一種化學(xué)發(fā)光免疫試條及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及免疫生物傳感器、化學(xué)發(fā)光光學(xué)檢測(cè)制備技術(shù)領(lǐng)域，更具體地涉及一種化學(xué)發(fā)光免疫試條及其制備方法，該試條可以快速檢測(cè)生物樣品中蛋白質(zhì)大分子或其它抗原分子濃度。
【背景技術(shù)】
[0002]對(duì)于血樣、尿樣等生物樣品中的蛋白質(zhì)大分子的快速檢測(cè)中，免疫檢測(cè)是最常用的一種技術(shù)。方法簡(jiǎn)便、特異性高。利用抗原和抗體特異性結(jié)合而建立的高選擇性分析方法，進(jìn)一步將探針技術(shù)引入分析中以實(shí)現(xiàn)在線檢測(cè)。免疫檢測(cè)包括酶聯(lián)免疫分析法、熒光免疫法、電化學(xué)免疫法、電化學(xué)發(fā)光免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫分析法等。免疫檢測(cè)不僅可以檢測(cè)大分子，如體液中的各種蛋白質(zhì)等，還可以檢測(cè)一些小分子，如小分子量的激素、抗生素、藥物等。
[0003]POCT(point-of-care testing)也稱之為即時(shí)檢驗(yàn)，POCT實(shí)驗(yàn)技術(shù)儀器具有小型化、操作簡(jiǎn)單化、結(jié)果報(bào)告即時(shí)化的特點(diǎn)，開創(chuàng)了新的檢驗(yàn)?zāi)Ｊ?，可使患者盡早得到診斷結(jié)果。POCT實(shí)驗(yàn)技術(shù)縮短檢驗(yàn)周轉(zhuǎn)期，省去了標(biāo)本復(fù)雜的預(yù)處理程序和時(shí)間，可以在采樣現(xiàn)場(chǎng)分析。目前，POCT產(chǎn)品應(yīng)用范圍越來越廣泛，它在綜合的臨床實(shí)驗(yàn)室、病房、門急診、手術(shù)室、監(jiān)護(hù)室、救護(hù)車、康復(fù)中心、血庫、家庭康復(fù)機(jī)構(gòu)、社區(qū)、農(nóng)村診所等都有實(shí)際的臨床應(yīng)用，且效果較好。
[0004]干化學(xué)技術(shù)，是將一種或多種反應(yīng)試劑干燥固定在固體載體，例如紙片、膠片等上，使用被測(cè)樣品中存在的液體作為反應(yīng)介質(zhì)，被測(cè)成分直接與固化于載體上的干試劑進(jìn)行呈色、電流或發(fā)光反應(yīng)。
[0005]隨著技術(shù)的發(fā)展，免疫技術(shù)、POCT技術(shù)和干化學(xué)技術(shù)出現(xiàn)了交叉發(fā)展，由此誕生了諸如膠體金免疫試紙檢測(cè)及熒光免疫試紙檢測(cè)等技術(shù)。但是膠體金試紙的檢測(cè)靈敏度不夠、定量顏色檢測(cè)不準(zhǔn)確，通常只能用于定性或半定量分析，熒光免疫試紙需要專門的熒光檢測(cè)設(shè)備，成本比較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]有鑒于此，本發(fā)明針對(duì)樣品中蛋白大分子等極低濃度物質(zhì)的快速檢測(cè)需求，主要目的在于提供一種化學(xué)發(fā)光免疫試條及其制備方法，從而可以實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單快速、高靈敏度的定量檢測(cè)。
[0007]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，作為本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種化學(xué)發(fā)光免疫試條，包括:
[0008]樣品滴加區(qū)，采用親水性材料制造，待測(cè)樣品滴加在該區(qū)域；
[0009]捕獲區(qū)，所述捕獲區(qū)中固定有可以捕獲待測(cè)樣品中待檢測(cè)分子的抗體、抗原和/或抗抗體；
[0010]化學(xué)發(fā)光檢測(cè)區(qū)，所述檢測(cè)區(qū)中固定有透明微粒子，所述透明微粒子表面修飾有能與所述待測(cè)樣品中待檢測(cè)分子結(jié)合的抗體、抗原和/或抗抗體，以及化學(xué)發(fā)光底物、化學(xué)發(fā)光穩(wěn)定劑和/或增強(qiáng)劑，由于透明微粒子的結(jié)合放大作用，實(shí)現(xiàn)待測(cè)樣品的微弱光的靈敏檢測(cè)；
[0011]其中，所述透明微粒子由透明有機(jī)高分子材料制備。
[0012]其中，所述透明微粒子是直徑在10nm?50 μπι之間的均勾透明球體，所述透明微粒子選自聚乙烯醇微球、聚乙烯基吡咯烷酮微球、殼聚糖微球、PVA-PS復(fù)合微球、聚乙烯醇-明膠微球、聚丙烯微球、聚乙二醇二丙烯酸酯微球、PEG-DA/HEMA共聚凝膠微球中的至少之一；以及
[0013]所述透明微粒子表面進(jìn)行了羧基、羥基或巰基親水功能團(tuán)修飾。
[0014]其中，所述化學(xué)發(fā)光底物為魯米諾及其衍生物、異魯米諾及其衍生物、I，2- 二氧乙烷發(fā)光體或二氧雜環(huán)丁烷。
[0015]其中，當(dāng)所述化學(xué)發(fā)光免疫試條采用HRP發(fā)光體時(shí)，所述化學(xué)發(fā)光穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑選用熒光素、噻唑、碘苯酚、6-羥基苯并噻唑、4-碘苯硼酸和/或溴酚蘭；當(dāng)所述化學(xué)發(fā)光免疫試條采用ALP發(fā)光體系時(shí)，所述化學(xué)發(fā)光穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑選用聚氯芐乙烯芐基二甲基銨 BDMQ、TMQ 和 / 或 BSA。
[0016]其中，當(dāng)所述透明微粒子表面結(jié)合有抗抗體時(shí)，所述抗抗體進(jìn)行了生物素標(biāo)記。
[0017]其中，所述捕獲區(qū)包括酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)和單克隆抗體2捕獲區(qū)，所述酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)固定有酶標(biāo)-單克隆抗體1，待測(cè)樣品中的抗原與所述酶標(biāo)-單克隆抗體I結(jié)合，形成“酶標(biāo)-抗體1-抗原”復(fù)合物；所述單克隆抗體2捕獲區(qū)固定有單克隆抗體2，待測(cè)樣品中的抗原與所述單克隆抗體2結(jié)合，形成“酶標(biāo)-抗體1-抗原-抗體2”復(fù)合物；以及
[0018]所述酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)多余的酶標(biāo)-單克隆抗體I隨著液體的流動(dòng)與所述化學(xué)發(fā)光檢測(cè)區(qū)中透明微粒子表面的發(fā)光底物反應(yīng)而發(fā)光，從而所述待測(cè)樣品中抗原的濃度與所述化學(xué)發(fā)光檢測(cè)區(qū)的發(fā)光強(qiáng)度呈負(fù)相關(guān)。
[0019]其中，所述酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)中的酶標(biāo)物為辣根過氧化物酶HRP或堿性磷酸酶ALP0
[0020]作為本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明還提供了一種化學(xué)發(fā)光免疫試條的制備方法，包括以下步驟:
[0021]步驟1、在透明襯底上，預(yù)粘一層親水性薄紙，粘上玻璃纖維素膜，在所述玻璃纖維素膜上固定單克隆抗體2，干燥；
[0022]步驟2、在硝酸纖維素膜上固定修飾好的透明微粒子；所述透明微粒子由透明有機(jī)高分子材料制備，選自聚乙烯醇微球、聚乙烯基吡咯烷酮微球、殼聚糖微球、PVA-PS復(fù)合微球、聚乙烯醇-明膠微球、聚丙烯微球、聚乙二醇二丙烯酸酯微球、PEG-DA/HEMA共聚凝膠微球中的至少之一，直徑在10nm?50μπι之間，且所述透明微粒子表面進(jìn)行了羧基、羥基或巰基親水功能團(tuán)修飾；
[0023]步驟3、固定酶標(biāo)單抗結(jié)合區(qū)的玻璃纖維素紙，噴涂酶標(biāo)單克隆抗體1，干燥；
[0024]步驟4、固定樣品墊玻璃纖維素紙。
[0025]步驟5、切條，密封干燥保存。
[0026]其中，步驟2中通過在所述硝酸纖維素膜上刻出長(zhǎng)方形空白區(qū)域來固定所述透明微粒子，或者通過將所述透明微粒子直接噴涂在所述硝酸纖維素膜表面來固定所述透明微粒子。
[0027]其中，步驟3中所述酶標(biāo)單抗I結(jié)合區(qū)中的酶標(biāo)物為堿性磷酸酶ALP，所述堿性磷酸酶進(jìn)行了鏈霉親和素標(biāo)記。
[0028]基于上述技術(shù)方案可知，本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光免疫試條相對(duì)于現(xiàn)有膠體金免疫試條檢測(cè)靈敏度更高，可以與便攜式光學(xué)檢測(cè)儀結(jié)合，實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)單快速、高靈敏的精確定量檢測(cè)；本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光免疫試條結(jié)合了化學(xué)發(fā)光技術(shù)、免疫技術(shù)、層析技術(shù)、微粒子技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)樣品中低濃度蛋白質(zhì)大分子等物質(zhì)的快速定量和一步式的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，可用于急診檢測(cè)、現(xiàn)場(chǎng)快速篩查或者家庭快速自測(cè)等。
【附圖說明】
[0029]圖1是本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光免疫試條的結(jié)構(gòu)示意圖；
[0030]圖2是在發(fā)光檢測(cè)區(qū)的本發(fā)明的透明微粒子的反應(yīng)示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0031]為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合具體實(shí)施例，并參照附圖，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0032]膠體金試紙檢測(cè)技術(shù)靈敏度不夠高，一般只能用于定性或半定量檢測(cè)；而現(xiàn)有的化學(xué)發(fā)光技術(shù)通常都需要多步操作，需要分離等步驟，難以實(shí)現(xiàn)一步式的快速、簡(jiǎn)易操作。本發(fā)明通過將免疫技術(shù)和化學(xué)發(fā)光技術(shù)結(jié)合，綜合了化學(xué)發(fā)光的高靈敏度和免疫分析技術(shù)的高選擇性，在抗體上標(biāo)記的酶標(biāo)物質(zhì)與發(fā)光底物結(jié)合后，發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生光子，光子的強(qiáng)度與待測(cè)物的濃度呈正相關(guān)或負(fù)相關(guān)，從而可以通過便攜式檢測(cè)儀進(jìn)行光學(xué)定量檢測(cè)