專利名稱：土霉素膠體金法檢測試紙的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型屬于用標(biāo)記抗體與抗原免疫反應(yīng)來測試待測物質(zhì)的試紙。
背景技術(shù)：
土霉素(Oxytetracyclin)屬于四環(huán)素族抗生素，具有廣譜抗菌活性，其價格低廉，因此作為畜禽的飼料添加劑控制某些動物性疾病、促進動物的生長發(fā)育，被廣泛應(yīng)用于畜禽肉制品生產(chǎn)。由于其濫用所導(dǎo)致的藥物殘留對人體健康有潛在危害，因此其在動物肉制品中的殘留限量受到國家農(nóng)業(yè)部的嚴格控制，土霉素在肉制品在的殘留限量為0.1mg/kg。目前，測定土霉素的方法主要有高效液相色譜(HPLC)和酶聯(lián)免疫等方法，HPLC法要求有特殊的儀器設(shè)備和專業(yè)技術(shù)人員，且樣品篩選量少、需要樣品的前處理，因此其檢測成本高、檢測時間長，這些因素限制了HPLC法對土霉素檢測項目的開展，不能完全滿足當(dāng)前食品安全對土霉素殘留量檢測的需要。而酶聯(lián)免疫試劑主要依賴進口，檢測成本較高。

發(fā)明內(nèi)容
本實用新型的目的是提供使用方法簡便，省時省力省錢，靈敏度高的土霉素檢測試紙。
本實用新型土霉素膠體金法檢測試紙包括固著于襯板7上的硝酸纖維素膜6，其特征是沿硝酸纖維素膜6縱向表面由下向上間隔地依次固著金標(biāo)土霉素單抗2、土霉素偶聯(lián)抗原3和抗鼠IgG抗體4，構(gòu)成復(fù)合層。
所述硝酸纖維素膜6上端與上吸水墊5串聯(lián)；下端或通過金標(biāo)土霉素單抗2與下吸水墊1連接，或直接與下吸水墊1串聯(lián)。
所述下吸水墊1、金標(biāo)土霉素單抗2及上吸水墊5表面貼有不干膠紙。
所述試紙以土霉素偶聯(lián)抗原3作為檢測帶，以抗鼠IgG抗體4作為參照帶。
金標(biāo)土霉素單抗和土霉素偶聯(lián)抗原為最低檢測標(biāo)準量設(shè)置。
本實用新型原理樣液中的土霉素分子由硝酸纖維素膜毛細管虹吸作用向膜上端移動，在金標(biāo)單抗處，土霉素分子與金標(biāo)單抗結(jié)合形成復(fù)合物；當(dāng)樣液中土霉素分子過量時，復(fù)合物漂移到二抗參照帶被捕捉，檢測帶顏色不變；當(dāng)土霉素分子未達到檢測標(biāo)準時，金標(biāo)單抗漂移到檢測帶與土霉素偶聯(lián)抗原結(jié)合，檢測帶顯色。因此，檢測帶顏色隨著樣液中土霉素分子含量大小變化。
本實用新型整個操作過程只須20分鐘，簡便、快速、經(jīng)濟、靈敏度可達到1ppb，對牛奶、血清、飼料、尿液、肉類和組織提取物等樣品進行土霉素殘留量檢測，可滿足快速檢測的要求。


圖1為本實用新型主視圖。
圖2是本實用新型下吸水墊與金標(biāo)土霉素單抗部分交疊的側(cè)視圖。
圖3是本實用新型下吸水墊與硝酸纖維素膜串聯(lián)的側(cè)視圖。
具體實施方式
一、試紙圖中包括，下吸水墊1、金標(biāo)土霉素單抗2、土霉素偶聯(lián)抗原3、抗鼠IgG抗體4、上吸水墊5，硝酸纖維素膜6、塑料襯板7。將金標(biāo)土霉素單抗2、土霉素偶聯(lián)抗原3、羊抗鼠IgG抗體4間隔4mm順序敷于底板7中部的的硝酸纖維素膜6上，與硝酸纖維素膜6表面形成復(fù)合層。
下吸水墊1和固相金標(biāo)單抗2表面以及上吸水墊5表面貼有彩色不干膠紙。
土霉素單抗的抗體效價為15000；金標(biāo)土霉素單抗和土霉素偶聯(lián)抗原為標(biāo)準量1ppb設(shè)置。
其中，以土霉素偶聯(lián)抗原3作為檢測帶，以抗鼠IgG抗體4作為參照帶。
膜條外觀平整，材料附著牢固，寬度2.5mm，液體移行速度不低于5mm/min。
圖2是將下吸水墊1粘貼于底板7靠金標(biāo)土霉素單抗2一端，并與硝酸纖維素膜6表面的金標(biāo)土霉素單抗2部分交疊；上吸水墊5粘貼于底板7靠參照帶4一端，并與硝酸纖維素膜6一端交疊。
圖3是將下吸水墊1粘貼于底板7靠金標(biāo)土霉素單抗2一端，并與硝酸纖維素膜6部分交疊；上吸水墊5粘貼同圖2。
本試紙為單一固體條式結(jié)構(gòu)并可根據(jù)需要加裝塑料保護夾片。
二、試紙使用(1)樣品制備血清抽取待檢動物血液，離心或靜置后取透明上清夜使用；若血清有過度溶血現(xiàn)象，將血清用蒸餾水稀釋一倍后再進行實驗，否則試劑片紅色太深，影響測試結(jié)果。
尿液用尿液直接進行測試，如渾濁，先離心取上清夜或蒸餾水1∶1稀釋。
飼料取1g一磨碎的待測飼料加入10ml稀釋液，其間每隔2min用力震蕩；10min時，搖均后靜置1min取上清夜100μl，用稀釋液做10倍稀釋后用試紙分析。
(2)操作及檢測將試紙箭頭端浸泡在待測樣本中，不要超過下吸水墊。浸入30sec取出放平，10min讀取結(jié)果。
陰性兩條帶都顯色，且檢測帶顏色深于參照帶顏色，說明樣品中不含土霉素。
兩條帶都顯色，且檢測帶顏色與參照帶顏色相同或接近，說明樣品的土霉素含量低于1ppb(1ng/ml)。
陽性兩條帶都顯色，但檢測帶顏色淺于參照帶顏色，說明檢測樣品中土霉素含量超過1ppb(1ng/ml)。
檢測帶不顯色，參照帶顯色，說明樣品中的土霉素含量高于5ppb(5ng/ml)。
檢測結(jié)果如下表所示

上表均以ppb或ng/ml為檢測量的單位。檢測帶＞、≈、＜、0是與參照帶顏色比較。
權(quán)利要求1.土霉素膠體金法檢測試紙，包括固著于襯板(7)上的硝酸纖維素膜(6)，其特征在于沿硝酸纖維素膜(6)縱向表面由下向上間隔地依次固著金標(biāo)土霉素單抗(2)、土霉素偶聯(lián)抗原(3)、抗鼠IgG抗體(4)，構(gòu)成復(fù)合層。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的土霉素膠體金法檢測試紙，其特征在于在硝酸纖維素膜(6)上端與上吸水墊(5)串聯(lián)；下端或通過金標(biāo)土霉素單抗(2)與下吸水墊(1)連接，或直接與下吸水墊(1)串聯(lián)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的土霉素膠體金法檢測試紙，其特征在于在下吸水墊(1)、金標(biāo)土霉素單抗(2)及上吸水墊(5)表面貼有不干膠紙。
專利摘要土霉素膠體金法檢測試紙，本實用新型涉及用標(biāo)記抗體與抗原免疫反應(yīng)來測試待測物質(zhì)的材料。本實用新型是將土霉素偶聯(lián)抗原、抗鼠IgG抗體、膠體金標(biāo)記的土霉素單抗和其它試劑固著在硝酸纖維素膜上制成，應(yīng)用層析式一步競爭法的原理檢測樣品中的土霉素殘留量。本實用新型操作過程不超過20分鐘，靈敏度為2ppb，簡便、經(jīng)濟，能夠滿足對牛奶、血清、飼料、尿液、肉類和組織提取物等樣品進行土霉素殘留快速檢測的需求。
文檔編號G01N33/52GK2893708SQ200620019378
公開日2007年4月25日 申請日期2006年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月23日
發(fā)明者馬嵐, 袁航, 葛長榮, 張曦 申請人:云南大學(xué), 云南農(nóng)業(yè)大學(xué), 昆明云大生物技術(shù)有限公司, 馬嵐, 葛長榮, 張曦