一種參麥注射液中皂苷類成分的定量檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種參麥注射液中皂苷類成分的定量測定方法，屬于藥物分析領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 參麥注射液是由紅參和麥冬兩味藥材提取制成的復(fù)方制劑，具有益氣固脫、養(yǎng)陰 生津等功能，主治元氣虧損、氣少神疲、汗出津傷、氣喘欲脫等癥，在心血管疾病與腫瘤輔助 治療中療效明確，并得到了廣泛的臨床應(yīng)用。參麥注射液中含有皂苷類、黃酮類、糖類化合 物等活性成分，其中人參皂苷包括原人參二醇型皂苷（人參皂苷Rbl、Rb2、Rc、Rd)、原人參 三醇型皂苷（人參皂苷此、1^1、1^)、齊墩果酸型人參皂苷（人參皂苷1?0)及其他（人參皂 苷Rg2、Rhl、Rh2、Rg3、Rg5、Rg6、Rs4-Rs7、Rkl-Rk3)等成分，麥冬皂苷D為麥冬中的代表性 皂苷。
[0003] 參麥注射液現(xiàn)執(zhí)行標準（國家藥品標準WS3-B-3428-98-2010)規(guī)定了人參皂苷 Rbl、Rgl、Re的定性鑒別，以及總皂苷及人參皂苷Rbl、Rgl、Re的定量測定，其中采用比色法 測定總皂苷，專屬性不強。鑒于參麥注射液中成分復(fù)雜且各種成分含量差別很大，而現(xiàn)有參 麥注射液中皂苷類成分的定量測定僅僅對少數(shù)幾種人參皂苷進行測定，難以全面控制其質(zhì) 量。因此，急需一種能夠一次測定十多種皂苷類成分的定量檢測方法，以加強參麥注射液的 質(zhì)量控制，提尚廣品的有效性及可控性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了一種參麥注射液中皂苷類成分的定量檢測方法，其包括下列步驟： (a) 混合對照品溶液制備：精密稱取人參皂苷Rbl、Re、Rgl，還包括人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rhl、Rg2、Rbl、Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3中至少一種的對照品適量，加50%甲醇制成混合 對照品溶液； (b) 供試品溶液制備：精密量取參麥注射液適量，制成供試品溶液； (c) 液相測定條件：十八烷基硅烷鍵合硅膠反相色譜柱，以乙腈-水為流動相進行梯度 洗脫，紫外檢測器檢測；其中，所述乙腈-水梯度洗脫的體積比為18%- 22%:82%- 78% (0 ~27min)、22 % - 26 % :78 % - 74 % (27 ~28min)、26 % - 31 % :74 % - 69 % (28 ~ 65min)、31%-39%:69%一 61% (65 ~80min)、39%-50%:61%一 50% (80 ~105min)、 50%一 60% :50%一 40% (105 ~115min)、60%- 75% :40%一 25% (115 ~125min)、 75% :25% (125 ~135min); (d) 樣品測定：取混合對照品溶液和供試品溶液各20-30yL，注入液相色譜儀進行測 定，外標法計算樣品中各皂苷類成分含量。
[0005] 本發(fā)明所述的定量檢測方法，適用于參麥注射液中人參皂苷Rbl、Re、Rgl，還包括 人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rhl、Rg2、Rbl、Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3中至少一種的皂苷類化合物的 含量測定，或還包括結(jié)構(gòu)類似的皂苷類化合物的含量測定。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以根據(jù)待 檢測物質(zhì)選擇合適的對照品配制混合對照品溶液。
[0006] 在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案中，步驟（a)中所述混合對照品溶液制備方法包括 精密稱取人參皂苷Rbl、Re、Rgl、Rgl、Re、Rf、Rhl、Rg2、Rbl、Rc、Rb2、Rb3、Rd和Rg3 適量， 加50%甲醇制成混合對照品溶液。
[0007] 在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案中，步驟（a)中所述混合對照品溶液中人參皂苷 Rgl、Re、Rf、Rbl、Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3 的濃度為 0? 20mg/mL，人參皂苷Rhl或Rg2 的濃度 為 0? 10mg/mL。
[0008] 在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案中，步驟（c)中所述色譜條件為：流速為lmL/min; 柱溫為30°C;進樣量為20yL;檢測波長為203nm。
[0009] 在本發(fā)明的一些優(yōu)選實施方案中，步驟（b)中所述供試品溶液按照如下方法制 備：精密量取參麥注射液5mL，過固相萃取小柱（Alltech500mgX4mL)，依次用5mL水，5mL 30%甲醇，5mL甲醇洗脫，收集甲醇洗脫部分，并轉(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度， 搖勻，0. 45ym微孔濾膜濾過，即得。
[0010] 進一步地，在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明所述的定量檢測方法包括如下步 驟： (a) 混合對照品溶液制備：混合對照品溶液制備：精密稱取人參皂苷他1、此、1^1，還包 括人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rhl、Rg2、Rbl、Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3中至少一種的對照品適量， 加50%甲醇制成混合對照品溶液，其中所述混合對照品溶液中人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rbl、 Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3的濃度為0? 20mg/mL，人參皂苷Rhl或Rg2的濃度為0?lOmg/mL; (b) 供試品溶液制備：精密量取參麥注射液5mL，過固相萃取小柱（Alltech 500mgX4mL)，依次用5mL水，5mL30%甲醇，5mL甲醇洗脫，收集甲醇洗脫部分，并轉(zhuǎn)移至 5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，0. 45ym微孔濾膜濾過，制成供試品溶液； (c) 液相測定條件：C18分析柱（250mmX4. 6mm，5ym)，以乙腈-水為流動相進行梯度洗 脫，流速為lmL/min，柱溫為30°C，進樣量為20yL，檢測波長為203nm，其中，所述乙腈-水 梯度洗脫的體積比為 18%- 22% :82%- 78% (0 ~27min)、22%- 26% :78%- 74% (27 ~28min)、26%一 31% :74%一 69% (28 ~65min)、31%一 39% :69%一 61% (65 ~ 80min)、39 % - 50 % :61 % - 50 % (80 ~105min)、50 % - 60 % :50 % - 40 % (105 ~ 115min)、60%一 75% :40%一 25% (115 ~125min)、75% :25% (125 ~135min); (d) 樣品測定：取混合對照品溶液和供試品溶液，注入液相色譜儀進行測定，外標法計 算樣品中各皂苷類成分含量。
[0011] 更進一步地，在本發(fā)明的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明所述的定量檢測方法包括如下 步驟： (a) 混合對照品溶液制備：精密稱取人參皂苷Rbl、Re、Rgl、Rgl、Re、Rf、Rhl、Rg2、Rbl、 此、他2、他3、1?(1和1^3的對照品適量，加50%甲醇制成混合對照品溶液，其中所述混合對 照品溶液中人參皂苷Rgl、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd或Rg3的濃度為0? 20mg/mL，人參皂 苷Rhl或Rg2的濃度為0?lOmg/mL; (b) 供試品溶液制備：精密量取參麥注射液5mL，過固相萃取小柱（Alltech 500mgX4mL)，依次用5mL水，5mL30%甲醇，5mL甲醇洗脫，收集甲醇洗脫部分，并轉(zhuǎn)移至 5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，0. 45ym微孔濾膜濾過，制成供試品溶液； (c) 液相測定條件：C18分析柱（250mmX4. 6mm，5ym)，以乙腈-水為流動相進行梯度洗 脫，流速為lmL/min，柱溫為30°C，進樣量為20yL，檢測波長為203nm，其中，所述乙腈-水 梯度洗脫的體積比為 18%- 22% :82%- 78% (0 ~27min)、22%- 26% :78%- 74% (27 ~28min)、26%一 31% :74%一 69% (28 ~65min)、31%一 39% :69%一 61% (65 ~ 80min)、39 % - 50 % :61 % - 50 % (80 ~105min)、50 % - 60 % :50 % - 40 % (105 ~ 115min)、60%一 75% :40%一 25% (115 ~125min)、75% :25% (125 ~135min); (d)樣品測定：取混合對照品溶液和供試品溶液，注入液相色譜儀進行測定，外標法計 算樣品中各皂苷類成分含量。
[0012] 本發(fā)明能夠同時測定參麥注射液中多種皂苷類成分，其適用于參麥注射液成品及 其生產(chǎn)過程中皂苷類成分的質(zhì)量控制，尤其是含量測定，其在一定范圍內(nèi)進樣量與峰面積 呈良好的線性關(guān)系，具有專屬性好、干擾較少、靈敏度高、精密度好、重現(xiàn)性好、供試品溶液 穩(wěn)定、方法測定準確、方法快捷準確、分析相對時問較短等特點，對濃度較高的人參皂苷類 成分（如人參皂苷Rbl)和濃度較低的人參皂苷類成分（如人參皂苷Rb3、Rf)均能同時進 行準確定量特點，且供試品處理方法簡單，檢測儀器常用易于操作，方法簡便