] 圖2為阿卡波糖對a -葡萄糖苷酶的抑制作用的結(jié)果示意圖。
[0011]圖3為葛花供試藥物對a-葡萄糖苷酶的的抑制作用的結(jié)果示意圖。
[0012] 圖4為葛花供試藥物與對照品的量效關(guān)系曲線圖。
[0013]圖5為20個批次的葛花供試樣品的a-葡萄糖苷酶的抑制作用檢測結(jié)果的 SPSS19. 0聚類分析。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0015] 本發(fā)明在具體實(shí)施中可由以下實(shí)施例給出。
[0016] 實(shí)施例1 本發(fā)明在具體實(shí)施中，可由以下步驟實(shí)現(xiàn)： 1) 葛花供試藥物的制備： 將葛花藥材凈選，粉碎，加入葛花重量10倍的雙蒸水浸泡30分鐘，超聲提取20分鐘， 抽濾，得葛花水提物母液，母液質(zhì)量濃度為0. lg/mL，即為葛花供試藥物，密封，閉光40°C保 存； 2) 檢測用溶液的配制： (1)制備PBS磷酸緩沖液： 將2. 28g K2HP04溶解在100mL雙蒸水中，制成K 2HP04母液；稱取3. 4g KH 2P04溶解在 lOOmL雙蒸水中，制成KH2P04母液；取K 2HP04母液29. 8ml、KH 2P04母液30. 2ml，混勾，得PBS 磷酸緩沖液； (2) 制備a-葡萄糖苷酶溶液： 將30U/mg的a -葡萄糖苷酶凍干粉l〇mg溶于30ml的PBS磷酸緩沖液中，再加入60mg 小牛血清白蛋白，混勻成a -葡萄糖苷酶溶液，4°C保存； (3) 制備PNPG溶液： 將90mg PNPG溶于30ml雙蒸水中，得PNPG溶液； (4) 制備似20)3溶液： 將10. 6g無水Na2C03溶于100ml雙蒸水中，得Na 2C03溶液； 3) 制備對照品溶液： 取對照品50mg，溶于lml雙蒸水中，離心，取上清，即得對照品溶液；所述的對照品為阿 卡波糖、伏格列波糖或米格列醇的一種； 4) 測定葛花對a -葡萄糖苷酶活性抑制率： 在樣品管中加入葛花供試藥物0. lml和PNPG溶液0. 5ml，混勻；在空白管中加入PBS磷 酸緩沖液〇. lml和PNPG溶液0. 5ml，混勻；在背景管中加入PBS磷酸緩沖液0. 35ml、對照品 溶液0. lml和PNPG溶液0. 5ml，混勻；然后將上述溶液在35~40°C保溫lOmin，向空白管和 樣品管中分別加入a-葡萄糖苷酶〇.25ml，35~40°C保溫20min;向空白管、樣品管和背景 管中加入Na 2C03溶液0. 5ml，靜置5min，從上述管中分別取200 y 1溶液置于96孔板中，在 波長400nm處用酶標(biāo)儀分別測定各孔板中溶液的吸光度0D值，每管做3個重復(fù)，取平均值 計算，并將得到的吸光度0D值代入以下公式計算，得葛花對a _葡萄糖苷酶活性抑制率： 酶活性抑制率=[0D空白組_ (0D樣品組-0D背景組）]/0D空白組X 100% ; 5) 效價測定與計算： 將葛花供試藥物的劑量、對照品的劑量、葛花對a _葡萄糖苷酶活性抑制率、對照品的 約定效價值、待測樣品的估計效價值分別輸入中國藥典生物檢定統(tǒng)計程序BS2000進(jìn)行計 算，即得葛花樣品的效價值，實(shí)現(xiàn)葛花質(zhì)量的評價。
[0017]實(shí)施例2 本發(fā)明在具體實(shí)施中，還可由以下步驟實(shí)現(xiàn) 1) 葛花供試藥物的制備： 將葛花藥材凈選，粉碎，加入葛花重量9倍的雙蒸水浸泡26分鐘，超聲提取16分鐘， 抽濾，得葛花水提物母液，母液質(zhì)量濃度為0. lg/mL，即為葛花供試藥物，密封，閉光40°C保 存； 2) 檢測用溶液的配制： (1) 制備PBS磷酸緩沖液： 將2. lg K2HP04溶解在100mL雙蒸水中，制成K2HP04母液；稱取3. 3g KH2P04溶解在 100mL雙蒸水中，制成KH2P04母液；取K 2HP04母液30. 2ml、KH 2P04母液29. 2ml，混勾，得PBS 磷酸緩沖液； (2) 制備a-葡萄糖苷酶溶液： 將30U/mg的a -葡萄糖苷酶凍干粉9. 2mg溶于28. 3ml的PBS磷酸緩沖液中，再加入 55. 2mg小牛血清白蛋白，混勻成a -葡萄糖苷酶溶液，4°C保存； (3) 制備PNPG溶液： 將86mg PNPG溶于28. 2ml雙蒸水中，得PNPG溶液； (4) 制備似20)3溶液： 將10. 2g無水Na2C03溶于92ml雙蒸水中，得Na 2(303溶液； 3) 制備對照品溶液： 取對照品42mg，溶于0. 6ml雙蒸水中，離心，取上清，即得對照品溶液；所述的對照品為 阿卡波糖、伏格列波糖或米格列醇的一種； 4) 測定葛花對a -葡萄糖苷酶活性抑制率： 在樣品管中加入葛花供試藥物0. 07ml和PNPG溶液0. 42ml，混勻；在空白管中加入PBS 磷酸緩沖液〇. 〇7ml和PNPG溶液0. 42ml，混勻；在背景管中加入PBS磷酸緩沖液0. 32ml、對 照品溶液0. 07ml和PNPG溶液0. 42ml，混勻；然后將上述溶液在35~40°C保溫9min，向空白 管和樣品管中分別加入a -葡萄糖苷酶0. 22ml，35~40°C保溫19min ;向空白管、樣品管和 背景管中加入Na2C03溶液0. 42ml，靜置4. 5min，從上述管中分別取190 y 1溶液置于96孔 板中，在波長400nm處用酶標(biāo)儀分別測定各孔板中溶液的吸光度OD值，每管做3個重復(fù)，取 平均值計算，并將得到的吸光度OD值代入以下公式計算，得葛花對a _葡萄糖苷酶活性抑 制率： 酶活性抑制率=[OD空白組_ (OD樣品組-OD背景組）]/OD空白組X 100% ; 5) 效價測定與計算： 將葛花供試藥物的劑量、對照品的劑量、葛花對a _葡萄糖苷酶活性抑制率、對照品的 約定效價值、待測樣品的估計效價值分別輸入中國藥典生物檢定統(tǒng)計程序BS2000進(jìn)行計 算，即得葛花樣品的效價值，實(shí)現(xiàn)葛花質(zhì)量的評價。
[0018] 實(shí)施例3 本發(fā)明在具體實(shí)施中，也可由以下步驟實(shí)現(xiàn) 1) 葛花供試藥物的制備： 將葛花藥材凈選，粉碎，加入葛花重量11倍的雙蒸水浸泡33分鐘，超聲提取23分鐘， 抽濾，得葛花水提物母液，母液質(zhì)量濃度為0. lg/mL，即為葛花供試藥物，密封，閉光40°C保 存； 2) 檢測用溶液的配制： (1) 制備PBS磷酸緩沖液： 將2. 4g K2HP04溶解在100mL雙蒸水中，制成K 2HP04母液；稱取3. 5g KH2P04溶解在 100mL雙蒸水中，制成KH2P04母液；取K 2HP04母液30. 8ml、KH 2P04母液30. 8ml，混勾，得PBS 磷酸緩沖液； (2) 制備a-葡萄糖苷酶溶液： 將30U/mg的a -葡萄糖苷酶凍干粉10. 8mg溶于31ml的PBS磷酸緩沖液中，再加入 63mg小牛血清白蛋白，混勻成a -葡萄糖苷酶溶液，4°C保存； (3) 制備PNPG溶液： 將93mg PNPG溶于31ml雙蒸水中，得PNPG溶液； (4) 制備似20)3溶液： 將10. 8g無水Na2C03溶于108ml雙蒸水中，得Na 2C03溶液； 3) 制備對照品溶液： 取對照品58mg，溶于1. 3ml雙蒸水中，離心，取上清，即得對照品溶液；所述的對照品為 阿卡波糖、伏格列波糖或米格列醇的一種； 4) 測定葛花對a -葡萄糖苷酶活性抑制率： 在樣品管中加入葛花供試藥物0. 18ml和PNPG溶液0. 58ml，混勻；在空白管中加入PBS 磷酸緩沖液〇. 18ml和PNPG溶液0. 58ml，混勻；在背景管中加入PBS磷酸緩沖液0. 38ml、對 照品溶液0. 18ml和PNPG溶液0. 58ml，混勻；然后將上述溶液在35~40°C保溫llmin，向空 白管和樣品管中分別加入a -葡萄糖苷酶0. 28ml，35~40°C保溫21min ;向空白管、樣品管和 背景管中加入Na2C03溶液0. 58ml，靜置5. 5min，從上述管中分別取210 y 1溶液置于96孔 板中，在波長400nm處用酶標(biāo)儀分別測定各孔板中溶液的吸光度OD值，每管做3個重復(fù)，取 平均值計算，并將得到的吸光度OD值代入以下公式計算，得葛花對a _葡萄糖苷酶活性抑 制率： 酶活性抑制率=[OD空白組_ (OD樣品組-OD背景組）]/OD空白組X 100% ; 5) 效價測定與計算： 將葛花供試藥物的劑量、對照品的劑量、葛花對a _葡萄糖苷酶活性抑制率、對照品的 約定效價值、待測樣品的估計效價值分別輸入中國藥典生物檢定統(tǒng)計程序BS2000進(jìn)行計 算，即得葛花樣品的效價值，實(shí)現(xiàn)葛花質(zhì)量的評價。
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