本發(fā)明涉及檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種利用羊角月牙藻檢測(cè)水中全氟辛烷磺酸毒性的方法。

背景技術(shù)：

全氟辛酸是一種全氟有機(jī)酸，具有疏水和疏油特性，在碳氧化合物表面能使氟化物具有極高的表面活性，且耐高溫和耐強(qiáng)氧化劑，化學(xué)結(jié)構(gòu)遠(yuǎn)較其他表面活性劑穩(wěn)定，因此被廣泛用于數(shù)百種化學(xué)工業(yè)、機(jī)械工業(yè)和日用全氟化工產(chǎn)品中。20世紀(jì)50年代伙計(jì)、醫(yī)藥品和化妝品，以及電子產(chǎn)品的生產(chǎn)和化學(xué)鍍膜領(lǐng)域。其大量生產(chǎn)和使用已在全球生態(tài)系統(tǒng)中造成了嚴(yán)重的環(huán)境累計(jì)和持久性污染，成為嚴(yán)重威脅生態(tài)環(huán)境和人類健康的安全隱患。2005年，美國(guó)環(huán)境保護(hù)書(epa)見(jiàn)pfoa列為可以致癌物質(zhì)。由于該類物質(zhì)的極性和遷移性使其可以在不降解情況下進(jìn)入海洋或地下水中，對(duì)水體中生物體構(gòu)成威脅。

急性毒性數(shù)據(jù)顯示，pfoa類物質(zhì)半致死濃度遠(yuǎn)高于環(huán)境中的實(shí)際含量。因此，關(guān)于pfoa的低劑量、長(zhǎng)期慢性毒性研究更具有現(xiàn)實(shí)意義。目前，人類對(duì)pfoa等全氟化合物有機(jī)化合物對(duì)水體重的生物體的毒性影響主要集中在大型植物、兩棲動(dòng)物、魚類、蚌類和大型溞類。這些模式和非模式的生物生長(zhǎng)周期均在兩周以上，試驗(yàn)周期長(zhǎng)，浪費(fèi)資源。羊角月牙藻因其生長(zhǎng)迅速，易于實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，國(guó)內(nèi)外均已將羊角月牙藻作為化學(xué)品、農(nóng)藥登記中環(huán)境試驗(yàn)的模式生物，廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、毒理學(xué)、環(huán)境科學(xué)和農(nóng)業(yè)科學(xué)等領(lǐng)域。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，本發(fā)明旨在提供一種簡(jiǎn)便、靈敏、系統(tǒng)的利用羊角月牙藻檢測(cè)水中全氟辛烷磺酸毒性的方法，該方法方便、快速、成本低廉。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明一種利用羊角月牙藻檢測(cè)水中全氟辛烷磺酸毒性的方法，包括以下步驟：

1)羊角月牙藻的培養(yǎng)

羊角月牙藻用l9培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，每2～4天轉(zhuǎn)接一次，至少連續(xù)轉(zhuǎn)接三次，確保其處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在23±1℃、4440～8880lux持續(xù)光照條件下培養(yǎng)；

2)生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)

將全氟辛烷磺酸設(shè)為5個(gè)濃度梯度，分別為2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0及128.0mg/l，每個(gè)梯度設(shè)置3個(gè)平行，另設(shè)1個(gè)空白對(duì)照組，在每個(gè)三角瓶中分別加入50ml配制好的2倍試驗(yàn)液濃度及50ml濃度為4×107cells/l的藻液，試驗(yàn)在23±1℃，持續(xù)光照條件下進(jìn)行，采用概率單位法分別計(jì)算72herc50值；

3)不同濃度全氟辛烷磺酸對(duì)羊角月牙藻增長(zhǎng)率的影響

利用72h生長(zhǎng)率抑制百分率評(píng)價(jià)不同濃度全氟辛烷磺酸對(duì)羊角月牙藻生長(zhǎng)抑制的影響，72h后，觀察每個(gè)處理下羊角月牙藻藻細(xì)胞濃度，處理組，藻類生長(zhǎng)率的抑制百分率的計(jì)算公式為：

ir是處理組藻類生長(zhǎng)抑制百分率，μc是空白組生長(zhǎng)率的平均值，μt是處理組生長(zhǎng)率的平均值，

其中μ的計(jì)算公式為：

μj-i是在時(shí)間點(diǎn)j到時(shí)間點(diǎn)i之間的平均生長(zhǎng)率，xi是在時(shí)間點(diǎn)i時(shí)的藻生物量，用細(xì)胞數(shù)表示為個(gè)/ml，xj是在時(shí)間點(diǎn)j時(shí)的藻生物量，用細(xì)胞數(shù)表示為個(gè)/ml。

優(yōu)選的，在步驟3)中所述濃度為8.0、16.0及32.0mg/l。

本發(fā)明的利用羊角月牙藻檢測(cè)水中全氟辛烷磺酸毒性的方法克服了目前測(cè)定水中pfoa生物毒性中周期長(zhǎng)、操作復(fù)雜的困難，提供了一個(gè)簡(jiǎn)便、靈敏、系統(tǒng)的檢測(cè)水中全氟辛烷磺酸(pfoa)毒性的方法，該方法方便、快速、成本低廉。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明中不同濃度的全氟辛烷磺酸對(duì)羊角月牙藻生長(zhǎng)率的影響。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。

實(shí)施例1

本發(fā)明的利用羊角月牙藻檢測(cè)水中全氟辛烷磺酸毒性的方法，包括以下步驟：

1)羊角月牙藻的培養(yǎng)

羊角月牙藻用l9培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，每2～4天轉(zhuǎn)接一次，至少連續(xù)轉(zhuǎn)接三次，確保其處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在23±1℃、4440～8880lux持續(xù)光照條件下培養(yǎng)；

2)生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)

將全氟辛烷磺酸設(shè)為5個(gè)濃度梯度，分別為2.0、4.0、8.0、16.0、32.0、64.0及128.0mg/l，每個(gè)梯度設(shè)置3個(gè)平行，另設(shè)1個(gè)空白對(duì)照組，在每個(gè)三角瓶中分別加入50ml配制好的2倍試驗(yàn)液濃度及50ml濃度為4×107cells/l的藻液，試驗(yàn)在23±1℃，持續(xù)光照條件下進(jìn)行，采用概率單位法分別計(jì)算72herc50值；

3)不同濃度全氟辛烷磺酸對(duì)羊角月牙藻增長(zhǎng)率的影響

利用72h生長(zhǎng)率抑制百分率評(píng)價(jià)不同濃度全氟辛烷磺酸對(duì)羊角月牙藻生長(zhǎng)抑制的影響，72h后，觀察每個(gè)處理下羊角月牙藻藻細(xì)胞濃度，處理組，藻類生長(zhǎng)率的抑制百分率的計(jì)算公式為：

ir是處理組藻類生長(zhǎng)抑制百分率，μc是空白組生長(zhǎng)率的平均值，μt是處理組生長(zhǎng)率的平均值，

其中μ的計(jì)算公式為：

μj-i是在時(shí)間點(diǎn)j到時(shí)間點(diǎn)i之間的平均生長(zhǎng)率，xi是在時(shí)間點(diǎn)i時(shí)的藻生物量，用細(xì)胞數(shù)表示為個(gè)/ml，xj是在時(shí)間點(diǎn)j時(shí)的藻生物量，用細(xì)胞數(shù)表示為個(gè)/ml。

由急性致死實(shí)驗(yàn)篩選合適的處理劑量，結(jié)果得知：全氟辛烷磺酸(pfoa)半數(shù)抑制濃度為54.0mg/l，無(wú)可觀察效應(yīng)濃度noec為8.0mg/l，可觀察效應(yīng)濃度loec值為16.0mg/l，選擇72h-ec50值以下noec值以上考察不同pfoa濃度對(duì)羊角月牙藻生長(zhǎng)抑制率的影響。

實(shí)施例2

以濃度為16.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液來(lái)代替實(shí)施例1中的步驟3中8.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液，其他條件同實(shí)施例1；試驗(yàn)表明，與對(duì)照相比，16.0mg/l得全氟辛烷磺酸(pfoa)藻細(xì)胞濃度增長(zhǎng)量稍低于空白對(duì)照組。

實(shí)施例3

以濃度為32.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液來(lái)代替實(shí)施例1中的步驟3中16.0mg/l的全氟辛烷磺酸(pfoa)溶液，其他條件同實(shí)施例1；試驗(yàn)表明，與對(duì)照相比，32.0mg/l得全氟辛烷磺酸(pfoa)藻細(xì)胞濃度增長(zhǎng)量顯著于空白對(duì)照組。

顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其它實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。