檢測IgM抗體的膠體金試紙條及其試紙卡、試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本實用新型涉及一種試紙條，具體涉及一種檢測IgM抗體的膠體金試紙條，所述 IgM抗體為九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗體，以及包括該膠體金試紙條的膠體金試紙 卡及膠體金試劑盒。
【背景技術】
[0002] 目前通過免疫熒光試劑盒檢測樣品中的九項呼吸道病原體的特異性IgM抗體是一 種成熟的技術，但是所需時間較長。例如，安圖生物公司九項呼吸道感染病原體IgM抗體檢 測試劑盒采用間接免疫熒光法原理，在載玻片上（10孔/片)分別包被：1孔包被嗜肺軍團菌 血清I型，2孔包被McCoy細胞中的肺炎支原體，3孔包被Q熱立克次體II相，4孔包被肺炎衣原 體(原生小體），5孔包被HEp-2細胞中的腺病毒，6孔包被HEp-2細胞中的呼吸道合胞病毒，7 孔包被LLC-MK2細胞中的甲型流感病毒，8孔包被LLC-MK2細胞中的乙型流感病毒，9孔包被 LLC-MK2細胞中的副流感病毒1，2和3型，10孔為質(zhì)控孔。除嗜肺軍團菌，載玻片中所有抗原 都是從細胞培養(yǎng)物中獲得。簡單步驟為:稀釋血清樣本(5min)-加入抗人IgG吸附劑處理血 清樣本，并離心，（20min)-在載玻片中加入所檢測血清樣本，并37°C孵育90min-清洗并晾 干15min-加兔抗人IgM-FITC結合物，并7°C孵育30min-清洗并晾干15min-加入封閉介質(zhì) 并置于顯微鏡下觀察結果15min，所以檢測時間需要約3小時以上。
[0003] 現(xiàn)有技術中還有其他的檢測呼吸道病原體的試劑盒，但這些試劑盒及相關檢測方 法常需要擴增樣品的核酸片段，有的需培養(yǎng)或制備相應的探針溶液，有的還需使用大型儀 器設備，如質(zhì)譜儀、GeXP遺傳分析儀等進行檢測。這會付出額外的培養(yǎng)時間和反應時間，并 且要求有專業(yè)人員和昂貴的專業(yè)設備相配合才能得以實施，因而檢測成本高且效率較低。
[0004] 膠體金試紙條作為一種快速現(xiàn)場檢測技術，操作簡便，一般15分鐘內(nèi)即可肉眼讀 出結果。然而，目前還未見在一個膠體金試紙條上同時檢測九項呼吸道病原體的特異性IgM 抗體的報道。 【實用新型內(nèi)容】
[0005] 因此，本實用新型的目的在于克服現(xiàn)有技術中的上述缺陷，提供了一種特異性強、 檢測便捷、價格低廉的檢測九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗體的膠體金試紙條，還提供 了包括該膠體金試紙條的膠體金試紙卡及膠體金試劑盒。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本實用新型提供了一種檢測IgM抗體的膠體金試紙條，所述IgM 抗體為九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗體，所述膠體金試紙條包括在聚氯乙烯(PVC)底 板上依次貼附的樣品墊、結合物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊;所述結合物墊為包覆有兔抗人 IgM抗體-膠體金結合物的玻璃纖維膜;所述硝酸纖維素膜依次包被有9條檢測線和1條質(zhì)控 線，所述9條檢測線分別為肺炎支原體重組抗原、肺炎衣原體重組抗原、甲型流感病毒抗原、 乙型流感病毒抗原、副流感病毒抗原、嗜肺軍團菌抗原、Q熱立克次體抗原、呼吸道合胞病毒 抗原和腺病毒抗原(下文中可分別簡稱為T1~T9線），所述質(zhì)控線為二抗(下文中可簡稱為C 線）。以上9條檢測線可以以任意順序排列而不影響檢測結果。
[0007] 本實用新型涉及的呼吸道感染病原體的相關介紹如下：
[0008] 肺炎支原體:肺炎支原體引起的肺炎在兒童和青少年中最為常見，可在呼吸道粘 膜上皮內(nèi)潛伏，部分患者無明顯癥狀，但大部分患者為顯性感染，在3歲以下兒童呼吸道感 染多見，成人以肺炎表現(xiàn)為主。肺炎支原體肺炎潛伏期為14~21天，起病緩慢，IgM抗體一般 在感染后1周出現(xiàn)，3~4周達高峰期，可持續(xù)3~6個月。
[0009] 肺炎衣原體:肺炎衣原體極易造成呼吸系統(tǒng)感染，特別是支氣管炎和肺炎，在老年 人中發(fā)病率較高，它所引起的肺炎占所有肺炎病例的10%，肺炎衣原體所感染所致的肺炎， 癥狀和體征無特異性，多數(shù)起病緩慢，潛伏期一般為30天左右，IgM抗體在發(fā)病2~3周出現(xiàn)， 一般來說可持續(xù)存在2~6個月。
[0010] 流感病毒:它是流感的病原體，在具有潛在病理學的患者中會產(chǎn)生嚴重的并發(fā)癥。 由于它易與其它呼吸道疾病混淆，所以在流行期間臨床診斷很困難，因此實驗室診斷顯得 非常重要。流感病毒感染的潛伏期一般為1~7天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)，可持續(xù)2~3 個月。
[0011] 副流感:副流感病毒在2~4歲兒童中能引起喉氣管支氣管炎，潛伏期一般為2~7 天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)，可持續(xù)2~3個月。
[0012] 嗜肺軍團菌:人最易感染嗜肺軍團菌1型，非典型性肺炎常伴隨有全身癥狀。10% 的肺炎是由嗜肺軍團菌1型所引起的，潛伏期一般為2~10天，IgM抗體存在感染后1周出現(xiàn)， 并可持續(xù)3~6個月。
[0013] Q熱立克次體:Q熱是由Q熱立克次體引起的全身疾病，會造成發(fā)熱，非典型肺炎，肝 炎或者心內(nèi)膜炎，潛伏期為2~38天，通常為12~19天，IgM抗體一般在感染后2周出現(xiàn)，4~8 周達高峰，可持續(xù)存在3~4個月。
[0014] 呼吸道合胞病毒:是兩歲以下幼兒呼吸道感染的主要病原體，在冬季爆發(fā)流行。潛 伏期為3~7天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)。
[0015] 腺病毒:腺病毒是一種重要的呼吸道病原體，能引起上呼吸道疾病，伴隨有急驟發(fā) 熱和輕度呼吸道感染。腺病毒感染的潛伏期為2~14天，IgM抗體在發(fā)病1周左右出現(xiàn)?？沙?續(xù)2~3個月。
[0016] 免疫球蛋白M(IgM)是人類或者動物體內(nèi)最重要的一種免疫球蛋白。當機體感染病 原體后，在體內(nèi)，最早出現(xiàn)的是該病原體的特異性的IgM抗體，之后IgM濃度降低，特異性的 IgG抗體升高。因此，通過檢測機體內(nèi)病原體特異性的IgM抗體的存在與否，可以診斷人或者 動物對該病原體是否有早期感染的可能。血清內(nèi)若檢測出病原體的特異性的IgM抗體，證明 該機體有近期感染的發(fā)生，如果能夠?qū)崿F(xiàn)早診斷、早診療，無疑對臨床醫(yī)生和患者都是具有 重要的意義。
[0017] 根據(jù)本實用新型的膠體金試紙條，其中，所述樣品墊為玻璃纖維膜。
[0018] 根據(jù)本實用新型的膠體金試紙條，其中，所述吸水墊為吸水紙。
[0019] 根據(jù)本實用新型的膠體金試紙條，其中，所述檢測線和質(zhì)控線的各相鄰線的間隔 為3~4mm〇
[0020] 根據(jù)本實用新型的膠體金試紙條，其中，所述檢測線和質(zhì)控線的各相鄰線的間隔 均為3mm。
[0021] 根據(jù)本實用新型的膠體金試紙條，其中，所述膠體金試紙條的寬度為3~5_。
[0022] 根據(jù)本實用新型的膠體金試紙條，其中，所述膠體金試紙條的寬度為4_。
[0023]根據(jù)本實用新型的膠體金試紙條，其中，所述樣品墊與結合物墊之間重疊1~2_， 所述結合物墊與硝酸纖維素膜之間重疊1~2mm，所述硝酸纖維素膜與吸水墊之間重疊1~ 2mm 〇
[0024] 根據(jù)本實用新型的膠體金試紙條，其中，選用的二抗為羊抗兔IgG抗體。
[0025] 該膠體金試紙條的檢測原理大體為:在樣品墊滴加入待測樣品后，通過毛細作用， 待測樣品將結合物墊中的兔抗人IgM抗體-膠體金結合物溶解釋放出來并向吸水墊一端的 方向移動。如果被檢測樣品中含有針對肺炎支原體、衣原體、甲型流感、乙型流感、副流感、 嗜肺軍團菌、Q熱立克次體、呼吸道合胞病毒、腺病毒中的任何一種或者多種病原體對應的 特異性的IgM抗體，則與金納米顆粒-兔抗人IgM抗體發(fā)生特異性反應，生成金納米顆粒-兔 抗人IgM抗體-特異性的IgM抗體復合物，當樣品繼續(xù)移動到T1~T9線時，其中有針對感染的 病原體的特異性IgM抗體會和相應的病原體的抗原發(fā)生特異性反應并被其捕獲，形成抗原-特異性IgM抗體-兔抗人IgM抗體-膠體金的復合物，因此在該測試線處形成一條紅色條帶， 樣品繼續(xù)移動到C線處時，多余的會被二抗捕獲，因而在C線處形成一條紅色條帶。C線顯色 證明該測試的有效性，C線不顯色則視為測試無效，需重新檢測。
[0026] 本實用新型還提供了一種檢測IgM抗體的膠體金試紙卡，所述IgM抗體為九項呼吸 道感染病原體特異性IgM抗體，所述膠體金試紙卡包括殼體和位于所述殼體中的本實用新 型的膠體金試紙條，所述殼體上設置有加樣孔和顯色觀察窗，所述加樣孔對準所述樣品墊 的位置，所述顯色觀察窗對準所述包被有9條檢測線和1條質(zhì)控線的硝酸纖維素膜的位置。
[0027] 本實用新型還提供了一種檢測IgM抗體的膠體金試劑盒，所述IgM抗體為九項呼吸 道感染病原體特異性IgM抗體，所述膠體金試劑盒包括鋁箱袋和密封在所述鋁箱袋中的干 燥劑、滴管以及本實用新型的膠體金試紙條或膠體金試紙卡。
[0028] 本實用新型的發(fā)明人將膠體金免疫層析技術和間接免疫法原理相結合，將測試線 包被九項呼吸道病原體所相應的重組抗原，通過免疫間接法原理，一步法就能夠快速檢測 出樣本中是否有九項呼吸道病原體相應的特異性的IgM抗體。到目前為止，沒有關于九項呼 吸道病原體特異性IgM抗體通過膠體金試紙條快速檢測的試劑盒。盡管安圖生物公司可以 實現(xiàn)同時檢測，但是耗時很長，大于3個小時。更具體地，本發(fā)明所提供的膠體金試紙條及相 關的試紙卡和試劑盒相對于現(xiàn)有技術可具有下列優(yōu)勢：
[0029] (1)檢測速度快、效率高。一般在10~15分鐘內(nèi)即可讀取顯色結果并進行判斷，不 需要額外的樣品培養(yǎng)時間或反應時間。
[0030] (2)特異性強、符合率高。膠體金試紙條上的9條檢測線可以針對性地分別檢測可 能存在的九項呼吸道病原體的特異性IgM抗體，并通過可目視的顯色（例如顯紅色或不顯 色）來體現(xiàn)特異性IgM抗體的陰性或陽性。根據(jù)本實用新型對實際樣品的檢測結果來看，其 對九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗體的檢測符合率均在95%以上。
[0031] (3)操作簡單，價格低廉，不需要專業(yè)技術人員或大型儀器設備即可實施檢測，尤 其適合在偏遠貧困地區(qū)使用。
[0032] (4)可適用于早期診斷，通過肉眼即可讀出檢測結果，從而獲取更多的相關信息， 輔助臨床醫(yī)生給予正確的醫(yī)療診斷等，早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療、早痊愈，具有重要的臨床意 義。
【附圖說明】
[0033]以下，結合附圖來詳細說明本實用新型的實施方案，其中：
[0034]圖1示出了本實用新型的檢測IgM抗體的膠體金試紙條的示意性的結構及原理圖； [0035]圖2示出了本實用新型的檢測IgM抗體的膠體金試紙卡的結構示意圖。
[0036] 附圖標記說明：
[0037] 1、樣品墊;11、九項呼吸道感染病原體特異性IgM抗體；
[0038] 2、結合物墊;21、兔抗人IgM抗體-膠體金結合物；
[0039] 3、硝酸纖維素膜;4、吸水墊；<