基于納米金聚集的顯色方法在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及化學(xué)檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，設(shè)及利用銀離子或一價(jià)銅離子引起功能化納米金 的聚集來(lái)作為顯色反應(yīng)，并將該一顯色變化應(yīng)用到免疫檢測(cè)中。具體地說(shuō)，是采用含有末端 訣基的有機(jī)分子對(duì)納米金進(jìn)行功能化處理，含有末端訣基的有機(jī)分子與銀或一價(jià)銅離子反 應(yīng)會(huì)引起功能化納米金的聚集，溶液顏色發(fā)生變化，并將該一顯色反應(yīng)應(yīng)用于免疫檢測(cè)中。
【背景技術(shù)】
[0002] 納米材料具有表面效應(yīng)、量子尺寸效應(yīng)、小尺寸效應(yīng)等該幾個(gè)特殊的性質(zhì)。納米金 的表面等離子共振會(huì)隨著顆粒間的距離而改變，溶液中的納米金從分散到聚集狀態(tài)時(shí)會(huì)產(chǎn) 生明顯的由紅到藍(lán)的顏色變化，該種由聚集而導(dǎo)致的顏色變化應(yīng)用非常廣泛，可用于檢測(cè) 金屬離子、小分子、DNA、蛋白質(zhì)及腫瘤細(xì)胞等，并通過(guò)裸眼觀測(cè)檢測(cè)結(jié)果。通過(guò)有機(jī)分子修 飾納米金顆粒，獲得的功能化納米金由于功能化分子的不同而表現(xiàn)出不同的性質(zhì)，可W對(duì) 不同的分子或離子有響應(yīng)。
[0003] 目前，應(yīng)用比較廣泛的免疫檢測(cè)技術(shù)主要有免疫巧光法、免疫層析法、酶聯(lián)免疫法 等。該些免疫檢測(cè)技術(shù)主要是利用了抗原抗體特異性結(jié)合的原理。就酶聯(lián)免疫來(lái)說(shuō)，酶聯(lián) 免疫吸附實(shí)驗(yàn)是基于抗原抗體的特異性結(jié)合并引入酶標(biāo)抗體，最終通過(guò)檢測(cè)酶催化反應(yīng)的 程度對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定量檢測(cè)的方法。該方法的缺點(diǎn)是檢測(cè)限比較高、耗時(shí)并且需要借 助儀器分析。更重要的是，在檢測(cè)過(guò)程中使用酶標(biāo)抗體，不僅儲(chǔ)存不方便，而且酶的活性容 易受到外部條件的影響。酶催化反應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的苛刻要求限制了該種檢測(cè)方法的廣泛應(yīng) 用。
[0004] 納米金的消光系數(shù)極高，當(dāng)濃度低至納摩爾時(shí)其溶液的顏色依舊可W觀察到。目 前，納米金(又稱膠體金）技術(shù)被逐漸用于免疫檢測(cè)。該一檢測(cè)技術(shù)主要是利用納米金的紅 色，通過(guò)抗體與納米金結(jié)合(金標(biāo)抗體)，當(dāng)抗原濃度較高時(shí)，金標(biāo)抗體濃度也比較高，聚集 產(chǎn)生紅色代表陽(yáng)性反應(yīng)。由于該一檢測(cè)技術(shù)本身的顯色機(jī)理的原因，靈敏度較低，不適合用 于檢測(cè)很低濃度待測(cè)物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服W上不足，提出一種新的、基于納米金聚集的顯色方法并 將該一顯色方法應(yīng)用于免疫檢測(cè)中。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取了W下技術(shù)方案。
[0007] -種基于納米金聚集的顯色方法在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用。
[0008] 進(jìn)一步，所述顯色方法為利用銀離子或者一價(jià)銅離子引起功能化納米金的聚集而 產(chǎn)生的顯色反應(yīng)，所述功能化納米金的聚集會(huì)使溶液由紅色變?yōu)樗{(lán)色，該種顏色的變化是 裸眼能夠觀測(cè)的。
[0009] 進(jìn)一步，所述功能化納米金為利用含有末端訣基的有機(jī)分子對(duì)納米金進(jìn)行修飾后 的功能化的納米金。
[0010] 進(jìn)一步，將含有金屬銀或者銅的納米顆粒與免疫檢測(cè)中的反應(yīng)物結(jié)合在一起，使 所述含有金屬銀或者銅的納米顆粒作為反應(yīng)物，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生銀離子或者一價(jià)銅離 子，將所述功能化納米金作為顯色液，從而引起納米金的聚集；不同濃度的銀離子或者一價(jià) 銅離子引起功能化納米金的聚集程度是不同的，其紫外可見(jiàn)吸收光譜也是有變化的，因此， 可通過(guò)紫外可見(jiàn)吸收光譜來(lái)表征納米金的聚集程度，進(jìn)而對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定量檢測(cè)。
[0011] 本發(fā)明的積極效果是： (1)將末端訣化合物與銀離子或一價(jià)銅離子的反應(yīng)引入到顯色反應(yīng)中，顯色迅速且穩(wěn) 定。
[0012] (2)提供了一種銀離子或一價(jià)銅離子調(diào)控納米金聚集的顯色方法，使功能化納米 金溶液產(chǎn)生由紅色到藍(lán)色的變化，該一聚集過(guò)程不僅能通過(guò)裸眼觀察進(jìn)行定性分析而且能 通過(guò)紫外可見(jiàn)吸收光譜的表征實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。
[0013](3)將基于納米金聚集的顯色方法應(yīng)用于免疫檢測(cè)，用裸眼觀察納米金溶液的顏 色變化過(guò)程，能用之替代傳統(tǒng)免疫試驗(yàn)中的酶催化反應(yīng)過(guò)程，既能實(shí)現(xiàn)裸眼檢測(cè)抗原或抗 體，又能解決因酶催化反應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件要求苛刻而產(chǎn)生的問(wèn)題。
[0014](4)利用化學(xué)反應(yīng)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的酶催化過(guò)程并將上述顯色反應(yīng)引入生物檢測(cè)，縮短 了反應(yīng)時(shí)間，提高了體系的穩(wěn)定性，降低了體系的成本，對(duì)將化學(xué)反應(yīng)引入免疫檢測(cè)體系有 積極的幫助。
【附圖說(shuō)明】
[0015] 附圖1為本發(fā)明基于納米金聚集的顯色方法在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用的流程說(shuō)明圖。
[0016] 圖中的標(biāo)號(hào)分別為： 1、酶標(biāo)板； 2、抗體； 3、抗原； 4、銀標(biāo)抗體； 5、功能化納米金。
【具體實(shí)施方式】
[0017]W下結(jié)合附圖繼續(xù)介紹本發(fā)明一種基于納米金聚集的顯色方法在免疫檢測(cè)中的 應(yīng)用的【具體實(shí)施方式】。本發(fā)明的實(shí)施W銀標(biāo)抗體為例，通過(guò)雙氧水腐蝕產(chǎn)生銀離子；W化合 物1為例，制備功能化納米金；W甲胎蛋白為例進(jìn)行免疫檢測(cè)。但是應(yīng)當(dāng)指出，發(fā)明的實(shí)施， 還可用氧化銀、氧化銅、銅等其它納米顆粒標(biāo)記抗體，通過(guò)酸腐蝕或其它方法產(chǎn)生銀離子或 一價(jià)銅離子。另外，功能化納米金也可W用其它含有末端訣基的化合物制備。因此，本發(fā)明 的實(shí)施不限于W下所述的實(shí)施方式。
[001引 實(shí)施例1 一、制備功能化納米金 1、選擇含有末端訣基的化合物，對(duì)納米金進(jìn)行修飾，本發(fā)明W化合物1為例，其結(jié)構(gòu)式 為：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種基于納米金聚集的顯色方法在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的顯色方法為利用銀離子或者一價(jià) 銅離子引起功能化納米金的聚集而產(chǎn)生的顯色反應(yīng)，所述功能化納米金的聚集會(huì)使溶液由 紅色變?yōu)樗{(lán)色，這種顏色的變化是裸眼能夠觀測(cè)的。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述功能化納米金為利用含有末端炔基 的有機(jī)分子對(duì)納米金進(jìn)行修飾后的功能化的納米金。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，將含有金屬銀或者銅的納米顆粒與免疫 檢測(cè)中的反應(yīng)物結(jié)合在一起，使所述含有金屬銀或者銅的納米顆粒作為反應(yīng)物，通過(guò)化學(xué) 反應(yīng)產(chǎn)生銀離子或者一價(jià)銅離子，將所述功能化納米金作為顯色液，從而引起納米金的聚 集；不同濃度的銀離子或者一價(jià)銅離子引起功能化納米金的聚集程度是不同的，其紫外可 見(jiàn)吸收光譜也是有變化的，因此，可通過(guò)紫外可見(jiàn)吸收光譜來(lái)表征納米金的聚集程度，進(jìn)而 對(duì)待測(cè)物進(jìn)行定量檢測(cè)。
【專利摘要】本發(fā)明基于納米金聚集的顯色方法在免疫檢測(cè)中的應(yīng)用，是用含有末端炔基的化合物對(duì)納米金進(jìn)行修飾，修飾后的功能化納米金對(duì)銀離子或一價(jià)銅離子有積極的響應(yīng)，再加入銀離子或一價(jià)銅離子，使功能化納米金因不同程度的聚集而產(chǎn)生顯色反應(yīng)：納米金溶液由原本的紅色變?yōu)樗{(lán)色；將功能化納米金因不同程度的聚集而產(chǎn)生的顯色反應(yīng)應(yīng)用于免疫檢測(cè)，由于納米金聚集程度的不同其紫外可見(jiàn)吸收的光譜是有變化的，因此，通過(guò)儀器能對(duì)變化的吸收光譜進(jìn)行測(cè)量，實(shí)現(xiàn)免疫檢測(cè)中的定量檢測(cè)。本發(fā)明不僅能通過(guò)裸眼觀察而且能通過(guò)儀器對(duì)顯色反應(yīng)的紫外可見(jiàn)吸收光譜進(jìn)行表征，對(duì)化學(xué)檢測(cè)，尤其是對(duì)做免疫檢測(cè)有積極的幫助。
【IPC分類】G01N33-53, G01N21-78, G01N33-68
【公開(kāi)號(hào)】CN104865247
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510272184
【發(fā)明人】馬巍, 于汝佳, 劉曉院, 彭茂潘, 韓煥興, 龍億濤
【申請(qǐng)人】華東理工大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年8月26日
【申請(qǐng)日】2015年5月25日