專利名稱：復方夏連膠囊的成分檢測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種復方夏連膠囊的成分檢測方法。
背景技術：
傳統(tǒng)中成藥檢測方法只能定性說明中成藥的成分。高效和定量的檢測中成藥的成分，是現(xiàn)代中藥產(chǎn)業(yè)急需解決的技術問題。復方夏連膠囊組方應用于臨床多年，療效顯著，現(xiàn)已向國家食品藥品監(jiān)督管理局申請新藥臨床批號。迄今為止，尚未有科學的檢測方法對其進行檢測。
發(fā)明內(nèi)容
為了解決高效和定量的檢測復方夏連膠囊的成分含量，本發(fā)明采取液相色譜技術結合薄層鑒別技術，提供能定性、定量檢測復方夏連膠囊的成分含量的方法。其中黃連、人參、炙甘草、黃芩是該膠囊的主要成分，由于中藥制備中的配伍作用，形成了特定含量的有效成分組，對于保證藥效具有決定作用。膠囊成分的唯一性決定了化合物含量的唯一性。尤其是通過液相色譜和薄層鑒別的指紋特征能夠鑒定復方夏連膠囊。本發(fā)明采用高效液相色譜檢測復方夏連膠囊的黃連中鹽酸小檗堿的含量，并定性鑒別人參、炙甘草、黃芩的主要成分，從而為確保復方夏連膠囊成藥成分的質(zhì)量穩(wěn)定、安全可靠，提供質(zhì)量控制的科學和高效檢測方法。
實現(xiàn)本發(fā)明的技術方案如下本發(fā)明的復方夏連膠囊成分及重量％比為法半夏3.5，黃連18.5，干姜18.5，人參9.5，黃芩18.5，厚樸9，乳香3.5，炙甘草19。
I、復方夏連膠囊成品的觀察與薄層鑒別(1)取復方夏連膠囊成品觀察，內(nèi)容物為棕黃色至棕褐色粉末，氣微，味苦；(2)取復方夏連膠囊成品內(nèi)容物2g，加水飽和正丁醇30ml，放置30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，離心10分鐘(2000轉/分鐘)，傾取上清液，用正丁醇飽和氨試液提取3次，每次20ml，棄去，正丁醇層蒸干，殘渣加2ml甲醇使溶解，加中性氧化鋁2g(100目-200目)拌勻，水浴上揮盡甲醇后，加中性氧化鋁柱(100目-200目，內(nèi)徑1.5cm，高3cm)，用體積比為1∶1的乙酸乙酯與甲醇混合溶液洗脫，洗至無色時，棄去，再用40％甲醇洗脫，收集洗脫液80ml，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為檢測品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1對照品，加甲醇制成黃芩苷含量為1mg/ml的混合溶液；吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15∶22∶40∶10的氯仿、甲醇、乙酸乙酯和水混合溶液4℃放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰；檢測品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取檢測品1g，加5％碳酸氫鈉溶液30ml，超聲30分鐘，放冷，離心，上清液用10％硫酸溶液調(diào)pH2-3，用乙醚提取3次，每次20ml，棄去，繼續(xù)用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，藥渣加甲醇1ml使溶解，作為檢測品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成黃芩苷含量為1mg/1ml的混合溶液，作為對照品溶液。
吸取檢測品溶液10ul、對照品溶液5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5∶3∶1∶1的乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鐵溶液，熱風吹至顯色清晰；檢測品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取檢測品1g，加5％碳酸氫鈉溶液30ml，超聲30分鐘，放冷，離心，上清液用10％硫酸溶液調(diào)pH2-3，用乙醚提取3次，每次20ml，棄去，繼續(xù)用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為檢測品溶液；另取炙甘草藥材，同法制成對照藥材溶液；
吸取對照品溶液、檢測品溶液各8ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為6.5∶3.5∶0.2的石油醚(60-90℃)、乙酸乙酯和甲酸混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風吹至顯色清晰；檢測品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
II.含量測定(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈與乙酸銨水溶液的體積比為31∶69，其中乙酸銨水溶液的濃度為0.0034mol/L并用磷酸調(diào)pH為3.0，其為流動相；檢測波長為265nm；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于5000；(2)對照品溶液的制備，精密稱取鹽酸小檗堿對照品10mg，置于100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至100ml，吸取10ml置于25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋，搖勻；(3)精密稱取復方夏連膠囊膠囊成品0.4g，置索氏提取器中，加甲醇與鹽酸體積比為100∶1的混合溶液至能夠回流，回流提取5小時，濃縮置于50ml量瓶中，并用甲醇與鹽酸體積比為100∶1的混合溶液稀釋至50ml；精密吸取5ml，上中性氧化鋁柱(100-200目，內(nèi)徑1.5cm，高3cm)，以乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，殘渣加甲醇與水體積比為31∶69的混合溶液溶于50ml量瓶中，并用甲醇與水體積比為31∶69的混合溶液稀釋至50ml，搖勻，即得復方夏連膠囊膠囊成品檢測品溶液；(4)分別精密吸取對照品溶液與上述檢測品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定復方夏連膠囊膠囊成品每粒(0.4g)含鹽酸小檗堿不低于9mg。
上述步驟并不需要按照先后順序進行。而且同時還可以進行常規(guī)檢測。該復方夏連膠囊膠囊成品為膠囊劑，符合膠囊劑項下有關的各項規(guī)定(中國藥典2000年版一部附錄I L)。經(jīng)本發(fā)明的方法檢測，符合以上條件的復方夏連膠囊膠囊成品為合格品。
本發(fā)明定性和定量檢測了復方夏連膠囊膠囊成品的成分含量，有利于對復方夏連膠囊膠囊成品的質(zhì)量的科學和有效控制。
具體實施例方式
實施例1一種復方夏連膠囊成品的成分含量檢測方法，包含如下步驟和條件1.復方夏連膠囊成品的觀察與薄層鑒別(1)取復方夏連膠囊成品觀察，內(nèi)容物為棕黃色至棕褐色粉末；氣微，味苦；(2)取復方夏連膠囊成品內(nèi)容物2g，加水飽和正丁醇30ml，放置30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，離心10分鐘(2000轉/分鐘)，傾取上清液，用正丁醇飽和氨試液提取3次，每次20ml，棄去，正丁醇層蒸干，殘渣加2ml甲醇使溶解，加中性氧化鋁2g(100目-200目)拌勻，水浴上揮盡甲醇后，加中性氧化鋁柱(100目-200目，內(nèi)徑1.5cm，高3cm)，用體積比為1∶1的乙酸乙酯與甲醇混合溶液洗脫，洗至無色時，棄去，再用40％甲醇洗脫，收集洗脫液80ml，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為檢測品溶液。
另取人參皂苷Re、Rg1對照品，加甲醇制成甲醇含量為1mg/ml的混合溶液。吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15∶22∶40∶10的氯仿、甲醇、乙酸乙酯和水混合溶液4℃放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰。
檢測品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取檢測品1g，加5％碳酸氫鈉溶液30ml，超聲30分鐘，放冷，離心，上清液用10％硫酸溶液調(diào)pH2-3，用乙醚提取3次，每次20ml，棄去，繼續(xù)用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，藥渣加甲醇1ml使溶解，作為檢測品溶液。
另取黃芩苷對照品，加甲醇制成黃芩苷含量為1mg/ml的混合溶液，作為對照品溶液。
吸取檢測品溶液10ul、對照品溶液5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5∶3∶1∶1的乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鐵溶液，熱風吹至顯色清晰。
檢測品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；
(4)取檢測品1g，加5％碳酸氫鈉溶液30ml，超聲30分鐘，放冷，離心，上清液用10％硫酸溶液調(diào)pH2-3，用乙醚提取3次，每次20ml，棄去，繼續(xù)用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為檢測品溶液。
另取炙甘草藥材，同法制成對照藥材溶液。吸取對照品溶液、檢測品溶液各8ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為6.5∶3.5∶0.2的石油醚(60-90℃)、乙酸乙酯和甲酸混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風吹至顯色清晰。
檢測品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
2.含量測定(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性檢驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈與乙酸銨水溶液的體積比為31∶69，其中乙酸銨水溶液的濃度為0.0034mol/L并用磷酸調(diào)pH為3.0，其為流動相；檢測波長為265nm。理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于5000；(2)對照品溶液的制備，精密稱取鹽酸小檗堿對照品10mg，置于100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至100ml，吸取10ml置于25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋，搖勻；(3)精密稱取復方夏連膠囊成品0.4g，置索氏提取器中，加甲醇與鹽酸體積比為100∶1的混合溶液至能夠回流，回流提取5小時，濃縮置于50ml量瓶中，并用甲醇與鹽酸體積比為100∶1的混合溶液稀釋至50ml。精密吸取5ml，上中性氧化鋁柱(100-200目，內(nèi)徑1.5cm，高3cmm)，以乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，殘渣加甲醇與水體積比為31∶69的混合溶液溶于50ml量瓶中，并用甲醇與水體積比為31∶69的混合溶液稀釋至50ml，搖勻，即得復方夏連膠囊成品檢測品溶液。
(4)分別精密吸取對照品溶液與上述檢測品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定。復方夏連膠囊成品每粒(0.4g)含鹽酸小檗堿不低于9mg。
上述步驟并不需要按照先后順序進行。
權利要求
1.一種復方夏連膠囊的成分含量檢測方法，其特征在于，步驟和條件如下I、復方夏連膠囊成品的觀察與薄層鑒別(1)取復方夏連膠囊成品觀察，內(nèi)容物為棕黃色至棕褐色粉末，氣微，味苦；(2)取復方夏連膠囊成品內(nèi)容物2g，加水飽和正丁醇30ml，放置30分鐘，超聲處理30分鐘，放冷，離心10分鐘(2000轉/分鐘)，傾取上清液，用正丁醇飽和氨試液提取3次，每次20ml，棄去，正丁醇層蒸干，殘渣加2ml甲醇使溶解，加中性氧化鋁2g(100目-200目)拌勻，水浴上揮盡甲醇后，加中性氧化鋁柱(100目-200目，內(nèi)徑1.5cm，高3cm)，用體積比為1∶1的乙酸乙酯與甲醇混合溶液洗脫，洗至無色時，棄去，再用40％甲醇洗脫，收集洗脫液80ml，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為檢測品溶液；另取人參皂苷Re、Rg1對照品，加甲醇制成黃芩苷含量為1mg/ml的混合溶液；吸取上述兩種溶液各5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15∶22∶40∶10的氯仿、甲醇、乙酸乙酯和水混合溶液4℃放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰；檢測品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(3)取檢測品1g，加5％碳酸氫鈉溶液30ml，超聲30分鐘，放冷，離心，上清液用10％硫酸溶液調(diào)pH2-3，用乙醚提取3次，每次20ml，棄去，繼續(xù)用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，藥渣加甲醇1ml使溶解，作為檢測品溶液；另取黃芩苷對照品，加甲醇制成黃芩苷含量為1mg/1ml的混合溶液，作為對照品溶液。吸取檢測品溶液10ul、對照品溶液5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5∶3∶1∶1的乙酸乙酯、丁酮、甲酸和水混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5％三氯化鐵溶液，熱風吹至顯色清晰；檢測品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(4)取檢測品1g，加5％碳酸氫鈉溶液30ml，超聲30分鐘，放冷，離心，上清液用10％硫酸溶液調(diào)pH2-3，用乙醚提取3次，每次20ml，棄去，繼續(xù)用乙酸乙酯提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為檢測品溶液；另取炙甘草藥材，同法制成對照藥材溶液；吸取對照品溶液、檢測品溶液各8ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為6.5∶3.5∶0.2的石油醚(60-90℃)、乙酸乙酯和甲酸混合溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，熱風吹至顯色清晰；檢測品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；II.含量測定(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈與乙酸銨水溶液的體積比為31∶69，其中乙酸銨水溶液的濃度為0.0034mol/L并用磷酸調(diào)pH為3.0，其為流動相；檢測波長為265nm；理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應不低于5000；(2)對照品溶液的制備，精密稱取鹽酸小檗堿對照品10mg，置于100ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至100ml，吸取10ml置于25ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋，搖勻；(3)精密稱取復方夏連膠囊成品0.4g，置索氏提取器中，加甲醇與鹽酸體積比為100∶1的混合溶液至能夠回流，回流提取5小時，濃縮置于50ml量瓶中，并用甲醇與鹽酸體積比為100∶1的混合溶液稀釋至50ml；精密吸取5ml，上中性氧化鋁柱(100-200目，內(nèi)徑1.5cm，高3cm)，以乙醇50ml洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，殘渣加甲醇與水體積比為31∶69的混合溶液溶于50ml量瓶中，并用甲醇與水體積比為31∶69的混合溶液稀釋至50ml，搖勻，即得復方夏連膠囊成品檢測品溶液；(4)分別精密吸取對照品溶液與上述檢測品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定復方夏連膠囊成品每粒(0.4g)含鹽酸小檗堿不低于9mg。
全文摘要
本發(fā)明是對復方夏連膠囊的成分檢測方法。為了解決高效和定量的檢測中成藥的成分含量，本發(fā)明采取液相色譜技術結合薄層鑒別技術，提供能定性、定量檢測中成藥的成分含量的方法。尤其是通過液相色譜和薄層鑒別的指紋特征能夠鑒定復方夏連膠囊，本發(fā)明采用高效液相色譜檢測復方夏連膠囊成藥的黃連中鹽酸小檗堿的含量，并定性鑒別人參、炙甘草、黃芩的主要成分，從而為確保復方夏連膠囊成藥成分的質(zhì)量穩(wěn)定、安全可靠，提供質(zhì)量控制更科學和更高效方法。
文檔編號G01N30/02GK1971265SQ20061016321
公開日2007年5月30日 申請日期2006年12月6日 優(yōu)先權日2006年12月6日
發(fā)明者劉志強, 越皓, 皮子鳳, 劉淑瑩, 宋鳳瑞, 金東明 申請人:中國科學院長春應用化學研究所