，快速便捷地得出待測(cè)物的濃度。
[0033]此外，通常在液相化學(xué)發(fā)光檢測(cè)步驟中，待測(cè)物與酶標(biāo)抗體I結(jié)合形成酶標(biāo)抗體1-抗原-抗體2-磁珠的復(fù)合物；磁分離后，將多余抗體去除；加入發(fā)光底物，在酶作用下，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。而本發(fā)明為了減少分離、洗滌、加入發(fā)光底物等反應(yīng)步驟，并與層析試條技術(shù)相結(jié)合，與通用的液相免疫化學(xué)發(fā)光和層析試條的反應(yīng)都不同，形成酶標(biāo)抗體1-抗原-抗體2復(fù)合物固定在捕獲帶上，多余的酶標(biāo)抗體I與發(fā)光底物反應(yīng)，抗原濃度與光強(qiáng)度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)的技術(shù)方案。
[0034]由此，本發(fā)明公開了一種化學(xué)發(fā)光免疫試條，包括樣品滴加區(qū)、捕獲區(qū)、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)區(qū)、廢液吸水區(qū)和襯底。該化學(xué)發(fā)光免疫試條可以用于生物樣品中蛋白大分子等極低濃度物質(zhì)的快速檢測(cè)。所述化學(xué)發(fā)光免疫試條是基于層析原理和免疫化學(xué)發(fā)光原理制備的集成試條，其中，
[0035]樣品滴加區(qū)，采用高親水性材料，待測(cè)樣品即滴加在該區(qū)域；
[0036]捕獲區(qū)，所述捕獲區(qū)中固定有可以捕獲待測(cè)樣品中待檢測(cè)分子的抗體、抗原和/或抗抗體；
[0037]作為一個(gè)優(yōu)選，捕獲區(qū)包括酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)和抗原捕獲帶，其中，
[0038]酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)，為酶標(biāo)-單克隆抗體I的儲(chǔ)存區(qū)域，待測(cè)樣品中的抗原與該酶標(biāo)-單克隆單抗I結(jié)合，形成“酶標(biāo)-抗體1-抗原”復(fù)合物；
[0039]抗原捕獲帶，也稱之為固定單抗2反應(yīng)區(qū)，為單克隆抗體2的固定區(qū)域，復(fù)合物流動(dòng)到該區(qū)，抗原與固定單克隆抗體2結(jié)合，形成“酶標(biāo)-抗體1-抗原-抗體2”復(fù)合物，從而使該復(fù)合物被捕獲固定在該區(qū)域；
[0040]化學(xué)發(fā)光檢測(cè)區(qū)，由透明有機(jī)高分子材料制備，是結(jié)合抗抗體和發(fā)光底物的透明微粒子的固定區(qū)域，同時(shí)固定有化學(xué)發(fā)光穩(wěn)定劑和/或增強(qiáng)劑。透明微粒子表面修飾了二抗(抗抗體)和高效化學(xué)發(fā)光底物，當(dāng)過量的酶標(biāo)抗體I流動(dòng)到該固定有透明微粒子的區(qū)域，二抗特異性識(shí)別酶標(biāo)單抗1，酶標(biāo)物與發(fā)光底物結(jié)合并穩(wěn)定發(fā)光，且由于透明微粒子的結(jié)合放大作用，實(shí)現(xiàn)了微弱光的靈敏檢測(cè)，從而可以定量得到抗原的濃度。
[0041]其中，所述的樣品滴加區(qū)采用高多孔材料，待測(cè)樣品滴加在該區(qū)域可迅速被滲入樣品墊，并且能快速移動(dòng)，不在樣品墊儲(chǔ)留；樣品墊材料，例如可以采用玻璃纖維紙、濾紙等；樣品滴加區(qū)需要進(jìn)行材料預(yù)處理，預(yù)處理液包括大分子親水材料、蛋白質(zhì)保護(hù)性材料或表面活性劑。
[0042]所述的酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)中，酶標(biāo)物可以是辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)或喊性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)。喊性磷酸酶可以進(jìn)行鏈霉親和素標(biāo)記。
[0043]所述的酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)可以采用玻璃纖維素紙、濾紙等材料制備，結(jié)合區(qū)材料先進(jìn)行預(yù)處理并干燥后，噴涂酶標(biāo)-單克隆抗體I，低溫干燥。
[0044]所述的抗原捕獲帶采用硝酸纖維素薄膜材料制備，為單克隆抗體2的固定區(qū)域，單克隆抗體2采用噴涂或劃線方式固定在硝酸纖維素膜材料上，當(dāng)復(fù)合物流動(dòng)到該區(qū)，復(fù)合物中的抗原與固定的單克隆抗體2結(jié)合，形成“酶標(biāo)-抗體1-抗原-抗體2”復(fù)合物，從而使該復(fù)合物被捕獲固定在該區(qū)域。
[0045]所述透明微粒子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)帶中，透明微粒子是直徑在10nm?50 μm之間的均勻透明球體，表面進(jìn)行了親水化處理，例如采用羧基、羥基或巰基等親水功能團(tuán)修飾，透明微粒子例如可以是ST-EVB(苯乙烯和二乙烯苯共聚物)、PMMA(聚甲基丙烯酸酯)、PVA(親水性聚乙烯醇)、PVP(聚乙烯基吡咯烷酮)、殼聚糖(CS)、PVA-PS復(fù)合微球、PET(聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯)微球、聚乙烯醇-明膠、PAA(聚丙烯)、聚乙二醇二丙烯酸酯(PEGDA)、PEG-DA/HEMA共聚凝膠微球等材料中的一種或多種。
[0046]所述的透明微粒子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)帶中，發(fā)光底物可以是魯米諾、異魯米諾及其衍生物、1，2_ 二氧乙烷發(fā)光體、二氧雜環(huán)丁烷等。發(fā)光穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑，例如熒光素、噻唑、碘苯酚、6-羥基苯并噻唑、4-碘苯硼酸、溴酚蘭等可用于HRP發(fā)光體系；或者例如聚氯芐乙烯芐基二甲基銨(BDMQ)、防老劑RD(TMQ)或牛血清白蛋白(BSA)等可用于ALP發(fā)光體系。
[0047]透明微粒子表面修飾的抗抗體可進(jìn)行生物素標(biāo)記。
[0048]所述的廢液吸水區(qū)由具有強(qiáng)吸水性的材料制備而成，多余的樣品液體被吸收儲(chǔ)存在此處。
[0049]所述的襯底為該化學(xué)發(fā)光免疫試條的支撐結(jié)構(gòu)，可選用不透明支撐材料或透明塑料基材制成，從而結(jié)合不同的光學(xué)測(cè)量儀器，利于不同設(shè)備的光學(xué)定量檢測(cè)。優(yōu)選襯底采用硝酸纖維素膜(NC膜)制造。
[0050]本發(fā)明還公開了一種化學(xué)發(fā)光免疫試條的制備方法，包括以下步驟:
[0051]步驟1、在透明襯底上，預(yù)粘一層親水性薄紙，粘上玻璃纖維素膜，玻璃纖維素膜上固定單克隆抗體2，干燥；粘好吸水紙材料。
[0052]步驟2、在硝酸纖維素膜上固定修飾好的透明微粒子；可以在其上刻出長方形空白區(qū)域來固定該透明微粒子，也可以將該透明微粒子直接噴涂在該硝酸纖維素膜表面。
[0053]步驟3、固定酶標(biāo)單抗結(jié)合區(qū)的玻璃纖維素紙，噴涂酶標(biāo)單克隆抗體1，干燥；
[0054]步驟4、固定樣品墊玻璃纖維素紙。
[0055]步驟5、切條，密封干燥保存。
[0056]其中，當(dāng)采用在硝酸纖維素膜上刻出的長方形凹槽或斷口中固定修飾好的透明微粒子時(shí)，透明微粒子需要進(jìn)行修飾。透明微粒子既考慮其透明性，又要考慮其干燥后的穩(wěn)定性和復(fù)溶后的試劑靈敏度和透明度。透明微粒子微球表面結(jié)合了抗抗體和發(fā)光底物，同時(shí)固定有化學(xué)發(fā)光穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑。
[0057]下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方案作進(jìn)一步的闡述說明。
[0058]圖1示出了作為本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例的化學(xué)發(fā)光免疫試條的結(jié)構(gòu)示意圖。如圖所示，本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光免疫試條包括樣品滴加區(qū)1、酶標(biāo)單抗I反應(yīng)區(qū)2、抗原捕獲帶3、透明微粒子化學(xué)發(fā)光檢測(cè)帶4、廢液吸水區(qū)5和襯底6。
[0059]其中，樣品滴加區(qū)I采用高多孔材料，具體地說，樣品墊材料采用玻璃纖維素紙并進(jìn)行材料預(yù)處理，預(yù)處理液為大分子親水材料。
[0060]酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)2中，酶標(biāo)物為堿性磷酸酶(ALP)。堿性磷酸酶進(jìn)行了鏈霉親和素申不I己O
[0061]酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)2采用玻璃纖維素紙制備，制備好并進(jìn)行預(yù)處理、干燥之后，再噴涂酶標(biāo)-單克隆抗體1，低溫干燥。
[0062]抗原捕獲帶3采用NC膜制備，為單克隆抗體2的固定區(qū)域，單克隆抗體2采用噴涂方式固定在NC膜上。
[0063]光學(xué)檢測(cè)帶4采用NC膜制備，并通過在NC膜上刻出長方形斷口來固定修飾好的透明微粒子，透明微粒子選用PVA材料制備，直徑在10nm?50 μ m之間的均勾透明球體，其表面采用羧基或羥基親水功能團(tuán)修飾，并結(jié)合有抗抗體和聚氯芐乙烯芐基二甲基銨(BDMQ)穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑。
[0064]廢液吸水區(qū)5采用強(qiáng)吸水性材料制備，襯底6采用NC膜制備。
[0065]作為本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，本發(fā)明還公開了上述化學(xué)發(fā)光免疫試條的制備方法，包括以下步驟:
[0066]步驟1、在透明NC膜襯底6上，預(yù)粘一層親水性薄紙，粘上NC膜(膜預(yù)先切割出長方形空...