一種應(yīng)用頂空-氣相色譜/質(zhì)譜法測(cè)定食品中亞硝酸鹽的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品安全檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種應(yīng)用頂空-氣相色譜/質(zhì)譜法測(cè)定 食品中亞硝酸鹽的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 天然新鮮食物當(dāng)中，比如蔬菜含有很多硝酸鹽，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，食物變質(zhì)，硝酸 鹽會(huì)慢慢的生成生亞硝酸鹽；亞硝酸鹽也是肉制品生產(chǎn)中最常用的發(fā)色劑，使肉制品呈現(xiàn) 新鮮的色澤。冷凍罐頭及醬制品中也會(huì)存有。亞硝酸鹽很容易與胺化合，生成為亞硝胺。亞 硝胺具有強(qiáng)烈的致癌作用，因此，進(jìn)行食品中亞硝酸鹽的檢測(cè)已成為質(zhì)量安全保證的重要 關(guān)注點(diǎn)。
[0003] 目前國(guó)標(biāo)中亞硝酸鹽的測(cè)定方法是鹽酸萘乙二胺分光光度法，常用的有色譜法、 光譜法和電化學(xué)法等三大類。其中光譜法一般需要顯色，操作較為復(fù)雜，檢出限高，干擾大。 特別是當(dāng)樣品存在NCV時(shí)，容易對(duì)NO，在紫外區(qū)吸收測(cè)定產(chǎn)生強(qiáng)烈干擾。電化學(xué)法測(cè)定亞 硝酸鹽時(shí)，如伏安法測(cè)定亞硝酸根，樣品中的雜質(zhì)會(huì)毒化固態(tài)電極，降低電極的靈敏度和準(zhǔn) 確度。因此需要建立一種操作簡(jiǎn)便、分析速度快、準(zhǔn)確度高、靈敏度高的亞硝酸鹽測(cè)定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服上述技術(shù)缺陷，本發(fā)明提供了一種應(yīng)用頂空-氣相色譜/質(zhì)譜法測(cè)定食 品中亞硝酸鹽的方法。
[0005] 本發(fā)明的一種應(yīng)用頂空-氣相色譜/質(zhì)譜法測(cè)定食品中亞硝酸鹽的方法，包括如 下步驟：
[0006] (1)將待測(cè)食品樣品經(jīng)超聲提??；
[0007] (2)將步驟（1)中提取后的溶液加入乙酸鋅、亞鐵氰化鉀溶液和純水，沉淀蛋白 質(zhì)，過濾；
[0008] (3)將步驟（2)得到的濾液在酸性條件下與甜蜜素作用，置于頂空瓶中，用氣相色 譜-質(zhì)譜測(cè)定分析；
[0009] (4)以衍生產(chǎn)物環(huán)己烯的響應(yīng)峰面積對(duì)應(yīng)亞硝酸鹽含量作校正曲線進(jìn)行定量分 析。
[0010] 所述步驟（1)中的食品樣品和步驟（2)中的乙酸鋅、亞鐵氰化鉀溶液和純水的質(zhì) 量體積比為：lg食品樣品：2. 5ml乙酸鋅溶液：2. 5ml亞鐵氰化鉀溶液：15ml純水。
[0011] 所述乙酸鋅溶液的濃度為219g/L。
[0012] 所述亞鐵氰化鉀溶液的濃度為109g/L。
[0013] 所述步驟⑵中的過濾采用濾紙過濾。
[0014] 所述步驟（3)中的酸性條件為加硫酸溶液。
[0015] 所述步驟（3)中的濾液、硫酸溶液的體積比為5ml濾液：5ml硫酸溶液，所述硫酸 溶液的體積百分比濃度為1% ;所述甜蜜素的質(zhì)量體積比濃度為0. 1%。
[0016] 所述步驟（3)中的測(cè)定分析的條件如下：
[0017] 所述頂空的測(cè)定條件為：
[0018] a)氣液比：2/3 ;
[0019] b)平衡溫度：75°C;
[0020] c)平衡時(shí)間：5min;
[0021] d)密封針溫度：75°C;
[0022] e)轉(zhuǎn)速：500r/min;
[0023] 所述色譜的測(cè)定條件為：
[0024] a)毛細(xì)管柱：HP-5MS(30mX0. 25mmX0. 25ym);
[0025] b)載氣：以高純He為載氣（99. 999 %以上），流量1.OmL/min;
[0026] c)進(jìn)樣模式：分流進(jìn)樣，分流比5 :1 ;
[0027] d)進(jìn)樣量：250yL;
[0028] e)進(jìn)樣 口溫度：180°C;
[0029] f)接口溫度：275°C;
[0030] g)升溫程序：45°C保持 40min，10°C/min升至 200°C，保持 5min。
[0031] 所述質(zhì)譜的測(cè)定參數(shù)為：
[0032] a)溶劑延遲：lmin;
[0033] b)電子轟擊離子化（EI)方式：70eV;
[0034] c)離子源溫度（EI) :230°C;
[0035] d)四極桿溫度：150°C;
[0036] e)電子倍增器、離子聚焦和入口透鏡值均通過自動(dòng)調(diào)諧計(jì)算；
[0037] f)掃描方式：全掃描。
[0038] 本發(fā)明檢測(cè)食品中亞硝酸鹽的方法，定量檢測(cè)限為100yg/kg。亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)在 0.lmg/L-5mg/L濃度下，響應(yīng)值與質(zhì)量濃度呈良好的線性關(guān)系。相關(guān)系數(shù)大于0.998。被測(cè) 物中亞硝酸鹽的回收率應(yīng)在85. 3~102%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD)〈5.0%。
[0039] 本發(fā)明的方法與傳統(tǒng)光譜法相比，操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)限低，靈敏度與準(zhǔn)確度高，重現(xiàn) 性好。利用三合一自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)，真正實(shí)現(xiàn)高通量分析，檢測(cè)工作效率得到極大提高。
【附圖說明】
[0040] 圖1為不同氣液比與液體每增加1ml增加的峰面積的關(guān)系圖；
[0041] 圖2為平衡溫度對(duì)峰面積的關(guān)系圖；
[0042] 圖3為平衡時(shí)間對(duì)峰面積的關(guān)系圖；
[0043] 圖4為亞硝酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品的總離子色譜圖；
[0044] 圖5為亞硝酸鹽衍生產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)譜圖；
[0045] 圖6為亞硝酸鹽濃度和響應(yīng)值的相關(guān)系數(shù)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0046] 為使本發(fā)明更加容易理解，下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這 些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，下列實(shí)施例中未提及的具體實(shí)驗(yàn) 方法，通常按照常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行。
[0047] 儀器和耗材：
[0048] 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：四極桿質(zhì)譜檢測(cè)器，配EI源； Aglient7890A-5975C(Aglient公司，美國(guó)）；
[0049] 振蕩器（MS2minishaker)，IKA;
[0050] 分析天平（精確到 0? 001g)，CHYOMJ-300 ;
[0051] 離心機(jī)，HITACHI，himacCT6D;
[0052] 精密PH試紙，上海三愛思試劑有限公司。
[0053] 試劑與溶液：
[0054] 所用試劑除注明外均為分析純，水為去離子水。
[0055] 試劑包括：硫酸、亞鐵氰化鉀、乙酸鋅、甜蜜素、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及標(biāo)準(zhǔn)溶液、亞硝酸鈉 (純度彡99.0% )。
[0056] 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制與儲(chǔ)存如下：
[0057] 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)品0. 025g(精確到0.OOOlg)，置于25mL容量瓶， 并用水定容至刻度，混勻。配制成亞硝酸鈉貯備溶液，濃度為l〇〇〇ug/mL。在4°C避光存放， 保存期一年。
[0058] 標(biāo)準(zhǔn)中間混合溶液：分別吸取亞硝酸鈉貯備溶液10.OmL，用水定容至100mL得到 100yg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，在4°C避光存放，保存期六個(gè)月。
[0059] 標(biāo)準(zhǔn)工作液：用水逐級(jí)稀釋標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0060] 實(shí)施例1 :本發(fā)明的一種應(yīng)用頂空-氣相色譜/質(zhì)譜法測(cè)定食品中亞硝酸鹽的方 法的建立1、提取步驟
[0061] 稱取lg食品樣品放入離心管中加入2. 5ml乙酸鋅溶液（濃度為219g/L)、2. 5ml 亞鐵氰化鉀溶液（濃度為l〇9g/L)，再加純水15ml，充分振搖混勻，混勻后超聲提取20min， 用濾紙過濾，收集濾液備用。
[0062] 取去蛋白濾液5ml、