一種牛羊肉中18種磺胺類藥物殘留量的檢測(cè)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體來(lái)說(shuō)是一種?；蜓蚣∪饨M織中18種磺 胺類抗生素殘留量的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 牛肉和羊肉是消費(fèi)量大的肉類食品，其營(yíng)養(yǎng)豐富，富含蛋白質(zhì)、脂肪、磷脂、多種維 生素、礦物質(zhì)和鈣、磷、鐵、鋅、銅、錳等多種微量元素。牛羊肉營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，是人類營(yíng)養(yǎng)的重 要來(lái)源，也是大宗的肉類消費(fèi)品。
[0003] 磺胺類藥物是人工合成的具有對(duì)氨基苯磺酰胺結(jié)構(gòu)的一類抗生素，因其抗菌譜 廣、價(jià)廉、使用方便而廣泛用于畜牧業(yè)養(yǎng)殖中。但磺胺的超量使用，會(huì)在牛羊等動(dòng)物體內(nèi)蓄 積，并通過(guò)牛羊肉等食品蓄積于人體內(nèi)，對(duì)人體造成潛在的抗藥性、致畸、致癌等危害。目 前，我國(guó)以及美國(guó)、歐盟等大多數(shù)國(guó)家都對(duì)食品中磺胺類藥物的最高殘留量有明確規(guī)定。
[0004] 目前，食品中磺胺類藥物殘留的檢測(cè)方法主要有：微生物檢測(cè)法、分光光度法、免 疫分析法、分子印記分析法、毛細(xì)管電泳法、色譜技術(shù)以及聯(lián)用技術(shù)等。微生物法和分光光 度法操作簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉，但結(jié)果的準(zhǔn)確性和靈敏度不高，不能滿足實(shí)際樣品的檢測(cè)要求； 免疫分析法包括放射免疫技術(shù)、酶聯(lián)免疫技術(shù)、熒光免疫測(cè)定技術(shù)和生物傳感技術(shù)，免疫分 析法和分子印記分析法均具有適用范圍廣，靈敏度高，準(zhǔn)確性高的優(yōu)點(diǎn)，但同時(shí)檢測(cè)多種藥 物殘留的能力弱，準(zhǔn)確定量能力弱。近年來(lái)，毛細(xì)管電泳技術(shù)得到廣泛應(yīng)用，但由于其進(jìn)樣 量少，靈敏度受到限制，不能用于痕量物質(zhì)的檢測(cè)。色譜技術(shù)主要有高效液相色譜法、氣相 色譜法、薄層色譜法和免疫色譜法，聯(lián)用技術(shù)主要是高效液相色譜-質(zhì)譜法和氣相色譜-質(zhì) 譜法。上述色譜技術(shù)均具有分辨率高，檢測(cè)限低等優(yōu)點(diǎn)，其中高效液相色譜法和高效液相色 譜-質(zhì)譜法是磺胺類藥物分析中應(yīng)用最多的檢測(cè)方法，但由于質(zhì)譜法所用儀器昂貴，且對(duì) 檢測(cè)要求高，高效液相色譜法采用紫外檢測(cè)器時(shí)靈敏度低，選擇性差。
[0005] 前處理方法直接影響檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性和靈敏度，磺胺類藥物前處理方法各有其 優(yōu)缺點(diǎn)，其中QuEChERS作為一種快速、簡(jiǎn)單、廉價(jià)、高效、耐用和安全的樣品處理方法，已經(jīng) 在各領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，但是由于原有歐盟和AOAC的方法主要是針對(duì)水果、蔬菜中農(nóng)藥的 檢測(cè)，而肉類基質(zhì)比較復(fù)雜，需對(duì)原有的配方進(jìn)行創(chuàng)造性的改造方才適用。
[0006] 食品中存在的磺胺類抗生素屬于痕量物質(zhì)，發(fā)達(dá)國(guó)家多采用高效液相色譜儀-質(zhì) 譜聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，該方法定性定量都很準(zhǔn)確，但成本相對(duì)較高，在我國(guó)的推廣使用有一 定局限性。
[0007] 磺胺類藥物本身不發(fā)熒光，只能通過(guò)衍生的方式才能使其具有熒光特性?；前泛?有光化學(xué)活性基團(tuán)，能發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生熒光物質(zhì)，從而可用熒光檢測(cè)器直接檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)中磺胺類抗生素檢測(cè)方法成本高、步驟繁瑣等缺點(diǎn)與不 足，本發(fā)明的目的在于提供一種牛羊肉中18種磺胺類抗生素的檢測(cè)方法。
[0009] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：牛羊肉中18種磺胺類藥物殘留量的 快速衍生高效液相色譜熒光檢測(cè)法。步驟包括：
[0010] (1)將不含磺胺物質(zhì)的牛肉或羊肉作為空白樣品和待測(cè)樣品5g分別加入50mL 離心管中，分別加入2. 5~Sg無(wú)水硫酸鎂、1~3g乙酸鈉，1~10%乙酸乙腈溶液（體積 比）20mL，PH3 ~5,10000 ~20000r/min 高速勻漿 2 ~5min，提取液 2000 ~4000r/min 離 心 5 ~IOmin0
[0011] (2)上清液采用加入含有多種吸附劑的凈化材料渦旋混合2~4min凈化除雜， 2000~4000r/min離心，吸取上清液IOmL于40~70°C減壓或氮吹濃縮至小于0. 5mL，用 10~20%甲醇水溶液定容至lmL，搖勻后得過(guò)0. 22 μ m微孔濾膜到供試品溶液。
[0012] (3)該溶液采用液相色譜反相鍵和C18為填料的色譜柱分離、紫外光照射在線快 速衍生，根據(jù)色譜峰保留時(shí)間定性，標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量，計(jì)算得到牛羊肉肌肉組織中18 種磺胺類獸藥組分的殘留量。
[0013] 進(jìn)一步的，本發(fā)明所述磺胺類抗生素指磺胺醋酰（sulfacetamide，SCM)、磺胺啼 啶（sulfadiazine，SDZ)、橫胺噻唑（sulfathiazole，STZ)、橫胺吡啶（sulfapyridine， SF1D)、橫胺甲基啼啶（sulfamerazine，SM1)、橫胺二甲惡挫（sufamoxol，SMX)、橫胺二 甲啼啶（sulfamethazine，SM2)、橫胺甲氧 ?達(dá)嗪（sulfamethoxypyridazine，SMP)、橫胺 氯 11達(dá)嗪（sulfachloropyridazine，SCP)、橫胺甲惡唑（sulfamethoxazole，SMZ)、橫胺 間甲氧啼啶鈉（sulfamonomethoxine，SMM)、橫胺二甲異惡唑（sulfisoxazole，SSX)、 苯酰磺胺（sulfabenzamide，SBZ)、磺胺苯吡唑（sulfaphenazole，SPP)、磺胺氯吡嗪 鈉（sulfaclozine，SPZ)、橫胺間二甲氧啼啶（sulfadimethoxine，SDM)、橫胺喹惡啉 (sulfaquinoxaline，SQZ)、橫胺硝苯（sulfanitran，SNT) 〇
[0014] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的特征在于，步驟（1)中，所述提取液為1~10%乙酸乙腈溶液， 其PH為3~5,高速勻漿條件為10000~20000r/min，離心條件是2000~4000r/min，離心 條件為5~10min。
[0015] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的特征在于，步驟⑵中，所述凈化試劑包括MgS04400~ 2000mg、PSA或MCX 50~500mg、C18或C8或中性多壁碳納米管或羥基型多壁碳納米管或 羧基型多壁碳納米管20~300mg、苯基或氨基或HLB、石墨化炭黑40~300mg等的組合物。
[0016] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的特征在于，步驟（3)中，所述的反相鍵和C18為填料的色譜柱 為ODS C18或其它以十八碳烷基鍵合硅膠為填料的液相色譜柱。
[0017] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的特征在于，所述的液相色譜的分離流動(dòng)相體系為為甲醇-水， 乙腈-7K，異丙醇-7K，甲醇-乙腈-7K，甲醇-異丙醇-7K，乙腈-異丙醇-7K，以及上述 有機(jī)相和水相中均含有或單一相含有甲酸、乙酸、磷酸和三氟乙酸，甲酸、乙酸、磷酸和三氟 乙酸的比例（體積比）范圍為〇· 005~2%。
[0018] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的特征在于，所述的液相色譜的分離流動(dòng)相體為等度淋洗或梯 度淋洗，有機(jī)相的比例從1 %到1 〇〇 %。
[0019] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的特征在于，所述的液相色譜分析時(shí)的流速為0. 5~I. 3mL/ min〇
[0020] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的特征在于，所述的液相色譜柱的柱溫為室溫到50°C。
[0021] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的特征在于，所述的在線柱后光化學(xué)衍生條件為2~12瓦紫外 燈，波長(zhǎng)190nm~400nm，反應(yīng)線圈長(zhǎng)度為5~25m，內(nèi)徑為0.1 mm~0. 5mm。
[0022] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的特征在于，所述的熒光檢測(cè)波長(zhǎng)為，激發(fā)波長(zhǎng)為220~430nm， 發(fā)射波長(zhǎng)為401~520nm〇
[0023] 進(jìn)一步的，本發(fā)明的特征在于，本方法單種磺胺藥物的檢出限為0. 1~30.0 ug/ kg，加標(biāo)回收率為60~120%。
[0023] 進(jìn)一步的，與現(xiàn)有的肉類中磺胺類藥物檢測(cè)方法相比，本發(fā)明所述的方法的不同 之處在于，應(yīng)用了適合于牛肉和羊肉基質(zhì)的改良QuEChERS提取和凈化試劑組合，與文獻(xiàn) "陳萬(wàn)勤，分析化學(xué)，2014年42卷573~578頁(yè)"方法相比，大幅縮短了樣品前處理的時(shí)間； 18種常用磺胺成分同時(shí)檢測(cè)；另外，采用了紫外光在線衍生的方式檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度有較 大提尚。
[0025] 本發(fā)明的有益技術(shù)效果是：本發(fā)明采用的樣品前處理方法，包括提取和凈化，其操 作簡(jiǎn)便，耗時(shí)短，在20~40min內(nèi)完成；有機(jī)溶劑消耗少，減少了對(duì)環(huán)境的污染。
【附圖說(shuō)明】
[0026] 圖1為18種磺