專利名稱：腎綜合征出血熱檢測方法及檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及傳染病學(xué)、分子生物學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及腎綜合征出血熱的檢測方法和檢測試劑盒。
腎綜合征出血熱(HFRS)是由肯尼亞病毒科漢坦病毒屬(Hanta Virus)中某些病毒引起的人類急性傳染病。發(fā)病后死亡率很高，因此早期的正確診斷非常必要。在我國，腎綜合癥出血熱(HFRS)是除病毒性肝炎外危害最大的一種傳染病，本病的疫區(qū)范圍涉及歐亞非等世界各地，我國的發(fā)病人數(shù)亦無減少趨勢。在上海浦東地區(qū)，由于外來人口的增多，HFRS的發(fā)病居多不下。因此，對該病的早期快速診斷和及時(shí)治療，對人民的生命健康具有現(xiàn)實(shí)意義。
漢坦病毒是HFRS的病原體，該病毒血清學(xué)診斷國內(nèi)常用的免疫熒光技術(shù)和酶聯(lián)免疫試驗(yàn)(ELISA)檢測特異性抗體IgG與IgM，都存在一定的局限性，檢測時(shí)間至少也要4小時(shí)，國外開發(fā)的高密度顆粒凝集試驗(yàn)(HDPA)能在1小時(shí)內(nèi)完成檢測，但尚未在國內(nèi)普遍推廣。
斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)(滴金法)是最新的先進(jìn)、快速技術(shù)，曾成功地用于多種傳染病的檢測，但尚未見用于HFRS檢測的試劑盒面市。滴金法具有操作簡便、快速(可在幾分鐘內(nèi)完成)及特異性高等特點(diǎn)，因此是一種HFRS的早期快速診斷提新的有實(shí)用價(jià)值的候選檢測方法，特別適于在基層醫(yī)療單位推廣應(yīng)用。
盡管，某些文獻(xiàn)描述了一些用金標(biāo)法檢測腎綜合征出血熱的方法，但是完全按照這些文獻(xiàn)所公開的方法和程序重復(fù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，卻無法獲得令人滿意的結(jié)果，甚至根本無法檢測。在《中國醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志)》1998年3月第21卷第2期中，公開了一種滴金法檢測腎綜合征出血熱血清特異性IgM的方法，但是完全按照該法卻無法重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其原因可能是抗原的制備方法有問題。
目前，在開發(fā)腎綜合征出血熱滴金法檢測和試劑盒時(shí)，因?yàn)镮gM抗體產(chǎn)生的時(shí)間最早，所以為了早期檢測都把注意力集中在檢測IgM上。沒有公開過任何針對IgG的滴金法和試劑盒。
因此，迫切需要一種能快速、正確和簡便的診斷腎綜合征出血熱的方法和試劑盒。
本發(fā)明的目的就是提供一種快速、正確和簡便的檢測腎綜合征出血熱的方法及相應(yīng)的檢測試劑盒。
一方面，本發(fā)明提供了一種檢測樣品中是否含有抗?jié)h坦病毒的IgG抗體的方法，它包括步驟(a)將純化的漢坦病毒核蛋白包被在硝酸纖維素膜上，形成在點(diǎn)樣區(qū)中包被有漢坦病毒核蛋白的硝酸纖維素檢測膜；(b)以非人的抗人IgG抗體和膠體金為原料，制備膠體金-抗人IgG抗體的結(jié)合物；(c)將待檢測的血清樣品滴加在步驟(a)中獲得的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)上；(d)洗滌步驟(c)的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)；(e)將步驟(b)的膠體金-抗人IgG抗體的結(jié)合物滴加在點(diǎn)樣區(qū)上；(f)洗滌步驟(e)的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)；點(diǎn)樣區(qū)出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)表示樣品中存在抗?jié)h坦病毒的IgG抗體，不出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)表示樣品中不存在抗?jié)h坦病毒的IgG抗體。
另一方面，本發(fā)明提供了一種檢測腎綜合征出血熱的檢測試劑盒，該試劑盒包含硝酸纖維素膜，在該膜的點(diǎn)樣區(qū)包被有純化的漢坦病毒抗原，膠體金-非人抗IgG抗體結(jié)合物溶液，和可選的洗滌緩沖液。
本發(fā)明還提供了一種檢測樣品中是否含有抗?jié)h坦病毒的IgM抗體的方法，它包括步驟(a)將純化的漢坦病毒抗原包被在硝酸纖維素膜上，形成在點(diǎn)樣區(qū)中包被有漢坦病毒核蛋白的硝酸纖維素檢測膜，其中該純化的抗原是如下制備的收集培養(yǎng)的接種過漢坦病毒的宿主細(xì)胞，經(jīng)2800-3200rpm 20-40分鐘粗離心后，取上清液在35000-45000rpm離心1-4小時(shí)，棄去上清液，沉淀即為純化的漢坦病毒抗原；(b)以非人的抗人IgM抗體和膠體金為原料，制備膠體金-抗人IgM抗體的結(jié)合物；(c)將待檢測的血清樣品滴加在步驟(a)中獲得的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)上；(d)洗滌步驟(c)的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)；(e)將步驟(b)的膠體金-抗人IgM抗體的結(jié)合物滴加在點(diǎn)樣區(qū)上；(f)洗滌步驟(e)的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)；
點(diǎn)樣區(qū)出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)表示樣品中存在抗?jié)h坦病毒的IgM抗體，不出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)表示樣品中不存在抗?jié)h坦病毒的IgM抗體。
本發(fā)明是基于如下意外發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)上完成的在受到漢坦病毒感染后，IgG會(huì)很快產(chǎn)生，因而可作為檢測對象。眾所周知，在受到感染后，通常IgM抗體最早產(chǎn)生。而IgG抗體的產(chǎn)生則較慢，而且IgG的滴度較低，因此通常不適宜作為滴金法的檢測對象。然而，本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在受到漢坦病毒感染后，IgG會(huì)很快產(chǎn)生(約1-2天內(nèi))，而且滴度水平可以達(dá)到滴金法的檢測靈敏度。并在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
無論是選擇IgG還是IgM作為檢測對象，為了成功地進(jìn)行滴金法檢測，漢坦病毒抗原的制備很關(guān)鍵。通常要求純度高，與IgG和IgM結(jié)合特異的抗原，在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，采用分步離心的方法來制備抗原，即收集培養(yǎng)的接種過漢坦病毒的宿主細(xì)胞，經(jīng)2800-3200rpm 20-40分鐘粗離心后，取上清液在35000-45000rpm離心1-4小時(shí)，棄去上清液，沉淀即為純化的漢坦病毒抗原(核蛋白)。
為了獲得漢坦病毒，可以將其接種于一些采用的宿主細(xì)胞，如Vero-E6細(xì)胞和沙鼠腎細(xì)胞。較佳地，可接種于沙鼠腎細(xì)胞。
接種后，在35-37℃按常規(guī)方法傳導(dǎo)培養(yǎng)7-10天后，可收獲病毒。培養(yǎng)方法可參見例如《現(xiàn)代微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及其應(yīng)用)》，人民衛(wèi)生出版社，1997年10月；《醫(yī)學(xué)病毒學(xué)及實(shí)驗(yàn)技術(shù)》1990年，科學(xué)出版社；和《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)病毒學(xué)》人民軍醫(yī)出版社，1985年等文獻(xiàn)。
在獲得了純化的漢坦病毒抗原之后，可用常規(guī)方法將其包被在檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)上。
為了消除非特異性結(jié)合，獲得的在點(diǎn)樣區(qū)中包被有漢坦病毒核蛋白的硝酸纖維素檢測膜還經(jīng)過預(yù)結(jié)合處理，例如用0.75-1.5％BSA溶液封閉2-24小時(shí)。封閉時(shí)間也可進(jìn)一步延長。但通常2小時(shí)就足夠了。
在本發(fā)明中，可供使用的與IgG抗體結(jié)合的雙抗可以是任何非人的抗人IgG抗體，它們包括(但并不限于)羊抗人IgG抗體，小鼠抗人IgG抗體和兔抗人IgG抗體較佳地，是羊抗人IgG抗體，上述非人的抗人IgM抗體可用常規(guī)方法制備，或購買得到；在本發(fā)明中，可供使用的檢測膜可以是平均孔徑在0.3-1.2微米之間的各種材質(zhì)膜。較佳地，所用的是硝酸纖維素膜。各種規(guī)格的膜的平均孔徑不同，因此，在制備檢測膜時(shí)，應(yīng)根據(jù)孔徑大小來確定膠體金的顆粒大小(粒徑)。這可通過控制膠體金制備過程中檸檬酸鈉與水的重量比。研究表明，檸檬酸鈉用量增加，膠體金粒徑下降。具體用量可通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定。例如當(dāng)該硝酸纖維素膜的平均孔徑為0.65微米時(shí)，在用檸檬酸還原法制備的并且在制備時(shí)檸檬酸鈉與水的重量比為0.035-0.045∶100，較佳地0.038-0.042∶100，最佳地約0.04∶100。用這樣的膠體金所制備的膠體金-抗人IgM或IgG抗體結(jié)合物可以有效地滲透入0.65微米的膜中。
通常，在檸檬酸還原法制備膠體金的常規(guī)方法中氯金酸與水的重量比0.0075-0.03∶100，較佳地約0.01-0.02∶100。
在獲得了膠體金和抗人IgG抗體(或抗人IgM抗體)后，兩者的偶聯(lián)可根據(jù)常規(guī)方法進(jìn)行。例如如下進(jìn)行制備以10毫升膠體金溶液為基準(zhǔn)，加入8-30微克的非人抗人IgG抗體，靜置后加BSA，使BSA終濃度為1％，再靜置后，加入聚乙二醇(PEG)0.8-0.12克(防止膠體金自聚沉淀)，混勻，加入適量防腐劑。制得膠體金-抗人IgG抗體(或抗人IgM抗體)結(jié)合物溶液。其中，偶聯(lián)時(shí)，抗人IgG抗體(或抗人IgM抗體)的用量上限也可進(jìn)一步提高，這樣做雖對檢測結(jié)果無影響，但是出于減低成本，用量宜為8-30微克/10毫升膠體金溶液，較佳地9-20毫克/10毫升膠體金溶液，更佳地10-15毫克/10毫升膠體金溶液。
在檢測時(shí)，通常包括如下步驟A、取包被了漢坦病毒抗原的檢測膜，在下方墊一次性吸水材料。
B、在點(diǎn)樣區(qū)上滴加適量(通常1滴即足夠)洗滌緩沖液(如PBS-Tween 20緩沖液)，以活化膜表面。待滲入即可(該活化步驟可省略)。
C、在點(diǎn)樣區(qū)滴加適量血清樣品，待滲入即可。
D、在點(diǎn)樣區(qū)滴加適量洗滌緩沖液，以洗滌點(diǎn)樣區(qū)?？芍貜?fù)洗滌2-5次，通常共3次。
E、在點(diǎn)樣區(qū)滴加適量(通常1滴即可)本發(fā)明的膠體金-羊抗人IgG抗體結(jié)合物(或膠體金-羊抗人IgG抗體結(jié)合物溶液)。
F、在點(diǎn)樣區(qū)滴加適量洗滌緩沖液，以洗滌點(diǎn)樣區(qū)?？芍貜?fù)洗滌2-5次，通常共3次。觀察結(jié)果，在點(diǎn)樣區(qū)出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)為陽性，無紅色斑點(diǎn)為陰性。
為了更準(zhǔn)確地檢測，可同時(shí)檢測IgM和/或使用陽性和陰性對照。在試劑盒中，也可包含選自下組的物質(zhì)膠體金-非人抗IgM抗體結(jié)合物溶液，陽性和陰性對照。
本發(fā)明方法制備的漢坦病毒抗原非常適合作為金標(biāo)法檢測腎綜合征出血熱的抗原蛋白。選用該核蛋白制作的金標(biāo)檢測試紙，在檢測樣品中是否存在抗?jié)h坦病毒的抗體時(shí)，靈敏度大大提高，可以快速和正確地得出受檢對象是否被漢坦病毒所感染，從而十分有利于降低腎綜合征出血熱的死亡率。
此外，由于被檢測的IgG抗體的特異性遠(yuǎn)高于IgM抗體，所以可有效地降低假陽性，并且有利于臨床確診腎綜合征出血熱。
此外，本發(fā)明的檢測方法簡便，使用極其簡單，不需要特殊的培訓(xùn)就可掌握，因此非常適合檢測腎綜合征出血熱這一在經(jīng)濟(jì)較不發(fā)達(dá)地區(qū)(尤其是半開墾地，城鄉(xiāng)結(jié)合區(qū))發(fā)病率較高的疾病。
下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，這些實(shí)施例僅用于說明目的而不用于限定本發(fā)明范圍。
實(shí)施例1漢坦病毒抗原的制備將野鼠型漢坦病毒株76-118接種于沙鼠腎細(xì)胞，按常規(guī)方法在35-37℃?zhèn)鲗?dǎo)培養(yǎng)7-10天后，收集細(xì)胞培養(yǎng)物。
超聲波破細(xì)胞處理之后，于3000rpm粗離心30分鐘，以去除細(xì)胞膜碎片等雜質(zhì)。取上清液，在40000rpm離心2小時(shí)以便使?jié)h坦病毒抗原沉淀。棄去上清液，取沉淀。沉淀溶解后，測定溶液中蛋白含量。如蛋白含量較低，可再離心濃縮，使?jié)h坦病毒抗原的終濃度為1-2MG/ML。
實(shí)施例2膠體金的制備在250毫升三角燒瓶中加入100毫升去離子雙蒸水，加1％檸檬酸鈉4毫升，煮沸后迅速加入1％氯金酸1毫升。繼續(xù)煮沸15分鐘，冷卻后用0.1M碳酸鉀將pH調(diào)至8.5。
實(shí)施例3膠體金-羊抗IgG抗體結(jié)合物的制備(a)羊抗IgG抗體的制備將購自上海市生物制品研究所的羊抗IgG抗體，經(jīng)硫酸銨純化處理后備用。
(b)穩(wěn)定性試驗(yàn)由于購買的(或用常規(guī)方法制備的)各種生物制品的效價(jià)存在波動(dòng)，因此，為了提高重復(fù)性，宜對各批抗體繼續(xù)穩(wěn)定性試驗(yàn)，以確定最佳的抗體添加量。
以一批抗體濃度約為1毫克/毫升的羊抗IgG抗體溶液為例。在1毫升在實(shí)施例2中制備的膠體金溶液中，分別加入0微升、2微升、4微升、6微升、8微升、10微升、12微升的，在室溫下混合均勻后，在室溫下靜置10分鐘。在每管中加入10％氯化鈉0.1毫升，混合均勻后，在室溫下靜置2小時(shí)。保持紅色不變且加入量最少(為了節(jié)約成本，減少浪費(fèi))的一管，即為穩(wěn)定1毫升膠體金溶液所需的最佳蛋白量。通常，可在該最佳蛋白量的基礎(chǔ)上再加10％，作為標(biāo)記抗體的實(shí)際用量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在加人6微升時(shí)可產(chǎn)生紅色，且紅色變化不大。在加入8微升和10微升時(shí)，產(chǎn)生的紅色保持不變。因此，將該批抗體實(shí)際添加量定為11微升。
(c)制備膠體金-羊抗IgG抗體結(jié)合物溶液取10毫升實(shí)施例2中新鮮制備膠體金溶液，加入11微升羊抗人IgG抗體，10分鐘后加5％BSA，使BSA終濃度為1％。室溫下靜置10分鐘后，加入聚乙二醇(PEG)0.1克(防止膠體金自聚沉淀)，混勻，加10％疊氮化鈉(NaN3)75微升(起防腐作用)。
實(shí)施例4檢測膜的制備1.將0.65微米硝酸纖維素膜用軟鉛劃成1厘米×1厘米的小格。
2.在每小格的中央(點(diǎn)樣區(qū))滴加1微升實(shí)施例1中的漢坦病毒抗原(核蛋白)溶液。
3.膜在室溫中干燥后，用1％BSA封閉2小時(shí)，以便去除非特異性結(jié)合，從而進(jìn)一步降低假陽性機(jī)率。
實(shí)施例5膠體金-羊抗IgM抗體結(jié)合物的制備重復(fù)實(shí)施例3，不同點(diǎn)僅在于，用羊抗IgM抗體(購自上海市生物制品研究所)代替羊抗IgG抗體。
實(shí)施例6樣品的檢測A、取實(shí)施例4中制備的檢測膜，在下方墊一次性吸水材料。
B、在點(diǎn)樣區(qū)上滴加PBS-Tween 20緩沖液1滴，以活化膜表面。待滲入即可。
C、在點(diǎn)樣區(qū)滴加10微升血清樣品。待滲入即可。
D、在點(diǎn)樣區(qū)滴加PBS-Tween 20緩沖液1滴，以洗滌點(diǎn)樣區(qū)。重復(fù)洗滌2次。
E、在點(diǎn)樣區(qū)滴加實(shí)施例3中制備的膠體金-羊抗人IgG抗體結(jié)合物(或?qū)嵤├?中制備的膠體金-羊抗人IgG抗體結(jié)合物溶液)1-2滴。
F、在點(diǎn)樣區(qū)滴加PBS-Tween 20緩沖液1滴，以洗滌點(diǎn)樣區(qū)。重復(fù)洗滌2次。
觀察結(jié)果，在點(diǎn)樣區(qū)出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)為陽性，無紅色斑點(diǎn)為陰性。
通過對2組ELISA法檢測為陽性的血清樣品(分別30個(gè)樣品和20個(gè)樣品)，20例陰性樣品，和15例正常人樣品的檢測，可以在3-8分鐘內(nèi)即獲得檢測結(jié)果。對于50例陽性樣品，有46例檢測為陽性(這是因?yàn)榈谓鸱ǖ撵`敏度稍低于ELISA法所導(dǎo)致的結(jié)果)且所有陰性或正常樣品都為陰性。由于受漢坦病毒感染后很短時(shí)間內(nèi)受感染者體內(nèi)相應(yīng)的IgM和IgG抗體就迅速上升(達(dá)到或大大超過滴金法的檢測靈敏度)，因此在實(shí)際臨床檢測時(shí)的準(zhǔn)確性預(yù)計(jì)將更高。
實(shí)施例7-8重復(fù)實(shí)施例6，不同點(diǎn)僅在于實(shí)施例7中省略步驟B；實(shí)施例8中用蒸餾水代替PBS-Tween 20緩沖液。
結(jié)果，對檢測結(jié)果無影響。
實(shí)施例9試劑盒的制備將實(shí)施例4制備的檢測膜劃成1厘米×1厘米的小片(具有一個(gè)點(diǎn)樣區(qū)，檢測IgG或IgM)，或1厘米×2厘米的小片(具有2個(gè)點(diǎn)樣區(qū)，在一片上檢測IgG和IgM)，或2厘米×2厘米的小片(具有4個(gè)點(diǎn)樣區(qū)，在一片上檢測IgG和IgM并且具有陽性和陰性對照)。
將各小片膜(點(diǎn)樣區(qū)朝上)分別裝在相應(yīng)大小的塑料盒中，在點(diǎn)樣區(qū)上方開有直徑約0.6厘米的小孔，在膜下方墊入一次性吸水材料。
在各塑料盒中，再放置每管0.5毫升的實(shí)施例3中制備的膠體金-羊抗人IgG抗體結(jié)合物和/或?qū)嵤├?中制備的膠體金-羊抗人IgG抗體結(jié)合物溶液。
此外，試劑盒可同時(shí)裝有洗滌液，如PBS-Tween 20緩沖液。
權(quán)利要求
1.一種檢測樣品中是否含有抗?jié)h坦病毒的IgG抗體的方法，其特征在于，它包括步驟(a)將純化的漢坦病毒核蛋白包被在硝酸纖維素膜上，形成在點(diǎn)樣區(qū)中包被有漢坦病毒核蛋白的硝酸纖維素檢測膜；(b)以非人的抗人IgG抗體和膠體金為原料，制備膠體金-抗人IgG抗體的結(jié)合物；(c)將待檢測的血清樣品滴加在步驟(a)中獲得的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)上；(d)洗滌步驟(c)的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)；(e)將步驟(b)的膠體金-抗人IgG抗體的結(jié)合物滴加在點(diǎn)樣區(qū)上；(f)洗滌步驟(e)的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)；點(diǎn)樣區(qū)出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)表示樣品中存在抗?jié)h坦病毒的IgG抗體，不出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)表示樣品中不存在抗?jié)h坦病毒的IgG抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該純化的漢坦病毒核蛋白是如下制備的收集培養(yǎng)的接種過漢坦病毒的宿主細(xì)胞，經(jīng)2800-3200rpm 20-40分鐘粗離心后，取上清液在35000-45000rpm離心1-4小時(shí)，棄去上清液，沉淀即為純化的漢坦病毒核蛋白。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，該宿主細(xì)胞選自下組沙鼠腎細(xì)胞和Vero-E6細(xì)胞。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該非人的抗人IgG抗體選自下組羊抗人IgG抗體，小鼠抗人IgG抗體，小鼠抗人IgG抗體和兔抗人IgG抗體。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該硝酸纖維素膜的平均孔徑為0.65微米，而且該膠體金是用檸檬酸還原法制備的并且在制備時(shí)檸檬酸鈉與水的重量比為0.035-0.045∶100，而氯金酸與水的重量比0.0075-0.03∶100。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(a)中獲得的在點(diǎn)樣區(qū)中包被有漢坦病毒核蛋白的硝酸纖維素檢測膜還經(jīng)過如下處理用0.75-1.5％BSA溶液封閉2-24小時(shí)。
7.如權(quán)利要求1所述方法，其持征在于，步驟(b)中，膠體金-抗人IgG抗體的結(jié)合物是如下進(jìn)行制備的以10毫升膠體金溶液為基準(zhǔn)，加入8-30微克的非人抗人IgG抗體，靜置后加BSA，使BSA終濃度為1％，再靜置后，加入聚乙二醇0.8-0.12克，混勻，加入適量防腐劑。
8.一種檢測腎綜合征出血熱的檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包含硝酸纖維素膜，在該膜的點(diǎn)樣區(qū)包被有純化的漢坦病毒抗原，膠體金-非人抗IgG抗體結(jié)合物溶液，和可選的洗滌緩沖液。
9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于，還包含選自下組的物質(zhì)膠體金-非人抗IgM抗體結(jié)合物溶液，陽性和陰性對照。
10.如權(quán)利要求8和9所述的試劑盒，其特征在于，硝酸纖維素膜的平均孔徑為0.65微米，該非人抗IgG抗本是羊抗人IgG抗體，而且該漢坦病毒抗原如下得到的收集培養(yǎng)的接種過漢坦病毒的宿主細(xì)胞，經(jīng)2800-3200rpm 20-40分鐘粗離心后，取上清液在35000-45000rpm離心1-4小時(shí)，棄去上清液，沉淀即為純化的漢坦病毒核蛋白，溶解后使終濃度為1毫克/毫升。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種滴金法檢測腎綜合征出血熱檢測方法及檢測試劑盒。在該方法中,將血清中抗?jié)h坦病毒的IgG抗體作為檢測對象,它包括步驟:(a)將純化的漢坦病毒核蛋白包被在硝酸纖維素膜上,形成在點(diǎn)樣區(qū)中包被有漢坦病毒核蛋白的硝酸纖維素檢測膜;(b)以非人的抗人IgG抗體和膠體金為原料,制備膠體金－抗人IgG抗體的結(jié)合物;(c)將待檢測的血清樣品滴加在步驟(a)中獲得的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)上;(d)洗滌步驟(c)的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū);(e)將步驟(b)的膠體金－抗人IgG抗體的結(jié)合物滴加在點(diǎn)樣區(qū)上;(f)洗滌步驟(e)的檢測膜的點(diǎn)樣區(qū)。該方法和試劑盒可快速、正確和簡便的檢測腎綜合征出血熱。
文檔編號G01N33/53GK1267831SQ9911354
公開日2000年9月27日 申請日期1999年3月18日 優(yōu)先權(quán)日1999年3月18日
發(fā)明者儲(chǔ)峰, 季青, 嚴(yán)潤民, 王霞明 申請人:上海市南匯縣南華醫(yī)院