jí)種子培養(yǎng)液；按照3%的比例將一級(jí)種子培養(yǎng) 液接種到25個(gè)裝有400mL培養(yǎng)基2的2000mL三角瓶中，其中，培養(yǎng)基2為牛肉膏5g，蛋白胨 l〇g，葡萄糖20g，氯化鈉5g，蒸餾水IOOOmL;培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度28°C;初始pH值7.O;攪 拌轉(zhuǎn)速210rpm;發(fā)酵時(shí)間為24h;得到IOL的二級(jí)種子培養(yǎng)液；之后，按照3%的比例將二級(jí) 種子培養(yǎng)液接種到培養(yǎng)基3中，其中培養(yǎng)基3的組分為玉米粉15g，豆柏粉10g，玉米漿6g， 硫酸銨6g，七水硫酸鎂I. 0g，三水合磷酸氫二鉀3g，硫酸錳0. 05g，自來(lái)水1000mL。在500L 發(fā)酵罐進(jìn)行液體發(fā)酵，其中，發(fā)酵條件為：發(fā)酵溫度28°C;初始pH值7. 0 ;攪拌轉(zhuǎn)速250rpm; 裝液系數(shù)〇. 5 ;發(fā)酵時(shí)間為24h;發(fā)酵后4500rpm離心15min收集菌體，在菌體中加入菌體質(zhì) 量3倍玉米淀粉作為載體，經(jīng)振動(dòng)流化床干燥（進(jìn)風(fēng)溫度80°C;出風(fēng)溫度50°C)、粉碎、80 目過(guò)篩、真空包裝，獲得可常溫保存的益生菌粉；按照質(zhì)量份稱取組分：益生菌粉8份、果寡 糖22份、三丁酸甘油酯7份、谷氨酰胺二肽18份，白炭黑15份、脫脂米糠30份。利用上述 稱量的白炭黑作為載體吸附三丁酸甘油酯；再與上述稱量的果寡糖、谷氨酰胺二肽及脫脂 米糠載體進(jìn)行混合，最后該復(fù)合物與益生菌粉混合均勻，即得復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào) 節(jié)劑產(chǎn)品。
[0034] 下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果來(lái)說(shuō)明本實(shí)施例1的有益效果：
[0035] 表1腸道健康調(diào)節(jié)劑對(duì)斜帶石斑魚生長(zhǎng)性能和飼料系數(shù)的影響
[0036]

【權(quán)利要求】
1. 一種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑，其特征在于，按照質(zhì)量份包括以下組分：益 生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、二丁酸甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20 份、白炭黑10份_20份、脫脂米糠15份-45份。
2. -種復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于，具體按照以下步驟 實(shí)施： 步驟1、制備益生菌粉，將短小芽孢桿菌SE5經(jīng)一級(jí)和二級(jí)搖瓶培養(yǎng)后，接種到發(fā)酵罐， 進(jìn)行液體發(fā)酵；發(fā)酵后離心收集菌體，在菌體中加入玉米淀粉作為載體，經(jīng)振動(dòng)流化床干 燥、粉碎、過(guò)濾、真空包裝，獲得常溫保存的益生菌粉； 步驟2、稱量，按照質(zhì)量份稱取組分：益生菌粉5份-10份、果寡糖20份-25份、三丁酸 甘油酯5份-10份、谷氨酰胺二肽15份-20份、白炭黑10份-20份、脫脂米糠15份-45份； 步驟3、將步驟2中稱量好的白炭黑作為載體吸附三丁酸甘油酯；再與上述稱量的果寡 糖、谷氨酰胺二肽及脫脂米糠載體進(jìn)行混合，最后該復(fù)合物與益生菌粉混合均勻，即得復(fù)合 型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑產(chǎn)品。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于， 所述一級(jí)培養(yǎng)具體為：用接種環(huán)挑取兩菌環(huán)斜面保存的短小芽孢桿菌SE5菌體接種到6-10 個(gè)裝有50mL培養(yǎng)基1的250mL三角瓶中進(jìn)行培養(yǎng)，其中培養(yǎng)基1的組成為：牛肉膏4-6g，蛋 白胨8-12g，葡萄糖18-25g，氯化鈉4-6g，蒸餾水IOOOmL ;培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度28-30°C ; 初始pH值6. 8-7. 2 ;搖床轉(zhuǎn)速180-240rpm ;培養(yǎng)時(shí)間為18-24h ;得到300-500mL的一級(jí)種 子培養(yǎng)液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于， 所述二級(jí)培養(yǎng)具體為：按照2-4%的比例將一級(jí)種子培養(yǎng)液接種到20-30個(gè)裝有400mL培 養(yǎng)基2的2000mL三角瓶中，其中，培養(yǎng)基2為牛肉膏4-6g，蛋白胨8-12g，葡萄糖18-25g，氯 化鈉4-6g，蒸餾水IOOOmL ;培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度28-3CTC ;初始pH值6. 8-7. 2 ;攪拌轉(zhuǎn)速 180-240rpm ;發(fā)酵時(shí)間為18-24h ;得到8-12L的二級(jí)種子培養(yǎng)液。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于， 所述液體發(fā)酵具體為：按照1% -5%的比例將二級(jí)種子培養(yǎng)液接種到培養(yǎng)基3中，其中 培養(yǎng)基3的組分為玉米粉12-18g，豆柏粉8-12g，玉米漿4-8g，硫酸銨5-8g，七水硫酸鎂 0. 8-1. 2g，三水合磷酸氫二鉀2-4g，硫酸錳0. 04-0. 06g，蒸餾水IOOOmL ;在500L發(fā)酵罐進(jìn) 行液體發(fā)酵，發(fā)酵條件為：發(fā)酵溫度28-3CTC;初始pH值6. 8-7. 2 ;攪拌轉(zhuǎn)速200-300rpm ;裝 液系數(shù)〇. 5 ;發(fā)酵時(shí)間為20-28h。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于， 所述步驟1中離心條件為：轉(zhuǎn)速為4000-5000rpm ;離心時(shí)間為10min_20min。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于， 所述菌體與玉米淀粉的質(zhì)量比為1:2-1:4。
8. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于， 所述振動(dòng)流化床干燥條件為進(jìn)風(fēng)溫度60°C -100°C ;出風(fēng)溫度40°C -60°C。
9. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于， 所述過(guò)濾條件為80目篩。
10. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的復(fù)合型石斑魚用腸道健康調(diào)節(jié)劑的制備方法，其特征在于， 所述益生菌粉中短小芽孢桿菌SE5含量不低于2. OX 101(lCFU/g，腸道健康調(diào)節(jié)劑中短小芽 孢桿菌SE5含量不低于I. OX 109CFU/g。
【文檔編號(hào)】A23K1/16GK104323029SQ201410617985
【公開日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2014年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月5日
【發(fā)明者】孫云章, 楊紅玲, 夏漢欽, 趙蕓, 葉繼丹 申請(qǐng)人:集美大學(xué)