膠體金微孔法檢測(cè)試劑盒及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于食品安全快速檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002]目前我國(guó)食品安全狀況并不令人樂(lè)觀:劇毒農(nóng)藥、獸藥的大量使用；添加劑的誤用、濫用；各種工業(yè)、環(huán)境污染物的存在；有害元素、微生物和各種病原體的污染；有害生物和疫病多次發(fā)現(xiàn)；生物技術(shù)和食品新技術(shù)、新工藝的應(yīng)用帶來(lái)的可能的負(fù)面效應(yīng)；周邊國(guó)家疫情的頻繁發(fā)生；國(guó)內(nèi)外人口流動(dòng)的增加，新疾病的出現(xiàn)和原已消滅的重大疫病的死灰復(fù)燃等。近年在市場(chǎng)上曾發(fā)現(xiàn)食物加吊白塊、雞鴨飼喂激素、面粉加增白劑、海鮮用甲醛浸泡等，還有在水果上噴施催熟劑、膨大劑，在蔬菜上噴施劇毒農(nóng)藥等案例。
[0003]食品安全問(wèn)題似有愈演愈烈之勢(shì)，概括起來(lái)，有如下三個(gè)特點(diǎn)。一是問(wèn)題食品的涉及面越來(lái)越廣。問(wèn)題食品已從過(guò)去的糧油肉禽蛋菜豆制品、水產(chǎn)品等傳統(tǒng)主副食品，擴(kuò)展到水果、酒類、南北干貨類、奶制品、炒貨食品等，呈立體式、全方位態(tài)勢(shì)。二是問(wèn)題食品的危害程度越來(lái)越深，已從食品外部的衛(wèi)生危害走向了食品內(nèi)部的安全危害。過(guò)去只注意食品細(xì)菌總數(shù)，現(xiàn)在是深入食品內(nèi)部的農(nóng)藥、化肥、化學(xué)品殘留。三是制毒制劣手段越來(lái)越多樣、越來(lái)越“深入”、手法越來(lái)越隱蔽，從食品外部的走向內(nèi)部的、從物理的走向化學(xué)的。
[0004]隨著食品安全問(wèn)題的嚴(yán)重程度愈演愈烈，對(duì)于食物中藥物殘留的檢測(cè)，例如，水產(chǎn)品中的呋喃唑酮、阿莫西林、環(huán)丙沙星以及四環(huán)素等等采用的方法有化學(xué)比色法、液相色譜法、酶聯(lián)免疫法、膠體金法等。其中，化學(xué)比色法、液相色譜法和酶聯(lián)免疫法耗時(shí)較長(zhǎng)，且需要配備專門的檢測(cè)設(shè)備，不能滿足抽檢過(guò)程中現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)的要求；同時(shí)，這三種檢測(cè)方法相對(duì)來(lái)說(shuō)檢測(cè)成本很高，而且需要專業(yè)人員進(jìn)行檢測(cè)操作，會(huì)無(wú)形中增加檢測(cè)成本和人工成本。膠體金檢測(cè)方法是最近幾年新興的檢測(cè)技術(shù)，該檢測(cè)方法是利用抗原與抗體的高度特異性反應(yīng)的原理進(jìn)行檢測(cè)，具有高度的靈敏度和特異性，操作過(guò)程簡(jiǎn)單，且不需要配套的儀器設(shè)備，檢測(cè)耗時(shí)短，而且檢測(cè)結(jié)果可直接用肉眼進(jìn)行判讀，適合抽檢過(guò)程中樣本的現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，可以較好的實(shí)現(xiàn)食品安全領(lǐng)域快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)要求。
[0005]雖然經(jīng)過(guò)近幾年的發(fā)展，膠體金檢測(cè)技術(shù)逐漸發(fā)展成熟，但是之前的膠體金檢測(cè)試紙條產(chǎn)品都是直接將膠體金顆粒標(biāo)記在單克隆或多克隆抗體上，這樣會(huì)增加抗體的用量和標(biāo)記的成本，同時(shí)，由于標(biāo)記技術(shù)的局限性會(huì)導(dǎo)致膠體金顆粒的標(biāo)記影響抗體的活性，導(dǎo)致抗體活性下降，從而影響實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中的檢測(cè)效果，因此，需要開(kāi)發(fā)一種新的技術(shù)，既能應(yīng)用膠體金檢測(cè)方法的快速、靈敏度高和特異性好等特點(diǎn)，又能保證抗體的活性，減少因?yàn)闃?biāo)記對(duì)抗體活性的影響而導(dǎo)致的檢測(cè)結(jié)果不理想的問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的之一是為了提供一種間接標(biāo)記的檢測(cè)食物中藥物殘留的檢測(cè)試劑盒，該檢測(cè)試劑盒能克服以上的缺陷，能利用膠體金檢測(cè)方法的快速、簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，同時(shí)又能避免原有的膠體金標(biāo)記技術(shù)對(duì)抗體活性的影響保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
[0007]本發(fā)明的目的之二是提供一種制備該檢測(cè)試劑盒的方法。
[0008]本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
[0009]膠體金微孔法檢測(cè)試劑盒，包括金標(biāo)微孔板和檢測(cè)卡，所述金標(biāo)微孔板為在微孔板上包被有膠體金標(biāo)記的單克隆抗體，所述檢測(cè)卡包括吸水墊和載體膜，所述吸水墊與所述載體膜一端相連，所述載體膜上設(shè)有檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)，檢測(cè)區(qū)位于吸水墊與質(zhì)控區(qū)間，檢測(cè)區(qū)上包被有特異性結(jié)合抗原，質(zhì)控區(qū)上包被有二抗。
[0010]進(jìn)一步地，所述膠體金標(biāo)記的單克隆抗體采用間接標(biāo)記的方法制備，具體方法為:將膠體金標(biāo)記在抗抗體上，然后用膠體金標(biāo)記完的抗抗體與單克隆抗體特異性的結(jié)合。
[0011]進(jìn)一步地，所述載體膜為硝酸纖維素膜。
[0012]進(jìn)一步地，所述吸水墊為吸水紙或?yàn)V油紙。
[0013]一種制備上述檢測(cè)試劑盒的方法，所述金標(biāo)微孔板的制備方法為:取微孔板，將膠體金標(biāo)記的單克隆抗體溶液加入微孔板中，溶液高度為微孔高度的五分之一至二分之一，加入溶液完成之后，即將帶有溶液的微孔板冷凍干燥，即得金標(biāo)微孔板；所述檢測(cè)卡的制備方法為:首先將載體膜粘附于底板上，然后將吸水墊粘附在載體膜的一端，制備特異性結(jié)合抗原溶液和二抗溶液，然后制備檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)，最后切成寬度小于金標(biāo)微孔板內(nèi)徑的檢測(cè)卡。
[0014]本發(fā)明提供的膠體金微孔法檢測(cè)試劑盒及其制備方法，具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0015]1、本發(fā)明采用膠體金免疫層析法作為檢測(cè)手段，膠體金金顆粒對(duì)蛋白有很強(qiáng)的吸附功能，可以與蛋白或者抗體非共價(jià)結(jié)合，這樣可以放大反應(yīng)信號(hào)，使溶液觀察不到的反應(yīng)通過(guò)膠體金放大反應(yīng)信號(hào)。
[0016]2、本發(fā)明采用膠體金間接與單克隆抗體相結(jié)合，避免了膠體金直接標(biāo)記抗體而導(dǎo)致的抗體效價(jià)下降，從而避免了檢測(cè)靈敏度的下降，從而間接的避免了單克隆抗體用量的增加，因?yàn)閭鹘y(tǒng)的直接對(duì)單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記的方法很容易導(dǎo)致抗體的效價(jià)降低，這種情況下要保證檢測(cè)的靈敏度就必須要增加單克隆抗體的用量。采用膠體金間接與單克隆抗體相結(jié)合的方法可以減少單克隆抗體的用量，一定程度的控制成本。
[0017]3、采用金標(biāo)微孔板有利于樣品的批量檢測(cè)，同時(shí)將金標(biāo)的抗體與檢測(cè)卡分開(kāi)包裝，避免了檢測(cè)卡的污染，從而避免了對(duì)檢測(cè)結(jié)果的不良影響。
[0018]4、本發(fā)明利用了膠體金檢測(cè)方法的優(yōu)良特性，可實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)樣本的快速檢測(cè)，符合市場(chǎng)需求，有利于推廣應(yīng)用。
【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為本發(fā)明實(shí)施例提供的金標(biāo)微孔板單元的縱剖示意圖。
[0020]圖2為本發(fā)明實(shí)施例提供的金標(biāo)微孔板單元的結(jié)構(gòu)示意圖。