專利名稱：：生產(chǎn)改變含油量的植物的制作方法相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2004年5月28日提交的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)60/575,202的優(yōu)先權(quán)，其內(nèi)容全部引入作為參考。
背景技術(shù)：
：操縱農(nóng)作物種子的組成，尤其是種子油類的含量和組成的能力在涉及加工食品油類以及動(dòng)物飼養(yǎng)油類的農(nóng)業(yè)工業(yè)中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。農(nóng)作物的種子含有多種有價(jià)值的組分，包括油類，蛋白以及淀粉。工業(yè)生產(chǎn)過(guò)程可以分離若干或所有這些組分用于專門應(yīng)用的單獨(dú)銷售。例如，幾乎60％的美國(guó)大豆農(nóng)作物通過(guò)大豆加工工業(yè)進(jìn)行壓榨。大豆加工產(chǎn)生高價(jià)銷售的精煉油，而殘余物主要作為低價(jià)值的飼料銷售(USSoybeanBoard，2001SoyStats)。加拿大油菜(canola)種子被壓榨產(chǎn)生油類以及副產(chǎn)品加拿大油菜粗粉(加拿大加拿大油菜協(xié)會(huì))。幾乎20％的1999/2000年的美國(guó)玉米農(nóng)作物經(jīng)過(guò)工業(yè)化精煉，主要用于產(chǎn)生淀粉，乙醇以及油類(玉米精煉業(yè)者協(xié)會(huì))。因此，常常需要使種子的含油量最大化。例如，對(duì)于諸如大豆以及加拿大油菜的加工含油種子而言，提高種子的絕對(duì)含油量將提高這種谷物的價(jià)值。對(duì)于加工的玉米而言，可能需要根據(jù)其它主要組分的應(yīng)用提高或者降低含油量。降低油類可以通過(guò)降低與油類氧化相關(guān)的不希望的味道改善分離的淀粉的質(zhì)量?；蛘撸谖兜啦⒉恢匾囊掖籍a(chǎn)生中，提高含油量可以提高總的價(jià)值。在許多谷物飼料中，諸如玉米以及小麥，可能希望提高植物含油量，因?yàn)橛皖惐戎T如碳水化合物的其它種子組分具有較高的能含量。含油種子加工，就像大多數(shù)谷物加工業(yè)一樣是資金密集型產(chǎn)業(yè)；因此產(chǎn)品從低值組分到高價(jià)值油類組分的產(chǎn)品分布的較小改變可能對(duì)于谷物加工者而言就具有顯著的經(jīng)濟(jì)影響。油類的生物技術(shù)處理可以提供組成的改變以及油產(chǎn)量的改進(jìn)。組成的改變尤其包括高油酸的大豆以及玉米油(美國(guó)專利6,229,033以及6,248,939)，以及含有月桂酸酯的種子(美國(guó)專利5,639,790)等。組成改變的工作主要集中在加工的含油種子但是已經(jīng)可以很容易地延伸至非-含油種子農(nóng)作物包括玉米。雖然對(duì)提高含油量具有相當(dāng)?shù)呐d趣，在這一領(lǐng)域目前唯一可行的生物技術(shù)是高油類玉米(HOC)技術(shù)(杜邦，美國(guó)專利5,704,160)。HOC利用通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的選擇育種連同生產(chǎn)系統(tǒng)中稱為頂交(TopCross)的優(yōu)良品種(不孕雄性)雜交雌性得到的高油類授粉者。頂交高油類系統(tǒng)使玉米收獲的谷物含油量從～3.5％提高到～7％，改善了谷物的能含量。雖然HOC生產(chǎn)系統(tǒng)已經(jīng)卓有成效，但是其仍然具有固有的局限性。首先，擔(dān)負(fù)全部的土地的種子栽植的低授粉者百分比的系統(tǒng)含有固有風(fēng)險(xiǎn)，尤其是在旱年。第二，當(dāng)前HOC領(lǐng)域含油量已經(jīng)平穩(wěn)在大約9％的油類。最后，高油類玉米主要不是生物化學(xué)變化，而是對(duì)于提高含油量產(chǎn)生間接結(jié)果的解剖學(xué)上的突變體(提高胚芽尺寸)。為此，可選擇的高油類策略，尤其是來(lái)源于改變生化產(chǎn)量的高油類策略將是非常重要的。操作油市場(chǎng)最明顯的目標(biāo)農(nóng)作物是大豆以及油菜籽，并且大量商業(yè)工作(例如美國(guó)專利5,952,544；PCT申請(qǐng)WO9411516)證明擬南芥是這些農(nóng)作物中油類代謝的優(yōu)良模型。種子油組合物的生物化學(xué)篩選已經(jīng)鑒定了擬南芥的許多關(guān)鍵生物合成酶基因并且導(dǎo)致農(nóng)業(yè)上重要基因的直向同源物被鑒定出來(lái)。例如，利用化學(xué)誘變處理群的篩選已經(jīng)鑒定了其種子顯示脂肪酸成份改變的脂類突變體(LemieuxB等1990，James以及Dooner，1990)。檢測(cè)脂肪酸成份改變的T-DNA誘變篩選(Feldmann等1989)鑒定了ω3脫氫酶(FAD3)以及δ-12脫氫酶(FAD2)基因(美國(guó)專利5952544；Yadav等，1993；Okuley等，1994)。集中在含油量而非油類質(zhì)量的篩選分析化學(xué)上誘導(dǎo)的皺縮種子或籽粒密度改變的突變體，據(jù)此推斷出改變的植物含油量(Focks以及Benning，1998)。用來(lái)鑒定參與非常長(zhǎng)鏈脂肪酸產(chǎn)生的酶的另一種篩選鑒定了編碼負(fù)責(zé)降低種子中三酰甘油聚集的甘油二酯?；D(zhuǎn)移酶(DGAT)的基因的突變(KatavicV等，1995)。此外，還顯示DGATcDNA的種子特異性過(guò)表達(dá)與提高的植物含油量有關(guān)(Jako等，2001)。植物中的激活標(biāo)簽法是一種通過(guò)插入包含調(diào)節(jié)序列(例如，增強(qiáng)子)的異源核酸構(gòu)建體到植物基因組中而產(chǎn)生隨機(jī)突變的方法。調(diào)節(jié)序列可起到增強(qiáng)一個(gè)或多個(gè)天然植物基因轉(zhuǎn)錄的作用；因此，激活標(biāo)簽法是一種用于產(chǎn)生功能獲得(gain-of-function)，通常是顯性突變體的有效方法(參見(jiàn)，例如，Hayashi等，1992；WeigelD等，2000)。插入的構(gòu)建體提供了一種分子標(biāo)簽，其用于快速鑒定由于其錯(cuò)表達(dá)引起突變表型的天然植物。激活標(biāo)簽法同時(shí)可導(dǎo)致功能喪失的表型。插入可導(dǎo)致天然植物基因的破壞，在該情況中表型通常是隱性的。激活標(biāo)簽法已經(jīng)被用于多種物種，包括煙草和擬南芥，來(lái)鑒定各種突變表型和與這些表型相關(guān)的基因(Wilson，等，1996，Schaffer等，1998，F(xiàn)ridborg等，1999；Kardailsky等，1999；ChristensenS等，1998)。發(fā)明概述本發(fā)明提供了具有高油類含量表型的轉(zhuǎn)基因植物。轉(zhuǎn)基因植物包括含有編碼或互補(bǔ)于編碼HIO1002多肽的核苷酸序列的轉(zhuǎn)化載體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，轉(zhuǎn)基因植物選自油菜籽，大豆，玉米，向日葵，棉花，可可，紅花，油棕，椰子，亞麻，蓖麻以及花生。本發(fā)明還提供了產(chǎn)生油類的方法，包括培育轉(zhuǎn)基因植物以及從所述植物回收油類。本發(fā)明還提供了具有高油表型的轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞。所述轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞包括含有編碼或者互補(bǔ)于編碼高油(下文稱作“HIO1002”)多肽的序列的核苷酸序列的轉(zhuǎn)化載體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，該轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞選自油菜籽，大豆，玉米，向日葵，棉花，可可，紅花，油棕，椰子，亞麻，蓖麻以及花生。在其它實(shí)施方案中，所述植物細(xì)胞為種子，花粉，繁殖體或者胚芽細(xì)胞。本發(fā)明進(jìn)一步提供了含有編碼HIO1002多肽的核酸序列的飼料，粗粉，谷物，食品或者種子。本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因植物通過(guò)包括向植物的祖細(xì)胞導(dǎo)入含有編碼或互補(bǔ)于編碼HIO1002多肽的序列的核苷酸序列的植物轉(zhuǎn)化載體，以及培育轉(zhuǎn)化的祖細(xì)胞產(chǎn)生轉(zhuǎn)基因植物的方法產(chǎn)生，其中的HIO1002多核苷酸序列的表達(dá)產(chǎn)生高油類含量表型。本發(fā)明還提供了從所述轉(zhuǎn)基因植物獲得的植物細(xì)胞。本發(fā)明還提供了超過(guò)約10,000，更優(yōu)選約20,000，甚至優(yōu)選約40,000粒種子的容器，其中超過(guò)約10％，更優(yōu)選約25％，更優(yōu)選約50％，甚至更優(yōu)選約75％或者更優(yōu)選約90％的種子為來(lái)源于本發(fā)明的植物的種子。本發(fā)明還提供了超過(guò)約10kg，更優(yōu)選約25kg，甚至更優(yōu)選約50kg種子的容器，其中超過(guò)約10％，更優(yōu)選約25％，更優(yōu)選約50％，甚至更優(yōu)選約75％或者更優(yōu)選約90％的種子為來(lái)源于本發(fā)明的植物的種子。本發(fā)明的任一植物或其部分可以被加工產(chǎn)生飼料，粗粉或者油制劑。用于該目的的尤其優(yōu)選的植物部分為種子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，飼料，粗粉或者油制劑被設(shè)計(jì)用于反芻動(dòng)物。生產(chǎn)飼料，粗粉和油制劑的方法是本領(lǐng)域公知的。例如，參見(jiàn)美國(guó)專利4,957,748；5,100,679；5,219,596；5,936,069；6,005,076；6,146,669；以及6,156,227。本發(fā)明的粗粉可以與其他的粗粉混合。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，產(chǎn)自本發(fā)明的植物或者由本發(fā)明的方法產(chǎn)生的粗粉構(gòu)成任一產(chǎn)品的粗粉組分的超過(guò)約0.5％，約1％，約5％，約10％，約25％，約50％，約75％或約90％體積或者重量。在另一實(shí)施方案中，可以混合粗粉制劑并可以構(gòu)成混合物超過(guò)約10％，約25％，約35％，約50％或約75％的體積。發(fā)明詳述定義除非另有陳述，這里使用的全部技術(shù)以及科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本領(lǐng)域技術(shù)人員知曉的相同的含義。專業(yè)人員尤其參考Sambrook等，1989，以及AusubelFM等，1993的定義以及術(shù)語(yǔ)。應(yīng)該理解本發(fā)明不限于所描述的特定方法，流程以及試劑，因?yàn)檫@些可以改變。此處所述的術(shù)語(yǔ)“載體”是指設(shè)計(jì)用于在不同宿主細(xì)胞之間轉(zhuǎn)移的核酸構(gòu)建體?！氨磉_(dá)載體”是指可以在異源細(xì)胞中整合并表達(dá)異源DNA片段的載體。許多原核以及真核生物表達(dá)載體是可以市售獲得的。選擇合適的表達(dá)載體是本領(lǐng)域述人員所熟知的?！爱愒吹摹焙怂針?gòu)建體或序列具有一部分序列不是植物細(xì)胞的野生型序列但是在其中表達(dá)。異源的控制序列是指不天然調(diào)節(jié)目前正在調(diào)節(jié)的相同基因表達(dá)的控制序列(即啟動(dòng)子或增強(qiáng)子)。通常，異源核酸序列不是它們所存在于的細(xì)胞或者基因組的一部分所內(nèi)源產(chǎn)生的，但是已經(jīng)通過(guò)傳染，轉(zhuǎn)染，顯微注射，電穿孔法等添加到細(xì)胞中?！爱愒吹摹焙怂針?gòu)建體可以含有控制序列/DNA編碼序列組合，其與野生型植物中發(fā)現(xiàn)的控制序列/DNA編碼序列組合相同或者不同。此處所述的術(shù)語(yǔ)“基因”是指參與多肽鏈產(chǎn)生的DNA片段，其可能包括或者不包括編碼區(qū)之前以及之后的區(qū)域，例如5′非翻譯區(qū)(5′UTR)或者“前導(dǎo)”序列以及3′UTR或者“尾部”序列以及單獨(dú)的編碼片段(外顯子)以及非-轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)序列之間的內(nèi)含子序列(內(nèi)含子)。這里使用的“重組體”包括已經(jīng)通過(guò)導(dǎo)入異源的核酸序列進(jìn)行修飾的細(xì)胞或者載體，或者所述細(xì)胞來(lái)源于如此修飾的細(xì)胞。因此，例如，重組細(xì)胞表達(dá)在天然(非-重組體)形式的細(xì)胞內(nèi)沒(méi)有發(fā)現(xiàn)相同形式的基因或者表達(dá)在人為干預(yù)下完全表達(dá)或者完全不表達(dá)的異常表達(dá)的天然基因。此處所述的術(shù)語(yǔ)“基因表達(dá)”是指基于基因的核酸序列產(chǎn)生的多肽的過(guò)程。所述過(guò)程包括轉(zhuǎn)錄以及翻譯；因此“表達(dá)”可以是針對(duì)多核苷酸或者多肽序列或者兩者。有時(shí)，多核苷酸序列的表達(dá)不會(huì)引起蛋白翻譯?！斑^(guò)表達(dá)”是指相對(duì)于其在野生型(或者其它的參考[例如，非-轉(zhuǎn)基因])植物中的表達(dá)，多核苷酸和/或多肽序列表達(dá)增加并且可能涉及自然存在或者非-自然存在的序列?！爱愇槐磉_(dá)”是指在未-改變或者野生型植物中不自然發(fā)生的，在某時(shí)，某地和/或提高水平的表達(dá)?！跋抡{(diào)表達(dá)”是指多核苷酸和/或多肽序列，通常是內(nèi)源性基因相對(duì)于其在野生型植物中表達(dá)的降低表達(dá)。術(shù)語(yǔ)“錯(cuò)誤表達(dá)”以及“改變表達(dá)”包括過(guò)表達(dá)，下調(diào)表達(dá)以及異位表達(dá)。在將核酸序列插入細(xì)胞的概念中，術(shù)語(yǔ)“引入的”是指“轉(zhuǎn)染”，或者“轉(zhuǎn)化”或者“轉(zhuǎn)導(dǎo)”，并且包括核酸序列整合到真核或者原核細(xì)胞中，其中核酸序列可以整合入細(xì)胞的基因組(例如染色體，質(zhì)粒，質(zhì)體或者線粒體DNA)，轉(zhuǎn)化為自主復(fù)制子，或者瞬間表達(dá)(例如，轉(zhuǎn)染的mRNA)。本文使用的“植物細(xì)胞”是指來(lái)源于植物的任意細(xì)胞，包括來(lái)自未分化的組織(例如愈傷組織)以及植物種子，花粉，繁殖體(progagules)以及胚的細(xì)胞。此處所述的術(shù)語(yǔ)“天然的”以及“野生型”相對(duì)于給定植物性狀或者表型是指具有在相同種類的植物本身發(fā)現(xiàn)的特征或者表型的形式。此處所述的術(shù)語(yǔ)關(guān)于植物特性的“修飾”是指轉(zhuǎn)基因植物相對(duì)于類似的非-轉(zhuǎn)基因植物的表型的改變。對(duì)于轉(zhuǎn)基因植物的“目的表型(性狀)”，指通過(guò)T1和/或后代植物證明的可觀察到的或可測(cè)量的表型，相應(yīng)的非轉(zhuǎn)基因植物不顯示該表型(也即，在相似條件下培養(yǎng)或分析的基因型類似的植物)。目的表型可表示對(duì)植物的改良，或可提供一種在其他植物中產(chǎn)生改良的方法?！案牧肌笔且环N通過(guò)給植物提供獨(dú)特的和/或新的品質(zhì)，而增強(qiáng)植物物種或品種的實(shí)用性的特征?！案淖兒土勘硇汀敝高z傳修飾植物的可測(cè)量表型，其中與類似的，但是非修飾的植物相比，該植物顯示統(tǒng)計(jì)上顯著增加或減少的總體含油量(即，油類占種子質(zhì)量的百分比)。高油表型指總體含油量增加。本文使用的“突變體”多核苷酸序列或者基因與相應(yīng)的野生型多核苷酸序列或者基因在序列或者表達(dá)上不同，其中的差異導(dǎo)致修飾的植物的表型或者性狀。相對(duì)于植物或植物株系，術(shù)語(yǔ)“突變體”是指植物或者株系具有修飾的植物表型或性狀，其中修飾的表型或性狀與野生型多核苷酸序列或基因的修飾表達(dá)有關(guān)。此處所述的術(shù)語(yǔ)“T1”是指來(lái)自T0植物的種子的植物子代。T1子代是可通過(guò)應(yīng)用選擇性試劑篩選的第一系列轉(zhuǎn)化的植物，所述的選擇性試劑為例如抗生素或除草劑，由此轉(zhuǎn)基因植物含有相應(yīng)的抗性基因。術(shù)語(yǔ)“T2”是指通過(guò)T1植物的花進(jìn)行自體受精產(chǎn)生的植物子代，所述T1植物之前被篩選作為轉(zhuǎn)基因植物。T3植物是由T2植物等產(chǎn)生的。這里所述的特定植物的“直系子代”來(lái)源于所述植物的種子(或者，有時(shí)來(lái)自其它的組織)且是緊隨的子代；例如，對(duì)于特定的家系而言，T2植物是T1植物的直系子代。特定植物的“間接子代”來(lái)源于所述植物直系子代的種子(或其它組織)，或來(lái)自該家系隨后子代的種子(或其它組織)；例如，T3植物是T1植物的間接子代。此處所述的術(shù)語(yǔ)“植物部分”包括任意的植物器官或組織，包括，但不限于種子，胚，分生組織區(qū)域，愈傷組織，葉，根，芽，配子體，孢子體，花粉和小孢子。植物細(xì)胞可獲自任意的植物器官或組織以及由其制備的培養(yǎng)物?？捎糜诒景l(fā)明方法的植物種類通常是廣泛的，其可以是可用于轉(zhuǎn)化技術(shù)的高等植物，包括單子葉的和雙子葉的植物。在這里所述的“轉(zhuǎn)基因植物”包括在其基因組內(nèi)含有異源多核苷酸的植物。異源的多核苷酸可以穩(wěn)定地整合到基因組中，或可以被插入到染色體外。優(yōu)選地，本發(fā)明的多核苷酸被穩(wěn)定地整合到基因組中從而使多核苷酸被連續(xù)傳代。植物細(xì)胞，組織，器官或已被導(dǎo)入異源多核苷酸的植物被認(rèn)為是“轉(zhuǎn)化的”，“轉(zhuǎn)染的”或“轉(zhuǎn)基因的”植物。也含有該異源多核苷酸的轉(zhuǎn)化植物或植物細(xì)胞的直系和間接子代也被視為是轉(zhuǎn)基因的?？梢岳脤⑺璧木幋a所需蛋白的聚核苷酸序列導(dǎo)入植物細(xì)胞的多種方法，并且這些方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員也是公知的，包括但不限于(1)諸如微注射，電穿孔和微粒介導(dǎo)的遞送(粒子槍(biolistic)或基因槍技術(shù))；(2)病毒介導(dǎo)的遞送技術(shù)；以及(3)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化方法。最常使用的轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞的方法是農(nóng)桿菌介導(dǎo)的DNA轉(zhuǎn)化方法和粒子槍或微粒轟擊介導(dǎo)的方法(即，基因槍)。通常，核轉(zhuǎn)化是所希望的，但是當(dāng)需要用于特異性轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，諸如葉綠體或者造粉體時(shí)，可以利用微粒介導(dǎo)遞送所需的多核苷酸轉(zhuǎn)化植物質(zhì)粒。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化通過(guò)使用基因工程化的屬于農(nóng)桿菌屬的土壤細(xì)菌實(shí)現(xiàn)。具有Ti或Ri質(zhì)粒的根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriumtumefaciens)以及發(fā)根農(nóng)桿菌(AgrobacteriumRhizogenes)的大量野生型以及卸甲(disarmed)株可用于向植物進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化。通過(guò)將可被基因工程化攜帶任一所需DNA片段的稱作“T-DNA”的特異性DNA轉(zhuǎn)化到很多品種的植物內(nèi)進(jìn)行基因轉(zhuǎn)化。農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物的遺傳轉(zhuǎn)化包括若干步驟。第一步，首先將毒性的農(nóng)桿菌和植物細(xì)胞彼此接觸，通常這一步稱作“接種”。接種后，使農(nóng)桿菌和植物細(xì)胞/組織在一起培養(yǎng)幾小時(shí)到幾天的時(shí)間或者更長(zhǎng)時(shí)間，培養(yǎng)條件適于生長(zhǎng)和T-DNA的轉(zhuǎn)化。這一步稱作“共培養(yǎng)”。共培養(yǎng)和T-DNA遞送以后，用殺細(xì)菌或者制菌劑處理植物細(xì)胞滅殺與外植體接觸或者保留在含有外植體分容器中的農(nóng)桿菌。如果在缺乏任一選擇劑促進(jìn)轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞相比非轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的優(yōu)先生長(zhǎng)的條件下進(jìn)行，通常這一步稱作“延遲”步驟。如果在存在選擇性好壓轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞的條件下進(jìn)行，這一步稱作“選擇”步驟。在使用“延遲”步驟時(shí)，通常緊接著一個(gè)或者多個(gè)“選擇步驟”。對(duì)于微粒轟擊(美國(guó)專利5,550,318(Adams等)；美國(guó)專利5,538,880(Lundquist等)，美國(guó)專利5,610,042(Chang等)；以及PCT公開WO95/06128(Admas等)；每一個(gè)都在此處具體引入作為參考)而言，粒子涂覆有核酸并通過(guò)推進(jìn)力遞送到細(xì)胞中。示范性的粒子包括鎢，鉑，并優(yōu)選金。通過(guò)加速將DNA遞送到植物細(xì)胞中的方法的示范性實(shí)施方案為粒子槍粒子遞送系統(tǒng)(BiolisticsParticleDeliverySystem)(BioRad，Hercule，CA)，該系統(tǒng)可被用于將通過(guò)篩子，諸如不銹鋼或者Nytex篩子涂覆DNA或者細(xì)胞的粒子推進(jìn)到用懸浮培養(yǎng)的單子葉植物細(xì)胞覆蓋的過(guò)濾器表面上。微粒轟擊技術(shù)是廣泛應(yīng)用的技術(shù)，并且可幾乎被用于轉(zhuǎn)化任一的植物品種。已通過(guò)微粒轟擊轉(zhuǎn)化的植物品種的實(shí)例包括單子葉植物品種，諸如玉米(國(guó)際公開WO95/06128)(Adams等)，大麥，小麥(美國(guó)專利5,563,055(Townsend等)，在此處全文引入作為參考)，大米，燕麥，黑麥(rye)，甘蔗以及高粱；以及大量包括煙草，大豆的雙子葉植物(美國(guó)專利5,322,783(Tomes等)，在此處全文引入作為參考)，向日葵，花生，棉花，番茄以及豆類(美國(guó)專利5,563,055(Townsend等)在此處全文引入作為參考)。為了不考慮轉(zhuǎn)化方法對(duì)轉(zhuǎn)化的植物細(xì)胞進(jìn)行選擇或者記分，導(dǎo)入細(xì)胞中的DNA含有在可再生的植物組織中發(fā)揮產(chǎn)生對(duì)植物組織賦予對(duì)其他毒性化合物抗性的化合物的基因。用作可選擇的，可篩選的或者可記分的標(biāo)記的目的基因包括但不限于GUS，綠色熒光蛋白(GFP)，熒光酶(LUX)，抗生素或者除草劑耐受基因?？股乜剐曰虻膶?shí)例包括青霉素，卡那霉素(以及新霉素，G418，博來(lái)霉素)；氨甲蝶呤(以及三甲氧芐二氨嘧啶)；氯霉素；卡那霉素以及四環(huán)素。編碼參與除草劑耐受的蛋白的多核苷酸分子是本領(lǐng)域公知的，包括但不限于美國(guó)專利5,627,061(Barry等)，美國(guó)專利5,633,435(Barry等)，以及美國(guó)專利6,040,497(Spencer等)記載的編碼5-烯醇丙酮基莽草酸鹽-3-磷酸鹽合成酶(EPSPS)以及美國(guó)專利5,094,945(Comai)描述的用于耐受glyphosate的aroA；描述于美國(guó)專利4,810,648(Duerrschnabel等)用于耐受溴苯腈(bromoxynil)的編碼溴苯腈水解酶(Nitrilase)(Bxn)的多核苷酸分子；描述于Misawaetal，(1993)PlantJ.4833-840andMisawaetal，(1994)PlantJ.6481-489用于耐受噠草伏(norflurazon)的編碼八氫番茄紅素脫氫酶(crtI)的多核苷酸分子；描述于Sathasiivan等，(1990)Nucl.AcidsRes.182188-2193a用于耐受磺酰脲類除草劑的編碼乙酰羥基酸合成酶(AHAS，akaALS)的多核苷酸分子；以及描述于DeBlock，etal.(1987)EMBOJ.62513-2519用于耐受草銨膦(Glufosinate)和雙丙氨膦(bialaphos)的bar基因。從多種轉(zhuǎn)化的外植體再生，發(fā)育和培育植物是本領(lǐng)域公知的。這種再生和生長(zhǎng)過(guò)程通常包括選擇轉(zhuǎn)化的細(xì)胞以及通過(guò)常規(guī)的胚芽發(fā)育到生根的小苗發(fā)育階段培育這些單獨(dú)的細(xì)胞的階段。類似地再生轉(zhuǎn)基因胚芽和種子。然后將所產(chǎn)生的轉(zhuǎn)基因生根的小苗種植在合適的植物生長(zhǎng)介質(zhì)，諸如土壤中。暴露選擇性試劑單存活下來(lái)的細(xì)胞，或者在篩選分析中記分為陽(yáng)性的細(xì)胞可以培養(yǎng)在支持植物體再生的培養(yǎng)基中。將發(fā)育中的小苗轉(zhuǎn)移到土壤較少的植物生長(zhǎng)混合物中，并在轉(zhuǎn)移到溫室或者用于成熟的生長(zhǎng)室之前使(幼苗)受冷而變得耐寒。本發(fā)明可以與轉(zhuǎn)化的細(xì)胞或者組織一起使用。本文中所使用的“可轉(zhuǎn)化的”是指能夠進(jìn)一步繁殖產(chǎn)生植物體的細(xì)胞或者組織。本領(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)識(shí)到大量插入外源DNA的植物細(xì)胞或者組織是可以轉(zhuǎn)化的，并且在合適的培養(yǎng)條件下，該植物細(xì)胞或者組織可以形成分化的植物。適于這些目的的組織可以包括但不限于未成熟的胚芽，小組織，懸浮細(xì)胞培養(yǎng)物，未成熟的花序，莖分生組織，結(jié)外植體，愈傷組織，下胚軸組織，子葉，根和葉?？梢允褂萌我缓线m的培養(yǎng)基。合適的培養(yǎng)基的實(shí)例包括但不限于基于MS-的培養(yǎng)基(MurashigeandSkoog，Physiol.Plant，15473-497，1962)或填充有包括但不限于植物激素，細(xì)胞分裂素，ABA和赤霉素的其他植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的基于N6-的培養(yǎng)基(Chu等，ScientiaSinica18659，1975)。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知多種組織培養(yǎng)基，其當(dāng)進(jìn)行適當(dāng)補(bǔ)充時(shí)可以支持植物組織生長(zhǎng)和發(fā)育并適于植物轉(zhuǎn)化和再生。這些組織培養(yǎng)基可以作為市售制劑，或者用戶制備以及改進(jìn)的試劑出售。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以認(rèn)識(shí)到用于轉(zhuǎn)化和再生的諸如營(yíng)養(yǎng)劑和生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的培養(yǎng)基和培養(yǎng)基補(bǔ)充劑以及其他培養(yǎng)條件，諸如培養(yǎng)期間的光密度，pH，可被優(yōu)化用于特定的多種目的的培養(yǎng)溫度。本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到將表達(dá)盒穩(wěn)定整合到轉(zhuǎn)基因植物并證實(shí)可以操作后，可以通過(guò)有性雜交導(dǎo)入其他的植物體內(nèi)。取決于所雜交的品種，可以使用大量標(biāo)準(zhǔn)的繁殖技術(shù)。具有改變的含油量表型的植物的鑒定我們使用擬南芥激活標(biāo)簽篩選來(lái)鑒定我們已經(jīng)鑒定并命名為“HIO1002”(Atlg73650；GI#30698954)編碼蛋白(GI#18410409)的基因與改變的含油量表型(具體地，高油表型)之間的關(guān)聯(lián)。剪接變體及其相應(yīng)的GenBank入口如下所述。簡(jiǎn)要地，而且如實(shí)施例中進(jìn)一步描述的，用pSKI015載體對(duì)許多擬南芥植物進(jìn)行了突變，所述載體包含來(lái)自根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA，病毒增強(qiáng)子元件和選擇標(biāo)記基因(Weigel等，2000)。當(dāng)T-DNA插入到轉(zhuǎn)化植物的基因組中時(shí)，增強(qiáng)子元件可導(dǎo)致附近基因的上調(diào)，通常在增強(qiáng)子的大約10千堿基(kb)內(nèi)。為了特異性回收表達(dá)選擇性標(biāo)記并因此具有T-DNA插入序列的轉(zhuǎn)化植物，把T1植物暴露于選擇劑。從這些轉(zhuǎn)化的T1植物收集大約15-20顆T2種子，并從全種子提取脂類。進(jìn)行氣相色譜(GC)分析，以測(cè)定種子樣本的脂肪酸含量和組成。對(duì)顯示高油表型的擬南芥系進(jìn)行了鑒定。通過(guò)分析所鑒定的品系中側(cè)翼T-DNA插入片段基因組DNA序列發(fā)現(xiàn)了HIO1002基因與高油表型之間的關(guān)聯(lián)。因此，HIO1002基因和/或多肽可用于開發(fā)具有修飾的含油量表型(“HIO1002表型”)的基因修飾的植物。HIO1002基因可用于產(chǎn)生含油種子作物，其從含油種子加工提供提高的產(chǎn)油量，以及用于生產(chǎn)能提供能量增加的飼料谷物作物用于動(dòng)物飼養(yǎng)。HIO1002基因可進(jìn)一步用于增加特種油料作物的含油量，以便增加所需稀有脂肪酸的產(chǎn)量。已經(jīng)進(jìn)行遺傳修飾表達(dá)HIO1002的轉(zhuǎn)基因植物可用于生產(chǎn)油，其中利用標(biāo)準(zhǔn)方法培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因植物，并從植物部分(例如，種子)獲得油。HIO1002核酸和名肽擬南芥HIO1002核酸序列提供于SEQIDNO1，3或5以及Genbank登錄號(hào)GI#30698954。對(duì)應(yīng)的蛋白序列提供于SEQIDNO2以及GI#18410409中。還鑒定了兩個(gè)推定的剪接變體，其編碼COOH末端不同于SEQIDNO2的蛋白GI#30698952(SEQIDNO3)，具有相應(yīng)的蛋白序列GI#30698953(SEQIDNO4)，與SEQIDNO2直至E288具有100％的同一性，并結(jié)束于LG，氨基酸位置分別為289以及290；以及GI#42572098(SEQIDNO5)具有相應(yīng)的蛋白序列為GI#42572099(SEQIDNO6)，與SEQIDNO2直至E288具有100％的同一性，并且結(jié)束于GRLQNSKEKEVKDD，氨基酸分別為289-302。擬南芥HIO1002的直系同源物或旁系同源物的核酸和/或蛋白描述于下面的實(shí)施例3中。如這里使用的術(shù)語(yǔ)“HIO1002多肽”指全長(zhǎng)HIO1002蛋白或其“功能活性”的片段，衍生物(變體)或者直系同源物，指該蛋白片段，衍生物或者直系同源物顯示與SEQIDNO2，4或6的多肽相關(guān)的一種或多種功能活性。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，功能活性HIO1002多肽，當(dāng)在植物中錯(cuò)表達(dá)時(shí)，導(dǎo)致改變的含油量表型。在更進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，HIO1002多肽在植物中的錯(cuò)表達(dá)導(dǎo)致高油表型。在另一個(gè)實(shí)施方案中，功能活性HIO1002多肽當(dāng)在植物或植物細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，能拯救缺陷的(包括缺失的)內(nèi)源HIO1002活性；該拯救多肽可來(lái)自與具有缺陷活性的植物相同的或不同的物種。在另一個(gè)實(shí)施方案中，全長(zhǎng)HIO1002多肽的功能活性片段(也即，具有SEQIDNO2的序列的天然多肽或其天然存在的直系同源物)保留與全長(zhǎng)HIO1002多肽相關(guān)的一種或多種生物學(xué)特性，例如信號(hào)活性，結(jié)合活性，催化活性或細(xì)胞或者細(xì)胞外定位活性。HIO1002片段優(yōu)選包括HIO1002結(jié)構(gòu)域，例如C-或N-末端或者催化結(jié)構(gòu)域，尤其，優(yōu)選包括HIO1002蛋白的至少10個(gè)，優(yōu)選至少20個(gè)，更優(yōu)選至少25個(gè)，最優(yōu)選至少50個(gè)的連續(xù)氨基酸。功能域可使用PFAM程序進(jìn)行鑒定(BatemanA等，1999NucleicAcidsRes27260-262)。優(yōu)選HIO1002片段包括一或者多個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。全長(zhǎng)HIO1002多肽或其片段的功能活性變體包括具有氨基酸插入序列，缺失，或者置換，但保留與全長(zhǎng)HIO1002多肽相關(guān)的一種或多種生物學(xué)特性的多肽。有時(shí)，產(chǎn)生的變體能改變HIO1002多肽的翻譯后加工。例如，與天然多肽相比，變體可以具有改變的蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)或者蛋白定位特性，或者改變的蛋白的半衰期。這里使用的術(shù)語(yǔ)“HIO1002核酸”包含具有SEQIDNO1，3或5提供的序列，或者與SEQIDNO1，3或5提供的序列互補(bǔ)的序列的核酸，及其功能活性片段，衍生物或直系同源物。本發(fā)明的HIO1002核酸可以是來(lái)源于基因組DNA或者cDNA的DNA，或者RNA。在一個(gè)實(shí)施方案中，功能活性的HIO1002核酸編碼或者互補(bǔ)于編碼功能活性的HIO1002多肽的核酸?；蚪MDNA包括在該定義內(nèi)，其用作原始RNA轉(zhuǎn)錄本(也即，mRNA前體)的模板，其在編碼功能活性HIO1002多肽之前需要加工，例如剪接。HIO1002核酸可包括其他的非編碼序列，其可以轉(zhuǎn)錄或者不被轉(zhuǎn)錄；這種序列包括5’和3’UTRs，聚腺苷酸化信號(hào)和尤其是本領(lǐng)域已知的控制基因表達(dá)的調(diào)節(jié)序列。一些多肽需要加工事件，例如蛋白水解剪切，共價(jià)修飾，等等，以便完全活化。因此，功能活性核酸可編碼成熟的或者預(yù)先加工的HIO1002多肽，或者中間體形式。HIO1002多核苷酸還可以包括異源編碼序列，例如，編碼包括的促進(jìn)融合多肽純化的標(biāo)記或者轉(zhuǎn)化標(biāo)記的序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，功能活性HIO1002核酸可用于例如，通過(guò)反義抑制，共抑制等產(chǎn)生功能喪失的HIO1002表型。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于本發(fā)明方法的HIO1002核酸，包括編碼或互補(bǔ)于編碼HIO1002多肽的序列的核酸序列，該HIO1002多肽與SEQIDNO2，4或6提供的多肽序列具有至少50％，60％，70％，75％，80％，85％，90％，95％或以上的序列同一性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的HIO1002多肽包括與SEQIDNO2，4或6的HIO1002多肽序列具有至少50％或60％同一性的多肽序列，而且與SEQIDNO2，4或6的HIO1002多肽序列可具有至少70％，80％，85％，90％或95％或以上的序列同一性，諸如一或者多個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)實(shí)施方案中，HIO1002多肽包括與SEQIDNO2，4或6所示的多肽的功能活性片段具有至少50％，60％，70％，80％，85％，90％或95％或以上的序列同一性的多肽序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，HIO1002多肽包括與SEQIDNO2，4或6的多肽序列的全長(zhǎng)具有至少50％，60％，70％，80％或90％的序列同一性的多肽序列并且包括一或者多個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。在另一個(gè)方面，HIO1002多核苷酸序列與SEQIDNO1，3或5所示的HIO1002核酸序列的全長(zhǎng)或是與這種HIO1002序列互補(bǔ)的核酸序列具有至少50％到60％的同一性，而且可包含與SEQIDNO1，3或5所示的HIO1002序列或其功能活性片段，或互補(bǔ)序列具有至少70％，80％，85％，90％或95％或以上的序列同一性。這里使用的，特定的目標(biāo)序列或其特定部分的“百分比(％)序列同一性”被定義為如果需要獲得最大的百分比序列同一性，如通過(guò)WU-BLAST-2.0a19程序(Altschul等，J.Mol.Biol.(1990)215403-410)所產(chǎn)生的，其中搜索參數(shù)設(shè)為缺省值，在進(jìn)行序列比對(duì)和引入缺口之后，候選的衍生序列中核苷酸或氨基酸與目標(biāo)序列(或其特定部分)中核苷酸或氨基酸相同的百分比。HSPS和HSPS2參數(shù)是機(jī)動(dòng)值，而且是通過(guò)程序本身取決于特定序列的組成和在其中對(duì)感興趣的序列進(jìn)行搜索的特定數(shù)據(jù)庫(kù)的組成而確定的?！埃ネ恍灾怠蓖ㄟ^(guò)把匹配的相同核苷酸或氨基酸的數(shù)目除以報(bào)告的百分比同一性的序列的序列長(zhǎng)度而確定?！鞍俜直?％)氨基酸序列相似性”通過(guò)進(jìn)行與確定百分比氨基酸序列同一性相同的計(jì)算而確定，但是在計(jì)算中除了相同的氨基酸之外還包括保守氨基酸取代。保守氨基酸取代，即其中氨基酸被具有相似特性的另一個(gè)氨基酸所取代，而對(duì)蛋白的折疊或活性沒(méi)有顯著的影響?？梢曰ハ嗳〈姆枷阕灏被釣楸奖彼?，色氨酸和酪氨酸；可互換的疏水氨基酸為亮氨酸，異亮氨酸，甲硫氨酸和纈氨酸；可互換的極性氨基酸為谷氨酰胺和天門冬酰胺；可互換的堿性氨基酸為精氨酸，賴氨酸和組氨酸；可互換的酸性氨基酸為天冬氨酸和谷氨酸；可互換的小氨基酸為丙氨酸，絲氨酸，蘇氨酸，半胱氨酸和甘氨酸。目標(biāo)核酸分子的衍生核酸分子包括能選擇性地與SEQIDNO1的核酸序列雜交的序列。雜交的嚴(yán)謹(jǐn)度可通過(guò)溫度，離子強(qiáng)度，pH，以及雜交和洗滌期間變性劑諸如甲酰胺的存在來(lái)進(jìn)行控制。通常使用的條件是大家所熟知的(參見(jiàn)，例如，CurrentProtocolinMolecularBiology，Vol.1，Chap.2.10，JohnWiley&Sons，Publishers(1994)；Sambrook等，MolecularCloning，ColdSpringHarbor(1989))。在一些實(shí)施方案子中，本發(fā)明的核酸分子能在如下的嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件下與包含SEQIDNO1的核苷酸序列的核酸分子雜交含有核酸的濾紙，在含有6X單倍濃度的檸檬酸鹽(SSC)(1XSSC為0.15MNaCl，0.015M檸檬酸鈉；pH7.0)，5XDenhardt溶液，0.05％焦磷酸鈉和100μg/ml的鯡魚精子DNA的溶液中，65℃預(yù)雜交8小時(shí)至過(guò)夜；在含有6XSSC，1XDenhardt溶液，100μg/ml酵母tRNA和0.05％焦磷酸鈉的溶液中，65℃雜交18-20小時(shí)；在含有0.1XSSC和0.1％SDS(十二烷基硫酸鈉)的溶液中，65℃洗滌濾紙1小時(shí)。在其他的實(shí)施方案中，使用如下的中等嚴(yán)謹(jǐn)雜交條件包含核酸的濾紙，在含有35％甲酰胺，5XSSC，50mMTris-HCl(pH7.5)，5mMEDTA，0.1％PVP，1％Ficoll，1％BSA和500μg/ml變性鮭魚精子DNA的溶液中，40℃預(yù)處理6小時(shí)；在含有35％甲酰胺，5XSSC，50mMTris-HCl(pH7.5)，5mMEDTA，0.02％PVP，0.02％Ficoll，0.2％BSA，100μg/ml鮭魚精子DNA和10％(wt/vol)葡聚糖硫酸酯的溶液中，40℃雜交18-20小時(shí)；接著，在含有2XSSC和0.1％SDS的溶液中，55℃洗滌兩次1小時(shí)?；蛘?，可使用如下的低嚴(yán)謹(jǐn)條件在含有20％甲酰胺，5×SSC，50mM磷酸鈉(pH7.6)，5XDenhardt溶液，10％葡聚糖硫酸酯和20μg/ml變性剪切鮭魚精子DNA的溶液中，37℃孵育8小時(shí)到過(guò)夜；在相同的緩沖液中雜交18到20小時(shí)；在1×SSC中，大約37℃洗滌濾紙1小時(shí)。由于遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，可產(chǎn)生許多編碼HIO1002多肽的多核苷酸序列。例如，根據(jù)特定宿主生物顯示的最佳密碼子使用，可選擇密碼子以增加多肽在特定的宿主物種中的表達(dá)(參見(jiàn)，例如，Nakamura等，1999)。這種序列變體可用于本發(fā)明的方法中。本發(fā)明的方法可使用擬南芥HIO1002的直系同源物。鑒定其他植物品種中直系同源物的方法是本領(lǐng)域已知的。一般說(shuō)來(lái)，不同物種中的直系同源物保持相同的功能，由于存在一個(gè)或多個(gè)蛋白基序和/或三維結(jié)構(gòu)。在進(jìn)化過(guò)程中，當(dāng)物種形成后發(fā)生基因重復(fù)事件時(shí)，一個(gè)物種，例如擬南芥中的單個(gè)基因可能相應(yīng)于另一個(gè)物種中的多個(gè)基因(旁系同源物)。這里使用的，術(shù)語(yǔ)“直系同源物”包括旁系同源物。當(dāng)序列數(shù)據(jù)可用于特定的植物物種時(shí)，通?？赏ㄟ^(guò)序列同源性分析，例如BLAST分析，一般使用蛋白餌序列，來(lái)鑒定直系同源物。如果來(lái)自正向BLAST結(jié)果的最合適序列檢索到了反向BLAST中原始的查詢序列，該序列則為可能的直系同源物(HuynenMA和BorkP，ProcNatlAcadSci(1998)955849-5856；HuynenMA等，GenomeResearch(2000)101204-1210)。用于多個(gè)序列比對(duì)的程序，例如CLUSTAL(ThompsonJD等，1994，NucleicAcidsRes224673-4680)，可用于突出直系同源蛋白的保守區(qū)域和/或殘基，并產(chǎn)生系統(tǒng)樹。在表示來(lái)自不同物種的多個(gè)同源序列(例如，通過(guò)BLAST分析檢索到的)的系統(tǒng)樹中，來(lái)自2個(gè)物種的直系同源序列，相對(duì)于來(lái)自2個(gè)物種的所有其他的序列，通常在系統(tǒng)樹上顯得最靠近。結(jié)構(gòu)串線(threading)或蛋白折疊的其他分析(例如，使用ProCeryon，Biosciences，Salzburg，Austria的軟件)也可鑒定可能的直系同源物。核酸雜交方法也可用于尋找直向同源基因，而且當(dāng)不能獲得序列數(shù)據(jù)是優(yōu)選的。簡(jiǎn)并PCR和cDNA或基因組DNA文庫(kù)篩選是尋找相關(guān)基因序列的常見(jiàn)方法，而且是本領(lǐng)域熟知的(參見(jiàn)，例如，Sambrook，1989；DieffenbachandDveksler，1995)。例如，Sambrook等中描述了用于從感興趣的植物物種產(chǎn)生cDNA文庫(kù)，和用部分同源基因探針探測(cè)文庫(kù)的方法。擬南芥HIO1002編碼序列的高度保守部分可用作探針。HIO1002直系同源核酸可在高度，中度或低度嚴(yán)謹(jǐn)條件下與SEQIDNO1，3或5的核酸雜交。擴(kuò)增或分離假定的直系同源物的部分之后，可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)克隆該部分并進(jìn)行測(cè)序，而且用作探針來(lái)分離完整的cDNA或基因組克隆?；蛘?，可以啟動(dòng)EST方案來(lái)產(chǎn)生感興趣的植物物種的序列信息數(shù)據(jù)庫(kù)。在另一種方法中，能特異性結(jié)合已知的HIO1002多肽的抗體，用于直系同源物分離(參見(jiàn)，例如，HarlowandLane，1988，1999)。Western印跡分析可確定HIO1002直系同源物(也即，直系同源蛋白)存在于特定植物物種的粗提取物中。當(dāng)觀察反應(yīng)性時(shí)，可通過(guò)篩選顯示特定植物物種的表達(dá)文庫(kù)，來(lái)分離編碼候選直系同源物的序列。如Sambrook等1989中所述，可在各種商業(yè)可獲得的載體中構(gòu)建表達(dá)文庫(kù)，包括λgt11。一旦通過(guò)任何這些方法鑒定到了候選的直系同源物，候選的直系同源序列可用作餌(“查詢”)，用于從其中已經(jīng)鑒定到HIO1002核酸和/或多肽序列的擬南芥或其他的物種中對(duì)序列進(jìn)行反向BLAST?？墒褂萌魏慰捎玫姆椒▉?lái)獲得HIO1002核酸和多肽。例如，通過(guò)如前所述的篩選DNA文庫(kù)或通過(guò)使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)，分離感興趣的cDNA或基因組DNA序列的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的?；蛘?，可合成核酸序列。任何已知的方法，例如位點(diǎn)定向誘變(KunkelTA等，1991)，可用于將所需的改變引入到克隆的核酸中。通常，本發(fā)明的方法包括把所需形式的HIO1002核酸整合到用于轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞的植物表達(dá)載體中，并在宿主植物中表達(dá)HIO1002多肽。分離的HIO1002核酸分子是不同于天然發(fā)現(xiàn)的形式或設(shè)置的核酸分子，而且從至少一個(gè)雜質(zhì)核酸分子中鑒定和分離，該雜質(zhì)核酸分子通常結(jié)合在HIO1002核酸的天然來(lái)源中。然而，分離的HIO1002核酸分子包括包含在通常表達(dá)HIO1002的細(xì)胞中的HIO1002核酸分子，例如，該核酸分子位于與天然細(xì)胞的核酸分子不同的染色體位置中。產(chǎn)生具有改變的含油量表型的遺傳修飾的植物HIO1002核酸和多肽可用于產(chǎn)生具有修飾的含油量表型的遺傳修飾的植物。這里使用的，“修飾的含油量表型”可指植物任何部分中修飾的含油量；經(jīng)常在種子中觀察到修飾的含油量。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，植物中HIO1002基因的改變表達(dá)可用于產(chǎn)生具有高油表型的植物。這里所述的方法一般適用于所有植物。盡管在擬南芥中進(jìn)行了激活標(biāo)簽法和基因鑒定，但是HIO1002基因(或其直系同源物，變體或片段)可在任何植物種類中表達(dá)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及產(chǎn)油植物，其在特異性器官，主要是在種子中生產(chǎn)和儲(chǔ)存三?；视汀＿@些物種包括大豆(Glycinemax)，油菜籽和canola(包括甘藍(lán)型油菜(Brassicanapus)，B.campestris)，向日葵(Helianthusannus)，棉花(陸地棉)，玉米(Zeamaya)，可可(Theobromacacao)，紅花(Carthamustinctorius)，油棕(Elaeisguineensis)，椰子(Cocosnucifera)，亞麻(Linumusitatissimum)，蓖麻(Ricinuscommunis)和花生(Arachishypogaea)。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生果實(shí)和蔬菜的植物，產(chǎn)生谷物的植物，產(chǎn)生堅(jiān)果的植物，快速周期的蕓苔品種，紫花苜蓿(Medicagosativa)，煙草(Nicotiana)，草坪草(Poaceaefamily)，其他的飼料作物，和可能是稀有脂肪酸來(lái)源的野生物種。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該了解本領(lǐng)域存在的各式各樣的轉(zhuǎn)化技術(shù)，而且新技術(shù)不斷地變成可用的。適于靶宿主植物的任何技術(shù)可用于本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，可引入各種形式的構(gòu)建體，包括但不限于DNA鏈，到質(zhì)粒，或人工染色體中?？赏ㄟ^(guò)各種技術(shù)將構(gòu)建體引入到靶植物細(xì)胞中，包括但不限于異源核酸的土壤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化，電穿孔法，顯微注射，微粒轟擊，磷酸鈣-DNA共沉淀或脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化。植物轉(zhuǎn)化優(yōu)選是永久的，也即通過(guò)使導(dǎo)入的表達(dá)構(gòu)建體整合到宿主植物基因組中，以便該導(dǎo)入的構(gòu)建體傳遞給連續(xù)的植物世代。根據(jù)計(jì)劃的用途，包含HIO1002多核苷酸的異源核酸構(gòu)建體可編碼完整的蛋白或其生物學(xué)活性部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，雙元的基于Ti的載體系統(tǒng)可用于轉(zhuǎn)移多核苷酸。標(biāo)準(zhǔn)的土壤農(nóng)桿菌雙元載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，而且許多是可商業(yè)獲得的(例如，pBI121ClontechLaboratories，PaloAlto，CA)。構(gòu)建體或者載體可以包括植物啟動(dòng)子來(lái)表達(dá)所選擇的核酸分子。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，啟動(dòng)子為植物啟動(dòng)子。用土壤農(nóng)桿菌載體轉(zhuǎn)化植物的最佳方法隨待轉(zhuǎn)化的植物種類而變化。用于土壤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化的示例性方法包括轉(zhuǎn)化來(lái)源于無(wú)菌籽苗和/或小植株的胚軸，芽，莖或葉組織的外植體。這種轉(zhuǎn)化的植物可有性繁殖，或通過(guò)細(xì)胞或組織培養(yǎng)繁殖。先前已經(jīng)描述了土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化用于許多不同類型的植物，而且可在科學(xué)文獻(xiàn)中找到這種轉(zhuǎn)化方法。其中特別相關(guān)的是轉(zhuǎn)化商業(yè)上重要的作物，例如油菜籽(DeBlock等，1989)，向日葵(Everett等，1987)和大豆(Christou等，1989；Kline等，1987)的方法。根據(jù)表達(dá)水平，發(fā)生表達(dá)的組織類型和/或表達(dá)的發(fā)育階段，可調(diào)節(jié)HIO1002的表達(dá)(包括轉(zhuǎn)錄和翻譯)。許多異源調(diào)節(jié)序列(例如，啟動(dòng)子和增強(qiáng)子)可用于控制HIO1002核酸的表達(dá)。這些包括組成型，誘導(dǎo)型和可調(diào)節(jié)的啟動(dòng)子，以及能以組織或瞬時(shí)特異性方式調(diào)控表達(dá)的啟動(dòng)子和增強(qiáng)因子。示例性的組成型啟動(dòng)子包括樹莓E4啟動(dòng)子(美國(guó)專利5,783,393和5,783,394)，胭脂堿合成酶(NOS)啟動(dòng)子(Ebert等，Proc.Nat.Acad.Sci(U.S.A)845745-5749，1987)，章魚堿合成酶(OCS)啟動(dòng)子(其由根癌農(nóng)桿菌的誘導(dǎo)腫瘤的質(zhì)粒攜帶)，諸如花椰菜花葉病毒(CaMV)19S啟動(dòng)子(Lawton等，PlantMol.Biol，9315-324，1987)以及CaMV35S啟動(dòng)子(Odelletal.，Nature313810-812，1985andJonesJDetal，1992)的花椰菜病毒啟動(dòng)子，甜瓜肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子(公開的PCT申請(qǐng)WO0056863)，玄參花葉病毒35S-啟動(dòng)子(美國(guó)專利5,378,619)，光誘導(dǎo)的來(lái)自1，5-二磷酸核酮糖羧化酶小亞基的啟動(dòng)子(ssRUBISCO)，Adh啟動(dòng)子(Walker等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)846624-6628，1987)，蔗糖合成酶啟動(dòng)子(Yang等，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)874144-4148，1990)，R基因復(fù)合啟動(dòng)子(Chandler等，ThePlantCell11175-1183，1989)，葉綠素a/b結(jié)合蛋白基因啟動(dòng)子，CsVMV啟動(dòng)子(VerdaguerB等，1998)；這些啟動(dòng)子也被用于產(chǎn)生在植物中表達(dá)的DNA構(gòu)建體，例如PCT公開WO84/02913。示例性的組織特異性啟動(dòng)子包括番茄E4和E8啟動(dòng)子(美國(guó)專利5,859,330)和番茄2AII基因啟動(dòng)子(VanHaarenMJJ等，1993)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，HIO1002表達(dá)在來(lái)自其表達(dá)與早期種子和/或胚胎發(fā)育相關(guān)的基因的調(diào)節(jié)序列的調(diào)控下。實(shí)際上，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所使用的啟動(dòng)子為種子增強(qiáng)的啟動(dòng)子。這種啟動(dòng)子的實(shí)例包括來(lái)自諸如napin(Kridl等，SeedSci.Res.1209219，1991)，球蛋白(BelangerandKriz，Genet.，129863-872，1991，GenBankAccessionNo.L22295)，γ玉米醇溶蛋白Z27(Lopes等，MolGenGenet.，247603-613，1995)，L3油質(zhì)蛋白啟動(dòng)子(美國(guó)專利6,433,252)，菜豆蛋白(Bustos等，PlantCell，1(9)839-853，1989)，arcelin5(US2003/0046727)，大豆7S啟動(dòng)子，7Sα啟動(dòng)子(US2003/0093828)，大豆7Sα’β黃豆蛋白啟動(dòng)子，7Sα’啟動(dòng)子(Beachy等，EMBOJ.，43047，1985；Schuler等，NucleicAcidRes.，10(24)8225-8244，1982)，大豆胰蛋白酶抑制劑(Riggs等，PlantCell1(6)609-621，1989)，ACP(Baerson等，PlantMol.Biol.，22(2)255-267，1993)，硬脂酰-ACP脫氫酶(Slocombe等，PlantPhysiol.104(4)167-176，1994)，β黃豆蛋白的大豆a′亞基(Chen等，Proc.Natl.Acad.Sci.838560-8564，1986)，蠶豆USP(P-Vf.Usp，SEQIDNO1，2，和3(US2003/229918)以及玉米L3油質(zhì)蛋白啟動(dòng)子(Hong等，PlantMol.Biol.，34(3)549-555，1997)等基因的5’調(diào)節(jié)區(qū)域。還包括玉米醇溶蛋白，是在玉米胚乳中發(fā)現(xiàn)的一組貯藏蛋白。玉米醇溶蛋白基因的基因組克隆已被分離(Pedersen等，Cell291015-1026，1982；以及Russell等，TransgenicRes.6(2)157-168)并且來(lái)自這些克隆的啟動(dòng)子，包括15kD，16kD，19kD，22kD，27kD以及這些基因也可被利用。已知例如在玉米內(nèi)發(fā)揮功能的其他啟動(dòng)子包括下列基因的啟動(dòng)子waxy，Brittle，Shrunken2，分支酶I和II，淀粉合成酶，去分支酶，油質(zhì)蛋白，谷蛋白以及蔗糖合成酶。其啟動(dòng)子與早期種子和胚胎發(fā)育相關(guān)的豆科植物基因包括V.faba豆球蛋白(Baumlein等，1991，MolGenGenet225121-8；Baumlein等，1992，PlantJ2233-9)，V.fabausp(Fiedler等，1993，PlantMolBiol22669-79)，豌豆convicilin(Bown等，1988，BiochemJ251717-26)，豌豆凝集素(dePater等，1993，PlantCell5877-86)，P.vulgarisβ菜豆蛋白(Bustos等，1991，EMBOJ101469-79)，P.vulgarisDLEC2和PHS[β](Bobb等，1997，NucleicAcidsRes25641-7)和大豆β-conglycinin，7S貯藏蛋白(Chamberland等，1992，PlantMolBiol19937-49)。其啟動(dòng)子與早期種子和胚胎發(fā)育相關(guān)的谷類基因包括水稻谷蛋白(″GluA-3，″YoshiharaandTakaiwa，1996，PlantCellPhysiol37107-11；″GluB-1，″Takaiwa等，1996，PlantMolBiol301207-21；Washida等，1999，PlantMolBiol401-12；″Gt3，″Leisy等，1990，PlantMolBiol1441-50)，水稻醇溶谷蛋白(Zhou&Fan，1993，TransgenicRes2141-6)，小麥醇溶谷蛋白(Hammond-Kosack等，1993，EMBOJ12545-54)，玉米醇溶蛋白(Z4，Matzke等，1990，PlantMolBiol14323-32)和大麥B-hordein(Entwistle等，1991，PlantMolBiol171217-31)。其他的其啟動(dòng)子與早期種子和胚胎發(fā)育相關(guān)的基因，包括油棕GL07A(7S球蛋白，Morcillo等，2001，PhysiolPlant112233-243)，甘藍(lán)型油菜napin，2S貯藏蛋白和napA基因(Josefsson等，1987，JBiolChem26212196-201；Stalberg等，1993，PlantMolBiol199323671-83；Ellerstrom等，1996，PlantMolBiol321019-27)，甘藍(lán)型油菜油質(zhì)蛋白(Keddie等，1994，PlantMolBiol24327-40)，擬南芥油質(zhì)蛋白(Plant等，1994，PlantMolBiol25193-205)，擬南芥FAE1(Rossak等，2001，PlantMolBiol46717-25)，刀豆conA(Yamamoto等，1995，PlantMolBiol27729-41)和長(zhǎng)春花異胡豆苷合成酶(Str，OuwerkerkandMemelink，1999，MolGenGenet261635-43)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，使用來(lái)自在油生物合成期間表達(dá)的基因的調(diào)節(jié)序列(參見(jiàn)，例如，美國(guó)專利5,952,544)。可選擇的啟動(dòng)子來(lái)自于植物貯藏蛋白基因(Bevan等，1993，PhilosTransRSocLondBBiolSci342209-15)。其他可使用的啟動(dòng)子例如描述于美國(guó)專利5,378,619；5,391,725；5,428,147；5,447,858；5,608,144；5,608,144；5,614,399；5,633,441；5,633,435和4,633,436。在另一個(gè)方面，有時(shí)可能需要抑制宿主細(xì)胞中內(nèi)源HIO1002的表達(dá)。用于實(shí)施本發(fā)明該方面的示例性方法包括，但不限于反義抑制(Smith等，1988；vanderKrol等，1988)；共抑制(Napoli，等，1990)；核酶(PCT公開WO97/10328)；和正義與反義的組合(Waterhouse，等，1998)。抑制宿主細(xì)胞中內(nèi)源序列的方法，一般使用待抑制序列的至少一部分的轉(zhuǎn)錄或轉(zhuǎn)錄和翻譯。這種序列可以與內(nèi)源序列的編碼以及非編碼區(qū)同源。反義抑制可使用完整的cDNA序列(Sheehy等，1988)，部分cDNA序列包括5’編碼序列(Cannon等，1990)或3’非編碼序列(Ch′ng等，1989)的片段。共抑制技術(shù)可使用完整的cDNA序列(Napoli等，1990；vanderKrol等，1990)或部分cDNA序列(Smith等，1990)。可進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的分子和遺傳試驗(yàn)，以更進(jìn)一步分析基因與觀察到的表型之間的關(guān)聯(lián)。示例性技術(shù)描述如下。DNA/RNA分析例如，通過(guò)原位雜交，可通過(guò)突變體與野生型系的對(duì)比確定階段-與組織特異性基因表達(dá)模式?？蛇M(jìn)行基因，尤其是側(cè)翼調(diào)節(jié)區(qū)甲基化狀況的分析。其他的適用技術(shù)包括過(guò)表達(dá)，異位表達(dá)，在其他植物物種中的表達(dá)和基因敲除(反向遺傳學(xué)，靶向敲除，病毒誘導(dǎo)的基因沉默[VIGS，參見(jiàn)BaulcombeD，1999])。在優(yōu)選的應(yīng)用中，通過(guò)微陣列分析的表達(dá)分布被用于同時(shí)測(cè)量許多不同基因表達(dá)中的差異或誘導(dǎo)的改變。用于微陣列分析的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知的(SchenaM等，Science(1995)270467-470；BaldwinD等，1999；DangondF，PhysiolGenomics(2000)253-58；vanHalNL等，JBiotechnol(2000)78271-280；RichmondTandSomervilleS，CurrOpinPlantBiol(2000)3108-116)。可以進(jìn)行單獨(dú)標(biāo)簽的株系的表達(dá)分布分析。這種分析可鑒定由于感興趣基因的過(guò)表達(dá)而協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)的其它基因，其可有助于把未知基因置于特定的途徑。基因產(chǎn)物的分析基因產(chǎn)物分析可包括重組蛋白表達(dá)，抗血清產(chǎn)生，免疫定位，催化或其他的活性的生物化學(xué)分析，磷酸化狀況分析和通過(guò)酵母雙雜交分析進(jìn)行與其他蛋白之間的相互作用分析。途徑分析途徑分析可包括，基于它的錯(cuò)表達(dá)表型或通過(guò)與相關(guān)基因的序列同源性，把基因或基因產(chǎn)物置于特定的生物化學(xué)，新陳代謝或信號(hào)途徑中。或者，分析可包括與野生型系和其它突變系的遺傳交叉(產(chǎn)生雙突變體)，以把基因指定于途徑中，或確定在途徑中突變對(duì)下游“報(bào)告”基因表達(dá)的作用。產(chǎn)生具有改變含油量的表型的突變植物本發(fā)明更進(jìn)一步提供了鑒定在內(nèi)源HIO1002或者其等位基因中具有能賦予這些植物及其后代HIO1002表型的突變的非轉(zhuǎn)基因植物的方法。在一種稱為“TILLING”的方法中(用于在基因組中靶向誘導(dǎo)的局部病變)，例如，使用EMS處理，在感興趣植物的種子中誘導(dǎo)突變。培養(yǎng)得到的植物，并且自花受精，后代用于制備DNA樣品。HIO1002-特異性PCR被用于鑒定突變的植物是否具有HIO1002突變。然后測(cè)試具有HIO1002突變的植物含油量的改變，或者，測(cè)試植物的含油量的改變，然后使用HIO1002-特異性PCR確定具有改變含油量的植物是否具有突變的HIO1002基因。TILLING可鑒定能改變特異性基因的表達(dá)或由這些基因編碼的蛋白的活性的突變(參見(jiàn)Colbert等(2001)PlantPhysiol126480-484；McCallum等(2000)NatureBiotechnology18455-457)。在另一種方法中，候選基因/數(shù)量性狀基因座(QTL)方法可用于標(biāo)記輔助的育種項(xiàng)目，以鑒定HIO1002基因或HIO1002直系同源物中能賦予含油量的改變的等位基因或突變(參見(jiàn)Bert等，TheorApplGenet.2003Jun；107(1)181-9；以及Lionneton等，Genome.2002Dec；45(6)1203-15)。因此，在本發(fā)明更進(jìn)一步的方面中，HIO1002核酸被用于鑒定具有改變的含油量的植物是否在內(nèi)源HIO1002中具有突變，或是否具有能導(dǎo)致含油量改變的特定等位基因。雖然參考特定的方法和實(shí)施方案已經(jīng)描述了本發(fā)明，應(yīng)當(dāng)理解只要不背離本發(fā)明可以進(jìn)行各種修飾和改變。這里引用的所有出版物都明確地在這里作為參考引入，用于描述和公開可與本發(fā)明一起使用的組合物和方法的目的。所有引用的專利，專利申請(qǐng)和參考的網(wǎng)站和公共數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列信息也引入作為參考。實(shí)施例實(shí)施例1利用激活標(biāo)簽構(gòu)建體進(jìn)行轉(zhuǎn)化產(chǎn)生具有HIO1002表型的植物使用激活標(biāo)簽“ACTTAG”載體，pSKI015產(chǎn)生突變體(GI#6537289；WeigelD等，2000)。使用標(biāo)準(zhǔn)方法產(chǎn)生擬南芥轉(zhuǎn)基因植物，基本上如公開的申請(qǐng)PCTWO0183697中所述。簡(jiǎn)要地，T0擬南芥(Col-0)植物用攜帶有pSKI015載體的土壤農(nóng)桿菌進(jìn)行轉(zhuǎn)化，該載體包括來(lái)源于土壤農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA，除草劑抗性選擇性標(biāo)記基因和4XCaMV35S增強(qiáng)子元件。根據(jù)除草劑抗性，在T1世代選擇轉(zhuǎn)基因植物。在收獲時(shí)通過(guò)近紅外光譜學(xué)(NIR)分析T3種子。利用Bruker22N/F捕獲NIR紅外光譜。利用NIR分析的數(shù)據(jù)和參考廠商說(shuō)明通過(guò)Bruker軟件估計(jì)總種子油的含量以及總種子蛋白含量。將我們的校準(zhǔn)預(yù)測(cè)的油含量(ren油14731d+sline.q2，預(yù)測(cè)己烷萃取油)，緊接美國(guó)石油化學(xué)家學(xué)會(huì)官方的方法以及推薦作法(OfficialandRecommendedPracticesofAmericanOilChemistsSociety)，第五版本，AOCS，Champaign，Ill的AOCS法AM1-92的一般方法，與38,090個(gè)個(gè)體ACTTAG系進(jìn)行比較。種子組成分析之后，通過(guò)反向PCR以及測(cè)序確定各品系基因組中ACTTAG元件的位置。在這個(gè)分析中考慮38,090個(gè)具有回收的側(cè)翼序列的品系。由于種植了38,090個(gè)品系并且長(zhǎng)滿12個(gè)月，將種子油含量值校正到使環(huán)境差異的影響最小化，所述環(huán)境差異可以改變種子油含量。計(jì)算所種植的品系每天的平均種子油含量及其標(biāo)準(zhǔn)偏差。種子油含量表示為“相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差距離”(SD距離)，通過(guò)從各品系種子油含量減去種植日平均種子油含量并由那天標(biāo)準(zhǔn)偏差除差異進(jìn)行計(jì)算。該標(biāo)準(zhǔn)化可以比較整年生長(zhǎng)的種植種子中的種子油含量。通過(guò)評(píng)價(jià)38,090個(gè)品系中所有受ACTTAG元件影響的基因鑒定過(guò)表達(dá)時(shí)引起高種子油表現(xiàn)型的基因。通過(guò)下列方法實(shí)現(xiàn)；首先，鑒定各品系中可能由ACTTAG元件激活的基因并將品系的種子油含量指定給這些基因；第二，當(dāng)特定的基因過(guò)表達(dá)時(shí)通過(guò)獲得各基因單獨(dú)的種子油值的平均值確定種子油含量。由于評(píng)價(jià)了38,090個(gè)品系，并且各元件影響平均2.5個(gè)基因，各基因?qū)⒕哂?個(gè)種子油值的平均值。具有最高平均SD距離的基因被確定為過(guò)表達(dá)時(shí)引起高種子油的基因。過(guò)表達(dá)At1g73650，HIO1002的植物具有種植日平均128％的油含量，如下表1所示。表1.實(shí)施例2顯示改變的含油量表型的植物中T-DNA插入序列的表征我們進(jìn)行了基本上如專利申請(qǐng)PCTWO0183697中所示的標(biāo)準(zhǔn)分子分析，以確定與改變的含油量表型相關(guān)的T-DNA插入位點(diǎn)。簡(jiǎn)而言之，從顯示改變的含油量表型的植物提取基因組DNA。使用pSKI015載體的特異性引物進(jìn)行的PCR，確認(rèn)了來(lái)自HIO1002油系的植物中存在35S增強(qiáng)子，Southern印跡分析證實(shí)了ACTTAGT-DNA的基因組整合，并且顯示單獨(dú)的T-DNA插入序列在轉(zhuǎn)基因系中的存在。反相PCR被用于回收T-DNA插入序列側(cè)翼的基因組DNA，然后使用基礎(chǔ)的BLASTN搜索和/或擬南芥信息源(TAIR)數(shù)據(jù)庫(kù)(可以在公眾可以進(jìn)入的擬南芥信息資源網(wǎng)站獲得)進(jìn)行序列分析。實(shí)施例3HIO1002表型的復(fù)述為了檢驗(yàn)At1g73650的過(guò)表達(dá)是否引起高種子油表型，將從過(guò)表達(dá)該基因的轉(zhuǎn)基因植物的種子中的油含量與來(lái)自非-轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参锓N子中的油含量。為了這么做，將At1g73650克隆到種子特異性CsVMV啟動(dòng)子后植物轉(zhuǎn)化載體中并利用花浸漬法轉(zhuǎn)化到擬南芥植物中。該植物轉(zhuǎn)化載體含有由RE4啟動(dòng)子啟動(dòng)的nptII基因提供針對(duì)卡那霉素的抗性并用作選擇性標(biāo)記。將來(lái)自轉(zhuǎn)化的植物的種子接種在含有卡那霉素的瓊脂培養(yǎng)基上。7天后，轉(zhuǎn)基因植物被鑒定為健康的綠色植物并移植到土壤上。非-轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参镌诃傊囵B(yǎng)基上萌芽，生長(zhǎng)7天然后移植到土壤上。將22個(gè)轉(zhuǎn)基因的幼苗和10個(gè)非轉(zhuǎn)基因的對(duì)照植物轉(zhuǎn)移到相同的32格平地的隨機(jī)位置。植物生長(zhǎng)至成熟并自花授精并結(jié)子。從每一植物收獲種子，通過(guò)如下所述的方法由NearInfrared(NIR)波譜學(xué)評(píng)估種子的含油量。由NIR光譜學(xué)測(cè)定的從各植物收獲的種子中的油百分比顯示于表3中。通過(guò)用預(yù)測(cè)的油值除以對(duì)照種子(即沒(méi)有轉(zhuǎn)基因的植物的種子)中的平均油值確定相對(duì)的油值。已經(jīng)在2個(gè)實(shí)驗(yàn)中檢驗(yàn)了At1g73650的過(guò)表達(dá)對(duì)種子油的影響。在2個(gè)實(shí)驗(yàn)中，過(guò)表達(dá)At1g73650的植物具有比生長(zhǎng)在相同的平地的對(duì)照植物高的種子油含量。整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，過(guò)表達(dá)At1g73650的植物的平均種子油含量比未轉(zhuǎn)化的對(duì)照高4.5％。過(guò)表達(dá)At1g73650的植物的種子油含量顯著高于非-轉(zhuǎn)基因?qū)φ罩参?雙向方差分析；P＝0.0160)。表2實(shí)施例4擬南芥HIO1002序列的分析用BLAST(Altschul等，1990，J.Mol.Biol.215403-410)，PFAM(Bateman等，1999，NucleicAcidsRes27260-262)，PSORT(NakaiK，和HortonP，1999，TrendsBiochemSci2434-6)，和/或CLUSTAL(ThompsonJD等，1994，NucleicAcidsRes224673-4680)進(jìn)行序列分析。TBLASTN對(duì)比ESTs候選基因At1g73650得到全長(zhǎng)cDNAsGI15809973和GI27363285的支持。有許多來(lái)自顯示與At1g73650具有相似性不同的植物品種的ESTs。盡可能制備各品種的ESTs重疊群。每一下列品種的最佳符合列于如下并且包括在以下的“直系同源物表2”中小麥(Triticumaestivum)，大豆(Glycinemax)，辣薄荷(Mentha×Piperita)，歐洲山楊(Populustremula)，水稻(Oryzasativa)，番茄(Lycopersiconesculentum)，馬鈴薯(Solanumtuberosum)以及甜菜(Betavulgaris)1.具有下列GenBankIDS的甜菜ESTsgi|261216302.具有下列GenBankIDS的馬鈴薯ESTsgi|12588047gi|152593473.具有下列GenBankIDS的番茄ESTsgi|5896833gi|5896833gi|12628275gi|12628275gi|12628275gi|162425724.具有下列GenBankIDS的水稻ESTsgi|5456487gi|7001875.具有下列GenBankIDS的白楊ESTsgi|3857688gi|23959842gi|23960044gi|23963690gi|23997967gi|23998879gi|24062476gi|24065210gi|286092306.具有下列GenBankIDS的大豆ESTsgi|9205433gi|12488109gi|12773915gi|15286042gi|187315157.具有下列GenBankIDS的玉米ESTsgi|5739680gi|21208932gi|407242gi|4072438.具有下列GenBankIDS的棉花ESTsgi|33262509.具有下列GenBankIDS的小麥ESTsgi|9742370gi|20309688gi|25194283gi|25235692gi|25237006gi|25243036gi|25261519gi|25280706gi|25431065gi|25547029gi|25560875gi|32546080gi|32670437BLASTP比較氨基酸蛋白At1g73650與來(lái)自其他生物的蛋白具有同源性。At1g73650的最上面的7個(gè)BLAST結(jié)果列舉如下并且被包含在下表2的直系同源物中。1.來(lái)自甜菜(Betavulgaris)的一個(gè)EST重疊群ex|13978852|exs|139788512.來(lái)自Solanumtubersom的一個(gè)EST重疊群ex|11208765|exs|112087643.來(lái)自番茄(Lycopersiconesculentum)的一個(gè)EST重疊群ex|5891894|exs|58918934.來(lái)自水稻(Oryzasativa)的一個(gè)EST重疊群ex|7258057|exs|72580565.來(lái)自歐洲山楊(Populustremula)的一個(gè)EST重疊群ex|10187045|exs|101870446.來(lái)自大豆(Glycinemax)的一個(gè)EST重疊群ex|9156811|exs|91568107.來(lái)自玉米(Zeamays)的一個(gè)EST重疊群ex|7766057|exs|77660568.來(lái)自棉花(Gossypiumhirsutum)的一個(gè)EST重疊群ex|9283238|exs|92832379.來(lái)自小麥(Triticumaestivum)的一個(gè)EST重疊群ex|11024927|exs|11024926表3最接近的植物同系物At1g73650(NP_849882.1)的該NCBI入口是推定的跨膜蛋白。有6個(gè)推定的跨膜功能域(由TMHMM推定；氨基酸殘基931；64-86；99-118；138-155；185-204；209-231)。最初的跨膜功能域與信號(hào)錨序列重疊(由SignalP推定的；概率＝0.990；氨基酸殘基1-28)。Psort2預(yù)計(jì)At1g73650可能是定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，原生質(zhì)膜或線粒體(Psort2預(yù)計(jì)32％內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，28％原生質(zhì)膜，24％線粒體，4％核，4％高爾基體，4％液泡，4％分泌系統(tǒng)的囊泡)。然而，基于TargetP預(yù)計(jì)At1g73650不可能靶向線粒體。Pfam分析預(yù)計(jì)At1g73650具有一個(gè)未知功能的功能域(PF06966，氨基酸殘基24-252)模型結(jié)構(gòu)域seq-f*seq-thmm-fhmm-t記分E-值-----------------------------------------------PF069661/124252..1266[]453.04.9e-133*Seq-f是指“序列-來(lái)自”，seq-t是指“序列-進(jìn)入?！眘eq-t數(shù)后的兩個(gè)階段顯示匹配區(qū)域在序列內(nèi)并且沒(méi)有延伸到每一末端。兩個(gè)括號(hào)顯示匹配跨越圖譜HMM的全長(zhǎng)。hmm-f和hmm-t是指圖譜HMM的匹配部分的開始和末端坐標(biāo)。實(shí)施例5通過(guò)根癌土壤桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化或微粒轟擊獲得油菜籽，大豆，玉米，向日葵，棉花，可可，紅花，油椰，椰子，亞麻，蓖麻以及花生的轉(zhuǎn)化的外植體。由轉(zhuǎn)化的組織再生植物。然后分析溫室生長(zhǎng)的植物目的基因的表達(dá)水平以及油的水平。實(shí)施例6本實(shí)施例提供了測(cè)定轉(zhuǎn)基因包谷植物的油以及蛋白含量，質(zhì)量差，氨基酸組成，游離氨基酸水平以及微量元素含量的分析方法。通過(guò)低分辯率1H核磁共振(NMR)(Tiwari等，JAOCS，51104-109(1974)；或Rubel，JAOCS，711057-1062(1994))確定第一代單個(gè)玉米粒以及解剖的胚芽以及胚乳的油水平(基于質(zhì)量以及組織重量百分比)，由此測(cè)定單個(gè)粒樣品的NMR張弛時(shí)間，并基于利用從根據(jù)加速溶劑萃取之后重量分析測(cè)定的具有改變的油水平的玉米粒分析產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸分析計(jì)算油水平。進(jìn)行單向方差分析以及Student’st-檢驗(yàn)(JMP，版本4.04，SASInstituteInc.，Cary，NC，USA)來(lái)通過(guò)轉(zhuǎn)基因-特異性PCR鑒定轉(zhuǎn)基因以及非-轉(zhuǎn)基因粒之間的顯著差別。通過(guò)NIT光譜學(xué)確定第二代種子中油水平以及蛋白水平，由此測(cè)定由單株植物收獲的接種樣本品集的NIT譜，并基于利用由玉米粒分析產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸分析計(jì)算油以及蛋白水平，所述玉米粒具有分別由加速溶劑萃取或元素(％N)分析之后重量分析測(cè)定的改變的油或蛋白水平。進(jìn)行單向方差分析以及Student’st-檢驗(yàn)來(lái)鑒定陽(yáng)性標(biāo)記以及陰性標(biāo)記植物的種子之間油(％粒重)以及蛋白(％粒重)的顯著差異。利用下列方法分析來(lái)自每一轉(zhuǎn)基因事件的游離氨基酸的水平。將每一轉(zhuǎn)基因植物的種子逐一粉碎成細(xì)小的粉末并將約50mg所產(chǎn)生的粉末轉(zhuǎn)入預(yù)稱重的離心管。記錄精確的樣品重量并將1.0ml的5％三氯乙酸添加到各樣品管中。在室溫下通過(guò)渦旋混合樣品然后在Eppendorf微量離心機(jī)(Model5415C，BrinkmannInstrument，Westbury，NY)上在14,000rpm離心15分鐘。取出等分樣品的上清液并通過(guò)利用AgilentTechnicalPublication“AminoAnalysisUsingtheZorbaxEclipse-AAAColumnsandAgilent1100HPLC，”2000年3月17，所述的方法通過(guò)HPLC(Agilent1100)進(jìn)行分析。通過(guò)下列方法對(duì)來(lái)自谷物的總氨基酸進(jìn)行定量測(cè)定。研磨谷粒并利用6NHCl在100℃回流條件下24小時(shí)酸水解約60mg的產(chǎn)生的粗粉。干燥樣品并在0.1NHCl中重構(gòu)繼之以用α-苯二醛(OPA)預(yù)柱衍生化作用用于HPLC分析。通過(guò)反相ZorbaxEclipseXDB-C18HPLC柱在Agilent1100HPLC(Agilent，PaloAlto，CA)上分離氨基酸。通過(guò)熒光檢測(cè)氨基酸。半胱氨酸，脯氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺以及色氨酸并未包括在該氨基酸篩選中(Henderson等，″Rapid，Accurate，SensitiveandReproducibleHPLCAnalysisofAminoacids，AminoAcidAnalysisUsingZorbaxEclipse-AAAColumnsandtheAgilent1100HPLC，″AgilentPublication(2000)；也參見(jiàn)″MeasurementofAcid-StableAminoAcids，″AACCMethod07-01(AmericanAssociationofCerealChemists，ApprovedMethods，9th版本(LCCC#_9575308))。利用(ApprovedMethodsofthe美國(guó)谷物化學(xué)家協(xié)會(huì)-10th版本，AACC編輯，(2000)07-20MeasurementofTryptophan-AlaklineHydrolysis)所述的堿解方法測(cè)定玉米粒中總的色氨酸。通過(guò)本領(lǐng)域已知的方法分析種子中生育酚以及生育三烯酚的水平。簡(jiǎn)而言之，將10mg的種子組織添加到已經(jīng)添加了500μl1％連苯三酚(pyrogallol)(SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO)/乙醇的無(wú)菌微量離心管中的1g微株上(BiospecProductInc，Barlesville，OK。微Beadbeater(Biospec)中“快”速振蕩混合物3分鐘，然后過(guò)濾通過(guò)0.2μm濾膜進(jìn)入自動(dòng)取樣器管。利用帶有熒光檢測(cè)以及帶通以及狹縫的Zorbax硅石HPLC柱(4.6mm×250mm)經(jīng)HPLC分析過(guò)濾的提取物，熒光檢測(cè)的激發(fā)波長(zhǎng)290nm，發(fā)射波長(zhǎng)336nm。溶劑成分以及工作條件如下所列，溶劑A為己烷，溶劑B為甲基-叔丁基醚。注射體積為20μl，流速為1.5ml/分鐘并且運(yùn)行時(shí)間為40℃12分鐘。溶劑梯度為90％溶劑A，10％溶劑B10分鐘；25％溶劑A，75％溶劑B11分鐘；以及90％溶劑A，10％溶劑B12分鐘。在1％連苯三酚/乙醇中進(jìn)行生育酚標(biāo)準(zhǔn)的運(yùn)行用于比較(α-生育酚，γ-生育酚，β-生育酚，δ-生育酚以及生育酚(母育酚))。利用Chemstation軟件(HewlettPackard)計(jì)算α，β，δ以及γ生育酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在1％連苯三酚/乙醇中運(yùn)行生育三烯酚標(biāo)準(zhǔn)用于比較(α-生育三烯酚，γ-生育三烯酚，β-生育三烯酚，δ-生育三烯酚。利用Chemstation軟件(HewlettPackard)計(jì)算α-，β，δ-以及γ-生育三烯酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)的方案(Craft，Meth.Enzymol.，213185-205(1992)確定轉(zhuǎn)基因玉米粒內(nèi)類胡蘿卜素的水平。經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)的方案(Threlfall等，MethodsinEnzymology，XVIII，C部分，369-396(1971)；以及Ramadan等，Eur.FoodRes.Technol.，214(6)521-527(2002))確定plastiquinol以及葉綠醌。參考文獻(xiàn)Altschul，S.F.etal.，J.Mol.Biol.215403-410，1990.Altschul，S.F.etal.，NucleicAcidsRes.253389-3402，1997.AusubelFMetal.，CurrentProtocolsinMolecularBiology，JohnWiley&Sons，NewYork，N.Y.，1993.BaldwinDetal.，CurOpinPlantBiol.2(2)96-103，1999.Batemanetal.，1999，NucleicAcidsRes27260-262(websiteatpfam.wustl.edu).BaulcombeD，ArchVirolSuppl15189-201，1999.Cannonetal.，PlantMolec.Biol.(1990)1539-47.Ch′ngetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1989)8610006-10010ChristensenSetal.，9thInternationalConferenceonArabidopsisResearch.Univ.ofWisconsin-Madison，June24-28，1998.Abstract165.Christouetal.，Proc.Natl.Acad.SciUSA(1989)867500-7504.DeBlocketal.，PlantPhysiol.(1989)91694-701.DieffenbachCandDvekslerG(Eds.)PCRPrimerALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，NY，1989.Everettetal.，Bio/Technology(1987)51201Feldmannetal.，Science2431351-1354，1989.FocksNandBenningC，PlantPhysiol11891-101，1998.FridborgIetal.，PlantCell111019-1032，1999.HarlowEandLaneD，AntibodiesALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，1988，NewYork.HarlowEandLaneD，UsingAntibodiesALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，1999，NewYorkHayashiHetal.，Science2581350-1353，1992.Jakoetal.，PlantPhysiology126(2)861-74，2001.JamesDWandDoonerHK(1990)TheorApplGenet80，241-245.JonesJDetal.，TransgenicRes1285-2971992.KardailskyIetal.，Science2861962-1965，1999.KatavicVetal.，PlantPhysiology108(1)399-409，1995.Klineetal.，Nature(1987)32770.KunkelTAetal.，MethodsEnzymol.204125-39，1991.LemieuxB.，etal.，1990，TheorApplGenet80，234-240.NakamuraYetal.，1999，NucleicAcidsRes27292.Napoli，etal.，PlantCell2279-289，1990.Okuleyetal.，PlantCell6(1)147-158，1994.Sambrooketal.，MolecularCloningALaboratoryManual(SecondEdition)，ColdSpringHarborPress，Plainview，N.Y.，1989.SchafferR，etal.，Cell931219-1229，1998.Sheehyetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1988)858805-8809.Smith，etal.，Nature334724-726，1988.Smithetal.，Mol.Gen.Genetics(1990)224477-481.ThompsonJDetal.，NucleicAcidsRes224673-4680，1994.vanderKroletal.，Biotechniques(1988)6958-976.vanderKroletal.，ThePlantCell(1990)2291-299.VanHaarenMJJetal.，PlantMolBio21625-640，1993.VerdaguerBetal.，PlantMolBiol371055-1067，1998.Waterhouse，etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA9513959-13964，1998.WeigelD，etal.，PlantPhysiology，1221003-1013，2000.WilsonKetal.，PlantCell8659-671，1996.YadavNSetal.，(1993)PlantPhysiol103，467-476.序列表<110>農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)有限責(zé)任公司(Agrinomics，LLC)<120>生產(chǎn)改變含油量的植物(GENERATIONOFPLANTSWITHALTEREDOILCONTENT)<130>SCT065700-66<150>US60/575,202<151>2004-05-28<160>13<170>PatentInversion3.3<210>1<211>1272<212>DNA<213>Arabidopsisthaliana<400>1ttaaagtaatgacttttttttatatgatatattctcaattttgttactcggaaacaatag60aaaggataacgaatcgtttctcttcgatcgaaagaatatatatttggaagttttctctgc120ttttttgttttcgtttgatagaatgggaacagttctcgattcgcattttctggctctcac180tgctattgtcactgtgatttaccagttcatattcttcgtaatcacggctcttttcaaatt240tgatcaagtcactgactttgctggtagcacaaacttcgttatacttgctgtgttaacact300tgttctcaaagcctcttggcattttcgacagatagtattgactttgctagttgtggtatg360gggtcttcgcttggggattttccttctaatgaggatcttgcaatggggggaagatcgtcg420ctttgatgaacagcgtggaaatatagtgagactaatcattttctggactcttcaggctgt480gtgggtttggacggttagcttacctttaacacttgttaatgcaagtgatggtggtggatc540tcttaaacccgcagatgttatcggttggactatgtgggttttcggtttcttgattgaagc600tgcagctgatcaacagaagctatcattcaaaaactctcctgaaaacagaggaaaatggtg660tgatgttggagtctggaagtattcaagacatccaaactacttcggtgagatgttactgtg720gtggggaatctttgtggctgcatcgcctgtgcttgaaggtgcagagtatcttgtcatatt780cggaccactctttctcactttgctacttctattcgtcagcggcataccattactcgaggc840atcggctgacaaaaaacatggaaactcaggagcttacagatcctacaagaagacaacaag900tcctctgattctgttcccaagaggagtgtatgggaacttaccaggatggttcaagacggt960ctttctcttcgagtttccattttacagccgaaatctccctcaagaggtggctgtttagta1020actgcttattctgtttcagtttcatcttttatatcttactttagtgtttgatgagtttgg1080cttctctttgttgtatgtgtgcaagaaagttagggtagactccaaaacagcaaagagaaa1140gaagtaaaagatgactgatttgtgatactcatatttgagttattgttcttcacaacactc1200tttgataaaatttgtgtaaaaaattgcccgtaagaaactgaatttgtttgaaatattgga1260cagtcttgacag1272<210>2<211>291<212>PRT<213>Arabidopsisthaliana<400>2MetGlyThrValLeuAspSerHisPheLeuAlaLeuThrAlaIleVal151015ThrValIleTyrGlnPheIlePhePheValIleThrAlaLeuPheLys202530PheAspGlnValThrAspPheAlaGlySerThrAsnPheValIleLeu354045AlaValLeuThrLeuValLeuLysAlaSerTrpHisPheArgGlnIle505560ValLeuThrLeuLeuValValValTrpGlyLeuArgLeuGlyIlePhe65707580LeuLeuMetArgIleLeuGlnTrpGlyGluAspArgArgPheAspGlu859095GlnArgGlyAsnIleValArgLeuIleIlePheTrpThrLeuGlnAla100105110ValTrpValTrpThrValSerLeuProLeuThrLeuValAsnAlaSer115120125AspGlyGlyGlySerLeuLysProAlaAspValIleGlyTrpThrMet130135140TrpValPheGlyPheLeuIleGluAlaAlaAlaAspGlnGlnLysLeu145150155160SerPheLysAsnSerProGluAsnArgGlyLysTrpCysAspValGly165170175ValTrpLysTyrSerArgHisProAsnTyrPheGlyGluMetLeuLeu180185190TrpTrpGlyIlePheValAlaAlaSerProValLeuGluGlyAlaGlu195200205TyrLeuValIlePheGlyProLeuPheLeuThrLeuLeuLeuLeuPhe210215220ValSerGlyIleProLeuLeuGluAlaSerAlaAspLysLysHisGly225230235240AsnSerGlyAlaTyrArgSerTyrLysLysThrThrSerProLeuIle245250255LeuPheProArgGlyValTyrGlyAsnLeuProGlyTrpPheLysThr260265270ValPheLeuPheGluPheProPheTyrSerArgAsnLeuProGlnGlu275280285ValAlaVal290<210>3<211>1192<212>DNA<213>Arabidopsisthaliana<400>3ttaaagtaatgacttttttttatatgatatattctcaattttgttactcggaaacaatag60aaaggataacgaatcgtttctcttcgatcgaaagaatatatatttggaagttttctctgc120ttttttgttttcgtttgatagaatgggaacagttctcgattcgcattttctggctctcac180tgctattgtcactgtgatttaccagttcatattcttcgtaatcacggctcttttcaaatt240tgatcaagtcactgactttgctggtagcacaaacttcgttatacttgctgtgttaacact300tgttctcaaagcctcttggcattttcgacagatagtattgactttgctagttgtggtatg360gggtcttcgcttggggattttccttctaatgaggatcttgcaatggggggaagatcgtcg420ctttgatgaacagcgtggaaatatagtgagactaatcattttctggactcttcaggctgt480gtgggtttggacggttagcttacctttaacacttgttaatgcaagtgatggtggtggatc540tcttaaacccgcagatgttatcggttggactatgtgggttttcggtttcttgattgaagc600tgcagctgatcaacagaagctatcattcaaaaactctcctgaaaacagaggaaaatggtg660tgatgttggagtctggaagtattcaagacatccaaactacttcggtgagatgttactgtg720gtggggaatctttgtggctgcatcgcctgtgcttgaaggtgcagagtatcttgtcatatt780cggaccactctttctcactttgctacttctattcgtcagcggcataccattactcgaggc840atcggctgacaaaaaacatggaaactcaggagcttacagatcctacaagaagacaacaag900tcctctgattctgttcccaagaggagtgtatgggaacttaccaggatggttcaagacggt960ctttctcttcgagtttccattttacagccgaaatctccctcaagagttagggtagactcc1020aaaacagcaaagagaaagaagtaaaagatgactgatttgtgatactcatatttgagttat1080tgttcttcacaacactctttgataaaatttgtgtaaaaaattgcccgtaagaaactgaat1140ttgtttgaaatattggacagtcttgacagattatctcagttgtatttggttc1192<210>4<211>290<212>PRT<213>Arabidopsisthaliana<400>4MetGlyThrValLeuAspSerHisPheLeuAlaLeuThrAlaIleVal151015ThrValIleTyrGlnPheIlePhePheValIleThrAlaLeuPheLys202530PheAspGlnValThrAspPheAlaGlySerThrAsnPheValIleLeu354045AlaValLeuThrLeuValLeuLysAlaSerTrpHisPheArgGlnIle505560ValLeuThrLeuLeuValValValTrpGlyLeuArgLeuGlyIlePhe65707580LeuLeuMetArgIleLeuGlnTrpGlyGluAspArgArgPheAspGlu859095GlnArgGlyAsnIleValArgLeuIleIlePheTrpThrLeuGlnAla100105110ValTrpValTrpThrValSerLeuProLeuThrLeuValAsnAlaSer115120125AspGlyGlyGlySerLeuLysProAlaAspValIleGlyTrpThrMet130135140TrpValPheGlyPheLeuIleGluAlaAlaAlaAspGlnGlnLysLeu145150155160SerPheLysAsnSerProGluAsnArgGlyLysTrpCysAspValGly165170175ValTrpLysTyrSerArgHisProAsnTyrPheGlyGluMetLeuLeu180185190TrpTrpGlyIlePheValAlaAlaSerProValLeuGluGlyAlaGlu195200205TyrLeuValIlePheGlyProLeuPheLeuThrLeuLeuLeuLeuPhe210215220ValSerGlyIleProLeuLeuGluAlaSerAlaAspLysLysHisGly225230235240AsnSerGlyAlaTyrArgSerTyrLysLysThrThrSerProLeuIle245250255LeuPheProArgGlyValTyrGlyAsnLeuProGlyTrpPheLysThr260265270ValPheLeuPheGluPheProPheTyrSerArgAsnLeuProGlnGlu275280285LeuGly290<210>5<211>1337<212>DNA<213>Arabidopsisthaliana<400>5ttaaagtaatgacttttttttatatgatatattctcaattttgttactcggaaacaatag60aaaggataacgaatcgtttctcttcgatcgaaagaatatatatttggaagttttctctgc120ttttttgttttcgtttgatagaatgggaacagttctcgattcgcattttctggctctcac180tgctattgtcactgtgatttaccagttcatattcttcgtaatcacggctcttttcaaatt240tgatcaagtcactgactttgctggtagcacaaacttcgttatacttgctgtgttaacact300tgttctcaaagcctcttggcattttcgacagatagtattgactttgctagttgtggtatg360gggtcttcgcttggggattttccttctaatgaggatcttgcaatggggggaagatcgtcg420ctttgatgaacagcgtggaaatatagtgagactaatcattttctggactcttcaggctgt480gtgggtttggacggttagcttacctttaacacttgttaatgcaagtgatggtggtggatc540tcttaaacccgcagatgttatcggttggactatgtgggttttcggtttcttgattgaagc600tgcagctgatcaacagaagctatcattcaaaaactctcctgaaaacagaggaaaatggtg660tgatgttggagtctggaagtattcaagacatccaaactacttcggtgagatgttactgtg720gtggggaatctttgtggctgcatcgcctgtgcttgaaggtgcagagtatcttgtcatatt780cggaccactctttctcactttgctacttctattcgtcagcggcataccattactcgaggc840atcggctgacaaaaaacatggaaactcaggagcttacagatcctacaagaagacaacaag900tcctctgattctgttcccaagaggagtgtatgggaacttaccaggatggttcaagacggt960ctttctcttcgagtttccattttacagccgaaatctccctcaagagggtagactccaaaa1020cagcaaagagaaagaagtaaaagatgactgatttgtgatactcatatttgagttattgtt1080cttcacaacactctttgataaaatttgtgtaaaaaattgcccgtaagaaactgaatttgt1140ttgaaatattggacagtcttgacagattatctcagttgtatttggttcttttttttatgt1200gattttgttttttggttaaaaaaagttcccattccaagaatcgaacccgggtctcctggg1260tgaaagccaaatatcctaaccgctggacgacatcggatttgattatttgattatttaatt1320actttatatgttgattt1337<210>6<211>302<212>PRT<213>Arabidopsisthaliana<400>6MetGlyThrValLeuAspSerHisPheLeuAlaLeuThrAlaIleVal151015ThrValIleTyrGlnPheIlePhePheValIleThrAlaLeuPheLys202530PheAspGlnValThrAspPheAlaGlySerThrAsnPheValIleLeu354045AlaValLeuThrLeuValLeuLysAlaSerTrpHisPheArgGlnIle505560ValLeuThrLeuLeuValValValTrpGlyLeuArgLeuGlyIlePhe65707580LeuLeuMetArgIleLeuGlnTrpGlyGluAspArgArgPheAspGlu859095GlnArgGlyAsnIleValArgLeuIleIlePheTrpThrLeuGlnAla100105110ValTrpValTrpThrValSerLeuProLeuThrLeuValAsnAlaSer115120125AspGlyGlyGlySerLeuLysProAlaAspValIleGlyTrpThrMet130135140TrpValPheGlyPheLeuIleGluAlaAlaAlaAspGlnGlnLysLeu145150155160SerPheLysAsnSerProGluAsnArgGlyLysTrpCysAspValGly165170175ValTrpLysTyrSerArgHisProAsnTyrPheGlyGluMetLeuLeu180185190TrpTrpGlyIlePheValAlaAlaSerProValLeuGluGlyAlaGlu195200205TyrLeuValIlePheGlyProLeuPheLeuThrLeuLeuLeuLeuPhe210215220ValSerGlyIleProLeuLeuGluAlaSerAlaAspLysLysHisGly225230235240AsnSerGlyAlaTyrArgSerTyrLysLysThrThrSerProLeuIle245250255LeuPheProArgGlyValTyrGlyAsnLeuProGlyTrpPheLysThr260265270ValPheLeuPheGluPheProPheTyrSerArgAsnLeuProGlnGlu275280285GlyArgLeuGlnAsnSerLysGluLysGluValLysAspAsp290295300<210>7<211>585<212>DNA<213>Artificialsequence<220><223>syntheticconstruct<400>7gcaaagaccgaacagggaaagttatggattcccatttcttgggcctcactgccattgtta60ccttgggttatcagttaacatttttcattatcacagcactcttcaggtttgataaagtta120ctgactttgcgggaggtacgaacttcattatacttgctattttgaccttggtgctaaagg180gttcatggcactttcgacaggtggttttgtctctatttgtagttatatggggccttcggt240tggggcttttcttattaatgaggatattacagtggggggaggacagacgttttgatgaca300aacgtgacaatcttggaaaactggcaatattttggatacttcaggcaatctgggtatgga360ctgttagtttaccagtgacagttgttaatgcaagtgacaagcagccttctgttcaggctc420aagacatcattggttggattatgtggattattgggattttagttgagattacagctgacc480aacaaaaattggcgttcaaaaactcctcggagaacagaggaaagtggtgcagtgttggcc540tttggaaatattctcgtcatccaaactattttggtgagattttac585<210>8<211>927<212>DNA<213>Artificialsequence<220><223>syntheticconstruct<400>8ttctttgtgaatggggacagttatagactcccatttgttgggcctaaccgccattgttac60agtggtttaccaattaatcttttttataatcacagcactcctcaaatttgataaagtcac120agatttctcaggaggtacaaatttcattgtgcttgcagaattaactttgatactaaaagg180ttcatggaattttcgacaggtggttttgtctgtgtttgtcgtgatatggggccttcgact240ggggctatttctattaatgaggatattacaatggggcgaggatagacgttttgatgataa300gcgtgataatctggggaaactggcaatattttggctatttcaggcaatctgggtgtggac360tgtgagtttaccagtgacagttgttaatgcaagtgaccaccaaccatctgttcagacggt420agacatcattggttggattatgtggtctatcggaatatcagttgagattacagctgacca480acaaaaattggcattcaaaaactccccggaaaacagaggaaagtggtgcagtgatggcct540ttggaaatattctcgccatccaaactattttggtgagattttactttggtggggaatttt600cctggcttccacaccggtgctagagggtgctgaatggctggttgtgtttggaccagtctt660cataaccttgctgctcctttttgttagtggcatacccttgcttgaggcatcaggagacaa720gaagtttggaaatgttggtgcatacagatcatataagagaaaaactagccctcttattct780gctgcctcctggtgtgtatggggagtcttcctcaatggttcaaaaccatactcctttttg840agtttcctttttacagtcgcaatcttccgcagaaaagagtaagctggaaatagacaaccc900agccaggaagcagtagaacagacccga927<210>9<211>465<212>DNA<213>Artificialsequence<220><223>syntheticconstruct<220><221>misc_feature<222>(413)..(413)<223>nisa，c，g，ort<220><221>misc_feature<222>(456)..(456)<223>nisa，c，g，ort<400>9gtgagaggaggaggataaacggaggaggccgcgatgggaaccgtgctggactcccacttc60ctggcgctcacggccatcgtcactgtgggatatcagctggtgttcttcatcatcaccgcg120ctcctgcggttcgataaagtcactgatttcgcaggaagtacgaatttcatcatacttgca180atcctcacgctagctttgaagggagcatggcatttccgtcaggttgtattgactgtgctc240gttgtgatttggggtcttcgcttaggactattcttattaatgaggattcttcaatgggga300gaggacaaacggtttgatgaaatgcgcgataacttgggaaaactagcagttttctggatt360ttccaggctgtttggggtatggactggtccagcttgcctggttacaattgtgnacgcaag420tggccagcgatccctccaattgaagcccgtgatatnattggttgg465<210>10<211>1262<212>DNA<213>Artificialsequence<220><223>syntheticconstruct<400>10aagagaaaataaaagaagagacaccccataaggccataagcataaaaggagctgacaaat60gaacacaacaaactgaaaaaatcagtctttatagatcgaacaaaactatagtgaagtaca120acgtaatcccctcaaaatgggaaccgttttagactcccattttctagcactcactgccat180cgtcactgtgggataccaactgctgtttttcgttatcactgcccttctgaagtttgataa240agtcactgactttgccggaagcacaaattttattatactagctgtgttgactctggtttt300gaaagggacatggcatttcagacaggtagtcttaagtttccttgtagtatcttggggtct360tcgcctgggactgttcctgttactgaggattctgcagtggggggaggatagacgttttga420tgaaatgcgtagtaacttggggaaattagctgttttctggatatttcaggctgtctgggt480gtggactgtgagtttacctgtaacagtggttaatggaattgacagggatccttccgttca540ggctgcagacataattggctggattatgtggtctgttggtgtttcagttgaagctacagc600tgatcaacaaaaactgacattcaagaatgctccacaaaacagagggaaatggggcaatgt660tggattatggaatatatctcgtcacccaaactattttggcgaaattctcctttggtgggg720tatttttgtggcttctgcacctgtactggaaggtgctgaatggctggtgatccttgggcc780aatctttctcacattgttgcttctttttgtcagtggcataccattgcttgagcaatctgc840tgacaagaaatttggcaacgtggctgcatacagggcatataaaaggacaaccagccctct900aattccactgccccaagcagtgtacaggagcttaccttcatggttcaaaactgttttcct960ctttgaatttcctctctacagtcgtaattttccagaagaggggtcaacatgaacaagaca1020aggtggaggcagcgatggatcgaagattggctagaagttcaacaggggaatctgccctgt1080tttggtaactttaatgtactaggaatagttttagctgttaagctacatagacgccatgtt1140ctttctattactagctgtcggttgattttctttctcctgcctgaaacatgtctccacctc1200tactgttctgtccactgagtttccttcccacacaatcaatgctgatttcttatatttaag1260tt1262<210>11<211>605<212>DNA<213>Artificialsequence<220><223>syntheticconstruct<400>11gtttatccaacgaggtctgttttattattgcaagagttaagaactcgactcaagaagaca60gcaaaagtactgagccatgggtaccgtcatcgagtcccatttcttagccttcactgccct120tgtcactattgcctatcagtttctgtttttcgtcgtcactgcgctcctcaaattcgacaa180agtcactgattttgctggaagtacgaatttcatcataattgctgcattgaccctggtcat240caaagcctcctggtattttcgacagataatcctcactttgtttgttgggacatggggact300tcgcctctgccttttcctcctattcagaattttgcagtggggagaggaccggcgcttcga360tgaaatgcgtagtaatttgggtagactggccatattttggatatttcaggctgtctgggt420gtgggttgtgagtttacctgttacgttggttaatgcaagcgacagaaatcccttcctaca480ggttgttgatatagtagggtggattttgtgggctgtgggttttattgtggaaggtacagc540agatcaacaaaagctgcatttcaaaagatcttcagaaaatagagggaagtggtgtaatgt600tggac605<210>12<211>864<212>DNA<213>Artificialsequence<220><223>syntheticconstruct<400>12gcacgagcagaaacccctcgattgaagccagggatataatcggttggataatatggttgg60tcgggatatgtgtagaagcaacagctgatcagcagaagcttgtgttcaaaaattctccaa120gtaacaggggaaagtggtgcaacgccggtctttggaagtactctcgccacccgaactact180ttggggagatattcctttggtggggagtatttgtagcatcgaccccagttatctcagatg240ccgaatggcttgtgattcttggacctatattcctgactcttctgcttcttttcgttagtg300gaatcccactcctcgagtcatctgctgataagcgctatggacgattggaggaataccgtg360catacaagaacactacaagccctcttatcccatgccacctgctgtgtatggttccctgcc420tgcgtggttcaaggttgccttcctccttgagctcccgctctacaatcctgggccgggagg480tgatccaatcaaaccagaatgagcccattgatgggtcagcctgatgtttatgttgctatt540gtgtgcgtggcagttattccaccttcgattccaaggggttacagtggagtttggcccctg600atttatcgctcgcgaggctcaaacatgtatcttgttggttgaaagttagatttcttttgt660tgccctccctgcctccatgtgcagatgaatagatgcttagaaacctgaacgtggaacgtg720ttcaccttcctcgctccaaaaaagtgggaacggaacaatcttgtccatatagtgttaaag780tatttttttttaagtacggtaccacgttcctgtttctggttcccatcaatccgagaactg840attagatgatcaaaaaactcgtgc864<210>13<211>1569<212>DNA<213>Artificialsequence<220><223>syntheticconstruct<400>13gcacgaggaggcgatcgcaccacggtcccgtctcgcacagccgcgcattcgcaccaccag60ggtcgcatcgcacgcattcgcccgcctccctgtccagcctccagccacaagtgacaactg120acaagtcctcctgacctcctccccctcccaacgcgctccgccgggtcgcatcgccgccgc180cgccgccgtcgaccgaacccagtccaacccccgttaaaagcccggccggcgcgcgtgctc240gcttctcacttcattttaattctcaaagaaaggaaagggagaaggataaagaaacagacc300aacaaatccactgacggccggcggggaagaaaaggcgagaagatgggaacagtgctggac360tcccacttcctggcgctcaccgccctcgtcaccgtcgggtaccagctggtgttcttcatc420atcacagccctcctccgcttcgacaaggtcacggatttcgcaggcagtacaaattttgtc480ataatcgccgtcctggtagcagctttgaagggaacatggcacttccgtcagatcgtgttg540acagtgcttgttataatctggggacttcgtctggcagtgtttttactaatgaggattttg600caatggggagaggacaaacggtttgatgagatgcgcagtaacttgggaaaattagctgtc660ttctggacttttcaggctgtctgggtttggactgtcagcttgcctgttacaattgtgaac720gcaagtagcagaaacccttctattgaagctcgggatatcattggttggataatgtgggtc780atcgggctatctgtggaagctatagctgatcagcaaaagcttaaattcaagaactctcca840agcaataggggaaagtggtgtaatgtgggcctttggagttatactcggcacccaaattac900tttggggagatgttcctttggtggggggtgtttgtagcatcaaccccggttctctcagga960gctgaatggcttgtaatcttggggcccatcttcctgacgctcttgcttcttttcgttagt1020gggatcccacttcttgagtcatctgctgataagcgctttggtcggtctgaggaataccgc1080acatacaagaaaaccacaagccctcttatcccattgccgccggtcgtgtatggagccctg1140cccgattggttcaaggtggcattcctcctggagctgcccctctacaaccccggaccggaa1200cgcgaccccgtcagctgagtgatgaatgtgcattgttcttctgatcacaagtgattatac1260atgtaatgtactgcttttattctggatgggtgattcttttgcccattgatctcaagggtt1320tacggtgaagtttgtccatatgtatctatctccacgggatgttcaaagcatagattgtgt1380acttgtctttaatagggatattgtgtacttgtgttaatagtggaaaagtttgattttatg1440ttgtacccaaagtctgaatttttctctagtttctatgggaattttactctttgtcacgaa1500ctccatttaaaatttctatttctaaacgggcttcgatggtttgtgaagcttgcatgagtt1560catatttaa1569權(quán)利要求1.包括植物轉(zhuǎn)化載體的轉(zhuǎn)基因植物，該植物轉(zhuǎn)化載體含有編碼或互補(bǔ)于編碼包括SEQIDNO2，4或6的氨基酸序列的HIO1002多肽或其直系同源物的序列的核苷酸序列，由此相對(duì)于對(duì)照植物，該轉(zhuǎn)基因植物具有高油表型。2.權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)基因植物，其選自油菜籽，大豆，玉米，向日葵，棉花，可可，紅花，油棕，椰子，亞麻，蓖麻和花生。3.從權(quán)利要求1的植物獲得的植物部分。4.權(quán)利要求3的植物部分，其是種子。5.從權(quán)利要求4的種子生產(chǎn)的粗粉，飼料或者食品。6.一種生產(chǎn)油的方法，其包括培育權(quán)利要求1的轉(zhuǎn)基因植物，以及從所述植物回收油。7.權(quán)利要求6的方法，其中的油回收自所述植物的種子。8.產(chǎn)生高油表型植物的方法，所述方法包括把植物轉(zhuǎn)化載體導(dǎo)入到植物的祖細(xì)胞中，該植物轉(zhuǎn)化載體含有編碼或互補(bǔ)于編碼包括SEQIDNO2，4或6的氨基酸序列的HIO1002多肽或其直系同源物的序列的核苷酸序列，和b)培育該轉(zhuǎn)化的祖細(xì)胞以生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因植物，其中表達(dá)所述的多核苷酸序列，而且相對(duì)于對(duì)照植物，所述的轉(zhuǎn)基因植物顯示改變的含油量表型。9.通過(guò)權(quán)利要求8的方法獲得的植物。10.權(quán)利要求9的植物，其選自油菜籽，大豆，玉米，向日葵，棉花，可可，紅花，油棕，椰子，亞麻，蓖麻和花生。11.產(chǎn)生具有高油表型植物的方法，包括鑒定具有HIO1002基因的等位基因的植物以及產(chǎn)生所述鑒定的植物的子代，所述HIO1002基因的等位基因引起與缺少該等位基因的植物相比含油量的增加，其中產(chǎn)生的子代遺傳該等位基因并且為高油表型。12.權(quán)利要求11的方法，其使用候選基因/QTL法。13.權(quán)利要求11的方法，其使用TILLING法。14.飼料，粗粉，谷粒，食物或者種子，包含由SEQIDNO1，3或5的核酸序列編碼的多肽。15.飼料，粗粉，谷粒，食物或者種子，包括含有SEQIDNO2，4或6的氨基酸序列或者其直向同源物的多肽。全文摘要本發(fā)明涉及由于HIO1002核酸的改變的表達(dá)，而顯示改變的含油量表型的植物。本發(fā)明更進(jìn)一步涉及生產(chǎn)具有改變的含油量表型的植物的方法。文檔編號(hào)A01H5/00GK1993470SQ200580017394公開日2007年7月4日申請(qǐng)日期2005年5月26日優(yōu)先權(quán)日2004年5月28日發(fā)明者約翰·戴維斯,桑德拉·彼得斯,海因·措恩格·額申請(qǐng)人:農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)有限責(zé)任公司